A gengivite e a periodontite constituem doenças periodontais infecciosas comuns do homem, nas quais as bactérias periodontais e seus produtos participam ativamente para indução da inflamação local e efeitos sistêmicos (ex.: coração). Sabendo que a saliva representa a primeira e grande barreira às infecções orais, este trabalho se propôs a: i) avaliar a perda óssea induzida pela doença periodontal em ratos submetidos à indução de doença, via implante de ligadura, após os intervalos de 3, 7 e 14 dias; ii) Investigar possíveis alterações de fluxo (estimulado ou não com pilocarpina) e composição salivar nesses animais; iii) avaliar a concentração / expressão de marcadores de estresse oxidativo e inflamatórios em glândulas salivares e em amostras de saliva; iv) avaliar o papel funcional da função das glândulas salivares ex-vivo na produção da amilase. Para isto, ratos Wistar machos (180 -200g) foram submetidos à indução da periodontite através do implante da ligadura, e os parâmetros inflamatórios e bioquímicos foram avaliados nesses animais. Ratos com periodontite no dia 3, quando comparado ao grupo sham, exibiram aumento significativo do fluxo salivar (estimulada com pilocarpina), produção de Ca2+, secreção de proteínas e produção de amilase na saliva, bem como aumento do conteúdo de TBARs em glândulas parótida e da amilase liberada das glândulas submandibulares (GSM). Observou-se, ainda, aumento da expressão de mRNA para iNOS e nNOS em GSM. Em contrapartida, ratos com periodontite após 7 dias exibiram redução da taxa de salivação estimulada (e não estimulada), da produção de proteínas totais e da concentração e secreção de amilase na saliva, muito embora o conteúdo sérico e salivar de TBARs e da atividade de MPO na saliva desses animais mostrou-se elevado em relação ao grupo sham. Não foram observadas diferenças significativas quanto ao conteúdo de TBARs em glândulas salivares, secreção e concentração de Ca2+ na saliva e tampouco sobre o conteúdo de proteínas nitradas em amostras de GSM desses animais. Já no 14<font face=\"Symbol\">&#176; dia visualizou-se um aumento da atividade de NOS Ca2+ dependente e da expressão mRNA das iNOS e nNOS em GSM. Ratos com periodontite, após 14 dias de indução, não exibiram aumento significativo na taxa de salivação, concentração e secreção de Ca2+ salivar, produção e concentração de proteínas totais, amilase na saliva e conteúdo de TBARs em amostras de saliva e glândulas salivares. Ainda, observou-se aumento das atividades da peroxidase/MPO, concentração de nitrato em saliva e proteínas nitradas em GSM e maior concentração de citocinas Th1 / Th2 (IL-4, IL-13 e IL-10) em amostras de GSM. Conclui-se que a indução experimental da doença periodontal em ratos , influencia o funcionamento de glândulas salivares de acordo com os dias de indução, inicialmente estimulando, em um segundo momento inibindo e posteriormente retornando aos níveis basais. Após 7 dias, caracteriza-se como o tempo ideal para a manifestação dos efeitos inibitórios na glândula. / Gingivitis and periodontitis are common infectious periodontal diseases in man, in which periodontal bacteria and their products participate actively to induce local inflammation and systemic effects (eg heart). Knowing that saliva represents the first major barrier to oral infections, this study aimed to: i) to assess bone loss due to induced periodontitis in rats, after intervals of 3, 7 and 14 days, ii) to investigate possible changes in flow (or not stimulated with pilocarpine) and salivary composition in these animals, and iii) evaluate the concentration and expression of markers of oxidative stress and inflammation in the salivary glands and saliva samples, and iv) assess the functional role of salivary gland function in ex vivo production of amylase. For this purpose, male Wistar rats (180-200g) underwent induction of periodontitis by implanting the ligature, and biochemical and inflammatory parameters were assessed. Rats with periodontitis on day 3 when compared to sham group, exhibited a significant increase in salivary flow (stimulated with pilocarpine), production of Ca2+, protein secretion and production of amylase in saliva, as well as increased contents of TBARS in the parotid and amylase released from submandibular glands (GSM). There was also increased expression of mRNA for iNOS and nNOS in GSM. In contrast, rats with periodontitis after 7 days exhibited a reduction in stimulated saliva (not stimulated), production and total protein concentration and secretion of salivary amylase, although the content of serum and salivary TBARS and the activity of MPO in saliva of these animals was high compared to the sham group. There were no significant differences in TBARS content in salivary gland secretion and Ca2+ concentration in saliva, nor on the content of nitrated proteins in samples from these animals GSM. By the 14th day envisioned an increase of NOS activity and Ca2+ dependent mRNA expression of iNOS and nNOS in GSM. Rats with periodontitis, 14 days after induction, exhibited a significant increase in the rate of salivation, concentration and salivary secretion of Ca2+, production and concentration of total protein, salivary amylase and content of TBARS in samples of saliva and salivary glands. Still, there was increased activity of peroxidase / MPO, nitrate concentration in saliva and proteins nitrated in GSM and higher concentration of Th1 / Th2 (IL-4, IL-13 and IL-10) in samples of GSM. We conclude that the experimental induction of periodontal disease in rats, influence the functioning of the salivary glands according to the days of induction, initially stimulating, in a second time and subsequently inhibiting return to baseline levels. After 7 days, is characterized as the ideal time for the expression of an inhibitory effect on the gland function.

