La epilepsia lateral temporal de herencia autosómica dominante, es una forma de epilepsia parcial, con crisis secundariamente generalizadas, causada por mutaciones en LGI1. Este gen fue inicialmente descrito en 1998 en relación a la aparición de glioblastomas malignos y se ha visto que su expresión, se relaciona inversamente con el grado de malignidad de estos tumores. El análisis in silico de la secuencia primaria de LGI1, permitió identificar una familia génica compuesta por cuatro elementos, que compartían una misma organización en dominios proteicos: la familia LGI. La existencia de formas clínicas de epilepsia similares a aquellas debidas a mutaciones en LGI1 pero sin relación con este gen, permite establecer la hipótesis de que algún otro componente de la misma familia génica podría estar implicado en la aparición de la enfermedad. Además, la existencia de varios parálogos sugiere que se da un cierto grado de redundancia funcional, que podría ser explicado por una distinta distribución anatómica de los elementos de la familia LGI. En este trabajo se presentan los resultados del análisis de expresión de los ARNm de los componentes de la familia LGI en cerebro de ratón adulto. La distribución de transcritos de los genes de la familia LGI es regionalmente heterogénea, lo que hace pensar que desde su origen a partir de un gen ancestral común, sufrieron una subfuncionalización. Además, en este trabajo se trata de indagar, en la posible función o funciones de estos genes. / Autosomic dominant lateral temporal epilepsy (ADLTE) is a form of partial epilepsy with secondary generalized seizures, caused by mutations in LGI1. This gene was initially identified in 1998, as a tumour suppressor in multiform glioblastoma, affecting to the malignancy of these tumours. In silico analysis of the primary sequence of LGI1, revealed four paralogues of the gene, which shared a very similar domain structure and were named as LGI1, LGI2, LGI3 and LGI4. The existence of similar types of epilepsy with common features for that seen for ADLTE, suggests that some other members of this gene family could be involved in these pathologies. Moreover, the presence of four paralogues, makes the idea of a certain degree of functional redundancy, possible. This fact, could be explained by the complementary distribution of cells expressing the genes of this family in the brain. In this work, we show a detailed expression analysis of the mRNA of the members of the LGI family in adult mouse brain. The distribution of these genes is regionally heterogeneous, suggesting that since their origin as a common ancestral gene, a subfunctionalization might have occurred. In this work, we try to shed light on these possible functions.

Autosomic dominant lateral temporal epilepsy (ADLTE) is a form of partial epilepsy with secondary generalized seizures, caused by mutations in LGI1. This gene was initially identified in 1998, as a tumour suppressor in multiform glioblastoma, affecting to the malignancy of these tumours. In silico analysis of the primary sequence of LGI1, revealed four paralogues of the gene, which shared a very similar domain structure and were named as LGI1, LGI2, LGI3 and LGI4. The existence of similar types of epilepsy with common features for that seen for ADLTE, suggests that some other members of this gene family could be involved in these pathologies. Moreover, the presence of four paralogues, makes the idea of a certain degree of functional redundancy, possible. This fact, could be explained by the complementary distribution of cells expressing the genes of this family in the brain. In this work, we show a detailed expression analysis of the mRNA of the members of the LGI family in adult mouse brain. The distribution of these genes is regionally heterogeneous, suggesting that since their origin as a common ancestral gene, a subfunctionalization might have occurred. In this work, we try to shed light on these possible functions. / Negative cofactor 2 (NC2) has been described as an essential and evolutionarily conserved transcriptional repressor, although in vitro and in vivo experiments suggest that it can function as both a positive and a negative effector of transcription. NC2 operates by interacting with the core promoter and components of the basal transcription machinery, like the TBP. In this work, we have isolated mutants that suppress the growth defect caused by depletion of NC2. We have identified mutations affecting components of three different complexes involved in the control of basal transcription: the mediator, TFIIH, and RNA pol II itself. Mutations in RNA pol II include both overexpression of truncated forms of the two largest subunits (Rpb1p and Rpb2p) and reduced levels of these proteins. Suppression of NC2 depletion was also observed by reducing the amounts of the mediator essential components Nut2p and Med7p, as well as by deleting any of the nonessential mediator components, except Med2p, Med3p, and Gal11p subunits. Interestingly, the Med2p/Med3p/Gal11p triad forms a submodule within the mediator tail. Our results support the existence of different components within the basic transcription complexes that antagonistically interact with NC2 repressor and suggest that the correct balance between the activities of specific positive and negative components is essential for cell growth. In the second part of this work, we study a novel and highly conserved factor that physically interacts with most of the RNA pol II subunits, Iwr1p. Here we show that Iwr1p genetically interacts with components of the basal transcription machinery and plays a role in both basal and regulated transcription. We report that mutation of IWR1 gene is able to bypass the otherwise essential requirement for the transcriptional regulator NC2, which occurs with different components of the basal transcription machinery, including TFIIA and subunits of the mediator complex. Deletion of the IWR1 gene leads to an altered expression of specific genes, including phosphate-responsive genes and SUC2. Our results show that Iwr1p is a nucleocytoplasmic shuttling protein and suggest that Iwr1p acts early in the formation of the pre-initiation complex by mediating the interaction of certain activators with the basal transcription apparatus.

