Diversas espécies de Caesalpinia têm uso medicinal e algumas atividades biológicas foram comprovadas experimentalmente, como as atividades antitumoral, anti-inflamatória e antimicrobiana. No entanto, não existem relatos da espécie Caesalpinia peltophoroides, conhecida popularmente como sibipiruna, em relação às atividades biológicas e substâncias isoladas. O presente trabalho tem por objetivo o estudo químico e a avaliação das atividades antitumoral e anti-inflamatória das folhas de Caesalpinia peltophoroides e a avaliação antitumoral do óleo essencial das flores. Para tal estudo foram obtidas frações acetato de etila e hidroalcoólica das folhas da planta para o estudo fitoquímico a partir do extrato etanólico bruto para as avaliações farmacológicas. A proposta do trabalho fitoquímico foi estudar os extratos mais polares das folhas seguindo uma ordem de polaridade dos solventes extratores, uma vez que são escassas as informações de estudos químicos de Caesalpinia peltophoroides. O trabalho descreve o estudo fitoquímico realizado com o extrato etanólico bruto e as frações acetato de etila e hidroalcoólica das folhas. Os extratos foram fracionados e posteriormente submetidos a purificações. O fracionamento da fração acetato de etila das folhas levou ao isolamento da rutina. O composto isolado foi identificado por técnicas espectroscópicas usuais. A atividade anti-inflamatória foi avaliada no teste da retirada da pata (Von Frey eletrônico) e no modelo de edema de pata comparando os resultados com os grupos controle. Os resultados mostraram uma redução significativa no limiar da retirada da pata e redução do edema da pata quando os extratos foram testados. Esses resultados indicam que os extratos das folhas de C. peltophoroides testados, apresentam atividade anti-inflamatória e antinociceptiva, mas estudos futuros ainda são necessários para desvendar o mecanismo da ação anti-inflamatória. Para a atividade antitumoral realizada com as frações foram utilizadas linhagens celulares de carcinoma de pulmão (A549), adenocarcinoma mamário (MCF7), melanoma (HT144) e carcinoma de fígado (HepG2), provenientes de tumores humanos. Somente a fração acetato de etila inibiu a viabilidade celular de melanoma e carcinoma de pulmão. A atividade antitumoral do óleo essencial das flores foi avaliada contra células de melanona murino (B16F10-Nex2). O valor de CI50 obtido foi de 69 ± 5 μg/mL indicando alto potencial antiproliferativo do óleo em compação ao controle positivo cisplatina (53 ± 4 μg/mL). / Several species of Caesalpinia have medicinal and some biological activities have been proven experimentally, such as anti-tumor, anti-inflammatory and antimicrobial activity. However, there are no reports of Caesalpinia peltophoroides species, popularly know as sibipiruna, when it comes to biological activities and isolated substances. This paper aims to study the chemical and evaluation of antitumor and anti-inflammatory activity of leaves and isolated compounds from Caesalpinia peltophoroides. For this study were obtained from ethyl acetate and hydroalcoholic fractions of leaves for phytochemical studies, beyond the crude ethanol extract for pharmacological evaluations. The purpose of this study was to study the phytochemical more polar extracts of leaves following an order of polarity of solvent extractors, since there are few studies of chemical information Caesalpinia peltophoroides. The paper describes the phytochemical study performed with crude ethanol extract and ethyl acetate and hydroalcoholic fractions of leaves. The extracts were fractionated and then subjected to purification. Fractionation of the ethyl acetate fraction of leaves led to the isolation of rutin. The compound were identified by usual spectroscopic techniques. The antiinflammatory activity was evaluated in the paw withdrawal test (electronic Von Frey) and in the model of paw edema by comparing the results with the control groups. The results showed a significant reduction in paw withdrawal threshold and a reduction in paw edema when the extracts were tested. These results indicate that extracts of leaves of C. peltophoroides tested, exhibit anti-inflammatory and antinociceptive but further studies are still needed to discover the mechanism of anti-inflammatory action. For the antitumor activity performed with fractions the cell lines used were lung carcinoma (A549), breast adenocarcinoma (MCF7), melanoma (HT144) and liver carcinoma (HepG2), from human tumors. Only the ethyl acetate fraction inhibited cell viability of melanoma and lung carcinoma. The antitumor activity of essential oil was evaluated against murine melanotic cell (B16F10). The IC50 value obtained was 69 ± 5 μg/mL, indicative of a high potential to the crude oil in comparison to positive control cysplatin (53 ± 4 μg/mL). / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O cisto periodontal apical (CPA) forma-se como resultado de uma inflamação crônica induzida por um processo infeccioso bacteriano, com a presença de células inflamatórias e citocinas, as quais estão relacionadas com a formação e crescimento cístico. Os linfócitos são as células predominantes no infiltrado inflamatório de lesões periapicais, e podem se diferenciar em células das respostas imunes Th1 e Th2. Assim como os linfócitos, os macrófagos podem se diferenciar em subtipos celulares. Macrófagos M1 e M2 desempenham um papel importante no direcionamento da resposta imune, devido a sua capacidade de promover a diferenciação de linfócitos em Th1 e Th2 respectivamente. Assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a presença da resposta Th1 e macrófagos M1, por meio da expressão de IL-1β, TNF- α e IL-6, e a resposta Th2, pela presença de macrófagos M2 