Orientador: João Jose Fagundes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:06:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rocha_AntonioAngelo_M.pdf: 9354064 bytes, checksum: 2c1f3e7dd58858060ae0eb8ca742c8d6 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A cicatrização intestinal é assunto complexo. A má cicatrização conduz a expressivos índices de morbidade e mortalidade. O entendimento da resposta intestinal às situações de adversidade é assunto amplamente pesquisado. A oxigenoterapia hiperbárica apresenta papel defmido no tratamento de várias afecções. Alguns autores relatam, experimentalmente, melhora na cicatrização de anastomoses intestinais com seu uso na presença ou não de isquemia. Porém, ainda são controversos os efeitos da hiperóxia hiperbárica na isquemia intestinal em alça íntegra sem anastomose. Neste trabalho, analisaram-se os efeitos da oxigenoterapia hiperbárica em alça cólica íntegra com três diferentes graus de isquemia induzida. Foi proposto o estudo mecânico da alça intestinal pelo teste de pressão de ruptura pela distensão por líquido para aferir a qualidade da cicatrização intestinal. Foràm utilizados 80 ratos distribuídos em quatro grupos de 20 animais. No grupo 1 (Gl), grupo controle, não se provocou isquemia. A isquemia cólica foi induzida nos grupos 2 (G2), 3 (G3) e 4 (G4). No G2, fez-se ligadura do tronco da artéria mesentérica inferior e da arcada marginal a quatro centímetros acima da reflexão peritoneal. No grupo 3, fez-se ligadura do tronco da artéria mesentérica inferior, da arcada marginal a quatro centímetros acima da reflexão peritoneal e da arcada marginal ao nível da reflexão peritoneal. No G4, ampliou-se a isquemia, por meio da ligadura dos seguintes vasos: artéria cólica média, artéria mesentérica inferior e arcada marginal ao nível da reflexão peritoneal. Logo após o ato operatório, cada grupo de vinte animajs foi dividido em dois subgrupos de dez animais cada: Com Câmara Hiperbárica (CC) e Sem Câmara Hiperbárica (SC). Os animais dos quatro subgrupos CC eram colocados em uma câmara hiperbárica experimental para inalarem oxigênio a 100%, a duas Atmosferas Absolutas, durante 120 minutos. Cada sessão em repetida diariamente, no mesmo horário, por quatro dias consecutivos. Nos intervalos entre as sessões, os animais respiravam ar ambiente e tinham livre acesso à ração e água. No quinto dia do experimento, ou seja, quarto dia de pós-operatório, os animais eram submetidos à eutanásia. Os animais dos quatro subgrupos SC foram mantidos em ar ambiente durante os cinco dias do experimento. As sessões de câmara hiperbárica não foram empregadas. Não ocorreram óbitos em nenhum dos grupos. Os testes estatísticos utilizados foram Análise de Variância (ANOVA) e Teste de Tukey. Os quatro grupos são diferentes entre si considerando o fator isquemia (p = 0,0001). O grupo 4 é mais isquêmico que o grupo 3; o grupo 3 não difere do grupo 2; porém o grupo 2 é mais isquêmico que o grupo 1. Não houve diferença estatística entre os subgrupos ce e se (p = 0,3461). A análise dos resultados deste trabalho permite concluir que: A oxigenoterapia hiperbárica não apresenta melhora sobre a isquemia induzida em alça cólica íntegra de ratos / Abstract: The intestinal cicatrization is a complex issue. A bad cicatrlzation leads to high levels of mortality and morbidity. The understanding of the intestinal answers to the adversity situations is a highly researched issue. The hyperbaric oxygen-therapy presents a defined role in the treatment of a lot of affections. Some authors report, experimentally, intestinal anastomoses cicatrization improvement with its use under the presence of ischemia or noto However, the efIects of hyperbaric hyperoxia in intestinal ischemia in upright lug without anastomosis are still controversial. The effects of hyperbaric oxygen-therapy in upright colic lug were analyzed with three different levels of induced ischemia. It was proposed a mechanical study of the intestinallug by the pressure test of the rupture by liquid distension in order to check the quality of intestinal cicatrization. Eighty rats, distributed in four groups of 20 animals in each one, were used. In group 1 (G1), the control group, ischemia was not caused. The colic ischemia was induced in groups 2 (G2), 3 (G3) and 4 (G4). In G2, it was performed the ligature of the inferior mesenteric artery trunk and ofthe marginal