Introdução: Durante as últimas décadas, a utilização de métodos moleculares como Hibridizacão in situ por fluorescência (FISH) e Hibridização Genômica Comparativa (array-CGH) mudou dramaticamente a perspectiva em relação à detecção de rearranjos genômicos submicroscópicos. O número de doenças identificadas como causada por microdeleções/microduplicações cromossômicas aumentou rapidamente, trazendo um papel crucial para a citogenética no diagnóstico destas condições. Objetivo: O objetivo deste estudo foi identificar e caracterizar microdeleções cromossômicas associadas a síndromes de malformações em um laboratório de citogenética de referência de um hospital público do sul do Brasil. Métodos: Estudo retrospectivo e prospectivo, em uma série consecutiva de amostras. O estudo foi baseado em registros hospitalares e laboratoriais de amostras de uma coorte de pacientes com suspeita clínica de microdeleção cromossômica. Foram selecionadas amostras de indivíduos em que o diagnóstico clínico proposto incluia uma suspeita de rearranjo nos cromossomos 4p16.3, 5p15.2, 5q35, 7q11.23, 8q24.12, 15q11-q12, 16p13.3, 17p13.3, 17p11. 2,2 e 22q11 que foram analisados por hibridização in situ por fluorescência (FISH). Em 11 amostras com microdeleções, hibridização genômica comparativa (array-CGH) foi realizada. Resultados: Um total de 504 amostras foram avaliadas, sendo as suspeitas mais comuns a deleção 22q11.2 (29,5%), a síndrome de Prader-Willi (21,6%), a síndrome de Williams-Beuren (15%) e da síndrome de Angelman (13 %). Em 120 deles (23,8%) desequilíbrios cromossómicas relacionadas com o diagnóstico clínico foram encontrados. A del7q11.23 foi a alteração mais frequente (8,5%) detectada, seguida por del22q11.2 (5,3%) e del15q11-q12 (4,5%). Conclusões: Nossos achados reforçam à estratégia de que um teste de citogenética molecular sensível associada com uma avaliação clínico qualificado são cruciais para a detecção e caracterização precisa de deleções cromossômicas submicroscópicas. Além disso, nosso estudo enfatiza a necessidade de educação continuada para o desenvolvimento e utilização de novas tecnologias para o diagnóstico citogenético, as quais, em nossa experiência, puderam ser introduzidas com sucesso em um hospital público do sul do Brasil. / Background: During the past decades, the widespread use of FISH and microarray-based technologies dramatically changed our perspective regarding detection of submicroscopic genomic rearrangements. The number of diseases identified as caused by chromosomal microdeletions/microduplications increased quickly, bringing a new and crucial role for cytogenetics in the diagnosis of these conditions. Objective: The purpose of this study was to identify and chraracterize chromosomal microdeletions associated with malformation syndromes in a reference cytogenetics laboratory from a public hospital of Southern Brazil. Methods: Using retrospective and prospective approaches, we evaluated a consecutive series of samples. The study was based in hospital and laboratorial records of samples from a cohort of subjects with clinical suspicion of a chromosomal microdeletion. We selected samples from subjects in whom a clinical diagnosis was proposed, which included deletion of chromosomes 4p16.3, 5p15.2, 5q35, 7q11.23, 8q24.12, 15q11-q12, 16p13.3, 17p13.3, 17p11.2,2 and 22q11 identified by fluorescence in situ hybridization (FISH) analysis. In 11 samples with microdeletions, array-based comparative genomic hybridization (array-CGH) was performed. Results: A total of 504 samples were evaluated, being the most common suspicions the 22q11.2 deletion (29.5%), the Prader-Willi syndrome (21.6%), the Williams-Beuren syndrome (15%) and the Angelman syndrome (13%). In 120 of them (23.8%) chromosomal imbalances related to the clinical diagnosis were found. The deletion 7q11.23 was the most frequently finding (8.5%), followed by del22q11.2 (5.3%) and del15q11-q12 (4.5%). Conclusions: Our findings provide support to the idea that a sensitive molecular cytogenetic test associated with a qualified clinical evaluation are crucial for the detection and precise characterization of submiscroscopic chromosome deletions. Additionally, our study emphasizes the need of continuing 6 education for the improvement of the cytogenetic diagnosis technology, which was successfully introduced in a public hospital of Southern Brazil.

Introdução: Durante as últimas décadas, a utilização de métodos moleculares como Hibridizacão in situ por fluorescência (FISH) e Hibridização Genômica Comparativa (array-CGH) mudou dramaticamente a perspectiva em relação à detecção de rearranjos genômicos submicroscópicos. O número de doenças identificadas como causada por microdeleções/microduplicações cromossômicas aumentou rapidamente, trazendo um papel crucial para a citogenética no diagnóstico destas condições. Objetivo: O objetivo deste estudo foi identificar e caracterizar microdeleções cromossômicas associadas a síndromes de malformações em um laboratório de citogenética de referência de um hospital público do sul do Brasil. Métodos: Estudo retrospectivo e prospectivo, em uma série consecutiva de amostras. O estudo foi baseado em registros hospitalares e laboratoriais de amostras de uma coorte de pacientes com suspeita clínica de microdeleção cromossômica. Foram selecionadas amostras de indivíduos em que o diagnóstico clínico proposto incluia uma suspeita de rearranjo nos cromossomos 4p16.3, 5p15.2, 5q35, 7q11.23, 8q24.12, 15q11-q12, 16p13.3, 17p13.3, 17p11. 2,2 e 22q11 que foram analisados por hibridização in situ por fluorescência (FISH). Em 11 amostras com microdeleções, hibridização genômica comparativa (array-CGH) foi realizada. Resultados: Um total de 504 amostras foram avaliadas, sendo as suspeitas mais comuns a deleção 22q11.2 (29,5%), a síndrome de Prader-Willi (21,6%), a síndrome de Williams-Beuren (15%) e da síndrome de Angelman (13 %). Em 120 deles (23,8%) desequilíbrios cromossómicas relacionadas com o diagnóstico clínico foram encontrados. A del7q11.23 foi a alteração mais frequente (8,5%) detectada, seguida por del22q11.2 (5,3%) e del15q11-q12 (4,5%). Conclusões: Nossos achados reforçam à estratégia de que um teste de citogenética molecular sensível associada com uma avaliação clínico qualificado são cruciais para a detecção e caracterização precisa de deleções cromossômicas submicroscópicas. Além disso, nosso estudo enfatiza a necessidade de educação continuada para o desenvolvimento e utilização de novas tecnologias para o diagnóstico citogenético, as quais, em nossa experiência, puderam ser introduzidas com sucesso em um hospital público do sul do Brasil. / Background: During the past decades, the widespread use of FISH and microarray-based technologies dramatically changed our perspective regarding detection of submicroscopic genomic rearrangements. The number of diseases identified as caused by chromosomal microdeletions/microduplications increased quickly, bringing a new and crucial role for cytogenetics in the diagnosis of these conditions. Objective: The purpose of this study was to identify