Introdução: Resistência aos antirretrovirais pode limitar opções de tratamento, principalmente em pacientes com acúmulo de falhas terapêuticas, o que pode comprometer resultados clínicos. Objetivos: caracterizar o perfil de mutações na transcriptase reversa e protease do HIV-1 de pacientes em falha ao tratamento. Secundariamente, avaliar associação entre mutações e número de falhas terapêuticas, associação entre mutações e subtipos do HIV-1 e apresentar a evolução temporal da prevalência dos subtipos do HIV-1, no estado do Pará, ao Norte do Brasil. Método: Estudo transversal, no qual se avaliam genotipagens, entre janeiro de 2004 a dezembro de 2013, com dados obtidos de formulário de solicitação do exame padronizado pela RENAGENO e de impressos dos resultados, ambos arquivados em quatro serviços de atendimento especializados. Foram incluídos os testes realizados por laboratório da RENAGENO, em maiores de 18 anos, e o primeiro exame daqueles que o realizaram em mais de um momento, totalizando 377 amostras. As mutações são descritas de acordo com o banco de dados de resistência do HIV da Universidade de Stanford (http://hivdb.stanford.edu), estimam-se suas prevalências e avaliam-se mutações de resistência de acordo com o número de falhas no momento da genotipagem, bem como diferenças de mutações entre subtipos B e não-B do HIV-1. Resultados: A mutação M184V foi a mais prevalente (80,1%), seguida da K130N (40,6%) e TAM. Em pacientes multiexperimentados previamente à genotipagem, resistência a ZDV, d4T e TDF foi associada às mutações M41L, D67N, V118I, L210W, K219Q e T69D; bem como resistência a todos os IP/r associou-se às mutações principais M46I, V82A, L90M, I54V, I84V, M46L e L76V. O subtipo B é o predominante no Pará (90,7%) e diferenças de prevalência de mutações entre subtipos ocorreram entre as mutações L63P e A71T versus subtipo B, enquanto as mutações L76V, M36I, K20R, L10V, L89M e F53L associaram-se ao subtipo não-B. Conclusão: A seleção de mutações de resistência do HIV-1 relacionada aos antirretrovirais é similar ao descrito em literatura. O acúmulo de falhas ao tratamento favorece a emergência de mutações, o que reforça o monitoramento de falha virológica, seguida de genotipagem para minimizar o impacto de resistência. Estudos adicionais de epidemiologia molecular são necessários para avaliar melhor a questão da prevalência de subtipos de HIV-1 no estado e possíveis associações com mutações de resistência do HIV-1. / Introduction: Resistance to antiretroviral treatment can limit treatment options, especially in patients with accumulation of therapeutic failures, which may compromise clinical outcomes. Objectives: characterizing the profile of mutations in the protease and reverse transcriptase of HIV-1 patients in the treatment failure. Secondarily to evaluate the association between mutations and the number of treatment failures, association between mutations and subtypes of HIV-1 and present the temporal evolution of the prevalence of subtypes of HIV-1 in the state of Pará in northern Brazil. Method: cross-sectional study in which genotyping is evaluated between January, 2004 and December, 2013 with data obtained from the standardized application form for the examination RENAGENO and printed the results, both filed in four specialty care services. We included those by laboratory RENAGENO in 18 years and the first examination in those who underwent more than one time, totaling 377 samples. Mutations are described according to the database of HIV resistance at Stanford University (http://hivdb.stanford.edu), estimated their prevalence and resistance is evaluated according to the number of failures at the time of genotyping as well as differences between mutations and subtype B and non-B HIV-1. Results: The M184V mutation was the most prevalent (80.1%), followed by K130N (40.6%) and TAM. In patients who received at least three treatments prior to genotyping, resistance to ZDV, d4T and TDF was associated with mutations M41L, D67N, V118I, L210W, K219Q and T69D; well as resistance to all PI / r was associated with the major mutations M46I, V82A, L90M, I54V, I84V M46L and L76V. HIV-1 subtype B was the most prevalent (90.7%) and there were differences between subtypes B versus mutations: L63P and A71T were more frequent in the subtype B, whereas mutations L76V, K20R, L10V, L89M and F53L were in non-B subtypes. Conclusion: The selection of resistance mutations in HIV-1 related to antiretroviral is similar to that described in the literature. The accumulation of failures to treatment favors the emergence of mutations, reinforcing the monitoring and evaluation of virologic failure by genotyping to minimize the impact resistance. Additional molecular epidemiological studies are needed to better assess the issue of prevalence of subtypes of HIV-1 in the state and possible associations with resistance mutations in HIV-1.