arcade at four centimeters above the peritoneal reflection. In group 3, it was performed the ligature of the inferior mesenteric artery trunk, of the marginal arcade at four centimeters above the peritoneal reflection and of the marginal arcade at the leveI of the peritoneal reflection. In G4, the ischemia was broaden through the ligature of the following vessels: middle colic artery, inferior mesenteric artery and marginal arcade to the leveI of peritoneal reflection. Soon afier the operatory setting each group of twenty animals was divided into two subgroups of ten animaIs each: With Hyperbaric Chamber (CC) and Without Hyperbaric Chamber (SC). The animais of the four CC subgroups were placed in an experimental hyperbaric chamber in order to inhale oxygen at 100%, at two AbsoIute Atmospheres, for 120 minutes. Each session was repeated daily, at the same time, for a four-day consecutive period. In the intervals between the sessions the animaIs could breath environrnent air and allowed to water and ration. In the fifth day after the experiment, that is, in the fourth post-operative day, the animaIs were undergone to euthanasia. The animaIs of the four SC subgroups were kept in environrnent air during the tive days of the experiment. The hyperbaric chamber sessions were not applied. There was no death in any of the groups. The statistical tests applied were the Variance Analyze (ANOVA) and the Tukey Test. Considering the ischemia factor (p=0,00001),the four groups were difIerent among them Group 4 is more ischemic than group 3; group 3 doesn't differ ttom group 2;but group 2 is more ischemic, than group I. There was no statistical difference between the subgroups ee and se (p=0.3461).The result analysis of the work leads to conclude that: The hyperbaric oxygen-therapy does not present improvement on the induced ischemia in rats upright colic lug / Mestrado / Pesquisa Experimental / Mestre em Cirurgia

Doctor en Farmacología / En Chile, la patología cardiovascular tiene una elevada prevalencia y constituye la primera causa de muerte del país. Esta realidad ha provocado un aumento significativo de la morbimortalidad perioperatoria, por lo que se recomienda el uso de fármacos cardioprotectores (bloqueadores β-adrenérgicos, estatinas y agonistas α2-adrenérgicos) durante este período. La dexmedetomidina (DEX) es un agonista α2-adrenérgico de uso frecuente en anestesia, con potenciales efectos cardioprotectores. Recientemente, se ha sugerido que produciría un precondicionamiento isquémico al estimular receptores α2-adrenérgicos postsinápticos. Sin embargo, hasta este momento se desconocen los mecanismos moleculares asociados a la potencial cardioprotección inducida por dexmedetomidina. Para responder a esta interrogante, se utilizó un modelo in vivo y un modelo ex vivo de ratas Sprague Dawley, machos, cuyos corazones se sometieron a 30 min de isquemia miocárdica regional y 120 min de reperfusión. Se determinaron los niveles de fosforilación de ERK 1/2, Akt y eNOS, previo a la isquemia y los tamaños de infartos y la recuperación de la función ventricular, al final del periodo de reperfusión. Se estudió la relación entre la activación de kinasas de sobrevida y el efecto precondicionante del fármaco, mediante la inhibición de PI3K. Finalmente, se determinó la presencia y localización de los potenciales subtipos de receptores α2-adrenérgicos involucrados en la cardioprotección inducida por DEX. Los resultados mostraron que en ambos modelos, el precondicionamento con DEX aumentó significativamente los niveles de fosforilación de ERK 1/2, Akt y eNOS, previo a la I/R y redujo significativamente los tamaños de infarto en el área de riesgo, propiciando una mejor recuperación de la función ventricular, al término de la reperfusión. La administración de yohimbina y la inhibición de PI3K, revirtieron la reducción de los tamaños de infarto y la recuperación de la función ventricular inducida por DEX. Además, se demostró la existencia de receptores α2-adrenérgicos en los cardiomiocitos. Los resultados sugieren que el precondicionamiento con DEX produce cardioprotección frente a eventos de isquemia y reperfusión miocárdica regional, muy probablemente al producir activación de la kinasas relacionadas con sobrevida, posterior al estímulo de receptores α2-adrenérgicos ubicados en los cardiomiocitos. Estos hallazgos pueden ser relevantes en el manejo anestésico