Made available in DSpace on 2016-05-16T12:55:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 natalia_roque_ioc_mest_2011.pdf: 2207785 bytes, checksum: 5965085ee04bb1de36ccb11445b61038 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A formação de corpúsculos lipídicos é um evento que tem sido recentemente descrito durante a tuberculose tanto em condições clinicas quanto experimentais. O aumento no número dessas organelas é um fenômeno bem regulado que parece ter uma importante implicação na patogênese microbiana. Contudo, os mecanismos pelos quais as micobactérias desencadeiam a formação dos corpúsculos lipídicos bem como o seu papel na infecção ainda não estão totalmente compreendidos. Investigamos nesse trabalho os primeiros eventos da defesa do hospedeiro em resposta a infecção por BCG, bem como a formação de corpúsculos lipídicos, os receptores envolvidos na sua biogênese e o seu papel na modulação via endocítica. Durante a infecção experimental por BCG ocorreu uma intensa migração de neutrófilos nas 6 h iniciais. Em 24 h, um grande número de neutrófilos infectados (92%) apresentavam características de morte celular por apoptose. Nos experimentos in vitro, tanto os neutrófilos apoptóticos quanto a infecção com BCG sozinho foram capazes de induzir a formação de corpúsculos lipídicos em macrófagos. Contudo, a resposta foi amplificada no grupo contendo tanto os neutrófilos apoptóticos quanto o BCG. Ainda, o pré-tratamento in vivo com um inibidor de pan-caspase, o zVAD, inibiu a apoptose de neutrófilos, sem modificar o recrutamento destas células nos camundongos C57Bl/6 infectados com BCG. Sob esta condição, a formação de corpúsculos lipídicos em macrófagos foi significativamente inibida nos animais infectados, indicando o papel da célula apoptótica na formação dos corpúsculos lipídicos durante a infecção Além disso, foi observado o envolvimento dos receptores CD14 e CD36 na biogênese dos corpúsculos lipídicos induzidos por BCG in vitro e in vivo respectivamente. A parede celular das micobactérias tem sido apresentada como importante componente na interação patógeno-hospedeiro. Dessa forma, analisamos o papel de componentes da parede micobacteriana na indução de corpúsculos lipídicos. Foi observado que o LAM, TDM e TMM além do BCG, foram capazes de induzir a formação de corpúsculos lipídicos em macrófagos após 24 h de estimulação in vitro. Porém, a micobactéria não patogênica M. smegmatis e partículas de látex não revestidas não foram capazes de induzir um aumento no número de corpúsculos lipídicos. A análise por microscopia eletrônica de transmissão demonstrou a associação dos corpúsculos lipídicos com os fagossomas além da imagem sugestiva de um corpúsculo lipídico internalizado por um fagossoma infectado durante a infecção experimental por BCG in vivo Por imunofluorescência, foi observado que a interação dos corpúsculos lipídicos com os fagossomas não é dependente da viabilidade bacteriana. Partículas de látex revestidas com os componentes da parede micobacteriana LAM ou PIM apresentaram-se próximas dos corpúsculos lipídicos em diferentes tempos em experimentos in vitro. Após 24 h de infecção por BCG in vivo foi observada a presença da proteína da via endocítica Rab7 e do seu efetor a RILP, mas não da Rab5, co-localizada com os corpúsculos lipídicos, sugerindo que os corpúsculos lipídicos possam estar seqüestrando a Rab7, necessária para a maturação fagossomal. Nossos resultados mostraram diferentes mecanismos envolvidos na biogênese dos corpúsculos lipídicos induzidos por BCG sugerindo que a modulação dessas organelas pelo patógeno pode representar um importante mecanismo de escape da resposta imune do hospedeiro e um futuro alvo terapêutico / Lipid body formation is an event that has been recently described during tuberculosis in both clinical and experimental conditions. The increase of these organelles is a well regulated phenomenon that seems to have an implication in microbial pathogenesis. However, the mechanisms by which the microbial trigger the lipid bodies formation as well as its role in the infection are still not fully understood. We investigated in this work the first events of the host defense in the BCG infection response, as well as the lipid bodies formation, the receptors involved in their biogenesis, and their role in endocytic pathway modulation. During the experimental infection by BCG a great neutrophils influx happened in the initial 6 h. In 24h, a great number of infected neutrophils (92%) showed apoptotic cell death features. In in vitro experiments, both apoptotic neutrophils and BCG infection alone were able to induce lipid bodies formation in macrophages. However, the response was amplified in the group containing both apoptotic neutrophils and BCG. Still, the pre treatment in vivo with pan-caspase inhibitor, zVAD, inhibited the neutrophils apoptosis, without modifying the influx of these cells in the BCG infected C57Bl/6 mice. Under this condition, the lipid body formation in macrophages was drastically inhibited in infected animals, indicating the role apoptotic cells in the lipid body biogenesis during the infection. Beyond that, was observed the involvement of CD14 and CD36 receptors in the lipid bodies biogenesis induced by BCG in vitro and in vivo, respectively. The mycobacteria cell wall has been presented as an important component of host-pathogen interaction. In this way, we analyzed the role of mycobacteria cell wall component in the lipid bodies induction. It was observed that LAM, TDM, and TMM, beside BCG, were able to induce the lipid bodies formation in macrophages after 24h of in vitro stimuli. However, the non-pathogenic mycobacteria M. smegmatis and non coated latex beads were not able to induce an increase in the numbers of lipid bodies. Transmission electronic microscopic analyze showed an interaction between the lipid bodies and phagosomes, beside a suggestive image of an infected phagosome with an internalized lipid body during the experimental BCG infection in vivo. By imunofluorescence, it was observed that the interaction between the lipid bodies and phagosomes is not dependent of bacterial viability. Latex beads coated with mycobacterial cell wall components LAM or PIM presented themselves close of the lipid bodies in different times in in vitro experiments. After 24h of in vivo BCG infection, was observed the presence of Rab7 endocytic pathway protein and its effector RILP, but not the Rab5, co-localized with the lipid bodies, suggesting that the lipid bodies could be highjacking the Rab7, needed for the phagosome maturation. Our results showed different mechanisms involved in the lipid bodies biogenesis induced by BCG, suggesting that modulation of these organelles by the pathogen could represent an important escape mechanism of the host immune response and a future therapeutic target.

