O objetivo deste estudo foi avaliar a distribuição genotípica e mutações no genoma do vírus da hepatite B (VHB) em um grupo de pacientes co-infectados pelo VHB e vírus da imunodeficiência humana (HIV). Foram incluídos pacientes AgHBs +/HIV+ , atendidos em um ambulatório de referência para pacientes infectados pelo HIV, na cidade de São Paulo. Para a detecção dos marcadores sorológicos para infecção pelo VHB utilizou-se técnica de ELISA através de kits comerciais. A detecção do DNA-VHB foi realizada através de nested-PCR e sua quantificação foi realizada por COBAS AMPLICOR. De acordo com a literatura, a infecção pelo VHB no Brasil varia de 0,4 a 8,5%. Os genótipos de VHB, as mutações na região do core, BCP, pré-core e na região da polimerase foram determinados por seqüenciamento. Cinqüenta e nove pacientes foram incluídos neste estudo e cinqüenta e seis pacientes relatavam uso prévio de lamivudina ou tenofovir. A presença do DNA-VHB foi detectada em 22 pacientes AgHBs positivos. A identificação dos genótipos foi realizada em 16 pacientes e a distribuição dos genótipos do VHB foi: A (12-75%); G (2-13%), D (1-6%) e F (1-6%). Em 10 dos pacientes com viremia presente para DNA-VHB, foram observadas mutações na região da polimerase (rtL180M + rtM204V, rtV173L + rtL180M + rtM204V) e no gene do envelope (sI195M, sW196L, sI195M/sE164D). Mutações na região do BCP (A1762T, G1764A) e do pré-core (G1896A) foram identificados em quatro pacientes. Em conclusão, entre os pacientes analisados observou-se uma alta prevalência de mutações associadas a resistência à lamivudina e associadas a resistência a anti-HBs. O genótipo G, raramente descrito em nosso meio, foi também observado nesse grupo de pacientes. / The objective of this study was to evaluate the genotype distribution and genomic mutations of hepatitis B virus (HBV) among a group of HIVHBV co-infected patients from an AIDS outpatient clinic in São Paulo. HBV serological markers were detected by commercially available enzyme immunoassay kits. HBV DNA was detected by using an in-house nested PCR and quantified by COBAS AMPLICOR. HBV genotypes, basal core promoter (BCP) / pre-core / core region and surface / polymerase genes mutations were determined by sequencing. Among the 59 patients included in this study, 56 reported previous use of lamivudine or tenofovir. According to the literature HBV infection in Brazil varies from 0,4 to 8,5%. HBV DNA was detected in 16/22 patients and the genotypes distribution was A (n=12, 75%); G (n=2, 13%); D (n=1, 6%), and F (n=1, 6%). In 10 patients with viremia, lamivudine-resistance mutations in the polymerase gene (rtL180M + rtM204V, rtV173L + rtL180M + rtM204V) were found, accompanied by changes in the envelope gene (sI195M, sW196L, and sI195M/sE164D). Mutations in the BCP and pre-core regions were identified in 4 patients. In conclusion, genotype G, rarely seen in Brazil, was observed in this group of patients. A high prevalence of mutations associated with lamivudine-resistance accompanied by mutations associated with anti-HBs resistance was also found among these patients.

A hepatite C, causada pelo vírus da hepatite C (HCV), afeta milhões de pessoas no mundo. A transmissão do HCV é semelhante ao HIV, justificando a alta taxa de prevalência da coinfecção. Pacientes coinfectados HCV/HIV apresentam maior taxa de progressão da fibrose hepática e da mortalidade, em comparação aos pacientes monoinfectados com HCV. Assim, o estudo de genes e/ou moléculas que controlam a resposta imune é pertinente. No presente estudo, avaliamos o papel do antígeno leucocitário humano G (HLA-G), molécula com reconhecida atividade imunomoduladora, capaz de inibir a ativação das células T e a atividade citotóxica das células Natural Killers (NK) e linfócitos T CD8+, além de induzir a formação células T reguladoras. Nós investigamos 216 pacientes monoinfectados pelo HCV, 135 pacientes coinfectados HCV-HIV e 152 indivíduos não infectados. A variabilidade do gene HLA-G foi avaliada por sequenciamento de Sanger e a expressão hepática da molécula por imunoistoquímica. A expressão de HLA-G foi observada somente no tecido hepático dos pacientes, principalmente nos hepatócitos. O aumento de expressão de HLA-G foi associado com avanço da fibrose e da atividade necroinflamatória no fígado de ambos os grupos de pacientes. Idade igual ou superior a 40 anos e a cor de pele não-branca também foram associados com aumento da expressão hepática da molécula nos pacientes HCV. Outros fatores do hospedeiro analisados como gênero e genótipo do HCV não foram associados com o nível de expressão de HLA-G no fígado. A frequência do alelo HLA-G*01:01:01:01 estava aumentada nos pacientes HCV e do alelo G*01:05N diminuída nos pacientes coinfectados HCV-HIV, porém, não houveram associações significantes entre a variabilidade genética de HLA-G e a expressão hepática de HLA-G. O presente estudo contribui para a ampliar os conhecimentos acerca da participação da molécula HLA-G na hepatite C crônica, associado ou não com infecção pelo HIV. / Hepatitis C, caused by the hepatitis C virus (HCV), affects millions