The aim of this study was to characterize the replication of tick borne encephalitis virus in mouse macrophages and investigate the influence of tick saliva derived from Ixodes ricinus on the viral replication. Moreover, the effect of interferon (the member of type I interferons) and nitric oxide on virus replication was studied.

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:20:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 doris_schor_ipec_dout_2013.pdf: 2453286 bytes, checksum: 49f58fa88cc32f6cad2e62edd9ecdcf8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / INTRODUÇÃO: O vírus linfotrópico para células T humanas (HTLV-1) é o principal agente causador da Paraparesia Espástica Tropical / Mielopatia associada ao HTLV-1 (PET/MAH) e da Leucemia da célula T do Adulto (LTA). A maioria dos indivíduos infectados permanece assintomática, somente 2 a 5% irão desenvolver uma das duas doenças. Fatores da interação HTLV-1/ hospedeiro estão envolvidos no risco de desenvolver doença. A lesão neurológica na PET/MAH parece ser consequência de uma reação inflamatória, desencadeada pelo reconhecimento de células infectadas por linfócitos T citotóxicos, com consequente liberação de citocinas e lesão medular. OBJETIVO: Identificar marcadores genéticos, que possam ajudar no prognóstico e tratamento dos pacientes portadores do HTLV-1. MÉTODOS: Nas amostras de 117 portadores do HTLV-1 assintomáticos e 171 pacientes com acometimento neurológico em acompanhamento na cidade do Rio de Janeiro, foram realizadas as tipificações dos genes do HLA Classe I e II, dos polimorfismos dos genes das citocinas -308TNF-\03B1,-174IL-6, +874IFN-\03B3, códon 10 e 25TGF-\03B21 e -1082 - 819-592IL-10, e a quantificação da carga proviral. Os dados foram organizados em um banco de dados no programa SPSS. As frequências alélicas e genotípicas foram obtidas por contagem direta. O equilíbrio de Hardy-Weinberg foi avaliado para os polimorfismos das citocinas no sitio http://bioinfo.iconcologia.net/ubbweb/SNPStats_web, em relação ao HLA foram utilizadas as ferramentas disponíveis no sítio \201CLos Alamos HIV database tools\201D. As comparações entre os grupos foram realizadas através de tabelas de contingência 2x2 (quiquadrado, exato de Fisher e odds ratios), valores de p\22640,05 foram considerados significantes RESULTADOS E CONCLUSÕES: O alelo A*02 não influencia a condição clínica nem os níveis da carga proviral. Os alelos A*29 e B*44 foram mais frequentes entre os indivíduos assintomáticos e a sua presença influenciou os níveis da carga proviral sugerindo proteção ao desenvolvimento de doença neurológica. O alelo A*68 foi mais frequente entre os pacientes com doença neurológica, porém sua presença não influenciou nos níveis da carga proviral. O alelo C*04 foi mais frequente entre os portadores assintomáticos e não influenciou os níveis de carga proviral, já o alelo DRB1*03 predominou entre os pacientes com doença neurológica e a sua presença entre os indivíduos assintomáticos acarretou níveis mais elevados de carga proviral, sugerindo ser um possível fator de risco para o desenvolvimento de doença neurológica. Na análise do polimorfismo genético das citocinas, o polimorfismo de IL-10, com perfil fenotípico de baixo produtor da citocina foi mais frequente no grupo dos assintomáticos, enquanto que o fenótipo de produtor intermediário predominou entre os sintomáticos. O perfil fenotípico da população estudada foi caracterizado como: baixo produtor da citocina -308TNF-\03B1, intermediário a alto produtor para códon 10 e códon 25 TGF-\03B2, baixo a intermediário produtor para -1082,-819,- 592 IL-10, alto produtor para -174 IL-6 e baixo a intermediário produtor para +874IFN-\03B3 / INTRODUCTION: The human T cell lymphotropic vírus (HTLV-1) is the main causing agent of Tropical Spastic Paraparesis/HTLV -1 Associated Myelopathy (HAM/TSP) as well as of Adult T Cell Leukemia (ATL). Most of the infected individuals remain asymptomatic, only 2 to 5 % end up developing either one of these diseases. Factors related to the HTLV-1/host interaction may be involved in the risk of developing the