Los importantes cambios que están teniendo lugar en el entorno de las empresas, tales como la liberalización de los flujos comerciales, financieros y de inversión, el desarrollo tecnológico y la internacionalización están conduciendo a un aumento de la competencia. Aunque todas las empresas están siendo afectadas, estos cambios en el entorno están perjudicando en mayor medida a los sectores manufactureros tradicionales, ya que las empresas pertenecientes a estos sectores presentan una serie de características estructurales que las hacen más vulnerables (reducido tamaño, escaso desarrollo tecnológico, baja productividad, escasos recursos financieros, etc.). Esto ha dado lugar a que la situación en la que se encuentran una gran cantidad de compañías pertenecientes a estos sectores maduros pueda ser considerada como de declive. El objetivo de esta investigación consiste en conocer la razón por la que algunas de estas empresas afrontan la situación por la que atraviesan, a través de la elección de alternativas estratégicas, mientras que otras son incapaces de reaccionar. A partir de una muestra de 130 empresas se observa que las percepciones y las características del director general así como las características organizativas influyen en el carácter estimulador o inhibidor del declive. Específicamente, se demuestra que la percepción sobre las capacidades de la empresa y del entorno, el tiempo en el cargo del director general y la gravedad de la situación financiera influyen en la reacción de la empresa frente al declive. Además, los resultados también indican que el efecto de dichos factores variará en función de la estrategia considerada. Así, las características organizativas son variables explicativas de la percepción de necesidad de implementación de estrategias competitivas, las estrategias corporativas están explicadas en mayor medida por las percepciones del director general y la elección de las estrategias de retrenchment está influida principalmente por las características del director general. / The important changes are taking place in business environment, such as liberalization of commercial, financial and investment flows, technological development and globalization are leading to increased competition. Although all companies are affected, these changes in the environment are hurting more to traditional manufacturing industries, as companies in these sectors have a number of structural characteristics that make them more vulnerable (small size, low technological development, low productivity, limited financial resources, etc.). This has led to a situation in which there are a large number of companies in these industries we can consider in decline. The objective of this study is to know the reason why some of these companies face the situation through the choice of strategic alternatives, while others are unable to react. From a sample of 130 companies we show that CEO perceptions and characteristics as well as organizational characteristics influence the stimulating or inhibiting effect of decline. Specifically, we show that the perception about the capabilities of the company and the environment, the CEO tenure and the severity of the financial situation influence the company's reaction against a decline. Furthermore, the results also indicate that the effect of these factors will vary depending on the strategy considered. Thus, organizational characteristics are variables that explain the perceived need for implementation of business level strategies. Corporate strategies are better explained by CEO perceptions. Finally, the choice of retrenchment strategies is mainly influenced by CEO characteristics

En esta Tesis Doctoral estudiamos el efecto de la diabetes tipo 1 sobre la memoria de color. Los observadores con diabetes se clasifican en 3 grupos: 31 sujetos con fondo de ojo normal, (GDFON) 25 sujetos con retinopatía no proliferatíva, (GDRNP), y 29 sujetos con retinopatía proliferativa sometidos al tratamiento de fotocoagulación con laser, (GDTL). Determinamos, en el espacio CIELAB, las variaciones medias entre una muestra presente (test de referencia) y otra yuxtapuesta (igualación cromática simultánea) o que se recuerda (igualación cromática por memoria), correspondientes a las componentes de la diferencia de color (diferencia de claridad, ΔL*, diferencia de croma, ΔC*ab, y diferencia de tono, ΔH*ab), y a la diferencia total de color, ΔE*ab. A partir de aquí, comparamos los resultados obtenidos con cada uno de los tres grupos, entre sí y con los de un grupo control, GC, formado por 31 observadores -no diabéticos. Finalmente, medimos y comparamos los tiempos medios que precisan cada una de estos cuatro grupos en escoger, con ambos métodos de igualación cromática, la muestra que más se asemeja al test de referencia (tiempo de respuesta). Para realizar la experiencia seleccionamos 5 muestras de color, tests de referencia, de un Atlas de color Munsell. Para el estudio con cada uno de los tests utilizamos 20 muestras de comparación escogidas de un Atlas Munsell semejante al primero. De los resultados obtenidos se concluye lo siguiente: 1) Hemos comprobado que, también en el caso de los diabéticos, la igualación del color por memoria es peor que la simultánea (p ≤ 0.005). 2) Independientemente del color del test original, el grupo GDTL iguala el color del test peor que el grupo GC. Asimismo, el grupo GDTL iguala peor que los grupos GDFON (para rosa y naranja), y GDRNP (para violeta, rosa y naranja). 3) El grupo GDFON recuerda mejor el naranja original que los grupos GC (p=0.026) y GDTL (p=0.040). 4) Las diferencias entre grupos con los descriptores perceptuales del color (claridad, tono y croma) recordados no son significativos para violeta, verde azulado y rosa. 5) El grupo GDTL recuerda el verde amarillento original más claro que los grupos GC (p=0.008), GDFON (p=0.007), y GDRNP (p=0.004). 