CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Chromobacterium violaceum à uma betaproteobactÃria de vida livre encontrada em regiÃes tropicais e subtropicais. C. subtsugae, bactÃria do mesmo gÃnero, possui atividade tÃxica contra insetos de diversos gÃneros. Entre os genes que podem estar envolvidos no potencial inseticida dessa bactÃria, destacam-se aqueles que codificam quitinases. Em adiÃÃo, identificou-se tambÃm no genoma de C. violaceum ATCC 12472 uma proteÃna contendo repetiÃÃes YD com potencial atividade inseticida, codificada pelo gene cv2776, similar Ãquelas produzidas por Xenorhabdus bovienii e Photorhabdus luminescens. O motivo YD compreende 20 aminoÃcidos, com sequÃncia consenso Gx3-9YxYDx2GR(L, I ou V)x3-10G (x representa qualquer aminoÃcido). A proteÃna TccC, de P. luminescens, possui 9 repetiÃÃes YD, assim como a proteÃna SepC, de Serratia entomophila. SepC, juntamente com outras duas toxinas, SepA e SepB, sÃo suficientes para causar a doenÃa âÃmbarâ em Costelytra zealandica (Coleoptera: Scarabaeidae). No presente trabalho, a regiÃo codificadora do gene cv2776 de C. violaceum ATCC 12472 foi clonada em dois diferentes sistemas de expressÃo heterÃloga. Em Escherichia coli, o gene foi expresso sob controle do promotor araBAD, induzido por L-arabinose. A proteÃna rCV2776 foi detectada por ensaio de imunoblotting na fraÃÃo insolÃvel das cÃlulas de E. coli induzidas. A rCV2776 presente na fraÃÃo insolÃvel das cÃlulas dessa bactÃria teve efeito letal sobre larvas de Callosobruchus maculatus, diminuindo em atà 78% o nÃmero de insetos adultos emergidos, alÃm de diminuir o peso mÃdio desses insetos. AlÃm disso, a fraÃÃo celular de E. coli contendo rCV2776 mostrou-se capaz de inibir o crescimento vegetativo de trÃs fungos fitopatogÃnicos, Macrophomina phaseolina, Rhizoctonia solani e Sclerotium rolfsii. Quando incorporada no meio de cultura em uma concentraÃÃo de 1% (m/v), essa fraÃÃo causou percentuais de inibiÃÃo de crescimento do micÃlio de 38.5% (R. solani), 60.7% (M. phaseolina) e 71.1% (S. rolfsii), respectivamente. Na levedura Pichia pastoris, a regiÃo codificadora foi expressa sob controle do promotor PAOX, que à induzido na presenÃa de metanol como Ãnica fonte de carbono. Quando expressa em P. pastoris, a proteÃna recombinante foi aparentemente degradada por proteases endÃgenas, e nÃo pÃde ser detectada em anÃlises de SDS-PAGE ou Western Bloting, mesmo quando foram aplicados 8,0 mg do sobrenadante concentrado e liofilizado no gel de eletroforese. Em conclusÃo, a proteÃna rCV2776 presente na fraÃÃo insolÃvel das cÃlulas de E. coli induzidas foi efetiva em controlar a emergÃncia do caruncho do feijÃo-de-corda, bem como em retardar o crescimento de M. phaseolina e S. rolfsii / Chromobacterium violaceum is a free-living betaproteobacterium, which is found in the water and soil environments of tropical and subtropical regions. C. subtsugae, another species of the same genus, is toxic towards insects belonging to several orders. Among the genes that may be involved in the insecticidal activity displayed by these bacteria are those that encode chitinases. In addition to these chitinases, a protein containing YD repeats with potential insecticidal activity, encoded by the gene cv2776, was also identified in the genome of C. violaceum ATCC 12472. Similar proteins have also been found in the genomes of Xenorhabdus bovienii and Photorhabdus luminescens. The YD motif comprises 20 amino acids, with the consensus sequence Gx3-9YxYDx2GR(L, I or V)x3-10G, where x represents any amino acid. The protein TccC, from P. luminescens, has nine YD repeats in its sequence, as well as the protein SepC, from Serratia entomophila. SepC, along with two other toxins, SepA and SepB, are able to cause the "amber" disease in Costelytra zealandica (Coleoptera: Scarabaeidae). In the present work, the DNA coding seuquence of the gene cv2776 of C. violaceum ATCC 12472 was cloned in two different heterologous systems. In Escherichia coli, the coding sequence was expressed under control of the promoter araBAD, induced by L-arabinose. The protein rCV2776 was detected by imunoblotting in the insoluble fraction of induced E. coli cells. The rCV2776 present in the total insoluble cell fraction caused the death of Callosobruchus maculatus larvae, reducing the number of emerged adults in 78% and also decreasing the average weight of the insects. The E. coli cell fraction containing the recombinant protein also affected the vegetative growth of the phytopatogenic fungi Macrophomina phaseolina, Rhizoctonia solani and Sclerotium rolfsii. When the fraction containing rCV2776 was incorporated at 1.% (w/v) in the medium, the inhibition percentages of the mycelium growth were 38.5% (R. solani), 60.7% (M. phaseolina) and 71.1% (S. rolfsii). In the yeast Pichia pastoris, the coding sequence was expressed under the control of the promoter PAOX, which is induced by methanol as the sole carbon source. When expressed in P. pastoris, the recombinant protein was apparently degraded by endogenous proteases and could not be detected by SDS-PAGE or Western Blotting, even when 8 mg of protein was loaded into the gel. In conclusion, the recombinant protein CV2776 present in the insoluble fraction of induced E. coli cells was effective in controlling the emergence of the cowpea weevil, as well as slowing the growth of M. phaseolina and S. rolfsii

Foram realizados experimentos em laboratório, casa-de-vegetação e campo visando os seguintes objetivos: (i) avaliar a eficiência de diferentes métodos de detecção do fungo Fusarium graminearum em sementes de trigo (Triticum aestivum L.); (ii) estudar o efeito do patógeno na germinação das sementes, bem como na emergência de plântulas e verificar a sua transmissão da semente para a plântula; (iii) avaliar o efeito de diferentes doses de nitrogênio (0, 30, 60, 90, 120 e 180 kg.ha-1), cultivares (IAC – 24, IAC – 350 e IAC – 370), aplicação de mistura de fungicidas (triciclazole + tebuconazol: três aplicações de 0,75 L.ha-1) na parte aérea das plantas na incidência de F. graminearum; (iv) avaliar o efeito do tratamento de sementes de trigo na incidência do patógeno empregando, individualmente, os seguintes fungicidas com as respectivas dosagens (g i.a.100 kg–1 de sementes): captana (150,0), tiofanato metílico (75,0), triflumizole (45,0), triticonazole (45,0), triadimenol (13,5), tolyfluanida (75,0), tebuconazole (5,0), fludioxonil (5,0), difeconazole (30,0) e thiabendazole (30,0). Na detecção de F. graminearum em sementes de trigo da cultivar BR 23 foram utilizados os seguintes métodos: meio semi-seletivo (MSS); MSS + 2,4- D (0,02%); MSS + KCl (-0,8MPa); papel de filtro (PF) com e sem o congelamento das sementes; PF + 2,4 – D (0,02%); restritores hídricos (KCl, NaCl, manitol e sacarose) nos potenciais osmóticos de –0,4, -0,6, -0,8 e –1,0 MPa. A maior incidência do patógeno foi observada com a utilização de MSS + 2,4 – D e a menor percentagem de sementes germinadas foi observada com o uso de PF com congelamento. A germinação de 30 diferentes genótipos de trigo foi significativamente influenciada pela quantidade de sementes mortas com a presença de F. graminearum, contudo não foi encontrada correlação entre a incidência do patógeno e a germinação das sementes. Também foi constatado que o fungo não afeta a emergência das plântulas, contudo verificou-se que a sua taxa de transmissão para diferentes partes da plântula (raiz, colo e haste) é variável de acordo com a com o genótipo infectado. O inóculo da semente pode contribuir para o desenvolvimento de epidemias no campo. Verificou-se que maiores doses de N promovem o aumento da incidência do patógeno nas sementes, enquanto que a aplicação da mistura de fungicidas promove a redução. Não houve diferenças significativas entre as cultivares IAC – 250, IAC – 350 e IAC – 370 na incidência do patógeno. No tratamento químico de sementes de trigo da cultivar BR 18 Terena, as menores incidências do fungo foram observadas empregando-se os fungicidas tiofanato metílico e tebuconazole. Não houve influência dos fungicidas tanto na germinação quanto na emergência e velocidade de emergência de plântulas. Por outro lado, fungicidas como o captana, triticonazole, tebuconazole e triadimenol afetaram negativamente a altura de plântulas, interferindo no desempenho das mesmas. / Experiments were carried out in laboratory, green house and field aiming at the following objectives: (i) to evaluate the efficiency of different methods of detection of Fusarium graminearum; (ii) to study the effect of the pathogen in the germination of wheat seeds, as well as in the emergence of seedlings and to verify the transmission of the seed to the seedling; (iii) to evaluate the effect of different dosages of nitrogen (0, 30, 60, 90, 120 and 180 kg.ha-1), in the incidence of cultivars (IAC - 24, IAC - 350 and IAC - 370) and the application of a mixture of fungicides (triciclazole + tebuconazol: three applications of 0,75 L.ha-1) in the aerial part of the plants in the incidence of F. graminearum; (iv) to evaluate the effect of the treatment of wheat seeds in the incidence of the pathogen employed individually, the following fungicides, with the respective dosages (g i.a.100 kg-1 of seeds): captana (150,0), methylic tiophanate (75,0), triflumizole (45,0), triticonazole (45,0), triadimenol (13,5), tolyfluanida (75,0), tebuconazole (5,0), fludioxonil (5,0), difeconazole (30,0) and thiabendazole (30,0). In the detection of F. graminearum in wheat seeds of the cultivar BR 23 the following methods were used: semiselective media (MSS); MSS + 2,4-D (0,02%); MSS + KCl (-0,8MPa); blotter (PF) with and without the freezing of the seeds; 2,4 PF + - D (0,02%); hidric restrictors (KCl, NaCl, manitol