Submitted by Cleber Casali (clebercasali@ufv.br) on 2017-06-28T18:12:06Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 373142 bytes, checksum: c986ba96021738fe0ebd7f597cb20164 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T18:12:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 373142 bytes, checksum: c986ba96021738fe0ebd7f597cb20164 (MD5) Previous issue date: 2001-03-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O presente trabalho teve como objetivos avaliar os efeitos de diferentes níveis de uréia na dieta de vacas mestiças leiteiras no pós-parto sobre o consumo de matéria seca; a produção de leite corrigida para 3,5% de gordura; o peso corporal; o teor plasmático de N-uréia (NUP); a dinâmica folicular ovariana; o retorno da atividade ovariana; e o pH intra-uterino no estro e no diestro. Foram realizados dois experimentos na Fazenda Experimental Leopoldina-EPAMIG, nos anos de 1999 e 2000, respectivamente, experimento I e II. No experimento I, foram utilizadas 15 vacas lactantes (Holandês x Gir) distribuídas em um delineamento inteiramente casualizado e alimentadas individualmente com rações isoprotéicas constituídas de 60% de silagem de milho e 40% de concentrado, contendo 0,0; 0,7; 1,4; e 2,1% de uréia, correspondentes aos teores de proteína bruta na forma de compostos nitrogenados não-protéicos (NNP) de 2,08; 4,01; 5,76 e 8,07% na matéria seca das rações. O aumento dos níveis de NNP nas rações reduziu linearmente o consumo de matéria seca, expresso em kg/dia e %PV que foram de 16,04; 16,49;11,64; 11,93 kg/dia e 3,29;3,09; 2,47; e 2,35%PV, para as dietas contendo 2,08, 4,01, 5,76 e 8,07% de NNP, respectivamente. As médias de produção de leite corrigidas para 3,5% de gordura foram 21,18; 24,92; 20,63; e 18,83 kg/dia para os teores de NNP 2,08; 4,01; 5,76 e 8,07, respectivamente, e decresceram linearmente com o aumento dos níveis de NNP nas dietas. Os teores de uréia e N-uréia no plasma e no leite não foram influenciados pela adição de quantidades crescentes de NNP nas dietas. As variáveis da dinâmica folicular: número de ondas de crescimento folicular por ciclo estral, emergência da primeira e segunda onda de crescimento folicular, persistência do folículo ovulatório e diâmetro máximo do folículo ovulatório não foram influenciadas pelos níveis de NNP nas rações. Os níveis crescentes de uréia não influenciaram na primeira ovulação no pós-parto, que ocorreu em média aos 55 dias do pós-parto, no primeiro estro que foi observado aos 81 dias do pós-parto, no número de inseminações/concepção (1,2) e no período de serviço de 94 dias. No experimento II, foram utilizadas 16 vacas mestiças (Holandês-gir) distribuídas em delineamento inteiramente casualizado, alimentadas com o mesmo tipo de dieta e submetidas às mesmas condições de manejo do experimento I. Verificou-se que a elevação dos teores de uréia reduziu a ingestão de matéria seca e não influenciou na produção diária de leite, dos 70 aos 110 dias de lactação. As médias dos teores plasmáticos de N-uréia (19,59 mg/dL) e do pH uterino no estro e no diestro, respectivamente 6,66 e 6,97, também não foram influenciadas pelos níveis de NNP nas rações experimentais. / The objective of the experiment was to evaluate the effects of different levels of urea in the diets in postpartum crossbred dairy cows on dry matter intake, milk production for 3.5% of fat, the body weight, the plasma levels of N- urea (NUP), the follicular dynamics, the return of ovarian activity and the uterine pH during the estrus and diestrus. Two experiments were done in the EPAMIG- Leopoldina Experimental Farm, in the years of 1999 and 2000, respectively, experiment I and II. Fifteen milking cows (Holstein-Gir) were used in the experiment I in a completely random design. The animals were fed individually with isoproteic rations formed with 60% of corn silage and 40% of concentrate, with 0.0, 0.7, 1.4 and 2.1% of urea corresponding to crude protein in the non- protein