Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-31T12:20:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoTeoricoComplexo.pdf: 2354484 bytes, checksum: 80f0f32eb8a6fac1bd5aa7978b92d56f (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-02-01T12:21:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoTeoricoComplexo.pdf: 2354484 bytes, checksum: 80f0f32eb8a6fac1bd5aa7978b92d56f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-01T12:21:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoTeoricoComplexo.pdf: 2354484 bytes, checksum: 80f0f32eb8a6fac1bd5aa7978b92d56f (MD5) Previous issue date: 2014-12-12 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The Penicillin Binding Proteins (PBPs) are important for the development of new drugs against bacterial infections biological targets. This study was aimed to understand the interaction between the protein and cefoxitin 5 Penicillin-Binding (PBP5) of Escherichia coli (deposited in the PDB under the code 3MZE) through simulation Molecular Dynamics (MD), using the approach hybrid quantum molecular mechanics (QM/MM) and mechanical. As well as develop a prototype to evaluate, through computer simulation, the susceptibility of Gram negative bacteria against antibiotics. The analysis of antimicrobial susceptibility to antibiotics tested has shown that this strain of E. coli ATCC 8739 was sensitive to 5 antimicrobials study. The strain of E. coli derived from the clinical isolate was resistant to ciprofloxacin 5 μg and gentamicin 10 μg, intermediate sensitivity to cefepime 30 μg and ceftazidime 30 μg, and sensitivity to cefoxitina 30 μg. The difference in susceptibility of E. coli strain ATCC 8739 and strain of E. coli isolated from a clinical can show a molecular immunological memory of the bacteria. We observed no production of β-lactamases by the strain of E. coli derived from clinical isolate, suggested because no observed difference in antimicrobial susceptibility with respect to the presence or absence of EDTA on the disks containing the antibiotics. The analysis has revealed that protonation of the deprotonated His146, His151, His216 and His320 residues. The stabilization of the complex was studied after 0,6 ns of MD simulation. Moreover, a decomposition analysis in terms of energy was performed to determine the contributions of individual amino acid residues for protein-ligand interactions. The results revealed that cefoxitin has a strong interaction with Lis44, Lis210, Ser41, Gli212, His213, Glu246 residue, apart from water, which are important for stabilizing cefoxitin-PBP5 complex. The electrostatic potential map Molecular cefoxitin revealed a highly electrophilic center corresponding to the β-lactam ring, which promotes hydroxyl attack nuceofílico the serine residue of the E. coli PBP5 active site region. These results can give support the planning of new more selective and effective drugs to control bacterial infections. The experimental results were statistically consistent with the theoretical results thus this work can be used as a prototype for computing theoretical evaluate the antimicrobial susceptibility to Gram negative bacteria. This study may find applications in future planning and development of new and potent compounds with antimicrobial activity. Mainly in attempts to modify an inhibitor, particularly of the cephalosporin class in order to improve its selectivity and its activity. / As Proteínas de Ligação à Penicilina/“Penicillin Binding Proteins” (PLPs/PBPs) são alvos biológicos importantes para o desenvolvimento de novos fármacos contra infecções bacterianas. Neste estudo, objetivou-se, compreender a interação entre a cefoxitina e a Proteína 5 de Ligação à Penicilina (PBP5) da Escherichia coli (depositado no PDB sob o código 3MZE), através de simulação de Dinâmica Molecular (DM), usando a abordagem híbrida de mecânica quântica e mecânica molecular (QM/MM). Assim como, desenvolver um protótipo para avaliar, através de simulação computacional, a suscetibilidade de bactérias Gram negativas frente a antimicrobianos. A análise da suscetibilidade antimicrobiana aos antibióticos testados revelou que a cepa de E. coli ATCC 8739 foi sensível aos 5 antimicrobianos do estudo. A cepa de E. coli proveniente do isolado clínico apresentou resistência à ciprofloxacina 5 μg e à gentamicina 10 μg, sensibilidade intermediária à cefepime 30 μg e à ceftazidima 30 μg e sensibilidade à cefoxitina 30 μg. A diferença na suscetibilidade entre a cepa de E. coli ATCC 8739 e a cepa de E. coli proveniente de isolado clínico pode evidenciar uma memória imunológica molecular da bactéria. Observou-se ausência de produção de β-lactamases pela cepa de E. coli oriunda de isolado clínico, sugerida por não se ter observado diferença de suscetibilidade antimicrobiana com relação à presença ou à