6) El grupo GC recuerda el croma del verde amarillento y del naranja más cromático que los grupos GDFON Y GDRNP; para el naranja, el croma es el descriptor perceptual que más contribuye a la diferencia de color media entre los grupos GDFON y GC. 7) Mientras el grupo GDFON recuerda el tono del verde amarillento mejor, aunque más amarillento, los grupos GC, GDRNP y GDTL lo recuerdan más verdoso. Para el naranja, el grupo GDRNP recuerda el tono original peor, más amarillento, que el de GC (p=0.015), que además, lo recuerda más rojizo. 8) Para verde azulado y naranja todos los grupos tardan el mismo tiempo en igualar. Los grupos más lentos son el GDTL para violeta, y el GC para rosa; el grupo GDFON es el más rápido tanto con verde amarillento como con rosa. Observamos que, independientemente del color del test original, los tres grupos de diabéticos tardan en igualar por memoria la mitad de tiempo que el grupo GC (p≤0.005). Según estas conclusiones diseñamos 2 tests basados en la igualación cromática simultánea y por memoria, que se podrían utilizar en atención primaria y controles médicos rutinarios. Con ellos detectaríamos si el sujeto padece o no diabetes, y en su caso, el tipo de retinopatía que presenta. Sería un test fácil de utilizar, barato, inocuo y muy útil ya que evitaría las visitas al oftalmólogo de pacientes que realmente no lo necesitan y detectaría antes la enfermedad. / Effect of type 1 diabetes on the memory of colour. The observed diabetic subjects are classified in three groups: 31 subjects with healthy rear of the eye, (GDFON), 25 subjects suffering from non-proliferative retinopathy, (GDRNP), and 29 subjects suffering from proliferative retinopathy treated with laser photocoagulation, (GDTL). We determine, on CIELAB space, the average change between a present sample and a yuxtaposed or remembered one, corresponding to the components of the change in colour (ΔL*, ΔC* ab, ΔH* ab), and to the total difference in colour, ΔE*ab. From this point, we compare the results obtained in each of the three groups, among them and with the results obtained in a control group, (CG), 31 observed non diabetic subjects. To perform the experiment we select 5 reference tests, from a Munsell colour system. To conduct the study, with every test we use 20 matching samples selected from a Munsell colour system. Conclusions: 1) The balancing of colour done by memory is worse than the one which occurs simultaneously (p ≤ 0.005). 2) GDTL balances the colour on the test worse than GC. GDTL balances colour worse than GDFON (concerning pink and orange) and GDRNP (violet, pink and orange). 3) GDFON recalls original orange better than GC (p=0.026) and GDTL (p=0.040). 4) Concerning orange, the chroma is the perceptual descriptor that contributes the most to the average change of colour between GDFON and GC. 5) Concerning orange, GDRNP recalls the original hue worse, more yellowish, than GC (p=0.015), which in spite of everything, recalls it more reddish. According to these conclusions we design two tests based on the chromatic balancing, simultaneous and by memory, which could be used in routine medical checkups.We would detect if the subject suffers from diabetes or not, and in case the tests were positive, we could establish the kind of retinopathy. It would not only be an easy to use test but it also would be cheap, harmless and really useful as it would save appointments at the ophthalmologist to pacients who really don't need it and we would detect the disease earlier.

INTRODUCCIÓN: El cáncer de mama adquiere cada vez mayor relevancia por ser la enfermedad maligna que afecta a mujeres más común del mundo desarrollado. Aunque la mortalidad por cáncer de mama ha descendido, en los últimos años la incidencia de cáncer de mama se ha mantenido estancada. Se vuelve, por tanto, fundamental realizar esfuerzos encaminados a la prevención de esta enfermedad, siendo necesario para ello conocer el perfil de la paciente diagnosticada de cáncer de mama en la actualidad para valorar los posibles cambios producidos en este perfil en los últimos tiempos. Este estudio pretende obtener el perfil actual de las pacientes diagnosticadas de cáncer de mama en el momento de la detección, en el que se ponga de manifiesto la relación, si la hubiera, entre una serie de factores a estudiar y el desarrollo de cáncer de mama, con el fin de poder diseñar un programa de prevención de cáncer de mama. Se pretende, también, comprobar si el método definido por Gail es aplicable y predictivo en la población de mujeres valencianas, y por último, conocer la influencia que sobre la supervivencia global de los pacientes con cáncer de mama tienen ciertas variables de estudio. PACIENTES Y MÉTODOS: Se realizó un estudio retrospectivo mediante revisión de la información obtenida por el facultativo en la primera visita a casos incidentes de cáncer de mama, que habían sido atendidos en el Hospital Clínic Universitari de Valencia y en la Fundación Instituto Valenciano de Oncología durante el periodo comprendido entre enero de 2000 y diciembre de 2001. Se realizó un estudio de casos y controles, un análisis multivariante y, por último, se evaluó la supervivencia global de los pacientes con cáncer de mama, así como la supervivencia obtenida en función de determinados factores. Además, se realizó un estudio sobre la aplicación del método de Gail de cálculo de riesgo en la población de estudio. RESULTADOS: Los resultados obtenidos demuestran que las patologías benignas de mama, particularmente las lesiones calificadas como proliferativas, incrementan el riesgo de desarrollar cáncer de mama. Se corroboró la importancia del autoexamen mamario en la mujer. Se obtuvo una disminución del riesgo para aquellas mujeres con menos un hijo. Y la menopausia>55 años aumentó significativamente el riesgo. El método de Gail sólo habría detectado al 41% de las pacientes que han desarrollado un cáncer de mama. CONCLUSIONES: Sería recomendable incorporar la variable patología mamaria previa