Orientador: Jose Mauro Granjeiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T11:41:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Demarchi_AnaClaudiaCardosodeOliveira_D.pdf: 5748533 bytes, checksum: fc7f80117afc19afea7b65b54245cd3e (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: As fissuras orais exercem uma profunda influência sobre a vida de seus portadores. Esses indivíduos apresentam, desde o nascimento, dificuldades na alimentação, disturbios ósseos maxilar e mandibular, na arcada dentária, na fala e, em alguns casos, na audição. Além disto, fissurados e seus familiares enfrentam sérios problemas psicológicos decorrentes do comprometimento estético causado pela anomalia. Sem dúvida alguma, a morfogênese do palato secundário é um dos pontos mais críticos na formação da face e do palato. Depende de uma sequência complexa de eventos que possuem em comum o remodelamento de matriz extracelular (MEC), regulado, principalmente, pelas metaloproteinases de matriz (MMPs). Esta éa primeira vez que RECK, uma proteína indutora da reversão tumoral, rica em cisteína e com motivos kazal, é pesquisada neste processo. O primeiro objetivo deste estudo foi investigar se há expressão de RECK durante os eventos envolvidos na formação do palato secundário em camundongos. A partir dos resultados obtidos, indicando a presença de RECK nesses eventos, objetivou-se estabelecer um padrão temporal e espacial dessa expressão, assim como analisar o padrão de distribuição de MMP-2 e MMP-9, comparando os resultados obtidos entre si. Para tanto, cabeças inteiras e palatos dissecados de embriões de camundongos com 13; 14; 14,5 e 15 dias de desenvolvimento embrionário (DE) foram submetidos a reações de PCR em tempo real, hibridização in situ, imunoistoquímica e zimografia. As reações de PCR em tempo real indicaram a presença de mRNA de RECK (mRECK) em todos os períodos analisados, os níveis do transcrito aumentaram gradativamente e foram significativamente diferentes entre 13 e 15DE e entre 14 e lSDE. Os resultados de hibridização in situ e imunoistoquímica apontaram, consecutivamente, um padrão variável de distribuição de mRECK e da proteína RECK no mesênquima, epitélio e linha de junção (LI) formada entre as paredes palatais, no transcorrer dos períodos analisados. Com relação ao padrão de expressão das MMPs, a análise imunoistoquímica revelou a presença de MMP-2 no mesênquima, epitélio e LI em todos os períodos. A MMP-9 foi expressa no 14DE, 14,SDE e lSDE na LI e mesênquima palatal. A análise zimográfica confirmou a atividade de MMP-2 e MMP-9. Dessa forma, concluímos que RECK está presente nos principais eventos de formação do palato secundário, apresentando um padrão de expressão variável no tempo e espaço, que quando compar~o ao padrão de " expressão de MMP-2 e MMP-9 apresentam, na maioria das vezes, similaridades entre si. Esses , achados sugerem um provável envolvimento dessas moléculas na organogênese do palato secundário e uma possível interação/modulação entre elas / Abstract: The oral clefts show a great influence in the size of their hosts. They have, since birthy, difficulties in alimentation, problems in the maxilar bones, in dental arch, in speech, and in some cases, in hearing. In addition, the hosts and their families have serious psychological problems due to the esthetic lenght caused by anomalia. With no doubt, the formations of the secondary palate is one of the most critial phases during the formation of the surface and of the palate. Depending on a sequente of complex events that have in common the remodeling of the extracellular matrix (ECM), mainly regulated by matrix metalloproteinases (MMPs). This is first time that the presence of RECK, a reversion-inducing cystein-rich protein with kazal motifs, this is process is researched. The first objective of this study was to investigate the RECK expression during events involved in formation of the secondary palate in mice. Based on the results obtained, which indicated the presence of RECK in these events, the objective was to establish a temporal and spatial pattern of such expression, as well as to analyze the pattern of distribution of MMP-2 and MMP-9, comparing the results obtained to each other. For that purpose, whole heads and dissected palates of mice aged 13, 14, 14.5 and 15 days of embryonic development (ED) were submitted to real-time PCR, in