Resumo: A espermateca dos insetos estoca os espermatozóides desde a cópula até a fecundação dos ovos, e consiste de uma bolsa que freqüentemente possui glândulas associadas. Considerações sobre a anatomia, histologia e ultra-estrutura de espermatecas tornam-se muito mais complexas quando são considerados os insetos sociais, que apresentam diferenças no tamanho e na forma entre rainhas e operárias, e ainda, entre as espécies. Apesar desta complexidade, os resultados morfológicos, histoquímicos e ultra-estruturais aqui obtidos mostraram as diferenças entre as espermatecas das espécies: Atta sexdens rubropilosa, Atta laevigata, Atta sexdens sexdens, Atta sexdens piriventris, Atta capiguara, Acromyrmex balzani, Acromyrmex landolti, Acromyrmex landolti balzani, Acromyrmex coronatus e Cyphomyrmex muelleri. As espécies Atta sexdens rubropilosa, Atta laevigata, Acromyrmex coronatus e Cyphomyrmex muelleri apresentaram apenas a glândula espermatecal (porção secretora externa à espermateca). Atta sexdens sexdens, Atta capiguara e Acromyrmex landolti balzani apresentaram tanto a glândula espermatecal como um epitélio secretor interno. Atta sexdens piriventris, Acromyrmex balzani e Acromyrmex landolti, no entanto, apresentaram apenas epitélio secretor interno, sugerindo que nestas espécies a espermateca seja mais independente na manutenção dos espermatozóides. As formigas cortadeiras vêm sendo cada vez mais estudadas do ponto de vista filogenético, tendo como principal marcador o DNA mitocondrial. Estabelecer a filogenia das formigas atines auxiliaria na resposta de algumas questões evolutivas sobre a relação destas com seus fungos. Realizou-se aqui a correlação das informações obtidas através das seqüências de DNA e do estudo morfológico das espermatecas de rainhas Atta sexdens rubropilosa, Atta laevigata, Atta sexdens sexdens, Atta sexdens piriventris... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The insects spermatheca stores the spermatozoa from the copulation until the egg fecundation, and consists of a sac frequently associated with glands. Considerations about anatomy, histology and ultrastructure of spermathecae become much more complex in social insects, because they have queens and workers with different sizes and shapes, as well as among the species. Besides this complexity, the morphological, histochemical and ultrastructural results show the differences between the spermathecae of the following species: Atta sexdens rubropilosa, Atta laevigata, Atta sexdens sexdens, Atta sexdens piriventris, Atta capiguara, Acromyrmex balzani, Acromyrmex landolti, Acromyrmex landolti balzani, Acromyrmex coronatus and Cyphomyrmex muelleri. The species Atta sexdens rubropilosa, Atta laevigata, Acromyrmex coronatus and Cyphomyrmex muelleri presented only the spermathecal gland (external secretory portion). Atta sexdens sexdens, Atta capiguara and Acromyrmex landolti balzani presented both the spermathecal gland and an internal secretory epithelium. Atta sexdens piriventris, Acromyrmex balzani and Acromyrmex landolti, however, presented only the internal secretory epithelium, suggesting that the spermatheca in these species is more independent in spermatozoa maintenance. The leaf-cutter ants are being studied more from a phylogenetic point of view, having as a principal marker mitochondrial DNA. The establishment of the phylogeny of the attines ants would help in the response of some evolutionary questions about their relation with their fungus. The present study correlated the information obtained from the DNA sequences and morphological studies of spermathecae of Atta sexdens rubropilosa, Atta laevigata, Atta sexdens sexdens, Atta sexdens piriventris, Atta capiguara, Acromyrmex balzani, Acromyrmex landolti, Cyphomyrmex muelleri, Apterostigma sp. and Mycocepurus goeldii queens... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria Izabel Camargo Mathias / Coorientador: Mauricio Bacci Júnior / Banca: José Eduardo Serrão / Banca: Maria Santina de Castro Morini / Banca: Odair Correa Bueno / Banca: José Roberto Feitosa Silva / Doutor

Orientador: Odair Correa Bueno / Coorientador: Mario Sergio Palma / Banca: Alexsandro Santana Vieira / Banca: Ana Eugenia de Carvalho Campos / Resumo: As glândulas pós-faríngeas estão presentes em todas as formigas e em algumas vespas solitárias. Localizam-se dorso-lateralmente na transição entre a faringe e o esôfago e sua morfologia é variável entre os diferentes grupos de Formicidae, podendo apresentarse na forma lobulada ou digitada. As funções atribuídas a essas glândulas são passíveis de discussão. São consideradas por diferentes autores como cecos gástricos, divertículo do trato digestório, como produtoras de feromônios ou de hidrocarbonetos cuticulares. Novas evidências tem dado suporte a função dessas glândulas na ingestão e retenção de lipídios. Com isto em vista, o