Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-05-27T11:52:38Z No. of bitstreams: 1 2013_KhellidaLoianeVieiraRamos.pdf: 3419726 bytes, checksum: c52def39389e6f78cc9cb8b432b918f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-27T11:54:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_KhellidaLoianeVieiraRamos.pdf: 3419726 bytes, checksum: c52def39389e6f78cc9cb8b432b918f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-27T11:54:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_KhellidaLoianeVieiraRamos.pdf: 3419726 bytes, checksum: c52def39389e6f78cc9cb8b432b918f5 (MD5) / O câncer é definido como um conjunto de mais de cem doenças caracterizado por desordens celulares ocasionadas por múltiplas alterações genéticas que conduzem a um desequilíbrio na proliferação e morte celular. No Brasil, as estimativas para o ano de 2012 e 2013 apontam a ocorrência de aproximadamente 518.510 casos novos de câncer, dentre os quais, o mais incidente será o câncer de pele não melanoma. Devido a tantos efeitos colaterais das terapias convencionais no tratamento das neoplasias, a terapia fotodinâmica (TFD) desponta como uma alternativa segura e altamente eficaz no tratamento de diversos tipos de câncer. A sua alta eficácia decorre da indução direta de morte das células neoplásicas, da destruição da microvasculatura tumoral e do reforço da imunidade antitumoral. A TFD é realizada combinando-se o oxigênio molecular, luz de comprimento de onda específico e um fotossensibilizante. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver uma nanoemulsão (nanoA) à base de óleo de açaí como fotossensibilizante para uso na TFD e investigar os efeitos biológicos in vitro e in vivo no tratamento de câncer de pele não-melanoma. Para formulação da nanoA, foi utilizado água, óleo e surfactante Tween 80 e utilizou-se o método de temperatura de inversão de fase (PIT). Para a avaliação dos aspectos morfológicos e coloidais da nanoA utilizou-se recursos de microscopia eletrônica de transmissão e aparelho de dispersão dinâmica de luz Zetasizer, respectivamente. As propriedades fotofísicas foram avaliadas com leituras dos espectros de absorbância e fluorescência em espectrofotômetro. A nano A apresentou pico de absorção e emissão na região do vermelho,o que é bom para fotossensibilizantes a serem aplicados na TFD já que corresponde à janela óptica tecidual. O diâmetro hidrodinâmico obtido foi de 117,5 nm, o diâmetro médio de 74 nm, o índice de polidispersividade de 0,144 e potencial zeta de -0.536mV; características essas que viabilizam o uso da nanoA em sistemas biológicos devido a monodispersividade e pequeno diâmetro, favorecendo a retenção e permeação no tumor (EPR). A capacidade de geração de espécies reativas de oxigênio foi medida através do método de decaimento por benzofurano, comprovando a atividade fotoquímica do óleo, viabilizando seu uso como fotossensibilizante na TFD. A avaliação in vitro consistiu em análises de incorporação e distribuição da nanoA em células de carcinoma epidermóide humano A431 e em fibroblasto humano Detroit, assim como na avaliação da citotoxicidade das linhagens submetidas a diferentes concentrações da nanoA na ausência e na presença de luz. A linhagem normal mostrou-se inerte à incubação com a nanoA enquanto que a tumoral foi mais sensível nos menores tempos de exposição à nano tanto no escuro quanto pós-irradiação. O tempo necessário à incubação foi de quinze minutos e de irradiação equivalente à 10 minutos. A avaliação in vivo consistiu em análises clínica e histopatológica de tumores induzidos por injeção ortotópica de células A431 em camundongos nude, tratados com três sessões de TFD além de análises sanguíneas. Tanto a terapia quanto o fármaco sozinho apresentaram atividade antitumoral. A TFD foi responsável por 33% de regressão total enquanto que a nanoemulsão sozinha por 16% de regressão total e 33% de regressão parcial. Estes resultados indicam que esta inédita nanoemulsão é em potencial um novo fármaco para aplicação antitumoral, considerando a alta resistência do carcinoma estudado e a grande eficácia do tratamento alcançado. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cancer is defined as a set of more than hundred diseases characterized by cellular disorders caused by multiple genetic alterations that leads to imbalance between cell proliferation and death. In Brazil, approximately 518,510 new cases of cancer have been estimated from 2012 to 2013, majority being of non melanoma form of skin cancer. Due to so many side effects of the conventional therapies in the treatment of the neoplasias, the photodynamic therapy (PDT) emerges as a safe and highly efficient alternative in the treatment of several types of cancer. This high efficiency results from the straight induction of death of cancer cells , from the destruction of the tumor vasculature and to the reinforcement of the antitumor immunity. PDT is employed