and chraracterize chromosomal microdeletions associated with malformation syndromes in a reference cytogenetics laboratory from a public hospital of Southern Brazil. Methods: Using retrospective and prospective approaches, we evaluated a consecutive series of samples. The study was based in hospital and laboratorial records of samples from a cohort of subjects with clinical suspicion of a chromosomal microdeletion. We selected samples from subjects in whom a clinical diagnosis was proposed, which included deletion of chromosomes 4p16.3, 5p15.2, 5q35, 7q11.23, 8q24.12, 15q11-q12, 16p13.3, 17p13.3, 17p11.2,2 and 22q11 identified by fluorescence in situ hybridization (FISH) analysis. In 11 samples with microdeletions, array-based comparative genomic hybridization (array-CGH) was performed. Results: A total of 504 samples were evaluated, being the most common suspicions the 22q11.2 deletion (29.5%), the Prader-Willi syndrome (21.6%), the Williams-Beuren syndrome (15%) and the Angelman syndrome (13%). In 120 of them (23.8%) chromosomal imbalances related to the clinical diagnosis were found. The deletion 7q11.23 was the most frequently finding (8.5%), followed by del22q11.2 (5.3%) and del15q11-q12 (4.5%). Conclusions: Our findings provide support to the idea that a sensitive molecular cytogenetic test associated with a qualified clinical evaluation are crucial for the detection and precise characterization of submiscroscopic chromosome deletions. Additionally, our study emphasizes the need of continuing 6 education for the improvement of the cytogenetic diagnosis technology, which was successfully introduced in a public hospital of Southern Brazil.

Submitted by Bruna Rodrigues (bruna92rodrigues@yahoo.com.br) on 2016-09-27T14:16:35Z No. of bitstreams: 1 TeseJBT.pdf: 4183464 bytes, checksum: 396f197737f67452e4dcbb04ae000c10 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-10T14:11:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseJBT.pdf: 4183464 bytes, checksum: 396f197737f67452e4dcbb04ae000c10 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-10T14:11:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseJBT.pdf: 4183464 bytes, checksum: 396f197737f67452e4dcbb04ae000c10 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-10T14:12:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseJBT.pdf: 4183464 bytes, checksum: 396f197737f67452e4dcbb04ae000c10 (MD5) Previous issue date: 2015-11-27 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Parodontidae comprises the genera Parodon, Apareiodon e Saccodon, including 32 valid species. Of these, 16 occur in Brazil, and only ten defined at species level and one at genus level possess available chromosomal data. Due to the lack of cytogenetic data of Parodontidae species from the Tocantins-Araguaia and Jaguaribe river basins, this study analyzed by cytogenetic (classical and molecular) and molecular (DNA Barcode) methods six populations from the Tocantins-Araguaia river basin (Apareiodon cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2, Apareiodon machrisi, Apareiodon argenteus and Parodon cf. pongoensis) and one species from the Jaguaribe river basin (Apareiodon davisi), in order to contribute to the knowledge of the genetic diversity of the family and assist in the understanding of chromosome evolution of this fish group. For all of the Apareiodon analyzed species was identified conservation in diploid number, distribution pattern of heterochromatic blocks and dispersion pattern of repetitive fraction WAp. However, karyotype formula, active nucleolar organizer regions, location of ribosomal genes 45S and 5S and distribution of satellite DNA pPh2004 sites shown to be variable among the species. The (GATA)n and telomeric (TTAGGG)n sequences exhibited similar pattern in A. cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2 and A. machrisi. In this work, we described the first reports of ribosomal genes co-location for Parodontidae, being observed in A. cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2, A. machrisi and A. davisi, and also the polymorphism involving the two ribosomal sequences of A. davisi. Analysis of histones H1 and H4 localization represent the first study of histone genes in the family and showed that the seven collected species have co-location of these sequences in a chromosome pair, occuring one additional site of H1 in A. davisi, and dispersed sites of this sequence by the chromosomes of the species. Chromosomal analysis and DNA Barcode performed in A. cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2 and A. machrisi showed recent divergence among these individual groups, suggesting that Apareiodon sp. 2 is a possible new species, and Apareiodon sp. 1 is a population of A. machrisi. This work contributed to the knowledge of the genetic diversity of viii Parodontidae, presenting unpublished chromosomal and molecular data of this family. General analysis of chromosomal data of this family revealed conservation of karyotype macrostructure, however, more detailed analyzes indicated the occurrence of a great variety of chromosomal microstructural level. The results presented in this study, along with that available in literature, indicated that this microstructure chromosome diversity is clearly linked to repetitive DNAs dynamics. / Parodontidae é composta pelos gêneros Parodon, Apareiodon e Saccodon, incluindo 32 espécies consideradas válidas. Destas, 16 ocorrem em território brasileiro e apenas 11 possuem dados cromossômicos disponíveis. Considerando a escassez de dados citogenéticos para espécies de Parodontidae das bacias dos rios Tocantins-Araguaia e Jaguaribe, o presente trabalho analisou através de metodologias citogenéticas (clássicas e moleculares) e moleculares (DNA Barcode) seis populações da bacia dos rios Tocantins-Araguaia (Apareiodon cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2, Apareiodon machrisi, Apareiodon argenteus e Parodon cf. pongoensis) e uma espécie da bacia do rio Jaguaribe (Apareiodon davisi), com o intuito de contribuir para o conhecimento da diversidade genética da família e auxiliar na compreensão da taxonomia e evolução cromossômica desse grupo de peixes. Para todas as espécies de Apareiodon analisadas, foi identificada conservação no número diploide, padrão de distribuição de heterocromatina e padrão de dispersão da fração repetitiva WAp. Entretanto, a fórmula cariotípica, as regiões organizadoras de nucléolo ativas, a localização dos genes ribossomais 45S e 5S e a distribuição dos sítios do DNA satélite pPh2004 mostraram-se variáveis entre as espécies. As sequências (GATA)n e telomérica (TTAGGG)n exibiram padrão similar para A. cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2, A. machrisi. No presente trabalho foram descritos os primeiros relatos de co-localização de genes ribossomais para Parodontidae, sendo observados em A. cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2, A. machrisi e A. davisi, e também do polimorfismo envolvendo as duas sequências ribossomais verificado em A. davisi. As análises da localização das sequências