and sacarose) in the osmotic potentials of -0,4, -0,6, -0,8 and -1,0 MPa. The highest incidence of the pathogen was observed with the use of MSS + 2,4 - D and the lowest percentage of germinated seeds was observed with the use deep freezing blotter method of PF with freezing. The germination of 30 different wheat genotypes was significantly influenced by the quantity of dead seeds with the presence of F. graminearum. However, correlation between the incidence of the pathogen and the germination of the seeds was not found. It was found that the fungus does not affect the emergence of seedlings, however it was verified that its rate of transmission for different parts of seedling is variable in accordance with the infected genotype. It was also verified that higher doses of N promote the increase of the incidence of the pathogen in the seeds, and that the application of the mixture of fungicides promotes the reduction. There was no effect of cultivars IAC – 250, IAC – 350 e IAC – 370 on the incidence of pathogen. Regarding the chemical treatment of wheat seeds of cultivar BR 18 Terena, the lowest incidences of the fungus were observed using the fungicides methylic tiophanate and tebuconazole. There was no effect of fungicides both on the germination and on the seedlings emergence and emergence velocity. On the other hand, fungicides such as the captan, triticonazole, tebuconazole and triadimenol affected the height of plântulas negatively, interfering with their performance.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:44:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_leticia_dos_santos_holbig.pdf: 122179 bytes, checksum: 4242f0c09c55bf484ae980dfebe196bf (MD5) Previous issue date: 2007-03-08 / The objective of the study was to evaluate the physiological performance of onion seed after hydroconditioning and coated with polymer and fungicide. Onion seeds cv. Ball early-Hortec ®, Bagé / RS; have been used and subject to hydroconditioning physiological or hydroconditioning samples in 5.0 g of seed pads between two sheets of paper Germitest, with 2.5 times the dry weight of the paper, for 24 hours at 25 ° C. After hydroconditioning made to the drying of the seed in greenhouses with circulation of air forced to ± 35 ° C for 20 hours, until they reach the initial humidity of 7%. Soon after was the coated with polymer-Colorseed Rigran ® in the dose of 50mL.kg-1 and the fungicide Captan ® in the dose of 0.002 g.kg-1. The treatments were to: 1-witness, 2-seed+fungicide, 3 seed+polymer, 4-seed+fungicide +polymer, 5-seed hydroconditioned, 6-seed hidrocondicionada + fungicide, 7-seed hidrocondicionada + polymer, 8 seed+fungicidehidrocondicionada+ polymer. The statistical approach was used 2X4 factorial, with 4 repetitions and averages were compared by Duncan test of the level of significance of 5%. Results showed that the seeds of onion hydroconditioning promoted germination, speed emergency and the percentage of seedlings emerged. Seeds hydroconditioned led seedlings greater and greater accumulation of biomass. Seeds of onion hydroconditioned and covered with polymer-Colorseed Rigran® in the dose of 50mL. Kg-1 and fungicide Captan® at the dose of 0.2%, expressed force that better seeds not conditional. / O objetivo do trabalho foi avaliar o desempenho fisiológico de sementes de cebola após hidrocondicionamento e recobrimento com polímero e fungicida. Foram utilizadas sementes de cebola cv. Bola precoce - Hortec®, Bagé/RS; submetidas ao hidrocondicionamento fisiológico ou hidrocondicionamento em amostras de 5,0 g de sementes embebidas entre duas folhas de papel Germitest, com 2,5 vezes o peso seco do papel, durante 24 horas a 25ºC. Após o hidrocondicionamento efetuou-se a secagem das sementes em estufa com circulação de ar forçado à ±35ºC por 20 horas, até atingirem a umidade inicial de 7%. Logo após foi realizado o recobrimento com o polímero Colorseed-Rigran® na dose de 50mL.kg-1 e o fungicida Captan® na dose de 0,002g.kg-1 . Os tratamentos constituíram-se: 1-testemunha, 2-sementes+fungicida, 3- sementes+polímero, 4-sementes+fungicida+polímero, 5- semente hidrocondicionada, 6- semente hidrocondicionada+fungicida, 7- semente hidrocondicionada+polímero, 8- semente hidrocondicionada+fungicida+polímero. O delineamento estatístico utilizado foi fatorial 2X4, com 4 repetições e as médias foram comparadas pelo teste de Duncan ao nível de 5% de significância. Os resultados mostraram que o hidrocondicionamento das sementes de cebola favoreceu a germinação, velocidade de emergência e a porcentagem de plântulas emergidas. Sementes hidrocondicionadas originaram plântulas maiores e com maior acúmulo de biomassa. As sementes de cebola hidrocondicionadas e recobertas com polímero Colorseed-Rigran® na dose de 50mL. kg-1 e fungicida Captan® na dose de 0,2%, expressaram melhor vigor que sementes não condicionadas.