with combination molecular oxygen, specific wavelength and photosensitizers. So, the objective of this work was to develop a nanoemulsion (nanoA) with açai oil as a photosensitizer for the application in PDT and investigates the biological effects in vitro and in vivo to evaluate the efficacy in the treatment of non melanoma skin cancer. For This formulation used water, oil and Tween 80 surfactant by the method of phase inversion temperature (PIT). For morphological and colloidal evaluation of nanoA transmission electronic microscopy, scanning electronic microscopy and dynamic dispersal of light Zetasizer were used. The photo-physical properties were evaluated with readings of the spectrum of absorbance and fluorescence in a spectrophotometer. The peak of absorption and emission was in the red region, which is good for application in PDT. The hydrodynamic diameter obtained was 117.5 nm, the middle diameter was 74 nm, the polydispersity index was 0.144 and the zeta potential was -0.536 mV. These features enabled the use of nanoA in biological systems, due to the monodispersity and small diameter favoring the permeation and retention in the tumor (EPR). The capacity of generation of reactive oxygen species was measured through the decline method for benzofuran proving the photochemical activity of the oil, enabling it´s use as a photosensitizer in PDT. The in vitro evaluation consisted of analyses of internalization and distribution of the nanoA in human epidermoid carcinoma cells A431 and in human fibroblast Detroit, as well as of evaluation the cytotoxicity of the cell line subjected to different concentrations of nanoA in the absence and in the presence of light. The normal cell line appeared inert to the incubation with the nanoA whereas the tumoral was more sensitive. The time necessary for nanoemulsion association on cells was fifteen minutes. The in vivo evaluation of the effects of nano A consisted of clinic and histopathological analyses of ortotopic induced tumor by injection of A431 cells in nude mice, treated with three sessions of PDT. As much as drug therapy alone showed antitumor activity. PDT was responsible for 33 % of total regression while the nanoemulsion alone for 16 % of total regression and 33 % of partial regression. These results indicate that this nanoemulsion is good as photosensitizer and a potential new antitumor drug for application in squamous cell carcinoma (SCC), considering the high resistance of this carcinoma and the great efficiency of the treatment.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Biologia Animal, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-02-10T14:20:34Z No. of bitstreams: 1 2013_RenataCarvalhoSilva.pdf: 4451431 bytes, checksum: 1ab1cd7ef589f2e5dc5061124ef5ae6b (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-02-10T14:29:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_RenataCarvalhoSilva.pdf: 4451431 bytes, checksum: 1ab1cd7ef589f2e5dc5061124ef5ae6b (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-10T14:29:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_RenataCarvalhoSilva.pdf: 4451431 bytes, checksum: 1ab1cd7ef589f2e5dc5061124ef5ae6b (MD5) / A terapia fotodinâmica (TFD) é uma terapia alternativa a cura de diversas doenças, entre elas o câncer. Um novo conjunto de fármacos fotossensibilizantes (FS) de origem natural oriunda de extratos e óleos vegetais tem sido testado na terapia contra o câncer. Porém, a maioria desses fármacos FS apresentam alguns entraves para uso clínico e nesse contexto, as nanoemulsões poliméricas, sistemas cineticamente estáveis, apresentam diversas potencialidades como sistemas carreadores de fármacos. O objetivo do presente estudo foi identificar e avaliar as possíveis propriedades fotoquímicas e fotofísicas do extrato clorofórmico de partes aéreas de crajiru (Arrabidaea chica) livre (ECr) e incorporado em nanoemulsão polimérica (NanoECr) e testar os efeitos da nanoemulsão na TFD contra células de adenocarcinoma mamário murino (4T1) in vitro. Por análises no espectrofotômetro, tanto o ECr quanto a NanoECr apresentaram absorbância em comprimento de onda de 670 nm e fluorescência em 690 nm e apresentaram produção de espécies reativas de oxigênio pelo teste de decaimento da absorbância do benzofurano, características fundamentais para serem considerados fármacos úteis em TFD. Pela técnica de espalhamento dinâmico da luz, a NanoECr apresentou diâmetro hidrodinâmico médio de 370,5 ± 264,31 nm, PdI de 0,133 ± 0,01 e carga de superfície de – 36,1 ± 0,15 mV, características que predizem que a formulação é estável. Nas microscopias eletrônicas de transmissão (MET) e varredura (MEV), as NanoECr apresentaram morfologia esférica e superfície rugosa com diâmetros médios de 374 ± 117 nm (MET) e 367 ± 69 nm (MEV antes da metalização) e 488 ± 70 nm (após metalização), sendo a MEV sem metalização o protocolo adequado para caracterização morfométrica