en los criterios de selección de mujeres para el cribado del cáncer de mama. Se confirma la paridad como un importante factor protector El método de Gail no parece adaptarse a la población valenciana. En nuestra población sería útil para mujeres de edades avanzadas con antecedentes de cáncer de mama. / INTRODUCTION: Breast cancer is the most common malignant disease affecting women in the developed world. It seems essential to make efforts at the prevention of breast cancer, being necessary to know the profile of the patient diagnosed with breast cancer nowadays to assess possible changes. This study seeks to obtain a current profile of patients diagnosed with breast cancer at the time of detection, to highlight the relationship between a number of factors and breast cancer, in order to improve the prevention programs for breast cancer. It is to check whether the method defined by Gail is applicable and predictive in Valencian women and know the influence on overall survival of certain variables. PATIENTS AND METHODS: A retrospective method was carried out by a review of information obtained at the first sight of incident cases treated at the University Hospital of Valencia and the Valencian Institute of Oncology Foundation between January 2000 and December 2001. It realized a case-control study, a multivariate analysis and assessed the overall survival of patients, the survival obtained in certain factors. Besides, it examined the application of the method of Gail risk calculation. RESULTS: Breast benign pathologies, particularly those classified as proliferative lesions, increase the risk of developing breast cancer. It confirmed the importance of breast self-examination in women. It was obtained a reduction of risk for women with at least one child and menopause > 55 years old significantly increased the risk. I would only have detected 41% of patients who have developed breast cancer using the Gail method. CONCLUSIONS: It would be advisable to incorporate the variable previous breast disease screening criteria for breast cancer. Parity is confirmed as an important protective factor. The method of Gail does not seem to fit in the population of Valencia. It would be useful in our population for older women with a history of breast cancer.

El estudio tiene como objetivo principal explorar los factores individuales, interpersonales y ambientales asociados con la reducción, aumento o mantenimiento del consumo de alcohol en la población inmigrante latinoamericana residente en la Ciudad de Valencia, en España. Específicamente, se determinan factores de riesgo o protectores para el consumo de alcohol perjudicial medido con el Alcohol Use Disorders Identification Test (AUDIT) (Saunders et al., 1993), y aquellos relacionados con el cambio en el consumo de alcohol (aumento, reducción), y mantenimiento del tipo de consumo (perjudicial, no perjudicial y abstinencia). Es un estudio con diseño longitudinal de dos años, en donde 113 inmigrantes latinoamericanos han sido entrevistados a través de llamada telefónica, y 27 de ellos entrevistados personalmente con una entrevista semi-estructurada. Se utiliza metodología cualitativa y cuantitativa en los análisis de los datos. En los apartados de resultados y discusión de resultados, se especifican los factores pronósticos -de riesgo o protección- para el consumo de alcohol perjudicial, y para el cambio o mantenimiento en el tipo de consumo posterior a los dos años. Adicionalmente, se exponen opiniones y sugerencias por parte de los entrevistados de medidas o programas efectivos para la prevención o reducción del consumo de alcohol y otras drogas ilegales -tanto en población inmigrante latinoamericana como en población general- y sobre la facilidad para solicitar o asistir a tratamiento por consumo de alcohol perjudicial o alcoholismo. En base a los resultados obtenidos, se realizan propuestas de estrategias para la prevención y asistencia que son sensibles culturalmente y adaptadas al contexto español; y propuestas de estudios relevantes a realizar en esta área. En los apéndices se exponen las tablas de los resultados de los análisis cuantitativos y cualitativos realizados, y los instrumentos de recolección de datos utilizados. / The aim of the study is to explore the individual, interpersonal and contextual factors associated with the reduction, increase and maintenance of alcohol consumption in latinoamerican immigrants living at Valencia City in Spain. Specifically, we determine risk and protective factors for the harmful consumption of alcohol measured with the Alcohol Use Disorders Identification Test (AUDIT) (Saunders et al., 1993), and those related with the change of alcohol consumption (increase or reduction), and maintenance of alcohol consumption (harmful, no harmful and abstinence). Is a two-year longitudinal study, where 113 latinoamericans immigrants were interviewed by phone call and 27 of them with a face to face semi-structure interview. It is used cuantitative and cualitative methodology for the analysis of data. In the sections of results and discussion are specified the prognostic factors –protective and risk factors- for harmful consumption, and for the change or maintenance of alcohol consumption two years after a first interview. Additionally, it is exposed the opinions and suggestions of respondents regard effective actions or programs for the prevention and reduction of alcohol consumption and illegal drugs –in both latinoamerican immigrants and general population- and regard the facility to request or attend treatment for alcohol abuse or dependence. Based on the results, proposals are made for prevention and assistance strategies, culturally relevant for latinoamericans and adapted to the Spanish context; also proposals to conduct relevant studies in this area. In appendices are presented the tables of results from the cuantitative and cualitative analysis, and instruments used to collect data.