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / The precocity has come to be one of the new goals of improving cowpea, because it is an important feature, as is the possibility of carrying out up to three crops a year. The objective was to select individual materials cowpea, from F3 progeny: 6, to obtain extraprecoces lines, and determine the efficiency of selection. The experiments were conducted in the irrigated perimeter Baixo AcaraÃ, in the municipality of Marco, CE; located at a latitude of 3Â04'60 '' S, longitude 40Â04'51''W to 52 meters. Were evaluated 15 progenies in F3: 6 in two selection cycles in consecutive years. For both selection cycles, the traits were: number of days to flowering (NDF), number of days to maturity (NDM), plant height (ALT), pod length (CPV), number of seeds per pod (NGV), number of grains per plant (NGP), weight of 100 grains (M100G) and total weight (MTOT). The data for the characteristics were analyzed according to the procedures established for a mixed model, by using the likelihood ratio test (LRT), with the REML/BLUP ethodology. Was performed,analysis deviance to determine the genetic variability among progenies. There were significant differences among the progenies, showing that there is variability between them. It was found that all the characters presented heritability of high magnitude and high accuracy, for all traits showing the stability of the material and the accuracy of selection. It is noticed that all 62 subjects had higher behavior witnesses BRS Tumucumaque and always green, as the NDF and NDM, these results show that all these materials can compose basis for future breeding programs. Individuals who had distinguished himself as the precocity (NDF and NDM) were 12, 15, 16, 19, 21, 30, 33, 37 and 52, with days to flowering and maturity below witnesses. / A precocidade tem passado a ser um dos novos objetivos do melhoramento do feijÃo-caupi, por ser uma importante caracterÃstica, pois representa a possibilidade da realizaÃÃo de atà trÃs cultivos por ano. Objetivou-se selecionar materiais individuais de feijÃo-caupi, a partir de progÃnies F3:6, para obtenÃÃo de linhagens extraprecoces, e determinar a eficiÃncia da seleÃÃo. Os experimentos foram realizados, no perÃmetro irrigado do Baixo AcaraÃ, localizado no municÃpio de Marco, CE; situado a uma latitude de 3Â04â60ââ S, longitude 40Â04â51ââW a 52 metros de altitude. Foram avaliadas 15 progÃnies em F3:6, em dois ciclos de seleÃÃo, em anos consecutivos. Para ambos os ciclos de seleÃÃo, os caracteres avaliados foram os seguintes: nÃmero de dias para o florescimento (NDF), nÃmero de dias para a maturaÃÃo (NDM), altura de planta (ALT), comprimento de vagem (CPV), nÃmero de grÃos por vagem (NGV), nÃmero de grÃos por planta (NGP), massa de 100 grÃos (M100G) e massa total (MTOT). Os dados obtidos para as caracterÃsticas avaliadas foram analisados de acordo com os procedimentos estabelecidos para um modelo misto, sendo utilizado o teste da razÃo de verossimilhanÃa (LRT), com a metodologia REML/BLUP. Foi realizada anÃlise de deviance para a determinaÃÃo da variabilidade genÃtica entre as progÃnies avaliadas. Houve diferenÃa significativa entre as progÃnies, mostrando que hà variabilidade entre as mesmas. Verificou-se que todos os caracteres apresentaram herdabilidade de alta magnitude e elevada acurÃcia, para todos os caracteres, mostrando a estabilidade dos materiais e a precisÃo da seleÃÃo. Percebe-se que todos os 62 indivÃduos apresentaram comportamento superior as testemunhas BRS Tumucumaque e Sempre verde, quanto ao NDF e NDM, estes resultados mostram que todos estes materiais podem compor base para futuros programas de melhoramento. Os indivÃduos que se destacara quanto a precocidade (NDF e NDM) foram 12, 15, 16, 19, 21, 30, 33, 37 e 52, com dias para o florescimento e maturaÃÃo abaixo das testemunhas.