situ hybridization, immunohistochemistry and zymography. The real-time PCR indicatedthe presence of mRNA of RECK (mRECK) in all periods analyzed; the transcript levels were gradually increased and were significant1y different between 13 and 15ED and between 14 and 15ED. The results of in situ hybridization and immunohismchemistry consecutively indicated a variable pattern of distribution of mRECK and RECK protein in the mesenchyme, epithelium and in midline edge seam (MES) formed between the palatal shelves during the study periods. With regard to the pattern of expression of MMPs, immunohistochemical analysis revealed the presence of MMP- 2 in the mesenchyme, epithelium and MES in all periods. The MMP-9 was expressed in the MES and palatal mesenchyme at 14ED, 14.5ED and 15ED. Zymographic analysis confirmed the activity of MMP- 2 and MMP-9. Therefore, it was concluded that RECK is present in the main events of formation of the secundary pala te, presenting a variable pattern of expression along time and space, which often present similarities to each other compared to the pattern of expression of MMP-2 and MMP-9. These findings suggest probable .involvement of these molecules in the formation of the secondary palate and possible interaction/modulation among them / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Glioblastoma multiforme é a forma mais comum e agressiva de tumor cerebral que apresenta um severo crescimento e um comportamento altamente invasivo. Linhagens de células de glioma em cultura apresentam alta atividade da enzima ecto-5’-nucleotidase que metaboliza AMP em adenosina. Em adição, ela também interage com componentes da matriz extracelular como molécula adesiva. Neste trabalho, nós avaliamos o efeito de diferentes componentes da matriz extracelular sobre a atividade da ecto-5’-nucleotidase, proliferação, adesão e migração celular na linhagem de células de glioma humano U138-MG. Os resultados obtidos mostraram uma inibição da atividade enzimática da ecto-5’- nucleotidase quando tratada com laminina sozinha e com fibronectina ou laminina em co-tratamento com dextran sulfato. O dextran sulfato mostrou reduzir a proliferação em 37%. O mesmo efeito foi observado para os co-tratamentos entre dextran/laminina (29%) e dextran/colágeno (28%). A presença de adenosina diminuiu a adesão celular em torno de 40% e o APCP aumentou a adesão em 75%. Laminina inibiu a adesão celular, já a condroitina sulfato aumentou em 70%. As células U138 apresentaram uma redução da adesão e migração celular quando tratadas apenas com dextran e também no co-tratamento deste com adenosina e APCP. Diante dos resultados podemos sugerir a modulação da atividade da ecto5’-nucleotidase e assim uma modulação da produção de adenosina por moléculas da matriz extracelular, afetando assim eventos celulares envolvidos no comportamento invasivo destas células tumorais. / Glioblastoma multiforme is the most aggressive form of brain tumor that shows a severe growth and highly invasiveness behavior. Glioma cell lines in culture present a high activity of the ecto-5’-nucleotidase (ecto-5’-NT/CD73) which metabolizes AMP to adenosine. In addition, ecto-5’-NT/CD73 also has contact with extracellular matrix components like adhesive molecule. In the present paper, we evaluate the effect of distinct extracellular matrix components on the ecto-5’- NT/CD73 activity, proliferation, adhesion and migration in U138-MG human glioma cell line. The results showed an inhibition of enzymatic activity of ecto-5’NT/CD73 in the presence of laminin, fibronectin plus dextran sulfate and laminin plus dextran sulfate. In the proliferation assay it was observed that dextran sulfate reduced the proliferation in 37% and in association with collagen type I or laminin, the proliferation was reduced too (28% and 29%, respectively). The presence of adenosina decreased of adhesion at about 40% and when treated with APCP increased in 75%. Laminin inhibited the cell adhesion and chondroitin sulfate increased in 70%. U138 cells presented reduction of adhesion and cell migration in the presence of dextran sulfate alone and in the presence of adenosine and APCP. Taken together these results suggest the modulation of ecto-5’-NT/CD73 activity and production of adenosin by extracellular matrix molecules, affecting cell events involved in the invasiveness behavior this tumor cells.