das histonas H1 e H4 representam os primeiros dados de genes histônicos para a família e evidenciaram para as sete espécies coletadas a ocorrência de co-localização destas sequências em um par cromossômico, ocorrendo um sítio adicional de H1 em A. davisi, e sítios dispersos dessa sequência pelos cromossomos das espécies. Análises cromossômicas e de DNA Barcode realizadas para A. cavalcante, Apareiodon sp.1, Apareiodon sp. 2, A. machrisi evidenciaram divergência recente entre esses grupos de indivíduos, vi sugerindo que Apareiodon sp. 2 represente uma possível espécie que carece de descrição taxonômica e Apareiodon sp. 1 seja uma população de A. machrisi. O presente trabalho contribuiu para o conhecimento da diversidade genética de Parodontidae, apresentando dados cromossômicos e moleculares inéditos desta família. Análises gerais dos dados cromossômicos conhecidos para a família revelam conservação da macroestrutura cariotípica, entretanto, análises mais detalhadas evidenciam a ocorrência de uma grande diversidade cromossômica em nível microestrutural. Os resultados apresentados no presente trabalho, juntamente aos disponíveis em literatura, indicam que esta diversidade da microestrutura cromossômica encontra-se claramente associada à dinâmica dos DNAs repetitivos. / 2012/15258-0

Erythrovirus B19 infects erythrocytic progenitor cells, leading to a transient interruption of erythropoiesis. It is the causal agent of several clinical syndromes, including erythema infectiosum and its associated (or isolated) joint symptoms; transitory aplastic crisis of individuals with hemolytic anemias; non-immune hydrops fetalis; and the chronic anemias of immunosuppressed patients, including those with AIDS. In this latter setting, erythrovirus B19 assumes certain importance, as it is, among the innumerable causes of anemia in AIDS, a treatable one. Aiming at to look for evidences of erythrovirus B19 infection, bone marrow stored material from 42 autopsies (49 paraffin blocks) and 36 biopsies (48 paraffin blocks from 31 patients)underwent histopathological examinations and immunohistochemical and in situ hybridization tests. As a whole, 97 paraffin blocks, from autopsies and necropsies done from 1988 to 2002, were examined. Eighty-five sections were stained with hematoxylin-eosin (HE) and examined under optical microscopy. In 20 out of these blocks intra-nuclear inclusion bodies displacing the chromatin to the periphery (lantern cells), suggestive of erythrovirus B19 infection, were noticed. Eighty-seven sections were also subjected to immunohistochemistry, in which ten were deemed positive. The immunohistochemistry was repeated in these ten sections and seven were again considered positive (two from necropsy material, plus five biopsies from four patients). Nine out of the 10 originally mmunohistochemistry positive sections were also subjected to in situ hybridization, with three positives, one of them strongly. Nine other sections, taken among those that were positive under HE, were also subjected to in situ hybridization, where four were considered positive. Among the techniques used in this study, the most easy-to-do was microscopy of HE-stained sections, the lantern cells being, as described in the literature, easily seen. Most bone marrow sections were normocellular or hypocellular, and many had myelodysplastic changes, plasma cell infiltrates, histiocytosis, and hyperplasia of megacaryocytes, with immature and dysmorphic forms. In spite of the tests being done blindly, there was a regular agreement between HE and immunohistochemistry results, as the percentage of HE positive sections were far greater among the immunohistochemistry positive ones. Among the 15 sections subjected to the three techniques used in the study, only one gave unequivocal positive results with all three. The use of immunohistochemistry and in situ hybridization in the diagnosis of erythrovirus B19 infections in paraffin-stored bone marrow material deserves further study. The frequency of erythrovirus B19 infection in the examined material can be deemed low. / O eritrovírus B19 infecta precursores eritrocíticos, determinando a interrupção temporária da eritropoese. É o agente causal de várias síndromes clínicas, entre as quais: o eritema infeccioso e os quadros articulares que o acompanham (ou que surgem isoladamente); a crise aplástica transitória dos indivíduos com anemias hemolíticas; a hidropisia fetal não imune; e as anemias crônicas dos pacientes imunossuprimidos, incluindo aqueles com AIDS. Nesse último contexto a infecção pelo eritrovírus B19 reveste-se de certa importância, por tratar-se, dentre as inúmeras causas de anemia em pacientes com AIDS, de uma infecção passível de tratamento. Com o intuito de investigar as evidências de infecção pelo eritrovírus B19, o material estocado das medulas ósseas de 42 necropsias (49 blocos de parafina) e 36 biópsias (48 blocos de parafina, de 31 pacientes) foi submetido a exame histopatológico, imunoistoquímica e hibridização in situ. No total, foram estudados 97 blocos de parafina, provenientes de biópsias e necropsias realizadas entre 1988 e 2002. Oitenta e cinco cortes foram corados pela hematoxilina-eosina (HE) e examinados à microscopia óptica. Em vinte desses blocos foi observada a presença de corpúsculos de inclusão intranucleares eosinofílicos, deslocando a cromatina para a periferia, sugestivos de infecção por eritrovírus B19 (células em lanterna). Oitenta e sete cortes foram também submetidos a imunoistoquímica, sendo que dez cortes foram considerados positivos. A imunoistoquímica foi repetida nesses dez cortes, e sete foram novamente positivos (dois de material de necropsia, mais cinco biópsias de quatro pacientes). Nove dos dez cortes inicialmente positivos à imunoistoquímica foram também submetidos a hibridização in situ sendo três deles positivos, um deles fortemente. Nove outros cortes, escolhidos por terem sido positivos à HE, foram também submetidos a hibridização in situ, sendo quatro considerados positivos. Das técnicas empregadas no presente estudo, a de mais fácil realização foi o exame microscópico dos cortes corados à HE, sendo as células em lanterna de fácil visualização, conforme padrão descrito na literatura. A maior parte das medulas era normo ou hipocelular e muitas continham alterações mielodisplásicas, plasmocitose, histiocitose e hiperplasia dos megacariócitos, com formas imaturas e dismórficas. Apesar de os exames terem sido conduzidos de modo cego, houve regular concordância entre os resultados da HE e os da imunoistoquímica, uma vez que o percentual de lâminas positivas à HE foi bem maior entre as lâminas positivas à imunoistoquímica. Dos 15 cortes submetidos às três técnicas empregadas no estudo, apenas um corte mostrou resultados positivos inequívocos em todas elas. O emprego de imunoistoquímica e da hibridização in situ no diagnóstico da infecção pelo eritrovírus B19 em material de medula óssea estocado em parafina merece estudos adicionais. A freqüência de infecção por eritrovírus B19 pode ser considerada baixa no material examinado.