del perioperatorio de pacientes de alto riesgo cardiovascular / In Chile, cardiovascular disease is highly prevalent and is the leading cause of death in the country. This fact has caused a significant increase in perioperative cardiovascular morbidity and mortality; therefore, the use of cardioprotective drugs (β-adrenergic blockers, statins and α2-adrenergic agonists) during the perioperative period is recommended. Dexmedetomidine (DEX) is an α2-adrenergic agonist commonly used in anesthesia, with potential cardioprotective effects. Recently, it has been suggested that DEX produces ischemic preconditioning by means of postsynaptic α2-adrenergic receptors stimulation. However, molecular mechanisms associated with the potential cardioprotection induced by dexmedetomidine still remains unknown. In order to answer this question, an in vivo and an ex vivo models of male Sprague Dawley rats, whose hearts were subjected to 30 min regional myocardial ischemia and 120 min of reperfusion, were developed. Levels The phosphorylated levels of ERK1/2, Akt and eNOS before ischemia and infarct size and ventricular function recovery at the end of reperfusion period, were determined. The relationship between activation of survival kinases and preconditioning effect of the drug, it was studied by specific PI3K inhibition. Finally, we investigated the presence and location of α2-adrenergic receptor subtypes potentially involved in DEX induced cardioprotection. The results showed that in both modelsDEX preconditioning significantly increased the phosphorylated levels of ERK 1/2, Akt and eNOS, prior to the I/R and significantly reduce infarct size in the area of risk, leading to a better ventricular function recovery at the end of reperfusion. The administration of yohimbine and PI3K inhibition, reversed the reduction of infarct size and ventricular function recovery induced by DEX. Furthermore, the existence of α2-adrenergic receptors in cardiomyocytes, was demonstrated. The results suggest that DEX preconditioning produces cardioprotection against regional myocardial ischemia and reperfusion events, by means of survival kinases activation after stimulation of α2-adrenergic receptors located in cardiomyocytes. These findings may be relevant in the perioperative anesthetic management of patients at high cardiovascular risk

Orientador : Luiz A. K. Bittencourt / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-19T04:25:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bastos_Avelino_D.pdf: 2631154 bytes, checksum: 9233285d7d051056bb10d316a456b9e1 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: O objetivo do trabalho é analisar a ocorrência de isquemia miocárdica na cardiopatia chagásica crbnica. Cinquenta e dois pacientes portadores da forma cronica da doença de Chagas, submetidos ao teste de esforço, que apresentaram testes sugestivos de isquemia miocárdica, foram comparados com 21 pacientes chagásicos que apresentaram resultados normais. Foram analisados 24 paràmetros, que poderiam influenciar no resultado...Observação: O resumo, na integra, podera ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The present study analyzed the frequency of myocardial ischemia in individuaIs with chronic chagasic cardiomyopathy. Fifty-two patients with chronic Chagas' disease who had exercise test results indicative of myocardial ischemia were compared with 21 patients having Chagas' disease but whose test results were normal. Twenty -four parameters which could influence the results "'lere analyzed...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Medicina

Introdução: A torção testicular permanece como uma emergência urológica, despertando grande interesse em fármacos que podem minorar a lesão testicular e suas repercussões na fertilidade e produção hormonal. No entanto, não há fármaco aprovado para uso clínico rotineiro. Uma droga estudada em isquemia celular é a clorpromazina, sendo conhecidos seus efeitos protetores na função e estrutura da membrana celular e mitocondrial. Objetivos: Avaliar a diferença na lesão de células germinativas após 1 e 6 horas de torção e a ação da clorpromazina administrada previamente à resolução da torção no testículo isquêmico. Materiais e Métodos: 54 ratos Wistar, machos, com peso corporal entre 220 e 260 gramas distribuídos em 5 grupos: sham, controle com isquemia de 1 hora(A), controle com isquemia de 6 