Submitted by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2015-03-30T20:43:52Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Fernanda Mattos de Souza.pdf: 3472551 bytes, checksum: 2895a9a8c269897020faa6fabc695397 (MD5) / Approved for entry into archive by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2015-04-08T18:11:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Fernanda Mattos de Souza.pdf: 3472551 bytes, checksum: 2895a9a8c269897020faa6fabc695397 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T18:11:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Fernanda Mattos de Souza.pdf: 3472551 bytes, checksum: 2895a9a8c269897020faa6fabc695397 (MD5) Previous issue date: 2014-04 / Introdução: Os ensaios de liberação do interferon- γ (ELIG) surgiram como uma alternativa para o diagnóstico de infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis (ILTB). Neste estudo, nós comparamos o desempenho de um dos ELIG, teste Quantiferon TB Gold in tube – QFT, com a prova tuberculínica (PT) em dois pontos de corte (≥ 5 mm e ≥ 10 mm), em profissionais de saúde da atenção básica à saúde (ABS). Métodos: Estudo transversal realizado em profissionais de saúde da ABS de quatro capitais nacionais com alta incidência de TB. O resultado do teste QFT foi comparado com o resultado da PT nos pontos de corte ≥ 5mm e ≥ 10 mm. Resultados: Foram incluídos 632 profissionais de saúde. Ao considerar o ponto de corte ≥ 10 mm para a PT, a concordância entre QFT e a PT foi de 69% (k = 0,31) e para o ponto de corte ≥ 5 mm, a concordância entre os testes foi de 57% (k = 0,22). Devido a baixa concordância entre a PT e o QFT, nós avaliamos os possíveis fatores associados com a discordância entre eles. Ao comparar o grupo PT- / QFT- com o grupo PT+ / QFT-, no ponto de corte ≥ 5 mm, a idade entre 41-45 [OR = 2,70, IC 95%: 1,32-5,51] e 46-64 [OR = 2,04, IC 95%: 1,05-3,93], presença de cicatriz vacinal do BCG [OR = 2,72, IC 95%: 1,40-5,25] e trabalhar apenas na ABS [OR = 2,30, IC 95 %: 1,09-4,86] apresentaram associação estatística significativa. Para o ponto de corte ≥ 10 mm, a presença de cicatriz vacinal do BCG [OR = 2,26, IC 95%: 1,03-4,91], ter tido contato domiciliar com paciente portador de tuberculose ativa [OR = 1,72, IC 95%: 1,01-2,92] e ter feito a PT anteriormente [OR = 1,66, IC 95%: 1,05-2,62] revelaram associação estatística significativa. Curiosamente, a discordância observada no grupo PT- / QFT + não apresentou associação estatistica com nenhuma das variáveis consideradas, independentemente do ponto de corte da PT. Conclusões: Apesar de termos identificado que a vacina BCG contribuiu para a discordância entre os testes, as recomendações brasileiras para o início do tratamento da ILTB não devem ser alteradas devido as limitações do QFT. / Background: A new interferon-γ release assay, QuantiFERON-TB (QFT) test, poses as an alternative test for the diagnosis of latent Mycobacterium tuberculosis infection (LTBI). Here, we compared the performance of QFT with tuberculin skin test (TST) measured at two different cut-off points among primary health care workers (HCW) in Brazil. Methods: A cross-sectional study was carried out among HCWs in four Brazilian cities with a known history of high incidence of TB. Results of the QFT were compared to TST results based on both ≥5mm and ≥10 mm as cut-off points. Results: We enrolled 632 HCWs. When the cut-off value of ≥10 mm was used, agreement between QFT and TST was 69% (k=0.31), and when the cut-off of ≥5 mm was chosen, the agreement was 57% (k=0.22). We investigated possible factors of discordance of TST vs QFT. Compared to the TST-/QFT– group, the risk factors identified for discordance at the TST+/QFT- group when the TST cut-off of ≥5 mm was used were age between 41-45 [OR=2.70; CI 95%: 1.32-5.51] and 46-64 [OR=2.04; CI 95%: 1.05-3.93], BCG scar [OR=2.72; CI 95%: 1.40-5.25], and having worked only in primary health care [OR=2.30; CI 95%: 1.09-4.86]. On the other hand, for the cut-off of ≥10 mm BCG scar [OR=2.26; CI 95%: 1.03-4.91], being a household contact of a TB patient [OR=1.72; CI 95%: 1.01-2.92] and having had a previous TST [OR=1.66; CI 95%: 1.05-2.62], were significant. Interestingly, discordance observed at the TST-/QFT+ group showed no statistically significant association with any of the variables regardless of TST cut-off value used. Conclusions: Although we identified BCG vaccination to contribute to the discordance in spite of TST cut-offs, the current Brazilians recommendation for the initiation of LTBI treatment, based on TST, should not be changed, based on QFT limitations and decreased accuracy of the method.