Introdução: Durante as últimas décadas, a utilização de métodos moleculares como Hibridizacão in situ por fluorescência (FISH) e Hibridização Genômica Comparativa (array-CGH) mudou dramaticamente a perspectiva em relação à detecção de rearranjos genômicos submicroscópicos. O número de doenças identificadas como causada por microdeleções/microduplicações cromossômicas aumentou rapidamente, trazendo um papel crucial para a citogenética no diagnóstico destas condições. Objetivo: O objetivo deste estudo foi identificar e caracterizar microdeleções cromossômicas associadas a síndromes de malformações em um laboratório de citogenética de referência de um hospital público do sul do Brasil. Métodos: Estudo retrospectivo e prospectivo, em uma série consecutiva de amostras. O estudo foi baseado em registros hospitalares e laboratoriais de amostras de uma coorte de pacientes com suspeita clínica de microdeleção cromossômica. Foram selecionadas amostras de indivíduos em que o diagnóstico clínico proposto incluia uma suspeita de rearranjo nos cromossomos 4p16.3, 5p15.2, 5q35, 7q11.23, 8q24.12, 15q11-q12, 16p13.3, 17p13.3, 17p11. 2,2 e 22q11 que foram analisados por hibridização in situ por fluorescência (FISH). Em 11 amostras com microdeleções, hibridização genômica comparativa (array-CGH) foi realizada. Resultados: Um total de 504 amostras foram avaliadas, sendo as suspeitas mais comuns a deleção 22q11.2 (29,5%), a síndrome de Prader-Willi (21,6%), a síndrome de Williams-Beuren (15%) e da síndrome de Angelman (13 %). Em 120 deles (23,8%) desequilíbrios cromossómicas relacionadas com o diagnóstico clínico foram encontrados. A del7q11.23 foi a alteração mais frequente (8,5%) detectada, seguida por del22q11.2 (5,3%) e del15q11-q12 (4,5%). Conclusões: Nossos achados reforçam à estratégia de que um teste de citogenética molecular sensível associada com uma avaliação clínico qualificado são cruciais para a detecção e caracterização precisa de deleções cromossômicas submicroscópicas. Além disso, nosso estudo enfatiza a necessidade de educação continuada para o desenvolvimento e utilização de novas tecnologias para o diagnóstico citogenético, as quais, em nossa experiência, puderam ser introduzidas com sucesso em um hospital público do sul do Brasil. / Background: During the past decades, the widespread use of FISH and microarray-based technologies dramatically changed our perspective regarding detection of submicroscopic genomic rearrangements. The number of diseases identified as caused by chromosomal microdeletions/microduplications increased quickly, bringing a new and crucial role for cytogenetics in the diagnosis of these conditions. Objective: The purpose of this study was to identify and chraracterize chromosomal microdeletions associated with malformation syndromes in a reference cytogenetics laboratory from a public hospital of Southern Brazil. Methods: Using retrospective and prospective approaches, we evaluated a consecutive series of samples. The study was based in hospital and laboratorial records of samples from a cohort of subjects with clinical suspicion of a chromosomal microdeletion. We selected samples from subjects in whom a clinical diagnosis was proposed, which included deletion of chromosomes 4p16.3, 5p15.2, 5q35, 7q11.23, 8q24.12, 15q11-q12, 16p13.3, 17p13.3, 17p11.2,2 and 22q11 identified by fluorescence in situ hybridization (FISH) analysis. In 11 samples with microdeletions, array-based comparative genomic hybridization (array-CGH) was performed. Results: A total of 504 samples were evaluated, being the most common suspicions the 22q11.2 deletion (29.5%), the Prader-Willi syndrome (21.6%), the Williams-Beuren syndrome (15%) and the Angelman syndrome (13%). In 120 of them (23.8%) chromosomal imbalances related to the clinical diagnosis were found. The deletion 7q11.23 was the most frequently finding (8.5%), followed by del22q11.2 (5.3%) and del15q11-q12 (4.5%). Conclusions: Our findings provide support to the idea that a sensitive molecular cytogenetic test associated with a qualified clinical evaluation are crucial for the detection and precise characterization of submiscroscopic chromosome deletions. Additionally, our study emphasizes the need of continuing 6 education for the improvement of the cytogenetic diagnosis technology, which was successfully introduced in a public hospital of Southern Brazil.

Orientador: Pedro Duarte Novaes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T13:01:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Salmon_CristianeRibeiro_D.pdf: 2931255 bytes, checksum: 8d0caff547f7c76dee5ed900784d683c (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O ligamento periodontal de incisivos de ratos é um tecido conjuntivo com a função de ancoragem, suporte do dente e provável papel na erupção dental. Esse tecido possui um alto grau de remodelação, cujo colágeno tipo I (Col-1) é um dos seus componentes principais. As metaloproteinases (MMPs) são enzimas que estão presentes no ligamento periodontal e degradam quase todos os constituintes da matriz extracelular. Alterações nas condições funcionais do dente podem provocar mudanças no metabolismo das células do ligamento, modificando o balanço entre a síntese das proteínas da matriz extracelular e a degradação pelas MMPs. O objetivo desse estudo é quantificar a expressão de mRNA de Col-1, MMP-2, MMP- 8, MMP-14, TIMP-1 e TIMP-2, identificar as células que expressam esses mRNAs e a localizar as proteínas no ligamento periodontal de incisivos de ratos submetidos a condições funcionais alteradas experimentalmente. Ratos Lewis machos foram utilizados, subdivididos em 4 grupos de acordo com as seguintes condições funcionais a que os incisivos inferiores foram submetidos por um período de 7 e 14 dias: normofuncional, hiperfuncional, hipofuncional e erupção contida. Os incisivos foram extraídos e o ligamento periodontal coletado por meio de leve raspagem de suas superfícies distal, lingual e mesial. Após a extração do RNA total e a síntese de cDNA, foi feita a quantifição relativa por PCR em Tempo Real. Para a localização do mRNA e das proteínas de interesse no ligamento periodontal foram utilizadas as técnicas de hibridização in situ e imunohistoquímica, utilizando-se 5 ratos para cada condição funcional e por período. Decorridos os tempos os animais foram sacrificados, tiveram as hemimandíbulas removidas, fixadas e processadas para a obtenção de cortes histológicos transversais. A análise da expressão gênica mostrou uma redução nos níveis de mRNA para o Col-1, MMPs e TIMPs em todos os grupos experimentais quando comparados ao normofuncional. Redução significativa foi encontrada nos grupos tratados por 7 dias, e houve aumento dos níveis de