of people worldwide. The transmission of HCV is similar to HIV, which explains the high prevalence of coinfection. HCV-HIV coinfected patients have higher rate of liver fibrosis progression and mortality when compared to HCV monoinfected patients. Thus, the study of genes and/or molecules that control the immune response is relevant. In the present study, we evaluated the role of human leukocyte antigen G (HLA-G), a molecule known by its immunomodulatory activity, which is capable to inhibit T cell activation and cytotoxic activity of natural killer (NK) cells and CD8+ T cells, in addition to inducing the formation of regulatory T cells. We studied 216 HCV patients, 135 HIV-HCV coinfected patients and 152 uninfected individual. The variability of the HLA-G gene was evaluated by Sanger sequencing and the hepatic expression of the molecule by immunohistochemistry. The HLA-G expression was observed only in liver tissue of patients, mainly in hepatocytes. The increased HLA-G expression was associated with increased liver fibrosis and necroinflammatory activity in both groups of patients. The age greater than or equal to 40 years and the non-white skin color were also associated with increased hepatic expression of the molecule in the HCV patients. Other host factors analyzed as gender and HCV genotype were not associated with the level of HLA-G expression in the liver. The frequency of HLA-G*01:01:01:01 allele was increased in HCV patients and G*01:05N decreased in HCV-HIV coinfected patients, however, there was no significant association between the genetic variability of HLA-G and HLA-G liver expression. The present study contributes to expand the knowledge regarding the participation of HLA-G in chronic C hepatitis, associated or not with the HIV infection.

Resumo não disponível.

Introdução: Diabete Melito Pós-Transplante (DMPT) é considerado uma séria complicação do transplante de rim, podendo diminuir a sobrevida do enxerto e do paciente. O imunossupressor tacrolimo (TAC) pode aumentar o risco de desenvolvimento de DMPT. Objetivos: Estimar o risco de DMPT em pacientes tratados com TAC no Serviço de Transplante Renal da Irmandade da Santa Casa de Misericórdia de Porto Alegre, identificar os demais fatores de risco para o DMPT e suas conseqüências. Métodos: Foram analisados 413 pacientes sem diabetes prévia ao transplante, com 18 anos ou mais, tratados com TAC, ciclosporina (CsA) ou sirolimo (SIR), em uso de corticoterapia e com período de seguimento póstransplante maior de 6 meses. O estudo seguiu o modelo observacional–coorte retrospectivo. Os critérios da Associação Americana de Diabete foram utilizados para o diagnóstico de DMPT. Os dados foram coletados de prontuários. Resultados: Dos 413 pacientes analisados, 171(41,4%) receberam como imunossupressão inicial TAC, 221(53,5%) CsA e 21(5,1%) SIR. DMPT ocorreu em 20,6% dos pacientes da coorte (85 de 413). A mediana do tempo para o desenvolvimento de DMPT foi de 54 dias. A incidência cumulativa de DMPT foi de 24,6% e 17,2% para os grupos de tratamento TAC e CsA, respectivamente. Na análise por intenção de tratamento, o risco para o desenvolvimento de DMPT, ao comparar os grupos TAC vs. CsA foi de HR=1,563, (IC:95%=1,008–2,425), P=0,006. Pelo método de Kaplan-Meier, 78,9% dos pacientes em uso de TAC estavam livres de DMPT no mês 6 vs. 87,8% dos pacientes em uso de CsA (P= 0,044). Os demais fatores de risco independentes identificados foram: índice de massa corporal (IMC) pré-transplante (P<0,0001), idade do receptor (P<0,0001) e episódio de rejeição aguda (RA) (P=0,013). Não houve diferença estatística significativa para anti-HCV reagente do receptor. Em 3 anos, a sobrevida do enxerto, ao comparar os pacientes com diagnóstico de DMPT vs. ausência de DMPT foi de 85,5% e 93,3%, respectivamente (P=0,021) e a sobrevida do paciente foi de 88,9% e 96,7%, respectivamente (P=0,017). Conclusão: A incidência de DMPT está associada com o tipo de imunossupressão utilizada, idade do receptor, IMC pré-transplante e episódio de RA. DMPT é um importante fator de risco para perda do enxerto e mortalidade. Medidas para minimizar o risco dessa complicação devem ser tomadas, como a individualização da terapia imunossupressora. / Introduction: Post-transplant diabetes mellitus (PTDM) is considered a serious complication of kidney transplantation and may reduce the patient and graft survival. The immunosuppressive Tacrolimus (TAC) may increase the risk of developing PTDM. Purpose: To estimate the risk of PTDM in renal transplant recipients treated with TAC in our center, identify all risk factors for PTDM and its consequences. Methodology: We analyzed 413 patients without diabetes prior to transplantation, with age ≥ 18 years, who were treated with tacrolimus (TAC), cyclosporine (CyA) or sirolimus (SIR), under steroids therapy and with a follow-up post-transplant period more than 6 months. We performed a retrospective review – cohort study. PTDM was diagnosed according to American Diabetes Association guidelines. Data were collected from medical records. Results: We examined 413 renal allograft