por meio da expressão de CD163 na cápsula cística de 24 casos de CPAs. A avaliação dos biomarcadores foi realizada através de reações imuno-histoquímicas, dividindo a espessura da cápsula em regiões superficial e profunda. Observou-se uma maior expressão das citocinas IL-1β, IL-6, TNF-α e macrófagos M2 na região superficial (p < 0,001). Ausência de correlação foi notada entre a intensidade da inflamação e CD163 na região superficial (p = 0,082; r = 0,362) e profunda (p = 0,415; r = 0,174). Verificou-se, ainda, correlação positiva entre IL-1β e IL-6 e a intensidade da inflamação em ambas regiões. A correlação das expressões das citocinas IL-1β, IL-6 e TNF-α mostrou-se positiva em ambas regiões. Em relação ao CD163, houve correlação positiva quando correlacionado com o TNF-α (p = 0,007; r = 0,537) e a IL-6 (p = 0,018; r = 0,478) na região superficial. Nossos resultados demonstraram a presença da resposta imune Th1 e macrófagos M1 nos CPAs por meio da expressão das citocinas TNF-α, IL-1β, IL-6 e resposta imune Th2 por meio da presença de macrófagos M2 nestas lesões, sendo estas células associadas às citocinas TNF-α e IL-6. / The radicular cyst (RC) results from chronic inflammation induced by a bacterial infectious process and reveals the presence of inflammatory cells and cytokines, which are related to the cystic formation and growth. The lymphocytes are the predominant cells in the inflammatory infiltrate of periapical lesions. These cells can differentiate into cell subtypes and produce two types of cellular immune responses: T-helper type 1 (Th1) and T-helper type 2 (Th2). In the same way as lymphocytes, the macrophages can differentiate into cell subtypes. M1 and M2 macrophages play an important role in the targeting of the immune response, due to their ability to promote the differentiation of lymphocytes towards Th1 and Th2 pathways, respectively. The aim of the present study was to evaluate the presence of Th1 response and macrophages M1, through the expression of IL-1 β, TNF-α and IL-6, and Th2 response and the presence of macrophages M2 through the expression of CD163 in cystic capsule of twenty-four cases of RCs. The biomarkers were evaluated by immunohistochemical reactions, dividing the capsule thickness into superficial and deep regions. A greater expression of the cytokines IL-1β, IL-6, TNF-α and M2 macrophages in the superfcial region (p < 0.001) was observed. Absence of correlation was noted among the intensity of inflammation and CD163 in the superficial (p = 0.082, r = 0.362) and deep region (p = 0.415; r = 0.174). There was also a positive correlation among IL-1β and IL-6 and the intensity of inflammation in both regions. The correlation of IL-1β, IL-6 and TNF-α cytokines expression was positive in both regions. In relation to CD163, there was a positive correlation when correlated with TNF-α (p = 0.007, r = 0.537) and IL-6 (p = 0.018, r = 0.478) in the superficial region. Our results demonstrated the presence of the Th1 immune response and M1 macrophages in CPAs through the expression of TNF-α, IL-1β, IL-6 cytokines and Th2 immune response through the presence of M2 macrophages in these lesions. In addition, M2 cells were associated with TNF-α and IL-6 cytokines. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

A dor caracteriza-se por uma resposta resultante da integração central de impulsos nervosos periféricos, ativados por estímulos locais. A nocicepção é a transdução de estímulos mecânicos, térmicos e químicos em impulsos elétricos por meio de nociceptores. Sua estimulação faz com que as informações sejam conduzidas através de fibras aferentes primárias, C e A-δ, que detectam estímulos nocivos e expressam o receptor TRPV1. Como tratamento da dor, a acupuntura é um método eficaz que traz benefícios terapêuticos como a analgesia. Para isso, o presente trabalho tem o objetivo de investigar o papel dos diferentes receptores das fibras aferentes nociceptivas A-δ e C, na condução dos estímulos produzidos pela acupuntura no controle do processo da hiperalgesia inflamatória aguda e neuropática, mediante ação de histamina, bradicinina, substância P, glutamato, serotonina e acetilcolina. Camundongos foram avaliados pelo teste de vonFrey digital. Após indução da hiperalgesia inflamatória por administração de CFA i.pl ou hiperalgesia neuropática (CCI- Constrição Crônica do nervo isquiático), foi administrado 20μL de glutamato ou histamina ou bradicinina ou serotonina ou substância P ou acetilcolina na pata direita traseira no acuponto E36. Após a aplicação de CFA i.pl, a dose 0,03μg foi eficaz para ACh. Para bradicinina e histamina, a dose de 30μg obteve efeito. Para o glutamato e serotonina, 3μg, 0,3μg e 0,03μg foram eficazes e para a substância P, 0,03μg foi eficaz. Após a CCI 0,3μg e 3μg de acetilcolina alteraram o efeito hiperalgésico, e para o glutamato, bradicinina, histamina, serotonina e substância P, todas as doses foram eficazes de acordo com seus respectivos tempos. De acordo com os resultados obtidos, sustenta-se a hipótese que esses mediadores estão envolvidos no efeito da acupuntura manual nos modelos de dor inflamatória e neuropática. / Pain is characterized by a resultant response from the central integration of peripheral nerve impulses triggered by local stimuli. The nociception is the transductional of mechanical thermal and chemical stimuli into electrical impulses via nociceptors. Such impulses are conducted through primary afferents, C-δ and A, which detect noxious stimuli and express the TRPV1 receptor. Acupuncture is an effective pain treatment that brings therapeutic benefits as analgesia. Because of this, the present study aims to investigate the role of different receptors of nociceptive afferent A-δ and C fibers, in the conduction of stimuli produced by acupuncture in control of the process of acute and neuropathic inflammatory hyperalgesia by action of histamine, bradykinin, substance P, glutamate, serotonin, and acetylcholine. Mice were evaluated by digital vonFrey test. After induction of inflammatory hyperalgesia by i.pl CFA administration or neuropathic hyperalgesia (CCI Chronic Constriction of the sciatic nerve), it was administered 20μL of either glutamate or histamine or bradykinin or serotonin or substance P or acetylcholine in the right hind leg at acupoint E36. After application of the CFA i.pl, the dose of 0,03μg dose was effective to ACh. For bradykinin and histamine, the dose of 30 μg was obtained. For serotonin and glutamate, 3μg, 0,3μg and 0,03μg were effective and substance P, 0,03μg was effective. After the CCI 0,3μg and 3μg acetylcholine altered the hyperalgesic effect, and glutamate, bradykinin, histamine, serotonin and substance P. In addition, all doses were effective in accordance with their respective times. The results supports the hypothesis that these mediators are involved in the effect of acupuncture in manual models of inflammatory and neuropathic pain. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Made available in DSpace on 2017-07-21T14:13:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Liliane Werle Lima.pdf: 3601191 bytes, checksum: 5783e9d4437866bebca28c4080abc069 (MD5) Previous issue date: 2014-11-10 / Pesticides are widely used around the world for pest control and guarantee increased productivity. As is harmful to insects and weeds, are also toxic to humans . Pesticides are related to alterations of the immune system, are neurotoxic, and involved with alterations em endocrine system, besides interfering with metabolism. Exposure to pesticides is monitored by measurement of biomarkers, especially cholinesterase , and through changes in laboratory tests. The most commonly used pesticides are those belonging to the class of organophosphates, whose mechanism of action is irreversible inhibition of cholinesterase. Pesticides being involved in alterations of the immune system, and cardiovascular disease, this study aimed to evaluate the activity of myeloperoxidase (present in phagocytic cells) in individuals chronically exposed to pesticides, in addition to other laboratory markers. This study included 79 volunteers , divided into 3 groups : 1 ) EDP : direct exposure to pesticides ; 2) EIP : indirect exposure to pesticides , and 3) C : control, volunteers not exposed, or low exposure to pesticides. Laboratory tests for glucose, total cholesterol and fractions , triglycerides , AST, ALT, urea, creatinine, myeloperoxidase (MPO) , alpha-1- acid glycoprotein (AGP), high sensitive C-reactive protein (Hs-CRP), total antioxidant capacity, cholinesterase were performed and CBC . There were significant increases in urea in the EDP group. High levels of MPO, AGP and glucose were found for the EDP and EIP groups. The Hs-CRP showed a direct correlation with the values of AGP, but was elevated only for the EIP group. Significant reduction in total antioxidant capacity of serum was found in groups EDP and EIP. The cholinesterase values showed significantly higher activity in the EDP group. With these results we concluded that chronic exposure to pesticides can lead to an adaptive increase in cholinesterase activity resulting in decreased anti-inflammatory action of acetylcholine, with increased levels of myeloperoxidase and other markers of inflammation. / Os praguicidas são largamente utilizados em todo o planeta para controle de pragas e garantia de aumento de produtividade. Assim como são nocivos para insetos e ervas daninhas, também são tóxicos para os seres humanos. Os pesticidas estão relacionados com alterações do sistema imunológico, nervoso, endócrino, alem de interferir no metabolismo. A exposição aos praguicidas é monitorada pela dosagem de biomarcadores, especialmente a colinesterase, e através de alterações em exames laboratoriais. Os pesticidas mais usados são aqueles pertencentes à classe dos organofosforados, que tem como mecanismo de ação a inibição irreversível das colinesterases. Estando os pesticidas envolvidos em alterações do sistema imunológico, e com a doença cardiovascular, este estudo teve por objetivo avaliar a atividade da enzima mieloperoxidase (presentes em células fagocíticas) em indivíduos expostos cronicamente a pesticidas, alem de outros marcadores laboratoriais. Este estudo incluiu 79 voluntários, divididos em 3 grupos: 1) EDP: exposição direta aos praguicidas; 2)EIP:exposição indireta aos praguicidas; e 3) C: controle, voluntários com pouca ou nenhuma exposição aos praguicidas. Foram realizados exames laboratoriais para dosagem de glicose, colesterol total e frações, triglicerídeos, TGO, TGP, ureia, creatinina, mieloperoxidase (MPO), alfa-1-glicoproteína ácida (AGP), proteína C reativa ultrassensível (PCR-us), colinesterase, capacidade antioxidante total e hemograma. Ocorreram aumentos significativos na ureia no grupo EDP. Níveis elevados de MPO, AGP e glicose foram encontrados para os grupos EDP e EIP. A PCR-us apresentou correlação direta com os valores de AGP, contudo mostrou-se elevada apenas para o grupo EIP. Significante redução na capacidade antioxidante total do soro foi encontrada nos grupos EDP e EIP. A colinesterase apresentou valores de atividade significativamente maiores no grupo EDP. Com estes resultados concluímos que a exposição crônica aos pesticidas pode levar a um aumento adaptativo da atividade da colinesterase resultando em diminuição da ação anti-inflamatória da acetilcolina, com aumento dos níveis de mieloperoxidase e outros marcadores da inflamação.