diseases. The neurological lesion in HA M/TSP may be the consequence of an inflammatory reaction, triggered by the rec ognition of infected cells by cytotoxic T lymphocytes, followed by the release of cyt okines and central nervous system lesion. OBJECTIVE: This work aims to identif y genetic markers, which may help in the prognosis and treatment of HT LV-1 patients. Methods: Th e polymorphism of the HLA Class I and II genes, as well as the TNF- α , IL6, IFN- γ , TGF- β and IL-10 cytokine genes, and the proviral load were analysed in 117 asymptomatic HTLV-1 carriers and 171 HTLV-1 symptomatic carriers from Rio de Janeiro city. Data were organized into a database using SPSS. The Hardy- Weinberg equilibrium was evaluated for cytokine polimorphisms using the site http ://bioinfo.iconcologi a.net/ubbweb/SNPStats _web. The tools available in the site “Los Alamos HIV dat abase tools” were used to analyze the HLA polimorphism s. Comparisons between groups were made using 2x2 contingency tables (Fisher Exact test/ χ 2 and odds ratios), p values p ≤ 0,05 were considered significan t. RESULTS and CONCLUSIONS: The A*02 allele does not influence the clinical condition or the leve ls of proviral load. The alleles A*29 and B*44 were more frequent among asymptom atic individuals and their presence influenced the levels of prov iral load, suggesting protec tion for the development of neurological disease. The A*68 allele was more frequent among patients with neurological disease, but did not influence the levels of proviral lo ad. The C*04 allele presented a higher frequency in the asymptomatic carriers , and did not influence the proviral load levels. The DRB1*03 allele was more frequent among the symptomatic carriers. However the asymptomatic indi viduals that possess the DRB1*03 allele, have higher levels of proviral load, sugges ting a possible risk factor for neurological disease. In the analysis of the genetic polymorphism of the cytokines, the IL-10 polymorphism, with a phenotypic profile of low cy tokine production was more frequent in the asymptomatic group, while the interm ediate producer phenotype predominated among the symptom atic. The phenotypic profile of the study population was characterized as low cytokine producer 308TNF- α -, intermediate to high producer for codon 10 and codon 25 TGF- β , low to intermediate producer to -1082, - 819, -592 IL-10, high producer for -174 IL-6 and low to intermediate producer to +874 IFN- γ .

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:53:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:09:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Resumo:Considerando-se a complexidade envolvida na resposta imune frente à infecção por Leishmania spp. nas diferentes espécies e a ausência de alterações clínicas na maioria dos gatos com leishmaniose visceral, o presente estudo teve como objetivos avaliar a expressão gênica de citocinas envolvidas na resposta imune celular (IFN-, TNF-α, IL-2) e humoral (IL-5) por PCR em tempo real em amostras de baço de 12 gatos naturalmente infectados por Leishmania spp., comparando-as à expressão gênica de quatro gatos saudáveis; e verificar a correlação entre a carga parasitária na medula óssea e a expressão gênica das citocinas no baço dos animais infectados. Nos gatos infectados observou-se aumento de 1,53 vezes na expressão gênica de IFNquando comparada ao grupo de animais hígidos (p=0,0005). Não foi verificada diferença estatisticamente significante na expressão gênica das demais citocinas avaliadas entre gatos infectados e hígidos (TNF-α p=0,4203, IL-2 p=0,1968, IL-5 p=0,6390). Não foi observada correlação entre a carga parasitária na medula óssea e a expressão gênica das citocinas no baço dos gatos infectados por Leishmania spp. (IFN- p = 0,1570; TNF- p = 0,5702; IL-2 p = 0,6081; IL-5 p = 0,2329). Estes resultados sugerem que o IFN- possa exercer papel relevante nos mecanismos de proteção contra a leishmaniose felina / Abstract:Considering the complexity of the immune response against Leishmania spp. infection in different species and the lack of clinical signs in