This study aimed to identify through polyphasic approach (phenotypic and genotypic methods) strains of Aeromonas spp. isolated from surface water and sediment from three different points of the Coco River, Cearà following the salinity gradient of the water. Sampling was conducted between October 2011 and March 2012 each collection consisted of six samples. Aeromonas strains were isolated according to the technique described in the literature Gelatin Phosphate Salt Agar (agar plus GSP 20 μg/mL ampicillin). The physico-chemical parameters (salinity, pH and temperature) of water were on a track that favored not only survival, but also the multiplication of micro-organisms in both sites. Among this sample was isolated 140 strains suspected of Aeromonas and (36.4%) 51 strains were confirmed like Aeromonas spp., wich will be identifiyed until species for fenotipic and genotipic tests. In parallel to the insulation work was done a survey of alternative culture media, where we assessed the efficiency of culture media with different compositions in the characterization of colonies of multiple species of Aeromonas. While the antimicrobial susceptibility profile of Aeromonas strains were resistant 100% penicillin (PEN) and cephalothin (CFL) and 100% antimicrobial susceptibility Amikacin (AMI) and imipenem (IMP) among the nine antimicrobials tested and generally A. caviae was the species that showed resistance to antimicrobials. Among the 27 strains tested (45.8%) were multidrug-resistant by making a multiple resistence antibiotic (MRA) > 2. Five factors of different virulence and all strains were tested had at least one of the five virulence factors tested so that different combinations of virulence factors were found in isolates from the same sample. The results of genetic analysis using primers Aero16S-F and Aero16S-F showed that all isolates identified by conventional microbiological tests were confirmed by PCR and 65.6% of the species identified by conventional biochemical tests were confirmed by Box-PCR method. / Este trabalho teve como objetivo principal identificar atravÃs de abordagem polifÃsica (tÃcnicas fenotÃpicas e genotÃpicas) de cepas de Aeromonas spp. isoladas de Ãgua de superfÃcie e sedimento de trÃs pontos distintos do Rio CocÃ, Fortaleza, Cearà seguindo o gradiente de salinidade da Ãgua. Foram realizadas coletas no perÃodo de outubro de 2011 a marÃo de 2012, sendo cada coleta composta por seis amostras. As cepas de Aeromonas foram isoladas de acordo com a tÃcnica descrita na literatura em Ãgar Gelatina Fosfato Sal (Ãgar GSP acrescido de 20 μg/mL de ampicilina). Os parÃmetros fÃsico-quÃmicos (salinidade, pH e temperatura) da Ãgua estavam em uma faixa que favorecia nÃo sà a sobrevivÃncia, mas tambÃm a multiplicaÃÃo dos micro-organismos em dois pontos de coleta. Foram isoladas 140 cepas suspeitas de Aeromonas, 36 (25,7%) foram identificadas atà espÃcie sendo elas: A. caviae, A. media, A. eucrenophila e A. veronii, sendo A. caviae a espÃcie que apareceu com maior frequÃncia. Em paralelo ao trabalho de isolamento foi feita uma pesquisa com dois meios de cultivo alternativos, Ãgar UNISC e Ãgar Amido Ampicilina (AAA), nos quais foi avaliada a eficiÃncia dos meios de cultura com diferentes composiÃÃes, na caracterizaÃÃo de colÃnias de vÃrias espÃcies de Aeromonas. O perfil de suscetibilidade antimicrobiana das cepas de Aeromonas apresentou resistÃncia de 100% a Penicilina (PEN) e Cefalotina (CFL) e 100% de sensibilidade aos antimicrobianos Amicacina (AMI) e Imipenem (IMP) entre os nove antimicrobianos testados e de forma geral A. caviae (38,9%) foi a espÃcie que mais apresentou resistÃncia. Dentre as cepas avaliadas 27 (45,8%) foram multirresistentes por apresentarem um MAR > 2. Foram testados cinco fatores de virulÃncia diferentes e todas as cepas apresentaram pelo menos um desses fatores, de forma que diferentes combinaÃÃes desses fatores foram observadas em isolados provenientes da mesma amostra. Os resultados da anÃlise genÃtica utilizando os iniciadores Aero16S-F e Aero16S-R mostraram que todos os isolados identificados atravÃs de testes clÃssicos de microbiologia foram confirmados por meio da tÃcnica de PCR e 65,6% das espÃcies identificadas por testes bioquÃmicos convencionais foram confirmadas pelo mÃtodo de Box-PCR.

Introdução: Resistência aos antirretrovirais pode limitar opções de tratamento, principalmente em pacientes com acúmulo de falhas terapêuticas, o que pode comprometer resultados clínicos. Objetivos: caracterizar o perfil de mutações na transcriptase reversa e protease do HIV-1 de pacientes em falha ao tratamento. Secundariamente, avaliar associação entre mutações e número de falhas terapêuticas, associação entre mutações e subtipos do HIV-1 e apresentar a evolução temporal da prevalência dos subtipos do HIV-1, no estado do Pará, ao Norte do Brasil. Método: Estudo transversal, no qual se avaliam genotipagens, entre janeiro de 2004 a dezembro de 2013, com dados obtidos de formulário de solicitação do exame padronizado pela RENAGENO e de impressos dos resultados, ambos arquivados em quatro serviços de atendimento especializados. Foram incluídos os testes realizados por laboratório da RENAGENO, em maiores de 18 anos, e o primeiro exame daqueles que o realizaram em mais de um momento, totalizando 377 amostras. As mutações são descritas de acordo com o banco de dados de resistência do HIV da Universidade de Stanford (http://hivdb.stanford.edu), estimam-se suas prevalências e avaliam-se mutações de resistência de acordo com o número de falhas no momento da genotipagem, bem como diferenças de mutações entre subtipos B e não-B do HIV-1. Resultados: A mutação M184V foi a mais prevalente (80,1%), seguida da K130N (40,6%) e TAM. Em pacientes multiexperimentados previamente à genotipagem, resistência a ZDV, d4T e TDF foi associada às mutações M41L, D67N, V118I, L210W, K219Q e T69D; bem como resistência a todos os IP/r associou-se às mutações principais M46I, V82A, L90M, I54V, I84V, M46L e L76V. O subtipo B é o predominante no Pará (90,7%) e diferenças de prevalência de mutações entre subtipos ocorreram entre as mutações L63P e A71T versus subtipo B, enquanto as mutações L76V, M36I, K20R, L10V, L89M e F53L associaram-se ao subtipo não-B. Conclusão: A seleção de mutações de resistência do HIV-1 