ausência de EDTA nos discos contendo os antimicrobianos. A análise de protonação revelou estarem desprotonados os resíduos His146, His151, His216 e His320. A estabilização do complexo estudado ocorreu após 0,6 ns de simulação de DM. Além disso, uma análise de decomposição em termos de energia foi realizada para determinar as contribuições individuais dos resíduos de aminoácidos para as interações proteína-ligante. Os resultados revelaram que a cefoxitina apresenta forte interação com os resíduos Lis44, Lis210, Ser41, Gli212, His213, Glu246, além da água, os quais são importantes para estabilizar o complexo cefoxitina-PBP5. O Mapa do Potencial Eletrostático Molecular da cefoxitina revelou um centro altamente eletrofílico na região correspondente ao anel β-lactâmico, o que favorece o ataque nuceofílico da hidroxila do resíduo de serina do sítio ativo da PBP5 de E. coli. Estes resultados podem dá suporte para o planejamento de novos fármacos mais seletivos e eficazes no controle de infecções bacterianas. Os resultados experimentais foram estatisticamente condizentes com os resultados teóricos, portanto, esse trabalho pode ser utilizado como um protótipo teórico computacional para avaliar a suscetibilidade antimicrobiana para bactérias Gram negativas. Esse estudo poderá encontrar aplicações futuras no planejamento e desenvolvimento de novos e potentes compostos com atividade antimicrobiana. Principalmente, nas tentativas de modificar um inibidor, em particular da classe das cefalosporinas, a fim de melhorar a sua seletividade e a sua atividade.

A Febre Purpúrica Brasileira - FPB- foi reconhecida como uma doença pediátrica fulminante, caracterizada por febre alta com rápida progressão para púrpura, choque e óbito. A grande maioria dos pacientes apresentaram conjuntivite prévia. O presente trabalho procura descrever os aspectos epidemiológicos desta doença, desde o surgimento dos primeiros casos, em 1984, em Promissão, Estado de São Paulo, Brasil. Foram registrados 277 casos distribuídos no Brasil em cinco Estados: São Paulo, Paraná, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul e Minas Gerais. Fora do Brasil, dois casos foram relatados na Austrália. Cerca de 89% dos casos ocorreram em crianças de até cinco anos de idade. A letalidade foi de 38%. Estima-se o período de incubação médio de 15 dias. O quadro inicial se caracteriza por conjuntivite e febre. O agente etiológico é a bactéria Haemophilus influenzae biogrupo aegyptius, clone invasivo, tendo sido isolado de sangue, liquor, lesão hemorrágica de pele, secreção de conjuntiva e de orofaringe em 1986, de pacientes no Estado de São Paulo. Os estudos moleculares identificaram características diferentes das descritas até então para o Haemophilus aegyptius isolado de surtos de conjuntivite. Os principais surtos da doença ocorreram em Serrana, Valparaíso no Estado de São Paulo e Maracaju no Estado do Mato Grosso do Sul. Em algumas localidades com surtos de conjuntivite se observou a presença de moscas (Diptera). Acredita-se que estes insetos tenham participação na disseminação da doença. O diagnóstico precoce da FPB é um fator importante para redução da letalidade. / Brazilian Purpuric Fever- BPF- has been recognized as a fulminant pediatric disease characterized by fever with rapid progression to purpura, shock and death. The vast majority of BPF patients have previously presented conjunctivitis. The present work aims to describe epidemiological aspects of BPF since the appearance of the first cases, in 1984, in Promissão, State of São Paulo, Brazil. It has been reported 277 cases in Brazil, distributed by five states: São Paulo, Paraná, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul and Minas Gerais. Outside Brazil, only two cases have been reported in Australia. About 89% from the total number of cases occurred in children aging five years old or less. The case fatality rate was 38%. The average incubation period is estimated as being 15 days. The initial clinical symptoms are conjunctivitis and fever. The etiologic agent of BPF is the bacteria Haemophilus influenzae biogroup aegyptius, invasive clone. It has been isolated from blood, cerebrospinal fluid, hemorrhagic skin lesion and conjunctival and orofarynx secretions in 1986, from São Paulo State patients. Molecular studies have identified different features from those described to H.aegyptius which have been isolated during conjunctivitis outbreaks since then. The most important BPF outbreaks occurred in Serrana and Valparaíso, State of São Paulo and in Maracaju, State of Mato Grosso do Sul. The presence of gnats (Diptera) has been observed in some of the places where conjunctivitis outbreaks have occurred. It is believed that these insects are associated with BPF transmission. Early diagnosis is an important factor in fatality reduction.