recipients, these, 171 (41.4%) received initial immunosuppresion with TAC, 221 (53.5%) CyA and 21 (5.1%) SIR. PTDM occurred in 20.6% of patients in the cohort (85 of 413). The median time to the development of PTDM was 54 days post transplant. The cumulative incidence of PTDM was 24.6% and 17.2% for groups TAC and CyA treatment, respectively. In the analysis by intention to treat, the proportion of patients receiving TAC who developed PTDM was significantly higher than patients receiving CyA (HR=1,563, (CI:95%=1,008–2,425), P=0,006. The Kaplan-Meier method showed that 78,9% patients taking TAC were free of PTDM at six months compared to 87,8% of patients taking CsA (P= 0.044). The other independent risk factors identified were: body mass index (BMI) (P<0,0001), recipient age (P<0,0001) and acute rejections episodes (AR) (P=0,013). There was no statistically significant difference for patients with hepatitis C. Three years actuarial graft survival was 85,5% in patients with PTDM compared with 93,3% for those without diabetes (P=0,021) and patient survival was 88,9% e 96,7%, respectively (P=0,017). Conclusions: The incidence of PTDM is associated with TAC use, the recipient age, BMI and acute rejections episodes. PTDM is an important risk factor for graft loss and mortality. Measures to minimize the risk of this complication should be taken, such as the individualization of immunosuppresive therapy.

INTRODUÇÃO: Foi recentemente sugerido que a suscetibilidade à fibrose hepática, induzida pelo HCV, está relacionada a genes que regulam a apoptose. OBJETIVOS: Este trabalho visa elucidar a possível interação entre apoptose, inflamação e fibrose em pacientes com hepatite crônica C (HCC). MATERIAL E MÉTODOS: Pacientes com HCC, monoinfectados, com idade entre 18 a 60 anos, foram incluídos e submetidos a exames clínico e histopatológico. Aqueles com insuficiência renal crônica, neoplasias malignas, abuso de álcool, gravidez e/ou uso de imunossupressores foram excluídos. Foram determinados o índice de massa corporal, glicose, insulina, HOMA-IR, perfil lipídico, fibrose (METAVIR), níveis séricos de CK-18 (M30-Apoptosense, ELISA - Lausen, Switzerland), Fas, Fas-L, I-CAM, V-CAM, MIF, PAI (HSEP-63k, Milliplex, Millipore, Copenhagen, Denmark). RESULTADOS: Cinquenta e cinco pacientes foram incluídos, 23 deles eram virgens de tratamento. Dos pacientes que receberam tratamento antiviral, 15 obtiveram resposta virológica sustentada (RVS) e 17 foram não respondedores (NR). A inflamação, avaliada pelo sVCAM foi diretamente associada à fibrose avançada (p = 0,009). Além disso, níveis de apoptose mensurados pelo sFas-L e inflamação mensurados através do sVCAM foram mais elevados no grupo RVS em relação aos virgens de tratamento (p = 0,006 e 0,019, respectivamente). sVCAM correlacionou-se tanto com o sFas-L (rs = 0,778, p < 0,001) quanto com o MIF (rs = 0,621, p < 0,001). MIF e sFas-L também apresentaram correlação positiva (rs = 0,526, p = 0,001). CK-18 não diferiu entre os grupos. CONCLUSÃO: Fibrose avançada teve uma correlação positiva com a inflamação, mensurada pelo sVCAM, mas não foi associada a marcadores de apoptose. Os níveis de apoptose via sFas-L e inflamação via sVCAM evidenciaram-se maiores em pacientes que eliminaram o vírus quando comparados a pacientes não tratados. MIF também revelou tendência a ter níveis mais elevados naqueles com fibrose avançada. / AIMS: HCV-related liver fibrosis was recently suggested to be linked to genes that regulate apoptosis. Our study aims to elucidate the possible crosstalk between apoptosis, inflammation and fibrosis in patients with HCV. METHODS: HCV monoinfected patients, aging from 18 to 60 years old were included and underwent clinical pathological examination. Those with chronic renal failure, malignancies, alcohol abuse, pregnancy and/or taking immunosuppressant agents, were excluded. Body mass index, glucose, insulin, HOMA-IR, lipid profile, and fibrosis (METAVIR) were determined as well as serum levels of CK-18 (M30-Apoptosense, ELISA - Lausen, Switzerland), Fas, Fas-L, I-CAM, V-CAM, MIF, and PAI (HSEP-63k, Milliplex, Millipore, Copenhagen, Denmark). RESULTS: Fifty-five patients were included, 23 of them naïve. From the antiviral-experienced patients, 15 had sustained virological response (SVR) and 17 were non-responders (NR). Inflammation as assessed by sVCAM was directly associated to advanced fibrosis (p=0.009). As well the levels of apoptosis via sFas-L and inflammation via sVCAM both were increased in SVR group in comparison to naïve (p=0.006 and 0.019, respectively). sVCAM correlated both with sFas-L (rs=0.778, p < 0.001) and MIF (rs = 0.621, p < 0.001). MIF and sFas-L also displayed a correlation (rs=0.526, p=0.001). CK-18 did not differ among the groups. CONCLUSION: Advanced fibrosis had a positive correlation with inflammation by sVCAM, but was not associated with apoptosis markers, while levels of apoptosis via sFas-L and inflammation via sVCAM were increased in patients who cleared the virus when compared to naïves. MIF also showed a tendency to have higher levels those with advanced fibrosis.