El género Satureja L. se ha muestreado en nueve localidades representativas del área biogeográfica de la especie en la Comunidad Valenciana: Cullera, Navalón (dos localidades), Sierra de Espadán, Chiva (dos localidades), San Juan de Peñagolosa y Culla (dos localidades). El muestreo se repitió 4 veces en cada localidad, coincidiendo con las épocas propias del clima mediterráneo: primavera, verano, otoño e invierno. Se ha efectuado el análisis del aceite esencial extraído tanto por cromatografía de gases (estudio cuantitativo) como por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (estudio cualitativo). Se ha analizado la composición del aceite esencial de las distintas especies de Satureja identificando más del 90% de los componentes de la esencia en todas las muestras estudiadas. Asimismo se ha realizado un estudio morfológico de las poblaciones en estudio considerando caracteres como longitud y anchura de las hojas y cálices y densidad y longitud de pelos. Esta especie presenta tres quimiotipos diferentes en el área de estudio, caracterizados por carvacrol, alcanfor y linalol. El quimiotipo linalol apoya la propuesta taxonómica de la especie innota, mientras que el carvacrol describe a la especie montana. Las localidades cuyo compuesto principal ha sido el alcanfor coinciden con las especies cuneifolia e intricata, con la diferencia que la primera presenta una mayor cantidad de dicho compuesto. Las diferencias obtenidas en la composición del aceite esencial de las diferentes poblaciones de Satureja, así como el estudio de los caracteres morfológicos de las mismas, apoyan la clasificación taxonómica propuesta por la Flora Ibérica, que divide estos taxones en especies. La calidad del aceite esencial se encuentra relacionada positivamente con los índices bioclimáticos (It, Itc, Io¿), mostrándose la bioclimatología como el factor de mayor influencia en la variabilidad de la esencia. La actividad fungicida, herbicida y capacidad antioxidante evidenció diferencias entre los aceites estudiados con un denominador común: el aceite de S. montana (cuyo compuesto mayoritario es carvacrol) resultó ser el más efectivo en todas las pruebas realizadas. / García Rellán, D. (2013). Ecología química y actividad biológica de las especies perennes de Satureja L. en la península ibérica [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/32826

O desenvolvimento de resistência antimicrobiana e a consequente seleção de microrganismos multirresistentes consolidam-se como grandes ameaças à saúde global. Neste contexto, a busca por novas drogas antimicrobianas/microbicidas é fundamental e compostos como os peptídeos antimicrobianos (AMPs) tornaram-se alvos atraentes. Os AMPs são compostos químicos de massa molar média e grande diversidade estrutural, produzidos por todos os seres vivos e com capacidade de inibir o crescimento de e/ou matar microrganismos. O AMP Cheferina I (Chef I) foi isolado das raízes de Capsella bursa-pastoris e é resultado da proteólise de uma proteína da família das proteínas ricas em glicina, que em plantas estão relacionadas às funções de defesa e cicatrização. O nosso grupo de pesquisa foi pioneiro no desenvolvimento e estudo de análogos truncados amidados deste AMP atípico rico em glicina (67,9%) e histidina (28,6%), que se mostraram ativos frente às diferentes cepas de Candida e a S. cerevisiae pela internalização/ação celular acompanhada de manutenção da integridade da membrana plasmática; o análogo amidado (Chef Ia) e o análogo marcado com 5(6)-carboxifluoresceína/FAM (FAM-Chef Ia) tiveram as suas atividades antifúngicas potencializadas por íons Zn2+. Este trabalho deu continuidade ao estudo do efeito dos íons metálicos divalentes Zn2+, Cu2+, Ca2+ e Mg2+ nas atividades anticandida/fungistática e candidacida/fungicida a diferentes pHs e forças iônicas, estruturas e localizações intracelulares destes análogos. Os resultados na ausência de íons em pH 5,1 revelaram maior atividade do análogo fluorescente em relação à do não fluorescente. Neste mesmo pH, as atividades anticandida e candidacida de Chef Ia foram influenciadas negativamente pelos íons Ca2+ e Mg2+ (2-4 vezes) enquanto que, na presença de íons Zn2+ as atividades anticandida de ambos os análogos foram aumentadas (Chef Ia: 8-64 vezes; FAM-Chef Ia: 4-32 vezes). Os íons Cu2+ aumentaram a atividade anticandida de Chef Ia (2-4 vezes), mas não a do análogo fluorescente, mas as atividades candidacidas de ambos foram melhoradas (Chef Ia: 2-8 vezes; FAM-Chef Ia: 2 vezes). Em pH 5,1, os íons Zn2+ mantiveram a atividade anticandida de Chef Ia em alta força iônica, mas só FAM-Chef Ia exibiu atividade candidacida. Em pH 7,4 ambos análogos foram inativos em baixa e alta forças iônicas na ausência e presença de Zn2+ ou Cu2+. As maiores porcentagens de folhas-β-antiparalelas e dobras foram observadas no espectro de DC de Chef Ia em pH 7,4, sendo que aqueles registrados em pH 5,1 e 7,4 em presença de íons Zn2 e Cu2+ indicaram a formação de quelatos estruturalmente distintos. Ambos os peptídeos são bioquelantes em potencial, sendo as proporções peptídeo: íon obtidas as seguintes: FAM-Chef Ia = 1:2 para Cu2+, 1:10 para Zn2+; Chef Ia = 1:1 para Cu2+. A análise da internalização celular de FAM-Chef Ia permitiu a suposição de dois mecanismos de internalização (translocação direta e endocitose), sendo que nas células vivas a presença de Zn2+ afetou negativamente a translocação direta (p 0,0343) e potencializou a endocitose (p 0,0002). / The development of antimicrobial resistance and the consequent selection of multiresistant microorganisms have become major threats to global health. In this context, the search for new antimicrobial/microbicidal drugs is crucial and the antimicrobial peptides (AMPs) have been seen as attractive targets. AMPs are chemical compounds of medium molecular mass and high structural diversity produced by all living beings, capable of inhibiting the growth of microorganisms and killing them. The AMP Shepherin I (Shep I) was isolated from the roots of Capsella bursa-pastoris, being a bioactive peptide encrypted in a glycine-rich protein from a family that in plants are strictly related to defense and healing functions. Our research group has pioneered the development and study of amidated truncated analogues of this atypical glycine- (67.9%) and histidine-rich (28.6%) AMP, which has shown activity against different strains of Candida and S. cerevisiae through cellular internalization with maintenance of the plasma membrane integrity. The amide analogue (Chef Ia) and its fluorescent analog labeled with 5 (6) - carboxyfluorescein / FAM (FAM-Chef Ia) had their antifungal activities