dessas nanoestruturas. Após incubação da linhagem celular 4T1 com a NanoECr em várias concentrações na ausência de irradiação, foi determinada, por MTT, a concentração não tóxica (54 µg/mL) e em seguida, por espectrofotômetro e microscopia confocal o tempo máximo de interação da NanoECr com a linhagem 4T1 (15 minutos). Associando 54 µg/mL de NanoECr, por 15 min com irradiação com laser de comprimento de onda de 670 nm, morte celular ocorreu quando as células foram 2 2irradiadas com doses de energia variando entre 8,57 J/cm a 85,7 J/cm, e apenas na 2dose de energia de 85,7 J/cm (maior dose de energia utilizada no experimento) ocorreu 100% de morte celular. Na avaliação do tipo de morte celular, as células 2irradiadas em doses de energia de 25,7 J/cm apresentaram morte por apoptose, visualizada em microscopia confocal pela intensa marcação em laranja de corpos apoptóticos (laranja de acridina) e pela visualização de blebs e danos a mitocôndrias e 2retículo endoplasmático observados em MET. Já na dose de 85,7 J/cm, a necrose foi o tipo de celular ocorrido, observado pela intensa marcação do citoplasma das células em vermelho (brometo de etídeo) em microscopia confocal e por danos a membrana plasmática com extravasamento de conteúdo celular e presença de vacúolos no interior das células observadas em MET. Concluiu-se que o extrato clorofórmico de partes aéreas do crajiru incorporado em nanoemulsões poliméricas de PVM/MA é uma potencial formulação fotossensibilizante para uso em TFD. Além disso, as características desta preparação oferecem a perspectiva de que esta possa ser utilizada como um fotossensibilizante de 3ª geração na TFD. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Photodynamic therapy (PDT) is an alternative therapy to cure a lot of diseases, including cancer. A new set of photosensitizing (PS) drugs arising from natural plants, as vegetable oils and extracts have been tested in cancer therapy. However, most of these PS drugs present some difficulties for clinical use and in this context, polymeric nanoemulsions, kinetically stable systems, have several potential as drug carrier systems. The aim of this study was to identify and evaluate possible photochemical and photophysical properties of the chloroform extract of aerial parts of crajiru (Arrabidaea chica) free (ECR ) and incorporated in polymeric nanoemulsion (NanoECr) and test the effects of this nanoemulsion in PDT against murine mammary adenocarcinoma cells ( 4T1 ) in vitro. By spectrophotometer analysis in both the ECr and NanoECr showed absorbance at a wavelength of 670 nm and fluorescence at 690 nm and production of reactive oxygen species by the decay of the absorbance of the test benzofuran, key features to be considered useful drugs in PDT. At the technique of dynamic light scattering, the NanoECr had an average hydrodynamic diameter of 370.5 ± 264.31 nm , PdI of 0.133 ± 0.01 and surface charge of - 36.1 ± 0.15 mV , characteristics that predict the formulation is stable. At transmission electron microscopy (TEM) and scanning electron microscopy (SEM), the NanoECr showed spherical morphology and a rough surface with an average diameter of 374 ± 117 nm (TEM), 367 ± 69 nm (SEM before etallization) and 488 ± 70 nm (SEM after metallization). The SEM without metallization was the most suitable protocol for morphometric characterization of these nanostructures. After incubation of 4T1 cell line with various NanoECr concentrations in the absence of irradiation, non-toxic concentration (54 µg/mL) was determined by MTT and then by confocal microscopy and spectrophotometer the maximum time of interaction between NanoECr and 4T1 line (15 minutes) was also determined. Associating 54 µg/mL of NanoECr for 15 min and irradiating the cells with a laser of 670 nm wavelength, cell death occurred when 2 2the cells were irradiated with energy ranging from 8.57 J/cm to 85.7 J/cm and only on 2the energy dose of 85.7 J/cm (higher dose of energy used in the experiment) occurred 100 % of cell death. Evaluating the type of cell death, cells irradiated at a energy dose 2of 25.7 J/cm had death by apoptosis, visualized by intense cytoplasmic stainning of the apoptotic bodies with acridine orange in confocal microscopy and a visualization of blebs and mitochondria and endoplasmic reticulum damage observed in TEM. At a 2,energy dose of 85.7 J/cm necrosis was the type of cellular occurred noted by intense staining of cells cytoplasm in red (ethidium bromide) in confocal microscopy and cell membrane damage with leakage of cellular contents and presence of vacuoles inside the cells observed in TEM. We can conclude that the chloroform extract of the aerial parts of crajiru incorporated in polymeric nanoemulsions is a potential photosensitizer formulation for use in PDT. Furthermore, the characteristics of this formulation offer the prospect that it can be used as a 3rd generation photosensitizer in PDT.