Submitted by Marcelo Andrade Silva (marcelo.andradesilva@ufpe.br) on 2015-03-09T14:28:37Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Joelma Carvalho Santos.pdf: 2064030 bytes, checksum: 9d9c233bec668a94294f6d19471cb844 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-09T14:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Joelma Carvalho Santos.pdf: 2064030 bytes, checksum: 9d9c233bec668a94294f6d19471cb844 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / A presença de polimorfismos de único nucleotídeo (SNPs) e a expressão variante dos genes das citocinas IFN-α1, IFN-γ e do receptor IFN-α r1 em pacientes com infecção crônica pelo vírus da hepatite B (HBV), podem ser considerados fatores etiopatogênicos relacionados aos níveis séricos do HBV, resultando em complicações da doença. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo verificar a associação entre as frequências genotípicas e proporções alélicas dos genes IFNG, IFNA1, IFNAR1 em relação aos níveis de expressão desses genes e à carga viral do HBV, em pacientes com infecção crônica pelo HBV sem tratamento antiviral. Foi realizado um estudo de caso-controle com amostras de sangue total de 208 indivíduos (94 pacientes com infecção crônica e 114 indivíduos imunes ao HBV) no período de outubro de 2012 a agosto de 2013, no ambulatório de hepatologia do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Pernambuco (HC/UFPE) e no Hospital Escola Dr. Helvio Auto da Universidade Estadual de Ciências da Saúde de Alagoas (HEHA/UNCISAL). Para a identificação dos polimorfismos foi utilizada a PCR em tempo real (qPCR) de acordo com técnica de alta resolução de melting (HRM). A quantificação da carga viral e a expressão absoluta dos genes IFNG (-5 A>G), IFNA1 (-2 C>T), IFNAR1 (-97 T>C) foram realizadas por qPCR. Em todos os pacientes com infecção crônica pelo HBV os níveis de expressão foram menores para o gene IFNA1 (mediana=2,56x10-1ηg/μL), em relação aos genes IFNG (mediana=4,54x105ηg/μL) e IFNAR1 (mediana=6,92x109ηg/μL), e a média de carga viral foi de 3,2 log10. Pacientes com genótipo heterozigoto IFNA1(-2) CT e alelo polimórfico IFNA1 (-2) T apresentaram maiores chances de desenvolver proteção pelo HBV quando comparados a indivíduos imunes com genótipo IFNA1(-2) CC e alelo tipo selvagem C, respectivamente (IFNA1 CT/CC: OR=0,45; p=0,01 e IFNA T/C: OR=0,54; p<0,01). Em pacientes com infecção crônica e genótipo tipo selvagem TT do IFNAR1, os baixos níveis de expressão do gene desse receptor, quando comparado aos outros genótipos, explicam em 40% os altos níveis de carga viral desses pacientes (r2=0,40 | p=0,04) conferindo um risco para o desenvolvimento da cronicidade. Para o genes IFNG(-5) não foi observada diferença estatisticamente significante entre os níveis de expressão e os genótipos. Assim, a presença da variante polimórfica do gene IFNA1 (-2) em pacientes com infecção crônica, pode estar associada à proteção da cronicidade quando comparada ao grupo controle. Os altos níveis de expressão do gene IFNAR1 e baixos níveis de IFNA1 podem contribuir para a cronicidade nestes indivíduos. Os pacientes que com genótipo polimórfico IFNA1 (-2) CT e alelo T apresentaram maior proteção para a cronicidade pelo HBV.

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T06:41:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Perhs_SimoneMariaCipas_M.pdf: 3198961 bytes, checksum: 7dcc68b78919337c618a237e6794be07 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O modelo experimental de infecção por Listeria monocytogenes tem provado ser útil na investigação dos efeitos de novos compostos na resposta imunológica primária contra bactérias intracelulares. Em particular, o número de células hematopoéticas na medula óssea e baço é de fundamental importância na resistência a esta infecção. No presente estudo, investigamos o efeito da solução hidro alcoólica de própolis (SHAP), sobre o crescimento e diferenciação de precursores hematopoéticos para granulócitos e macrófagos (CFU-GM) da medula óssea e do baço de animais infectados com Listeria monocytogenes. Além disso, quantificamos os níveis de fatores estimuladores de colônias (CSFs). A eficácia da SHAP frente a uma dose letal da bactéria também foi avaliada. Demonstramos que a SHAP protegeu os animais contra uma dose letal de L. monocytogenes, quando administrada profilaticamente na dose de 4 mg/kg durante 10 dias, com aumento de 20% na sobrevida. Este tratamento também preveniu a mielossupressão e hematopoese extramedular causadas por uma dose subletal de L. monocytogenes, devido a um aumento no número de CFU-GM na medula óssea. Além disso, observamos que os animais somente tratados (não infectados) não apresentaram diferenças significativas em relação ao grupo controle. Adicionalmente, a investigação da produção de fatores estimuladores de colônias no soro dos animais revelou um aumento de CSA nos grupos infectados após 48 e 72h pré-tratados com SHAP, sugerindo que a estimulação da mielopoese pelo produto seja mediada pela produção de fatores de crescimento. Além disso, observamos o aumento da citocinas interferon- gamma IFN-g no grupo infectado/tratado com o produto nas 48 e 72h. / Abstract: Infection with Listeria monocytogenes has proven to be a useful model to investigate early effects of new compounds on the immune response to intracellular bacteria. In particular, the number of hematopoietic cells in the bone marrow and spleen is critically important to resistance to this infection. In this study, we demonstrated the protective effects of hydro alcoholic solution of propolis in mice infected with a lethal dose of Listeria monocytogenes, when administered prophylactically at 4mg/kg for 10 days, with survival rates up to 20%. This dose also prevented the myelosuppression and the splenomegaly caused by a sublethal infection with Listeria monocytogenes, due to the maintenance of granulocytemacrophage progenitors (CFU-GM) numbers in the bone marrow. Non-infected mice treated with hydro alcoholic solution of propolis presented similar numbers of CFU-GM in the bone marrow when compared to the controls. Furthermore, investigation of the production of colony-stimulating factors (CSF) revealed increased colony-stimulating activity (CSA) in the serum of infected mice pre-treated with hydro alcoholic solution of propolis 48 and 72 hours after the infection, suggesting that its effects on the production of growth factors mediate stimulation of myelopoiesis by hydro alcoholic solution of propolis. Moreover, we observed increased level of IFN-g in infected/treated mice. These results sustain our proposal of hydro alcoholic solution of propolis use as an adjuvant agent in the prophylaxis of opportunistic infections and reduction of side effects caused by immunosuppressive therapies. / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