A Febre Purpúrica Brasileira - FPB- foi reconhecida como uma doença pediátrica fulminante, caracterizada por febre alta com rápida progressão para púrpura, choque e óbito. A grande maioria dos pacientes apresentaram conjuntivite prévia. O presente trabalho procura descrever os aspectos epidemiológicos desta doença, desde o surgimento dos primeiros casos, em 1984, em Promissão, Estado de São Paulo, Brasil. Foram registrados 277 casos distribuídos no Brasil em cinco Estados: São Paulo, Paraná, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul e Minas Gerais. Fora do Brasil, dois casos foram relatados na Austrália. Cerca de 89% dos casos ocorreram em crianças de até cinco anos de idade. A letalidade foi de 38%. Estima-se o período de incubação médio de 15 dias. O quadro inicial se caracteriza por conjuntivite e febre. O agente etiológico é a bactéria Haemophilus influenzae biogrupo aegyptius, clone invasivo, tendo sido isolado de sangue, liquor, lesão hemorrágica de pele, secreção de conjuntiva e de orofaringe em 1986, de pacientes no Estado de São Paulo. Os estudos moleculares identificaram características diferentes das descritas até então para o Haemophilus aegyptius isolado de surtos de conjuntivite. Os principais surtos da doença ocorreram em Serrana, Valparaíso no Estado de São Paulo e Maracaju no Estado do Mato Grosso do Sul. Em algumas localidades com surtos de conjuntivite se observou a presença de moscas (Diptera). Acredita-se que estes insetos tenham participação na disseminação da doença. O diagnóstico precoce da FPB é um fator importante para redução da letalidade. / Brazilian Purpuric Fever- BPF- has been recognized as a fulminant pediatric disease characterized by fever with rapid progression to purpura, shock and death. The vast majority of BPF patients have previously presented conjunctivitis. The present work aims to describe epidemiological aspects of BPF since the appearance of the first cases, in 1984, in Promissão, State of São Paulo, Brazil. It has been reported 277 cases in Brazil, distributed by five states: São Paulo, Paraná, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul and Minas Gerais. Outside Brazil, only two cases have been reported in Australia. About 89% from the total number of cases occurred in children aging five years old or less. The case fatality rate was 38%. The average incubation period is estimated as being 15 days. The initial clinical symptoms are conjunctivitis and fever. The etiologic agent of BPF is the bacteria Haemophilus influenzae biogroup aegyptius, invasive clone. It has been isolated from blood, cerebrospinal fluid, hemorrhagic skin lesion and conjunctival and orofarynx secretions in 1986, from São Paulo State patients. Molecular studies have identified different features from those described to H.aegyptius which have been isolated during conjunctivitis outbreaks since then. The most important BPF outbreaks occurred in Serrana and Valparaíso, State of São Paulo and in Maracaju, State of Mato Grosso do Sul. The presence of gnats (Diptera) has been observed in some of the places where conjunctivitis outbreaks have occurred. It is believed that these insects are associated with BPF transmission. Early diagnosis is an important factor in fatality reduction.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-05-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Introdução: o paciente com leucemia, principalmente aquele sob quimioterapia está exposto a diferentes agravos a sua imunidade, sendo a neutropenia intercorrência comum e frequentemente relacionada a ICS. Nas últimas décadas a epidemiologia das infecções no paciente neutropênico tem passado por constante mudança. Não bastasse a associação com mortalidade, os BGN têm cada vez mais implicado em desafio terapêutico, devido ao aumento da resistência e dificuldade no manejo da terapia empírica. O conhecimento da epidemiologia das ICS e dos fatores de risco para aquisição de ICS por BGN e BGN-MR são fundamentos para o adequado tratamento das complicações infecciosas. Casuística e Método: estudo retrospectivo das ICS de pacientes com leucemia, entre 2002 a 2007, em hospital terciário universitário. Foi realizada descrição epidemiológica dos agentes das ICS, assim como o perfil de susceptibilidade e análise dos fatores de risco para aquisição de ICS por BGN e por BGN-MR através de estudo caso-controle, seguido de análise uni e multivariada. Resultados: identificados 148 agentes de ICS em 64 pacientes com leucemia, sendo 55,4% eram BGN, 39,2% CGP e 5,4% fungos. Os agentes mais prevalentes foram SCoN (22,3%), P. aeruginosa (17,6%) e K. pneumoniae (10,8%). Entre os SCoN a resistência à oxacilina