Nosso estudo tem como objetivo verificar a presença e distribuição das fibras do sistema elástico na mucosa do bulbo duodenal humano normal. Para isso, foram realizadas biópsias endoscópicas do bulbo duodenal de nove homens adultos voluntários, as quais foram histologicamente processadas e coradas seletivamente para as fibras do sistema elástico, e observadas através de microscopia óptica. As técnicas de coloração seletiva utilizadas para fibras do sistema elástico foram: orcinol-neofucsina, para fibras elásticas; resorcina-fucsina de Weigert sem oxidação prévia, para fibras elaunínicas e elásticas; e resorcina-fucsina de Weigert com oxidação prévia, para fibras oxitalánicas, elaunínicas e elásticas. Através destas técnicas, nosso estudo revelou a presença de: a) descontínuas e curtas fibras elásticas localizadas somente na muscular da mucosa, exibindo características que sugerem tratar-se de estruturas fibrosas da parede dos vasos sangüíneos presentes nesta camada; b) fibras elaunínicas dispostas em uma linha subepitelial ao nível das vilosidades, ao redor das glândulas de Lieberkühn e de Brunner, e na muscular da mucosa; c) fibras oxitalânicas dispostas em uma linha subepitelial ao nível das vilosidades, ao redor das glândulas de Lieberkühn e de Brunner, e na muscular da mucosa. Esta distribuição pode sugerir a participação das fibras oxitalânicas e elaunínicas nas importantes e necessárias funções de suporte mecânico e mobilidade da mucosa bulbar. Estes resultados nos permitiram a realização de um desenho esquemático da distribuição das fibras oxitalânicas, elaunínicas e elásticas na mucosa do bulbo duodenal humano normal. / Our objective by means of this study is checking up on the presence and distribution of the elastic system fibers in the normal human duodenal bulta mucosa. For this purpose, were performed endoscopic biopsies on duodenal bulb of nine voluntary adult men, being such biopsies histologically processed and selective coloring for the fibers of the elastic system, and observed through optical microscopy. The techniques of selective coloration used for elastic system fibers were as follows: orcinol-new fuchsin, to elastic fibers; Weigerfs resorcin-fuchsin without oxidation, to elaunin and elastic fibers; and Weigerfs resorcin-fuchsin with previous oxidation, to oxytalan, elaunin and elastic fibers. Through these techniques, our investigations revealed the presence of: a) short and discontinuous elastic fibers localized only on the muscularis mucosae, exhibiting characteristics which suggest to be fibrous structures frora the walls of blood vessels present in this stratum; b) elaunin fibers disposed in a subepitelial line at the levei of the villosities, around Lieberkühn•s and Brunner,s glands, and in the muscularis mucosae; c) oxytalan fibers disposed in a subepitelial line at the levei of the villosities, around Lieberkühn's and Brunner's glands, and in the muscularis mucosae. This distribution may suggest the participation of the oxytalan and elaunin fibers in the important and necessary functions of mechanical support and mobility of the bulbar mucosa. These results gave us the possibility of realizing a schematic drawing of the distribution of oxytalan, elaunin and elastic fibers on the normal human duodenal bulb mucosa.

Orientador: Kleber Gomes Franchini / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T20:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Corat_MarcusAlexandreFinzi_D.pdf: 5959787 bytes, checksum: 480262d3ceea868b88144ebffae91a99 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Miogênese é um processo altamente ordenado que compromete e direciona células indiferenciadas para um programa de células musculares. Este processo envolve a transição de um alto nível de atividade mitótica, motilidade e período de sobrevivência das células para um período que o ciclo celular é interrompido e começa a expressão de genes músculo-específicos, reconhecimento célula-célula, assim como, formação de miotubos multinucleados. Embora estudos prévios tenham definido extensivamente o mecanismo de miogênese no nível transcricional e identificado genes envolvidos neste programa de diferenciação, tais como: MyoD, Myogenin, Myf-5 e MRF4, assim como, genes mais tardios como MHC, MCK, entre outros; o mecanismo intracelular envolvido com o processo inicial da miogênese permanece pouco entendido. Estudos mostram o envolvimento de proteínas da matriz-extracelular acopladas a receptores integrinas na célula, que quando estimulados, desencadeiam um processo de sinalização através do citoplasma em direção ao núcleo celular. Um papel crítico dessas proteínas sinalizadoras, em sua maioria proteínas tirosina-quinase (PTKs), tem sido evidenciado quanto a sua participação na progressão da miogênese, entre elas podemos destacar MAPKs (ERKI e ERK2), PI3K, PKB/AKT, Integrin, FAK e CASo Apesar destas proteínas aparecerem proeminentes no programa de miogênese, quando estas são superexpressadas ou forçadamente ativadas, o programa de miogênese é interrompido. Isto ressalta a importância de atividade regulatória sobre estas proteínas para o desencadeamento normal do programa de miogênese. Estas proteínas sendo tirosinaquinase- dependentes podem vir a ser reguladas por proteínas tirosina-fosfatases (PTPs). O involvimento de PTPs no programa de miogênese é ainda pouco