O objetivo do presente estudo foi verificar o grau de resistência insulínica (RI) em pacientes infectados com o vírus da hepatite C (VHC) genótipo 1 versus genótipo 3. Foi incluído um total de 44 pacientes com hepatite crônica C, sendo 23 pacientes infectados com genótipo 1 e 21 pacientes infectados com genótipo 3. Nenhum paciente incluído tinha fatores de risco para Síndrome Metabólica e não foram submetidos a tratamento antiviral prévio. Trinta pacientes eram homens (68%). A média de idade em anos na amostra global foi de 47,5±9,1. Quanto ao genótipo do VCH, 23 pacientes (52%) tinham genótipo 1 e 21 (48%) genótipo 3. O grau de esteatose hepática (EH) entre 5% e 66% foi encontrado em 35 dos 44 pacientes. Não houve diferença significativa entre os genótipos 1 e 3 do VHC. Quanto aos níveis de colesterol total, colesterol HDL, colesterol LDL e as transaminases, não houve diferenças significativas entres os genótipos em estudo. A média do Índice de Massa Corporal (IMC) na amostra global foi de 25±1,8. A prevalência de resistência insulínica, medida pelo teste de HOMA (Modelo de avaliação de homeostase), foi verificada em 27 pacientes (61%). A média do HOMA entre os genótipos não atingiu diferença significativa. Fibrose moderada e severa foi encontrada em 14 (38%) dos 37 pacientes com esteatose hepática e em apenas 2 (27%) dos 7 sem esteatose hepática. A correlação entre resistência insulínica e fibrose hepática na população estudada foi estatisticamente significativa (P<0,001). Na análise de nossos dados, portanto, encontramos Resistência Insulínica em 61% dos 44 pacientes com hepatite crônica C sem fatores de risco para Doença Hepática Gordurosa Não Alcoólica (DHGNA). O grau de RI em pacientes, infectados com genótipo 1 versus genótipo 3 do VHC não foi estatisticamente diferente, tanto no que diz respeito à prevalência (65% versus 57%, respectivamente) quanto à magnitude (2,6 verus 2,8, respectivamente). Quanto à relação entre RI e EH nesses pacientes, verificou-se correlação positiva, havendo RI em 68% dos pacientes com EH versus 29% dos sem EH, sem atingir, no entanto, diferença estatisticamente significativa. Ao analisar a relação entre RI e fibrose hepática, houve diferença estatisticamente significativa em nossa casuística, sendo encontrada maior prevalência de fibrose intensa (F2 e F3 na classificação Metavir) nos 27 pacientes com RI em comparação com os 17 pacientes sem RI (56% versus 6%, respectivamente; P<0,01). / The main goal of this research was to verify the insulin resistance (IR) in patients infected with HCV genotype 1 versus genotype 3. A total of 44 patients with chronic hepatitis C were included in the study, 23 patients infected with genotype 1 and 21 patients infected with genotype 3. None of the patients had any risk for the Metabolic Syndrome and had not been submitted to any antiviral therapy before. 30 patients were males (68%). The age average was 47, 5 ± 9,1. About the VHC genotype, 23 (52%) had the genotype 1 and 21 (48%) had genotype 3. Liver steatosis grade (LS) was found in the range of 5% and 66% in 35 patients. There was no significant difference between the genotypes. About the total cholesterol levels, HDL-C and LDL-C, as well as the serum transaminases, there was no significant difference between the genotypes. The average of the body mass was 25 ± 1,8. The prevalence of insulin resistance (IR), measured by HOMA-IR test was verified in 27 patients (61%). The average of the HOMA-IR test between the genotypes was not statistically significant. Moderate and severe liver fibrosis was found in 14 patients (38%) out of the 37 patients with liver steatosis and only in 2 patients (29%) out of the 7 patients without steatosis. The relationship between insulin resistance and liver fibrosis in our sample was statistically significant (p<0,001). Analyzing our data, we found insulin resistance in 61% out of 44 patients with chronic hepatitis C without risks factors for non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). The amount of the insulin resistance between patients infected with genotype 1 versus genotype 3 of HCV was not statistically different both in the prevalence (65% versus 57% respectively) and in the magnitude (2,6 versus 2,8, respectively). About the relationship between IR and LS in our patients, there was a positive relationship, with IR in 68% of the patients with LS versus 29% of the patients without LS, but without a statistically significant difference. However, the relationship between IR and hepatic fibrosis showed a statistically significant difference, with a greater prevalence of intense fibrosis (F2 and F3 in METAVIR classification) in the 27 patients with IR compared to the 17 patients without IR (56% versus 6%, respectively - p< 0,01).