A produção noturna de melatonina pela glândula pineal é fundamental no controle do sistema oscilatório endógeno de mamíferos. Sua síntese é iniciada pela ativação de receptores adrenérgicos em resposta à liberação noturna de noradrenalina (NA) por terminais simpáticos. A ativação adrenérgica induz, em roedores, a transcrição do gene e a ativação da enzima arilalquil-N-acetiltransferase (AA-NAT) que converte a serotonina em N-acetilserotonina (NAS). A NAS é então convertida em melatonina pela ação da enzima hidroxiindol-O-metiltransferase (HIOMT). Além das funções cronobiológicas, a pineal apresenta comunicação bidirecional com o sistema imunológico, descrita pelo conceito do eixo imune-pineal. Nosso grupo de pesquisa tem demonstrado que mediadores imunológicos, como o lipopolissacarídeo (LPS) de bactérias gram-negativas e o fator de necrose tumoral (TNF), inibem a síntese de melatonina pela pineal por um mecanismo dependente da ativação do fator nuclear de transcrição kappa B (NF-&kappa;B). Por outro lado, fatores que inibem esta via (glicocorticoides) aumentam a produção de melatonina pela glândula pineal. Outros mediadores imunológicos que sinalizam por vias distintas à do NF-&kappa;B também são capazes de atingir e modular a produção de melatonina. A citocina inteferon-gama (IFN-&gamma;) classicamente sinaliza pela via do STAT1 (do inglês Signal Transducer and Activator of Transcription) e é capaz de aumentar a produção de melatonina em pineais. Contudo, não existem relatos do papel desta via de sinalização sobre a síntese hormonal da glândula pineal. Sabendo-se que o IFN-&gamma; também é capaz de sinalizar pela ativação do NF-&kappa;B, o objetivo do presente trabalho foi caracterizar e avaliar o papel destas duas vias de sinalização ativadas pelo IFN-&gamma; sobre as produções de NAS e melatonina, induzidas por NA, em pineais em cultura. Nossos dados mostram que o aumento da síntese de NAS e melatonina induzida pelo IFN-&gamma; está associado ao aumento da expressão dos genes Aanat e Hiomt. A incubação das glândulas com IFN-&gamma; aumenta a translocação nuclear de STAT1 e de dímeros de NF-&kappa;B ativadores da transcrição gênica. Além disso, a incubação de pineais com IFN-&gamma; aumenta a transcrição de 27 genes relacionados com a via das STATs. IFN-&gamma; tende a aumentar a ligação da STAT1 com uma região do promotor do gene Aanat e a utilização de uma droga que potencia a ativação da STAT1 também aumenta a produção de NAS e melatonina. Por fim, o bloqueio da via do NF-&kappa;B inibe o aumento na produção de NAS e melatonina e da expressão de Aanat e Hiomt induzido pelo IFN-&gamma;. Nossos dados demonstram, pela primeira vez, a importância da via da STAT1 em associação com a via NF-&kappa;B sobre a produção hormonal da glândula pineal / The nocturnal production of melatonin by the pineal gland is crucial in the control of the mammalian endogenous oscillatory system. Melatonin synthesis is initiated by the activation of adrenergic receptors in response to nocturnal release of noradrenaline (NA) by sympathetic terminals. The adrenergic activation induces, in rodents, gene transcription and activation of the arylalkyl-N-acetyltransferase enzyme (AA-NAT) that converts serotonin into N-acetilserotonin (NAS). NAS is then converted to melatonin by the action of the enzyme hydroxyindole-O-methyltransferase (HIOMT). In addition to the chronobiological functions, the pineal has a bidirectional communication with the immune system as described by the concept of the immune-pineal axis. Our research group has demonstrated that immunological mediators as the lipopolysaccharide (LPS) of gram-negative bacteria and the tumor necrosis factor (TNF) inhibit the synthesis of melatonin by the pineal in a mechanism dependent on the activation of the nuclear transcription factor kappa B (NF-&kappa;B). Moreover, factors that inhibit NF-&kappa;B pathway (glucocorticoids) increase the production of melatonin by the pineal gland. Other immunological mediators that signalize by distinct signaling pathways are also able to target and modulate the melatonin production. The cytokine interferon-gamma (IFN-&gamma;) classically signals trough STAT1 (Signal transducer and Activator of Transcription) and is able to increase the production of melatonin by the pineal. However, there are no reports of the role of STAT1 pathway on the hormonal synthesis of the pineal gland. Considering that IFN-&gamma; is also able to signalize through NF-&kappa;B, the aim of this study was to characterize and evaluate the role of these two signaling pathways activated by IFN-&gamma; on the production of NAS and melatonin induced by NA in cultured pineals. Our data show that the increase in NAS and melatonin synthesis induced by IFN-&gamma; is associated with increased expression of the genes Aanat and Hiomt. Incubation of the glands with IFN-&gamma; increases the nuclear translocation of STAT1 and of p50:RelA NF-&kappa;B dimers. In addition, pineal incubation with IFN-&gamma; increases the transcription of 27 related to STAT pathway. IFN-&gamma; tends to increase the binding of STAT1 to a promoter region and the Aanat gene and the use of a STAT1-enhancer also increased the production of NAS and melatonin. Finally, the blockade of NF-&kappa;B pathway inhibits the increase in melatonin and NAS productions and also of Aanat and Hiomt genes expression induced by IFN-&gamma;. Our data demonstrate, for the first time, the importance of the STAT1 pathway in association with NF-&kappa;B pathway on the hormonal production of the pineal gland

O objetivo central desta dissertação de mestrado foi analisar se, pela sua resposta ao interferon-g (IFNg), as células não leucocitárias contribuem ao controle dos protozoários Trypanosoma cruzi, Plasmodium chabaudi AS e Plasmodium berghei ANKA. O IFNg é uma citocina que promove a ativação de diversos tipos de leucócitos, a sua ação sobre as células mononucleares fagóciticas merece um destaque especial. Apesar de conhecermos os pormenores do papel desta citocina na ativação dos leucócitos, desconhecemos se o IFNg exerce ação ativadora sobre as células estruturais (não leucocitárias), ou seja, sobre as células não profissionais da resposta imune. A nossa hipótese de trabalho é que, no caso dos parasitas intracelulares, o IFNg poderia reforçar a ação sinalizadora e efetora das células estruturais infectadas. Por outro lado, em ambas as situações de parasitas intracelulares e extracelulares, o IFNg, ao agir sobre diversas células estruturais, poderia induzir a produção de mediadores inflamatórios (citocinas, quimiocinas, etc) que contribuiriam direta ou indiretamente à remoção/controle do parasita. A nossa abordagem tem sido o estudo da infecção por estes protozoários em quimeras de medula óssea B6/IFNgRKO, nas quais as células não leucocitárias são deficientes em receptores para IFNg e as células leucocitárias são normais. A análise por imunofluorescência de cortes histológicos mostrou uma alta expressão de IFNgR pelas células estruturais do coração dos animais B6 e quimeras controle B6/B6, mas nenhuma expressão deste receptor nos cortes histológicos correspondentes de animais IFNgRKO e quimeras experimentais B6/IFNgRKO, apesar de grande parte dos leucócitos dos animais deste último grupo ter se tornado IFNgR+. Após infecção pelo T. cruzi, o coração e músculo esquelético dos animais quiméricos B6/IFNgRKO mostraram maior carga parasitária e menor intensidade dos infiltrados 8 inflamatórios do que aqueles dos animais quiméricos B6/B6, resultados que sugerem o envolvimento das células estruturais no controle do parasita e promoção do recrutamento leucocitário. Na infecção pelo Plasmodium chabaudi AS a análise comparativa dos grupos IFNgRKO e quimera B6/IFNgRKO mostrou que no início da infecção as curvas de parasitemia destes grupos são idênticas sugerindo que nesta fase da infecção a presença do IFNgR nos leucócitos em pouco contribui na evolução da parasitemia. Por outro lado, a análise comparativa dos grupos quimera B6/IFNgRKO e quimera B6/B6 mostrou níveis mais elevados de parasitemia e maior índice de mortalidade nos animais B6/IFNgRKO, sugerindo que as células estruturais participam no controle do parasita através da sua resposta ao