A Proteína Verde Fluorescente recombinante, GFPuv, é um sistema marcador atrativo pois, sua presença pode ser visualizada através da intensidade de fluorescência emitida, sem o uso de substratos ou meios complexos. Sendo uma molécula estável à presença de substâncias orgânicas, temperaturas acima de 70°C e ampla faixa de pH, é um potencial Indicador Biológico (IH) para diversas aplicações. A estabilidade térmica da GFPuv, foi avaliada pela medida da perda de intensidade de fluorescência, expressa em valores D (min), tempo de exposição necessário para redução de 90% da intensidade de fluorescência inicial da GFPuv. GFPuv (3,5-9,0 µg/mL), expressa por E. coli e isolada por extração de Partição em Três Fases (TPP) e purificação por Cromatografia de Interação Hidrofóbica (IDC), foi diluída nas soluções parenterais preparadas em tampão (10 mM cada: Tris-EDTA, pH 8; Fosfato, pH 6 e 7, e Acetato, pH 5) e em água para injeção, WFI; pH = 6,70±0,40), e expostas a temperaturas de 25°C e ao intervalo entre 80°C e 100°C. A 95°C, os valores D para a GFPuv em soluções de 1,5% a 50% de glicose variaram de: (i) 1,63 (±0,23) min em acetato pH 5; (ii) 2,64 ± 0,26 min em WFI; (iii) 2,50 ± 0,18 min em fosfato pH 6; (iv) 3,24 ± 0,28 min em fosfato pH 7 e, (v) 2,89 ± 0,44 min em Tris-EDTA pH 8. Cloreto de sódio associado aos tampões proporcionou influência positiva na estabilidade da GFPuv, sendo que em soluções de Tris-EDTA, a adição de 15-20% de NaCl dobrou a estabilidade térmica da GFPuv (valores D de 65,79 min e 18,12 min a 80 °C e 85°C) em relação à solução sem cloreto de sódio. Nos processos de esterilização por óxido de etileno (45°C-60°C), a GFPuv pode ser utilizada como IB para monitorar a distribuição de gás dentro da câmara, pois, apresentou variação na concentração remanescente de até 80%, após processamento, estabelecendo áreas distintas dentro da câmara. No tratamento em autoclave, a GFPuv em solução apresentou resistência térmica em solução de fosfato pH 7,0 (valor F = 2,53 min (± 0,12)). Quando expressa por esporos de Bacillus subtilis, a intensidade de fluorescência emitida por esporos sobreviventes se manteve. A estabilidade térmica da GFPuv atestou sua potencialidade como indicador biológico fluorescente da garantia da eficácia de tratamento de soluções e materiais expostos ao calor. / The recombinant Green Fluorescent Protein, GFPuv is an attractive system marker due to its ability to emit fluorescence when exposed to ultraviolet light, without use of substrates or complex environment. Being a stable molecule even in the presence of organic substances, temperatures above 70°C and wide range of pH, it is a potential Biological Indicator, BI, for many applications, including thermal processes. GFPuv thermal stability was evaluated by the loss of fluorescence intensity expressed in decimal reduction time (D-value, min), the exposure time required to reduce 90% of the GFPuv initial fluorescence intensity. GFPuv (3.5-9.0 µg/mL), expressed by E. coli and isolated by Three Phases Partitioning, TPP extraction with Hidrophobic Interaction Chromatography, HIC, was diluted in buffered solutions (each 10 mM: Tris-EDTA, pH 8; phosphate, pH 6 and 7, and acetate, pH 5) and in water for injection, WFI; pH = 6.70 (± 0.40), and exposed to temperatures of 25°C and between 80°C and 95°C. At 95°C, the D-value for GFPuv in 1.5%-50% glucose, ranged from: (i) 1.63 ± 0.23 min in acetate pH 5; (ii) 2.64 ± 0.26 min in WFI; (iii) 2.50 ± 0.18 min in phosphate, pH 6; (iv) 3.24 ± 0.28 min in phosphate, pH 7, (v) 2.89 ± 0.44 min in Tris-EDTA, pH 8. Sodium cloride provided a positive influence over GFPuv stability. In Tris-EDTA solutions, the addition of 15% and 20% of NaCl doubled the thermal stability of GFPuv (D = 65.79 min and D = 18.12 min at 80°C, and 85°C, respectively, in relation to the solutions without NaCl. For ethylene oxide sterilization processes (45°C-60°C), GFPuv can be used as biological indicator to monitor gas distribution into the chamber. After processing, the protein concentration varied by 80%, showing distinct areas into the chamber. In autoclave, GFPuv in solution showed thermal resistance in phosphate pH 7.0 solution (F-value = 2.53 (± 0.12) min. When expressed by Bacillus subtilis spores, the fluorescence intensity was kept constant after thermal processing. The thermal stability of GFPuv provides the basis for its potential utility as a fluorescent biological indicator to assess the efficacy of the treatment of liquids and materials exposed to steam.