presente trabalho teve como objetivo identificar as proteínas expressas nas glândulas pós-faríngeas de Atta sexdens rubropilosa buscando ampliar o conhecimento sobre uma possível função destas glândulas no metabolismo de lipídios por meio da comparação das proteínas diferencialmente expressas nas glândulas de formigas em três estágios alimentares: rainhas que não receberam nenhum tipo de tratamento alimentar e rainhas que receberam óleo de soja como suplementação lipídica, analisadas 4 e 120 horas após o tratamento. A utilização da abordagem proteômica envolveu técnicas de eletroforese bidimensional, estratégia shotgun e espectrometria de massas. Para a análise dos resultados obtidos foram usadas diferentes ferramentas de bioinformática para a identificação das proteínas e esclarecimento de suas funções. O algoritmo utilizado para pesquisa nos bancos de dados foi o MASCOT Ion Search versão 2.0 e os bancos de dados foram o Protein Data Bank, SwissProt e o GenBank. Foram identificadas 33 proteínas a partir do extrato de glândulas pós-faríngeas de rainhas Atta sexdens rubropilosa, envolvidas em diversas funções como metabolismo de lipídios, energético e de esteróides, bem como com os mecanismos de defesa, regulação metabólica, transdução de sinal e... / Abstract: The post-pharyngeal glands are present in all ants and some solitary wasps. These glands are located laterally in the back of the head, between the pharynx and esophagus, and their morphology varies among different groups of Formicidae. They may present themselves as lobulated or typed. The functions assigned to these glands are open to discussion, and are considered by different authors as gastric caeca, diverticulum of the digestive tract or as producer of pheromones or cuticular hydrocarbons. New evidence has supported the function of these glands to be in the intake and retention of lipids. The present study aimed to identify the proteins present in the post-pharyngeal glands of Atta sexdens rubropilosa seeking to expand knowledge about a possible function of these glands in the metabolism of lipids by comparing the differentially expressed proteins in the glands of ants food in three stages: queens who did not receive any treatment, and queens who received soybean oil as lipid supplementation analyzed 4h and 120h after treatment. Using the proteomic approach involving two-dimensional electrophoresis techniques, strategy and shotgun mass spectrometry. To analyze the obtained results various bioinformatics tools were used for protein identification and clarification of their duties. The algorithm used to search the databases was the MASCOT Ion Search version 2.0 and the databases were the Protein Data Bank, GenBank and SwissProt. In the end, 38 identified proteins were extracted of the post-pharyngeal glands of Atta sexdens rubropilosa queens, involved in several functions such as metabolism of lipid, energy and steroids, as well as defense mechanisms, metabolic regulation, signal transduction, cytoskeleton restoration and membrane protein. The expression of proteins related to lipid... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria Emilia Franco Oliveira / Coorientador: Marcus Antônio Rossi Feliciano / Coorientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Leandro Rodello / Banca: Lizandra Amoroso / Resumo: Objetivou-se caracterizar e descrever os parâmetros ultrassonográficos das glândulas vesiculares, prostática, bulbouretrais e os índices vasculares Doppler das artérias testicular e ilíaca interna de carneiros Dorper, correlacionando-os a avaliação testicular, seminal e níveis séricos de testosterona de acordo com a maturidade sexual dos animais. Foram avaliados 45 animais: 24 púberes (8 e 11 meses); e 21 maduros (≥ 12 meses) de idade. Os machos foram examinados por ultrassonografia antes e após colheita seminal e as glândulas foram mensuradas pela biometria. Realizou-se análise qualitativa das glândulas anexas quanto à ecotextura (homogênea e heterogênea) e ecogenicidade (hipo/hiperecoicas de alta e baixa intensidade e anecogênicos). O sêmen foi avaliado quanto a suas características morfofisiológicas. Verificou-se a glândula vesicular e bulbouretral com ecotextura heterogênea, predominando ecogenicidade hipoecogênica de baixa intensidade. A glândula prostática apresentou o parênquima com ecotextura homogênea em relação às outras glândulas e ecogenicidade hipoecogênica. Os valores para idade de 8-11 meses foram de glândula vesicular: 24,81±3,26 mm; próstata: 12,88±1,20 mm; e bulbouretral: 13,72±1,31 mm; e para os animais > 12 meses para a vesicular: 24,58±3,77; próstata: 14,22±2,67; e bulbouretral: 14,71±1,78. Houve correlações significativas (p<0,05) para as dimensões das glândulas genitais acessórias com as do testículo, com as características seminais e com a testosterona. Conclui-se que pela ultrassonografia