explorado. No presente estudo, através da utilização de dois modelos, nós focamos a atenção na etapa de regulação da sinalização da proteína tirosina-quinase FAK através da interação com a PTP SHP-2 no período inicial do programa de miogênese. Foi proposta a interação FAK/SHP-2 como um fator crucial para a regulação da Y397 da FAK no período inicial da miogênese. Além de ter reforçado a importância da regulação da FAK para o progresso do programa de diferenciação mioblástica / Abstract: Myogenesis is a highly ordered process tOOtcommits and directs undifferentiated cells into a muscle cell program. This process involves the transition of a high level of mitotic activity, motility and survival of the cell to a period when the cell cycle is disrupted and starts the expression of muscle-specific genes, cell-cell recognition as well as multinucleated myotube formation. Although previous studies have defined extensively the mechanisms of myogenesis at the transcription level and identified early- genes involved on this difIerentiation process such as MyoD, Myogenin, Myf5, MRF4 as well as advanced-genes such as MHC, MCK and others, the intracellular mechanisms engaged on the start of myogenesis remain to this day poorly understood. Some reports show the involvement of extracellular-matrix proteins engaged at integrins receptors of the cell. When such are stimulated, they start a signaling process through cytoplasm toward nucleus. A critical role those signaling proteins, which mostly are tyrosine kinases proteins (PTKs), OOvebeen evident to play on the myogenesis progression, among them, we can stand out MAPKs (ERKI and ERK2), PI3K, PKB/AKT, Integrin, FAK, CASo Despite PTKs figuring prominently in myogenesis, when they are overexpressed or pushed up in their activity, the miogenesis program is impaired. This stands up the importance of regulatory role of these proteins to normal miogenesis program. These PTKs may be regulated by proteins tyrosine phosphatase (PTPs). The engagement of PTPs into the myogenesis program has not been highly explored. In this report, by using two approaches, we OOvefocused on the step of signaling regulation of protein tyrosine-kinase FAK by PTP-SHP-2 on the early stage of myogenesis. We propose the FAK/SHP-2 complex as a crucial factor to regulate the FAK Y397 in this period. Indeed, we corroborated the importance of FAK regulation to the myoblastic differentiation progress / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Sergio R. Peres Line / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-21T06:53:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zaia_AlexandreAugusto_D.pdf: 2456850 bytes, checksum: d1b3ef837bc68e43f27ecb9248a2d266 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Atrofia obstrutiva de glândulas salivares é uma alteração comum que pode ser causada pela presença de cálculos, infecções ou processos neoplásicos. No presente estudo utilizamos microscopia eletrônica de transmissão e métodos bioquímicos para estudar alterações que ocorrem na matriz extracelular durante atrofia experimental de glândulas submandibulares de ratos. Estudos imunohistoquímicos da laminina e do colágeno IV mostraram distribuição irregular dessas proteínas ao redor das estruturas ductais e acinares atróficas. Análise em "Western blot" mostrou que glândulas submandibulares de ratos expressam laminina contendo apenas cadeias S, enquanto a cadeia A é presente em pequena quantidade. Isso foi observado tanto em glândulas normais como atróficas. Investigação da expressão da colagenase fibroblástica (MMP-1) por técnica zimográfica mostrou altos níveis desta enzima após 5 dias de atrofia. Com a evolução da atrofia, a atividade gelatinolítica regrediu gradativamente até 30 dias de atrofia. Microscopia eletrônica mostrou extensivas alterações morfológicas nas células glandulares. Células mioepiteliais de glândulas atróficas mostraram áreas com espessamento da membrana basal. A atrofia experimental de glândulas salivares pode ser usada como modelo in vivo para estudar eventos moleculares que ocorrem durante remodelação da matriz extracelular / Abstract: Obstructive atrophy of salivary glands is a common disease. It may occur by ductal obstruction caused by calculus, infection or neoplastic processes. In the present work we have used electron microscopy and biochemical methods to study the changes that occur in the expression laminin, type IV collagen and metaloproteinases during the experimental atrophy of the submandibular gland in rats. Immunohistochemical studies of laminin and type IV collagen showed an irregular distribution of there proteins around atrophies ducts and acini. The composition of laminin chains was not altered during glandular atrophy. Western blot analysis showed that rat submandibular gland laminin contain B chains, while A chain seems to be present only in small amounts. Investigation of the expression of fibroblast collagenase (MMP1), by zimographic analysis showed. high levels of this enzyme after 5, days of ligation. Gelatinolytic activity decrease progressively until 30 days of atrophy. Electron microscopy showed extensive morphologic changes in glandular cells. Myoepithelial cells showed "wrinkling" of outer plasma membrane leading to a thickening of the associated basement membrane. We conclude that the atrophy of salivary gland is an useful in vivo model to study the molecular events that take part in the remodeling of the extracellular matrix / Doutorado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Doutor em Odontologia