the majority of cats with visceral leishmaniasis, this study aimed to evaluate the gene expression of some cytokines involved in cellular (IFN-, TNF α, IL-2) and humoral (IL-5) immune response by real-time PCR, on spleen samples from 12 cats naturally infected by Leishmania spp., comparing to the immune response of four healthy cats; and to verify the correlation between the parasite load in the bone marrow and the gene expression of cytokines in the spleen of infected animals. An increase of 1.53 times in IFN- gene expression was observed in infected cats when compared to healthy cats (p=0.0005). Statistically significant differences were not observed in gene expression of the cytokines evaluated between infected and healthy cats (TNF-α p=0.4203, IL-2 p=0.1968, IL-5 p=0.6390). Correlation was not observed between the parasite load in the bone marrow and the gene expression of cytokines in the spleen of cats infected by Leishmania spp. (IFN- p = 0.1570; TNF- p = 0.5702; IL-2 p = 0.6081; IL-5 p = 0.2329). These results suggest that IFN- may play an important role in the protective mechanisms against feline leishmaniasis / Orientador:Mary Marcondes / Banca:Juliana Peloi Vides / Banca:Wagner Luis Ferreira / Mestre

Plasmacytoid dendritic cells (PDCs) are one cellular target of HIV-1 and respond to the virus by producing type I interferons and chemokines. PDCs exposed to HIV-1 strongly upregulate the expression of maturation markers such as CD83, CD80, CD86 and CCR7, which will turn them into professional antigen presenting cells with the ability to stimulate naïve CD4+T cells. When HIV-1 binds to the CD4 receptor and a co-receptor (CCR5 or CXCR4) on PDCs, the cell takes up the virus by endocytosis. In response to this, PDCs will become activated and express maturation markers on their surface that make them able to stimulate T cells to trigger an immune response. In this thesis, studies have been performed with different forms of HIV-1, i.e. opsonized virions covered in complement and antibodies since these forms are supposed to be more similar to how HIV appears in the body. According to our results there is no significant difference in PDC maturation between the free and opsonized HIV-1.

HINTERGRUND: Eine inadäquate Aktivierung von Typ-1-IFN kann in der Entstehung von Autoimmunität und Autoinflammation resultieren. Die einer solchen dysregulierten Typ-1-IFN-Achse zu Grunde liegenden Störungen werden primär über das angeborene Immunsystem vermittelt. Krankheitsbilder, die durch eine chronische Typ-1-IFN-Aktivierung bedingt sind, werden daher unter dem Begriff Typ-1-Interferonopathien zusammengefasst. Diese Gruppe seltener, genetisch bedingter Erkrankungen zeichnet sich durch eine große symptomatische Bandbreite aus, wobei vor allem neurologische und kutane Manifestationen im Vordergrund stehen. Bisher aufgeklärte Pathomechanismen dieser systemisch-entzündlichen Erkrankungen haben einen Einblick in neue zellintrinsische Mechanismen gegeben, die zu einer Typ-1-IFN-Aktivierung führen und auf Störungen im Metabolismus und der immunologischen Erkennung intrazellulärer Nukleinsäuren beruhen. Daraus ergeben sich auch Erkenntnisse hinsichtlich des Einsatzes einer immunmodulatorischen Therapie zur kausalen Behandlung von Typ-1-Interferonopathien. FRAGESTELLUNG: Typ-1-Interferonopathien gehören zu den genetisch bedingten, seltenen Erkrankungen. Eine Diagnosestellung ist jedoch aufgrund mangelnder Kenntnisse über die Krankheitsursache häufig nicht möglich, sodass kausale Therapieansätze für viele Patienten nicht existieren. Die Aufklärung der genetischen Ursache solcher Erkrankungen ist demnach von essentieller Bedeutung. Auch die hier untersuchten Familien leiden an bisher nicht molekulargenetisch diagnostizierten Krankheiten, deren Phänotyp jedoch eine Typ-1-Interferonopathie vermuten lässt. Vor diesem Hintergrund war es das Ziel dieser Arbeit, bisher unbekannte Gene zu identifizieren und zu charakterisieren, welche Krankheitsbilder mit chronischer Typ-1-IFN-Aktivierung verursachen. MATERIAL UND METHODEN: Anhand klinischer Daten wurden zunächst die Krankheitsbilder