convencional as glândulas vesicular e bulbouretral têm ecotextura heterogênea, predominando ecogenicidade hipoecogênica de baixa intensidade independentemente da idade. A glândula prostática apresenta o parênquima com ecotextura mais homogênea e a ecogenicidade mostra-se hipoecogênica de alta intensidade na parte dorsal à uretra e hipoecogênica de baixa intensidade na... / Abstract: This study aimed to characterize and describe the ultrassonographic parameters of prostate, vesicular, bulbourethral glands and Doppler vascular index of testicular arteries and internal iliac of Dorper rams, correlating them with evaluation of testicles, semen and serum testosterone levels according to the animals sexual maturity. We evaluated 45 animals: 24 pubescent (8 and 11 months) and 21 mature (≥ 12 months) of age. Males were examined by ultrasound before and after semen collection and seminal glands were biometric measured. We conducted qualitative analysis of accessory glands by the echotexture (homogenitys and heterogenety) and echogenicity (hypo/hyperechoic high and low intensity and anechogenic). Semen had it morphological and physiological characteristics evaluated. Vesicular and bulbourethral glands were found to have a heterogeneous echotexture, predominantly hypoechoic echogenicity of low intensity. The prostate gland parenchyma presented with homogeneous echo texture compared to other glands and hypoechoic echogenicity. The values for age 8-11 months were: vesicular gland (24.81±3.26 mm); Prostate (12.88±1.20 mm); and bulbourethral (13.72±1.31 mm). The values for animals> 12 months were: vesicular glands (24.58±3.77 mm); Prostate (14.22±2.67 mm); and bulbourethral (14.71±1.78 mm). There were significant correlations (p<0.05) for the dimensions of the accessory genital glands with testicles, seminal characteristics and testosterone serum levels. It is concluded that the conventional ultrasound of the vesicular and bulbourethral glands have heterogeneous echo texture, predominantly hypoechoic echogenicity of low intensity regardless of age. The prostate gland has the parenchyma with more homogeneous echo texture and echogenicity shows up high intensity hypoechoic in the dorsal part of the urethra and of low intensity hypoechoic in the ventral part to the urethra. Mature Dorper rans, showed higher dimensions ... / Mestre

Orientador: Márcia Rita Fernandes Machado / Banca: Tiago Luís Eilers Treichel / Banca: José Ribamar Privado Filho / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Fabrício Singaretti de Oliveira / Resumo: Estudou-se a anatomia do timo em 30 filhotes de avestruzes, 13 machos e 17 fêmeas com idade variando entre 10 a 20 dias, mediante fixação de cada ave em solução aquosa de formol a 10%. As cadeias de lobos tímicos localizaram-se no terço distal da região ventral do pescoço, dispondo-se de forma linear e paralela, desde a décima primeira até a décima quinta vértebra cervical, relacionando-se com o nervo vago e veia jugular. O número de lobos variou de 1 a 3 e 1 ou 2, para os antímero direito e esquerdo respectivamente. A média das dimensões dos lobos foram 2,09 x 0,71 x 0,41 cm para o lobo cranial, 0,69 x 0,38 x 0,27 cm para o lobo médio e 0,55 x 0,33 x 0,29 cm para o lobo caudal do antímero direito. No antímero esquerdo foram registrados de 2,14 x 0,71 x 0,37 cm para o lobo cranial e 0,60 x 0,31 x 0,22 cm para o lobo caudal. Os lobos tímicos direitos e esquerdos mostraram-se nutridos, em todos os casos, por vasos oriundos, direta e exclusivamente, das artérias comuns dos nervos vagos, esofágicas ascendentes e cervicais cutâneas ascendentes direitas e esquerdas. Os lobos tímicos do antímero direito receberam, independentemente de sua origem, de um a cinco ramos e do antímero esquerdo, houve uma variação de um a quatro ramos. A morfologia e vascularização arterial do timo apresentaram comportamentos bem definidos, possuindo características comuns que identificam a espécie que foi objeto de nosso estudo / Abstract: It was studied the morphology and the biometry of the thymus in 30 young ostriches, 13 males and 17 females aged from 10 to 20 days, by setting each bird in aqueous solution of 10% formaldehyde. Chains of thymic lobes were located in the third distal part of the ventral neck, offering up linear and parallel, from the eleventh to the fifteenth cervical vertebra, relating to the vagus nerve and jugular vein. The number of lobes varied from 1 to 3 and 1 or 2, to right and left antimeres respectively. The average dimensions of the lobes were 2.09 x 0.71 x 0.41 cm to the cranial lobe, 0.69 x 0.38 x 0.27 cm to the middle lobe and the 55 x 0.33 x 0.29 cm to the caudal lobe of the right side. On left antimere were found the average dimensions of the lobes of 2.14 x 0.71 x 0.37 cm for cranial lobes and 0.60 x 0.31 x 0.22 cm to the caudal lobes. Thymic right and left lobes shown to be nourished, in all cases, for vessels coming directly and exclusively, common arteries of the vagus nerves, skin and cervical esophageal ascending upward right and left . Thymic lobes of the right side received, regardless of its source, from one to five branches and left antimere, there was a variation of one to four branches. The morphology and thymus biometrics showed well-defined behaviors, possessing common characteristic who characterized the specie that was the subject of our study / Doutor