IFNg. Entretanto, em uma experiência preliminar de infecção pelo Plasmodium berghei ANKA não observamos grandes diferenças entre os animais dos grupos B6/IFNgRKO e B6/B6, não somente no que se refere à curva de parasitemias, como também na indução de morte precoce decorrente de malária cerebral. / The main purpose of our work was to analyze if by their response to Interferon-g (IFN-g), the non-leucocyte cells are able to control Trypanosoma cruzi, Plasmodium chabaudi AS and Plasmodium berghei ANKA protozoans. IFNg was described as a cytokine that promote activation on different types of leucocytes, its action on mononuclear phagocytic cells is important. Despite the fact that this cytokine activate leucocytes, it is unknown whether IFNg activates the structural cells (non-leucocytes), that is, the non-professional cells of the immune response. Our hypotheses suggest that in the case of intracellular parasites, IFNg could help the infected structural cells by increasing their signaling and effect actions. In addition, during the response against intracellular and extracellular parasites, IFNg could induce the production of inflammatory mediators by these cells guaranteeing direct or indirectly the parasite clearance. In the present study, we analyzed the infection of diferente protozoans on bone marrow B6/IFNgRKO chimeras, in which the non-leukocyte cells are deficient in IFNg receptor and the leukocyte cells are normal. Immunofluorescence analyses of histological sections revealed a high expression of IFNgR on the structural cells from the heart of B6 and control chimeras B6/B6 animals, but non-expression of this receptor on histological sections from IFNgRKO and experimental chimeras B6/IFNgRKO, despite the fact that a great part of leucocytes from the last group of animals express the receptor. After T. cruzi infection, the cardiac and skeletal muscle from B6/IFNgRKO chimera animals showed a huge amount of parasite and less infiltration inflammatory than B6/B6 animals, suggesting that the structural cells are involved in the parasite control and leukocyte recruitment. During Plasmodium chabaudi AS infection, comparative analyses from IFNgRKO and 10 B6/IFNgRKO groups showed that parasitemia curves at the early phase are similar, suggesting that during this phase IFNgR expression on leukocytes are not important. On the other hand, parasitemia and mortality levels on B6/IFNgRKO and B6/B6 groups were higher than those on B6/IFNgRKO animals, determining that structural cells participate during the course of infection through their response to IFNg. However, when B6/IFNgRKO and B6/B6 animals were infected with Plasmodium berghei ANKA no significantly difference was observed between these groups related to the course of parasitemia and cerebral malaria.

Orientador: Antonio Condino Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T09:19:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Prando_CarolinaCardosodeMello_D.pdf: 7021288 bytes, checksum: e93bf24a96be00102eb5a19f5d7c8880 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O sistema NADPH oxidase fagocítico humano possui um papel importante na defesa contra microorganismos intracelulares, incluindo micobactérias. Mutações nas subunidades deste sistema resultam na Doença Granulomatosa Crônica (DGC). O gene CYBB, localizado no cromossomo X, codifica a subunidade gp91phox, e mutações neste gene são responsáveis por cerca de 60% dos casos de DGC. Cerca de 40 anos depois da identificação de DGC, foi identificado o primeiro dos 13 defeitos genéticos associados à Susceptibilidade Mendeliana à Micobacteriose, participantes do eixo IL12/23-IFN-?. Baseado no fato de que ambas as doenças predispõem a infecções por micobactérias e que o IFN-? is é um importante ativador do gene CYBB os autores se propuseram a estudar as características clinicas de pacientes latino-americanos com DGC e o sistema NADPH oxidase e expressão do gene CYBB em pacientes com defeitos no eixo IL-12/23-IFN-?. Em relação às características clínicas: história familiar de infecções graves e/ou de repetição, bem como reação adversa à vacina BCG, linfadenopatia, abscessos de pele e profundos estavam associados à DGC, em comparação com não-DGC avaliados pelo laboratório. Defeitos nos receptores IFNGR1 e IFNGR2 e cadeia B1 do receptor de IL-12 podem apresentar expressão do gene CYBB e atividade do sistema NADPH oxidas e diminuída ou abolida, chegando a níveis comparáveis a um paciente com DGC. O IFN- ? e seus receptores são essenciais para o desenvolvimento e ativação do sistema NADPH oxidase, e pacientes com comprometimento da função deste sistema devem também ser avaliados para defeitos do eixo IL12/23-IFN-? afetando secundariamente o sistema NADPH oxidase. / Abstract: The NADPH phagocytic oxidase system plays a crucial role in host defense against intracellular microorganisms, including mycobacteria. Mutations affecting subunits of this system result in Chronic Granulomatous Disease (CGD). The CYEE gene, located in the X chromosome, encodes gp91 phox, and mutations on this gene account for more than 60% of CGD cases. Almost 40 years after, the first of 13 different genetic disorders associated with Mendelian Susceptibility to Mycobacterial Diseases (MSMD), was identified. The genes responsible for MSMD are part of the IL12/23-IFN-? axis. Based on the fact that both the diseases predispose to mycobacterial infections and that IFN-? is an important activator of CYBB gene, the authors aimed to describe clinical aspects of Latin American CGD patients and investigate ifthe NADPH oxidase system function and gp91phox expression would be affected in patients with defects in the IL-12/23-IFN-? axis. Regarding clinical features familial history of recurrent and sever infections, as well as adverse reactions to BCG vaccine, lymphadenopathy, skin and profound abscess were associated to DGC when compared to clinical features of non-CGD evaluated in the laboratory. Defects of IFNGR1 and IFNGR2 and IL12RB1 may present diminish.ed or abolished gene expression of CYBB and activity of NADPH oxidase system ate levels of a CGD patient. Based on that, we can conclude that IFN- ? and its receptor are essential for development and activation 9f NADPH oxidase system. In addition, patients who present an impaired superoxide release and/or failure on expressing gp91phox should also be evaluated for IL12/23-IFN-? axis affecting secondarily the NADPH oxidase system. / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Mutações no gene CD40LG estão associadas à Síndrome de Hiper-IgM, relacionada ao cromossomo X, que é uma Imunodeficiência Primária. A ausência da interação CD40L/CD40 (linfócitos-DCs) acarreta um aumento da suscetibilidade às infecções fúngicas. Os efeitos do tratamento in vitro com interferon-gama em células dendríticas de pacientes com mutações no CD40L demonstraram potencial sobre a imunologia das DCs e nos remete a fundamentar possíveis ensaios clínicos futuros, que tenham por tema a prevenção e o tratamento de infecções oportunistas. / Mutations in the CD40LG gene are associated with the X-linked Hyper-IgM Syndrome, which is a Primary Immunodeficiency. The absence of the CD40L / CD40 interaction (lymphocytes-DCs) leads to increased susceptibility to fungal infections. The effects of in vitro gamma-interferon treatment on dendritic cells from patients with CD40L mutations have demonstrated potential for DC immunology and suggest that future clinical trials should address the prevention and treatment of opportunistic infections.