INTRODUCCIÓN: La vía anticoagulante de la proteína C (PC) es un potente mecanismo fisiológico antitrombótico. Prueba de ello es que la mayoría de los factores de riesgo trombótico de origen genético conocidos, se localizan en las proteínas que componen esta vía o bien en aquellas que modulan su actividad. OBJETIVOS: Nos planteamos caracterizar las principales mutaciones identificadas en los genes que codifican para los dos receptores endoteliales implicados en la activación de la PC, el receptor endotelial de la PC (EPCR) y la trombomodulina (TM), con la finalidad de conocer cómo modifican el riesgo de tromboembolismo venoso (TEV) en pacientes consecutivos o en individuos que ya tienen un factor de riesgo trombótico conocido, como son los portadores de la mutación 20210A del gen de la protrombina (PT), en pacientes con la enfermedad de Behçet y pacientes que han sufrido un infarto de miocardio precoz, patologías en las que la inflamación juega un papel muy importante, y en las que las acciones antiinflamatorias y citoprotectoras del sistema de la PC pueden jugar un papel relevante. Además, nos planteamos estudiar los niveles de glucosilceramida (GlcCer), con actividad anticoagulante, así como identificar las posibles mutaciones en el gen que codifica para el enzima responsable de la síntesis de la GlcCer, la UGCG, que pudieran influir sobre los niveles de GlcCer y sobre el riesgo trombótico. MATERIAL Y MÉTODOS: Tras la selección del grupo de pacientes y controles adecuado a cada estudio, se realizó una extracción de sangre periférica empleando tubos con diferentes tipos de anticoagulantes según el ensayo a realizar para la determinación de los diferentes parámetros plasmáticos. La detección de las diferentes mutaciones se realizó empleando diferentes técnicas de biología molecular. RESULTADOS: En presencia del haplotipo A3 del gen del EPCR aumenta el riesgo de TEV en portadores de la mutación 20210A del gen de la PT, posiblemente debido a los niveles aumentados de EPCR soluble asociados con este haplotipo. Por otra parte, el alelo 1418T del gen de la TM reduce significativamente el riesgo trombótico. Este efecto protector puede deberse a la asociación de este alelo con una mayor estabilidad de la TM en la membrana de la célula endotelial. Así, en el estudio con células endoteliales de cordón umbilical humano, se observó que las células portadoras del alelo 1418T muestran un elevado nivel de TM en la membrana y un menor nivel en el sobrenadante del cultivo. Los resultados también demuestran que niveles reducidos de GlcCer y de PC activada (APC) constituyen un factor de riesgo independiente para el TEV, además, la deficiencia combinada de ambos eleva el riesgo individual de cada uno de ellos. El estudio del gen de la UGCG mostró que la inserción de 10 pb en posición -222 en homocigosis, se asocia con niveles aumentados de GlcCer y con una reducción del riesgo trombótico. Además, individuos portadores de los haplotipos A1 y A3 del gen del EPCR tienen un menor riesgo de infarto de miocardio precoz. Este efecto protector se debe, posiblemente, a los elevados niveles circulantes de APC y EPCR soluble asociados con estos haplotipos. Por último, los resultados preliminares para la enfermedad de Behçet sugieren que los haplotipos A1 y A3 del gen del EPCR también parecen disminuir el riesgo de sufrir un TEV en pacientes con esta enfermedad. CONCLUSIONES: Estos resultados reflejan el papel de las principales mutaciones descritas en las proteínas que componen o regulan la vía de la PC, mediadas por las diferentes funciones que pueden ejercer tanto la APC como el EPCR soluble. Así, la APC muestra efectos anticoagulantes y citoprotectores en la trombosis venosa y arterial, mientras que el EPCR soluble puede expresar una función procoagulante en la trombosis venosa y una función citoprotectora en la trombosis arterial. / The protein C (PC) anticoagulant pathway plays a crucial role in the regulation of blood coagulation. In the last years, several reports have suggested the association between mutations in the proteins that form or those that regulate this pathway and an increased risk of thrombosis. In the present study, we evaluated the functionality of the main mutations identified in the genes of two of the membrane-bound proteins involved in the activation of PC, thrombomodulin (TM) and endothelial PC receptor (EPCR), in a group of consecutive patients with venous thromboembolism (VTE), carriers of the prothrombin 20210A mutation, patients with premature myocardial infarction patients with Behcet’s disease, and in an age and sex-matched control group for each patients group. On the other hand, we assessed the association between levels of GlcCer, a glycolipid with anticoagulant activity, activated PC (APC) and the risk of VTE. The UGCG is the enzyme that synthesizes GlcCer, so we evaluated if any mutation in the UGCG gene modify the risk of VTE. Our results were as follow: 1) carriers of the 20210A mutation and the A3 haplotype of EPCR have increased risk of VTE, probably due to the increased levels of soluble EPCR observed, associated with this haplotype; 2) Carriers of EPCR A1 and A3 have lower risk of premature myocardial infarction, probably due to the increased levels of APC and soluble EPCR observed, associated with these haplotypes; 3) Patients with Behçet disease present a lower risk for VTE in the presence of EPCR A1 and A3 haplotypes; 4) Patients with VTE carrying the TM 1418T allele have lower risk of VTE, probably due to an increased stability of the membrane-bound TM in the presence of this allele; 5) Decreased levels of GlcCer are an independent risk factor for VTE, potentiated by low levels of APC; 6) The presence of the ins10pb -222 in the UGCG gene, is associated with elevated levels of GlcCer and reduced risk of VTE. In conclusion, these results showed the role of the main mutations described in the proteins that form or regulate the PC pathway, such as EPCR, TM and GlcCer. These functions are mediated by the anticoagulant and cytoprotective properties of the APC and soluble EPCR in venous and arterial thrombosis.