horas(B), experimental com isquemia de 1 hora(C) e experimental com isquemia de 6 horas(D). Em 48 animais foi realizada torção unilateral do cordão espermático com duas voltas em torno do seu eixo (720 graus), fixando-se o testículo nessa posição, após o que cada subgrupo foi separado em avaliação imediata (orquiectomia bilateral ao final do período de torção = 1) e tardia (orquiectomia bilateral, uma semana após a resolução da torção = 2). O grupo experimental recebeu 3 mg/kg de clorpromazina administrada via endovenosa, 30 minutos antes da resolução da torção. O grupo controle recebeu apenas solução salina a 0,9% por via endovenosa. Outros 6 animais formaram o grupo sham, onde foi realizada apenas a manipulação do cordão espermático. Após retiradas as gônadas, foram preparadas para análise histológica pela microscopia de luz e imunohistoquímica.Um pequeno fragmento de cada testículo foi separado para avaliação por microscopia eletrônica de transmissão (MET). Resultados: Na análise por microscopia de luz foram notadas alterações devido à isquemia como, necrose de coagulação e edema intersticial, principalmente nos grupos com isquemia mais prolongada (6h - B e D). Na avaliação por imunohistoquímica, houve maior expressão da caspase-3 nas células e túbulos dos testículos com 6 horas de isquemia, quando comparados com o grupo sham. No entanto, a expressão de bcl-2 não foi expressiva em nenhum grupo. Os grupos B e D também demonstraram alterações mais expressivas na análise por MET. Em nenhuma das avaliações foi observado superioridade do grupo da clorpromazina em relação ao grupo controle. Conclusão: As lesões celulares intratubulares induzidas pela isquemia e reperfusão testicular foram semelhantes após 1 e 6 horas, as diferenças foram relacionadas à sua maior intensidade no grupo com 6 horas e a clorpromazina não foi efetiva na prevenção da lesão por reperfusão. / Introdution: Testicular torsion remains as a urology emergency arousing interest about medicine which can reduce testicular injury and its impact on fertility and hormone production. However, there is no drug approved for routine clinical use. A drug studied in cell ischemia is chlorpromazine, being known its protective effects on the function and structure of cellular membrane and mitochondrial. Objective: To evaluate the difference in lesion of germ cells after 1 and 6 hours and the action of chlorpromazine administered before the resolution of ischemic testicle due torsion. Materials and methods: 54 male Wistar rats weighing between 220 to 260 grams divided into five groups: sham, control with one hour of ischemia (A) control with six hours of ischemia (B) experimental with one hour of ischemia (C) and experimental six hours of ischemia (D). In 48 animals was performed unilateral torsion of the spermatic cord with two laps around its axis (720 degrees), keeping the testicle in this position. After that, each subgroup was divided into immediate evaluation (bilateral orchiectomy at end of the torsion period = 1) or later (bilateral orchiectomy after one week of torsion resolution = 2). The experimental group received 3 mg / kg chlorpromazine administered intravenously 30 minutes before the resolution of torsion. The control group received only saline 0.9% intravenously. Other 6 animals were in the sham group, which was held just handling the spermatic cord. After withdrawal, the gonads were prepared for histological analysis by light microscopy and immunohistochemistry. A small piece of each testis was separated for evaluation by electron microscopy. Results: In analysis by light microscopy, ischemic changes were rated as coagulative necrosis and interstitial edema mainly in groups with prolonged ischemia (6h - B and D). When analyzed by immunohistochemistry, there was greater expression of caspase-3 in cells and tubules of the testes with 6 hour of ischemia compared to the sham group. However, bcl-2 expression was not impressive in either group. B and D groups also showed more significant changes in the analysis by electron microscopy. None of the ratings has been shown superiority of chlorpromazine group over the control group. Conclusion: The germ cell damage induced by ischemia and reperfusion was similar after 1 and 6 hours, the differences were related to its greatest intensity in the group with 6 hours and chlorpromazine was not effective in preventing reperfusion injury.