A hepatite C é uma doença que leva à inflamação do fígado, sendo causada pelo vírus da hepatite C (VHC). Estima-se que existam 130 a 170 milhões de casos de infecção crônica pelo VHC por todo o mundo. Apesar do VHC ser principalmente hepatotrópico, foi evidenciada a detecção de RNA viral em células mononucleares do sangue periférico (PBMC). Evidências clínicas e experimentais têm demonstrado um importante tropismo do VHC por células do sistema imune, em especial por PBMCs. Apesar deste interessante achado, a importância da infecção do sistema imune na história natural da doença não é totalmente conhecida. É possível observar em alguns estudos que, em pacientes que desenvolvem infecção aguda, observa-se uma vigorosa resposta mediada por células T, específica ao VHC, mediada, por células T CD4+ e T CD8. Esta resposta é detectada na fase inicial da doença, e prolonga-se durante vários anos após a resolução do vírus. Pelo contrário, os pacientes que desenvolvem infecção crônica, apresentam, normalmente, respostas T fracas e / ou de curta duração, bem como defeitos nas funções efetoras de células T específicas. As respostas mediadas por células T com este perfil resultam, normalmente, em um baixo controlo da viremia e na sua persistência. Outra importante questão que permanece incerta até o presente momento é como a infecção das células imunes pelo VHC altera a sua função, principalmente no que concerne às PBMCs. Informações referentes às PBMCs e o VHC são pouco estudadas e referidas na literatura internacional, embora sejam de fundamental importância para a compreensão do seu peso na história natural da infecção. OBJETIVO: Baseado nessas incertezas o presente estudo tentará contribuir para a elucidação da influência do parasitismo por VHC na função de células TCD4+ e TCD8+ em pacientes naïve com indicação de tratamento com IFNpeg+RBV e comparar os dados obtidos antes, durante e pós-tratamento com os valores encontrados dos controles negativos, avaliando a influência do tratamento sobre a função dessas células. Verificar a presença do RNA-VHC nas PBMCs por RT-PCR em Tempo Real. Verificar a influência de fatores do vírus e do hospedeiro, tais como genótipo, carga viral, idade, gênero, raça, polimorfismo IL28B e biópsia hepática sobre as células parasitadas pelo VHC e sua produção de citocinas; Determinar a contagem e a função de linfócitos T CD4+ e CD8+ no sangue periférico desses pacientes; Determinar a influência do parasitismo de linfócitos pelo VHC sobre a função dos linfócitos TCD4+ e TCD8+. METODOLOGIA: Foram estudados 52 pacientes com hepatite C crônica; destes, 17 pacientes foram tratados com IFNalfa+RBV; 10 controles sadios, atendidos no Ambulatório de Hepatites da Divisão de Clínica de Doenças Infecciosas e Parasitárias do HC FMUSP. A contagem de células da subpopulação de linfócitos T CD4+ e CD8+ periféricas foram realizadas por citometria de fluxo FACSCanto II (BD) por meio do software MultiSet(BD). Foi analisada a presença/ausência do RNA-VHC em PBMC por PCR em tempo real no sistema TaqMan, no termociclador Applied Biosystems StepOne(TM). A função dos linfócitos TCD4+ e TCD8+ foram avaliadas através da técnica ELISPOT utilizanso o Kit Human IFN-gamma/IL-4 Dual-Color FluoroSpot. A contagem dos spots foi realizada em um leitor automatizado CTL-ImmunoSpot® S6 FluoroSpot Line. As PBMCs foram fracionadas e depletadas, utilizando-se o Kit Dynabeads FlowComp Human CD4 (Invitrogen Life Technologies) segundo as instruções do fabricante. RESULTADOS: Foram estudados 52 pacientes com hepatite C crônica; destes, 17 pacientes foram tratados com IFNalfa+RBV; 10 controles sadios. O genótipo 1 foi o mais prevalente 61,5%. O RNA do VHC foi detectado nas PBMCS em 88,4% dos pacientes. XVII Nossos resultados mostraram um aumento de células CD4 e CD8 parasitadas pelo VHC antes do tratamento, com valores estatisticamente significantes quando comparadas aos controles normais apenas no caso das CD4. Ocorreu, porém, um nítido prejuízo na produção de interleucinas por estas células parasitadas, particularmente a produção de IFN- y, com valores altamente significantes (0,009). Na semana 12, podemos ver o aumento de células CD4 no pré-tratamento, porém com diminuição na semana 12 e no follow up; entretanto a produção de IL-4 pelas células CD4 aumenta na semana 12 e cai novamente no seguimento; com as células CD8 ocorre leve queda na semana 12 porém uma tentativa de recuperação no follow up; sua produção de IFN-y cai na semana 12 e no follow up para números estatisticamente significantes. É a chamada \"exaustão\" de função destas células já descrita in vitro por alguns autores. Estes dados poderão ser muito úteis nas futuras observações desses pacientes que serão tratados com esquemas de DAAs sem interferon alfa. CONCLUSÃO: Em conclusão, os resultados desta pesquisa confirmam a importante influência do parasitismo das células CD4 e CD8 em suas funções / Hepatitis C is a disease that causes inflammation of the liver, caused by hepatitis C virus (HCV). It is estimated that there are 130 million to 170 million cases of chronic HCV infection worldwide. Although HCV is primarily hepatotropic was evidenced by detection of viral RNA in peripheral blood mononuclear cells (PBMC). Clinical and experimental evidence have demonstrated an important tropism of HCV by immune system cells, in particular by PBMC. Despite this interesting finding, the importance of infection of the immune system in the natural history of the disease is not fully known. It can be observed in some studies in patients who develop acute infection a vigorous response is observed mediated by T cells specific to HCV mediated by CD4 + and CD8. This response is detected at the initial stage of the disease, and extends for years after the resolution of the virus. Conversely, patients who develop chronic infection, are typically in the low T responses and / or short-term as well as defects in the effector functions of specific T cells. The responses mediated by T cells with the profile usually result in a low control of viremia and its persistence. Another important issue that remains unclear to date is how the infection of immune cells by HCV alters its function, especially with regard to the PBMCs. Information relating to the PBMCs and HCV are little studied and reported in the international literature, although they are of fundamental