nitrogen (NNP) of 2.08, 4.01, 5.76 and 8.07% in the dry matter of the rations. The dry matter intake decreased with the increase in the levels of NNP in the rations were: 16.04, 16.49, 11.64 and 11.93 kg/day and 3.29, 3.09, 2.47 and 2.35% body weight, for the diets with 2.08, 4.01, 5.76 and 8.07% of NNP, respectively. The mean of milk production based on 3.5% of fat were 21.18, 24.92, 20.63 and 18.83 kg/day for the NNP levels of 2.08, 4.01, 5.76 and 8.07, respectively, and decreased linearly with the increase in the NNP levels of the diets. The urea levels and the N-urea in the plasma and in the milk, were not affected by the NNP in the diets. The dynamics variables such as: the number of follicular waves per cycle and the emergency of the first and second follicular waves and the persistency of the ovulatory follicle and its diameter were not affected by the levels of NNP in the diets. The first postpartum ovulation and estrus occurred on days 55 and 81, respectively and were not affected by NNP levels in the rations. The number of inseminations/conception (1.2) and the service period of 94 days were not affected by the NNP levels of the rations. In the experiment II, sixteen crossbred cows (Holstein-Gir) were allocated in a completely random design and fed with the same diet and the same management of the experiment I. The increase in the NNP levels in the rations decreased the dry matter and did not affect the daily milk production from the 70 to the 110 days of lactation. The mean plasma levels of N-urea (19.59 mg/dL) and of the uterine pH in the estrus and diestrus were 6.66 and 6.97, and were not affected by the NNP levels in the rations.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Orientadora: Prof. Dra. Marcella Pecora Milazzotto. / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2016. / A maturação de oócitos in vitro é amplamente utilizada para produção de embriões e tenta mimetizar as condições fisiológicas foliculares, permitindo a capacitação oocitária. No entanto, as condições foliculares a que os oócitos estão submetidos previamente a aspiração podem ser responsáveis por diferenças que serão refletidas no fenótipo embrionário. O objetivo deste trabalho foi quantificar marcadores metabólicos no fluido folicular (FF) e transcritos das células da granulosa (CG) de bovinos envolvidos na capacitação do oócito e sua relação com a competência embrionária (avaliada pela cinética e desenvolvimento a blastocisto). Para isso, foram aspirados individualmente complexo cumulus-oocito (COCs) e respectivos FFs e CG de folículos de 7-8mm de ovários de abatedouro comercial. As moléculas de glicose, colesterol, estradiol e piruvato foram quantificadas nos FFs por fluorimetria e os transcritos de receptor de FSH (FSH-R), receptor de angiotensina II (AngIIAT2), receptor de EGF (EGF-R) e aromatase (CYP19A) foram quantificados nas CG por RT-PCR. Os COCs foram fecundados e cultivados individualmente in vitro e os índices de clivagem e cinética embrionária foram avaliados as 40hpi e índices de blastocistos as 186hpi. Posteriormente os dados de desenvolvimento embrionário foram analisados em função dos dados dos respectivos FF e CG. Foram realizadas as seguintes comparações: não clivados x clivados (NCL x CL), clivados rápidos (> 4 células as 40hpi) x clivados lentos (< 4 células as 40hpi) (CLR x CLL), desenvolvimento a blastocisto x bloqueado (BL x NBL), clivados que se desenvolveram a blastocisto x clivados bloqueados (CLBL x CLNBL) e blastocistos derivados do grupo rápido x derivados do grupo lento (BLR x BLL). Os dados foram analisados pelo programa SAS System for Windows pelo teste t de Student, e o nível de significância de 5%. Não houve diferença entre os índices de CLR e CLL (19,2±3,8% e 25,1±3,8%, respectivamente). Da mesma forma, nenhum dos metabólitos e transcritos analisados foram distintos entre CLR x CLL, tampouco NCL x CL, a exceção do FSHR, que foi menos expresso CL, BL e CLBL quando