mRNA aos 14 dias para os genes estudados. Aumento significante nos níveis de mRNA (p<0,05) foi encontrado somente para MMP-2 no grupo hipofuncional por 7 dias. A redução (p<0,05) dos níveis de MMP- 8 no grupo contido por 7 e 14 dias parece estar relacionada ao aumento do inibidor TIMP-1. As MMPs e TIMPs citadas foram localizadas no ligamento periodontal e os resultados sugerem que esses genes são expressos por fibroblastos, cementoblastos, osteoblastos e osteoclastos. O Col-1 foi imunolocalizado no ligamento periodontal na região junto ao osso alveolar, enquanto a TIMP-2 estava mais concentrada na região adjacente ao dente. Os resultados sugerem que as alterações nas condições funcionais dos incisivos de rato provocam uma modificações no metabolismo do ligamento periodontal pelas mudanças nos níveis de expressão de Col-1, MMPs e TIMPs, ocorrendo picos de aumento ou redução da expressão com tendência de retorno à normalidade. O balanço entre a produção de Col-1, MMPs e TIMPS parece ter um importante papel no controle da taxa de erupção dos incisivos de ratos / Abstract: Periodontal ligament is a connective tissue that provides anchorage and support to the tooth, and it has a probable role in the tooth eruption. The extracelular matrix consists predominantly of collagen type I (Col-1) and the turnouver of collagen fibers is intense. Matrix metalloproteinases (MMPs) are members of a family of enzymes capable to degrade almost all components of the extracellular matrix. They are present in the periodontal ligament. It is supposed that tooth functional conditions alterations may promote changes in the metabolism of periodontal ligament cells, modifying the balance between the synthesis of extracellular matrix proteins and their degradation by MMPs. The aim of the present study is to quantify the levels of mRNA of Col-1, MMP-2, MMP-8, MMP-14, TIMP-1 and TIMP-2, identify the cells expressing these mRNA and locate these proteins in the periodontal ligament of rat incisors submitted to altered functional conditions. Lewis male rats were randomly assigned to 4 groups and their lower incisors were submitted to different functional conditions: normofunctional, hipofunctional, hiperfunctional and restraint, during 7 or 14 days. The teeth were extracted and the periodontal ligament was collected by gently scaling of the distal, lingual and mesial tooth surface. Total RNA was extracted and the synthesis of the cDNA was performed for Relative PCR Quantification. In situ hybridization and immunohistochemistry were performed to detect the cell expression and the proteins localization in the periodontal ligament. Five rats for each functional condition were sacrified after 7 and 14 experimental days.The rat hemimandubles were removed for histological processing to obtain 3µm transversal sections. Analysis of the expression of Col-1, MMPs and TIMPs showed a down-regulation for all genes in the groups studied in relation to the normofuctional group. Significant down-regulation (p<0,05) was found in the groups treated during 7 days, and increased levels of mRNA was related to 14 days of treatment. Significant increased levels of mRNA (p<0,05) were found only for MMP-2 to the hipofunctional group at 7 days. Reduction (p<0,05) of the levels of mRNA for MMP-8 in the restraint group at 7 and 14 days seems to be related to the increased levels of its inhibitor, TIMP-1. MMPs and TIMPs were found been expressed in the periodontal ligament by fibroblasts, cementoblasts, osteoblasts and osteoclasts. Col-1 was localized at the region adjacent to the alveolar bone, whereas TIMP-2 was concentrated adjacent to the tooth region of the periodontal ligament. The results obtained suggest that the alterations on the functional conditions of the rat incisors produce changes in the metabolism of the periodontal ligament tissue by changing the levels of COL-1, MMPs and TIMPs. Up-regulation peaks or downregulation peaks seem to be conduced to the normal levels of expression along the experimental time. The balance between production of Col-1, MMPs and TIMPs may have an important role in the control of the eruption rate of rat incisors / Doutorado / Histologia e Embriologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Orientadores: Eliane Maria Ingrid Amstalden, Jose Vasallo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T14:26:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_FranciscoPignataro_D.pdf: 4114475 bytes, checksum: 852f416deccb941fe4dc3e63c2553510 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Cerca de 20% a 40% dos linfomas não-Hodgkin (LNH) B são extranodais e caracterizam-se por comportamento biológico distinto, de acordo com o seu sítio de origem e variante histológica. Linfoma ósseo primário (LOP), uma forma extranodal rara, apresenta-se na maior parte dos casos como LNH B de alto grau e evolui com bom prognóstico. Os estudos sobre o LOP são escassos e suas características imunofenotípicas e citogenéticas ainda não estão bem definidas. Neste trabalho, foram analisados três grupos de linfomas difusos de grandes células B (LDGCB): a) ósseos primários, B) nodais e c) metastáticos (com envolvimento ósseo secundário). Foram investigados, nesses grupos, dados clínicos e de sobrevida, aspectos morfológicos, imunofenotípicos e citogenéticos. Na análise imunoistoquímica, foi verificado o estudo das moléculas envolvidas na apoptose e regulação do ciclo celular (Bcl-2, Bax, p53, Bcl-6, p21, pRB) moléculas envolvidas na adesão celular (CD29, CD62L, CD44, CD51) índice de proliferação celular (Ki-67) e expressão das subpopulações de células infiltrantes do sistema imune (CD3, CD4, CD5, CD8, CD57, CD68, Foxp3) com objetivo de melhor caracterizar o LOP. Foram selecionados no total 138 casos de LDGCB, provenientes dos departamentos de Anatomia Patológica FCM-UNICAMP, Hospital AC.