As metaloproteinases são abundantes em venenos de serpentes. Estas enzimas são homólogas às de mamíferos, encontradas em níveis elevados em inflamações articulares. Neste estudo avaliou-se a capacidade da BaP1, induzir: i) a inflamação e incapacitação articulares e a participação do TNF-<font face=\"symbol\">a e PGE2 nesses efeitos e ii) a ativação de macrófagos em cultura e a natureza de sua interação com estas células. A BaP1 induziu aumento da permeabilidade vascular, liberação de TNF-<font face=\"symbol\">a, MMP-9 e PGE2 e acúmulo de leucócitos na cavidade articular e tecido sinovial. Ainda, induziu dor articular. O pré-tratamento dos animais com indometacina ou anti-TNF-<font face=\"symbol\">a reduziu a dor e o influxo leucocitário, induzidos pela BaP1. A BaP1 induziu a expressão de COX-2 e de TNF-<font face=\"symbol\">a e a liberação desta citocina, em macrófagos isolados. Nestas células detectou-se a internalização da BaP1. Em conclusão, a BaP1 induz inflamação e nocicepção articulares, dependentes de TNF-<font face=\"symbol\">a e PGE2. A COX-2 deve estar envolvida na liberação de PGE2 e os macrófagos são alvos importantes para as ações dessa metaloproteinase. / Metalloproteinases are major enzymes in snake venoms showing high grade of homology with mammal matrix metalloproteinases, present in high levels in inflamed joints. In this study we examined the ability of BaP1, to induce: i) inflammation and hypernociception in rat articular joints and participation of TNF-<font face=\"symbol\">a and PGE2 in these effects, and ii) activation of cultured macrophages. BaP1 increased vascular permeability, induced release of TNF-<font face=\"symbol\">a, PGE2 and pro-MMP-9 in joint cavities, and leucocyte influx into joint cavities and synovial tissues. Moreover, BaP1 induced articular hypernociception. Treatment of animals with indomethacin or antiserum anti-TNF-<font face=\"symbol\">a significantly reduced hypernociception and leukocyte influx induced by BaP1. Incubation of macrophages with BaP1 caused expression of TNF-<font face=\"symbol\">a and COX-2 as well as TNF-<font face=\"symbol\">a release. In conclusion, BaP1 induces inflammation and hypernociception in articular joints. These effects are dependent on PGE2 and TNF-<font face=\"symbol\">a. COX-2 may contribute for BaP1-induced PGE2 release and macrophages are key targets for BaP1 induced effects.

Assim como visto nos vertebrado, os invertebrados também possuem um sistema imune bastante complexo, apresentando respostas humorais e celulares. Esta última é a principal forma de defesa, envolvendo células amebóides móveis capazes de isolar e/ou eliminar material estranho. Em equinodermos, as células envolvidas nestas respostas são categorizadas como celomócitos, uma denominação genérica que engloba vários tipos celulares encontrados nas cavidades corporais e no tecido conjuntivo. Entretanto, além da função imune, são reportados como tendo outros papéis diversos, como excreção, digestão, transporte e estocagem de nutrientes e a síntese e deposição de fibras de colágeno e da matriz extracelular Não existe consenso sobre quais os papéis específicos desempenhados por estas células num organismo saudável e nem diante de um processo inflamatório. Assim, o presente trabalho foi realizado para caracterizar o processo inflamatório no espinho de Eucidaris tribuloides causado por sabinella troglodytes, um molusco ectoparasita no espinho. A primeira parte do trabalho traz a caracterização das células da cavidade celomática. Para investigá-las foi realizada uma abordagem integrada onde os celomócitos foram descritos por meio da utilização de células vivas, citoquímica e microscopia eletrônica de transmissão. Foram encontrados sete tipos celulares, sendo um novo e dois pouco conhecidos. Com esta abordagem inicial, foi possível obter as ferramentas necessárias para investigar o processo inflamatório. Para estudar o processo inflamatório no espinho de E. tribuloides, utilizou-se uma abordagem estrutural, combinando histologia, microscopia eletrônica de varredura e microtomografia computadorizada, assim como celular/molecular. Os dados indicam que a inflamação causada pelo molusco parece ser um evento local, que altera tanto a matriz orgânica quanto a calcária, mas parece não se propagar para a cavidade celomática do hospedeiro / The invertebrates, as well as vertebrates, also have a very complex immune system, presenting humoral and cellular responses. The latter is their main form of defense, involving mobile amoeboid cells capable of isolating and/or eliminating foreign material. In Echinodermata, the cells involved in these responses are categorized as coelomocytes. This is a generic term that encompasses various cell types found in the body cavities and connective tissue. However, in addition to immune function, they are reported as having various other roles, such as excretion, digestion, transport and nutrient storage and the synthesis and deposition of collagen fibers and extracellular matrix. There is no consensus on what the specific role played by each one of these cells in healthy individuals and the knowledge about the inflammatory process is much worse. Thus, the present study was performed to characterize the inflammatory process in the spine of Eucidaris tribuloides caused by Sabinella troglodytes, a spine ectoparasites gastropod. The first part of the study provides the characterization of the cells of the coelomic cavity. To investigate them, an integrated approach was used, where the coelomocytes were described through the use of living cells, immunocytochemistry and transmission electron microscopy. Seven cell types were found: one new and two poorly known. This initial approach enables us to obtain the necessary tools to investigate the inflammatory process. To study the inflammatory process in the spine of E. tribuloides, we used a structural approach, combining histology, scanning electron microscopy and computed microtomography, and the cellular/molecular one. The data indicate that inflammation caused by snail appears to be a local event, which alters both the organic and calcareous matrix, but does not seem to be reflected within the coelomic cavity of the host