A regulação da expressão gênica é essencial para os fungos se adaptarem às adversidades ambientais, como alterações no pH extracelular, escassez de nutrientes, força iônica e oscilações de temperatura. A resposta adaptativa ao pH ambiente é bem caracterizada em fungos modelo como Aspergillus nidulans, e envolve a via de transdução de sinal constituída pelos produtos dos genes pal e pacC. No dermatófito Trichophyton rubrum, o gene pacC foi inativado, e a linhagem mutante apresentou uma diminuição na atividade das queratinases, indicando que, de alguma forma, este gene está envolvido na regulação da atividade queratinolítica deste dermatófito, e consequentemente na sua virulência e patogenicidade. Além disto, a glicosilação protéica é uma importante forma de regulação pós traducional, estruturando e estabilizando glicoproteínas que podem ser da via secretória, da parede ou da membrana celular. O processo de glicosilação protéica sofre influência do pH extracelular e da fonte nutricional. Foi ainda relatado que este tipo de regulação pós traducional também sofre influência dos genes palB e pacC, indicando que estes genes tenham um papel na glicosilação de enzimas secretadas. O objetivo deste trabalho foi analisar a influência do pH e da fonte nutricional na expressão de genes que codificam enzimas de N- e O-manosilação, e sua possível modulação pela proteína PacC no dermatófito T. rubrum. Para tanto, foi analisado, por PCR em tempo real, o perfil transcricional destes genes nas linhagens H6 (controle) e pacC-1, utilizando-se como fonte de carbono glicose, glicose e glicina ou queratina em vários tempos de cultivo, em pH 5,0 ou 8,0. A análise da expressão gênica revelou que quando a linhagem controle é cultivada em queratina em pH 5,0 ocorre um aumento da expressão da O-manosiltransferase, comparado com o cultivo em glicina com glicose e glicose. Porém, nestas mesmas condições o gene da N-manosiltransferase da linhagem mutante apresenta maiores níveis de expressão que os da linhagem controle. Em pH 8,0 pode-se notar grande semelhança entre os perfis de expressão apresentados por estes dois genes. Os resultados obtidos indicam que o gene pacC tem um papel importante no sensoriamento de nutrientes em meio ácido, modulando a expressão destas transferases, nas condições avaliadas. Estas enzimas podem ativar proteínas que atuam na hidrólise da queratina, ou mesmo formar glicoproteínas de parede celular que são essenciais na adesão do fungo à célula do hospedeiro, sugerindo um papel das manosiltransferases no processo infeccioso. / Gene expression regulation is essential for fungi to adapt to environmental adversities, such as changes in the extracellular pH, nutrient starvation, ionic strength, and temperature. The adaptive response to ambient pH is well characterized in model fungi such as Aspergillus nidulans, and involves the signal transduction pathway consisting of the products of the pal and pacC genes. In the dermatophyte Trichophyton rubrum, the pacC gene was inactivated and the mutant strain showed a decreased activity of keratinases, indicating that, somehow, this gene is involved in the regulation of the keratonolytic activity of this dermatophyte, and consequently in its virulence and pathogenicity. Moreover, protein glycosylation is an important form of post-translational regulation, playing a role in protein folding and stability of glycoproteins of the secretory pathway, cell wall or membrane. The process of protein glycosylation is influenced by extracellular pH and nutritional source. It has also been reported that this type of post-translational regulation is also influenced by the palB and pacC genes, indicating that these genes have a role in glycosylation of secreted enzymes. The objective of this study was to analyze the influence of the pH and nutritional source in the expression of the genes coding for the N-and O-manosylation enzymes, and their possible modulation by PacC in the dermatophyte T. rubrum. To this end, the transcriptional profile of these genes was analyzed, by Real Time PCR, in the H6 (control) and pacC-1 strains, using glucose, glucose with glycine, or keratin as the carbon source, in several culture times, at pH 5.0 or 8.0. Gene expression analysis showed that when the control strain is grown in keratin at pH 5.0 there is an increased expression of the O-manosyltransferase encoding gene, compared to the cultivation in glucose and glucose with glycine. However, at the same conditions the gene coding for the N-manosyltransferase presented higher levels of expression in the mutant strain in relation to the control strain. At pH 8.0 there is a great similarity between the expression profile of these two genes. The obtained results indicate that pacC gene plays an important role in nutrient sensing at acidic pH by modulating the expression of these transferases in the conditions evaluated. These enzymes can activate proteins that play roles in the hydrolysis of keratin, or even forming cell wall glycoproteins that are essential for the adhesion of the fungus to the host cell, suggesting a role of the manosyltransferases in the infectious process.