der zwei betroffenen Familien charakterisiert und hinsichtlich der Gemeinsamkeiten mit bekannten Typ-1-Interferonopathien untersucht. Zudem wurde das Vorliegen einer chronischen Typ-1-IFN-Aktivierung bei den erkrankten Familienmitgliedern untersucht. Mit Hilfe von Exomanalysen und anschließenden bioinformatischen Analysen wurde nach dem ursächlichen Krankheitsgen gesucht. Die in diesem Rahmen in der Familie 1 nachgewiesene STING-Mutation wurde unter Verwendung von molekularbiologischen sowie zellbiologischen Analysen eingehend untersucht und zudem ihre Konsequenzen auf die IFN-Achse und die Stabilität des STING-Dimers mittels Strukturmodellierungen charakterisiert. Hinsichtlich der Aufklärung der genetischen Ursache der Erkrankung der Familie 2 wurde ebenfalls eine Exomanalyse durchgeführt. Da dabei jedoch keine Mutation identifiziert werden konnte, erfolgte eine Analyse differentiell exprimierter Transkripte mit Hilfe von Transkriptomdaten von Fibroblasten gesunder Kontrollen im Vergleich zu erkrankten Familienmitgliedern der Familie 2. ERGEBNISSE: Im Verlauf dieser Arbeit konnte in der Familie 1 mit einem familiären Chilblain Lupus eine kausale heterozygote Mutation im STING-Gen identifiziert werden. Diese bisher nicht beschriebene Mutation bedingt den Aminosäureaustausch Gly166Glu (G166E) im hochkonservierten Dimerinterface des STING-Proteins. Strukturmodelle ergaben Hinweise auf strukturverändernde Eigenschaften der Mutation G166E, die das STING-Dimer konstitutiv aktivieren. Dies konnte experimentell bestätigt werden, da in den peripheren Blutzellen der Patienten eine erhöhte IFN-Signatur nachgewiesen werden konnte und Patientenfibroblasten eine erhöhte Produktion von IFN-β sowie eine vermehrte Phosphorylierung von IRF3 zeigten. Um den Einfluss einer therapeutischen Immunmodulation über eine JAK-Inhibition zu untersuchen, wurden zwei Erkrankte der Familie 1 mit dem JAK-Inhibitor Tofacitinib über einen Zeitraum von 17 Tagen behandelt. Es konnte dabei in vivo eine signifikant reduzierte IFN-Signatur nachgewiesen werden. Mit Hilfe der Exomanalyse konnte in der konsanguinen Familie 2 mit einem AGS-ähnlichen Phänotyp keine kausale Mutation identifiziert werden. Es zeigte sich zudem, dass in den Patientenzellen keine erhöhte IFN-Signatur sowie keine erhöhte IFN-β Produktion nachweisbar waren. Die vergleichende Transkriptomanalyse ergab keine auffällige differentielle Expression von Genen des Aminosäure-Metabolismus, der Seneszenz, des Zellzyklus, der DNA-Schadensantwort und DNA-Reparatur sowie von Genen immunologischer Prozesse. Allerdings wurde die vollständig fehlende Expression der Gene COL6A1 und COL6A2 in den Patientenzellen nachgewiesen. SCHLUSSFOLGERUNG: Die identifizierte STING-Mutation der Familie 1 führt zu einer chronischen Aktivierung der Typ-1-IFN-Achse und ist folglich als Gain-of-function Mutation anzusehen. Die Behandlung mit dem immunmodulierenden JAK-Inhibitor Tofacitinib führt zu einer Verminderung der IFN-Signatur und bietet somit einen vielversprechenden Ansatz für eine kausale Therapie. Weiterführende Untersuchungen, vor allem bezüglich der Langzeiteffekte, sind hier jedoch noch erforderlich. Die Erkrankung der Familie 2 ist dagegen vermutlich nicht den Typ-1-Interferonopathien zuzuordnen. Vielmehr scheint es zum jetzigen Zeitpunkt wahrscheinlich, dass eine Mutation innerhalb eines regulatorischen Elements, das die Expression der Gene COL6A1 und COL6A2 reguliert, für den Phänotyp der Erkrankten verantwortlich ist. Weiterführende Untersuchungen sind hier zukünftig von großem Interesse.