relacionada aos antirretrovirais é similar ao descrito em literatura. O acúmulo de falhas ao tratamento favorece a emergência de mutações, o que reforça o monitoramento de falha virológica, seguida de genotipagem para minimizar o impacto de resistência. Estudos adicionais de epidemiologia molecular são necessários para avaliar melhor a questão da prevalência de subtipos de HIV-1 no estado e possíveis associações com mutações de resistência do HIV-1. / Introduction: Resistance to antiretroviral treatment can limit treatment options, especially in patients with accumulation of therapeutic failures, which may compromise clinical outcomes. Objectives: characterizing the profile of mutations in the protease and reverse transcriptase of HIV-1 patients in the treatment failure. Secondarily to evaluate the association between mutations and the number of treatment failures, association between mutations and subtypes of HIV-1 and present the temporal evolution of the prevalence of subtypes of HIV-1 in the state of Pará in northern Brazil. Method: cross-sectional study in which genotyping is evaluated between January, 2004 and December, 2013 with data obtained from the standardized application form for the examination RENAGENO and printed the results, both filed in four specialty care services. We included those by laboratory RENAGENO in 18 years and the first examination in those who underwent more than one time, totaling 377 samples. Mutations are described according to the database of HIV resistance at Stanford University (http://hivdb.stanford.edu), estimated their prevalence and resistance is evaluated according to the number of failures at the time of genotyping as well as differences between mutations and subtype B and non-B HIV-1. Results: The M184V mutation was the most prevalent (80.1%), followed by K130N (40.6%) and TAM. In patients who received at least three treatments prior to genotyping, resistance to ZDV, d4T and TDF was associated with mutations M41L, D67N, V118I, L210W, K219Q and T69D; well as resistance to all PI / r was associated with the major mutations M46I, V82A, L90M, I54V, I84V M46L and L76V. HIV-1 subtype B was the most prevalent (90.7%) and there were differences between subtypes B versus mutations: L63P and A71T were more frequent in the subtype B, whereas mutations L76V, K20R, L10V, L89M and F53L were in non-B subtypes. Conclusion: The selection of resistance mutations in HIV-1 related to antiretroviral is similar to that described in the literature. The accumulation of failures to treatment favors the emergence of mutations, reinforcing the monitoring and evaluation of virologic failure by genotyping to minimize the impact resistance. Additional molecular epidemiological studies are needed to better assess the issue of prevalence of subtypes of HIV-1 in the state and possible associations with resistance mutations in HIV-1.

Amebas de vida livre (AVL) do gênero Acanthamoeba estão amplamente distribuídas no ambiente e podem tornar-se amebas patogênicas ao homem. O objetivo deste trabalho foi isolar em de água de torneira amebas de vida livre do gênero Acanthamoeba, identificá-las e classificá-las. Um total de 132 amostras de água de torneira foi coletado de escolas estaduais e municipais entre os meses de março a novembro de 2009. As amostras passaram pelo processo de filtração e as membranas foram semeadas em ágar não-nutriente 1,5% coberto por uma suspensão de E. coli inativadas pelo calor. Todas as amostras positivas para AVL foram submetidas à clonagem celular e identificadas como pertencentes ao gênero Acanthamoeba, através da morfologia dos cistos e trofozoitos e pela PCR utilizando oligonucleotídeos gênero-específicos que amplificam a região ASA.S1 do gene 18S rDNA. Ensaios fisiológicos de termo e osmotolerância foram utilizados para avaliar a patogenicidade dos isolados. Vinte sete isolados foram positivos para AVL e 10 foram identificados como pertencentes ao gênero Acanthamoeba tanto pelas características morfológicas quanto pela análise molecular. Destes, nove isolados apresentaram características do grupo II e um do grupo III, segundo Pussard e Pons (1977). A análise do sequenciamento através da comparação das sequências dispostas no GenBank, demonstrou a distribuição no grupo genotípicos T2 (40%), T2/T6 (40%), T6 (10%) e T4 (10%). Nos ensaios de termotolerância e osmotolerância 50% dos isolados obtiveram um baixo potencial patogênico. Os resultados indicaram a presença do gênero Acanthamoeba em água tratada no estado do RS, revelando sua importância epidemiológica e a necessidade de mais estudos para determinar sua distribuição no ambiente e seu potencial patogênico. / Free-living amoebae (FLA) of Acanthamoeba genus are widely distributed in the environment and can become human pathogenic amoebae. The aim of this study was to isolate from tap water in free-living amoebae of Acanthamoeba, identify them and then classify them. A total of 132 samples of tap water was collected from state and municipal schools between march and november 2009. The samples passed through the filtration process and the membranes were seeded in non-nutrient 1.5% covered by a suspension of E. coli heatinactivated. All samples of AVL were cloned and identified as belonging to the genus Acanthamoeba by the morphology of cysts and trophozoites by PCR using primers and genus-specific primers that amplify the ASA.S1 region of 18S rDNA gene. Tests of physiological thermotolerance and osmotolerance were used to evaluate the pathogenicity of the isolates. Twenty seven isolates of AVL and 10 were identified as belonging to the genus Acanthamoeba through the morphological and molecular analysis. Nine of the isolates showed characteristics of group II and one isolate showed characteristics of group III, according Pussard and Pons (1977). The sequencing analysis by comparing the sequences submitted to GenBank, showed that genotype distribution in group T2 (40%), T2/T6 (40%), T6 (10%) and T4 (10%). In tests of thermotolerance and osmotolerance 50% of isolates had a low pathogenic potential. The results indicated the presence of Acanthamoeba in tap water in the RS, revealing its importance and the need for more epidemiological studies to determine their distribution in the environment and its pathogenic potential.