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-06-28T12:52:01Z No. of bitstreams: 1 Rodrigo Feliciano do Carmo.pdf: 3731491 bytes, checksum: 86d8eb6b218e10bf0ba32ef83c2d9050 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-28T12:52:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigo Feliciano do Carmo.pdf: 3731491 bytes, checksum: 86d8eb6b218e10bf0ba32ef83c2d9050 (MD5) Previous issue date: 2016-05-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The hepatitis C virus (HCV) represents a worldwide health problem, with over 170 million people infected all over the world, corresponding to almost 3% of the world’s population. Approximately 70% of the individuals will develop the chronic form of the disease; 25% will develop cirrhosis and about 5% among the cirrhotic will develop hepatocellular carcinoma (HCC). The reason why some individuals evolve more rapidly to the severe forms is still unknown, however, several studies have pointed the influence of genetic factors of the host which are involved with the disease progression in the liver. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) are the most common type of genetic variation in humans, and they might alter serum levels or even the function of important proteins. Pentraxin 3 (PTX3) is an acute phase protein that is able to bind the surface of microorganisms and to regulate the complement system. Studies have demonstrated that PTX3 may influence positively the progression of various types of cancer. Additionally, some studies have demonstrated an important influence of a chromosomic region (6q23), associated with the progression of liver fibrosis in schistosomiasis. The IL22RA2 gene is located in this region e may be associated with the severity of fibrosis in HCV, once this gene codifies an inhibitor of an important cytokine correlated with the repair of liver damage, the interleukin-22 (IL-22). Thus, the aim of the present study was to associate the severity of the liver disease caused by HCV with SNPs in the PTX3 and IL22RA2 genes, as well as to identify new SNPs through exome sequencing approach. Patients with chronic hepatitis C were recruited and attended at the service of Gastrohepatology of the Oswaldo Cruz University Hospital/Liver Institute of Pernambuco (Recife, Pernambuco, Brazil) between August 2010 and December 2014. The detection of SNPs was performed by real time PCR using TaqMan probes (Thermo Fisher Scientific). Regarding the exome sequencing, it was used the IonTorrent platform (Thermo Fisher Scientific). A total of three studies were performed, the first study identified two polymorphisms (rs6570136 and rs2064501) on the IL22RA2 gene, associated with the severity of hepatic fibrosis, in a total of 532 patients. It was observed a higher frequency of genotypes GG/GA of rs6570136 and TT/TC of rs2064501 in the group of individuals with severe fibrosis (p=0,007 OR 1,7 and p=0,004 OR 2,4). On the second study, with a total of 524 patients, it was possible to notice a significant association of the genotype AA in the PTX3 gene (rs2305619) with risk of HCC (p=0.024 OR 1,94). Finally, the exome sequencing was carried in 9 HCC cases and 10 cirrhotic controls, where it was possible to identify two genes (PRSS58 and SOCS5), which are possibly associated with the development of HCC. Therefore, through this study we have demonstrated, for the first time, the association of SNPs in IL22RA2, PTX3, PRSS58 and SOCS5 with the progression of the hepatic disease caused by HCV. Other studies are needed in order to evaluate the use of these SNPs as progression markers of hepatitis C; as well as to evaluate the possible use of these molecules as therapeutic targets. / O vírus da hepatite C (HCV) representa um problema de saúde mundial, acometendo mais de 170 milhões de pessoas em todo o mundo, o que corresponde a cerca de 3% da população mundial. Aproximadamente 70% dos indivíduos irão desenvolver a forma crônica da doença, 25% desenvolverão cirrose e cerca de 5% dos cirróticos desenvolverão carcinoma hepatocelular (HCC). O motivo pelo qual alguns indivíduos evoluem mais rapidamente para formas mais graves ainda é desconhecido, entretanto diversos estudos têm apontado a influência de fatores genéticos do hospedeiro envolvidos com a progressão da doença no fígado. Polimorfismos de único nucleotídeo (SNPs) são o tipo de variação genética mais comum em humanos, e podem influenciar os níveis séricos ou até mesmo a função de proteínas importantes. A pentraxina 3 (PTX3) é uma proteína de fase aguda capaz de se ligar a microrganismos e de regular o sistema complemento. Estudos têm demonstrado que a PTX3 pode influenciar positivamente a progressão de vários tipos de câncer. Além disso, alguns estudos têm demonstrado uma grande influência de uma região