Orientador: Cecilia Amelia de Carvalho Zavaglia / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia mecanica / Made available in DSpace on 2018-08-04T05:13:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_ClaudioRobertoCutrim_M.pdf: 4282761 bytes, checksum: ab691d570344037977f1501d694b7a37 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Litografia macia tem sido usado recentemente para criar micro e nano estruturas bi e tridimensionais para cultura de células e engenharia de tecidos usando PDMS (poli dimetil-siloxano). PDMS é um elastômero biocompatíveí, opticamente transparente, não tóxica, e barato que pode ser moldado com alta fidelidade. Fabricou-se um arranjo de estruturas quadradas com espaçamento regular e secção transversal variando 100µmx100 µm, 150µmx 150µm, 200µmx200µm, 50µmx250µm com 50 µm de altura e uma linha separando cada uma dessas estruturas de 30µm. A proposta deste arranjo foi implementar a técnica de litografia macia para construção de dispositivos para aplicação em engenharia de tecidos, tais como: estudar o comportamento celular, adesão e espalhamento celular. Fabricaram-se também membranas porosas com diâmetro de 100 µm com altura de 35µm e espaçamento entre os poros de 35um e alguns canais microfluídicos. Estes arcabouços tridimensionais fornecerão o suporte físico para a fixação celular e reconstrução tecidual / Abstract: Soft lithography and microtransfer techniques have been used to create two and three dimensional micro and nanostructures for cells culture and tissue engineering, using PDMS (polydimethylsiloxane). PDMS is a biocompatible elastomer, optically transparent, non-toxic and inexpensive that can be molded with high fidelity. We fabricated three dimensional PDMS structures with regular spaced square arrays with l00µm, 150µm, 200µm and 250µm a side and 30µm line width and 50µ hight. The purpose of these structures is implematation of lithography soft for biomedical research such: study the behavior, adhesion and spreading of the cells.We also fabricated PDMS porous membrane with diameter of 100µm, 30µm height, spaced by 35µm and some microfluidic channels. These three dimensional scaffolds will provide the physical support to cells attachment and tissue reconstruction / Mestrado / Materiais e Processos de Fabricação / Mestre em Engenharia Mecânica

Orientador: Carlos Francisco Sampaio Bonafé / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T11:09:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Norberto_DouglasRicardo_M.pdf: 4245356 bytes, checksum: 8a2d8041749dec81554527bd8729d8ea (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A hemoglobina extracelular de Glossoscolex paulistus (eritrocruorina) foi investigada com respeito ao efeito da temperatura na dissociação induzida por alta pressão hidrostática. O aumento de temperatura e pressão induziu o processo de dissociação, como observado pela significativa diminuição da intensidade de espalhamento de luz. Tais informações foram confirmadas através de HPLC em gel filtração e microscopia eletrônica. Ocorreu uma redução dos valores de energia livre de Gibbs de dissociação indicando um processo predominantemente endotérmico. A variação de entalpia (?H) observada no processo foi de 27,82 MJ/mol de hemoglobina (Hb) e a de entropia (T?S), à temperatura de 293 K, de 23,91 MJ/mol de Hb. Foi encontrada uma redução da mudança de volume de dissociação (?V) de -78,20 para -10,44 mL/mol de subunidade de Hb. Em condições atmosféricas e temperatura de 293 K, a variação da energia interna de dissociação (?U) foi de 27,82 MJ/mol de Hb e da energia livre de Helmholtz, (?A), de 3,92 MJ/mol de Hb. Os resultados da dissociação oligomérica em alta pressão no intervalo de temperatura investigado mostraram a ocorrência de etapas distintas de mudança de estabilidade conformacional. Complementarmente, foi realizado um estudo das interações intersubunidades e da área de exposiçao da proteína ao solvente no processo de dissociação, permitindo a obtenção de importantes dados quantitativos no processo / Abstract: Glossoscolex paulistus extracelluar hemoglobin (erithrocruorin) was studied with respect of thermal effect on the dissociation induced by high hydrostatic pressure. The increase of temperature and pressure led to dissociation process, as observed by the significant decrease in the intensity of light scattering values. Such information was confirmed by HPLC gel filtration and electron microscopy. A predominantly endothermic process