A estimulação química das fibras aferentes nociceptivas através da injeção de diferentes substâncias álgicas vem sendo estudada em modelos de dor muscular em animais. A carragenina é um dos agentes que produz inflamação aguda e é freqüentemente utilizada em modelos de dor muscular. O nosso objetivo é aprofundar nossa compreensão e explorar em maior detalhe a participação das células gliais (astrócitos e microglia), de citocinas pró-inflamatórias, prostanóides e do óxido nítrico, após a indução de miosite aguda, correlacionando com modelos comportamentais nociceptivos. Para tanto, serão avaliadas as atividades dos mediadores, previamente descritos, na medula espinal dos ratos com e/ ou sem indução de miosite, através do método de Western blotting. Tais investigações poderão vir a ser uma abordagem totalmente inovadora para tentar entender quais são alguns dos mediadores envolvidos neste modelo de dor. Assim, os dados obtidos neste projeto poderão elucidar os mecanismos envolvidos na dor músculo-esquelética, a qual se enquadra nas patologias de difíceis tratamentos e de grande relevância clínica. / Chemical stimulation of nociceptive afferent fibers through the injection of different substances has been studied in different models of muscle pain in animals. Carrageenan is one of the agents that produce inflammation and is often used in models of muscle pain. Our goal is to explore in greater detail the involvement of glial cells (astrocytes and microglia), pro-inflammatory cytokines, prostanoids and nitric oxide after induction of acute myositis and correlate it with nociceptive behavioral models. It will be assessed the activity of these mediators in the spinal cord after induction of myositis in rats, using Western blotting assay. Such investigations may be a totally new approach to try to understand how some mediators are involved in this kind of pain. Thus, the data obtained in this project will elucidate the mechanisms involved in musculoskeletal pain, which are of difficult treatment and of great clinical relevance.

A prevalência de asma tem aumentado em crianças e nas comunidades que adotam um estilo de vida ocidental e se tornam mais urbanizadas. A teoria da higiene sugere que a exposição a infecções e contato não higiênicos na infância pode proteger contra o desenvolvimento de asma. Probióticos são micro-organismos vivos que conferem um benefício à saúde do hospedeiro. O tratamento com Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 protegeu camundongos contra infecções intestinais, preveniu a translocação bacteriana e aumentou a produção de IL-10. Até o momento, não há descrição do uso de Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 na prevenção e/ou tratamento da asma. Os objetivos deste trabalho foram avaliar os efeitos da administração de Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 na prevenção da asma e os mecanismos envolvidos. Camundongos Balbc machos de 6 a 8 semanas foram sensibilizados duas vezes com ovalbumina (OVA), com uma semana de intervalo, e desafiados com OVA diariamente por três dias consecutivos. Os camundongos receberam por gavagem Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 diariamente, dez dias antes da primeira sensibilização e durante todo o período de sensibilização e desafios, totalizando 27 administrações. O grupo controle recebeu apenas salina ou PBS. Assim quatro grupos, de 6 a 8 camundongos, foram estudados: Prev. SAL/PBS, Prev. OVA/PBS, Prev. SAL/Sac e Prev. OVA/Sac. Após a sensibilização e desafios, os animais foram anestesiados, ventilados com um pequeno ventilador para animais FlexiVent® (Scireq, Montreal, QC, Canadá) e submetidos a medidas in vivo da mecânica pulmonar na condição basal e após a administração de concentrações crescentes de aerossóis com metacolina. Após, o lavado broncoalveolar (LBA) foi coletado para contagem total e diferencial de células. As citocinas IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 e IFN- foram dosadas no LBA e homogenato pulmonar. Foi realizada histoquímica para visualização e quantificação de inflamação e colágeno. Observamos que o grupo Prev. OVA/PBS apresentou aumento significativo na hiper-responsividade brônquica (RRS: p<0,0001; RN: p<0,01 e G: p<0,05), o número total de células (p<0,0001), número de eosinófilos (p<0,001), e nos níveis de IL-4 (p<0,05) e IL-13 (p<0,05) quando comparado ao grupo Prev. SAL/PBS. O grupo Prev. OVA/Sac, em comparação ao grupo Prev. OVA/PBS apresentou redução na hiper-responsividade brônquica (RRS: p<0,001; RN: p<0,01; G: p<0,05), no número total de células (p<0,05), número de eosinófilos (p< 0,001) e níveis de IL-4 (p<0,05) no LBA. Em comparação com o grupo Prev. OVA/PBS, a administração de Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 reduziu os níveis de IL-5 (p<0,05) e IL-13 (p<0,05) no homogenato do pulmão, e as células inflamatórias no pulmão (p<0,001). Adicionalmente, houve aumento nos níveis de IL-10 (p<0,05) no tecido pulmonar do grupo OVA/Sac em comparação ao grupo Prev. OVA/PBS. Conclui-se que a Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 atenuou as principais características da asma em um modelo animal e, consequentemente, pode ter um efeito benéfico na prevenção da asma. / The prevalence of asthma has increased in children and communities that adopt a Western lifestyle and become more urbanized. The hygiene hypothesis suggests that exposure to infections early in life can reduce the risk of asthma and other allergic diseases. Probiotics are live micro-organisms that confer a health benefit to the host. Treatment with Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 protected mice against intestinal infections, prevented bacterial translocation and increased IL-10 production. There is no study of Saccharomyces cerevisiae in the prevention or treatment of asthma. The objective of this study was to evaluate the effects of viable Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 administration in the prevention and treatment of asthma and the mechanisms involved. Male Balb/c mice were sensitized twice with ovalbumin (OVA) intraperitoneally, one week apart, and challenged with OVA intranasally for three days. Mice were treated by gavage with Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 10 days before OVA sensitization and during challenges. Control mice received saline or PBS on the same days. After challenge, mice were ventilated with a small animal ventilator (FlexiVent®) and in vivo measurements of bronchial hyperresponsiveness were performed with increasing concentrations of methacoline aerosol (6.25, 12.5, 25 and 50 mg/ml). Bronchoalveolar lavage(BAL) was collected to quantify total and differential cell counts. Levels IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 and IFN- in BAL and lung homogenate were measured by ELISA. Inflammatory cell number and collagen deposition were assed in lung tissues. Oral treatment with Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 significantly decreased airway hyperresponsiveness, measured by total resistance (p<0,0001), central airway resistance(p<0,001) and tissue resistance (p<0,05). Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 significantly attenuated total cell number (p<0,05) and the influx of eosinophil (p<0,001) to the airway lumen. Furthermore, inflammatory cell number in lung peripheral (p<0,001 and levels of IL-4 (p<0,05) in BAL and IL-5 (p<0,05) and IL-13 (p<0,05) in lung homogenate were significantly diminished by Saccharomyces cerevisiae UFMG 905.Of note, Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 restored IL-10 (p<0,05) levels in lung tissue. In conclusion, oral administration of Saccharomyces cerevisiae 905 UFMG attenuated major asthma-like characteristics in a mouse model. These results showed that Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 might have potential for prevention of asthma.