Orientador: José Luiz Pereira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-17T10:58:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_IsabelaMateus_M.pdf: 18364444 bytes, checksum: 31989d921c63b7a58bff34af51349106 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Staphylococcus são micro-organismos amplamente distribuídos na natureza, sendo o homem e os animais suas principais fontes. A contaminação cruzada após a pasteurização do leite, especialmente por manipulação inadequada, é apontada como a mais importante forma de contaminação dos derivados do leite por estes patógenos, que são importantes em alimentos devido à sua habilidade de produzir uma grande quantidade de proteínas extracelulares (enterotoxinas) que, se pré-formadas no alimento e ingeridas, causam a intoxicação estafilocócica. Apesar da legislação brasileira (RDC 12/2001, Anvisa) preconizar apenas a contagem de Staphylococcus coagulase positiva, relacionando a produção da coagulase com o risco de produção de enterotoxinas, já foi comprovado que espécies coagulase negativas também são capazes de produzir enterotoxinas nos alimentos. Desta forma, os objetivos deste trabalho foram: i) quantificar e analisar a presença de Staphylococcus coagulase positiva e negativa em 104 amostras de derivados lácteos, sendo 24 de sorvete artesanal, 20 de creme de leite pasteurizado, 20 de patê à base de queijo, 20 de queijo Minas frescal e 20 de queijo Minas meia cura; ii) identificar fenotipicamente as espécies isoladas; iii) avaliar a produção de enterotoxinas clássicas (SEA, SEB, SEC1,2,3, SED e SEE) in vitro pelo sistema VIDAS e relacionar os resultados obtidos com a presença de possíveis genes codificadores destas enterotoxinas, pela aplicação da técnica de PCR. Os valores médios de contagens preliminares nos diferentes grupos de alimentos analisados foram: 5 x 103 UFC/g em sorvete, 2,9 x 105 UFC/g em creme de leite, 6,2 x 103 UFC/g em patê, 6,6 x 105 UFC/g em queijo Minas frescal e 6,4 x 105 UFC/g em queijo Minas meia cura. Do total de isolados, 83,6% (148/177) foram classificados como sendo do gênero Staphylococcus e 16,4% (29/177) como Micrococcus. Staphylococcus foram isolados de 43,3% (45/104) das amostras, sendo detectados em 25 amostras de queijos, em 16 sorvetes, em 3 patês e em apenas 1 amostra de creme de leite. Entre os isolados de Staphylococcus, 74,3% (110/148) eram coagulase negativa e 25,7% (38/148) eram coagulase positiva recuperados apenas nas amostras de queijos. Dos 111 isolados selecionados (27 coagulase positiva e 84 coagulase negativa), foram identificadas 13 espécies através do sistema API-Staph (bioMérieux-SA): S. aureus, S. auricularis, S. caprae, S. chromogenes, S. cohnii ssp cohnii, S. epidermidis, S. hominis, S. hyicus, S. lentus, S. saprophyticus, S. sciuri, S. warneri, S. xylosus. Para a detecção de enterotoxinas estafilocócicas clássicas, foi utilizado o kit (bioMérieux-SA). Dos?imunoenzimático ViDAS SET ¿Staph enterotoxin¿ 111 isolados, apenas um (0,9%) produziu enterotoxina, sendo este identificado como S. aureus, coagulase positiva, isolado a partir de queijo Minas meia cura, cuja contagem foi de 1,9 x 106 UFC/g. Ao contrário do esperado, não foram detectados genes codificadores das 5 enterotoxinas em nunhum dos isolados analisados. Discrepâncias entre resultados de testes fenotípicos e genotípicos para detecção de enterotoxinas são comuns, sendo necessária a realização de outros testes imunológicos e moleculares para confirmação destes resultados. Possíveis justificativas seriam a existência de variações nas sequências dos genes do isolado ou a presença de uma toxina que possui reação imunológica cruzada com as enterotoxinas clássicas. Neste estudo, apesar da quase totalidade dos isolados não terem produzido enterotoxinas clássicas, havia um número bem elevado de Staphylococcus em diversos produtos analisados, não excluindo um possível risco de produção das demais enterotoxinas já descritas e demonstrando a falta de cuidados higiênico-sanitários e de boas práticas durante a produção e comercialização destes alimentos / Abstract: Staphylococcus are microorganisms widespread in nature and humans and animals are their main sources. Cross-contamination after milk pasteurization, caused especially by improper handling, is considered the most recurrent source of dairy products contamination by these pathogens. Staphylococus deserves our close attention due their ability to produce a large amount of extracellular proteins (enterotoxins), that if preformed in food and ingested, cause staphylococcal food poisoning. Although the Brazilian legislation (RDC 12/2001, Anvisa) only recommends coagulase-positive staphylococci count monitoring (relating coagulase production to the risk of enterotoxins production), previous researches showed that coagulase-negative species are also capable