-Camargo - Fundação Antônio Prudente, Instituto de Traumatologia e Ortopedia da USP e Centre Hospitalier Universitarie (CHU Purpan). Do total de 138, 76 casos eram linfomas ósseos primários, 46 casos linfomas nodais e 16 casos linfomas com envolvimento ósseo secundário. Nossos resultados demonstraram que o LOP possui características evolutivas que diferem dos demais LDGCB extranodais. Observamos que a maioria dos LDGCB ósseos primários (66%) pertenceram ao imunofenótipo centro germinativo (CG) e não exibiram diferenciação plasmacítica. Os três grupos de LDGCB analisados exibiram forte imunoexpressão das proteínas relacionadas à apoptose e ao ciclo celular enquanto que a imunoexpressão de moléculas de adesão foi fraca ou ausente, na maioria dos casos. O estudo da sobrevida, envolvendo a ausência da imunoexpressão das moléculas de adesão CD29, CD62L e CD51, nos três grupos, revelou-se significativamente associada com melhor sobrevida. O significado biológico deste achado ainda está para ser esclarecido. O CD44 foi o mais fortemente expresso nas células tumorais. As moléculas envolvidas na apoptose Bax e p53 foram relacionadas à pior evolução e o pRB à evolução favorável nos LOP. As proteínas Bcl-2 e Bcl-6 foram expressas nos três grupos de linfomas. Com a análise em 32 casos de LOP das principais translocações em LNH (MYC, BCL2/IGH, BCL6, ALK, IGH/CCND1 e PAX5), conseguimos caracterizar melhor esta entidade. Rearranjos, envolvendo o BCL2 e MYC foram encontrados, entretanto não ocorreram rearranjos do BCL6. Os demais genes não demonstraram translocações. Estes achados indicam que o LOP deve ser considerado uma categoria distinta de LDGCB extranodal, com aspectos genéticos e moleculares mais próximos dos nodais / Abstract: The incidence of extranodal lymphomas is increasing in the last decades. Around 20 to 40% of B-cell non-Hodgkin lymphomas (NHL) arise outside the lymph nodes and may present distinct biological behavior, as compared to the corresponding nodal counterpart of similar histological grade. The heterogeneity of large B-cell lymphomas (LBCL) has been matter of various studies, although morphology alone may be insufficient to separate groups of clinical relevance, immunophenotyping and molecular techniques have demonstrated that different variants of LBCL may present diverse clinical and prognostic features. Primary bone lymphoma (PBL) is rare form of extra nodal NHL, which generally presents a more favorable prognosis than the nodal counterpart. The reason for this is unclear. We selected a large series (n=138) of nodal NHL (N=46), primary (n=76) and metastatic (n=16) bone diffuse large cell lymphomas collected in tissue micro-arrays from several centers in France and Brazil. We investigated to be comparing clinical, morphological and immunophenotypic features. Immunohistochemical detection of proliferation markers, apoptosis related proteins and adhesion molecules was be marked. Our results demonstrated that primary bone LDGCB possesses peculiar clinical characteristics that you differ of the other extranodal LDGCB as the longest evolution and smaller recurrence tax. The three groups of LDGCB exhibited strong immunoexpression of the related proteins the apoptosis and cellular cycle while the immunoexpression of adhesion molecules was weak or absentee in most of the cases. These cases were classified according to the expression of antigens with germinal center (GC) (n=37/62) or non germinal center (non-GC) (n=26/62) stages of B-cell differentiation. The study of the survival involving the absence of the imunoexpressão of the adhesion molecules CD29, CD62L and CD51 in the three groups was revealed significantly associated with better outcome. The biological meaning of this discovery is still to be explained. CD44 was it more strongly expressed in the tumor cells and it demonstrated relationship away with inferior survival without statistical significance. The molecules involved in the apoptosis Bax and p53 were related the worst evolution and the pRB the favorable evolution in PBL. The proteins Bcl-2 and Bcl-6 were expressed in the three lymphomas groups and associated the worst evolution, however without significance. By fluorescence in situ hybridization, we found a substantial number of cases with a rearrangement of BCL2 (n=9/32) and MYC (n= 3/32) whereas PAX5, BCL6, BCL-1/Cyclin D1 and ALK genes were in germ line configuration. Interestingly, one case, with GC phenotype, showed a dual BCL2 and MYC rearrangement. We observed that the majority of the cases with rearrangements were of GC phenotype. These results, associated with the lack of BCL6 rearrangement, suggest that bone DLBCL represents a specific group within extranodal B-cell lymphomas. Keywords: diffuse large cell lymphoma, adhesion molecules, apoptosis, fluorescent in situ hybridization / Doutorado / Anatomia Patologica / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Marcelo Carnier Dornelas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T20:30:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cazoto_JulianaLacorte_M.pdf: 1128689 bytes, checksum: 95594f5893e4e8ee4fb64f1d168d493e (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Espécies do gênero Bryophyllum, pertencentes à família Crassulaceae, apresentam uma característica pouco encontrada na natureza: as regiões da margem foliar sofrem diferenciação e desenvolvem pequenas estruturas, que se desprendem da planta e dão origem a novos indivíduos. Tais formações são chamadas de 'propágulos foliares' ou 'bulbilhos'. Entretanto, o estudo da morfologia e desenvolvimento de tais estruturas permitiu que alguns autores as considerassem como embriões, e não apenas 'brotos' foliares. A formação natural de embriões somáticos é um fenômeno morfogênico restrito a poucas espécies vegetais. Em Bryophyllum, entretanto, eles parecem fazer parte da ontogenia da folha. O presente estudo caracterizou morfológica e anatomicamente essas estruturas foliares em Bryophyllum tubiflorum Harv. e Bryophyllum pinnatum Lam., nas diferentes fases de seu desenvolvimento, através de microscopia eletrônica de varredura e microscopia óptica. A expressão diferencial de homólogos aos genes WUSCHEL, MONOPTEROS, CUP SHAPED COTYLEDON, YABBY e LEAFY COTYLEDON1 também foi analisada durante o desenvolvimento dos 'propágulos', com a utilização de técnicas de hibridização in situ. Os resultados da análise do padrão de expressão gênicas, unidos aos da análise morfo-anatômica do desenvolvimento dos 'propágulos' permitem classificar essas estruturas como embriões somáticos in planta ao menos na espécie B. tubiflorum. / Abstract: Bryophyllum species from the Crassulaceae family show a rare feature: the margin of the leaf develops structures which detach from the mother plant and give rise to a new organism. These structures are known as 'leaf-plantlets' or 'bulbils'. However, morphological and developmental studies allowed some authors to classify such structures as embryos, and not just foliar buds. The natural formation of somatic embryos is a phenomenon restrict to a few plant species. Nevertheless in Bryophyllum this event seems to be part of the leaf ontogeny. This study aimed on the morphological and anatomical characterization of these leaf structures, in their different developmental stages, through scanning electronic microscopy and optical microscopy, in both Bryophyllum tubiflorum Harv. and Bryophyllum pinnatum Lam. The differential pattern of gene expression was also analyzed for the homologs of WUSCHEL, MONOPTEROS, CUP SHAPED COTYLEDON, YABBY e LEAFY COTYLEDON1 during the development of the leaf 'bulbils' by in situ hybridization. Taken together, the result of gene expression analyzes and those from morphoanatomy of plantlet development allow the classification of these structures as in planta somatic embryos, at least for B. tubiflorum. / Mestrado / Mestre em Biologia Vegetal