O emprego da solução de hipoclorito de sódio em Endodontia data de 1936 quando Walker a introduziu na forma de soda clorada. Desde então, essa veio a se constituir na solução mais bem aceita como irrigante para fins endodônticos. Nos últimos anos, atribuições de grande importância relativas ao desempenho das soluções de hipoclorito de sódio, têm sido referidas ao controle do seu pH. Este trabalho tem por objetivo avaliar a resposta inflamatória do tecido conjuntivo do dorso de ratos frente ao emprego de soluções de hipoclorito de sódio em diferentes concentrações e valores de pH. Para tanto, 36 ratos receberam quatro feridas circulares confeccionadas por um punch. Sobre cada três dessas feridas foi gotejada uma solução diferente, enquanto que a última foi utilizada para controle. Os tratamentos foram realizados em triplicata. Após a irrigação das feridas, os ratos foram sacrificados em 3, 7 e 14 dias. Os fragmentos foram fixados e corados com hematoxilina e eosina para análise histológica. A análise histológica mostrou que aos 14 dias quase todos os espécimes encontravam-se totalmente epitelizados, com fenômenos inflamatórios somente no tecido conjuntivo subjacente, com exceção do grupo no qual foi utilizado a solução de hipoclorito de sódio 5% pH 11. / Sodium hypochlorite has been used as an endodontic irrigant since 1936, when Walker used it as Sodium Chlorine. Since then it has became the most well acceptable endodontic irrigant. During the last few years many studies have reported the importance of pH control. This study evaluates the inflammatory response of some endodontic irrigations solutions in the subcutaneous connective tissue of mice. Thirty six mice were obtained from the Biomedical Sciences Institute at the University of São Paulo. Their backs were divided in four quadrants and each quadrant was injured with an 8 mm punch. Three of these wounds were submitted to differents solutions, while the fourth was used as a control. This experiment was done in triplicate. After wounds irrigation mice were sacrificed at 3, 7 and 14 days. The samples were fixed on formol 10% and histologically analyzed after hematoxylin and eosin staining. At 14 days all wounds were covered with epithelium with a mild inflammatory infiltrate in the subjacent connective tissue, excepted the group that sodium hypochlorite 5% pH 11 was used. Endodontic; Sodium Hypochlorite; Inflamation.

Orientador: Lenice do Rosario de Souza / Resumo: Ao analisar as atuais causas dos óbitos das pessoas que vivem com HIV/aids (PVHA), diferentemente da era pré-cART (terapia antirretroviral combinada), destacam-se doenças típicas do envelhecimento, tais como dislipidemias, doenças cardiovasculares, diabetes mellitus, entre outras, que aparecem de forma muito precoce nesta população. Tal fenômeno ocorre devido às persistentes ativação imune e inflamação crônica em PVHA, que são favorecidas pela interação da HMGB1 - high mobility group box protein-1 - e dos produtos finais de glicação avançada (AGEs), com seu receptor (RAGE), presente na superfície da membrana celular. Em sua forma solúvel, sRAGE é uma provável supressora da ativação imune por sequestrar os ligantes e evitar a interação deles com a forma transmembrana, anulando assim, seus efeitos. Além disso, a translocação microbiana e o estresse oxidativo têm sido estudados como potencializadores dessa cascata inflamatória e, em PVHA, níveis de sCD14 e de produtos de peroxidação lipídica, tais como o malondialdeído (MDA) e 8-isoprostano, estão elevados em relação aos indivíduos não-infectados, enquanto que o sistema antioxidante dos portadores do vírus, incluindo a capacidade antioxidante total (CAT), vitaminas e seus precursores, também é considerada deficiente. Portanto, esses marcadores estão relacionados, tanto com a própria evolução para a doença, quanto com o aparecimento e gravidade das comorbidades não-associadas a aids. Objetivos: avaliar a influência da cART e das... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Analyzing the current causes of deaths of people living with HIV/AIDS (PLWHA), it turns out that, unlike the pre-cART era (combination antiretroviral therapy), the highlights are typical manifestations of aging, such as dyslipidemia, cardiovascular disease and diabetes mellitus, which appear early in this population. This phenomenon occurs because of persistent immune activation and chronic inflammation in PLWHA, which are favored by the interaction of HMGB1 (high mobility group box protein-1) and AGEs (advanced glycation end-products), with the receptor RAGE, present in surface of the cell membrane. In its soluble form, sRAGE competes with the transmembrane receptor sequestering its ligands and preventing the activation of proinflammatory pathways. Furthermore, microbial translocation and oxidative stress have been studied as enhancers of this inflammatory cascade. Compared to the non-infected individuals, in PVHA the sCD14 and product levels of lipid peroxidation, such as malondialdehyde (MDA) and 8-isoprostane are increased, while their antioxidant system, including the total antioxidant capacity (TAC), vitamins and their precursors are deficient. Therefore, these markers are related both to the evolution of the disease itself, as with the onset and severity of non-AIDS comorbidities. Objectives: to evaluate the influence of cART and CD4+ T cells counts on plasma levels of sRAGE, AGEs, HMGB1, sCD14, cytokines, MDA, 8-isoprostane, TAC, vitamins, C-reactive protein (CRP) an... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Geovanni Dantas Cassali / Resumo: As neoplasias mamárias constituem os tumores com maior incidência em cadelas. Dentre os fatores que contribuem para o desenvolvimento desta e de outras neoplasias, o microambiente tumoral inflamatório desempenha um papel crucial. Vários estudos relataram papéis importantes para linfócitos, macrófagos, plasmócitos, neutrófilos, eosinófilos e mastócitos neste contexto. No presente estudo, o objetivo foi avaliar a densidade de células inflamatórias e área de fibrose tumoral e sua relação com tumores mamários caninos com diferentes características histológicas e clínicas (tumor misto benigno, carcinoma em tumor misto, carcinoma sólido e carcinoma tubular). A análise de células inflamatórias e área de fibrose tumoral foram realizadas por meio de técnicas histoquímicas, enquanto a identificação de linfócitos Tregs foram realizadas por imuno-histoquímica. A análise estatística das densidades de células inflamatórias e áreas fibrose tumoral e sua relação com os tipos histológicos revelou diferença significativa para as plasmócitos (p = 0,035), neutrófilos (p = 0,0113), macrófagos (p = 0,0047) e fibrose tumoral (p = 0,05). Os dados encontrados sugerem associações entre alto número de neutrófilos e neoplasias mamárias agressivas, entre altas densidades de plasmócitos, macrófagos e células CD8+ e entre menor densidade de células CD4+ e neoplasias menos agressivas. Maiores áreas de fibrose tumoral mostraram relação com neoplasias mamárias caninas mais agressivas. / Abstract: Mammary neoplasias constitute the tumors with higher incidence in bitches. Among the factors that contribute for the development of this and other neoplasias, the inflammatory tumor microenvironment plays a crucial role. Several studies reported important roles for lymphocytes, macrophages, plasma cells, neutrophils, eosinophils and mast cells in this context. In the present study, the goal was to evaluate density of inflammatory cells and area of tumor fibrosis and their relation with canine mammary tumors with different histologic and clinical presentation (benign mixed tumor, carcinoma in mixed tumor, solid carcinoma and tubular carcinoma) Counting and staining of inflammatory cells and tumor fibrosis were performed through histochemistry, while counting and staining of Tregs were performed through immunohistochemistry. Statistical analysis of the densities of inflammatory cells and tumor fibrosis related to histologic types revealed significant difference for plasma cells (p=0,035), neutrophils (p=0,0113), macrophages (p=0,0047), and tumor fibrosis (p=0,05). The found data suggest associations between high number of neutrophils and agressive mammary neoplasias, between high densities of plasma cells, macrophages and CD8+ cells and between low density of CD4+ cells and less aggressive neoplasias. Higher areas of tumor fibrosis showed relation with more aggressive canine mammary neoplasias. / Mestre

Submitted by FERNANDA DA SILVA VON PORSTER (fdsvporster@univates.br) on 2015-08-10T17:52:45Z No. of bitstreams: 3 license_text: 21244 bytes, checksum: 51d48429f9b12e63f6b08237f8c0eabe (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) 2015HenriqueSulzbachdeOliveira.pdf: 1900803 bytes, checksum: b661d7808a3792bd808f143d5dd8e7a3 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Lisboa Monteiro (monteiro@univates.br) on 2015-08-17T20:07:59Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_text: 21244 bytes, checksum: 51d48429f9b12e63f6b08237f8c0eabe (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) 2015HenriqueSulzbachdeOliveira.pdf: 1900803 bytes, checksum: b661d7808a3792bd808f143d5dd8e7a3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-08-17T20:07:59Z (GMT). No. of bitstreams: 3 license_text: 21244 bytes, checksum: 51d48429f9b12e63f6b08237f8c0eabe (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) 2015HenriqueSulzbachdeOliveira.pdf: 1900803 bytes, checksum: b661d7808a3792bd808f143d5dd8e7a3 (MD5) / Helicobacter pylori é uma bactéria que infecta aproximadamente 50% da população mundial, podendo causar gastrite crônica e outras formas de dano celular. A relação entre inflamação e câncer é amplamente descrita. Estímulos patogênicos induzem a expressão do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) que, por sua vez, induz outros mediadores responsáveis pela resposta inflamatória e proliferação celular. O presente estudo teve como objetivo avaliar a expressão dos genes TNF-α, NFKΒ1 e p38α na mucosa gástrica humana e investigar a influência da presença de H. pylori na expressão destes em uma população do Vale do Taquari, Rio Grande do Sul, Brasil. As amostras foram coletadas por endoscopia digestiva alta, sendo o diagnóstico de H. pylori realizado através do teste rápido de urease, com posterior confirmação pelo exame anatomopatológico de rotina. O RNA total foi extraído e purificado para posterior síntese de DNAc (DNA complementar) e análise por qPCR (Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real). O