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:53:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:09:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito da inibição das cadeias inflamatórias reguladas pela ação do interferon-gama (IFN-γ) e da enzima óxido nítrico sintase indutível (iNOS) no dano radioinduzido após exposição a dose letal (8 Gy) ou moderada a severa (4 Gy) nos tecidos hematopoiéticos (baço e medula) de modelos experimentais irradiados nestas doses. Grupos de camundongos isogênicos C57Bl/6j foram expostos à radiação correspondente a 4 ou 8 Gy em exposições de corpo inteiro em fonte panorâmica de 60Co. Da mesma forma, foram irradiados camundongos cuja expressão de IFN-γ ou iNOS é ausente ou indetectável. Outros grupos receberam via oral por toda a duração do experimento um inibidor atividade de iNOS, aminoguanidina, ou via intraperitoneal uma quimiocina primordial promotora da hematopoiese, CXCL12, até o quarto dia após a exposição. Outra divisão experimental recebeu os dois agentes concomitantemente. Os animais foram sacrificados nos dias 2º, 4º e 8º após a irradiação, e fragmentos dos baços e fêmures foram preservados para histologia. Os esplenócitos e células não aderentes da medula óssea femoral foram removidos e divididos, fornecendo alíquotas para posterior RT-PCR e suspensões celulares apropriadas para ensaios de citometria de fluxo específicos para a detecção da freqüência de populações CD34+. Nestes mesmos dias de experimento, alíquotas de sangue caudal foram coletadas para contagem de hemácias e plaquetas periféricas. Os resultados mostraram que a ausência da produção de interferon-gama no local irradiado aumenta a sobrevivência e a quantidade de células progenitoras hematopoiéticas e que a ausência de iNOS ou seu bloqueio funcional diminuem a extensão do dano radioinduzido nos tecidos hematopoiéticos. Além disso, foi possível observar que a suplementação com CXCL12 sintética aumenta a freqüência do fenótipo CD34+ P.chave: radiação ionizante; medula óssea; óxido nítrico; aminoguanidina nos baços dos modelos testados, e que seu efeito parece antagonizar com a inibição da produção de NO pela aminoguanidina. / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Orientador: Ricardo Della Coletta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-09T19:23:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sobral_LaysMartin_M.pdf: 14271407 bytes, checksum: 448e55c30e66d3c36643955fe6ab0225 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Miofibroblastos são células especializadas que exercem funções importantes em processos fibróticos através da síntese elevada de macromoléculas da matriz extracelular, proteases e citocinas. O exato mecanismo do surgimento (transdiferenciação) dos miofibroblastos permanece desconhecido, porém inúmeros estudos sugerem que o fator de crescimento transformante-'beta'1 (TGF-'beta'1) exerça um papel importante neste processo via ativação do fator de crescimento de tecido conjuntivo (CTGF). Em oposição aos efeitos de TGF-'beta'1, algumas citocinas inflamatórias, incluindo interferon 'gama' (IFN'gama'), parecem inibir a transdiferenciação dos miofibroblastos. O uso da droga imunossupressora ciclosporina A (CsA) é freqüentemente associada a inúmeros efeitos colaterais, sendo o aumento gengival fibrótico o de maior interesse para a área odontológica. Linhagens celulares de fibroblastos de gengiva normal tratadas com CsA expressam níveis elevados de TGF-'gama'1 e colágeno, que são intrínsecos do fenótipo miofibroblástico. Os objetivos deste estudo foram compreender a participação de TGF-'beta'1 e IFN'gama' na transdiferenciação dos fibroblastos gengivais em miofibroblastos e entender os mecanismos de ação destes fatores neste processo. Adicionalmente, nós verificamos a presença de miofibroblastos em aumentos gengivais induzidos por CsA. Nossos resultados demonstraram, através de 4 diferentes ensaios: transcriptase reversa-reação em cadeia da polimerase (RTPCR), western blot, imunofluorescência e citometria de fluxo, que TGF-'beta'1 induz e FNg bloqueia a transdiferenciação dos fibroblastos gengivais em miofibroblastos metabolicamente ativos em uma maneira dependente da dose e tempo. Nas células onde a expressão de CTGF foi significantemente reduzida por seqüências específicas de RNA de interferência, TGF-'beta'1 não foi capaz de promover a transdiferenciação dos miofibroblastos, revelando que TGF-'beta'1 é dependente da ativação de CTGF para induzir a transdiferenciação dos fibroblastos gengivais em miofibroblastos. IFN'gama' bloqueou a transdiferenciação dos miofibroblastos por estimular a expressão de Smad 7, uma proteína que