foi de 66,7%. Entre os BGN, 34,3% foram multirresistentes. O óbito ocorreu em até sete dias em 20,0% dos pacientes com ICS por CGP e 47,0% entre os que faleceram após ICS por BGN. Na análise multivariada os fatores identificados como independentemente relacionados a essa infecção foram a neutropenia (p = 0,003, OR 14,060, IC 2,457-80,465) e a presença de sinais e sintomas localizatórios (p = 0,002, OR 20,907, IC 2,953-148,001) para BGN. Na análise multivariada o uso prévio de glicopeptídeo mostrou-se independentemente relacionado a ocorrência de ICS por BGN-MR (p = 0,0,15, OR = 7,530, IC 1,477-38,399). A letalidade atribuída as ICS por BGN foi semelhante à por BGN-MR (20,4% e 19,1%), porém nos pacientes com ICS por BGN-MR o óbito foi mais precoce. Conclusão: nos seis anos de estudo foram isolados 148 agentes em ICS, predominando os BGN. Entretanto, no último ano, ocorreu um “equilíbrio” entre esses agentes e os CGP. Mais de 30% dos agentes isolados eram multirresistentes. Os fatores de risco independentes para a aquisição de BGN foram a presença de neutropenia e de sinais e sintomas localizatórios. Já para a aquisição de BGN-MR o fator de risco encontrado foi o uso prévio de glicopeptídeo. A evolução para óbito ocorreu em 55% das vezes na internação do episódio de ICS, sendo mais precoce entre os pacientes com BGN-MR. / chemotherapy, are exposed to various damages against their immunity. Neutropenia is one of the most common and is often related to BSI. Recently, the epidemiology of infections in neutropenic patients experienced frequent changes. GNB bloodstream infections have been increasingly involved in therapeutic challenge, due to the increased resistance, difficulty in empirical therapy and mortality. Knowledge of the epidemiology of BSI and risk factors for acquisition of GNB and MDR-GNB BSI are fundamental for the appropriate treatment of infectious complications. Patients and methods: We conducted a retrospective study of BSI in patients with leukemia, admitted in an university tertiary hospital from 2002 to 2007. Epidemiological description of pathogens of BSI, as well as susceptibility and analysis of risk factors for the acquisition of GNB and MDR-GNB BSI were evaluated. Results: 148 agents were found in 64 patients with leukemia, being 55.4% GNB, 39.2% GPC and 5.4% fungus. The more prevalent agents were SCoN (22.3%), P. aeruginosa (17.6%) and K. pneumoniae (10.8%). Resistance to oxacillin was indentified in 66.7% of SCoN and 34.3% of GNB were multi-drug resistant. Seven day mortality occurred in 20.0% of patients with GPC BSI and in 47.0% of patients with GNB BSI. Neutropenia (p = 0.003, OR 14.060, IC 2.457-80.465) and presence of signs and symptoms of bacteremia (p = 0.002, OR 20.907, IC 2.953-148.001) were factors related to GNB BSI by multivariate analysis. The second multivariate analysis showed that previous use of glycopeptides was independently related to the occurrence of MDR-GNB BSI (p = 0,015, OR = 7,530). The GNB BSI lethality was similar to that found in MDR-GNB BSI (20.4% and 19.1%) but patients with the second one died earlier. Conclusions: in this study, GNB were the most prevalent BSI agents. More than 30% of agents were multi-drug resistant germs. Independent risk factors for the acquisition of BGN were the presence of neutropenia and signs and symptoms at the moment of bacteremia. Previous use of glycopeptide was an independent risk factor for the acquisition of MDR-GNB. Evolution to death occurred in 55% of patients with BSI, being more premature among patients with MDR-GNB. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2018-05-21T14:55:49Z No. of bitstreams: 1 PDF - Mysrayn Yargo de Freitas Araújo Reis.pdf: 25441289 bytes, checksum: 518beaa4a3b4581b9a50e243986be6b6 (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2018-05-23T16:59:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Mysrayn Yargo de Freitas Araújo Reis.pdf: 25441289 bytes, checksum: 518beaa4a3b4581b9a50e243986be6b6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-23T16:59:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Mysrayn Yargo de Freitas Araújo Reis.pdf: 25441289 bytes, checksum: 518beaa4a3b4581b9a50e243986be6b6 (MD5) Previous issue date: 2017-03-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Bacterial Skin Infections (BSIs) includes a varied group of diseases caused by the invasion of bacteria into the epidermidis and adjacent soft tissues. Although the skin can host bacteria belonging to the normal cutaneous microbiota, such as, several speciessuch as, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis and Pseudomonas aeruginosa can be considered pathogens for several