cromossômica (6q23) associada com a progressão da fibrose hepática na esquistossomose. O gene IL22RA2 está localizado nesta região e poderia estar associado com a gravidade da fibrose no HCV, uma vez que este gene codifica um inibidor de uma importante citocina envolvida com a reparação de danos hepáticos, a interleucina-22 (IL-22). Portanto, o objetivo do presente trabalho foi associar a gravidade da doença hepática causada pelo HCV, com SNPs nos genes PTX3 e IL22RA2, assim como identificar novos SNPs através da técnica de sequenciamento de exoma. Foram recrutados pacientes com hepatite C crônica, atendidos no serviço de Gastrohepatologia do Hospital Universitário Oswaldo Cruz/Instituto do Fígado de Pernambuco (Recife-PE, Brasil) entre agosto de 2010 e dezembro de 2014. A detecção dos SNPs foi realizada por PCR em tempo real através de sondas TaqMan®. Para o sequenciamento do exoma, foi utilizada a plataforma IonTorrent®. Um total de três estudos foram realizados, o primeiro estudo identificou dois polimorfismos (rs6570136 e rs2064501) no gene IL22RA2, associados com a gravidade da fibrose hepática, em um total de 532 pacientes. Foi observada uma maior frequência dos genótipos GG/GA do rs6570136 e TT/TC do rs2064501 no grupo de indivíduos com fibrose grave (p=0,007 OR 1,7 e p=0,004 OR 2,4). No segundo estudo, com um total de 524 pacientes, foi possível observar uma associação significativa do genótipo AA no gene PTX3 (rs2305619) com o risco de HCC (p=0.024 OR 1,94). Por fim, foi realizado o sequenciamento do exoma de 9 casos com HCC e 10 controles cirróticos, onde foi possível identificar dois genes (PRSS58 e SOCS5) possivelmente associados com o desenvolvimento de HCC. Portanto, através do presente estudo, foi demonstrado pela primeira vez a associação de SNPs no IL22RA2, PTX3, PRSS58 e SOCS5 com a progressão da doença hepática causada pelo HCV. Outros estudos são necessários para avaliar o uso desses SNPs como marcadores de progressão da hepatite C, bem como avaliar o possível uso dessas moléculas como alvos terapêuticos.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-08-01T15:38:22Z No. of bitstreams: 1 Kennya Genne Santos Lopes.pdf: 1276864 bytes, checksum: c83d62379a340a792ff753904d739f48 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-01T15:38:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kennya Genne Santos Lopes.pdf: 1276864 bytes, checksum: c83d62379a340a792ff753904d739f48 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Hepatitis E is an acute liver disease caused by hepatitis E virus (HEV). This virus is a member of family Hepeviridae, whose genome consists of a single-stranded RNA surrounded by a non-enveloped capsid. The HEV has four genotypes (genotypes 1-4), the genotypes 1 and 2, are found only found in humans, and genotypes 3 and 4 are considered as zoonotic. The pigs appear to be the main animal reservoir for zoonotic genotypes, although the virus has been identified in other animals. The concern of public health agencies with this infection has increased considerably due to its zoonotic potential. To evaluate the presence of HEV in confined pigs and wild boars, the enzyme immunoassay (ELISA) was used to identify anti-HEV IgG antibody in these animals. Among all samples in the present study, wild boar samples were negative (100%) for the presence of this antibody, whereas 50% of domestic pigs were positive. Although diagnostic methods have been developed and applied in the investigation of swine HEV infection, the available kits are imported and expensive to be use in research and routine laboratories. To contribute for the development of tools for diagnosis, this work also performed the cloning and expression methods in Escherichia coli bacteria system of a segment gene encoding the capsid HEV. The protein was expressed and purified although in small quantities. This work is the first serologic report about the HEV in wild boars from Brazil. These results confirm the circulation of HEV in Brazilian herds of domestic pigs and demostrates that the virus is not circulating among wild boars. This study shows that the risk of zoonotic transmission exist. Also, contributes to the HEV epidemiology studies in Brazil and to the development of biotechnological tools in the HEV infection. / A hepatite E é uma doença aguda do fígado, causada pelo vírus da hepatite E (HEV). Este vírus é membro da família Hepeviridae, cujo genoma consiste de uma fita simples de RNA positivo envolto por um capsídeo não envelopado. O HEV possui quatro genótipos (genótipos 1-4), sendo os genótipos 1 e 2 encontrados apenas em humanos, e os genótipos 3 e 4 considerados zoonóticos. Os suínos parecem ser o principal reservatório animal para os genótipos zoonóticos, embora o vírus tenha sido identificado também em