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-09-11T17:13:51Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EfeitoClareirasAcao.pdf: 1277177 bytes, checksum: 7a08864243db06c1ad06c10e9ef7a89b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-09-27T13:58:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EfeitoClareirasAcao.pdf: 1277177 bytes, checksum: 7a08864243db06c1ad06c10e9ef7a89b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-27T13:58:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EfeitoClareirasAcao.pdf: 1277177 bytes, checksum: 7a08864243db06c1ad06c10e9ef7a89b (MD5) Previous issue date: 2006 / Os drosofilídeos são indicadores das condições do ecossistema em relação aos efeitos do desmatamento das florestas tropicais úmidas, atuando indiretamente como ferramentas para a criação de estratégias de conservação dos grandes biomas. Foi conduzido um estudo na área petrolífera do Urucu - Am, com o intuito de comparar a riqueza e diversidade de espécies de drosofilídeos entre os habitats de clareiras artificiais (jazidas), naturais e floresta contínua. No período de 2003 a 2005 foram realizadas três excursões, nas quais foram utilizadas armadilhas contendo isca de banana fermentada. Para tal, foram utilizados 33 sítios: 11 clareiras naturais, 16 clareiras artificiais e seis transectos em floresta contínua. Além disto, foi testada experimentalmente no campo a capacidade de nove espécies desenvolverem-se nos dos habitats estudados. Foram capturados 7.652 insetos, dentre os quais 4.354 pertencentes à ordem Diptera (56,90%), distribuídos em 24 espécies de Drosophilidae, pertencentes a dois subgêneros: Sophophora e Drosophila. O padrão de abundância das espécies foi diferente entre os habitats. O subgrupo willistoni representou 60,54% do total de drosofilídeos, mais concentrado nas áreas de mata (79,09%). O segundo subgrupo mais abundante foi ananassae, representando 10,40% do total de drosofilídeos, concentrado nas jazidas (35,36%). As curvas de acumulação de espécies, com 227 amostras não tenderam a assíntota, com estimativas que variaram de 24 a 34 espécies. A análise de similaridade no coeficiente de Jaccard mostra 55% de semelhança entre os habitats de clareira natura e jazida, enquanto para Morisita ficou em torno de 98, 1 % entre a mata e clareira natural. Em relação ao experimento, D. malerkotliana foi a única espécie do subgrupo ananassae que emergiu em todos os habitats, apresentando diferenças significativas de emergência entre estes (ANOVA, p<0,001). As espécies do subgrupo willistoni apresentaram menores taxas de emergência, porém estas ocorreram apenas nas áreas de floresta independentemente do local de origem das moscas parentais. Estes resultados mostram a eficiência do método utilizado, precisando aumentar o esforço amostral para estimar a riqueza real de drosofilídeos de frutos. / Drosophilidae are ecosystem condition indicators in relation to the effects of deforestation in tropical rainforest, and are a tool for designing conservation strategies in large biomes. A study in the Urucu oilfields (State of Amazonas, Brazil), was conducted seeking to compare richness and diversity of drosophilidae in artificial clearings (oilfields), natural clearings and continuous forest. Three excursions took place between 2003 and 2005. Fermented banana traps were used in 33 sites: 11 natural clearings, 16 artificial clearings and six continuous forest transects. We also, tested in the field the ability of nine species to develop is these three habitats. We captured 7,652 insects, 4,354 of which belonging to the Order Diptera (56,90%), distributed among 24 species of Drosophilidae, of two subgenus, Sophophora and Drosophila. Species distribution varied among habitats. 60,54% of the drosophilidae were of the willistoni subgroup, heavily concentrated in primary forest (79,09%). The second largest subgroup was ananassae (10,40% of total drosophilidae), in higher concentrations in oilfields (35,36%). The species accumulation curves, with 227 samples did not approached asymptotes; the estimates varied between 24 and 34 species. Jaccard coefficient similarity analysis shows 55% likeness between natural clearing and oilfield habitats, while in Morisita it measured 98,1% between primary forest and natural clearings. D. malerkotliana was the only specie of the ananassae subgroup that appeared in all habitats, with significant variations (ANOVA, p=0.001). Willistoni subgroup species appeared less frequently, only in forest areas, regardless of the original location of parental xv flies. These results show the effectiveness of the methods used and the need to increase the sampling effort to estimate the actual diversity of fruit Drosophilidae.