Introdução: O carcinoma adenoide cístico (CAC) é uma das neoplasias de glândula salivar mais comuns para o qual não se encontra quimioterapia eficaz. Um conceito emergente na terapia do câncer é atingir proteínas especificas do tumor. MDM2 (murine double minute 2) é um importante inibidor do supressor tumoral p53, e sua expressão é aumentada em CAC. O objetivo do Artigo 1 foi avaliar o efeito de um novo inibidor da interação MDM2-p53 (MI-773) no CAC in vitro e in vivo. O Artigo 2 teve como objetivo entender o papel da combinação de MI-773 com cisplatina, além de avaliar a recorrência de CAC frente a regime neoadjuvante de MI-773. Materiais e Métodos: 3 modelos de xenoenxerto derivado de paciente (XEDP, UM-PDXHACC- 5; ACCx6; ACCx9) e 5 culturas primarias de CAC (UM-HACC-1, -2A, -2B, -5, -6) foram usados para experimentos in vitro e in vivo. Ensaio de Sulforrodamina B (SRB) foi realizado para avaliar o efeito dos agentes experimentais na viabilidade celular, além de determinar valores de IC50. Western blots revelaram a expressão de p53, fosfo-p53, MDM2, p21, PUMA, BAX, Bcl-2 e Bcl-xL. Lâminas histológicas (UMPDX- HACC-5) foram avaliadas por imunohistoquímica e imunofluorescência para determinar a localização de p53. Técnica de TUNEL in situ revelou o número de células de UM-PDX-HACC-5 no processo de apoptose. Citometria de fluxo foi realizada para determinar o efeito da terapia na proporção de células-tronco tumorais (ALDHhighCD44high) e para avaliar o ciclo celular. Para os estudos in vivo, animais transplantados com tumores (UM-PDX-HACC5, ACCx6, ou ACCx9) receberam protocolo terapêutico (MI-773 – gavagem; cisplatina – injeção intraperitoneal; ou veículo controle) conforme indicado. ANOVA, seguido de testes post-hoc (Tukey), Mann-Whitney U-test ou Student’s t-test foram usados para determinar as diferenças no crescimento tumoral, peso, volume, apoptose, viabilidade celular, expressão de TUNEL e p53. Significância estatística: p<0.05. Resultados: MI-773 causa regressão do tumor em todos os modelos préclínicos de CAC. Doses diárias de 100mg/kg de MI-773 reduziram significativamente o volume tumoral quando comparado com doses intermediárias (10 ou 50 mg/kg MI-773) ou veículo controle, em todos os modelos de CAC. Alternativamente, camundongos transplantados com tumores UM-PDX-HACC-5 receberam doses semanais de MI-773 (200 mg/kg) e/ou cisplatina (5 mg/kg) por 30 dias, a fim de se avaliar o efeito da combinação das drogas. MI-773, como agente único, causou regressão tumoral, sendo mais efetivo do que a cisplatina. Cisplatina, por outro lado, mostrou limitado efeito terapêutico, estabilizando o crescimento tumoral. Notavelmente, a combinação MI-773 + cisplatina foi mais efetiva do que os agentes isoladamente, e não foi verificada retomada do tumor no período pósoperatório. Importantemente, os protocolos experimentais não comprometeram a saúde geral dos animais. Coletivamente, estes resultados in vivo demonstram que MI-773 atua como mediador na regressão tumoral de CAC e sensibiliza os tumores à cisplatina. A inibição terapêutica da interação MDM2-p53 ativa p53 e induz apoptose. MI-773 potentemente induz expressão de p53, seu alvo p21 e proteínas relacionadas à apoptose, como PUMA, BAX, Bcl-2 e Bcl-xL in vitro e in vivo. Análise do ciclo celular mostrou que a inibição terapêutica da interação MDM2-p53 por MI- 773 causa parada no ciclo celular no primeiro ponto de checagem (G1). Marcação por TUNEL revelou número significativamente maior de células em apoptose quando tumores de UM-PDX-HACC-5 foram tratados com MI-773 em comparação com controle (p<0.05) Utilizando o mesmo modelo de xenoenxerto, a técnica de imunohistoquímica mostrou que MI-773 não somente aumentou a porcentagem de células p53-positivas (p<0.001), como causou uma translocação parcial de p53 ao citoplasma. MI-773 reduz a fração de células-tronco tumorais (CTT) e previne recorrência do CAC. Tratamento com MI-773 como agente único ou combinado com cisplatina reduziu a fração de CTT (p<0.05). Notavelmente, nenhum animal tratado com regime neoadjuvante de MI-773 apresentou recorrência tumoral mesmo após 300 dias de acompanhamento. Em contraste, em 62,5% dos animais do grupo controle houve recorrência (p=0.0097). Conclusões: Em resumo, os estudos demonstram que a inibição terapêutica da interação MDM2-p53 com MI-773 é uma estratégia antitumoral