algoritmo NormFinder foi utilizado para a análise do gene de referência. Para análise estatística dos genes de interesse foram utilizados os testes de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis seguido pelo teste de comparações múltiplas de Dunn. Das 100 amostras coletadas, 19% foram classificadas como normal, 46% como gastrite crônica não ativa, 27% como gastrite crônica ativa e 8% como metaplasia intestinal. Todas as amostras positivas para H. pylori apresentaram inflamação ativa, de acordo com o exame anatomopatológico. Utilizou-se como gene normalizador o SDHA, que foi classificado como mais estável em relação ao ACTB, GAPDH, B2M e HPRT1. A expressão do TNF-α foi significativamente superior nos grupo H. pylori Positivo (p < 0,0001, teste de Mann-Whitney) e Gastrite Crônica Ativa (p < 0,01, Teste de Kruskal-Wallis seguido pelo teste de comparações múltiplas de Dunn). No entanto, não foi detectada diferença na expressão gênica do NFKΒ1 e do p38α entre os grupos. Pode-se concluir que a presença de H. pylori pode estar relacionada ao aumento na expressão do TNF-α, demonstrando a sua influência no processo inflamatório do tecido gástrico. Apesar de não ter sido encontrada alteração na expressão do NFKΒ1 e do p38α em nível de RNAm, estudos adicionais devem ser realizados para verificação da influência destes genes nesta via. / Helicobacter pylori infects about 50% of the world’s population, causing chronic gastritis and other forms of cellular damage. The relationship between inflammation and cancer is well known. Pathogenic stimuli induce the expression of tumor necrosis factor alpha (TNF-α), which, in turn, induce other mediators responsible for inflammation response and cell proliferation. The present study aimed to evaluate the gene expression of TNF-α, NFKB1 and p38α in human gastric mucosa and investigate the H. pylori influence in the expression of these genes in a population of Vale do Taquari, Rio Grande do Sul, Brazil. The samples were collected by upper endoscopy and the H. pylori diagnosis was performed through rapid urease test and histological analysis. The total RNA was extracted and purified for subsequent cDNA synthesis and qPCR analysis. The NormFinder algorithm was used for reference gene analysis. For the statystical analysis of the studied genes were used the Mann-Whitney test and the Kruskal-Wallis test followed by the Dunn’s test for multiple comparisons. From the 100 samples collected, 19% were classified as normal, 46% as non-active chronic gastritis, 27% as active chronic gastritis, and 8% as intestinal metaplasia. All samples positive for H. pylori demonstrated active inflammation, according to hystological analysis. SDHA was classified as the most stable gene when compared to ACTB, GAPDH, B2M and HPRT1, being chosen to be used as reference gene for qPCR normalization. The TNF-α expression was significantly higher in the H. pylori (p < 0,0001, Mann-Whitney’s test) and the Active Chronic Gastritis groups (p < 0,01, Kruskal Wallis test followed by Duncan’s multiple comparisons test). However, it wasn’t detected any difference in NFKΒ1 and p38α expression in the studied groups. It can be concluded that the presence of H. pylori can be related to TNF-α upregulation, demonstrating its influence in the inflammatory response of the gastric tissue. Although it has not been found changes in the NFKΒ1 and p38α expression at mRNA levels, additional studies are needed to verify the influence of these genes in this pathway.

INTRODUÇÃO: A obesidade é uma doença multifatorial associada com alto risco de desenvolver resistência à insulina (RI), diabetes melito tipo 2 (DT2), síndrome metabólica (SM) e doenças cardiovasculares (DCV). Os mecanismos moleculares da fisiopatologia das doenças metabólicas não são totalmente compreendidos, emergindo a necessidade de novas estratégias. As modificações epigenéticas, especialmente os miRNAs, podem representar uma importante ferramenta, uma vez que são relacionados com o desenvolvimento de diversas doenças complexas, como as metabólicas. OBJETIVO: Avaliar o perfil de expressão de miRNAs séricos de indivíduos com obesidade, síndrome metabólica e resistência à insulina e sua relação com os mecanismos moleculares envolvidos nas suas fisiopatologias. CASUÍSTICA E MÉTODOS: O estudo foi realizado no Instituto Dante Pazzanese de Cardiologia (IDPC) e no Hospital Universitário da Universidade de São Paulo (HU/USP). Um total de 233 indivíduos foram distribuídos em três grupos: peso normal (n=47), sobrepeso (84) e obesos (102), de acordo com seu índice de massa corpórea (IMC). Os mesmos pacientes também foram re-classificados em com SM (n=89) e sem SM (n=144) de acordo com recomendações da Federação internacional de Diabetes e em com RI (n=123) e sem RI (n=110). As informações biodemográficas e amostras de sangue foram coletadas para testes laboratoriais clínicos e análises de perfis de expressão de miRNA pela PCR array (372 alvos). Analises in silico com a ferramenta Ingenuity Pathway Analysis (IPA) foi realizada para integração do perfil de miRNAs e seus genes alvos com doenças metabólicas. RESULTADOS: Os pacientes obesos e com RI, apresentaram aumento similar das concentrações de marcadores dos perfis lipídico, glicídico e inflamatório quando comparado com indivíduos com peso normal e sem RI. O perfil de miRNAs dos grupos obesos e com RI mostrou que o miR-346 (p=0,010; p=0,019), 483-5p (p=0,034; p=0,020), 296-3p (p=0,010; p=0,008), 1224-3p (p=0,044; p=0,012) e 95-3p (p=0,003; p=0,019) foram expressos similarmente nestes pacientes quando