IBPs. Among the various antibiotic groups used in treatment of BSIs, azithromycin is mentioned in the literature. Azithromycin (AZ), is a semi-synthetic macrolide antibiotic of the azalide class and is a promising candidate for the treatment of BSIs due to their capacity of penetration in the tissues and wide spectrum of action for several bacterial species. The incorporation of AZ into new drugs delivery systems such as microemulsion (ME) can ensure release control, lower toxicity, lower doses, decrease in plasma peaks, protection of drug degradation or inactivation. The present work aims to encapsulate AZ into microemulsion systems, perform the characterization and confirm its antibacterial activity. From the pseudoternary phase diagram were developed and selected one type of O/W formulations composed of deionized water, isopropyl myristate, LAS , and Brij 52 for the encapsulation of AZ. Both formulations in the absence (MEB) and presence of drug (MEAZ) were presented as clear and stable systems. For MEAZ, the pH value (6.75) indicated an excellent compatibility for dermal administration. In addition, its high conductivity (630.1), allied with the differential scanning calorimetry (DSC) studies, suggested an O/A type system. The refractive index revealed the isotropic character, confirmed by the technique of polarized light microscopy. Transmission electron microscopy (MET) indicated the nanometric droplet size of the systems and the dynamic light scattering (DLS) technique was able to measure a diameter of 18.72 and 20.89 nm for MEB and MEAZ, respectively. From the rheological analysis we can attest to the Newtonian type behavior for both formulations. Finally, the antimicrobial activity of MEAZ against the strains of S.aureus, S.epidermidis and P.aeruginosa was confirmed. Studies necessary to trace the release profile and determination of minimal inhibitory concentration will be conducted so that the developed ME may represent a new safe and effective alternative in the complementary treatment of PPIs. / As infecções bacterianas da pele (IBPs) engloba um variado grupo de doenças causadas pela invasão de bactérias na epiderme e tecidos moles adjacentes. Embora a pele possa abrigar bactérias que pertencem a microbiota cutânea normal, muitas espécies tais como, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Pseudomonas aeruginosa podem ser consideradas agentes patógenos para várias IBPs. Dentre os vários grupos de antibióticos utilizados no tratamento das IBPs, pode ser citada a azitromicina (AZ). A AZ é um antibiótico macrolídeo semi-sintético da classe dos azalídeos, apresenta-se como um promissor candidato no tratamento das IBPs uma vez que possui a capacidade de penetração nos tecidos e largo espectro de ação para diversas espécies bacterianas. A incorporação de AZ em novos sistemas de liberação de fármacos visando a sua administração por via tópica, como as microemulsões (ME), pode garantir o controle da liberação, menor toxicidade, menor número de doses, diminuição dos picos plasmáticos, a proteção da degradação e/ou inativação do fármaco. O presente trabalho teve como objetivo incorporar a AZ em uma ME, realizar a sua caracterização e confirmar a sua atividade antibacteriana. A partir do diagrama de fases pseudoternário foi desenvolvida e selecionada uma microemulsão do tipo O/A compostas por água deionizada (fase aquosa), miristato de isopropila (fase oleosa), LAS e Brij 52 (tensoativos na proporção 9:1) para a incorporação de AZ. Ambas as formulações na ausência (MEB) e presença de fármaco (MEAZ) se apresentaram como sistemas límpidos e estáveis. Para a MEAZ, o valor de pH (6,75) indicou uma ótima compatibilidade para administração cutânea. Além disso, a sua elevada condutividade (630, 1µScm^-1), aliada aos estudos de calorimetria exploratória diferencial (DSC) sugeriram um sistema do tipo O/A. O índice de refração revelou o caráter isotrópico, confirmada pela técnica de microscopia de luz polarizada. A microscopia eletrônica de transmissão (MET) indicou o tamanho de gotículas nanométrico dos sistemas e a técnica de espalhamento de luz dinâmica (DLS) foi capaz de medir um diâmetro de 18,72 e 20,89 nm, para a MEB e MEAZ, respectivamente. A partir de análises reológicas pode-se atestar o comportamento do tipo newtoniano para ambas as formulações. Por último, foi atestada a atividade antimicrobiana da MEAZ contra as cepas de S. aureus, S.epidermidis e P. aeruginosa. Estudos necessários para traçar o perfil de liberação e determinação da concentração inibitória mínima serão conduzidos para que a ME desenvolvida possa representar uma nova alternativa segura e eficaz no tratamento complementar das IBPs.