potentiated by Zn2+ ions, so the present work continued examining the effect of the divalent metallic ions Zn2+, Cu2+, Ca2+ and Mg2+ on the anticandidal/fungistatic and candidacidal/fungicide activities at different pHs and ionic forces, structures and intracellular locations of these analogues. The results in the absence of those ions at pH 5.1 revealed that the fluorescently labelled analog was more potent than the nonfluorescent. At the same pH, Shep Ia anticandidal and candidacidal activities were negatively influenced by Ca2+ and Mg2+ ions (2-4 fold), whereas in the presence of Zn2+ ions the anticandidal activities of both analogues were increased (Shep Ia: 8-64 fold, FAM- Shep Ia: 4-32 fold). Cu2+ ions increased Shep Ia anticandidal activity (2-4 fold) but not that of FAM-Shep Ia, nevertheless, the candidacidal activities of both analogues were increased (Shep Ia: 2-8 fold, FAM-Shep Ia: 2 fold). Also at pH 5.1, the Zn2+ ions helped retaining the anticandidal activity of Shep Ia at high ionic strength, although only FAM-Shep Ia exhibited candidacidal activity. At pH 7.4 both analogues were inactive at low and high ionic strengths in the absence or presence of Zn2+ or Cu2+. The highest percentages of antiparallel β-sheet and turns were observed in Shep Ia CD spectrum at pH 7.4, while those recorded at pH 5.1 and 7.4 in the presence of Zn2+ or Cu2+ ions indicated the formation of structurally different chelates. Both peptides are potential biochelates, with the following peptide:ion ratios: FAM-Shep Ia = 1: 2 for Cu2+, 1:10 for Zn2+; Shep Ia = 1: 1 for Cu2+. The analysis of the cellular internalization of FAM-Chef Ia allowed the assumption of two mechanisms of internalization (direct translocation and endocytosis) and in the living cells the presence of Zn2+ negatively affected the direct translocation (p 0.0343) and potentiated endocytosis (p 0.0002).

O fungo basidiomiceto Crinipellis perniciosa é o agente causal da vassoura-de-bruxa do cacaueiro (Theobroma cacao), podendo causar sérios perdas na produção. Este fungo é capaz de colonizar, além do cacau, várias outras plantas hospedeiras, onde pode se adaptar às novas condições, contribuindo, dessa forma, para o aumento da variabilidade genética desse microrganismo. Assim sendo, o objetivo desse trabalho foi isolar e identificar C. perniciosa de tecidos sadios de cacaueiro e comparar a sua variabilidade genética e fisiológica com isolados patogênicos por meio de análises moleculares e fisiológicas. Após a desinfecção e retirada da casca dos ramos, colônias morfologicamente similares a C. perniciosa foram obtidas de tecidos sadios de cacaueiro, os quais foram considerados como endófitos. A identificação preliminar desses isolados foi baseada nas observações morfológicas, tais como coloração da colônia e presença de grampos de conexão. Posteriormente, os isolados de C. perniciosa foram caracterizados geneticamente por RAPD, e sequenciamento de regiões do rDNA (18S+5.8S+28S), resistência a fungicidas, produção de exoenzimas e patogenicidade ao cacaueiro. A análise por marcadores RAPD separou os 37 isolados em 8 grupos (G1 a G8), sendo o grupo G1 dividido em 2 subgrupos (G1-1 e G1-2). Por esta análise foi possível observar que linhagens com 100 % de similaridade foram isoladas de locais diferentes, enquanto que isolados obtidos de uma mesma planta podem ser geneticamente diferentes. A análise da seqüência do rDNA dos isolados de C. perniciosa mostrou a formação de 6 grupos distintos (R1 a R6). Isolados obtidos de uma mesma planta não se agruparam, reforçando a hipótese de que isolados geneticamente diferentes podem ocupar a mesma planta hospedeira. Quanto resistência a fungicidas (tebuconazole, mancozeb, benomil e óxido cuproso), foi observado que tebuconazole foi o mais eficiente na inibição do crescimento miceliar, enquanto benomil apresentar menor taxa de inibição. Isolados endofíticos e patogênicos apresentaram comportamento similar em relação aos fungicidas. Resultado semelhante foi observado quanto a produção de exoenzimas (amilase, lipase, pectinase, exo e endoglicanase). Foi observada a produção de todas as enzimas avaliadas, sendo possível detectar variações entre os isolados. Entretanto, esta variação não foi correlacionada ao hábito endofítico ou patogênico. A patogenicidade de 8 isolados de C. perniciosa foi avaliada em mudas de cacau Catongo. A porcentagem de plantas infectadas com sintomas variou de 55% a 100%. Isolados endofíticos apresentaram baixa virulência sobre o cacaueiro, tendo o isolado endofítico 31 induziu sintomas em 60% das plantas inoculadas, resultado este provavelmente devido à alta pressão de inóculo. Este trabalho mostra pela primeira vez C. perniciosa como endófito em tecidos não meristemático do cacaueiro. / The basidiomycete fungus Crinipellis perniciosa (Stahel) Singer is the causal agent of Witches' Broom Disease of Cacao (Theobroma cacao L.) which is the main factor limiting cocoa production in the Americas. Pod losses of up to 90% are experienced in affected areas as evidenced by the 50% drop in production in Bahia province, Brazil following the arrival of the C. perniciosa in the area in 1989. The disease has proven particularly difficult to control and many farmers in affected areas have given up cacao cultivation. Any useful control strategy for Witches' Broom disease must be effective against in range strains of the pathogen. It is already known that pathogenic variation exists among isolates of Crinipellis perniciosa obtained from different areas and host plants. However, any study was developed about the variability between endophytic and pathogenic population. In order to evaluate the genetic variability of 35 isolates of endophytic and pathogenic populations of Crinipellis perniciosa, the RAPD technique, ITS sequencing and fungicide susceptibility were performed. Genetic variability between 35 isolates of C. perniciosa was analysed by the random amplified polymorphic DNA (RAPD) technique, which indicated that isolates from other host plants were more diverse than isolates obtained from cacao plants. Among cacao isolates was observed at least two groups, one formed mainly by endophytic isolates and other by pathogenic ones. Analysis by ITS sequence grouped isolates independently of endophytic or pathogenic status. Fungicide susceptibility showed that cupric oxide inhibits statistically more endophytic isolates than pathogenic ones, showing that could have physiological differences between these populations. The present study highlighted the possible genetic and physiological differences between endophytic and pathogenic population of C. perniciosa.