La Enfermedad Celiaca (EC) es de origen multifactorial (gluten y otros factores ambientales no bien definidos) y poligénico. La predisposición genética viene dada por la tasa de concordancia entre familiares de primer grado (10%) y la tasa de concordancia entre gemelos monocigotos de hasta un 70%. Los genes del sistema HLA (antígeno Humano de Histocompatibilidad) case II han sido identificados como factores de riego genético claves en la susceptibilidad de la EC otorgándoles un 40% del riesgo genético global. En nuestra población española (Comunidad Valenciana) se analizó la asociación entre los genes HLA clase II y EC. En nuestra muestra se han estudiado a un total de 185 pacientes (que cumplían los criterios ESPGAN 1990 para el diagnóstico de la EC) y a sus familiares en primer grado. En nuestra población hemos encontrado asociación individual entre la EC y los antígenos de sistema HLA DRB1*03, DRB1*07, DRB3*, DQB1*02:01, DQB1*02:02 y DQA1*05:01, sin embargo, no encontramos asociación con los alelos DRB1*04, DQB1*03:02 ni DQA1*03:01-03, que codificarían para la molécula heterodímera DQ8. El 92.9% de los sujetos son portadores de DQ2 y el 69.7% de los pacientes presentan el haplotipo DRB1*03:01-DQB1*02:01-DQA1*05:01 (DR3-DQ2), existiendo un número importante de pacientes con el haplotipo DRB1*07:01-DQB1*02:02-DQA1*02:01/ DRB1*11-DQB1*03:01-DQA1*05:05 (DR7-DQ2/DR5-DQ7) que codificarían para la molécula heterodímera DQ2 en trans (18.9%). El 3.7% son positivos para DQ8 y negativos para DQ2. Únicamente 1.6% de todos los pacientes no porta alguno de haplotipos asociados clásicamente a la EC. Las combinaciones de los haplotipos DR3–DQ2 con DR7–DQ2, y DR7–DQ2 con DR5–DQ7, presenta 2 veces el riesgo comparado con cada haplotipo en homocigosis. En el test de independencia para el haplotipo DR3-DQ2 mostró que la susceptibilidad para la EC no se asocia de forma primaria con ninguno de los loci estudiados sino con el haplotipo completo. Por el contrario en el caso del haplotipo DR7-DQ2 la asociación con DRB1*07 es secundaria a DQB1/DQA1. El tipaje de los alelos HLA en la EC nos reporta un alto valor predictivo negativo siendo útil como guía para el despistaje de la EC en familiares y grupos de riesgo o en aquellos casos con dudas diagnósticas. No encontramos relación entre las diversas combinaciones de haplotipos y las manifestaciones clínicas de la enfermedad, grado de lesión o momento de debut. Si realizamos el estudio HLA en los familiares como despistaje de EC en un 22,7% se excluiría la enfermedad no precisando seguimiento clínico ni serológico. En el estudio del locus CTLA-4, existe una transmisión estadísticamente significativa mayor del alelo A frente al alelo G a los individuos afectos de enfermedad celíaca en el caso del marcador +49*A/G. / Coeliac Disease (CD) is a polygenic (multiple gene) and multifactorial (gluten and other still unidentified environmental factors) disease. Genetic predisposition to CD is illustrated by a high prevalence rate among first-degree relatives (10%) and a concordance rate of approximately 70% in monozygotic twins. Human leukocyte antigen (HLA) genes encoding class II molecules have been firmly identified as key genetic risk factors in CD, this region by its own is believed to confer up to 40% of the increased risk of CD. The association between HLA class II antigens and CD was analyzed in a Spanish population (Valencian Community). In our CD population (185 patients who fulfil ESPGAN criteria) we found iassociation between CD and the HLA alleles DRB1*03, DRB1*07, DRB3*, DQB1*02:01, DQB1*02:02 and DQA1*05:01 but no association with DRB1*04 and DQB1*0302 was noted. The 92.9% of the subjects were DQ2 being the main associated haplotype in a 69.7% of the cases DRB1*03–DQB1*0201–DQA1*0501(DR3–DQ2), followed by DRB1*07– DQB1*0202–DQA1*0201 (DR7–DQ2) haplotype, which is associated with DRB1*11–DQB1*0301–DQA1*0505 (DR5–DQ7) in an 18.9%. The combinations of DR3–DQ2 with DR7–DQ2, and DR7–DQ2 with DR5–DQ7, present a twofold risk compared with each haplotype in homozygosis. An independence test in DR3-DQ2 haplotype found that association with CD was attributable to the whole haplotype, but for DR7-DQ2 was secondary to DQB1/DQA1. There is no need of a double gene dosage to increase the risk. CD-associated alleles typing demonstrate a very high negative predictive value to exclude CD in risk groups. No relation between clinical manifestations, age of onset or mucosal damage degree could be related with any kind of haplotype combination. If HLA typing was performed among first degree relatives following up of 22, 5% of them could be excluded as they do not share the risks HLA haplotypes. In the evaluation of the CTLA 4 locus in our population we found a small but significant association with the SNP +49*A/G.