was observed with the reduction in the Gibbs free energy of dissociation. The enthalpy change (?H) obtained was of 27,82 MJ/mol of hemoglobin (Hb) and the entropy change (T?S), at a temperature of 273 K, 23,91 MJ/mol of Hb. The estimated volume change of dissociation (?V) decreased from -78,20 to -10,44 mL/mol of subunit of Hb. The change of internal energy of dissociation (?U), at atmospheric conditions and temperature of 293K, was of 27,82 MJ/ mol of Hb and the change of free energy of Helmholtz (?A) was of 3,92 MJ/mol of Hb. The results also indicated that the dissociation of oligomeric Hb at high pressure and at investigated temperature range occurs in distinct steps of conformational stability and allowed to obtain significant quantitative data in the process. In addition, it was studied the subunity interactions and related exposed area of the protein solvent dissociation, attempting to obtain an quantitative description of the process / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-04T13:03:14Z No. of bitstreams: 1 anacristinamouragualberto.pdf: 3081974 bytes, checksum: e832afd5a1d1f2572f0135827ea9257c (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2015-12-07T03:20:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 anacristinamouragualberto.pdf: 3081974 bytes, checksum: e832afd5a1d1f2572f0135827ea9257c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-07T03:20:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 anacristinamouragualberto.pdf: 3081974 bytes, checksum: e832afd5a1d1f2572f0135827ea9257c (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A obesidade afeta mais de 300 milhões de pessoas no mundo e está relacionada com doenças como diabetes tipo 2, doenças cardiovasculares e cânceres. Assim como a obesidade, o câncer é atualmente um problema de saúde pública mundial com um aumento em sua incidência de 20% anualmente. Há uma correlação positiva entre a incidência de tumores com pior prognóstico e a obesidade. No microambiente tumoral a degradação dos elementos de matriz extracelular (MEC) está associada à migração de células tumorais por meio de membranas basais, barreira óssea e estroma intersticial. Moléculas associadas à MEC como metaloproteinase de matriz (MMP-2, 3, 9, 11 e 13) auxiliam a degradação da MEC, permitindo assim maior migração de células tumorais, estão, portanto, associados com as etapas de progressão tumoral assim como seus inibidores (TIMP-1, TIMP-2 e RECK), e outros componentes da MEC como a fibronectina, e colágeno IV. Portanto, a identificação dessas moléculas associadas ao processo metastático em camundongos obesos e a elucidação de seu papel neste processo são importantes para a exploração de novos métodos para o diagnóstico precoce, avaliação prognóstica e padronização de novas estratégias terapêuticas. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar e comparar marcadores associados a processos metastáticos em animais obesos e controle por meio de imunohistoquímica. Para tal a obesidade foi induzida durante 12 ou 16 semanas por meio de uma dieta hiperlipídica em que 60% das quilocalorias foram advindas de lipídeos. Ao final dessas semanas, o câncer de mama foi induzido pela linhagem celular metastática 4T1 com injeção intradérmica na mama superior de camundongos BALB/c (n=40). Os animais foram eutanasiados após 14 ou 21 dias e os tumores foram coletados. A análise histopatológica dos tumores foi feita por coloração Hematoxilina-Eosina observando um aumento de vacúolos lipídicos, que podem contribuir para o recrutamento de células imunes como fatores de crescimento, em tumores de animais obesos comparados aos animais controles. Em relação a imunohistoquímica em tumores obteve-se uma maior concentração dos marcadores MMP-3, 9, 11, 13 nos animais obesos e uma menor concentração em seu inibidor RECK, demonstrando uma possível progressão tumoral mais invasiva nesses animais. Em relação a fibronectina e colágeno IV foi encontrado uma marcação mais intensa em animais obesos em relação ao controle. Entretanto, TIMP-1 e TIMP-2, demonstraram-se super expressos nos obesos, como encontrado na literatura. Assim, os resultados indicam um tumor uma progressão tumoral com um tumor mais invasivo e por isso um pior prognóstico em animais obesos quando comparados aos controles. / Obesity affects more than 300 million people worldwide and is associated with diseases such as type 2 diabetes, cardiovascular diseases and cancers. As obesity, cancer is currently a global public