comparados a NCL, NBL e CLNBL. O índice de BL foi (27,3±3,9%) e maior índice de blastocisto foi para BLR do que BLL (18,5±2,7% e 8,8±2,5%, respectivamente). BL e CLBL apresentaram maior quantidade de piruvato e colesterol, aumento de CYP19 e, no caso de CLBL, ainda maiores níveis de ANGII e EGF-R 2 quando comparados a NBL e CLNBL. Em relação a cinética de desenvolvimento, CLR e BLR apresentaram aumento de ANGII e estradiol. Além disso, BLR ainda apresentaram diminuição de CYP19 e EGF-R, sugerindo uma alta atividade esteroidogênica mais relacionada à secreção do que com a síntese de esteroides, provavelmente por um efeito negativo do estradiol no controle da expressão destes genes. Os dados deste estudo permitem concluir que o status folicular tem relação direta com a habilidade do oócito a se desenvolver a blastocisto. Além disso, o aumento da disponibilidade de substrato energético e da capacidade esteroidogênica parece influenciar positivamente a capacitação oocitária. Da mesma forma, embriões de cinética distinta parecem ser derivados de folículos com atividade esteroidogênica distinta. / Follicular conditions established prior to aspiration for in vitro maturation may be responsible for differences that will reflect in the embryonic phenotype. In this work, cumulus-oocyte complex (COCs) and their respective follicular fluid (FF) were individually aspirated from slaughterhouse ovaries. Metabolic biomarkers as glucose, pyruvate, cholesterol and estradiol were quantified in FF by fluorimetry. Specific granulosa cells (GC) transcripts related to oocyte capacitation and steroidogenic capacity such as aromatase (CYP19A), FSH (FSH-r), angiotensin II (ANGII AT2) and EGF (EGF-r) receptors were quantified by RT-PCR. Bovine embryos were produced in vitro following conventional protocols. Embryos were cultured individually and divided into: Fast (> 4 cells at 40 hpi) and Slow (< 4 cells at 40hpi). Blastocyst rates and embryonic competence (evaluated through developmental kinetics and blastocysts rates) were assessed at 186hpi. Embryonic development data was analyzed in function of FF and GC results by comparing: non-cleaved vs. cleaved (NCL x CL), fast vs. slow (CLF x CLS), development to blastocyst x blocked (BL x NBL), cleaved that reached blastocyst stage vs. cleaved that blocked (CLBL x CLNBL) and blastocysts originated from fast vs. slow (BLF x BLS). Embryonic development, quantification of metabolites and transcripts were compared by Student t test using SAS for Windows considering á=5%. Cleavage rates were not different between fast and slow embryos (19.2±3.8% and 25.1±3.8%, respectively). Except for FSH-r, that was less expressed in CL, BL and CLBL than their respective counterparts NCL, NBL and CLNBL, all the other metabolites and transcripts did not present any differences. Total blastocyst rate was 27.3±3.9%, being 18.5±2.7% from BLF and 8.8±2.5% from BLL groups. BL and CLBL presented higher amounts of pyruvate and cholesterol, and an increased expression of CYP19 when compared to NBL and CLNBL, respectively. Also, CLBL presented higher levels of ANGII AT2 and EGF-r than CLNBL, suggesting that BL and CLBL derived follicles have a greater steroidogenic capacity. Regarding developmental kinetics, CLR and BLR presented an increase in ANGII AT2 and estradiol and diminished levels of CYP19 and EGF-R, suggesting an elevated secretion of steroids. Therefore, BLL, with increased expression of CYP19 and EGF-r under lower levels of estradiol and ANGII AT2 are preferably directed to the synthesis than secretion of this hormone. In summary, our results show that follicular status is direct ly related to the oocytes 4 ability to develop to blastocyst. In addition, the increased availability of energy substrates and steroidogenic capacity appears to positively influence the oocyte capacitation. Likewise, embryos with distinct developmental kinetics seem to originate from follicles with distinct steroidogenic activity.