comparados a seus respectivos controles. Estes miRNAs, por predição in silico, desempenham um importante papel na regulação de vias metabólicas associadas a doenças hepáticas gordurosas, inflamação, DCV e doenças metabólicas. Na SM, o grupo portador da doença apresentou altas concentrações de marcadores do perfil lipídico, glicídico e inflamatório. O perfil de expressão de miRNA indicou uma expressão reduzida do miR-183-5p (p=0,008) e miR-301a-3p (p=0,007) e aumentada do miR-542-5p (p=0,003), miR-424-3p (p=0,040), miR-326 (p=0,037), miR-421 (p=0,023) e miR-574-3p (p=0,001) no grupo SM comparado ao sem SM. A análise de regressão linear múltipla stepwise indicou que a expressão aumentada do miR-421 explica em 22,5% o aumento da associação de Hb1Ac, LDL-C, PAI-1, HOMA-IR, glicose e insulina (p <0,001, p=0,014, p=0,009, p <0,001, p=0,001 e p=0,007, respectivamente). Além disso o miR-421 foi predito in silico estar associado com a regulação de 11 mRNA alvos envolvidos em vias regulatórias de doenças como infarto do miocárdio, obesidade, diabetes melito, esteatose hepática, tolerância a glicose, distúrbio do metabolismo da glicose, hiperglicemia e resistência à insulina, bem como atua em vias regulatórias da resposta inflamatória, sendo associado com a variabilidade na quantidade de citocinas, massa do tecido adiposo e quantidade de leptina no sangue. Mediante a relação do miR-421 com a homeostase da glicose, sua expressão foi testada em pacientes com RI e interessantemente se manteve aumentada nesses pacientes em comparação com os sem RI (p=0.014). CONCLUSÕES: Os miR-346, miR-483-5p, miR-296-3p, miR-1224-3p e miR-95-3p podem ser considerados potenciais biomarcadores como preditores de DCV em pacientes obesos e resistência à insulina e o miR-421 um potencial biomarcador precoce de predição de risco de DCV em pacientes com síndrome metabólica. / BACKGROUND: Obesity is a multifactorial disease associated with high risk of developing insulin resistance (IR), Diabetes mellitus type 2 (DT2), metabolic syndrome (MetS) and cardiovascular disease (CVD). Molecular mechanisms of metabolic diseases\' pathophysiology are not fully understood, emerging the need for new strategies. Epigenetic modifications, especially miRNAs, may represent an important tool, since they are related to the development of several complex diseases, such as those metabolic. OBJECTIVE: Evaluate miRNA-derived serum expression profile in individuals with obesity, MetS and IR and their relationship with molecular mechanisms involved in the metabolic disease pathophysiology. MATERIAL AND METHODS: The study was conducted at the Dante Pazzanese Institute of Cardiology (IDPC) and at University Hospital of the University of São Paulo (HU/USP). Two hundred thirty-three subjects were distributed into three groups: normal weight (n = 47), overweight (n=84) and obese (n=102), according to their body mass index (BMI). The same patients were also re-classified as MetS (n=89) and Non-MetS (n=144) according to recommendations of the International Diabetes Federation and in IR (n=123) and Non-IR. Biodemographic data were registered and blood samples were collected for clinical laboratory tests and miRNA expression profiles by PCR array (372 targets). In silico analysis using Ingenuity Pathway Analysis (IPA) tool was performed to integrate the miRNA profile and their target genes with metabolic diseases. RESULTS: Obese and IR patients had similar increases in the concentrations of lipid, glucose and inflammatory markers when compared to individuals with normal weight and without IR, respectively. miRNA profile of obese and IR groups showed that miR-346 (p = 0.010, p = 0.019), 483-5p (p = 0.034, p = 0.020), 296-3p (p = 0.010, p = 0.008), 1224-3p (p = 0.044, p = 0.012) and 95-3p (p = 0.003, p = 0.019) were similarly expressed in these patients in comparison to their respective controls. These miRNAs, by in silico prediction, play an important role in the regulation of metabolic pathways associated with fatty liver diseases, inflammation, CVD and metabolic diseases. In MetS, patients diagnosed with the disease showed high concentrations of lipid, glycogen and inflammatory markers. The miRNA expression profile indicated a reduced expression of miR-183-5p (p=0.008) and miR-301a-3p (p=0.007) and increased miR-542-5p (p=0.003), miR- 3 (p=0.040), miR-326 (p=0.037), miR-421 (p=0.023) and miR-574-3p (p=0.001) in the MetS group compared to Non-MetS. Stepwise multiple linear regression analysis indicated that increased expression of miR-421 explain in 22.5% increased of Hb1Ac, LDL-C, PAI-1, HOMA-IR, glucose and insulin (p<0.001, p=0.014, p=0.009, p<0.001, p=0.001 and p=0.007, respectively). In addition the miR-421 was predicted in silico to associated with regulation of eleven mRNA of gene targets involved in regulatory pathways of diseases such as myocardial infarction, obesity, diabetes mellitus, hepatic steatosis, glucose tolerance, glucose metabolism disorder, hyperglycemia and insulin resistance, as well inflammatory response and is also associated with variability in the amount of cytokines, adipose tissue mass and amount of leptin in the blood. Due the relationship of miR-421 with glucose homeostasis, the miRNA expression was tested in patients with IR. Interestingly, miR-421 remained increased in these patients compared to those without IR (p = 0.014). CONCLUSIONS: The miR-346, miR-483-5p, miR-296-3p, miR-1224-3p and miR-95-3p may be potential biomarkers to predict CVD in obese and IR patients, while the miR-421 is a potential biomarker to predict CVD in MetS patients.