Orientador: Aureo Tatsumi Yamada / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T00:51:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aires_MarluciaBastos_D.pdf: 2189429 bytes, checksum: 72ea45d01e8d2f7c191ae7c71d82c5f8 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A implantação embrionária implica em alterações profundas do ambiente uterino, cujos eventos devem obedecer uma sincronia temporal e espacial com o estágio do desenvolvimento embrionário. Qualquer desequilíbrio nesta sincronia resulta em interrupção da gestação e o desconhecimento dos mecanismos que atuam nas interações materno-fetais inviabilizam as possíveis intervenções buscando controlar as causas que levam às perdas iniciais da gestação. Visando contribuir para a melhor compreensão da biologia da resposta uterina de bovinos, o presente trabalho utilizou úteros de bovinos (Bos spp) não gestantes (NG) e gestantes nos períodos correspondentes à implantação embrionária para a coleta de fragmentos das regiões carunculares (CAR) e intercarunculares (IC). Esses fragmentos foram processadas para embebição em parafina destinadas às análises histológicas e obtenção de RNA total para realização de RT-PCR semi-quantitativo dos morfógenos Bmp2, Wnt2, Wnt5a, Wnt7a, e de seus antagonistas Sostdc1, Noggin, Dkk1 e Sfrp2. Pela análise histológica do desenvolvimento da mucosa uterina da região CAR foram estabelecidos os critérios morfológicos das seqüências de alterações da histoarquitetura endometrial em resposta à implantação embrionária constituindo quatro grupos (P1-P4) definindo os períodos gestacionais correspondentes, quais sejam: P1 (20-26 dg) - adesão das células trofoblásticas na superfície apical das células epiteliais e/ou entremeadas no revestimento epitelial, P2 (28-33 dg) - presença de projeções digitiformes na superfície da região CAR e tecido epitelial uterino constantemente rompido em ambas as regiões CAR e IC, P3 (35-40 dg) - expansão das projeções da região CAR formando uma rede anastomosada, entremeada pelo córion e P4 (50-60dg) - consolidação do placentônio. A ruptura das células epiteliais observada em P2 demonstra a fragilidade da interação epitélio-córion neste período que pode estar diretamente relacionada com a alta freqüência de perdas gestacionais em bovinos particularmente durante a implantação embrionária. A reação imunocitoquímica para anti-PCNA demonstrou uma marcação crescente no epitélio (E) e estrato subepitelial (ES), particularmente nas projeções da CAR de P1 a P4 e em menor proporção no E e estrato compacto (EC) da IC, confirmando a intensa atividade proliferativa associada com a hipertrofia endometrial. As análises da expressão genica através de RT-PCR, demonstraram a presença dos transcritos de Bmp2, Sostdc1, Noggin, Wnt2, Wnt5a, Wnt7a, Sfrp2 e Dkk1, e pela hibridização in situ, confirmaram-se as expressões localizadas dos genes Bmp2, Wnt5a, Wnt7a, Dkk1, Sfrp2, além dos receptores Bmpr1a e Bmpr2 no E+ES da CAR e E+EC da IC no útero NG e gestantes de P1 a P4. A expressào de Bmp2 foi maior na CAR em relação a IC em P1 e P2 o que sugere uma participação importante na ativação da resposta da região CAR relacionada com a implantação embrionária, enquanto o Wnt5a parece não atuar neste período. A redução da expressão de Wnt2 em P1, indica uma regulação negativa na CAR e IC no inicio da implantação, enquanto que a menor expressão de Wnt7a na CAR em relação a IC sugere que este gene não está relacionado com as principais alterações observadas nessa região. A maior expressão de Dkk1 e Sfrp2 na CAR em relação à IC, sugere a participação na atividade celular da região CAR, porém não apresenta relação direta com a expressão dos genes Wnt analisados, assim como a ausência de Sostdc1 no endométrio e a menor expressão de Noggin demonstram não serem estes os antagonistas principais de BMP que atuam no endométrio bovino. A expressão de Wnt e Bmp em conjunto com seus antagonistas simultaneamente nas regiões CAR e IC atesta a dependência da ação múltipla e sinérgica/antagônica de vários fatores na modulação da resposta da mucosa uterina na implantação embrionária e durante o desenvolvimento da placentação sinepitéliocorial. / Abstract: The embryo implantation implies in deep changes of the uterine environment which events must be topologically and chronologically synchronized with embryo development stage. Any imbalance in this synchronization results in disruption of the gestation and the lack of knowledge regarding the mechanisms of maternal-fetal interaction make difficult any potential action intending to control the causes which induce early gestational loss. Aiming to contribute to a better understanding of the biology of bovine uterine response, the present work evaluated the caruncle (CAR) and intercaruncle (IC) regions collected from non-pregnant (NG) and pregnant bovine uteri (Bos spp) and processed for paraffin embedding and submitted to histological analysis, RNA isolation for RT-PCR of Bmp2, Wnt2, Wnt5a and Wnt7a morphogen genes and their antagonists Sostdc1, Noggin, Dkk1 and Sfrp2 gene expression. By histological analysis of CAR uterine mucosa development, the morphological criteria of the endometrial histoarchitecture changes sequences were established and adopted to compose four groups (P1- P4) with corresponding gestational stages: P1 (20-26 gd) - adhesion of throphoblast cells on the apical surface of epithelium cells and/or between them, P2 (28-33 gd) - villous-like projections on the CAR surface and areas of disrupted or absence of epithelial cells on both CAR and IC regions, P3 (35-40 gd) - expansion of villous-like projections resulting in an anastomosis mesh where chorion villi intrude, P4 (50-60 gd) - placentome consolidation. The constant disruption of epithelial cells seen in P2 evidenced the fragility of epithelium-chorion interaction that may be related to the high incidence of bovine pregnancy loss particularly during embryo implantation. The immunocytochemistry for PCNA demonstrated reactivity in epithelium (E) and subepithelium stratum (SS), particularly on CAR villous-like projections from P1-P4 and in a less frequent proportion in the epithelium (E) and compactum stratum (CS) from IC, demonstrating the intense proliferative activity associated with endometrial hypertrophy. The gene expression analysis by RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction) confirmed the transcripts for