Submitted by FELIPE MORALES DALANEZI null (fmdalanezi@gmail.com) on 2016-03-01T17:52:28Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_EV_MIV_Felipe_Dalanezi.pdf: 987917 bytes, checksum: 4a81200cfc32872f02a3c22702235ec4 (MD5) / Approved for entry into archive by Sandra Manzano de Almeida (smanzano@marilia.unesp.br) on 2016-03-01T19:24:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dalanezi_fm_me_bot.pdf: 987917 bytes, checksum: 4a81200cfc32872f02a3c22702235ec4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-01T19:24:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dalanezi_fm_me_bot.pdf: 987917 bytes, checksum: 4a81200cfc32872f02a3c22702235ec4 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Vários são os componentes que tem a capacidade de interferir no metabolismo e desenvolvimento do oócito no interior do folículos, dentre esses fatores estão As EVs. Sendo assim o objetivo deste estudo foi avaliar a modulação da maturação oocitária in vitro pelas EVs extraídos de vacas submetidas ao estresse térmico (ET) ou não. Para tanto 12 vacas da raça holandesa foram submetidas ao ET e 12 vacas foram mantidas em condições de termo-neutralidade, em seguida tiveram seus folículos aspirados em dois momentos do ciclo estral (pré-ovulação e desvio). Após a separação das EVs do fluido folicular, e visualizados pela microscopia eletrônica. Então As EVs foram colocados em meio de maturação para avaliação da ação destas vesículas durante a maturação oocitária. Após 22 horas de maturação, os oócitos e as células do cummulus foram recuperados para posterior análise de progressão da maturação e também para expressão de genes de interesse. Não foi observada diferença estatística entre os grupos na análise de progressão meiótica nem na integridade do DNA. Indicando que As EVs não interferiram na morfologia oocitária. A expressão gênica no entanto demonstrou que genes relacionados a expansão do cummulus (BMP15, HAS2, GDF9, PTX3), metabolismo energético (BMP15,CPT1B, PFKP), IGF (IGFBP2 e 4) e apoptose (BCL2 e STAT3), apresentaram expressão diminuída no grupo termo-neutro. Os dados do nosso estudo indicam que o ambiente termo-neutro levou a uma sinalização intrafolicular das EVs com a finalidade de indicar uma situação favorável para o oócito. / There are several components that have the ability to interfere with the metabolism and development of the oocyte in side of follicles, among these factors are the EVs. Thus the aim of this study was to evaluate the modulation of oocyte maturation in vitro by EVs extracted from cows under heat stress or not. For that, 12 Holstein cows were subjected to heat stress and 12 cows were kept in a thermo-neutral conditions, then had their follicles aspirated in two stages of the estrous cycle (pre-ovulation and deviation). After separation of the EVs from follicular fluid, and visualized by electron microscopy. The EVs were placed in maturation medium for evaluation of the action of these vesicles during oocyte maturation. After 22 hours of maturation, oocytes and cummulus cells were recovered for further analysis of meiotic progression and for expression of genes of interest. There was no statistical difference between the groups in meiotic progression analysis or the DNA integrity. Indicating that the EVs not interfere in oocyte morphology. Gene expression however demonstrated that genes related to the expansion of the cumulus (BMP15, HAS2, GDF9, PTX3), energy metabolism (BMP15, CPT1B, PFKP), IGF (IGFBP2 and 4) and apoptosis (BCL2 and STAT3) showed decreased expression the thermo-neutral group. The data from our study indicate that the thermo-neutral environment led to a intrafollicular signaling EVs in order to indicate a favorable situation for the oocyte.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-08Bitstream added on 2014-06-13T20:21:59Z : No. of bitstreams: 1 cordeiro_mf_dr_jabo.pdf: 737504 bytes, checksum: 28b79a078c889bdd457fb2f63a6e13b7 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O uso repetido da laparoscopia para aspiração folicular (LAF) associado ou não à estimulação hormonal foi avaliado. Para tanto foram utilizadas 40 fêmeas caprinas sem-raça-definida, divididas aleatoriamente em 4 grupos com 10 animais cada, sendo: Grupo 1 - adultas estimuladas com 80 mg de FSHp e 300 UI de eCG; Grupo 2 - adultas não estimuladas (controle); Grupo 3 - prépúberes estimuladas com metade das doses preconizadas para o G1 e Grupo 4 - pré-púberes não estimuladas. Cada fêmea foi submetida a seis sessões de colheita com intervalo de uma semana entre as intervenções. A estimulação hormonal foi feita em dose única, 36 horas antes do ato operatório. A técnica consistiu do uso