Durante uma infecção, uma complexa seqüência de eventos é inkiada após a invasão do hospedeiro por microrganismos patogênicos. Escherichia coli enteroinvasora (EIEC), assim como Shigella, causa disenteria através da invasão da mucosa do cólon, levando à destruição tecidual e inflamação. Para que ocorra um processo infeccioso, porém, são necessários inóculos de 102 Shigella e 106 EIEC. Foram avaliados aspectos da resposta inflamatória desencadeada pela infecção por EIEC em modelo murino, comparativamente a Shigella. A infecção de macrófagos J774 por EIEC resultou em fagocitose bacteriana, comprometimento da viabilidade do macrófago e produção de citocinas. Macrófagos de camundongos C57BU6 infectados com EIEC produziram NO, que parece ser importante no controle da infecção. Foi observado que camundongos INOS nocaute apresentaram maior produção de citocinas pró-inflamatórias e maior letalidade após infecção do que os selvagens. EIEC induziu a migração de granulócitos e monócitos para o peritônio, e a secreção de citocinas por estas células. Houve proliferação de linfócitos em resposta aos antígenos solúveis de EIEC, mas não foi detectada produção de citocinas por estes linfócitos.Comparativamente a Shigella, EIEC escapou mais lentamente do macrófago, induziu menor produção de citocinas pró-inflamatórias e NO, e menor ativação dos linfócitos T. Estes dados sugerem o desafio com EIEC desencadeia uma resposta menos severa no hospedeiro do que Shigella, o que explicaria a forma mais branda de disenteria e resolução mais rápida do processo infeccioso causado por EIEC. / During an infection, a complex sequence of events in iniciated after invasion of the host by pathogenic microorganisms. Enteroinvasive Escherichia coli (EIEC) and Shigella cause dysentery by means of invading the colonic mucosa, leading to tissue destruction and inflammation. In arder for an infectious process to occur, inocula of 102 Shigella are necessary incontrast to e 106 EIEC. The infection of J774 macrophages by EIEC resulted in phagocytosis of the bacterium, a hindering of the viability of the macrophage and in the production of cytokines. Macrophages obtained from C57BU6 mice infected with EIEC produced NO, which seems to be important for the control if infection. We observed that in iNOS knockout mice, both the production of proinflammatory cytokines and lethality were higher than that observed in wild-type mice. EIEC induced the migration of granulocytes and monocytes to the peritoneum as well as the secretion of cytokines by these cells. We observed a proliferation of Iymphocytes in response to inoculation with soluble EIEC antigens, however, in this case, the production of cytokines was not detected. Compared to Shigella, EIEC was slower in escaping from the macrophage, and induced a shyer production of pro-inflammatory cytokines and NO, as well as promoted a smaller activation of T Iymphocytes. These data suggest that when challenged with EIEC, the host produces a less severe response than that elicited by Shigella, which might explain why the infectious process with EIEC produces a milder form of dysentery with a quicker resolution.