of producing enterotoxins in foods. Thus, this research aimed: i) to quantify and analyze the presence of coagulase-positive and coagulase-negative staphylococci from 104 dairy products samples, being: 24 homemade ice cream, 20 pasteurized dairy cream, 20 cheese pate, 20 Minas fresh cheese, and 20 Minas half cured cheese; ii) to identify phenotypically the species; iii) to evaluate the production of classic enterotoxins (SEA, SEB, Sec1, 2.3, SED and SEE) in vitro by using VIDAS system and correlate the results to the presence of possible coding genes of these enterotoxins, applying the PCR technique. The average staphylococcal preliminary count values in different food groups analyzed were: 5 x 103 CFU/g in ice cream, 2,9 x 105 CFU/g in dairy cream, 6,2 x 103 CFU/g in pate, 6,6 x 105 CFU/g in Minas fresh cheese and 6,4 x 105 CFU/g in Minas half cured cheese. From isolated strains, 83,6% (148/177) were classified as genus Staphylococcus and 16,4% (29/177) as Micrococcus. Staphylococcus were isolated from 43,3% (45/104) of samples, being found in 25 cheese samples, in 16 ice creams, in 3 pates and in just one dairy cream sample. Among staphylococcal strains, 74,3% (110/148) were coagulase-negative Staphylococcus and 25,7% (38/148) were coagulase-positive Staphylococcus, being these recovered only from cheeses samples. On 111 selected isolates (27 coagulase-positive and 84 coagulase-negative), were identified 13 staphylococcal species by using API-Staph system (bioMérieux-SA): S. aureus, S. auricularis, S. caprae, S. chromogenes, S. cohnii ssp cohnii, S. epidermidis, S. hominis, S. hyicus, S. lentus, S. saprophyticus, S. sciuri, S. warneri, S. xylosus. For classical staphylococcal enterotoxins detection was used VIDAS SET Staph- Enterotoxin immunoassay kit (bioMérieux-SA). From 111 isolates, just one (0,9%) produced enterotoxin, which was identified as S. aureus, coagulasepositive, isolated from Minas half cured cheese, whose count was 1,9 x 106 CFU/g. Contrary to expectations, no coding genes were present in isolates analyzed. Discrepancies between phenotypic and genotypic results of enterotoxin detection tests are common, requiring the application of other immunological and molecular tests for the confirmation of the results. Possible explanations would be that there are genes sequences variations or another enterotoxin that has immunological cross-reaction with classic enterotoxins. For this research, although the higher number of the isolates did not produce classical enterotoxins, the analyzed samples showed high staphylococcal concentration, that do not exclude a newly described enterotoxins risk production. It also demonstrates the lack of hygiene, health care and good practices during the production and commercialization of dairy products / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-07-03T15:08:24Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Marcos César Fernandes Pessoa.pdf: 6006738 bytes, checksum: 6bf14f8b1d3cb3d2908ac7e37e22c668 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-13T15:51:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Marcos César Fernandes Pessoa.pdf: 6006738 bytes, checksum: 6bf14f8b1d3cb3d2908ac7e37e22c668 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-13T15:56:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Marcos César Fernandes Pessoa.pdf: 6006738 bytes, checksum: 6bf14f8b1d3cb3d2908ac7e37e22c668 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-13T15:56:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Marcos César Fernandes Pessoa.pdf: 6006738 bytes, checksum: 6bf14f8b1d3cb3d2908ac7e37e22c668 (MD5) Previous issue date: 2009-07-15 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Bacillus thuringiensis is a Gram-positive bacterium commonly used in the tropical disease vectors and agriculture pragues control. Despite of its use both agriculture and human health, this bacterium can be enterotoxins producer that are also present in a few Bacillus cereus strains, emphasizing the non-haemolytic enterotoxin (NHE), haemolysin BL (HBL) and enterotoxin T (BceT) that have been related to food poisoning outbreaks reported in the literature. Thereby, this work had as a purpose to identify and to realize a genotypic characterization of these enterotoxins in one hundred B. thuringiensis strains isolated in the Amazon State, as well as to achieve the sequencing of these enterotoxin genes starting from the product of Polymerase Chain Reaction (PCR). The prevalence of these enterotoxin genes in B. thuringiensis strains by PCR method was relatively high, of which the results for the seven genes researched (bceT, hblA, hblD, hblC, nheA, nheB and nheC) showed different between themselves. By the genotypic profile were determined 27 groups and was evidenciated that 41% of the strains were positives for all the