Las micotoxinas son metabolitos secundarios producidos por hongos filamentosos capaces de crecer en gran variedad de sustratos, contaminando con frecuencia alimentos, en especial, los de origen vegetal, pudiendo producir una respuesta tóxica en animales o seres humanos después de la ingestión del alimento contaminado. Los principales hongos productores de micotoxinas pertenecen a los géneros Penicillium, Aspergillus, Fusarium y Alternaria que pueden producir entre otras, las micotoxinas: alternarioles, aflatoxinas, zearalenona, patulina, ocratoxinas y tricotecenos. Dada la peligrosidad de la ingesta de micotoxinas, la Unión Europea, preocupada por la calidad y salubridad de los alimentos, ha aprobado el Reglamento (CE) 1881/2006 de la Comisión en el que controla la presencia de micotoxinas en productos alimentarios que llegan al consumidor. De entre las diferentes micotoxinas las que están adquiriendo mayor relevancia debido a que están siendo encontradas en gran variedad de sustratos son: la ocratoxina A (OTA) y los tricotecenos tipo B, así como la patulina (PAT). La OTA es nefrotóxica, nefrocarcinogénicas, inmunosupresora, teratogénica y posiblemente genotóxica. Los niveles más altos de incidencia de OTA se han encontrado en cereales y productos derivados, así como en uva y derivados. Los tricotecenos pueden producir diferentes efectos tóxicos en animales y humanos como rechazo del alimento, vomito, hemorragia, anemia, immunosupresión, reducción de ganancia de peso y diarrea. También son unos potentes inhibidores de la síntesis de la proteína. El desoxinivalenol es el más frecuente tricoteceno detectado en muestras de cereal, aunque también se puede encontrar nivalenol, 3- y 15-acetildesoxinivalenol. Todas estas micotoxinas están clasificadas como tricotecenos tipo B. La patulina, produce hiperemia, congestión y lesiones hemorrágicas, especialmente en el tracto digestivo; así como náuseas y vómitos. La PAT puede detectarse en frutas, hortalizas, cereales y piensos. Para la determinación de las micotoxinas se utilizan técnicas cromatográficas que ofrecen los mejores resultados, sin embargo es imprescindible su optimización para adaptarlas a cada matriz, así como de un método previo de preparación, extracción y purificación adecuado para cada tipo de sustrato. La tesis doctoral está enfocada a: i) La realización de estudios de la micobiota presente en trigo y manzana. ii) La evaluación de la incidencia de especies fúngicas potencialmente productoras de OTA y tricotecenos tipo B en trigo y de patulina en manzana. iii) La mejora de los métodos de detección de la OTA, tricotecenos tipo B y patulina en los productos a estudiar. Para ello se realiza un estudio de la metodología existente y se procede al análisis comparativo y a una posterior optimización con procedimientos desarrollados en nuestro laboratorio. iv) La optimización de técnicas de análisis sensibles, fiables y reproducibles para la determinación de las toxinas en los cereales y manzanas y en sus derivados considerados mediante GC, LC, GC-MS, LC-MS. v) El análisis de los tricotecenos tipo B y ocratoxina A en trigo y sus derivados como pan, y comprobar su incidencia y cantidad de toxina encontrada para establecer el grado de peligrosidad para el consumo humano, y comparar los resultados con los de otros países. De igual modo se abordó el estudio de la patulina para la manzana y sus derivados. vi) Los estudios de la influencia de la temperatura de incubación, actividad de agua y tipo de aislado en la producción de tricotecenos tipo B, OTA y patulina. vii) El desarrollo de métodos predictivos para poder predecir la existencia de micotoxinas y poder eliminar riesgos controlando los diversos factores de la manipulación del trigo. viii) Los estudios sobre el uso de fitosanitarios con respecto al control de la presencia de estas especies fúngicas contaminantes en las materia primas y el efecto que estos pueden ejercer sobre la producción de diferentes micotoxinas. / The mycotoxins are secondary metabolites produced by filamentous fungi able to grow in great variety of substrates, contaminating frequently foods such as wheat and apple. These foods can produce a toxic effects in humans. The main producing fungi of mycotoxins belong to the genera Penicillium, Aspergillus and Fusarium that can produce among others, patulin, ochratoxin and trichothecene mycotoxins. Research carried out in the development of the Doctoral Thesis has permitted: i) Mycobiota study of wheat coming from the Spanish market with special attention to the potentially producing species of ochratoxin A (OTA), nivalenol, deoxynivalenol, and 3–acetyldeoxynivalenol and 15–acetyldeoxynivalenol and mycobiota study of apple especially by Penicillium expansum, the main patulin producing species. ii) Critical study and optimization of chromatographic methods for ochratoxin, type–B trichothecene and patulin determination in vitro culture media of the main producing fungal species. iii) Chemotyping of isolates belonging to species that are potential producers of ochratoxins, type–B trichothecenes and patulin in wheat and apple. iv) Study of the influence of physicochemical factors on mycelial growth of the fungi and mycotoxin production. v) Design and application of response surface models to predict deoxynivalenol accumulation by Fusarium graminearum and ochratoxin A accumulation by Aspergillus ochraceus in wheat in different conditions. vi) Optimization of the methodology for determining of ochratoxin A and type–B trichothecenes in wheat and wheat products, and of patulin in apple and apple products. Analysis of foodstuffs in Spain. vii) Stability study of ochratoxin A and type– B trichothecenes for baking process. viii) Critical study of mycotoxin multi–detection methods by LC–MS in wheat flour. Preparation and optimization of an analytical method to determine the maximum number of mycotoxins present in wheat flour.