health problem increasing 20% annually. There is a positive correlation between the incidence of tumors with poor prognosis and obesity. The degradation of extracellular matrix components (ECM) in the tumor microenvironment is associated with tumor cells migration through basement membranes, bone barrier and interstitial stroma. Molecules associated with ECM such as extracellular matrix metalloproteinase (MMP-2, 3, 9, 11 and 13) help the degradation of ECM, and so promote tumor cell migration. Therefore, these molecules are associated with tumor progression stages as well as their inhibitors (TIMP-1, TIMP-2 and RECK), and other ECM components such as fibronectin and collagen IV. Thus, the identification of these molecules associated with the metastatic process in obese mice and the elucidation of their role in this process are important to explore new methods for early diagnosis, prognostic evaluation and standardization of new therapeutic strategies. Thus, this study aimed to evaluate and compare markers associated with metastatic processes in obese and control animals by immunohistochemistry. For that purpose, obesity was induced for 12 or 16 weeks by a high fat diet ( 60% of the kilocalories is from lipids). At the end of those weeks, breast cancer was induced by metastatic cell line 4T1 with intradermal injection in the upper breast BALB / c mice (n = 40). These animals were euthanized after 14 or 21 days and the tumors were collected. Histopathology analysis of the tumors was performed by Hematoxylin-Eosin staining. As result, it was observed an increase in lipid vacuoles, which may contribute to the recruitment of immune cells such as tumor growth factors in obese animals compared to control animals. The immunohistochemistry analysis shows a higher concentration of MMP-3, 9, 11, 13 expressions in obese animals and a lower concentration of their inhibitor RECK, suggesting a more aggressive tumor invasion in those animals. Regarding the fibronectin and collagen type IV were found higher concentrations in obese animals compared to controls. However, TIMP-1 and TIMP-2, showed an upregulation in obese, as found in the literature. Thus, the results indicate more invasive breast cancer progression and so a worse prognosis in obese animals when compare to controls.

Aneurismas e dissecções da aorta ascendente são caracterizados por degradação das fibras elásticas e de colágeno e diminuição de células musculares lisas, predominantemente em áreas mucóides, as quais são relacionadas ao acúmulo de glicosaminoglicanos ou proteoglicanos. Tendo em vistas tais alterações, estudamos a topologia das metaloproteases nestas doenças. Cortes de 5?m de aortas, fixadas em fomol e embebidas em parafina, foram submetidos a reações imuno-histoquímicas para MMP-3 (estromelisina), MMP-7 (matrilisina) e plasminogênio/plasmina na camada média. Em paralelo, cortes de aortas foram submetidos a coloração pela hematoxilina e eosina e azul de Alcian (para material mucóide). Aortas de 8 pacientes com aneurisma de aorta torácica e 10 com dissecções agudas foram analisadas. Adicionalmente, 9 aortas normais foram estudadas como controle. Em todos os casos, MMP-3 e, mais expressivamente, MMP-7 apresentaram marcação dentro dos acúmulos mucóides. Em contrapartida, a marcação para plasmina/plasminogênio situou-se ao redor deles. Fora dessas áreas, a MMP-3 mostrou distribuição intra e extracelular, a MMP-7 apresentou marcação intra e extracelular predominante na segunda metade da túnica média, e plasmina/plasminogênio teve co-localização com células musculares lisas. Considerando que matrilisina e estromelisina atuam sobre os proteoglicanos e sobre outros componentes da matriz extracelular, estas enzimas poderiam estar envolvidas diretamente na gênese dos aneurismas e dissecções da aorta ascendente, com possível modulação por plasminogênio/plasmina / In dissections and non-inflammatory aneurysms of the ascending aorta there is an increase in mucoid (proteoglycan) deposition. We analyzed by immunoperoxidase the distribution of stromelysin (MMP-7), matrilysin (MMP-3) and plasminogen/plasmin, enzymes that act on proteoglycans, in sections of human aortas with these diseases and in controls. In cases with any of these diseases MMP-7 and MMP-3 were accumulated in the areas of mucoid degeneration, and plasmin around them. Such enzymes could thus be involved in these diseases. We also evaluated by morphometry the amount of collagen in the two halves of the aortic media.