O objetivo deste trabalho foi determinar o efeito de tratamentos térmicos com ou sem aplicação de fungicida sobre a qualidade e o potencial de armazenamento de tangores. O armazenamento refrigerado por longos períodos aumenta a incidência de danos por frio ("chilling") e a incidência de podridões em tangor ‘Murcott’. As frutas foram submetidas a duas temperaturas de armazenamento: 1 e 4oC, sendo que em cada uma delas os seguintes tratamentos foram aplicados: 1) Controle (frutas sem fungicida, apenas imersas em água a 25oC durante dois minutos); 2) Imersão das frutas em imazalil 50 (mg L-1 ) a 25oC por dois minutos; 3) Imersão das frutas em imazalil 50 (mg L-1) a 53oC por dois minutos; 4) Imersão das frutas apenas em água quente a 53oC por dois minutos. Todos os frutos tratados foram armazenados a 1 e 4°C por 8 semanas. As avaliações foram feitas a cada 2 semanas e foram determinadas as características físico-químicas e as características sensoriais. A redução na temperatura de armazenamento e os tratamentos térmicos tiveram pouca influência nas características físico-químicas. Os frutos armazenados a 1°C apresentaram desenvolvimento de sintomas de danos por frio a partir da sexta semana de armazenamento. Os frutos tratados termicamente antes do armazenamento apresentaram redução nos danos por frio, porém tiveram uma elevação na perda de massa. Não houve efeito da aplicação do fungicida na incidência de danos por frio e de podridões, tampouco nas características físico-químicas. As características sensoriais foram decrescendo ao longo do período, sendo que os frutos tratados terrmicamente e armazenados a 1ºC apresentaram melhores caracterrísticas sensoriais ao final das avaliações. / The objective of this work was to determine the effect of heat treatment with or without fungicide on the quality and potential storage of ‘Murcott’ tangor. The cold storage for long time increases the incidence of chilling injury and decay of ‘Murcott’ tangor. Fruit were stored under two cold storage temperatures: 1 and 4°C, and different treatments were applied in each one: 1) Control (fruit without fungicide, just with 25°C water dip/2min), 2) Fruit with 25°C imazalil (50mg L-1) dip/2 min, 3) Fruit with 53°C imazalil (50mg L-1) dip/2 min, 4) Fruit just with 53°C water dip/2min. All fruit were stored (under temperatures 1°C and 4°C) during 8 weeks. Every two weeks analysis were determining the physico-chemicals properties and the sensorial characteristics. Reduction of storage temperature and heat treatments had low influence over physicochemicals properties. The 1°C stored fruit presented chilling injury symptoms after 6 weeks. The heat treated fruit before storage showed reduction on chilling injury levels but increased weight loss. The fungicide dips did not have effects over chilling injury and decay incidence neither on physico-chemicals properties. The sensorial characteristics decreased along the period. Heat treated and 1°C stored tangor `Murcott` presented better on the sensorial evaluations.

O presente trabalho teve por objetivo estudar a influência de um ativador de plantas e de dois fungicidas sobre o comportamento de plantas de tomate (Lycopersicon esculentum Mill.), cultivadas em vasos no interior de casa-de-vegetação, no município de Piedade, SP, e submetidas a diferentes condições de fornecimento de água. Os produtos químicos aplicados de forma isolada foram respectivamente dois fungicidas, a piraclostrobina (PRT) e a azoxistrobina (AZT); um ativador de plantas, o acibenzolar-s-metil (ASM). Foi incluída uma testemunha, sem aplicações de produtos. Todos os tratamentos mantiveram-se sob quatro níveis de água (90%, 72 %, 54% e 36% da capacidade de recipiente do substrato). Foram realizadas quatro aplicações dos produtos, sendo a primeira um dia antes do plantio definitivo das mudas, a segunda aos 10 dias após o plantio (DAP), seguindo-se mais duas aplicações com intervalo de 10 dias entre as mesmas. As avaliações foram efetuadas medindo os seguintes parâmetros: a) peso da massa seca da raiz, da parte aérea e total de cada planta aos 30 e 50 DAP; b) determinação do teor de clorofila das plantas aos 35 DAP, tomando-se como padrão o segundo folíolo da primeira folha abaixo do primeiro cacho floral; c) altura das plantas aos 29 e 49 DAP; d) número de folhas abaixo do primeiro cacho floral, aos 29 DAP; e) número total de folhas por planta aos 29 DAP; f) porcentagem de plantas com o primeiro cacho floral totalmente aberto aos 28 DAP; g) sintomas de deficiência hídrica aos 7 dias após a terceira e quarta aplicação dos produtos. Os resultados indicaram que as aplicações do acibenzolar-s-metil (ASM), piraclostrobina (PRT) e azoxistrobina (AZT) evitaram sintomas visíveis de murcha ocasionada pelo estresse hídrico, enquanto que em situações com maiores níveis de fornecimento de água, ocorreu maior acúmulo de matéria seca nas raízes e na parte aérea do tomateiro. / The aim of this study was to evaluate the influence of a systemic acquired resistance activator and two fungicides on tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) plants, cultivated in pots in a greenhouse, which was exposed to different conditions of water supply. The products which were sprayed without tank mixtures (applied in their isolated