Os limites de exposição ocupacional ao benzeno, um agente carcinogênico, vêm diminuindo drasticamente nos últimos anos. Por outro lado, a concentração de benzeno em ambientes não ocupacionais tem aumentado devido à emissão biogênica e antropogênica, como exaustão de motores a gasolina e fumaça de cigarro. Indicadores Biológicos de Exposição (IBE) são utilizados como ferramentas importantes na avaliação da exposição humana ao benzeno. Com a diminuição dos limites de exposição, se faz necessário o desenvolvimento de metodologias analíticas com sensibilidade adequada para a determinação de IBE em fluidos biológicos que se correlacionem com baixas concentrações de benzeno absorvido pelo organismo. A utilização do fenol urinário como IBE ao benzeno, embora reconhecida mundialmente, tem a desvantagem de não apresentar boa correlação com a concentração de benzeno ambiental quando esta é menor do que 10 ppm (32 mg/m3). Os ácidos trans,trans-mucônico e S-fenilmercaptúrico, metabólitos do benzeno encontrados na urina, estão entre os compostos mais estudados como IBE ao benzeno. Neste trabalho, o ácido trans,trans-mucônico foi determinado na urina de indivíduos expostos ao benzeno utilizando as técnicas de Eletroforese Capilar (CE) e HPLC, ambas com detecção no UV. Na determinação por HPLC foi adaptada uma metodologia da literatura utilizando coluna analítica com fase reversa. Na determinação por CE foi proposta uma metodologia empregando duas condições analíticas alternativas: uma que utiliza um capilar especial com cela ótica de alta sensibilidade e a outra que utiliza um capilar comum, mas com adição de um modificador orgânico ao eletrólito. As duas condições apresentaram grandes vantagens, como análise rápida (15 minutos) e baixo limite de detecção (25 &#181;g/L). Foram analisadas amostras de urina de indivíduos fumantes e não fumantes onde a sensibilidade da metodologia proposta foi suficiente para diferenciar estatisticamente os dois grupos avaliados. / The occupational exposure limits for benzene, a well-known carcinogenic agent, showed a drastic and continuous decrease in the last few years. In the other hand, benzene concentrations in non-occupational environments are increasing due to biogenic and anthropogenic emissions, like motor fuelled exhaustion and cigarette smoke. Biological markers of exposure are used like a powerful aid to evaluate human exposure for benzene. With the decrease of the exposure limits, the development of analytical methodologies is needed to accomplish adequate sensitivity for the exposure markers determination founded in biological fluids, in order to establish a correlation between the marker and the benzene concentration absorbed by organism. One of the biological marker of exposure for benzene recognized worldwide is urinary phenol, but the exposure for benzene at concentrations smaller than 10 ppm (32 mg/m3) usually is not correlated with urinary phenol concentration. The benzene metabolites trans,trans-Muconic and S-phenylmercapturic acids found in urine have been largely evaluated as biological markers of exposure. At the present work, trans,trans-muconic acid in urine from exposed individuals was determined by Capillary Electrophoresis (CE) and HPLC using UV detection. For HPLC, a pre-established method from literature using reversed phase column was utilized. A new analytical method was proposed using CE in two different conditions: one utilized a special capillary with high sensitivity optical cell and the other utilized a common capillary and an organic modifier added to the electrolyte. Both conditions showed interesting advantages, such as short-time analysis (15 min) and lower limit of detection (L.O.D = 25 &#181;g/L). Urine samples from smokers and non-smokers individuals were analyzed and the proposed method allowed statistical differentiation between these groups.