Nesta Tese foram estudadas as propriedades do composto nitroheterocíclico Quinifuril na sua ação com a luz. O composto possui absorção na região espectral 350-450 nm ( 1 1 396 ? = 24700 M- cm- ) e, sendo irradiado nesta região, sofre fotodecomposição. Foi observada a formação do seu estado tripleto (?max = 550 nm), de energia ET=18200 cm-1. O tripleto sofre supressão na interação com seu estado fundamental (2,6×108 M-1 s-1) e pelo oxigênio molecular (2×109 M-1 s-1). É apresentado um modelo para a fotodecomposição do Quinifuril em solução aquosa que supõe dois caminhos para sua fotólise: diretamente a partir do seu estado singleto e a partir da reação entre as moléculas nos estados fundamental e tripleto. São apresentados os efeitos de detergentes de diferentes cargas elétricas sobre suas propriedades, onde se observou o Quinifuril interage fracamente com o CTAB (catiônico); moderadamente como o DPS (zwitteriônico); e fortemente com o aniônico SDS, que afeta sua velocidade de fotodecomposição e seu estado tripleto. São apresentados dados da cinética de formação de agregação SDS-Quinifuril e o efeito destes agregados sobre suas características de fotodecomposição. Estudou-se a fotocitotoxicidade do Quinifuril contra células em cultura, P388 (leucemia de camundongos), K562 (leucemia humana) e NIH3T3 (fibroblasto imortalizado de camundongos), onde se determinou um significativo aumento na sua citotoxicidade ao ser irradiado. O composto apresentou fotocitotoxicidade contra células K562 e NIT3H3 em doses tão baixas quanto 0,2 ?g/mL; sua dose letal (LC50) contra células P388 foi estimada em 0,45 ?g/mL. O composto apresentou capacidade de inibir a proliferação destas linhagens em ~100 %. Mostrou-se que os produtos finais de sua fotodecomposição não são os responsáveis pela sua fotocitotoxicidade. Foi mostrado que, sob ação da luz, o Quinifuril produz as espécies reativas oxigênio singlete g 1? , ânion superóxido ( o- 2 O ) e óxido nítrico NO? e sua fotocitotoxicidade pode ser explicada pela produção destas espécies intermediárias. / In this work there were studied the properties of a nitroheterocyclic compound Quinifuryl in its interaction with light. The compound presents absorption in the 350-450 nm spectral region ( 1 1 396 ? = 24700 M- cm- ), and suffers photolysis under irradiation. The triplet state is formed (?max = 550 nm), characterized by the energy ET= 18200 cm-1. The triplet state can be self-quenched (2,6×108 M-1 s-1), and quenched by oxygen (2×109 M-1 s-1). A model of the Quinifuryl water solution photolysis proposes two possible ways for the process: a direct photolysis through singlet state, and the other one due to its triplet/ground states reaction. We present the effects of different charged detergents upon Quinifuryl properties. It was observed that Quinifuryl interacts weakly with cationic CTAB, moderately with zwitterionic DPS, and strongly with anionic SDS. The latter affects the rate of its photolysis and the triplet state properties. The SDS-Quinifuryl aggregation and its effects over the Quinifuryl photolysis behavior are discussed. Phototoxic effects of Quinifuryl against the P388 (mouse leukaemia), the K562 (human erythroleukaemia), and the NIH3T3 (immortalized mouse fibroblast) cell lines were studied. The compound demonstrated an elevated cytotoxicity under irradiation. The phototoxic dosage was 0.2 ?g/mL to both K562 and NIT3H3 cell lines, and 0.45 ?g/mL to the P388 ones. Under irradiation the compound showed ~100 % proliferation arrest against the P388 cell line. These results show that the final products of Quinifuryl photolysis are not responsible for its cytotoxicity. Under irradiation, Quinifuryl produces reactive species, such as singlet oxygen g 1? , superoxide anion ( o- 2 O ), and nitric oxide NO?, which can explain its high photocytotoxicity.

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Banca: Aguinaldo Silva Garcez Segundo / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Resumo: A terapia fotodinâmica (TFD) tem demonstrado ação antimicrobiana sobre as leveduras do gênero Candida, sendo considerada uma técnica promissora para o tratamento de candidose. Recentemente foi relatado que a aplicação de TFD também pode resultar em ativação do sistema imunológico, contribuindo para a melhora da infecção. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar a ação da TFD e da terapia laser sobre a resposta imunológica à candidose experimental utilizando Galleria mellonella como modelo hospedeiro de infecção. Larvas de G. mellonella foram infectadas com diferentes cepas de Candida albicans e, após 30 min, foram tratadas com TFD mediada por azul de metileno e laser diodo emitido em 660 nm. A seguir, as larvas foram incubadas a 37°C por sete dias e analisadas diariamente para determinação da curva de sobrevivência. Para o estudo da resposta imunológica, após os tempos de 3, 6, 18 h da TFD foram realizados testes de determinação da densidade de hemócitos na hemolinfa de G. mellonella. Os dados obtidos na curva de sobrevivência foram avaliados pelo teste de Log-rank (Mantel Cox) e os resultados da análise imunológica por análise