eficaz, é capaz de sensibilizar tumores à cisplatina e previne recorrência neste modelo pré-clínico de CAC. Coletivamente, os dados sugerem que pacientes com carcinoma adenoide cístico podem ser beneficiados através de terapias-alvo contra MDM2. / Introduction: Adenoid cystic carcinoma (ACC) is one of the most common salivary gland malignancies for which no effective chemotherapy is available. An emerging concept in cancer therapy is to target specific tumor-related proteins. Murine double minute 2 (MDM2) is an important inhibitor of the tumor suppressor p53 and has been found overexpressed in ACC. Paper #1 aimed to evaluate the effect of a novel small molecule inhibitor of the MDM2-p53 interaction (MI-773) on ACC in vitro and in vivo. Paper #2 aimed to understand the role of combining MI-773 with cisplatin, and to evaluated ACC recurrence using a neoadjuvant regimen of MI-773. Material and Methods: 3 patient-derived xenograft (PDX) models (UM-PDX-HACC-5; ACCx6; ACCx9) and 5 low passage primary human ACC cells pools (UM-HACC-1, -2A, -2B, - 5, -6) were used for in vivo and in vitro experiments. Sulforhodamine B (SRB) assay was performed to evaluate the effect of experimental agents on ACC cell viability and to determine IC50 values. Western blots revealed the expression of p53, phosphop53, MDM2, p21, PUMA, BAX, Bcl-2 and Bcl-xL. Histological sections from UM-PDXHACC- 5 tumors were stained using immunohistochemistry and immunofluorescence techniques to determine p53 status. In situ TUNEL staining revealed the number of UM-PDX-HACC-5 cells undergoing apoptosis. Flow cytometry was carried out to determine the effect of therapy on the proportion of cancer stem cells (ALDHhighCD44high) and for cell cycle analysis. For in vivo studies, mice harboring UM-PDX-HACC5, ACCx6, or ACCx9 tumors were treated following specific therapeutic protocol (MI-773 – gavage; cisplatin – intraperitoneal injection; or vehicle control), as opportunely indicated. One-way ANOVA, followed by post-hoc tests (Tukey), Mann-Whitney U-test or Student’s t-test were used to determine significant differences in tumor growth, weight, volume, apoptosis levels, cell viability, TUNEL and p53 expression. Significance was determined at p<0.05. Results: MI-773 caused tumor regression in all ACC PDX models. Daily doses of 100 mg/kg MI- 773 significantly reduced tumor volume when compared to intermediate doses (10 or 50 mg/kg MI-773) or vehicle-treated controls in all ACC xenograft models. Alternatively, mice harboring UM-PDX-HACC-5 tumors received either weekly doses of MI-773 (200 mg/kg) and/or cisplatin (5 mg/kg) for 30 days, in order to evaluate the effect of this drug combination. MI-773 as single agent caused tumor regression, being more effective than single agent cisplatin. Cisplatin showed limited therapeutic response stabilizing tumor growth. Notably, combination of MI-773 with cisplatin was more effective than single agent therapies and no tumor rebound was observed during the follow up period. Importantly, experimental protocols did not compromise the overall health status of mice. Collectively, these in vivo results demonstrate that MI-773 mediates ACC tumor regression, and sensitizes ACC xenograft tumors to cisplatin. Therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction activates p53 and induces apoptosis. MI-773 potently induced the expression of p53, its downstream target p21 and apoptosis-related proteins PUMA, BAX, Bcl-2 and Bcl-xL in vitro and in vivo. Cell cycle analysis showed that therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction by MI-773 causes cell cycle arrest at the first checkpoint (G1). In situ TUNEL revealed a significant higher number of cells undergoing apoptosis in UMPDX- HACC-5 tumors treated with MI-773 compared to vehicle control (p<0.05). Using the same xenograft model, immunohistochemistry assay showed that MI-773 not only increased the percentage of p53-positive cells (p<0.001), but also caused a partial translocation of p53 to the cytoplasm. MI-773 reduces the fraction of cancer stem cells (CSC) and prevents recurrence in ACC. Treatment with MI-773 as single agent or combined with cisplatin significantly reduced the fraction of CSC (p<0.05). Notably, not a single animal treated with neoadjuvant MI-773 presented recurrence even after 300 days of follow-up. In contrast, 62,5% of mice that received vehicle control experienced tumor reappearance within this time period (p=0.0097). Conclusions: In summary, these studies demonstrate that therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction with MI-773 is an effective anti-tumor strategy that mediates tumor regression, sensitizes tumors to cisplatin and prevents recurrence in this pre-clinical model of ACC. Collectively, these data suggest that patients with adenoid cystic carcinoma might benefit from MDM2-targeted therapies.