La intersección de las Avenidas José Granda y Universitaria, ubicado en el distrito de San Martín de Porres, Lima (conocido como Óvalo José Granda); es un cruce con un diseño geométrico no convencional, que tiene forma de rotonda, pero que no opera como tal; consta de un cruce semaforizado de cuatro accesos que cruzan la rotonda al interior de la misma, en los sentidos Norte-Sur, Sur-Norte, generando entrecruzamientos en todos los carriles de la rotonda y muy bajas velocidades, que son sumamente peligrosos en su operación. Para, mitigar el problema encontrado, se ha realizado el rediseño de la intersección implementando un intercambio vial semaforizado tipo diamante a nivel; para el cual se han aplicado dos alternativas de coordinación semafórica, ambas con control de tiempo fijo. De la modelación del tránsito vehicular en los software AIMSUN para el análisis de microsimulación y SYNCHRO para la optimización en la coordinación semafórica; de los tres escenarios evaluados (situación actual, alternativas 1 y 2), se compararon dos medidas de efectividad, el tiempo de demoras (seg/veh) y el número de paradas (#/veh/km), concluyendo que los resultados operacionales mejoran con la alternativa 1; sin embargo, empeoran con la alternativa 2, sometidas a evaluación contra la situación actual. Se recomienda analizar las alternativas planteadas con semaforización actuada (de tiempo flexible, activado por el tránsito); así como también, con paraderos de transporte público, se ubiquen fuera el área de análisis, para que no afecte la operación del diseño propuesto. / The intersection of José Granda and Universitaria avenues, located in the district of San Martín de Porres, Lima (known as Óvalo José Granda), is a junction with an unconventional geometric design, which is shaped like a roundabout, but does not operate as such. It consists of a traffic light crossing with four accesses that cross the roundabout inside it, in the North-South, South-North directions, generating intersections in all the lanes of the roundabout and very low speeds, which are extremely dangerous in its operation. To mitigate the problem encountered, the intersection has been redesigned by implementing a diamond-type traffic light interchange, at level; for which two alternatives of traffic light coordination have been applied, both with fixed time control. From vehicle traffic modeling in AIMSUN software for microsimulation analysis and SYNCHRO for traffic light coordination optimization; Of the three evaluated scenarios (current situation, alternatives 1 and 2), two measures of effectiveness were compared, the delay time (sec / veh) and the number of stops (# / veh / km), concluding that the operational results improve with alternative 1; however, they worsen with alternative 2, evaluated against the current situation. It is recommended to analyze the alternatives proposed with activated traffic lights (flexible time, activated by traffic); as well as, with public transport stops, are located outside the analysis area, so that they do not affect the operation of the proposed design. / Tesis

Esta tesis doctoral resulta de gran interés para las entidades operadoras y gestoras de sistemas de abastecimiento y saneamiento de agua que se encuentran interesadas en adoptar mecanismos holísticos para establecer necesidades de intervención en sus redes, atendiendo a una visión global de las políticas de la empresa, y no sólo al desempeño estructural de las tuberías. El objetivo general de la presente investigación es proponer una metodología de soporte a la decisión flexible, que incluya una forma para capturar la experiencia experta y su grado de incertidumbre asociado, y además que permita evaluar los criterios de mayor relevancia local, dentro del proceso tendiente a establecer las necesidades de intervención de tuberías y sectores de la red, haciendo uso de la lógica difusa como núcleo matemático fundamental que da estructura a la propuesta. Otros objetivos que complementan al anterior, se enfocan en la realización de un repaso detallado de los elementos influyentes en el proceso de deterioro de una tubería, en la revisión de protocolos de inspección y evaluación, y así mismo en un análisis crítico de diversas estructuras decisionales, que a juicio del autor resultan relevantes en el contexto de este estudio. La metodología propuesta para asignar prioridades de intervención se basa en el uso de la lógica difusa como eje fundamental, y en