form), were respectively two fungicides: piraclostrobina (PRT) and azoxistrobina (AZT); and one systemic acquired resistance activator, the acibenzolar-s-methyl (ASM), and one without products. All treatments were rent on four water levels (90%, 72%, 54% and 36% of container capacity). Four sprays of these produtcs were done: the first was done one day before planting, and the second 10 days after planting. Two more spray was done with 10 days interval between them. The following parameters were taken into measured to do the evaluations: a) dry weights of the root mass, the leaf area, and the entirely plant at 30 and 50 days after the planting (DAP); b) determination of the chlorophyll contents of the plants at 35 DAP, taking as the standard the second leaflet of the first leaf, immediately bellow the first inflorescence; c) plant height at 29 and 49 DAP; d) number of leaves below the first inflorescence at 29 DAP; e) total number of leaves for each plant at 29 DAP; f) percentage of plants with the first inflorescence totally opened at 28 DAP; g) water stress symptoms evaluation at the 7th day after the third and the fourth product sprays. The results indicated that the sprays of acibenzolar-s-methyl (ASM), piraclostrobina (PRT) and azoxistrobina (AZT) avoided the visible wilt symptoms due to the hydric stress, while in situations with higher water supply levels, the accumulation of dry material in the roots and in the leaf area of tomato plants increased.

A alface é a hortaliça folhosa mais consumida no Brasil. Seu cultivo vem sendo severamente afetado pelo fungo Thielaviopsis basicola, que ocasiona podridão radicular e subdesenvolvimento de plantas. Não existem maiores estudos sobre o controle desse patógeno nas condições brasileiras. Os objetivos deste trabalho foram: a determinação da ocorrência de T. basicola em plantios comerciais de alface e outras folhosas do Estado de São Paulo, do efeito da temperatura sobre a patogenicidade in vitro dos isolados obtidos e a avaliação da viabilidade de seu controle através do emprego de cultivares de alface resistentes, de fungicidas e da solarização, com e sem incorporação de matéria orgânica. Quatorze isolados de T. basicola foram obtidos de raízes necróticas de alface, chicória e rúcula. O efeito da temperatura sobre a patogenicidade in vitro dos isolados foi determinado, inoculando-se sementes de alface semeadas em agar-água. Foram realizados dois ensaios. No primeiro, quatorze cultivares de alface foram inoculadas com o isolado L1, a 21 e 30ºC. No segundo, a cv. Elisa foi inoculada com os quatorze isolados de T. basicola, a 21 e 27ºC. O isolado L1 foi mais agressivo a 21ºC do que a 30ºC, ocasionando maiores severidade da doença e restrição do comprimento de plântulas em todas as cultivares. Todos os isolados causaram podridão radicular e reduziram o comprimento de plântulas a 21 e 27ºC, destacando-se o isolado A2 como o mais agressivo. De modo geral, os isolados foram mais agressivos a 27 que a 21ºC, exceto L1 e L2. A reação de cultivares de alface a três isolados de T. basicola foi avaliada in vivo. Primeiramente, treze cultivares foram confrontadas com o isolado L1 e, posteriormente, seis dessas cultivares foram inoculadas com os isolados A2 e CH. As cultivares do tipo lisa foram suscetíveis e as do tipo crespa, resistentes, exceto a cv. Verônica. Quanto às cultivares do tipo americana, houve variação na reação ao patógeno. O efeito de fungicidas sobre o crescimento micelial e a esporulação in vitro foi determinado para três isolados de T. basicola. Nove fungicidas foram testados para o isolado L1 e sete para os isolados A2 e CH, nas concentrações de 0; 0,1; 1, 10 e 100 ppm de ingrediente ativo. O fungicida carbendazim foi o mais efetivo. A eficiência de sete fungicidas foi avaliada no controle de T. basicola in vivo. Todos os produtos testados foram eficientes, destacando-se o tebuconazole e o triadimenol. O controle de T. basicola através da solarização, associada ou não à incorporação de 10 ton / ha de torta de mamona ou de cama de frango, também foi avaliado. A solarização do solo com e sem incorporação de matéria orgânica controlou efetivamente o patógeno. Os melhores resultados foram obtidos com a incorporação da torta de mamona seguida de solarização, que permitiu a produção de plantas com maiores comprimento e massa fresca e evitou o aparecimento de qualquer sintoma de necrose radicular. / Lettuce is the most used leafy vegetable in Brazil. Its crop is being severely affected by Thielaviopsis basicola, fungus which causes root rot and stunting in plants. There are no control studies about this pathogen for the brazillian conditions. This research aimed: to determine the T. basicola occurence in São Paulo State commercial lettuce and other leafy vegetables crops, the temperature effect on isolates pathogenicity in vitro and control viability evaluation by lettuce resistant varieties, fungicides and solarization with and without organic matter amendments. Fourteen T. basicola isolates were got from lettuce, chicory and arugula necrotic roots. Temperature effect on the isolates pathogenicity in vitro was determined in inoculated seeds sown on the surface of water agar medium. Two trials were carried out. In the first one, fourteen lettuce