El envejecimiento humano está asociado a una pérdida de masa muscular que se inicia en la cuarta década de la vida con una pérdida de fuerza de un 1% al año y que se acelera con el transcurso de los años. Las causas del envejecimiento del organismo son complejas. Una amplia variedad de procesos se considera que están implicados en el declive de los distintos aparatos y sistemas con el paso de los años. Dentro los factores implicados en la pérdida de la funcionalidad del músculo esquelético podemos destacar: la muerte celular programada, el estrés oxidativo, las alteraciones en la síntesis de proteínas, la inflamación, las alteraciones hormonales, el desuso y las disfunción mitocondrial. El objetivo general de la presente tesis es determinar el posible papel de PGC- 1 (un coactivador transcripcional descubierto en 1998) en la prevención de los efectos del envejecimiento sobre la masa muscular, el contenido mitocondrial y la defensa antioxidante en animales de experimentación. Para el desarrollo de la presente tesis doctoral utilizamos un total de 24 ratas Wistar (12 jóvenes y 12 viejas) y 20 ratones C57BL/6J (10 silvestres y 10 deficientes de PGC-1 ). Los animales fueran divididos en dos grupos experimentales: entrenados y no entrenados. Los animales jóvenes y viejos realizaron un entrenamiento aeróbico de 3 semanas de duración, mientras que los ratones silvestres y deficientes PGC-1 realizaron un entrenamiento aeróbico de 5 semanas de duración. Transcurrido el período de entrenamiento los animales fueron sometidos a una prueba de resistencia y sacrificados. Los tejidos (distintos tipos musculares) y la sangre fueron extraídos y congelados. Se analizaron: la expresión de factores de transcripción relacionados con la biogénesis mitocondrial (PGC-1 , NRF-1 y Tfam), la expresión de proteínas marcadoras de contenido mitocondrial (citocromo c y citocromo c oxidasa), la expresión de factores miogénicos en el músculo esquelético (MioD y miogenina), la expresión de proteínas oxidadas en el músculo esquelético y en el plasma, la expresión de enzimas antioxidantes (catalasa y Mn-SOD) y el rendimiento físico de los animales. Nuestros resultados demuestran que el proceso de biogénesis mitocondrial se encuentra bloqueado en los animales viejos y deficientes en PGC-1 , lo que se manifiesta en una disminución del rendimiento aeróbico de estos animales. Las similitudes observadas entre el modelo de animales deficientes en PGC-1 y el modelo de animales viejos, indican que la disfuncionalidad de PGC-1 podría ser la causa de las alteraciones mitocondriales que se producen en el músculo esquelético durante el envejecimiento. En relación al proceso de miogénesis, nuestros resultados muestran un aumento en la expresión de la miogenina en el grupo de animales viejos, lo que consideramos se puede interpretar como una respuesta compensatoria para minimizar las pérdidas de células musculares asociadas al envejecimiento. En relación a la expresión de enzimas antioxidantes, la catalasa se encuentra aumentada en los músculos de animales viejos y deficientes en PGC-1 como respuesta al aumento de estrés oxidativo (en forma de proteínas carboniladas) encontrado en los músculos de ambos grupos experimentales. El principal hallazgo de nuestra investigación es que el entrenamiento de corta duración no supone un estímulo suficiente para la activación del proceso de biogénesis mitocondrial en el músculo esquelético de los animales viejos. La escasa reactividad de PGC-1 al estímulo del ejercicio, requiere del estudio de estrategias alternativas (nutricionales y/o farmacológicas) para mejorar la inducción de este importante coactivador transcripcional y su aplicación en el tratamiento y prevención de la sarcopenia senil. / Human aging is associated with a loss of muscle mass that begins in the fourth decade of life with a loss of strength of 1% per year and is accelerated over the years. The causes of aging of the body are complex. A wide variety of processes are considered to be implicated in the decline of the various devices and systems over the years. Among the factors involved in the loss of skeletal muscle function can include: programmed cell death, oxidative stress, alterations in protein synthesis, inflammation, hormonal changes, disuse and mitochondria ldysfunction. The overall objective of this thesis is to determine the possible role of PGC- 1& (a transcriptional coactivator discovered in 1998) in preventing the effects of aging on muscle mass, mitochondrial content and antioxidative defense in experimental animals. The main finding of our research is that the short-term training is not a sufficient stimulus to activate the process of mitochondrial biogenesis in skeletal muscle of old animals. The low reactivity of PGC-1& to the stimulus of exercise, requires the study of alternative strategies (nutritional and / or pharmacological) to improve the induction of this important transcriptional coactivator and its application in the treatment and prevention of senile sarcopenia.