importance for the understanding of its weight in the natural history of infection. OBJECTIVE: Based on these uncertainties the present study attempts to contribute to the elucidation of the influence of parasitism by HCV on CD4 T cell function + and CD8 + in naïve patients with treatment indication with IFNpeg + RBV and compare the data obtained before, during and after treatment with the values found negative controls, assessing the influence of treatment on the function of these cells. Verify the presence of HCV-RNA in PBMC by RT-PCR in real time. Check the influence of virus and host factors such as genotype, viral load, age, gender, race, IL28B polymorphism and liver biopsy on the parasitized cells with HCV and their cytokine production; Determine count and function of lymphocytes T CD4 + and CD8 + peripheral blood of patients; To determine the influence of parasitism lymphocytes HCV on the function of CD4 + and CD8 + T lymphocytes. METHODS: We studied 52 patients with chronic hepatitis C; of these, 17 patients were treated with IFNalpha + RBV; 10 healthy controls, treated at the Hepatitis Clinic of the Division of Clinical Infectious and Parasitic Diseases of the FMUSP. The lymphocyte subpopulation of T-cell count CD4 + and CD8 + peripheral been made by FACSCanto II flow cytometer (BD) through the multiset software (BD). the presence / absence of HCV-RNA in PBMC by real-time PCR was analyzed in the TaqMan system, Applied Biosystems thermal cycler StepOne (TM). The role of CD4 + T lymphocytes and CD8 + were assessed by ELISPOT technique utilizanso the Human Kit IFN-gamma / IL-4 Dual-Color FluoroSpot. The counting of the spots was carried out in an automated reader CTL-ImmunoSpot® S6 FluoroSpot Line. And fractionated PBMCs were depleted using Dynabeads kit is the Human CD4 FlowComp (Invitrogen Life Technologies) according to manufacturer\'s instructions. RESULTS: We studied 52 patients with chronic hepatitis C; of these, 17 patients were treated with IFNalpha + RBV; 10 healthy controls. Genotype 1 was the most prevalent 61.5%. The HCV RNA was detected in PBMC in 88.4% of patients. Our results showed an increase of CD4 and CD8 cells parasitized with HCV prior to treatment, with statistically significant amounts compared to controls only if CD4. There was however, a marked impairment in production of interleukins for these parasitized cells, particularly the production of IFN- y, with highly significant values (0.009). At week 12, we can see the increase in CD4 cells before treatment, but with decreased at week 12 and at follow up; However IL-4 production by CD4 cells increased at week 12 and again falls in the following; with the CD8 cells is slightly lower at week 12 but a recovery attempt at follow up; their IFN-y production drops at week 12 and follow up to statistically significant numbers. It is called \"exhaust\" function of these cells in vitro been described by some authors. This data is very useful in future observations of these patients are treated with AADs regimens without interferon alfa. CONCLUSION: In conclusion, the results confirm the important influence of the parasitism of CD4 and CD8 cells in their functions

A hepatite C é uma doença que leva à inflamação do fígado, sendo causada pelo vírus da hepatite C (VHC). Estima-se que existam 130 a 170 milhões de casos de infecção crônica pelo VHC por todo o mundo. Apesar do VHC ser principalmente hepatotrópico, foi evidenciada a detecção de RNA viral em células mononucleares do sangue periférico (PBMC). Evidências clínicas e experimentais têm demonstrado um importante tropismo do VHC por células do sistema imune, em especial por PBMCs. Apesar deste interessante achado, a importância da infecção do sistema imune na história natural da doença não é totalmente conhecida. É possível observar em alguns estudos que, em pacientes que desenvolvem infecção aguda, observa-se uma vigorosa resposta mediada por células T, específica ao VHC, mediada, por células T CD4+ e T CD8. Esta resposta é detectada na fase inicial da doença, e prolonga-se durante vários anos após a resolução do vírus. Pelo contrário, os pacientes que desenvolvem infecção crônica, apresentam, normalmente, respostas T fracas e / ou de curta duração, bem como defeitos nas funções efetoras de células T específicas. As respostas mediadas por células T com este perfil resultam, normalmente, em um baixo controlo da viremia e na sua persistência. Outra importante questão que permanece incerta até o presente momento é como a infecção das células imunes pelo VHC altera a sua função, principalmente no que concerne às PBMCs. Informações referentes às PBMCs e o VHC são pouco estudadas e referidas na literatura internacional, embora sejam de fundamental importância para a compreensão do seu peso na história natural da infecção. OBJETIVO: Baseado nessas incertezas o presente estudo tentará contribuir para a elucidação da influência do parasitismo por VHC na função de células TCD4+ e TCD8+ em pacientes naïve com indicação de tratamento com IFNpeg+RBV e comparar os dados obtidos antes, durante e pós-tratamento com os valores encontrados dos controles negativos, avaliando a influência do tratamento sobre a função dessas células. Verificar a presença do RNA-VHC nas PBMCs por RT-PCR em Tempo Real. Verificar a influência de fatores do vírus e do hospedeiro, tais como genótipo, carga viral, idade, gênero, raça, polimorfismo IL28B e biópsia hepática sobre as células parasitadas pelo VHC e sua produção de citocinas; Determinar a contagem e a função de linfócitos T CD4+ e CD8+ no sangue periférico desses pacientes; Determinar a influência do parasitismo de linfócitos pelo VHC sobre a função dos linfócitos TCD4+ e TCD8+. METODOLOGIA: Foram estudados 52 pacientes com hepatite C crônica; destes, 17 pacientes foram tratados com IFNalfa+RBV; 10 controles sadios, atendidos no Ambulatório de Hepatites da Divisão de Clínica de Doenças Infecciosas e Parasitárias do HC FMUSP. A contagem de células da subpopulação de linfócitos T CD4+ e CD8+ periféricas foram realizadas por citometria de fluxo FACSCanto II (BD) por meio do software MultiSet(BD). Foi analisada a presença/ausência do RNA-VHC em PBMC por PCR em tempo real no sistema TaqMan, no termociclador Applied Biosystems StepOne(TM). A função dos linfócitos TCD4+ e TCD8+ foram avaliadas através da técnica ELISPOT utilizanso