varieties were inoculated with L1 isolate at 21 and 30ºC. In the second, only cv. Elisa was inoculated with fourteen T. basicola isolates, at 21 and 27ºC. The isolate L1 was the most aggressive at 21ºC than 30ºC, causing higher disease severity and seedling length restriction of all varieties. All isolates induced root rot and reduced seedlings length at 21 and 27ºC, but A2 isolate was the most aggressive one. All isolates were more aggressive at 27 rather than 21ºC, except L1 and L2 isolates. Lettuce varieties reactions to three T. basicola isolates were evaluated in vivo. First about thirteen varieties were challenged with L1 isolate and later, six of them were inoculated with A2 and CH isolates. Butterhead types were susceptible and Grand Rapids types were resistant, except cv. Veronica. Iceberg type varieties varied in their reaction to pathogen. Fungicide effect on mycelial growth and sporulation in vitro was determined for three T. basicola isolates. Nine fungicides were tested for L1 isolate and seven for A2 and CH isolates, at concentrations of 0; 0,1; 1; 10 and 100 ppm of active ingredient. Carbendazim was the most effective. Seven fungicides efficacy was evaluated to control of T. basicola in vivo. All tested products were efficient, but tebuconazole and triadimenol were the best ones. The control of T. basicola through soil solarization with and without chicken litter and coarse castor bean meal amendments, at 10 ton / ha, also was evaluated. Soil solarization alone and combined with organic matter amendments were both effective ways to control the pathogen. The best results were got with incorporation of coarse castor bean meal followed by solarization, which allowed increase in fresh weight and length of plants, and avoided root rot symptoms.

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2017-05-12T14:19:07Z No. of bitstreams: 1 2010 - Henriqueta Talita Guimar?es Barboza.pdf: 10302674 bytes, checksum: 6daf4f88308c3c733615f0772d6db594 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T14:19:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010 - Henriqueta Talita Guimar?es Barboza.pdf: 10302674 bytes, checksum: 6daf4f88308c3c733615f0772d6db594 (MD5) Previous issue date: 2010-03-04 / Twelve heterocyclic dialkylphosphorylhydrazones compounds were synthesized in this work. Dialkylphosphorylhydrazones were obtained through 3 steps of reaction. The first step consists on the synthesis of different dialkylphosphonates obtained by reaction of triethyl phosphate (PCl3) with 3 mols of the corresponding alcohol. The second step occurs by the reaction with dialkylphosphonates synthesized and hydrazine, producing dialkylphosphorylhydrazines. The third and last step is the condensation reaction of these dialkylphosphorylhydrazines with different heterocycle substituted aromatic aldehydes. The analysis of the 1H NMR spectra allowed to observe the stereoisomers E and Z, with the formation of E diastereisomer preferencially. All the compounds were characterized by 1H, 13C and 31P NMR, IR and mass spectroscopy. Tests in vitro with, Alternaria sp., Colletotrichum sp., Fusarium sp. e Fusarium solani, known as patogenic in papaya (Carica papaya L.) were performed in order to confirm if the compounds showed fungicide activity. The substance 6 B was the one with the best performance in the inhibition of all fungal growths. Finally, tests with acetylcholinesterase enzyme indicated that all substances did not inhibit this enzyme. Figure 2 - General structures of dialkylphosphoryhidrazones synthesized. R ? Ethyl; propyl; isopropyl e isobuthyl. X = O, Y, Z e W = CH; X = S, Y, Z e W = CH; X = NH, Y, Z e W = CH; X = NH, Y= CH, Z=CH e W = N; X = CH, Y= N, Z=CH e W = N; / Neste trabalho foram sintetizadas doze (12) novas dialquilfosforilidrazonas heteroc?clicas. Esses compostos foram obtidos utilizando-se tr?s etapas de rea??o. A primeira etapa consiste na s?ntese de diferentes fosfonatos de dialquila, obtidos por meio da rea??o do tricloreto de f?sforo (PCl3) com tr?s mols do ?lcool correspondente. A segunda etapa ocorre por meio da rea??o dos fosfonatos de dialquila sintetizados com a hidrazina, formando as dialquilfosforilidrazinas. A terceira e ?ltima etapa ? a condensa??o destas dialquilfosforilidrazinas com diferentes alde?dos heteroc?clicos. A an?lise dos espectros de RMN-1H indica a forma??o de diastereois?meros, E e Z, com predomin?ncia do diastereis?meros E. Todos os compostos obtidos foram caracterizados por RMN de H1 e C13 e P31, IV, an?lises de massas. Em seguida foram realizados testes in vitro para verificar se os mesmos possuem atividade fungicida sobre os fungos Alternaria sp., Colletotrichum sp., Fusarium sp. e Fusarium solani, conhecidos por serem pat?genos da cultura de mam?o (Carica papaya L.). O composto 6 B foi o que apresentou o melhor efeito fungicida sobre o crescimento de todos os fungos. Finalmente foram realizados testes com a enzima acetilcolinesterase a fim de observar a toxicidade dos compostos sintetizados frente a esta enzima. Figura 1- Estrututa gen?rica das dialquilfosforilidrazonas heteroc?clicas sintetizadas. R ? Etil; propil; isopropil e isobutil. X = O, Y, Z e W = CH; X = S, Y, Z e W = CH; X = NH, Y, Z e W = CH; X = NH, Y= CH, Z=CH e W = N; X = CH, Y= N, Z=CH e W = N.