outros animais. Devido ao seu potencial zoonótico, a preocupação dos órgãos de saúde pública tem aumentado com esta infecção. Objetivando avaliar a presença do HEV em suínos confinados e javalis livres, realizou-se ensaio imunoenzimático (ELISA) para verificação da presença de IgG anti-HEV nesses animais. Do total de amostras analisadas, 100% das amostras de javalis foram negativas para a presença deste anticorpo, enquanto que 50% das amostras de suínos domésticos foram positivas. Embora métodos de diagnósticos tenham sido desenvolvidos e aplicados na investigação da infecção pelo HEV suíno, os kits disponíveis são importados e de alto custo para serem aplicados em pesquisa e na rotina de laboratórios. Objetivando contribuir no desenvolvimento de ferramentas para o uso em diagnóstico da hepatite E suína, este trabalho também realizou a clonagem e expressão em Escherichia coli de um segmento do gene que codifica o capsídeo do HEV. A proteína foi expressa e purificada, embora em pequena quantidade. Esse trabalho é a primeira análise sorológica da presença do HEV envolvendo suínos selvagens no Brasil. Os resultados obtidos confirmam a circulação desse vírus em rebanhos brasileiros, bem como a ausência do mesmo na população de javalis selvagens estudada. Assim, esse trabalho alerta para o risco de transmissão zoonótica, contribui para estudos de epidemiologia do HEV no Brasil, e no desenvolvimento de ferramentas para fins biotecnológicos no estudo da infecção pelo HEV.

INTRODUCTION: The virus of hepatitis B was classified in eight genotypes that vary with geographic distribution, presenting different clinical manifestations and responses to anti-viral treatment. PURPOSES: This work intends to determine the prevalence of genotypes in Sergipe Brasil and evaluate them according to clinical and histopathological findings. METHODOLOGY: In a transversal search, were evaluated 97 patients, all of them AgHBs chronic porters, with traces of viral replication. From those patients, we got DNA s amplification in 43 samples, that formed the core to genotypical determination. Those were also evaluated on AgHBe positivity, viral load (CV) quantification, aminotransferases (ALT) and histological data. RESULTS: The genotypes A and F, were identified, with 35/43 (81.4%) of genotype A. Twenty Five from 43 patients (58.1%) presented abnormal ALT level, AgHBe negative (23/43 53.5%) and CV below 10.000 copies/ml (20/32 62.5%). In the patients presenting genotype A, 20/32 (62.5%) presented CV below 10,000 copies/ml, but in those with the genotype F, 5/7 (71.4%) presented CV above 10,000 copies/ml (p=0,101). There was no statistic difference between viral genotype and histological findings. CONCLUSION: In Sergipe, the genotypes A and F were found, but predominates the genotype A. Important differences were not found among the genotypes relatively to clinical and laboratorial findings. / INTRODUÇÃO: O vírus da hepatite B foi classificado em oito genótipos que variam de acordo com a distribuição geográfica, apresentando diferentes manifestações clínicas e resposta ao tratamento anti-viral. OBJETIVOS: O estudo visa determinar a prevalência dos genótipos em Sergipe-Brasil, e avaliá-los de acordo com achados clínicos e histopatológicos. METODOLOGIA: Em estudo transversal, foram avaliados 97 pacientes portadores crônicos do AgHBs com sinais de replicação viral. Destes, conseguiu-se amplificação do DNA em 43 amostras, as quais constituíram a casuística para realização de genotipagem. Foram, também, avaliados quanto à positividade do AgHBe, quantificação da carga viral (CV), aminotranferases (ALT) e avaliação histológica. RESULTADOS: Foram identificados os genótipos A e F, sendo 35/43 (81,4%) do genótipo A. Vinte e cinco/43 pacientes (58,1%) apresentaram ALT normais, AgHBe negativo (23/43, 53,5%) e CV inferior a 10.000 cópiasl/ml (20/32 (62,5%). Nos pacientes com genótipo A, 20/32 (62,5%) apresentaram CV inferior a 10.000 cópias/ml enquanto o genótipo F, 5/7 (71,4%) apresentaram CV superior a 10.000 cópias/ml (p=0,101). Não houve diferença estatística entre genótipo viral e características histológicas. CONCLUSÃO: Em Sergipe, foram descritos os genótipos A e F com predomínio do genótipo A. Não foram encontradas diferenças significantes entre os genótipos em relação às manifestações clínico-laboratoriais.