Apesar da incidência relativamente baixa, as neoplasias de glândulas salivares (NGSs) constituem um grupo de doenças caracterizado pela notável heterogeneidade em sua apresentação clínica, histológica e comportamento biológico, abrigando um fator de extrema relevância a despeito de seu prognóstico: a ocorrência de metástases, considerada a principal intercorrência relacionada à mortalidade em pacientes oncológicos. Neste estudo, analisamos as características clínicas e histopatológicas de pacientes diagnosticados com metástases à distância de carcinomas de glândulas salivares tratados no A.C. Camargo Cancer Center, São Paulo, no período de 1970 a 2010. Investigamos alterações fenotípicas entre os tumores primários e tumores metastáticos de glândulas salivares, a partir do estudo da caracterização do padrão de expressão de citoqueratinas, procurando identificar a associação entre a expressão destes antígenos a fatores de risco, ou não, ao potencial metastático à distância e sua importância prognóstica. A casuística total compreendeu 43 pacientes diagnosticados com metástase à distância, com a média de idade de 42.5 anos sendo a glândula parótida o órgão primário mais acometido, e os pulmões o sítio metastático mais incidente. O tipo histológico mais comumente relacionado à metástase foi o carcinoma adenoide cístico. A análise imunoistoquímica da expressão de citoqueratinas fora realizada em 10 neoplasias primárias e 10 metastáticas, as quais revelaram um padrão fenotípico similar no tumor primário e no tumor metastático, apresentando a evidenciação majoritária de células luminais de estruturas ductais. A perda de expressão dos marcadores em áreas tumorais periféricas, adjacentes ao parênquima pulmonar, corrobora a predição de alteração do citoesqueleto das células neoplásicas, possivelmente promovendo uma maior capacidade de migração das células neoplásicas. / Salivary gland neoplasms consist of a notorious group of malignancies best known for its clinical features, biological behavior and histological heterogeneity. An important facto related to prognosis is distant metastasis (uncommon in salivary gland tumors). Cytokeratins (CK) are important differentiation markers frequently used for diagnosis processes. Its employment may be useful to identify metastatic disease. In this study, a retrospective evaluation was performed on patients undergoing treatment for metastatic salivary glands tumors between 1970 and 2010, from A.C. Camargo Cancer Center, São Paulo, Brazil. Demographic data and histopathological specimens were obtained from the medical records. Investigation of the expression of cytokeratins in primary and metastatic salivary gland neoplasms was performed and correlated with their phenotypical patterns. Forty three eligible patients were obtained from the database. Parotid gland represented the primary tumor site most frequently related to metastasis. Lung was the most common metastatic site. Adenoid cystic carcinoma was the histological type more frequently associated to metastatic disease. Immunohistochemistry analysis was performed in 10 primary salivary gland tumors and 10 metastatic salivary gland neoplasms. CK expression patterns were similar in both primary and metastatic neoplams, except for the tumor periphery in close contact with lung parenchyma. Cytokeratins were absent in the invasive front of metastatic lesions, and this may be related to an increased capacity of tumor cells migration and proliferation.

Orientador: Nereu Carlos Prestes / Banca: José Paes de almeida Nogueira Pinto / Banca: Lisiane de Almeida Martins / Resumo: Diante da importância do colostro e leite de égua na alimentação e aquisição de imunidade de potros recém nascidos e na sua utilização na dieta humana, o objetivo do estudo foi avaliar a composição, propriedades físico-químicas, perfil microbiológico e contagem de células somáticas (CCS) do colostro e leite de éguas na fase inicial da lactação. As amostras foram coletadas de 36 éguas em sete momentos: M1= momento do parto, M2= 12 horas, M3= 24 horas, M4= 36 horas, M5= 48 horas, M6= onze dias e M7= 15 dias após o parto. Houve queda nos teores de proteína, gordura, sólidos totais e sólidos desengordurados, e aumento dos teores de lactose durante os momentos estudados. Também houve variação nos valores de pH, índice crioscópico e acidez durante os momentos, principalmente entre amostras de colostro e leite de transição. Houve isolamento microbiológico em 5,55% das amostras cultivadas, das quais 28,57% eram Streptococcus não hemolítico, 28,57% Streptococcus α hemolítico, 21,43% Streptococcus equi, 14,29% Micrococcus spp. e 7,14% Bacillus spp. Nenhum animal apresentou mastite clínica. Maiores valores de CCS foram encontrados no M1 e M2, com diminuição significativa no M3, com valores inferiores a 100.000 células somáticas/mL a partir deste momento. Perante os resultados podemos constatar alterações na composição, qualidade físico-química e celularidade durante os 15 primeiros dias de lactação. Onze amostras foram positivas ao California Mastitis Test, sendo observadas no M1 (36,36%), M2 (27,27%), M3 (18,19%), M5 (9,09%) e M7 (9,09%). Bactérias do gênero Streptococcus foram as mais frequentes isoladas. Entretanto, é necessário cautela na utilização de alguns métodos de diagnóstico de mastite, já que não há padronização dos mesmos para a espécie equina / Abstract: Given the importance of colostrum and milk of the mare on feeding and acquisition of immunity of newborn foals and their use in the human diet, the aim of the study was to evaluate the composition, physicochemical properties, microbiological profile and somatic cell count (SCC) of colostrum and milk of mares in early lactation. Samples were collected