Submitted by Eunice Novais (enovais@uepg.br) on 2018-07-24T14:58:19Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Mariane A Sanson.pdf: 3058378 bytes, checksum: 43bb48ea0be645db69444ec684b43bac (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-24T14:58:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Mariane A Sanson.pdf: 3058378 bytes, checksum: 43bb48ea0be645db69444ec684b43bac (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Compostos de ouro já apresentam propriedades anti-inflamatórias estabelecidas pela literatura, além de importante potencial antioxidante. A utilização do ouro na forma nanoparticulada é uma aposta promissora para o tratamento de condições inflamatórias, como a doença periodontal, pelo seu mecanismo de ação. Apesar da biocompatibilidade estabelecida do ouro, é importante atentar-se para a possibilidade de efeito tóxico do ouro na forma nanoparticulada, devido a sua maior facilidade de penetrar nos tecidos e atravessar membranas, em resposta principalmente ao seu tamanho e concentração de ouro presente. O objetivo deste estudo foi a caracterização das nanopartículas de ouro (AuNPs) de 10, 20 e 30 nm utilizadas no trabalho, bem como testar seu efeito tópico em modelos de inflamação aguda local in vivo (edema de orelha induzido por TPA e edema de pata induzido por LPS) e verificar sua citotoxicidade em cultura de fibroblastos (3T3) e macrófagos (RAW 264.7) murinos após 12, 24 e 48h pelos ensaios de MTT, VN e teste de exclusão do azul de tripan. Para a caracterização das AuNPs foram realizados os testes de espectroscopia no ultravioleta-visível (Uv-Vis), difratometria de raios-x, absorbância atômica, potencial zeta e microscopia eletrônica de varredura por canhão de emissão de campo elétrico (FEG). Os resultados dos testes de caracterização demonstraram que as nanopartículas apresentavam-se estáveis e realmente com os diâmetros de 10, 20 e 30 nm, como proposto pelo método de síntese, estando adequadas para a utilização nos testes subsequentes. No modelo de edema de orelha induzido por TPA as formulações de AuNPs em creme a 0,1% reduziu a formação do edema em 47,76%, enquanto a formulação em creme a 0,06% reduziu o edema em 33,72% após 6h. Após 24h todas as formulações testadas apresentaram redução da formação do edema, apresentando resultados sem diferença estatística em comparação ao grupo tratado com a dexametasona. No modelo de edema de pata induzido por LPS a formulação de AuNPs em creme a 0,1% foi capaz de reduzir a formação do edema em 84,46% e a formulação em creme a 0,6% reduziu em 86,57%, também sem apresentar diferença estatística em comparação ao grupo tratado com dexametasona. Quanto aos testes de viabilidade celular, os métodos do MTT e VN não foram capazes de obter resultados confiáveis, porém o teste de exclusão do azul de tripan indicou ausência de citotoxicidade das AuNPs em 12h nas culturas de fibroblastos e macrófagos. Após 24h de incubação, a maior concentração (35 mg/L) das dispersões de AuNPs nos 3 diâmetros testados reduziu a viabilidade de macrófagos, e os fibroblastos obtiveram seus valores de viabilidade celular diminuídos pela maioria das dispersões de AuNPs testadas. Após 48h de incubação, todas as concentrações e diâmetros testados das dispersões de AuNPs foram capazes de diminuir drasticamente as porcentagens de viabilidade celular tanto em fibroblastos quanto em macrófagos. / Gold compounds already demonstrated anti-inflammatory properties in previous studies, in addition to important antioxidant potential. The use of gold in nanoparticle form is promising for the treatment of inflammatory conditions such as periodontal disease, especially for its mechanism of action. Although the established gold biocompatibility, it is important to pay attention to the possible toxic effect of gold on nanoparticulate form, for its ease of penetration through the tissues and membranes, mainly in response to its size and gold concentration. The study purpose was the physical characterization of gold nanoparticles (AuNPs) of 10, 20 and 30 nm used in the experiments, in addition to test their topical effect in models of acute inflammation in vivo (ear edema TPA-induced and paw edema LPS-induced) and verify its cytotoxicity in fibroblasts and macrophages mice cell cultures after 12, 24 e 48 hours by MTT and Neutral Red assay and exclusion of trypan blue test. To characterize the AuNPs were performed the ultraviolet-visible spectroscopy, x-ray diffraction, atomic absorbance, zeta potential and Field Emission Gun Scanning Electron Microscopy (FEG). The characterization tests results shown that the nanoparticles are stable and truly presented the diameters of 10, 20 and 30 nm, as proposed by synthesis method, and so are suitable for use in subsequent experiments. In the ear edema TPA-induced model AuNPs cream formulation at 0.1% reduced edema formation at 47.76%, while the cream formulation at 0.06% reduced 33.72% of edema after 6 hours. After 24 hours all formulations tested showed a reduction of edema formation, presenting results with no statistical difference compared to the group treated with dexamethasone. In LPS-induced paw edema model the AuNPs cream formulation at 0.1% was able to reduce edema formation in 84.46% and cream formulation at 0.6% decreased 86.57%, also without showing statistical difference compared to the group treated with dexamethasone. In viability tests, the MTT and Neutral Red methods were not able to obtain reliable results, but exclusion trypan blue test indicated no cytotoxicity of AuNPs after 12h in fibroblasts and macrophages cell cultures. After 24h incubation, the dispersions of AuNPs in 3 diameters at the highest concentration (35 mg/L) reduced the macrophages viability and fibroblast viability decreased with most of the tested AuNPs dispersions. After 48h all tested AuNPs dispersions concentrations and diameters were able to reduce the percentages of fibroblasts and macrophages cell viability.