de variância ANOVA e teste de Tukey, com significância de 5%. Os resultados obtidos demonstraram que tanto para a cepa ATCC 18804 como para a cepa clínica 17 de C. albicans, a TFD prolongou a sobrevivência das larvas de G. mellonella infectadas por uma dose fúngica letal. Entretanto, houve diferença estatisticamente significante e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Photodynamic therapy (PDT) has demonstrated antimicrobial activity on the yeast of the genus Candida and is considered a promising technique for the treatment of candidiasis. Recently it was reported that the application of PDT may also result in activation of the immune system, contributing to the improvement of the infection. The objective of this study is to evaluate the action of PDT and laser therapy on the immune response to experimental candidiasis using Galleria mellonella as host of the infection. G. mellonella larvae were infected with different Candida albicans strains and, after 30 min were treated with methylene blue-mediated PDT and laser diode emitted at 660 nm. Then, the larvae were incubated at 37° C for seven days and analyzed daily in order to determine the survival curve. For the study of the immunological response, after intervals of 3, 6, 18 h of the PDT, tests were performed to determine the density of hemocytes in the hemolymph of G. mellonella. The data obtained in the survival curve were evaluated by the Log-rank test (Mantel Cox) and the results of the immunological analysis by analysis of variance ANOVA and Tukey test, with significance of 5%. The results demonstrated that for both the ATCC 18804 strain and the C. albicans clinical strain 17, PDT prolonged the survival of the infected G. mellonella larvae by a lethal fungal dose. However, there was a statistically significant difference between the PDT and the control groups only... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientadora: Letícia Helena Theodoro / Coorientador: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Juliano Milanezi de Almeida / Banca: Teresinha Costa de Santana / Resumo: Objetivo: Este estudo avaliou por meio de análise clínica e microbiológica os efeitos do Metronidazol associado à Amoxicilina (MTZ+AMX) e de múltiplas aplicações da terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) como coadjuvantes ao tratamento da periodontite crônica em fumantes. Métodos: Um estudo clínico controlado, randomizado foi conduzido em 51 pacientes fumantes que receberam: Grupo RAR (n=17) - raspagem e aplainamento radicular e placebo; Grupo MTZ+AMX (n=17) - RAR e uso sistêmico de Metronidazol (400 mg 3 X por dia, 7 dias) e Amoxicilina (500 mg 3 X por dia, 7 dias); Grupo aPDT (n=17) - RAR e 3 aplicações de aPDT em dois sítios (1 bolsa moderada e 1 profunda) por quadrante, imediatamente, 48 e 72 horas após a raspagem e placebo durante 7 dias. Os exames clínicos e microbiológicos foram realizados no início, aos 90 e 180 dias após o tratamento. Os parâmetros clínicos de índice de placa visível (IPV), sangramento à sondagem (SS), profundidade de sondagem (PS) e nível de inserção clínico (NIC) foram avaliados. Foram coletadas amostras de biofilme subgengival de uma bolsa ≥ 4 ≤ 6 mm (bolsa moderada) e de outra ≥ 7 mm (profunda) em cada quadrante de cada paciente dos grupos RAR, MTZ+AMX e aPDT. A aPDT foi realizada, utilizando o Azul de metileno e o laser em baixa intensidade após 1 minuto (AsGaAl, 660 nm, 100 mW, 48 segundos, 160 J/cm2) imediatamente, 48 e 72 hs após o tratamento, nos mesmos sítios da coleta. Para análise microbiológica, três patógenos periodontais foram avaliados por Reação de Polimerase em Cadeia em tempo real (PCR-real time): Porphyromonas gingivalis (Pg), Prevotella nigrescens (Pn) e Prevotella intermedia (Pi). Os dados clínicos e microbiológicos foram estatisticamente analisados (α=5%). Resultados: Os tratamentos com MTZ +AMX e aPDT promoveram melhoras nos parâmetros de PS, NIC, SS... / Abstract: Aim: The aim of this study was to evaluate the clinical and microbiological effects of Metronidazolecombined with Amoxicillin (MTZ+AMX) and multiple applications of antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) as adjuvant treatment of smokers with chronic periodontitis. Methods:A double-blind controlled, randomized clinical trial was conducted in 51 smoking patients who received: SRP Group (n=17): scaling and root planning and placebo; MTZ+AMX Group (n=17) and SRP with systemic use of Metronidazole (400 mg 3 X per day 7 days) and Amoxicillin (500 mg 3 X per day 7 days); aPDT Group (n=17): SRP and three aPDT applications at two sites (one moderate and one deep pocket) per quadrant, immediately 48 and 72 hours after scaling and MTZ and AMX (placebo) during 7 days. Clinical and microbiologic examinations were performed at Baseline, 3 and 6 months post-therapy. Clinical parameters of visible plaque index (VPI), bleeding on probing (BOP), probing depth (PD), and clinical attachment level (CAL) were measured. Samples were collected from a subgingival pocket ≥ 4mm ≤ 6mm (pocket moderate) and another ≥ 7mm (pocket deep) in each quadrant of each patient, in the groups SRP, MTZ+AMX and aPDT. The APDT was carried out using methylene blue and the laser low level after 1 minute (GaAlAs 660 nm, 100 mW, 48 seconds, 160 J/cm²) 48 and 72 hours immediately after treatment, into the same sites of the collection. For microbiological analysis, three periodontal pathogens were assessed by polymerase chain reaction in real time (PCR-real time): Porphyromonas gingivalis (Pg), Prevotella nigrescens (Pn) e Prevotella intermedia (Pi).The statistical analysis was performed (α=5%). Results: Treatments with MTZ + AMX and aPDT promoted improvements in PD, CAL, BOP and VPI parameters after treatment. Patients who received the treatment with aPDT showed a higher reduction of CAL and PD in pockets collected, when... / Mestre