regula negativamente a atividade de TGF-'beta'1. Interessantemente, miofibroblastos não foram associados aos aumentos gengivais induzidos por CsA, como revelado pelos modelos in vivo de injeções diárias de CsA em ratos Wistar e in vitro de tratamento de fibroblastos gengivais com CsA. Embora CsA tenha induzido a expressão de TGF-'beta'1, não demonstrou nenhum efeito na modulação dos níveis de CTGF. Nossos resultados demonstram que a indução da transdiferenciação dos miofibroblastos por TGF-'beta'1 é dependente da estimulação de CTGF. Adicionalmente, este estudo sugere que IFN'gama' pode ser clinicamente efetivo no tratamento de alterações fibróticas associadas à presença de miofibroblastos, pois atenua a excessiva produção de colágeno tipo I por estas células / Abstract: Myofibroblasts are the main cellular type involved in extracellular matrix deposition in fibrotic diseases. Relatively little is known about the underlying mechanisms that regulate myofibroblast emergence (transdifferentiation), however the regulatory cytokine transforming growth factor-beta 1 (TGF-'beta'1) has been traditionally considered an inducer of the myofibroblastic phenotype via activation of connective tissue growth factor (CTGF)-dependent pathway. Some inflammatory cytokines, particularly interferon g (IFN'gama'), show opposite effects to TGF-'beta'1, inhibiting myofibroblast transdifferentiation. Cyclosporin A (CsA) is a widely used immunosuppressant drug that causes significant side effects such as gingival overgrowth. Normal gingival fibroblast cell lines treated with CsA express high levels of TGF-'beta'1 and collagen, which are intrinsic of myofibroblasts. In the present study we examined whether TGF-'beta'1 and IFN'gama' can modulate transdifferentiation of gingival fibroblasts into myofibroblasts, and the biologic mechanisms behind those factors in this process. Additionally, we have analyzed the presence of myofibroblasts in CsA-induced gingival overgrowth. Our results demonstrated throughout a modality of experiments that included reverse trancriptasepolymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, immunofluorescence and flow citometry analysis, that TGF-'beta'1 induces and IFN'gama' blocks fibroblast-myofibroblast transdifferentiation in a dose- and time-dependent manner. In fibroblasts with CTGF levels know-down by specific small interference RNA, TGF-'beta'1 effect on transdifferentiation was significantly reduced, revealing that CTGF plays a crucial role in mediating TGF-'beta'1 myofibroblast transdifferentiation. IFN'gama' blocked myofibroblast transdifferentiation by stimulating Smad 7 levels, a protein that negatively regulates TGF-'beta'1 signaling. Interestingly, myofibroblasts were not found in CsA-induced gingival overgrowth, as revealed by the in vivo model of daily injections of CsA in Wistar rats and by the in vitro model of gingival fibroblast cultures treated with CsA. Although CsA treatment stimulated TGF-'beta'1 expression by NG fibroblasts, it lacked to induce CTGF levels. Our results demonstrate that TGF-'beta'1 induction of transdifferentiation of gingival fibroblasts to myofibroblasts occurs via a CTGF dependent pathway. Additionally, this study suggests that IFN'gama' may be clinically effective in the treatment of fibrotic diseases associate with myofibroblast / Mestrado / Patologia / Mestre em Estomatopatologia

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Claudia Maria de Melo Silva.pdf: 2215806 bytes, checksum: c9afeecd5c357af061e1b38a8a31df56 (MD5) Previous issue date: 2014-04-28 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Tuberculosis (TB) is a chronic infection caused by Mycobacterium tuberculosis complex and remains a major worldwide public health problem, leading to almost 1.45 million deaths annually. The state of Amazonas has a high rate incidence of TB, about 68.3/100,000 inhabitants in 2012. Only 5 to 10% of infected individuals develop active TB. It has been suggested that host factors determine the immune response to pathogen. Thus, many immunogenetic researches have demonstrated TB associated