Bmp2, Sostdc1, Noggin, Wnt2, Wnt5a, Wnt7a, Sfrp2 and Dkk1, and by In situ hybridization the localized expression of Bmp2, Wnt5a, Wnt7a, Dkk1, Sfrp2, and also Bmpr1a and Bmpr2 receptors in E+SS and E+CS in NG and P1-P4 uteri. The Bmp2 expression was higher on CAR when compared to IC in P1 and P2 which suggest an important involvement on CAR response activation related to embryo implantation, whereas Wnt5a does not seem to participate at this period. The decreased expression of Wnt2 in P1 point out a negative regulation on CAR and IC in the beginning of implantation, while the lower expression of Wnt7a in CAR when compared to IC suggest that this is not the main gene related to changes of CAR in pregnancy. The highest expression of Dkk1 and Sfrp2 on CAR when compared to IC indicate their participation on the cellular activity on the CAR region, but it is not involved directly with the expression of Wnt genes analyzed, as well as the absence of Sostdc1 on the endometrium and the lowest expression of Noggin demonstrated that they are not the main BMP antagonists acting on bovine endometrium. The expression of Wnt and Bmp together with their antagonists simultaneously on CAR and IC regions attest the multiple and synergic/antagonic action of several factors on the modulation of uterine mucosa response during the embryo implantation and development of synepitheliochorial placentation. / Doutorado / Histologia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

INTRODUÇÃO: A leucemia promielocítica aguda (LPA) é um subtipo distinto de leucemia mielóide aguda (LMA), caracterizado pela presença de um acúmulo de promielócitos anormais na medula óssea e/ou sangue periférico, riscos de coagulopatias e por alterações cromossômicas estruturais envolvendo sempre o locus gênico para o receptor alfa do ácido retinóico (RAR). Corresponde morfologicamente aos subtipos M3 e M3variante de LMA, segundo a Classificação Franco- Américo- Britânica (FAB) e ao subtipo de LMA associada à translocação recíproca e balanceada entre os cromossomos 15 e 17[t(15;17)] e variantes, segundo a classificação da Organização Mundial de Saúde. O curso clínico da LPA tem sido modificado, nos últimos anos, de uma leucemia aguda rapidamente fatal para um dos mais curáveis subtipos de LMA. A introdução de agentes terapêuticos que atuam diretamente na lesão molecular, como o ATRA e o Trióxido de Arsênico, teve grande impacto na sobrevida da LPA. A eficácia do tratamento é dependente do rearranjo genético presente nas células leucêmicas, o diagnóstico morfológico é sugestivo da alteração genética, devendo ser rapidamente confirmado por técnicas de citogenética molecular. MÉTODOS: Utilizando a citogenética convencional e molecular (FISH) com sondas de fusão para o rearranjo PML-RAR e de ruptura para o gene RAR, analisou-se 62 pacientes portadores de LPA, diagnosticados por estudo morfológico/imunofetípico no HC-FM/USP entre os anos de 1997 a 2006. RESULTADOS: Dos 62 pacientes analisados, 37 (59,7%) apresentaram a t(15;17)(q22;q21) visível no cariótipo; destes, 26 (42,0%) apresentaram a t(15;17) como anormalidade clonal isolada, 10 (16,1%) apresentaram outras alterações cromossômicas clonais em adição a t(15;17) e um paciente (1,6%) apresentou uma variante complexa da t(15;17). Dezoito pacientes (29%) tiveram a confirmação da presença da t(15;17)-rearranjo PML-RAR através da técnica de FISH-fusão e sete (11,3%) não apresentaram ruptura no RAR. Ausência de sangramento ao diagnóstico (p<0,02) e a presença de morfologia M3v (p<0,01) se associaram à ausência ruptura no RAR. A taxa de sobrevida global (SG) em dois anos, entre os 55 pacientes que apresentaram a t(15;17)-rearranjo- PML-RAR ao diagnóstico citogenético, foi de 49,28%. Duas variáveis prognósticas mostraram estar estatisticamente relacionadas à pior taxa de SG nesse estudo: idade acima de 60 anos e presença de morfologia de M3v. A taxa de Sobrevida Livre de Doença em dois anos nesses pacientes foi de 72,10%.CONCLUSÃO: Cerca de 11% dos pacientes diagnosticados para LPA, através de estudo morfológico/imunofenotípico, não apresentaram diagnóstico citogenético compatível para esta doença. Na ausência de sangramento ao diagnóstico e na presença de morfologia M3v o teste de FISH deve ser priorizado. / INTRODUCTION: Acute promyelocytic leukemia (APL) is a distinct subtype of acute myeloid leukemia (AML), characterized by clonal expansion of myeloid precursors blocked at promyelocytic stage, risks of coagulopathy and presence of chromosomal translocations involving RAR (retinoic acid receptor ) gene. Corresponds to the M3 and M3variant subtypes of AML, according to the French-American-British (FAB) classification and the subtype of AML associated with balanced reciprocal translocation between chromosomes 15 and 17 [t (15; 17)] and variants, according to the World Health Organization classification. The clinical APL course has been changed in late years, from highly fatal to highly curable subtype of AML. The introduction of therapeutic agents that act directly on the molecular lesion, such as ATRA and arsenic trioxide, had a great impact on survival of APL. The efficacy of treatment is dependent on genetic rearrangement present in the leukemia cells, the morphologic diagnosis although predictive of the specific genetic lesion genetic, should be quickly confirmed by molecular techniques. METHODS: We analysed cytogenetics findings in 62 patients diagnosed as promyelocytic leukemia by morphological and immunophenotypic studies at the Hematology Service of Clinical Hospital of Sao Paulo Medical School from 1997 to 2006. For this, we used karyotype and FISH with PML-RARA fusion translocation and RARA break-apart probes. RESULTS: Of the 62 patients studied, 59.7% showed the t(15;17)(q22;q21) visible in the karyotype [42.0% had t(15;17) as the sole clonal abnormality, 16.1% showed other additional abnormalities and 1.6% had a complex variant of t(15;17)], 29% had the confirmation of the rearrangement PML-RAR through the FISH-fusion technique and 11.3% showed no break in RAR. No bleeding at diagnosis (p<0.02) and the presence of M3v morphology (p<0.01) were associated to no RAR rearrangement. The 24months overall survival of 55 patients with t(15;17) confirmed by cytogenetics was 49.28%. Two parameters were associated to worse rate of overall survival in this study: age > 60 years and M3v morphology . The 24 months disease-free survival was 72.10%. CONCLUSION: 11,3% of patients diagnosed as promyelocytic leukemia by morphological and immunophenotypic studies, showed no consistent cytogenetic diagnosis for this disease. In the absence of bleeding at diagnosis and in the presence of the M3v morphology, FISH test should be prioritized.