Sepse e choque séptico são causas frequentes de morte nas unidades de terapia intensiva, sendo responsável pelo alto custo global de internação, segundo DATA-SUS. Sabendo-se que o paciente diabético apresenta um maior risco de infecção e que 22% dos indivíduos com sepse apresentam diabetes, é de extrema importância o melhor entendimento da sua fisiopatologia no paciente diabético para que medidas intervencionistas sejam desenvolvidas, preservando vidas. O projeto buscou avaliar a sepse experimentalmente através do modelo de ligadura e perfuração do ceco (CLP - 2 perfurações) em ratos Wistar machos sadios e tornados diabéticos através da injeção endovenosa de aloxana (42 mg/kg, i.v., 10 dias). Além disso, buscamos avaliar se o tratamento com insulina alteraria as variáveis escolhidas. O trabalho avaliou parâmetros hematológicos e bioquímicos como uréia, creatinina, alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST) e fosfatase alcalina (FAL). Após 6 horas da realização da CLP foram coletados lavados broncoalveolares (LBA) e peritoneal (LPe) com o objetivo de estudar o perfil de citocinas através da dosagem das interleucinas (IL)-1&#946;, IL-6, IL-10, fator de necrose tumoral (TNF)-&#945; e cytokine-induced neutrophill chemoattractant (CINC)-1 e CINC-2, celularidade total e específica. Rim, pulmão e fígado foram coletados para análises morfológicas e da atividade da mieloperoxidase (MPO). Após 6 horas de CLP observamos que a hematimetria, hemoglobina, plaquetometria e celularidade do LBA não sofreram alterações nem após o tratamento com insulina. A sepse provocou diminuição da leucometria total nos animais diabéticos e controles, aumento da celularidade total do LPe com um predomínio de polimorfonucleares, que foi semelhante em ambos os grupos; aumento da concentração no LPe de IL-1&#946;, IL-6, CINC-1, CINC-2 e IL-10; as concentrações do TNF-&#945; permaneceram idênticas em ambos os grupos. Em relação aos marcadores hepáticos, foram observados que os animais diabéticos possuem os maiores valores de ALT, AST e FAL em relação ao grupo controle e já apresentavam uma disfunção morfológica de hepatócitos, porém, sem infiltrado neutrofílico. O tratamento com insulina reduziu os valores dessas enzimas em níveis próximos aos do controle. Dos marcadores renais, apenas a uréia sofreu aumento significativo nos animais diabéticos em relação aos controles, sendo exacerbada pela CLP. Alterações glomerulares, como capilares dilatados e redução do espaço de Bowman foram observadas nos animais com sepse, os quais não sofreram influência após o tratamento com insulina. Estes dados sugerem que a insulina teve um efeito hepato-protetor e que o padrão causado pela sepse nos animais controles e diabéticos não foi modificado pelo tratamento com insulina. / Sepsis and septic shock are common cause of death in intensive care units (ICU) and according to Brazilian DATA-SUS is one of the major causes of high cost hospitalization. Since diabetic patients have a higher risk of infection and represent approximately 22% of all the septic individuals, it is extremely important to understand the pathophysiology of sepsis in diabetic patients in order to develop interventional measure. The objective of this study is to evaluate the experimental sepsis model by cecal ligation and puncture (CLP 2 punctures) in Wistar healthy males rendered diabetic by intravenous injection of alloxan (42 mg/kg, i.v., 10 days). The study analyzed hematological and biochemical parameters such as urea, creatinine, alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) and alkaline phosphatase (ALP). Furthermore, we studied how insulin treatment could modulate these parameters. After 6 hours of CLP bronchoalveolar (BAL) and peritoneal lavages (PeL) were collected and a cytokine profile was accessed: interleukin (IL)-1&#946;, IL-6, IL-10, tumor necrosis factor (TNF)-&#945;, cytokine-induced neutrophill chemoattractant (CINC)-1, CINC-2. Samples from kidney, lung and liver were collected for morphological analysis and for the measurement of myeloperoxidase activity (MPO). After 6 hours of CLP, red blood cell count, hemoglobin, platelet count, cytokine profile and cellularity of the BAL did not change. In addition, insulin treatment did not change these parameters. CLP caused a decrease in total leukocyte count in both groups diabetic and control rats. Moreover, this model induced a rise in total PeL cellularity with a predominance of polymorfonuclear cells, which was similar in both groups control and diabetic rats. In the PeL, proinflammatory cytokines such as IL-1&#946;, IL-6, CINC-1, CINC-2 and the antinflammatory cytokine IL-10 were enhanced. The TNF-&#945; concentrations remained similar in both groups. Hepatic markers inferring in hepatocyte dysfunction were higher in the diabetes-induced animals what was in part restored after insulin administration. Regarding renal markers, only urea levels were enhanced in diabetic rats and worsened after CLP induction. Morphological changes, such as capillary dilatation and reduced Bowman space was already observed in the kidney of animals with sepsis, insulin treatment did not corrected the values. These data suggest that insulin had a hepato-protective effect but further changes were not observed after insulin treatment.