from 36 mares at seven moments: M1 = moment of partum, M2 = 12 hours, M3 = 24 hours, M4 = 36 hours, M5 = 48 hours, M6 = 11 days and M7 = 15 days post-partum. It was observed decreased levels of protein, fat, total solids and solids non-fat, and increased levels of lactose during the evaluated moments. There was also variation in pH, cryoscopic index and acidity during the moments, especially between samples of colostrum and transitional milk. The microbiological isolation occurred in 5.55% of the cultured samples, of which, 28.57% was non-hemolytic Streptococcus, 28.57% α-hemolytic Streptococcus, 21.43% Streptococcus equi, 14.29% Micrococcus spp. and 7.14% Bacillus spp. No animals showed clinical mastitis. Higher SCC values were found in M1 and M2, with a significant decrease in M3, with values less than 100,000 somatic cells / mL from this moment. Given these results, changes in the composition, physicochemical quality and cellularity during the first 15 days of lactation were observed. Eleven samples were positive on California Mastitis Test, being observed in M1 (36.36%), M2 (27.27%), M3 (18.19%), M5 (9.09%) and M7 (9.09%). Bacteria of the genera Streptococcus were the most frequently isolated. However, caution is needed in the use of some methods for diagnosis of mastitis, because there is no standardization in the equine species / Mestre

Orientador: Ricardo De Oliveira Orsi / Banca: Simone Fernandes / Banca: Hélio Almeida Ricardo / Banca: Maria Luiza Poiatti / Banca: Sarita Bonagurio Gallo / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar se o nível de liberação de cortisol de ovelhas da raça Santa Inês influencia o seu desempenho e incidência de mastite. Foram utilizadas 49 ovelhas da raça Santa Inês, as quais foram submetidas a uma aplicação de ACTH exógeno (1ml/10 kg PV) para posteriormente serem divididas em 2 grupos de acordo com o nível de concentração plasmática de cortisol no pico da sua curva de liberação: AC (alto cortisol) e BC (baixo cortisol). Foram analisados o desempenho de ovelhas e cordeiros ao parto e à desmama, assim como o CMT, CCS, produção de leite, proteína e gordura do leite. Os dados foram analisados utilizando-se a análise de variância e teste de Tukey a 5% de significância. O grupo AC obteve maior média de cortisol plasmático (225,45 ± 52,08 vs 114,65 ± 36,11 ng/ml) do que o grupo BC, entretanto não houve efeito de nível de liberação de cortisol sobre as variáveis consideradas. Foi observado efeito de período (antes e após a desmama) para produção de leite (924,27 vs 232,19 ml) e proteína bruta (4,16 vs 5,79 %), respectivamente. Para CMT e CCS não foram encontradas diferenças. Concluiu-se que o nível de liberação de cortisol não influencia o desempenho nem a incidência de mastite das ovelhas da raça Santa Inês. / Abstract: The aim of this study at evaluating whether cortisol release level of Santa Ines ewes influences their performance and incidence of mastitis. It were used forty nine Santa Inês ewes, which were submitted to an application of exogenous ACTH (1ml/10 kg BW) for later be divided into 2 groups according to the level of plasma cortisol concentration at the peak of its release curve: AC (high cortisol) and BC (low cortisol). It were analyzed ewes and lambs performance for weight gain at lambing and weaning, as well as CMT, CCS, milk production, protein and fat. Data were analyzed using analysis of variance and Tukey test at 5% significance level. The AC group had higher mean plasma cortisol (225.45 ± 52.08 vs 114.65 ± 36.11 ng/ml) than the BC group, but there was no effect level of cortisol release on the variables considered. Effect was observed for period (before and after weaning) for milk production (924.27 vs 232.19 ml) and crude protein (4.16 vs 5.79%), respectively. For CMT and CCS, no differences were found. It was concluded that the level of cortisol release does not affect the performance or the incidence of mastitis of Santa Ines ewes. / Doutor

Orientador: Humberto Tonhati / Coorientador: Daniele Fernanda Jovino / Coorientador: Larissa Fernanda Simielli Fonseca Noronha / Banca: Marcia Cristina de Sena Oliveira / Banca: Rodrigo Pelicioni Savegnago / Resumo: A mastite é a principal doença que acomete os rebanhos leiteiros e promove grandes perdas na produção devido a alterações na composição do leite e prejuízos na saúde do animal, aumentando assim os custos de produção. Caracteriza-se pela resposta inflamatória da glândula mamária a agentes infecciosos, alterando sua fisiologia e metabolismo. Estudo de expressão gênica vem sendo empregado em vários organismos com a finalidade de identificar genes relacionados com características economicamente importantes como resistência a doenças. Com o objetivo de compreender melhor os mecanismos de resposta imune envolvidos no fenótipo de resistência/susceptibilidade à mastite, foi realizada a quantificação da expressão relativa dos genes do Fator Estimulador de Colônias de Granulócitos 3 (CSF3) e Lactoperoxidase (LPO), em leite de búfalas mestiças saudáveis e com mastite, por meio da técnica de PCR quantitativa em tempo real (qRT-PCR). Para isso, foi realizada a extração de RNA total, com Trizol, de células somáticas do leite de doze animais diagnosticados com mastite e de doze animais livres da infecção. Foram realizadas análises de qualidade e quantificação do RNA total e das contaminações por DNA genômico para garantir a integridade das amostras. A quantificação da expressão gênica foi realizada por meio do método do Delta Delta Ct. Os genes GAPH, HPRT1, EEF1A1 e RPLP0, foram selecionados na literatura, e testados como genes de referência. As análises referentes às quanti... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available / Mestre