O Staphylococcus aureus é um patógeno extremamente versátil tanto em termos de resistência a antimicrobianos quanto em virulência. O S. aureus resistente a oxacilina (ORSA) adquire a resistência a toda a classe de beta-Iactâmicos através de um cassete cromossômico (SCCmec) que carrega o gene mecA, mas pode carregar outros genes de resistência. A soma desses genes de resistência e de virulência torna o S. aureus um grave problema para hospitais do mundo inteiro, que nos últimos vem se estendendo também à comunidade. Foram estudados 50 isolados de ORSA, dentre os quais 15 pertencentes ao clone endêmico brasileiro (CEB) e 3 cepas SCCmec tipo IV isoladas entre 1995 e 1999. Adicionalmente, 32 amostras ORSA SCCmec tipo IV isoladas no Hospital de Clínicas de São Paulo. As amostras foram analisadas quanto ao perfil de sensibilidade a antimicrobianos, classificação do tipo de SCCmec, perfil de virulência quanto a toxinas e adesinas, classificação do grupo agr (locus regulatório dos genes de virulência) e sua funcionalidade, avaliação da expressão dos genes de toxinas e genotipagens por PFGE e MLST. Observou-se que as cepas CEB são multiresistentes. Já as cepas SCCmec IV apresentam um perfil de sensibilidade maior, uma vez que possuem um tipo de SCCmec que não carrega outros genes de resistência além do gene mecA. As amostras CEB SCCmec IV não apresentaram grandes diferenças no conteúdo de toxinas e adesinas. Apenas as cepas SCCmec IV isoladas entre 1995 e 1999 apresentaram um maior conteúdo de genes de virulência que as isoladas no HC. As cepas SCCmec IV isoladas no Brasil não são altamente virulentas como descrito em outros países. Não possuem fatores de virulência como a Leucocidina Panton-Valentine, toxinas exfoliativas e enterotoxinas. Por outro lado, possuem a alfa-hemolisina e a leucocidina LukD-LukE, toxina ainda pouco estudada, que vem sendo apresentada em pesquisas como causa de lesões oculares graves e diarréias pós-antibioticoterapia. Não foi possível estabelecer uma relação entre o tipo de agr e o perfil de virulência das cepas, uma vez que os perfis foram muito semelhantes mesmo entre cepas de grupos agr diferentes. / Staphylococcus aureus is an extremely successful pathogen for it is both highly resistant to antibiotics in addition to being virulent. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) acquires resistance to the beta-Iactam antibiotics through the acquisition of a chromosomal cassette (SCCmec) which carries the mecA gene, and can carry other resistance genes. The presence of these genes in S. aureus makes it a serious problem in hospitaIs worldwide. In spite of usually being restricted to the nosocomial environment, over the last few years MRSA has been spreading throughout the community. Fifty nosocomial MRSA strains were studied, including 15 belonging to the Brazilian endemic clone (BEC), 3 type IV SCCmec strains isolated between 1995-1999, and 32 type N SCCmec isolates from the \"Hospital de Clínicas (HC) de São Paulo\". The isolates were analyzed as to their susceptibility profile, SCCmec type, virulence and expression profile (toxins and adhesins), agr group classification and functionality, PFGE and MLST profiles. BEC isolates proved to be multiresistant to antibiotics. Type IV SCCmec strains presented a susceptibility profile to a number of drugs of different antimicrobial classes. BEC and type N SCCmec strains did not present significant differences in their virulence profiles. Only the type IV SCCmec strains isolated in 1995-1999 presented a greater virulence profile than those isolated in the HC. Type IV SCCmec strains isolated in Brazil were not highly virulent as described in other countries. Brazilian isolates usually do not possess virulence factors such as the Panton-Valentine leukocidin, exfoliative toxins and enterotoxins. On the other hand, they usually possess alpha-hemolysin and the LukED leukocidin, which is still very poorly studied that have been presented in papers like cause of serious ocular lesions and post-antimicrobial therapy diarrhea. A relation between the agr type and the virulence profile was not established, for virulence profiles were very similar even between isolates belonging to different agr groups.

A leptospirose é uma zoonose causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira. Apesar de sua importância, a patogênese e virulência permanecem não elucidadas. As leptospiras não apresentam proteases conhecidas de degradação de matriz extracelular, atividade crucial para a penetração e disseminação nos hospedeiros. Assim, foi proposta a investigação da interação de leptospiras com plasminogênio/plasmina e as implicações para a infecção. As leptospiras capturam plasminogênio na superfície, e este é convertido à plasmina por ativadores do hospedeiro. A plasmina associada propicia degradação de componentes de matriz extracelular, habilidade de penetração e evasão imune. Adicionalmente, as leptospiras estimulam a expressão de ativadores de plasminogênio e metaloproteases de matriz. Os resultados contribuem para o conhecimento do processo infeccioso das leptospiras, descrevendo um novo mecanismo de patogenicidade. / Leptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic bacteria from genus Leptospira. Despite its importance, the pathogenicity and virulence remain to be elucidated. The leptospires do not present known proteases able to degrade extracellular matrix, an activity essential for the penetration and dissemination within the hosts. Therefore, we proposed the investigation of the leptospiral interaction with plasminogen/plasmin and its implications for infection. Leptospires capture plasminogen on the surface, which is converted to plasmin by hosts activators. Surface-bound plasmin confers extracellular matrix components degradation, penetration ability and immune evasion. Additionally, leptospires stimulate plasminogen activators and matrix metaloproteases expressions. The results constitute one possible mechanism that contributes to the invasion process and the rapid dissemination of Leptospira.