genes, but in the north region, research in this field is still rare. This fact motivated the investigation of polymorphisms for IFNG, IL12B, CD80 and CD86 genes, which codify proteins for cellular immune response. Furthermore, IFN- concentration and its relation with genotypes found have been verified. A total of 177 patients and 224 controls (159 contacts and 65 non-contacts) were included in this study and DNA sequencing was performed for genes IFNG (SNP +874A/T and microsatellite +875), IL12B (SNPs +1030C/T, +1188A/C and +1254T/G), CD80 (SNPs -454 C/A, -387 T/C, -232 G/A, -79 C/G, -7T/C, +5C/A and an indel polymorphism -557_-561insCATGA) and CD86 (SNPs +1057G/A and +1079G/A). The IFN-y concentration was determined by enzyme-linked immunoassay. At IFNG, the presence of the allele +874A and the allele with 15 CA repeats were associated with susceptibility to pulmonary TB, while the allele +874T and the allele with 12 CA repeats were associated with protection from pulmonary TB. In addition, an association between genotype CC (SNP +1188A/C at IL12B) and increased risk of pulmonary TB was found. Furthermore, a significant difference between IFN- concentration and genotypes of SNP +1188A/C at IL12B and microsatellite at IFNG was observed, with decrease of IFN-at genotype CC and 15 CA repeats respectively. These outcomes lead to a better understanding of the immune response regulation for TB and help to determine the genetic profile of the Amazon population. Future researches are still needed for a better understanding of the role of other genes involved in the immune response to M. tuberculosis and their influence at the production of citokines like IFN-. / A Tuberculose (TB) é uma infecção crônica causada pelo complexo Mycobacterium tuberculosis sendo um importante problema de saúde pública mundial, levando a aproximadamente 1,45 milhões de mortes a cada ano. O estado do Amazonas possui uma alta incidência desta doença, atingindo 68,3 casos por 100 mil habitantes em 2012. Dos indivíduos infectados pelo bacilo, cerca de 5 a 10% desenvolvem a Tuberculose ativa, sugerindo que há fatores associados ao hospedeiro que determinam o destino da resposta imune ao patógeno. Neste contexto, diversos estudos em imunogenética têm demonstrado genes associados à TB, mas na região norte ainda são raras as pesquisas nesta área, fato que motivou a investigação da frequência dos polimorfismos nos genes IFNG, IL12B, CD80 e CD86, que codificam para proteínas fundamentais na resposta imune celular. Além disso, foi verificado se a concentração de IFN- está relacionada com o genótipo encontrado. Foram incluídas amostras de 177 pacientes e 224 controles (159 contatos e 65 não contatos) e realizado sequenciamento de DNA para os genes IFNG (SNP +874A/T e microssatélite +875), IL12B (SNPs +1030C/T, +1188A/C e +1254T/G), CD80 (SNPs -454 C/A, 454 C/A, 454 C/A, 454 C/A, -387 T/C, 387 T/C, 387 T/C, -232 G/A, 232 G/A, 232 G/A, -79 C/G, 79 C/G, 79 C/G, -7T/C e 7T/C e 7T/C e 7T/C e +5C/A+5C/A +5C/A e um polimorfismo indel -557_-561insCATGA) e CD86 (SNPs +1057G/A e +1079G/A). A determinação das concentrações de IFN-foi realizada através de ensaio imunoenzimático. Foi verificada uma associação do gene IFNG, entre a presença do alelo +874A e 15 repetições CA, como fator de risco para TB pulmonar assim como a presença do alelo +874T e 12 repetições CA como fatores de proteção contra TB pulmonar. Também foi encontrada uma associação do genótipo CC, do SNP +1188A/C no gene IL12B, como fator de risco ao desenvolvimento da TB pulmonar. Houve diferença significativa na concentração de IFN-entre os genótipos do SNP +1188A/C no gene IL12B e o microssatélite no gene IFNG, com menor produção no genótipo CC e 15 repetições CA respectivamente. Estes resultados contribuem para o melhor entendimento da regulação na resposta imune à TB e auxilia na determinação do perfil genético da população da região Amazônica. Estudos futuros são necessários para uma melhor compreensão do papel de outros genes envolvidos na resposta imunológica a M. tuberculosis e influência nos níveis de produção de citocinas como IFN-.