Orientador: Luiz Antônio Salata / Banca: Osvaldo Magro Filho / Banca: Sérgio Luiz Scombatti Souza / Banca: Wilson Roberto Poi / Banca: Andreza Ribeiro Simioni / Resumo: A combinação de um fármaco fotossensível (FS) ativado por luz (vermelha, infravermelho ou ambas) forma uma das vertentes de aplicação da Terapia Fotodinâmica (TFD), que consiste na administração de um FS que posteriormente é ativado pela irradiação do LED ou Laser junto ao tecido, sendo que o FS ou a luz sozinhas, não apresentam citotoxicidade. O presente estudo teve por objetivos estabelecer o potencial regenerador do tecido ósseo para o reparo em calvária de coelho, utilizando três sistemas de liberação de drogas (DDS) de FS, estimulado pela combinação da fotobiomodulação de sistemas LED operando na faixa do visível e infravermelho. Foram utilizados 48 coelhos New Zealand White divididos em 3 grupos: Grupo LED 24/48 (dezoito coelhos) com aplicações de LED 24/48 horas após a cirurgia, Grupo LED 72/96 (dezoito coelhos) com aplicações de LED 72/96 horas após a cirurgia e Controle (doze coelhos) onde não houve aplicação de LED. Nos grupos experimentais foram realizadas 4 perfurações nas calvárias com preenchimento aleatoriamente de 1) Base em gel, 2) nanoemulsão carregada com FS, 3) lipossoma em gel com FS e 4) nanopartículas de albumina (BSA) carregada com FS. No grupo controle foram feitas duas perfurações, uma preenchida por osso autógeno e outra com coágulo. Dezesseis animais foram submetidos à eutanásia em cada tempo experimental: 5 dias, 10 dias e 20 dias. Lâminas histológicas foram feitas a partir dos defeitos e o osso neoformado foi mensurado. O uso de FS nos DDS não foi efetivo para abreviar o tempo de reparo ósseo em calvária de coelhos nos inervalos de tempo deste estudo / Abstract: The combination between photosensitizer substances with laser or LED (light emitting diode) form the photodynamic therapy (PDT) basis that consists of photosensitivity drug activated by low frequency light. This mechanism is used in soft tissue healing process to improve the oxygen tension leading to a fast revascularization. The objective of this study was to evaluate the effects of photosensitivity drugs activated through LED on bone healing process. Fourty eight New Zealand White rabbits were underwent to four bicortical calvaria defects made by 6.0 mm trephine drill. The defects were randomly filled up with (1) Gel, (2) Nanoemulsion + photosensitizer drug, (3) Liposome + photosensitizer drug, (4) NPS (nanostructure polymeric system) + photosensitizer drug. After 24/48 hours or 72/96 hours a LED were applied on all the rabbits. Sixteen animals were sacrificed, respectively, at 5, 10 and 20 days after surgery. Histological slides were prepared from each experimental site for histomorphometry and histological analysis. Bone graft was significant higher bone level in all experimental time points.. At 10 days liposome showed higher bone level than Gel (p=0,0161). However on 20 days, no difference was detected between the materials. The use of photosensitizer drugs activated by LED demonstrated do not achieve the stimulate bone formation on later time points on thsi presente study / Doutor

Orientador: Ana Claudia Pavarina / Resumo: O objetivo do estudo foi avaliar a eficácia da terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) associada a Nistatina (NYS) no tratamento de candidose oral induzida em camundongos infectados com Candida albicans resistente a fluconazol. Foram utilizados 174 camundongos Swiss fêmeas com aproximadamente 5 semanas de vida. Os animais foram imunossuprimidos com predinisolona 100 mg/kg no 1º, 5º e 13 º dias de experimento. No 2º dia, os animais foram sedados com 0,1 mL de cloridrato de clorpromazina e uma suspensão de C. albicans 107 UFC/mL foi inoculada na língua dos mesmos. Do dia 7 ao 11 os tratamentos foram realizados. No grupo aPDT foi utilizado 200 mg/L de Photodithazine (PDZ) associado à luz LED de 50 J/cm2 (grupo P+L+); no grupo (P+L-) foi utilizado apenas com PDZ; o grupo (P-L+) recebeu só luz LED e nos animais do grupo NYS o medicamento foi aplicado uma vez ao dia. Além disso, foi avaliada a combinação de duas terapias: P+L+NYS e NYS+P+L+. Um grupo recebeu apenas inoculação de C. albicans (grupo P-L-) e outro grupo de animais saudáveis (grupo CNI). Após os tratamentos, foi realizada a recuperação de C. albicans por meio de swabs