de duas punções para a introdução do endoscópio e da pinça de manipulação atraumática. Após a visualização dos ovários, os folículos visíveis na sua superfície foram puncionados com auxílio de agulha de aspiração acoplada a um sistema de vácuo. Os oócitos encontrados foram classificados de acordo com a qualidade, submetidos à maturação in vitro por 27 horas, e posteriormente fixados e corados para avaliação do estádio de maturação. A técnica utilizada, embora tenha apresentado redução da qualidade dos oócitos, não interferiu na taxa de maturação ao longo das seis intervenções. A resposta ovariana diminuiu com o uso repetido da estimulação com FSH exógeno. Não houve comprometimento da condição corporal e da fertilidade dos animais. A avaliação das funções hepática e renal e da analgesia, indica que o protocolo anestésico utilizado é seguro e eficiente para este tipo de procedimento cirúrgico. Diante dos resultados obtidos pode-se concluir que a técnica de laparoscopia para aspiração folicular é adequada para a obtenção de oócitos de fêmeas caprinas pré-púberes e adultas. / The repeated use of the laparoscopy to follicular aspiration (LFA) associated or not the hormonal stimulation was evaluated. Forty crossbred goat females were used, divided randomly in 4 groups with 10 animals each, being: Group 1 - adult stimulated with 80 mg of FSHp and 300 UI of eCG; Group 2 - adult not stimulated (control); Group 3 - pre-pubertal stimulated with half of the dose praised for the G1 and Group 4 - prepubertal not stimulated. Each female was submitted the six sessions of harvest with interval of one week between the interventions. The hormonal stimulation was made in only dose, 36 hours before the surgery. The technique consisted of the use of two punctions for the introduction of the endoscopy and the clamp atraumatic manipulation. After the visualization of the ovaries, the visible follicles in its surface were punched with aid of needle of aspiration connected to a vacuum system. The recovery oocytes were classified in accordance with the quality, submitted to in vitro maturation for 27 hours, and later fixed and stained for evaluation of maturation state. The used technique does not interfered in the maturation rate although oocytes quality has reduced. However the ovulatory response diminished with the repeated use of exogenous FSH stimulation. Damage was not observed in corporal condition nor fertility. The evaluation of the hepatic function, renal and pain analysis, showed that the anaesthetic protocol used is safe and efficient for this type of surgery. In conclusion, the technique of laparoscopy to follicular aspiration is adjusted for the attainment of oocytes in goat females adult and prepubertal.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-11Bitstream added on 2014-06-13T19:45:10Z : No. of bitstreams: 1 barbosa_cp_dr_jabo.pdf: 277709 bytes, checksum: bb4ed336bed6a785faaefe8d1318a305 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A produção in vitro (PIV) de embriões em bovinos tem se estabelecido a cada dia como uma biotecnologia de uso frequente, devido à rapidez na multiplicação de produtos oriundos de fêmeas de alto valor genético. Este trabalho comparou a produção de ovários com e sem corpo lúteo (CL) de vacas Nelore, em relação à quantidade e qualidade de ovócitos recuperados, embriões produzidos, taxas de prenhez e proporção dos sexos após a PIV. Foram realizadas aspirações foliculares dos dois ovários em 250 seções, igualmente distribuídas em cinco grupos, sendo G1=fêmeas gestantes; G2=não gestantes, com CL e submetidas à tratamento hormonal com progestágeno+BE+PGF2µ; G3=não gestantes, sem CL e com o mesmo tratamento de G2; G4=não gestantes, com presença de CL e sem tratamento; G5=não gestantes, sem presença de CL e sem tratamento. Os resultados foram avaliados pela Análise de Variância (ANOVA) e aplicado o Teste de Tukey para comparação entre médias, a 5% de significância, pelo programa SISVAR. Já para comparação de proporção de sexos dentro e entre os grupos, foi utilizado o teste de comparação múltipla de proporções. O G4 produziu maior média de ovócitos totais aspirados que G2 e G3. Comparando os três grupos que apresentavam CL (G1, G2, G4), o G4 foi superior a G1 e G2 em ovócitos totais, no ovário com e sem CL. Em ovócitos viáveis, G2 foi superior a G1 no ovário com CL. Os ovários com CL produziram mais embriões do que os sem CL. As vacas gestantes produziram melhor nos ovários sem CL, com mais ovócitos viáveis (p<0,05) e iguais em embriões (p>0,05), em relação ao ovário com CL. As taxas de prenhez e proporção dos sexos foram semelhantes entre os grupos (p>0,05). A concentração de P4 foi