Peçonhas de serpentes são ricas em proteínas, peptídeos, compostos inorgânicos, lipídeos e carboidratos. Entre os principais constituintes protéicos podemos destacar as metaloproteases (SVMPs), responsáveis pelos processos hemorrágicos e inflamatórios, induzindo a formação de edema e infiltração de leucócitos. Da peçonha de Bothrops atrox, foi isolada uma metaloprotease denominada Batroxase. Esta SVMP foi isolada a partir de três passos cromatográficos, sendo duas exclusões moleculares, uma clássica e outra em FPLC, e uma troca aniônica utilizando CLAE. As SVMPs podem ser classificadas de acordo com os domínios existentes em sua estrutura. Entre as diversas classes, existem as SVMPs da classe PI, que possuem fraca atividade hemorrágica e baixo peso molecular. A Batroxase apresentou massa molecular de 27 kDa (dados não mostrados) e DHM de 10µg, podendo ser classificada como uma metaloprotease de classe PI. A atividade proteolítica da Batroxase foi avaliada sobre diferentes substratos presentes na matriz extracelular e em algumas proteínas presentes no plasma, responsáveis pela ativação da coagulação. Dos constituintes da matriz extracelular (MEC) avaliadas, a Batroxase apresentou atividade sobre o colágeno tipo IV e sobre a fibronectina, esta atividade facilita o processo hemorrágico, desde que estes substratos são encontrados na MEC de tecidos epiteliais e vasos sanguíneos. A atividade sobre proteínas presentes no plasma foi avaliada, evidenciando a capacidade de degradar o fibrinogênio e a fibrina, principalmente a cadeia . Esta atividade pode ser inibida na presença de inibidores de metaloproteases EDTA e EGTA, e na presença do redutor de proteínas -mercaptoetanol. A atividade sobre a fibrina e sobre o fibrinogênio interfere no processo de coagulação, dificultando a interrupção de processos hemorrágicos. Após a formação de um coágulo, a Batroxase foi capaz de dissolvê-lo completamente, capacidade esta, relacionada à sua atividade fibrinolítica. As plaquetas quando na presença da Batroxase não foram induzidas a se agregarem, e quando, na adição de ADP, não foi capaz de inibir a agregação. A atividade inflamatória foi elucidada, evidenciando a participação na formação de edema e hiperalgesia, bem como infiltração de leucócitos. Na avaliação farmacológica foi observada a participação de mediadores pró-inflamatórios como a histamina via receptores H1, a serotonina via receptores 5-HT1, e a formação de leucotrienos no edema e a histamina via receptores H1 e formação de leucotrienos na hiperalgesia. A infiltração de leucócitos observada foi mediada principalmente por neutrófilos nas primeiras horas, seguida do aumento de células mononucleares. A Batroxase possui citotoxicidade ausente ou baixa sobre as linhagens tumorais testadas, com análise significativa apenas para JURKAT, B16-F10, SK-BR3 em altas concentrações. Em células como EL-4 e PBMC sugerem que a Batroxase apresenta atividade imunorregulatória, induzindo proliferação celular em baixas concentrações e inibindo este crescimento em concentrações mais altas como observado em células JURKAT, A-20 e PBMC. É capaz de estimular a produção de citocinas próinflamatórias e antiinflamatórias de maneira distinta induzindo preferencialmente a produção de citocinas do padrão Th1 como IFN-, que, após adição de estímulo policlonal anti-CD3, apresentou atividade supressora na capacidade proliferativa de células T, inibindo a produção de citocinas do padrão Th1 como a IL-2 e IFN-, citocinas do padrão Th2 como a IL-4 e citocinas do padrão Th17 como a IL-17A. / Snake venoms are rich in components like proteins, peptides, lipids, carbohydrates and inorganic compounds. Among their main proteins components, the metalloproteinases (SVMPs) are responsible for hemorrhagic and inflammatory effects, edema formation and leucocytes recruitment. Batroxase, a new metalloproteinase isolated from Bothrops atrox snake venom, was purified using three chromatographic steps, namely: two molecular exclusion steps, one as classic chromatography and another as FPLC, and an anionic exchange in HPLC. SVMPs can be classified by specific domains in their structure. Among the various classes, there are SVMP PI, which has weak hemorrhagic activity and low molecular weight. Batroxase showed a molecular mass of 27 kDa (data not shown) and DHM of 10 µg. The proteolytic activity was evaluated on different substrates in the extracellular matrix and some plasma proteins, responsible for activation of coagulation. Batroxase was able to degrade extracellular matrix (ECM) components like, type IV collagen and fibronectin, inducing bleeding process, since these components are found in the ECM of epithelial tissues and blood vessels. The activity of proteins present in plasma was evaluated, demonstrating the ability to degrade fibrinogen and fibrin, especially the chain, which can be inhibited in the presence of metalloproteinase inhibitors as EDTA and EGTA, as well as with a reducing protein agent -mercaptoethanol. Activity on fibrin and fibrinogen interfere with the clotting process, making difficult to interrupt processes like bleeding. After clot formation, Batroxase was able to dissolve it completely, which is related to their fibrinolytic activity. The platelets in the presence of Batroxase were not induced to aggregate, and when, in addition to ADP, was not able to inhibit aggregation. Inflammatory activity has been elucidated, suggesting the participation in edema and hyperalgesia, as well as infiltration of leukocytes. Pharmacological evaluation was observed with participation of pro-inflammatory mediators such as histamine via H1 receptors, serotonin 5-HT1 receptor via, and the synthesis of leukotrienes and histamine on edema via H1 receptors and synthesis of leukotrienes in hyperalgesia. Infiltration of leukocytes was observed mainly mediated by neutrophils in the early hours, followed by the increase of mononuclear cells. Batroxase have absent or very low cytotoxicity on tumor cell lines tested, with significant only for Jurkat analysis, B16-F10, SK-BR3 in high concentrations. In EL-4 cells and PBMC, inducing cell proliferation at low concentrations and inhibiting this growth in higher concentrations as observed in Jurkat cells, A-20 and PBMC. It can stimulate production of proinflammatory and antiinflammatory cytokines, preferentially induces the production of Th1 cytokines such as IFN-, which, after addition of polyclonal anti-CD3 stimulation showed activity in suppressing proliferative capacity of T cells, inhibiting the production of Th1 cytokines such as IL-2 and IFN-, Th2 cytokines such as IL-4 and Th17 cytokine pattern as IL-17A.