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-06-14T14:38:48Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO RODRIGO JOSE VIDERES CORDEIRO DE BRITO. PERFIL EPIDEMIOLOGICO.pdf: 514696 bytes, checksum: 811c40da5b89d6993c34ce5a1c927604 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-14T14:38:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO RODRIGO JOSE VIDERES CORDEIRO DE BRITO. PERFIL EPIDEMIOLOGICO.pdf: 514696 bytes, checksum: 811c40da5b89d6993c34ce5a1c927604 (MD5) Previous issue date: 2009-08-28 / Esta dissertação de mestrado é composta por uma revisão bibliográfica sobre as formas de transmissão do HCV e um artigo original, a ser submetido a publicação, que versa sobre os fatores de risco de uma subpopulação do Norte da Bahia com anti-HCV positivo. Para a revisão realizou-se busca nas bases de dados eletrônicas LILACS, MEDLINE, COCHRANE e SciELO, considerando o período de janeiro de 1990 até março de 2009. Os seguintes descritores foram utilizados: (1) hepatite C crônica; (2) Transmissão do HCV (3) Transmissão vertical do HCV (4) Transmissão sexual do HCV. Além disso, as referências dos artigos encontrados também foram revisadas. O artigo original é um estudo descritivo, do tipo série de casos, sem grupo controle, realizado entre outubro e dezembro de 2008, cujo título é: Fatores de risco para infecção pelo vírus da hepatite C em Centro de Referência no Norte da Bahia. Foram avaliados consecutivamente 147 pacientes com infecção pelo HCV, maiores de 18 anos, matriculados no Centro de Informação em doenças sexualmente transmissíveis DSTs, HIV e AIDS (CIDHA) do Município de Juazeiro, situado no Norte do Estado da Bahia. Destes, 99 (67,3%) foram selecionados por residirem na região Norte da Bahia por um período mínimo de 20 anos. Testes de amplificação do RNA-HCV e um questionário foram realizados com o objetivo de descrever os principais fatores de riscos para a infecção pelo vírus da hepatite C (VHC) e a características sociodemográficas dos pacientes e características virais da infecção. O sexo masculino foi predominante (82,8%) e os principais fatores de risco para transmissão foram uso de seringa descartável de vidro (85,9%), mais de 5 parceiros sexuais (81,8%), internações (65,7%), passado história de doenças sexualmente transmissíveis (60,6%), uso de Gluconergan ® (55,6%), cirurgias anteriores (53,5%), o consumo de drogas ilícitas (24,2%), transfusões sanguíneas (18,2%). A incidência de genótipos virais (56,6%) para o genótipo 1, (1%) para o genótipo 2 e (38,3%) ao genótipo 3 .. O consumo de Gluconergan® foi associado ao sexo masculino (p <0,001), o consumo de etanol (p = 0,001), história de doença sexualmente transmissível (p <0,001). Os dados revelam um importante comportamento sociocultural complexo caracterizado pelo uso de álcool e de suplementos vitamínicos endovenosos, semelhante aos usuários de drogas ilícitas, com a partilha de seringas e da utilização de técnicas inadequadas para a limpeza. / This master's thesis consists of a literature review on ways of transmission of HCV and an original article which is about the risk factors of a subpopulation of northern Bahia with anti-HCV positive. For a review of literature was carried out search in electronic databases LILACS, MEDLINE, Cochrane Library and SciELO, considering the period from January 1990 until March 2009. The following descriptors were used: (1) chronic hepatitis C, (2) Transmission of HCV (3) Vertical transmission of HCV (4) Sexual transmission of Moreover, the references of articles found were also reviewed. The original article is a descriptive study, the type of case series without control group, conducted between October and December 2008, whose title is: Risk factors for infection with hepatitis C virus in the Reference Center in northern Bahia. We evaluated 147 consecutive patients with HCV infection, over 18, enrolled in the Center for Information on sexually transmitted diseases STDs, HIV and AIDS (CIDHA) of the city of Juazeiro, located in the northern state of Bahia. Of these, 99 (67.3%) were selected to reside in the northern region of Bahia for a minimum period of 20 years. Amplification tests for HCV-RNA and a questionnaire were carried out to describe the main risk factors for infection by the hepatitis C virus (HCV) and sociodemographic characteristics of patients and characteristics of viral infection. Male gender was predominant (82.8%) and the main risk factors for transmission were use of disposable glass syringe (85.9%), more than 5 sexual partners (81.8%), hospitalizations 65.7 %), past history of sexually transmitted diseases (60.6%), use of Gluconergan ® 55.6%), previous surgeries (53.5%), illicit drug use (24.2%), blood transfusions 18.2%)The incidence of viral genotypes (56.6%) for genotype 1, (1%) for genotype 2 and 38.3%) to genotype 3 . The consumption of Gluconergan ® was associated with male gender (p <0.001), consumption of ethanol (p = 0.001) and history of sexually transmitted disease (p <0.001). The data reveal an important sociocultural complex behavior characterized by the use of alcohol and intravenous vitamin supplements, similar to users of illicit drugs, with the sharing of syringes and use of inappropriate techniques for cleaning.