enterotoxin genes, whereas 3% were negatives for all the genes studied.. The analysis of the nucleotides and amino acids sequences of the Amazonian B. thuringiensis strains identified similarities with the nucleotides and amino acids sequences that are deposited in the GenBank and EMBL databases. / Bacillus thuringiensis é uma bactéria Gram-positiva comumente utilizada no controle de vetores de doenças tropicais e pragas da agricultura. Apesar de seu uso tanto na agricultura quanto em saúde humana, esta bactéria pode ser produtora de enterotoxinas que estão presentes também em algumas linhagens de Bacillus cereus, destacando-se a enterotoxina não-hemolítica (NHE), a hemolisina BL (HBL) e a enterotoxina T (BceT), que têm sido relacionadas a surtos de intoxicação alimentar relatados na literatura. Em vista disso, este trabalho teve como objetivo identificar e caracterizar genotipicamente estas enterotoxinas em 100 linhagens de B. thuringiensis isoladas no Estado do Amazonas, bem como realizar o seqüenciamento destes genes de enterotoxinas a partir do produto da Reação em Cadeia de Polimerase (PCR). A prevalência dos genes destas enterotoxinas nas estirpes de B. thuringiensis pelo método de PCR foi relativamente alta, cujos resultados para os sete genes pesquisados (bceT, hblA, hblD, hblC, nheA, nheB e nheC) mostraram-se distintos entre si. Pelo perfil genotípico foram determinados 27 grupos e ficou evidenciado que 41% das linhagens deram positivas para todos os genes de enterotoxinas, enquanto que 3% foram negativas para todos os genes estudados. A análise das sequências de nucleotídeos e de aminoácidos das linhagens de B. thuringiensis amazônicas identificou similaridades com as sequências de nucleotídeos e aminoácidos que estão depositadas no banco de dados do GenBank/EMBL.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-08-08T11:37:43Z No. of bitstreams: 2 Tese - Caroline Oliveira de Araújo Melo - 2017.pdf: 3534804 bytes, checksum: e2352db895513b3e3c11c5732eff4bda (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-08-08T15:00:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Caroline Oliveira de Araújo Melo - 2017.pdf: 3534804 bytes, checksum: e2352db895513b3e3c11c5732eff4bda (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-08T15:00:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Caroline Oliveira de Araújo Melo - 2017.pdf: 3534804 bytes, checksum: e2352db895513b3e3c11c5732eff4bda (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-07-06 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Alcohol abuse is related to approximately 3.3 million annual deaths worldwide and is considered the first risk factor for the global burden of disease in countries of the Americas. Long-term abuse of alcohol induces numerous molecular and biochemical changes in alcohol-related tissues. It is believed that the toxic effects of alcohol are mediated by DNA damage by several mechanisms, such as by the induction of oxidative damage, DNA adducts, crosslinks and DNA strand breaks. In this sense, the aim of this study was to verify the frequency of polymorphisms in the repair and detoxification genes and the association with the DNA damage in alcoholics. The analysis of the obtained results showed a greater genotoxic damage in the alcoholics, when carrying out the Comet Assay. A point of variation was found in the GSTP1 gene and another point of variation in the XRCC1 gene. However, no statistically significant differences were observed between GSTM1 and GSTT1 genotypes and genetic damage. In this context, it can be concluded that the Comet Assay is a very effective and inexpensive method for the analysis of genotoxic damage. / O consumo abusivo do álcool está relacionado a aproximadamente 3,3 milhões de mortes anuais em todo o mundo, sendo considerado o primeiro fator de risco para a carga global de doenças em países das Américas. O abuso da ingestão de álcool em longo prazo induz inúmeras alterações moleculares e bioquímicas nos tecidos relacionadas ao álcool. Acredita-se que os efeitos tóxicos do álcool sejam mediados por danos ao DNA por vários mecanismos, como pela indução dos danos oxidativos, pelos adutos de DNA, pelos crosslinks e pelas quebras de fitas de DNA. Nesse sentido, o objetivo do presente trabalho foi de verificar a frequência de polimorfismos nos genes de reparo e detoxificação e a associação com o dano no DNA em etilistas. A análise dos resultados obtidos mostrou um maior dano genotóxico nos etilistas, ao realizar o Ensaio Cometa. Foi encontrado um ponto de variação no gene GSTP1 e um ponto de variação no gene XRCC1. No entanto, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os genótipos GSTM1 e GSTT1 e os danos genéticos. Nesse contexto, pode-se concluir que o Ensaio Cometa é um método bastante eficaz e barato para a análise de danos genotóxicos.