Orientador: José Corrêa de Lacerda Neto / Coorientador: Rita de Cássia de Lima Sampaio / Banca: Lina Maria Wehrle Gomide / Banca: Deborah Penteado Martins Dias / Resumo: Diferentes estudos foram realizados buscando relacionar a ocorrência de distúrbios gastrointestinais e a manifestação da laminite. Neste contexto, destacou-se a participação de processos inflamatórios e sua relação com a expressão de metaloproteinases (MMP), que sabidamente promovem a degradação da membrana basal no tecido laminar do casco. O presente estudo objetivou avaliar a expressão das MMP-2 e MMP-9 no tecido laminar, bem como sua integridade celular por avaliação histológica, em equinos submetidos à obstrução intraluminal do cólon menor. Oito equinos adultos hígidos foram avaliados. Realizou-se laparotomia e obteve-se obstrução do cólon menor utilizando-se balão de vinil inserido no lúmem intestinal. O balão foi inflado à pressão de 80 mmHg e a obstrução foi mantida por 4 horas, simulando a presença de um enterólito. Foram realizadas biópsias pelo acesso transmural-dorsal para obtenção de tecido laminar podal em três momentos (T): antes da obstrução (T0), imediatamente após desobstrução (T4) e após 72 horas da desobstrução (T72). As amostras foram submetidas à análise zimográfica e histológica. Segundo a zimografia, não observou-se alterações nos valores de MMP-2 e MMP-9 em T4 e T72. Entretanto, observou-se o surgimento de lesões no tecido laminar analisado microscopicamente (T4 e T72). Concluiu-se que as alterações inflamatórias decorrentes da obstrução do cólon menor levaram ao surgimento de lesões no tecido laminar podal. Porém, a inflamação promovida não foi suficiente para ocasionar alteração na expressão das MMP-2 e MMP-9 no tecido avaliado / Abstract: A number of studies have been conducted in order to relate gastrointestinal disorders and laminitis occurrence in horses. In this issue, special attention has been given to the role of inflammatory process and its relation with metalloproteinase (MMP) expression, which may lead to basement membrane degradation in the hoof laminar tissue. The purpose of the present study was to investigate MMP-2 and MMP-9 expression in the laminar tissue, as well as its cellular integrity assessed histologically, in horses subjected to intraluminal obstruction of the small colon. Eight healthy horses were evaluated. A laparotomy was performed and the small colon obstruction was achieved by the use of a vinyl ball inserted into the intestinal lumen. The ball was insufflated at 80 mmHg and the obstruction was sustained for 4 hours, mimicking an enterolithiasis. Through a dorsal-transmural access, podal laminar tissue samples were biopsied at three time-points: before obstruction (T0), immediately after desobstruction (T4) and after 72 hours from desobstruction. Samples were subjected to zymographic and histological analysis. The zymography did not reveal changes in MMP-2 and MMP-9 values at T4 and T72. However, microscopic evaluation showed laminar tissue lesions (T4 and T72). In conclusion, the inflammatory changes followed by the small colon obstruction led to podal laminar tissue damage. However, the inflammation was not sufficient to induce changes in MMP-2 and MMP-9 expression in the evaluated tissue / Mestre

Introdução:O envelhecimento está associado a redução na capacidade de lidar/enfrentar estressores, o que significa o principal conceito de fragilidade. Algumas mudanças na composição e função corporal são relacionadas com o desenvolvimento da fragilidade, como: deposição de gordura visceral (altamente relacionada com a inflamação sistêmica) e a redução da gordura subcutânea. Uma alteração importante é a relacionada com um aumento na concentração de marcadores inflamatórios no sangue, o que tem sido associado com um processo mais amplo, denominado inflammaging. Nosso trabalho destaca a hipótese de que esta inflamação de baixo nível é associada a um desbalanço na microbiota e alterações na permeabiliade intestinal, o que então justifica o uso de substâncias simbióticas. Objetivos: avaliar o efeito de uma suplementação por seis meses com substância simbiótica sobre a inflamação sistêmica de idosos em risco de fragilidade. Métodos: foram estudados 49 indivíduos, entre 65-90 anos, que atenderam um ou dois critérios de fragilidade propostos por Fried et al (2001). Tratou-se de um estudo duplo-cego randomizado, no qual os participantes foram alocados em um dos grupos que seguem: SIM (tratamento com simbiótico) - ingestão de uma substância simbiótica (Frutooligossacarideos 6 g, Lactobacillus paracasei 109 a 108 CFU, Lactobacillus rhamnosus 109 a 108 CFU, Lactobacillus acidophilus 109 a 108 CFU e Bifidobacterium lactis 109 a 108 CFU); ou PLA (placebo, controle)- maltodextrina (6g) nas mesmas doses do grupo simbiótico. Ambos os grupos foram instruídos a consumir as substâncias duas vezes ao dia. Antes e após a suplementação os sujeitos foram avaliados para: marcadores plasmáticos de inflamação (IL-6, IL-10 e TNF-&#945;); contagem de células sanguíneas; medidas antropométricas; função intestinal (Escala