diferente entre os grupos, mas não influenciou as variáveis analisadas. A utilização do tratamento hormonal não melhorou os resultados de nenhuma... / The in vitro production (IVP) bovine embryos has been established each day as a frequent use of biotechnology because of the speed of the multiplication products from females of high genetic value. This study compared the production of ovaries with and without corpus luteum (CL) of cows in relation to quantity and quality of oocytes aspirated, embryos obtained, pregnancy rates and sex ratio after the IVP. Follicular aspirations were performed on both ovaries in 250 sections, equally divided into five groups: G1 = pregnant, G2 = not pregnant, with CL and submitted to hormonal therapy with progestin+BE+PGF2µ; G3 = not pregnant, without CL and with the same treatment of G2; G4 = not pregnant, with the presence of CL and no treatment; G5 = not pregnant, without the presence of CL and no treatment. The statistical analysis was performed with analysis of variance (ANOVA) and the Tukey Test was applied to compare means at 5% significance level, by SISVAR program. To the comparison of sex ratio within and between groups was used the multiple comparison test of proportions. The G4 has produced higher mean total aspirated oocytes that G2 and G3. Comparing the three groups that had CL (G1, G2, G4), G4 was higher than G1 and G2 in total oocytes in ovaries with and without CL. G2 was superior to G1, on viable oocytes from ovary with CL. Ovaries with CL produced more embryos than those without CL. The ovaries without CL produced better in pregnant cows in despite of viable oocytes (p<0.05) and similar embryo production (p>0.05), when compared with ovaries presenting CL. Pregnancy rates and sex ratio were similar between groups (p>0.05). The P4 concentration was different between groups, but did not influence any variable. The use of hormonal treatment did not improve the results of any variable. The choice of donor for PIV is independent of hormone treatment or presence of CL

Resumo não disponível

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The growth factor receptor-bound protein 10 (Grb10) has been extensively studied in human and has been implicated in the regulation of MAPK and PI3K pathways, activated by Insulin-like Growth Factor Receptor (IGF-IR). In cattle, it is well established that the IGF system is required for follicular dominance. On the other hand, Grb10 protein has not been studied in follicular development, dominance or deviation of any species. Then, we conducted experiments to characterize the Grb10 in ovarian follicular cells and to evaluate the regulation of Grb10 mRNA expression during follicular deviation. Cow ovaries were obtained from an abattoir, transported to the laboratory on ice and processed immediately. Granulosa and theca cells collected from follicles of 3-5 mm, 6-8 mm and > 8 mm of diameter expressed Grb10 mRNA and protein. Western blot assay from granulosa cells lysates showed a single band while three bands were observed in theca cells. The confocal study demonstrated presence of Grb10 in the cytoplasm of theca and granulosa cells. After characterize the Grb10 message and protein in follicular cells, we studied the regulation of Grb10 in follicular cells during deviation in vivo. Higher Grb10 mRNA expression was observed in subordinate follicles when compared to the dominant follicle (P < 0.05) as well as a negative correlation between Grb10 and aromatase throughout the follicular deviation (P < 0.05). To our knowledge, this is the first report of Grb10 expression in granulosa and theca cells during follicular development. Moreover, the results present strong evidence that Grb10 mRNA expression is regulated during follicle deviation and, therefore, is potentially involved in the selection of dominant follicle in cattle. / A proteína de ligação Grb10 é extensivamente estudada em humanos onde atua regulando a rotas intracelulares do MAPK e do PI3K, ativadas pelos receptors do IGF-I. Em bovinos, está bem estabelecido que o sistema IGF é indispensável para a divergência folicular e seleção do folículo dominante. Porém, a proteína Grb10 ainda não foi estudada no desenvolvimento folicular, dominância ou divergência de nenhuma espécie. Por isso, experimentos foram conduzidos para caracterizar o Grb10 em células foliculares e para avaliar a regulação da expressão do RNAm para o Grb10 durante a divergência folicular. Ovários bovinos foram obtidos a partir de abatedouro, transportado até o laboratório em gelo e imediatamente processados. Células da granulosa e da teca coletadas de folículos de 3-5 mm, 6-8 mm e >8 mm de diâmetro expressaram RNAm e