Bordetella pertussis e B. parapertussis são agentes etiológicos da coqueluche. A IL-12 liga a imunidade inata e adaptativa. Investigamos alguns mecanismos que controlam a síntese de IL-12 em macrófagos medulares murinos (MfDM) ativados in vitro com estas duas espécies de bactérias. Demonstramos que IL-12p40 e TNF-a foram produzidos pelos MfDM ativados com qualquer uma das bactérias. A síntese de IL-12p40 foi dependente de TNF-a, MyD88 e NFkB e independente de MAPK p38 e ERK 1/2. Durante a estimulação com B. pertussis a produção de IL-12p40 foi dependente de TLR-4, mas com B. parapertussis envolveu outras vias independentes de MyD88 e TLR-4. Estas bactérias não induziram a síntese de IL-12p70, necessitando de sinais moleculares adicionais de IFN-g, que aumentou a síntese desta citocina. A produção de IL-12 p70 aumentou após o bloqueio das vias PI3K, MAPK p38 e ERK1/2 assim como após a adição exógena de PT sobre MfDM ativados com B. parapertussis. Portanto, diversas vias de sinais dependentes e independentes de TLR-4 controlam a produção de IL-12 neste modelo. / Bordetella pertussis and B. parapertussis are etiological agents of whooping cough. IL-12 links the innate and adaptive immunity. We investigated the ability of both bacteria to modulate IL-12 by in vitro activation of bone marrow derived macrophages (MfDM). We demonstrated that IL-12p40 and TNF-a were produced after stimulation of cells with either bacterium. IL-12p40 production was dependent on TNF-a, MyD88 and NFkB but independent of MAPK p38 and ERK 1/2. During B. pertussis activation the production of IL-12p40 was dependent on TLR-4, while B. parapertussis activation was MyD88 and TLR-4 independent. However, the bacteria alone did not induce IL-12p70 synthesis, requiring IFN-g as an additional signal. Evidences indicated MAPK p38, ERK1/2 and PI3K during B. pertussis and B. parapertussis activation, as well as the exogenous addition of PT to B. parapertussis activated MfDM, was critical for the up regulation of IL-12p70. This finding indicates that different TLR-4 dependent and independent signaling pathways may control the production of IL-12 in this model.

Foram analisados dentes decíduos com cárie dental profunda de 110 crianças, sendo coletadas 103 amostras de polpa necrosada e 7 de fístulas gengivais. Morfotipos bacterianos foram visualizados pelas colorações de Gram e Brenn-Brown, e os DNA foram obtidos e usados na detecção bacteriana por PCR. A predominância de cocos Gram positivos (81,8%) e cocobacilos Gram negativos (49,1%) foram observadas. Em 88 amostras de polpas, microrganismos com maior ocorrência foram: Enterococcus spp. (50%), P. gingivalis (49%), F. nucleatum (25%) e P. nigrescens (11,4%). Foram detectados em fístulas: P. gingivalis (43%), Enterococcus spp. (28,6%), F. nucleatum (14,3%), P. nigrescens (14,3%), e D. pneumosintes (14,3%). Os nossos resultados permitem concluir que a microbiota envolvida nas infecções pulpares em dentes decíduos é similar em termos qualitativos àquela observada em dentes permanentes. Entretanto, a predominância de Enterococcus spp. e P. gingivalis deve ser levado em consideração pelos clínicos em casos necessários de tratamento endodôntico em crianças com dentição decídua. / In this study, deciduous teeth with deep caries from 110 children, with 103 pulp necrosis and 7 gingival fistula samples were evaluated. Bacterial morphotypes were visualized by Gram staining and Brown-Brenn. DNA were obtained and used in bacterial detection by using PCR. The predominance of Gram-positive cocci (81.8%) and Gram-negative coccobacilli (49.1%) were observed. In 88 pulp samples a high frequency of microrganisms were observed: Enterococcus spp. (50%), P. gingivalis (49%), F. nucleatum (25%) and P. nigrescens (11.4%). In fistulas were detected: P. gingivalis (43%), Enterococcus spp. (28.6%), F. nucleatum (14.3%), P. nigrescens (14.3%), and Dialister pneumosintes (14.3%). Our results, suggest that the involved microbiota in pulp infections of deciduous teeth are qualitatively similar than those permanent teeth. However, a predominance of Enterococcus spp. and P. gingivalis was observed, and it must be considered in the endodontic treatment in children with primary dentition.