la definición y análisis de espacios decisionales para relacionar criterios relevantes. El problema de la incorporación de la incertidumbre que el experto posee para caracterizar cada criterio se ve debidamente solventado con la construcción de funciones matemáticas difusas, e igualmente con la conformación de matrices difusas de agregación. La propuesta permite simplificar el proceso al definir unidades de decisión, y reducir o eliminar totalmente la necesidad de utilizar pesos de importancia, al proponer una forma en que se pueden relacionar múltiples espacios de decisión. Como aporte principal de la investigación doctoral, se expone la estructura de la metodología decisional propuesta mediante la incorporación de la lógica difusa, su combinación con el análisis del espacio de decisión, y su aplicación a una red de abastecimiento del mediterráneo español. Los resultados se presentan a nivel de tuberías individuales, asignando un valor de prioridad de intervención a cada una de las 10485 tuberías que conforman la muestra poblacional elegida, y a nivel de sectores de la red, para 10 zonas del sistema. A través de diferentes análisis de sensibilidad se evidencian las fortalezas y debilidades de la propuesta. Otros aportes presentados en la tesis, que revisten especial importancia en este contexto, se plasman en: las aplicaciones de cuatro diferentes metodologías mediante igual número de casos de estudio (tanto para sistemas de abastecimiento como para sistemas de saneamiento), la presentación de un conjunto de directrices para la integración de bases de datos relativas a la gestión patrimonial de infraestructura; la propuesta de un plan básico de actuación para llevar a cabo procesos de intervención en las redes, aplicable en empresas gestoras de cualquier tamaño, y que implementa la metodología de decisión basada en lógica difusa; y la exposición de una herramienta informática sencilla, en la cual se sistematiza la metodología decisional propuesta, y que puede servir de ejemplo a las entidades gestoras para el desarrollo de un paquete más robusto y a medida de sus necesidades. / Parra Toro, JC. (2013). Desarrollo de un conjunto de herramientas de soporte a la decisión y su implementación en un plan de gestión técnica para la renovación de redes de abastecimiento y saneamiento de agua [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/33182

Tesis por compendio / [ES] La presente tesis, permitió indagar acerca de la problemática ambiental y las posibili-dades para la implantación de prácticas circulares, vinculadas específicamente con la didáctica proyectual de diseño. Dicho trabajo, como una respuesta a la responsabilidad que le ha cabido a la disciplina, respecto de la problemática medioambiental y la peren-toria necesidad de encontrar formas eficientes y ágiles para poder abordar proyectos de diseño, bajo requerimientos sostenibles. Y estas, dirigidas en particular para ser incorporadas de forma directa a la formación profesional universitaria, así como, en la praxis profesional del diseñador al interior de las empresas, y con especial énfasis en las que se definen como de pequeño y mediano tamaño. Los resultados que se han podido obtener, permitieron levantar un panorama general a modo de identificación y caracterización del contexto de interés. Tal como, de las condiciones presentes para conseguir avanzar en propuestas procedimentales que faciliten la toma de decisión en soluciones de diseño, alineadas con los requisitos establecidos por la institucionalidad ambiental vigente. Lográndose a partir de esto, el planteamiento de un modelo de aplicación didáctica, que considera la metodología y herramientas del ecodiseño, pero desde una perspectiva simplificada. Para poder con-tribuir de esta forma, con procedimientos ejecutivos que definan estrategias destina-das a la mejora ambiental. Las conclusiones de la investigación evidenciaron finalmente una ejecución efectiva en casos de diseño, asumidos estos, como encargos destinados a la validación pre-liminar del modelo. Considerándose para tal efecto, el ensayo en carreras universitarias de pregrado relacionadas con diseño e ingeniería, así como, en proyectos de tipo colaborativo, solicitados directamente por empresas regionales de manufactura. No obstante, aquello, la propuesta pudo estimarse aún como una versión de carácter inicial, abriéndose así, un espacio para continuas evaluaciones y mejoras para la misma. Quedando finalmente a la