proteína para o Grb10. Utilizando a técnica de Western blot, nas células da granulosa foi obtida uma banda, enquanto que nas células da teca foram verificadas três bandas. Imagens em microscópio confocal demonstraram a presença da proteína Grb10 no citoplasma das células da granulosa e da teca. Após a caracterização da mensagem e da proteína para o Grb10 nas células foliculares, nós estudamos a regulacão do Grb10 nas células foliculares durante a divergência folicular in vivo. Foi observada uma maior expressão de RNAm para o Grb10 em folículos subordinados em relação os folículos dominantes (P < 0.05) e também uma correlação negativa entre a expressão de Grb10 e aromatase durante a divergência folicular (P < 0.05). Em nosso conhecimento, este é o primeiro trabalho a demonstrar a expressão de Grb10 em células da granulosa e da teca durante o desenvolvimento folicular. Além disso, os resultados indicam fortes evidências de que a expressão de RNAm para o Grb10 é regulado durante a divergência folicular e, portanto, está potencialmente envolvido na seleção do folículo dominante em bovinos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-01Bitstream added on 2014-06-13T19:50:48Z : No. of bitstreams: 1 teixeira_ppm_me_jabo.pdf: 919906 bytes, checksum: b2c15789fbac17124ed31790a17fab93 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Avaliou-se macro e microscopicamente os ovários de ovelhas submetidas a sucessivas aspirações foliculares, com o objetivo de se verificar se houve ou não interferência na produção oocitária e morfologia das gônadas; além da avaliação macroscópica do trato genital interno. Dezoito ovelhas da raça Santa Inês, distribuídas aleatoriamente compuseram três grupos experimentais de igual número (n=6). G0, G1, G9 com 0, 1 e 9 repetições, respectivamente. A sincronização do estro foi feita utilizando-se protocolo curto com MAP, seguindo-se estimulação, em dose única, com 80mg de FSHp e 300 UI de eCG (IM) e após 36 horas realizavam-se as aspirações foliculares por vídeolaparoscopia, com intervalo de 7 dias. Os folículos visibilizados, os aspirados e os oócitos recuperados foram contabilizados. Após a última intervenção foi realizada ovariectomia para avaliar os macro e microscopicamente, a existência ou não de lesões causadas pelas punções foliculares, classificando a intensidade do processo em ausente (0), leve (1), moderada (2) e severa (3). Os dados foram expressos em média e desvio padrão, comparados pelo teste one-way ANOVA e teste de Tukey. Os números de folículos visibilizados, aspirados e oócitos recuperados foram de 13,24±2,0, 11,27±3,03 e 5,79±2,3 respectivamente, com taxa de recuperação de 51,69%, não havendo diferenças entre as nove sessões (p>0,05). Também não se verificou, macroscopicamnte, lesões no trato genital interno, nem alterações consideráveis nas análises histológicas, sendo o escore 0±0 para o G0, 0,1±0,4 para o G1 e 0±0 para o G9 (p>0,05). Conclui-se que as nove sessões de superovulação e aspiração folicular não causam lesões ovarianas e não interferiram na produção de folículos em ovelhas da raça Santa Inês / We evaluated macroscopically and microscopically the ovaries of ewes to repeated follicular aspiration, in order to verify whether or not there was interference with the production oocyte and gonad morphology, besides the macroscopic evaluation of internal genital tract. Eighteen sheep Santa Ines, randomly distributed three groups composed of equal numbers (n = 6). G0, G1, G9 with 0, 1 and 9 replicates, respectively. Synchronization of estrus was performed using short protocol with MAP, followed by stimulation in a single dose of 80mg FSHp and 300 IU of eCG (IM) and after 36 hours was held at the follicular aspiration by laparoscopy with interval 7 days. The follicles visualized, aspirated and the oocytes recovered were counted. After the last intervention was performed ovariectomy was performed to assess the macro and microscopically, the presence or absence of lesions caused by follicular puncture, classifying the intensity of the process as absent (0), mild (1), moderate (2) and severe (3) . Data were expressed as mean and standard deviation and compared by using one-way ANOVA and Tukey test. The numbers of follicles visualized, aspirated and oocytes recovered were 13.24 ± 2.0, 11.27 ± 3.03 and 5.79 ± 2.3 respectively, with a recovery rate of 51.69%, with no differences among the nine sessions (p> 0.05). Nor is there, macroscopicamnte, internal genital tract injury, or significant changes in histological evaluations, with a score of 0 ± 0 for G0, 0.1 ± 0.4 for G1 and 0 ± 0 for the G9 (p> 0.05). We conclude the nine sessions of superovulation and ovum do not cause ovarian lesions and did not interfere in the production of follicles in Santa Ines sheep