As pessoas vivendo com HIV tÃm probabilidade aumentada de desenvolver, apresentar formar graves, ter cepas multirresistentes e morrer por tuberculose. A profilaxia para infecÃÃo latente por Mycobacteium tuberculosis (ILTB) diminui a chance de ativaÃÃo de tuberculose (TB) numa mÃdia de 62% nessa populaÃÃo. Entretanto, o diagnÃstico da TB na sua forma latente à controverso. O teste tuberculÃnico (TT) à o Ãnico exame aprovado no Brasil para avaliaÃÃo dessa infecÃÃo, embora existam problemas tanto na sua realizaÃÃo quanto na sua interpretaÃÃo. Exames de liberaÃÃo de interferon-gama foram criados recentemente com o objetivo de aumentar a especificidade e a praticidade da investigaÃÃo da ILTB. Esse estudo se propÃs a avaliar como vem sendo feita a investigaÃÃo da ILTB e o desempenho do TT e do QuantiFERON-TB Gold In-Tube (QTF-GIT) em portadores de HIV. Foram selecionados ao todo 351 pacientes portadores de HIV e sem evidÃncia de TB ativa, admitidos em dois centros de referÃncia de Fortaleza-CE, no perÃodo de 2007-2010. Na admissÃo, 41,8% dos pacientes realizaram TT, 36,3% foram avaliados quanto a contato com TB e 28,4% tiveram radiografia de tÃrax. A profilaxia foi realizada para 73,3% dos pacientes com TT positivo. Houve diagnÃstico de ILTB em 25,3% dos pacientes de acordo com o TT e em 6,7% pelo QTF-GIT (p<0,001). A correlaÃÃo entre os resultados dos dois testes foi considerada fraca (k= -0,037). Resultado positivo do TT esteve associado com drogadiÃÃo (OR 7 CI: 1,53-32,11; p=0,01), contato com TB bacilÃfera (OR 13 CI: 2,7-62,83; p=0,001), profilaxia para ILTB prÃvia (OR 17,5 CI: 3,4-90,4; p<0,001), procedÃncia do interior do estado (OR 2,74 CI:1,04-7,22; p= 0,04). NÃo houve associaÃÃo entre QTF-GIT positivo e fatores de risco para TB. A mÃdia de contagem de linfÃcitos T CD4+ nos indivÃduos com TT positivo foi superior à mÃdia dos com TT negativo (535,8 vs. 373,4 cÃl/mm3; p=0,006), enquanto o inverso ocorreu em relaÃÃo ao QTF-GIT (277 vs. 438,3 cÃl/mm3; p= 0,055). A mÃdia do logaritmo da carga viral foi superior naqueles com QTF-GIT positivo (4,81 vs. 2,11 log10 cÃp/ml; p= 0,005). Mais da metade dos pacientes nÃo realizou TT, apesar da alta prevalÃncia de ILTB. O TT contou com maior nÃmero de testes positivos. O QTF-GIT mostrou-se superior para pacientes com elevada viremia e imunossupressÃo. Sugere-se o uso de ambos os testes de forma complementar para aumentar a chance de diagnÃstico de ILTB e diminuir os riscos de progressÃo da doenÃa. / People living with HIV have an enhanced chance to develop and to die of tuberculosis (TB). Many studies demonstrate that chemoprophylaxis for latent tuberculosis infection (LTBI) reduces the progression to active TB. Indeed, the diagnosis of LTBI is controversial. In Brazil, the only test approved for use is the tuberculin skin test (TST), however, this test is complicated by several problems due to application and interpretation of the exam. Recently developed interferon-gamma release assays (IGRA) using Mycobacterium tuberculosis-specific antigens have the advantage of decreased cross-reactivity and, therefore, increased specificity. The purpose of this study is to evaluate the adherence of LTBI diagnosis and to compare the results of the QuantiFERON-TB Gold In-Tube test (QTF-GIT) and TST in a population of HIV-positive individuals from a country with high prevalence of TB. A cross-sectional study was carried out with 351 HIV patients without active tuberculosis, attending outpatient in two reference centers, from November 2007- 2010. At admission, 41.8% had realized TST, 36.3% had been interrogated about TB exposure and 28.4% had performed a chest X-ray. Chemoprophylaxis was offered to 73.3% of TST positive patients. The TST and QTF-GIT results were positive in 25.3% and 6.7% (p<0.001) of the individuals, respectively. The agreement between the two tests was poor (k= -0.037). Drug use (OR 7, 95% CI 1.5-32.1; p=0.01), TB exposure (OR 13, 95% CI 2.7-62.83; p=0.001), previous LTBI prophylaxis (OR 17.5, 95% CI 3.4-90.4; p<0.001), and living outside the state capÃtal (OR 2.7, 95% CI 1-7.2; p= 0.04) were associated with a positive TST result. There is no association between QTF-GIT positive result and risk factors for TB. TST positive individuals had a higher mean CD4+ cell count than those with TST negative result (535.8 cell/mm3 vs. 373.4 cell/mm3; p=0.006), in contrast to QTF-GIT positive result (277 cell/mm3 vs. 438.3 cell/mm3; p= 0.055). Higher viral load was associated with QTF-GIT positive result (4.8 log10 cop/ml vs. 2.1 log10 cop/ml; p= 0.005). Despite of Brazil being a country with a high burden of TB, more than half the patients have not realized TST, which appears to be more sensitive than QTF-GIT for diagnosis of LTBI. Otherwise, QTF-GIT shows better results in patients with advanced immunosuppression and high viral load. We suggest the use of both tests to increase LTBI diagnosis and decrease the risk of disease progression.