espera, de una implantación definitiva de dicho instrumento en el contexto formativo universitario y en el ámbito productivo-empresarial. / [CA] La present tesi, va permetre indagar sobre la problemàtica ambiental i les possibilitats per a la implantació de pràctiques circulars, vinculades específicament amb la didàctica projectual de disseny. Este treball, com una resposta a la responsabilitat que li ha cabut a la disciplina, respecte de la problemàtica mediambiental i la peremptòria necessitat de trobar formes eficients i àgils per a poder abordar projectes de disseny, sota reque-riments sostenibles. I estes, dirigides en particular per a ser incorporades de manera directa a la formació professional universitària, així com, en la praxi professional del dissenyador a l'interior de les empreses, i amb especial èmfasi en les quals es definixen com de petit i mitjana grandària. Els resultats que s'han pogut obtindre, van permetre alçar un panorama general a mode d'identificació i caracterització del context d'interés. Tal com, de les condicions presents per a aconseguir avançar en propostes procedimentals que faciliten la presa de decisió en solucions de disseny, alineades amb els requisits establits per la institu-cionalitat ambiental vigent. Aconseguint-se a partir d'això, el plantejament d'un model d'aplicació didàctica, que considera la metodologia i eines de l'ecodisseny però des d'una perspectiva simplificada. Per a poder amb-*tribuir d'esta manera, amb procedi-ments executius que definisquen estratègies destina-dones a la millora ambiental. Les conclusions de la investigació van evidenciar finalment una execució efectiva en casos de disseny, assumits estos, com a encàrrecs destinats a la validació *pre-liminar del model. Considerant-se per a tal efecte, l'assaig en carreres universitàries de pregrau relacionades amb disseny i Enginyeria, així com, en projectes de tipus col·laboratiu, sol·licitats directament per empreses regionals de manufactura. No obstant això allò, la proposta va poder estimar-se encara com una versió de caràcter inicial, obrint-se així, un espai per a contínues avaluacions i millores per a esta. Quedant finalment a l'espera, d'una implantació definitiva d'este instrument en el con-text formatiu universitari i en l'àmbit productiu-empresarial. / [EN] The present work delves into the environmental issues and explores the possibilities for the implementation of circular practices, specifically linked to the projective didactics of design. This work serves as a response to the responsibility inherent in the discipline, concerning environmental issues and the peremptory need to find efficient and agile ways to address design projects under sustainable requirements. These approaches are particularly aimed at direct integration into university professional education and, concurrently, into the professional practice of designers within companies, with a spe-cific emphasis on those categorized as small and medium-size enterprises. The obtained results have allowed for the development of a comprehensive over-view for the identification and characterization of the context of interest. Such as the current conditions to advance procedural proposals facilitating decision-making in design solutions aligned with the requirements established by current environmental regulations. This has resulted in the formulation of an instructional application that embraces the methodology and tools of eco-design but from a simplified perspective. This model aims to contribute to the development of executive procedures that define strategies for environmental improvement. The research conclusions ultimately demonstrated effective implementation in de-sign cases, considering them as assignments intended for the preliminary validation of the model. In pursuit of this objective, the trial was conducted in undergraduate uni-versity programs related to design and engineering, as well as in collaborative projects directly commissioned by regional manufacturing companies. Nevertheless, the proposal could still be regarded as an initial version, thus creat-ing room for ongoing evaluations and enhancements. Finally, it awaits the definitive implementation of this instrument within the university educational context and the productive business sphere. / Venegas Marcel, MES. (2024). Didáctica proyectual desde la perspectiva económica circular [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/207339 / Compendio