estéreis. Então diluições seriadas foram realizadas e plaqueadas em placas de Petri com SDA. Após 48 horas de incubação a 37o C as colônias foram quantificadas e o número de UFC/mL foi determinado. Os camundongos foram sacrificados 24 horas e 7 dias após os tratamentos. Os resultados demonstraram que a combinação das terapias promoveu redução de 2,6 lo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to evaluate of PDZ-mediated aPDT, as well as the association of this approach with antifungal nystatin, would be effective to treat oral candidosis in mice infected with fluconazole resistant C. albicans. Were used 174 female Swiss mice of 5 weeks-old-age approximately. The animals were immunosuppressed with predinisolone 100 mg/kg on the 1st, 5th and 13th days of the experiment. On day 2, the animals were sedated with 0.1 mL of chlorpromazine hydrochloride and a suspension of C. albicans 107 CFU/mL was inoculated into the tongue. From 7 to 11 the treatments were performed. In the aPDT group, was used 200 mg/L of Photodithazine (PDZ) associated with 50 J /cm2 LED light (P+L+ group). In the (P+L-) group was used only with PDZ; the group (P-L+) received only LED light and in the animals of the NYS group the drug was applied once a day. In addition, we evaluated the combination of two therapies: P+L+NYS and NYS+P+L+. One group received only inoculation of C. albicans (P-L- group) and another group of healthy animals (CNI group). After the treatments, recovery of C. albicans was performed by sterile swabs, then serial dilutions were performed and plated on Petri dishes with SDA. After 48 hours incubation at 37 °C the colonies were quantified, and the number of CFU/mL was determined. Mice were sacrificed 24 hours and 7 days after the treatments. The results showed that the combination of the therapies promoted reduction of 2.6 log10 and 2.1 log10 f... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-28Bitstream added on 2014-06-13T19:20:06Z : No. of bitstreams: 1 faria_pep_dr_araca.pdf: 1244848 bytes, checksum: 1c3d78205883be40533349acdfc5ffde (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A combinação de um fármaco fotossensível (FS) ativado por luz (vermelha, infravermelho ou ambas) forma uma das vertentes de aplicação da Terapia Fotodinâmica (TFD), que consiste na administração de um FS que posteriormente é ativado pela irradiação do LED ou Laser junto ao tecido, sendo que o FS ou a luz sozinhas, não apresentam citotoxicidade. O presente estudo teve por objetivos estabelecer o potencial regenerador do tecido ósseo para o reparo em calvária de coelho, utilizando três sistemas de liberação de drogas (DDS) de FS, estimulado pela combinação da fotobiomodulação de sistemas LED operando na faixa do visível e infravermelho. Foram utilizados 48 coelhos New Zealand White divididos em 3 grupos: Grupo LED 24/48 (dezoito coelhos) com aplicações de LED 24/48 horas após a cirurgia, Grupo LED 72/96 (dezoito coelhos) com aplicações de LED 72/96 horas após a cirurgia e Controle (doze coelhos) onde não houve aplicação de LED. Nos grupos experimentais foram realizadas 4 perfurações nas calvárias com preenchimento aleatoriamente de 1) Base em gel, 2) nanoemulsão carregada com FS, 3) lipossoma em gel com FS e 4) nanopartículas de albumina (BSA) carregada com FS. No grupo controle foram feitas duas perfurações, uma preenchida por osso autógeno e outra com coágulo. Dezesseis animais foram submetidos à eutanásia em cada tempo experimental: 5 dias, 10 dias e 20 dias. Lâminas histológicas foram feitas a partir dos defeitos e o osso neoformado foi mensurado. O uso de FS nos DDS não foi efetivo para abreviar o tempo de reparo ósseo em calvária de coelhos nos inervalos de tempo deste estudo / The combination between photosensitizer substances with laser or LED (light emitting diode) form the photodynamic therapy (PDT) basis that consists of photosensitivity drug activated by low frequency light. This mechanism is used in soft tissue healing process to improve the oxygen tension leading to a fast revascularization. The objective of this study was to evaluate the effects of photosensitivity drugs activated through LED on bone healing process. Fourty eight New Zealand White rabbits were underwent to four bicortical calvaria defects made by 6.0 mm trephine drill. The defects were randomly filled up with (1) Gel, (2) Nanoemulsion + photosensitizer drug, (3) Liposome + photosensitizer drug, (4) NPS (nanostructure polymeric system) + photosensitizer drug. After 24/48 hours or 72/96 hours a LED were applied on all the rabbits. Sixteen animals were sacrificed, respectively, at 5, 10 and 20 days after surgery. Histological slides were prepared from each experimental site for histomorphometry and histological analysis. Bone graft was significant higher bone level in all experimental time points.. At 10 days liposome showed higher bone level than Gel (p=0,0161). However on 20 days, no difference was detected between the materials. The use of photosensitizer drugs activated by LED demonstrated do not achieve the stimulate bone formation on later time points on thsi presente study