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2142544 bytes, checksum: 8e7df43b18b62658d62b10baab0d7506 (MD5) Previous issue date: 2003-03-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The experiments of the present study were developed with the objectives of verifying the effect of the birth season on the first ovulation of fillies, to characterize some follicular parameters of fillies and to compare the occurrence of the first ovulation of the season, as well as some ovarian characteristics among fillies and mares. In addition, the relationship between the body condition and the hair coat length with the ovarian follicular activity were studied. Crossbred Breton Postier fillies (n=14) and mares (n=22) were used during three consecutive reproductive seasons. On Experiment 1, fillies born in the summer were used (Summer Group; n = 9, age = 8.5 ± 0.2 month old) and mares (Control Group; n = 5, age = 76.0 ± 10.2 months old). On Experiments 2 and 3, the animals used were divided into three Groups: Summer Group (fillies born in the summer; n = 9, age = 18.8 ± 0.2 month old and n = 6, age = 31.9 ± 0.3 month old), Spring Group (fillies born in the spring; n = 5, age = 10.1 ± 0.6 month old, and n = 5, age = 23.3 ± 0.6 months old) and Control Group (adult mares; n = 9, age = 91.4 ± 4.3 months old and n = 8, age = 82.5 ± 12 months old), respectively. Ovarian and uterine parameters were evaluated by ultrasonography. Every 14 days, the weight, the body condition score and the hair coat lengths were evaluated in the 3 experiments. Based on the results of this present study, it can be concluded that: a) the birth season influences the beginning of puberty in fillies; b) the fillies start the reproductive season later than the mares; c) the follicular development occur in waves in prepubertal fillies; d) the ovarian activity between mares and fillies is pretty similar during the transition phase and the interovulatory intervals, when only quantitative differences, not qualitative differences, can be observed; e) apparently the follicles of prepubertal fillies present estrogenic activity, since it was observed a positive correlation among the follicular diameters and the uterine echotexture; f) the body condition score, the weight and the hair coat length, during the prepubertal and pubertal phases, presented correlation with the ovarian follicular activity in fillies. / Os experimentos do presente estudo foram desenvolvidos com os objetivos de verificar o efeito da estação de nascimento na primeira ovulação de potras; caracterizar alguns parâmetros foliculares de potras; e comparar a ocorrência da primeira ovulação da estação, bem como algumas características ovarianas, entre potras e éguas. Adicionalmente, a relação entre a condição corporal e o comprimento do pêlo com a atividade folicular ovariana, foi estudada. Potras mestiças da raça Bretão Postier (n = 14) e éguas (n = 22) foram usadas durante três estações reprodutivas consecutivas. No Experimento 1, foram utilizadas potras nascidas no verão (Grupo Verão; n = 9, idade = 8,5 ± 0,2 mês) e éguas (Grupo Controle; n = 5, idade = 76,0 ± 10,2 meses). Nos Experimentos 2 e 3, os animais utilizados foram divididos em 3 grupos: Grupo Verão (potras nascidas no verão; n = 9, idade = 18,8 ± 0,2 mês e n = 6, idade = 31,9 ± 0,3 mês , Grupo Primavera (potras nascidas na primavera; n = 5, idade = 10,1 ± 0,6 mês e n = 5, idade = 23,3 ± 0,6 mês) e Grupo Controle (éguas adultas; n = 9, idade = 91,4 ± 4,3 meses e n = 8, idade = 82,5 ± 12 meses), respectivamente. Parâmetros ovarianos e uterinos foram avaliados por meio de exames ultra-sonográficos. A cada 14 dias, o peso, o escore da condição corporal e o comprimento do pêlo foram avaliados nos 3 experimentos. Com base nos resultados do presente estudo, pode-se concluir que: a) a estação do nascimento influencia o início da puberdade em potras; b) as potras iniciam a estação reprodutiva mais tardiamente que as éguas; c) potras apresentam o crescimento folicular em forma de ondas durante a fase pré-púbere; d) a atividade ovariana entre éguas e potras é bastante semelhante durante a fase de transição e o período interovulatório, observando-se apenas diferenças quantitativas e não qualitativas; e) aparentemente os folículos de potras pré-púberes apresentam atividade estrogênica, visto que foi observada correlação positiva entre os diâmetros foliculares e a ecotextura uterina; e f) o escore da condição corporal, o peso e o comprimento do pêlo, durante as fases pré-púbere e púbere, apresentaram correlação com a atividade folicular ovariana de potras.