Cryptosporidium é um coccídeo que acomete peixes, répteis, anfíbios, aves e mamíferos. O papel dos animais na dinâmica de transmissão deste agente ao homem é pouco conhecido e a ocorrência na população animal é motivo de preocupação para a saúde pública, devido ao potencial zoonótico. O objetivo deste estudo foi obter informações de natureza epidemiológica pela caracterização genotípica de isolados de gatos, cães e bovinos do Estado de São Paulo e avaliar a diversidade nucleotídica das seqüências obtidas. Foi realizada a extração de DNA dos oocistos e a amplificação destes pela reação em cadeia da polimerase (Nested PCR) utilizando primers específicos para a amplificação de fragmentos do gene codificador da subunidade 18S do RNA ribossômico e posterior sequenciamento. Através do exame de fezes de 106 amostras de felinos, 119 de caninos e 123 de bovinos foi observada positividade em três (2,8%), 15 (12,6%) e 21 (17,1%), respectivamente. Nas amostras positivas de bovinos a análise morfológica revelou 16 (76,2%) como Cryptosporidium tipo parvum e cinco (23,8%) como Cryptosporidium andersoni. Para a análise genotípica amostras anteriormente obtidas, foram associadas, sendo analisadas sete amostras de gatos, nove de cães e nove de bovinos. Das sete amostras de gatos a análise genotípica revelou, em todas, Cryptosporidium felis, sendo estas as primeiras caracterizações genotípicas de isolados de felinos domésticos no Brasil. Nas nove amostras de cães seqüenciadas revelou-se identidade genotípica compatível com Cryptosporidium canis em todas as amostras, sugerindo que esta espécie está conservada no Estado de São Paulo. A análise genotípica das amostras de bovinos revelou Cryptosporidium parvum Eire I em duas amostras, Cryptosporidium parvum genótipo bovino em seis amostras e Cryptosporidium bovis em outra amostra sendo, esta última espécie, não zoonótica, e não relacionada a sintomas clínicos e sendo descrita pela primeira vez no Brasil. / Cryptosporidium is a coccidia which contaminates fish, reptiles, amphibians, birds and mammals. The animals role in the transmission dynamics of this protozoa to man is not well known and its occurrence in the animal population is a cause for concern to public health due to its zoonotic potential. The objective of this study was to obtain information of epidemiological nature by genotypic characterization of isolates from dogs, cats and bovine from the State of São Paulo and to evaluate nucleotidic diversity of the existing sequences. The extraction of DNA from oocysts was carried out and the amplification was made by the polymerase chain reaction (Nested PCR) using specific primers for the amplification of fragments from the code gene of subunit 18S of ribosomal RNA and post sequencing. Through a feces examination, in 106 cat samples, 119 dog samples and 123 bovine samples, positivity was observed in three (2.8%), 15 (12.6%) and 21 (17.1%), respectively. In the positive bovine samples the morphologic analysis revealed 16 (76.2%) as Cryptosporidium type parvum and five (23.8%) as Cryptosporidium andersoni. For the purpose of genotypic analyses, previously obtained samples, were associated, with analyses of seven cat samples, nine dog samples and nine bovine samples. From the seven cat samples the genotypic analyses, revealed Cryptosporidium felis in all. These were the first genotypic characterizations of Cryptosporidium from domestic felines in Brazil. In nine sequenced samples from dogs, genotypic identities compatible with Cryptosporidium canis, were revealed in all samples, suggesting that this species is conserved in State of São Paulo. The genotypic analysis in bovines revealed Cryptosporidium parvum Eire I in two samples, Cryptosporidium parvum bovine genotype in six samples and Cryptosporidium bovis in another sample, the last one being a non zoonotic species, not related to clinical symptoms and described for the first time in Brazil.

The relationship of current manual preference (phenotypic handedness) and family history of handedness (genotypic handedness) to memory for imageable stimuli was studied. The purpose of the study was to test the hypothesis that genotypic handedness was related to lessened cerebral lateralization of Paivio's (1969) dual memory systems. The structure of memory was not at issue, but the mediation of storage and retrieval in memory has been explained with reference to verbal or imaginal processes. Verbal mediation theories and supporting data were reviewed along with imaginal theories and supporting data for these latter theories. Paivio's (1969) dual coding and processing theory was considered a conceptual bridge between the competing positions.