INTRODUÇÃO: A obesidade é uma doença multifatorial associada com alto risco de desenvolver resistência à insulina (RI), diabetes melito tipo 2 (DT2), síndrome metabólica (SM) e doenças cardiovasculares (DCV). Os mecanismos moleculares da fisiopatologia das doenças metabólicas não são totalmente compreendidos, emergindo a necessidade de novas estratégias. As modificações epigenéticas, especialmente os miRNAs, podem representar uma importante ferramenta, uma vez que são relacionados com o desenvolvimento de diversas doenças complexas, como as metabólicas. OBJETIVO: Avaliar o perfil de expressão de miRNAs séricos de indivíduos com obesidade, síndrome metabólica e resistência à insulina e sua relação com os mecanismos moleculares envolvidos nas suas fisiopatologias. CASUÍSTICA E MÉTODOS: O estudo foi realizado no Instituto Dante Pazzanese de Cardiologia (IDPC) e no Hospital Universitário da Universidade de São Paulo (HU/USP). Um total de 233 indivíduos foram distribuídos em três grupos: peso normal (n=47), sobrepeso (84) e obesos (102), de acordo com seu índice de massa corpórea (IMC). Os mesmos pacientes também foram re-classificados em com SM (n=89) e sem SM (n=144) de acordo com recomendações da Federação internacional de Diabetes e em com RI (n=123) e sem RI (n=110). As informações biodemográficas e amostras de sangue foram coletadas para testes laboratoriais clínicos e análises de perfis de expressão de miRNA pela PCR array (372 alvos). Analises in silico com a ferramenta Ingenuity Pathway Analysis (IPA) foi realizada para integração do perfil de miRNAs e seus genes alvos com doenças metabólicas. RESULTADOS: Os pacientes obesos e com RI, apresentaram aumento similar das concentrações de marcadores dos perfis lipídico, glicídico e inflamatório quando comparado com indivíduos com peso normal e sem RI. O perfil de miRNAs dos grupos obesos e com RI mostrou que o miR-346 (p=0,010; p=0,019), 483-5p (p=0,034; p=0,020), 296-3p (p=0,010; p=0,008), 1224-3p (p=0,044; p=0,012) e 95-3p (p=0,003; p=0,019) foram expressos similarmente nestes pacientes quando comparados a seus respectivos controles. Estes miRNAs, por predição in silico, desempenham um importante papel na regulação de vias metabólicas associadas a doenças hepáticas gordurosas, inflamação, DCV e doenças metabólicas. Na SM, o grupo portador da doença apresentou altas concentrações de marcadores do perfil lipídico, glicídico e inflamatório. O perfil de expressão de miRNA indicou uma expressão reduzida do miR-183-5p (p=0,008) e miR-301a-3p (p=0,007) e aumentada do miR-542-5p (p=0,003), miR-424-3p (p=0,040), miR-326 (p=0,037), miR-421 (p=0,023) e miR-574-3p (p=0,001) no grupo SM comparado ao sem SM. A análise de regressão linear múltipla stepwise indicou que a expressão aumentada do miR-421 explica em 22,5% o aumento da associação de Hb1Ac, LDL-C, PAI-1, HOMA-IR, glicose e insulina (p <0,001, p=0,014, p=0,009, p <0,001, p=0,001 e p=0,007, respectivamente). Além disso o miR-421 foi predito in silico estar associado com a regulação de 11 mRNA alvos envolvidos em vias regulatórias de doenças como infarto do miocárdio, obesidade, diabetes melito, esteatose hepática, tolerância a glicose, distúrbio do metabolismo da glicose, hiperglicemia e resistência à insulina, bem como atua em vias regulatórias da resposta inflamatória, sendo associado com a variabilidade na quantidade de citocinas, massa do tecido adiposo e quantidade de leptina no sangue. Mediante a relação do miR-421 com a homeostase da glicose, sua expressão foi testada em pacientes com RI e interessantemente se manteve aumentada nesses pacientes em comparação com os sem RI (p=0.014). CONCLUSÕES: Os miR-346, miR-483-5p, miR-296-3p, miR-1224-3p e miR-95-3p podem ser considerados potenciais biomarcadores como preditores de DCV em pacientes obesos e resistência à insulina e o miR-421 um potencial biomarcador precoce de predição de risco de DCV em pacientes com síndrome metabólica. / BACKGROUND: Obesity is a multifactorial disease associated with high risk of developing insulin resistance (IR), Diabetes mellitus type 2 (DT2), metabolic syndrome (MetS) and cardiovascular disease (CVD). Molecular mechanisms of metabolic diseases\' pathophysiology are not fully understood, emerging the need for new strategies. Epigenetic modifications, especially miRNAs, may represent an important tool, since they are related to the development of several complex diseases, such as those metabolic. OBJECTIVE: Evaluate miRNA-derived serum expression profile in individuals with obesity, MetS and IR and their relationship with molecular mechanisms involved in the metabolic disease pathophysiology. MATERIAL AND METHODS: The study was conducted at the Dante Pazzanese Institute of Cardiology (IDPC) and at University Hospital of the University of São Paulo (HU/USP). Two hundred thirty-three subjects were distributed into three groups: normal weight (n = 47), overweight (n=84) and obese (n=102), according to their body mass index (BMI). The same patients were also re-classified as MetS (n=89) and Non-MetS (n=144) according to recommendations of the International Diabetes Federation and in IR (n=123) and Non-IR. Biodemographic data were registered and blood samples were collected for clinical laboratory tests and miRNA expression profiles by PCR array (372 targets). In silico analysis using Ingenuity Pathway Analysis (IPA) tool was performed to integrate the miRNA profile and their target genes with metabolic diseases. RESULTS: Obese and IR patients had similar increases in the concentrations of lipid, glucose and inflammatory markers when compared to individuals with normal weight and without IR, respectively. miRNA profile of obese and IR groups showed that miR-346 (p = 0.010, p = 0.019), 483-5p (p = 0.034, p = 0.020), 296-3p (p = 0.010, p = 0.008), 1224-3p (p = 0.044, p = 0.012) and 95-3p (p = 0.003, p = 0.019) were similarly expressed in these patients in comparison to their respective controls. These miRNAs, by in silico prediction, play an important role in the regulation of metabolic pathways associated with fatty liver diseases, inflammation, CVD and metabolic diseases. In MetS, patients diagnosed with the disease showed high concentrations of lipid, glycogen and inflammatory markers. The miRNA expression profile indicated a reduced expression of miR-183-5p (p=0.008) and miR-301a-3p (p=0.007) and increased miR-542-5p (p=0.003), miR- 3 (p=0.040), miR-326 (p=0.037), miR-421 (p=0.023) and miR-574-3p (p=0.001) in the MetS group compared to Non-MetS. Stepwise multiple linear regression analysis indicated that increased expression of miR-421 explain in 22.5% increased of Hb1Ac, LDL-C, PAI-1, HOMA-IR, glucose and insulin (p<0.001, p=0.014, p=0.009, p<0.001, p=0.001 and p=0.007, respectively). In addition the miR-421 was predicted in silico to associated with regulation of eleven mRNA of gene targets involved in regulatory pathways of diseases such as myocardial infarction, obesity, diabetes mellitus, hepatic steatosis, glucose tolerance, glucose metabolism disorder, hyperglycemia and insulin resistance, as well inflammatory response and is also associated with variability in the amount of cytokines, adipose tissue mass and amount of leptin in the blood. Due the relationship of miR-421 with glucose homeostasis, the miRNA expression was tested in patients with IR. Interestingly, miR-421 remained increased in these patients compared to those without IR (p = 0.014). CONCLUSIONS: The miR-346, miR-483-5p, miR-296-3p, miR-1224-3p and miR-95-3p may be potential biomarkers to predict CVD in obese and IR patients, while the miR-421 is a potential biomarker to predict CVD in MetS patients.

É conhecido que o sistema colinérgico, via receptor nicotínico a7, atua como atenuador do processo inflamatório. O lítio é utilizado no tratamento do transtorno afetivo bipolar e, em microdoses, foi benéfico para o tratamento da doença de Alzheimer. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos do tratamento crônico com microdoses de lítio para a formação de mediadores inflamatórios em cérebros de camundongos jovens, após injeção intraperitoneal de LPS, e se os receptores a7 estavam envolvidos nesse processo. Após sete meses de tratamento, foi observado que o grupo lítio-LPS apresentou formação da memória espacial, diferentemente do grupo água-LPS. Oito dias após a injeção de LPS, os níveis de IL-6, TNF-a, IL-10 e pGSK-3b/GSK-3b estavam iguais em todos os grupos, evidenciando que o processo inflamatório já estava terminado. Além disso, não houve diferença com relação à densidade de CAT e a7. Não foi possível comprovar ou excluir o efeito anti-inflamatório das microdoses de lítio. Portanto, o desenho experimental deverá ser ajustado. / It is known that the cholinergic system, via a7 nicotinic receptors, acts as attenuator of the inflammatory process. Lithium is used in the treatment of bipolar disorder and microdosing was beneficial for the treatment of Alzheimer\'s disease. The aim of this study was to evaluate the effects of chronic treatment with lithium microdoses for the formation of inflammatory mediators in the brain of young mice after intraperitoneal injection of LPS, and if a7 receptors were involved in this process. After seven months of treatment, animals treated with lithium-LPS presented spatial memory, while water-LPS animals did not. Eight days after the induction of acute inflammation levels of IL-6, TNF-a, IL-10 and pGSK-3b/GSK-3b were the same in all groups, indicating that the inflammatory process had been completed. Still, there was no difference with respect to the density of CAT and a7. It was not possible to confirm or exclude the anti-inflammatory effect of microdoses of lithium. So, the experimental design will be adjusted.