Orientador: Valdir Gouveia Garcia / Coorientador: Letícia Helena Theodoro / Banca: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Álvaro Francisco Bosco / Banca: Enilson Antônio Sallum / Banca: Martha Simões Ribeiro / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar histológica e histometricamente a influência da terapia fotodinâmica (PDT) no tratamento coadjuvante da doença periodontal (DP) experimental induzida em ratos diabéticos e não-diabéticos. Foram utilizados 180 ratos divididos em 2 grupos: Grupo A: 90 animais não-diabéticos e Grupo B: 90 animais diabéticos induzidos pela aloxana a 2% (42 mg/Kg). Nos Grupos A e B a DP foi induzida no primeiro molar inferior. Após 7 dias de evolução da DP, em todos animais de ambos os Grupos, a ligadura foi removida seguida de raspagem e alisamento radicular (RAR) e divididos conforme os tratamentos: I (RAR) - RAR e irrigação com 1 ml de soro fisiológico; II (TBO) - RAR e irrigação com 1 ml de azul de toluidina O (TBO 100 μg/ml); III (PDT) - RAR, irrigação com 1 ml de TBO e após 1 minuto irradiação com o laser em baixa intensidade. O laser (AsGaAl, 660 nm) foi aplicado na vestibular e lingual em 3 pontos eqüidistantes em cada região, com dose energética de 4 J/ponto. Dez animais de cada grupo experimental e tratamento foram sacrificados nos períodos de 7, 15 e 30 dias para a análise histológica e histométrica. Os dados histométricos foram submetidos à análise estatística (p<0,05). Os animais tratados com a PDT (Grupo A e B), apresentaram histologicamente tecido conjuntivo (TC) bem organizado e trabéculas ósseas presentes em toda a extensão da furca. Nos animais tratados com RAR nos dois grupos, o TC estava desorganizado, com intenso infiltrado inflamatório e áreas de reabsorções ósseas e cementárias. As alterações mais severas foram observadas no Grupo B. Histometricamente, no Grupo A, o tratamento com a PDT (0,33±0,05 mm2; 0,35±0,06 mm2; 0,27±0,07 mm2), promoveu menor perda óssea (p<0,05) na região de furca quando comparado com os animais tratados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate histological and histometrically the influence of photodynamic therapy (PDT) as an adjuvant treatment on the experimentally induced periodontitis in diabetic and non-diabetic rats. One-hundred eighty rats were assigned to 2 groups: Group A: Ninety non-diabetic and Group B: Ninety alloxan-diabetic. In Group B, after 7 days of alloxan-diabetic induction (42 mg/Kg), the periodontal disease (PD) was induced at the first mandibular molar. Seven days after the establishment of PD, the ligatures were removed. Thereafter, all animals were submitted to scaling and root planing (SRP) and then divided according with the following protocols treatment: I (SRP) - SRP and irrigation with saline solution (1 mL); II (TBO) - SRP and irrigation with 1 mL of Toluidine Blue (TBO) (100 μg/mL); III (PDT) - SRP, irrigation with 1mL of TBO and after 1 minute, low-level laser therapy (LLLT). The LLLT GaAlAs (4 J) was performed in 3 equidistant points at the each buccal and lingual aspect of the first mandibular molar. Ten animals in each experimental group and treatment were sacrificed at 7, 15 and 30 days. Histologic and histometric analyses were performed. The histometric values were statistical analyzed ( p<0.05). The animals treated by PDT in Group A and B showed the furcation area fulfilled with a well-organized connective tissue (CT) and with bone trabeculae in all extension of furcation. In animals treated with SRP, the CT was poorly organized, showing an intense inflammatory infiltrate and areas with bone and cement resorption. The worst tissue response was found in Group B. Histometrically, in Group A, the animals treated by PDT (0.33±0.05 mm2; 0.35±0.06 mm2; 0.27±0.07 mm2) showed a lesser bone loss (p<0.05) in all experimental... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T12:43:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 276700.pdf: 1996904 bytes, checksum: 633109f10aa6cc3b6b662dba76a6a2bd (MD5) / Neste trabalho foram sintetizados quatro novos complexos mononucleares de cobre(II). Os complexos foram caracterizados por vários métodos e a estrutura de um dos compleoxs foi resolvida por cristalografia de raios-X. A interação dos complexos com o DNA foi avaliada por titulação com o DNA Calf Thymus através de uma técnica espectroscópica e as constantes de interação Kb foram obtidas. A técnica revelou que nenhum complexo intercala no DNA, mas todos interagem suficientemente bem. A atividade de nuclease e fotonuclease dos complexos também foi avaliada através da clivagem de DNA plasmidial. Os complexos apresentaram uma boa atividade tanto quanto irradiados com luz UV como quando sob luz vermelha. Alguns estudos mecanísticos foram realizados para elucidar os mecanismos de clivagem. Partindo das estruturas de raios-X e das estruturas propostas para os complexos, calculou-se a estrutura eletrônica nos estado fundamental e "tripleto" para cada um. Com a correlação de propriedades teóricas com experimentais, propôs-se novas relações entre a atividade de fotonuclease dos complexos e as propriedades específicas destes estados eletrônicos.