o Kit Human IFN-gamma/IL-4 Dual-Color FluoroSpot. A contagem dos spots foi realizada em um leitor automatizado CTL-ImmunoSpot® S6 FluoroSpot Line. As PBMCs foram fracionadas e depletadas, utilizando-se o Kit Dynabeads FlowComp Human CD4 (Invitrogen Life Technologies) segundo as instruções do fabricante. RESULTADOS: Foram estudados 52 pacientes com hepatite C crônica; destes, 17 pacientes foram tratados com IFNalfa+RBV; 10 controles sadios. O genótipo 1 foi o mais prevalente 61,5%. O RNA do VHC foi detectado nas PBMCS em 88,4% dos pacientes. XVII Nossos resultados mostraram um aumento de células CD4 e CD8 parasitadas pelo VHC antes do tratamento, com valores estatisticamente significantes quando comparadas aos controles normais apenas no caso das CD4. Ocorreu, porém, um nítido prejuízo na produção de interleucinas por estas células parasitadas, particularmente a produção de IFN- y, com valores altamente significantes (0,009). Na semana 12, podemos ver o aumento de células CD4 no pré-tratamento, porém com diminuição na semana 12 e no follow up; entretanto a produção de IL-4 pelas células CD4 aumenta na semana 12 e cai novamente no seguimento; com as células CD8 ocorre leve queda na semana 12 porém uma tentativa de recuperação no follow up; sua produção de IFN-y cai na semana 12 e no follow up para números estatisticamente significantes. É a chamada \"exaustão\" de função destas células já descrita in vitro por alguns autores. Estes dados poderão ser muito úteis nas futuras observações desses pacientes que serão tratados com esquemas de DAAs sem interferon alfa. CONCLUSÃO: Em conclusão, os resultados desta pesquisa confirmam a importante influência do parasitismo das células CD4 e CD8 em suas funções / Hepatitis C is a disease that causes inflammation of the liver, caused by hepatitis C virus (HCV). It is estimated that there are 130 million to 170 million cases of chronic HCV infection worldwide. Although HCV is primarily hepatotropic was evidenced by detection of viral RNA in peripheral blood mononuclear cells (PBMC). Clinical and experimental evidence have demonstrated an important tropism of HCV by immune system cells, in particular by PBMC. Despite this interesting finding, the importance of infection of the immune system in the natural history of the disease is not fully known. It can be observed in some studies in patients who develop acute infection a vigorous response is observed mediated by T cells specific to HCV mediated by CD4 + and CD8. This response is detected at the initial stage of the disease, and extends for years after the resolution of the virus. Conversely, patients who develop chronic infection, are typically in the low T responses and / or short-term as well as defects in the effector functions of specific T cells. The responses mediated by T cells with the profile usually result in a low control of viremia and its persistence. Another important issue that remains unclear to date is how the infection of immune cells by HCV alters its function, especially with regard to the PBMCs. Information relating to the PBMCs and HCV are little studied and reported in the international literature, although they are of fundamental importance for the understanding of its weight in the natural history of infection. OBJECTIVE: Based on these uncertainties the present study attempts to contribute to the elucidation of the influence of parasitism by HCV on CD4 T cell function + and CD8 + in naïve patients with treatment indication with IFNpeg + RBV and compare the data obtained before, during and after treatment with the values found negative controls, assessing the influence of treatment on the function of these cells. Verify the presence of HCV-RNA in PBMC by RT-PCR in real time. Check the influence of virus and host factors such as genotype, viral load, age, gender, race, IL28B polymorphism and liver biopsy on the parasitized cells with HCV and their cytokine production; Determine count and function of lymphocytes T CD4 + and CD8 + peripheral blood of patients; To determine the influence of parasitism lymphocytes HCV on the function of CD4 + and CD8 + T lymphocytes. METHODS: We studied 52 patients with chronic hepatitis C; of these, 17 patients were treated with IFNalpha + RBV; 10 healthy controls, treated at the Hepatitis Clinic of the Division of Clinical Infectious and Parasitic Diseases of the FMUSP. The lymphocyte subpopulation of T-cell count CD4 + and CD8 + peripheral been made by FACSCanto II flow cytometer (BD) through the multiset software (BD). the presence / absence of HCV-RNA in PBMC by real-time PCR was analyzed in the TaqMan system, Applied Biosystems thermal cycler StepOne (TM). The role of CD4 + T lymphocytes and CD8 + were assessed by ELISPOT technique utilizanso the Human Kit IFN-gamma / IL-4 Dual-Color FluoroSpot. The counting of the spots was carried out in an automated reader CTL-ImmunoSpot® S6 FluoroSpot Line. And fractionated PBMCs were depleted using Dynabeads kit is the Human CD4 FlowComp (Invitrogen Life Technologies) according to manufacturer\'s instructions. RESULTS: We studied 52 patients with chronic hepatitis C; of these, 17 patients were treated with IFNalpha + RBV; 10 healthy controls. Genotype 1 was the most prevalent 61.5%. The HCV RNA was detected in PBMC in 88.4% of patients. Our results showed an increase of CD4 and CD8 cells parasitized with HCV prior to treatment, with statistically significant amounts compared to controls only if CD4. There was however, a marked impairment in production of interleukins for these parasitized cells, particularly the production of IFN- y, with highly significant values (0.009). At week 12, we can see the increase in CD4 cells before treatment, but with decreased at week 12 and at follow up; However IL-4 production by CD4 cells increased at week 12 and again falls in the following; with the CD8 cells is slightly lower at week 12 but a recovery attempt at follow up; their IFN-y production drops at week 12 and follow up to statistically significant numbers. It is called \"exhaust\" function of these cells in vitro been described by some authors. This data is very useful in future observations of these patients are treated with AADs regimens without interferon alfa. CONCLUSION: In conclusion, the results confirm the important influence of the parasitism of CD4 and CD8 cells in their functions