de Bristol e Critério de ROMAIII). Os dados foram analisados por ANOVA de medidas repetidas (marcadores inflamatórios), com test pos-hoc apropriado, teste T de student (células sanguíneas), bem como odds ratio e redução de risco. Foi adotado o princípio da intenção de tratar. A significância foi considerada para p<0.05. Resultados: O grupo SIM foi composto por 25 sujeitos com idade media de 76.2±8.4 anos, e o grupo PLA foi formado por 24 sujeitos média de idade de 75.6±8.1 anos. A função intestinal melhorou em 5,3% no grupo SIM. Em constraste, o grupo PLA apresentou piora de 20% dos sintomas negativos da função intestinal. O OR da melhora do SIM de acordo com o ROMA III foi de 0.76 (IC= 0.09-6.17), indicando um benefício da suplementação com simbióticos. Os marcadores inflamatórios foram analisados de duas diferentes maneiras: o grupo todo e considerando a idade como co-variável. Quando comparados os grupos, algumas diferenças foram encontradas em função do tempo para ambos os grupos entre os níveis de IL-10 antes (a) e depois (d) da suplementação (p<0,01) (PLAa=3,9±5,4; PLAd=1,4±1,7; SIMa1,9±3,2; SIMd=1,5±1,3) e IL-6 (p<0,01) (PLAa=3,9±5,4; PLAb=2,4±1,6 e SIMa=3,0±1,9; SIMb=2,5±1,1). A contagem de células sanguíneas revelou maior número de basófilos (contagem relativa) (p=0,01) (PLA=4,22±17,91; SIM=32,05±39,85) e monócitos (contagem absoluta) (p=0,04) (PLA=14,58±8,60; SIM=11,00±7,36) no grupo SIM comparado ao grupo PLA. Conclusão: Considerando tudo o que foi exposto, é possível concluir que a suplementação com simbióticos pareceu ser eficiente para idosos considerados em risco de fragilidade, mas ainda é necessário que mais estudos sejam desenvolvidos incluindo populações maiores, e análises de permeabilidade intestinal. / Background: Ageing is associated to a reduction in the capacity to cope with stressors, which is the main concept of frailty. A number of changes in body composition and function are related to the development of frailty, such as: visceral deposition of fat (highly associated with systemic inflammation) and reduction in the subcutaneous fat. A remarkable change is related to a systemic and low level rise in inflammatory markers in the blood, which has been associated to a broader process called inflammaging. Our work highlights the hypothesis that this low-level inflammation is associated to an imbalance in gut microbiota and changes in intestinal permeability, which in turn justifies the use of synbiotic substances. Aims: to evaluate the effect of a 6-month supplementation of a synbiotic substance on the systemic inflammation in elderly in risk of frailty. Methods: we studied 49 individuals, 65-90 years old, fulfilling from one to two frailty criteria proposed by Fried et al (2001). A double-blind randomized clinical trial was performed, in which the participants were allocated in one of the following groups: SYN (symbiotic treatment) - intake of a synbiotic substance (Frutooligossacarideos 6 g, Lactobacillus paracasei 109 to 108 CFU, Lactobacillus rhamnosus 109 to 108 CFU, Lactobacillus acidophilus 109 to 108 CFU and Bifidobacterium lactis 109 to 108 CFU); or PLA (placebo, control)- maltodextrin in the same doses as the SYN group. Both groups were instructed to consume the substances twice a day, for the period of 6 months. Before and after the supplementation the subjects were evaluated for: plasma inflammatory markers (IL-6, IL-10 and TNF-&#945;); blood cells count; anthropometric measures, gut function (Bristol Scale and Roma criteria). Data were analyzed by repeated measures ANOVA (inflammatory markers), with appropriated pos-hoc test, student\'s t Test (blood cells), as well as odds ratio and risk reduction analysis. The Intention to treat principle was adopted. Significance was considered as p<0.05. Results: The PLA group was composed by 24 subjects with mean age of 76.2±8.4 years, and the PLA group was formed by 24 subjects with mean age 75.6±8.1 years. The gut function was improved in 5.3% of SYN. In turn, PLA group presented 20% of negative symptoms of gut function. The OR of improvement of SYN according to ROMA III was 0.76 (CI= 0.09-6.17), indicating a benefit of the synbiotic supplementation. The inflammatory markers were analyzed in two different ways: the whole group and considering the age as co-variable. When compared the whole groups, some differences were found by the time between both groups for IL-10 at baseline (b) and after supplementation (a) for IL-10 (p<0,01) (PLAb=3,9±5,4; PLAa=1,4±1,7; and SYNb1,9±3,2; SYNa=1,5±1,3) and IL6 (p<0,01) (PLAb=3,9±5,4; PLAa=2,4±1,6 and SYNb=3,0±1,9; SYNa=2,5±1,1). The blood cells count revealed higher numbers of basophiles (p=0,01; PLA=4,22±17,91; SYN=32,05±39,85) and monocytes (p=0,04; PLA=14,58±8,60; SYN=11,00±7,36) on the SIM group compared to the PLA group. Conclusion: Taking altogether, it\'s possible to conclude that the synbiotic supplementation seemed to be efficient for the elderly considered in risk of frailty, but it remains necessary to perform more studies, including larger populations and with analysis of gut permeability.