A isquemia cerebral causada pela parada cardíaca leva ao desapareciemnto neuronal. studamos os mecanismos de morte celular envolvidos na isquemia in vitro em linhagem de neuroblastoma.O insulto isquêmicao foi reproduzido cultivando as células sem fatores de crescimento, sem glicose e em embiente hipóxico produzido por um sistema de anaerobiose. Os resultados sugerem que a privação de oxigênio, glicose e fatores de cresciemtno do meio de cultura reproduzem o fenômeno semelhante a isquemia. INvestigamos ainda a participação de processo apoptótico e sua modulação térmica. Observams que a hipotermia produz neuroproteção, enquanto a hipertermia agrava o processo de morte celular por apoptose. / Cardiac arrest causes cerebral ischemia and neuronal disappearance. We investigate celular death mechanisms elucidated by a model of ischemia in neuroblastoma cell line. The ischemic insult was reproduced by deprivation of growth factors and glucose in a hypoxic environment produced by an anaerobiosis system. Our results validate the experimental model and revel the participation of an apoptotic process in the celular loss induced by ischemia. We also demonstrated that hypothermia can be used as a neuroprotector agent whereas hyperthermia aggavates celular damage.

A isquemia e reperfusão (IR) é a principal causa de insuficiência renal aguda. Evidências mostram a participação de linfócitos T e células dendríticas (DC) na lesão por IR. Entretanto, os mecanismos envolvidos não estão claros. A enzima heme oxigenase (HO)-1 está relacionada à diminuição de respostas inflamatórias. Neste trabalho, investigamos a participação de linfócitos T CD4+ e DC na proteção da lesão por IR induzida pela HO-1. Injetamos em camundongos um indutor de HO-1 (Hemin), e realizamos a IR. Avaliamos a lesão pela uréia e creatinina no soro, a expressão de citocinas por RT-PCR, nível de proteínas por bioplex e perfil celular por FACS. Observamos que a HO-1 protegeu da lesão por IR. A diminuição de INFg com a HO-1 sugeriu uma menor ativação de linfócitos T. No entanto, a transferência de células CD4+ tratadas com Hemin não apresentou diferença. Vimos que a HO-1 alterou o fenótipo das DC após IR e suprimiu a produção de TNFa pelas mesmas. Concluímos que a proteção pela HO-1 é capaz de modular a resposta inflamatória de DC, diminuindo o TNFa. / The ischemia and reperfusion (IR) is the main acute kidney injury. Evidences have shown the role of CD4+ T cells and dendritic cells (DC) in the IR injury. However, the mechanisms involved in the participation of these cells are not clear. The heme oxygenase (HO)-1 enzyme is associated to decrease in inflammatory responses. In this work, we investigated the role of CD4+ T cells and DC in renal injury protection induced by HO-1. We injected in mice a HO-1 inducer (Hemin), and we did the IR. Renal injury was evaluated by serum levels of urea and creatinine, cytokines expression by RT-PCR, proteins level by bioplex and cell profile by FACS. We observed that HO-1 lead to IR injury protection. The IFNg decrease with HO-1 suggested less T cells activation. However, transfer of hemin treated CD4+ cells did not differ from the other group. We observed that HO-1 altered DC phenotype after IR and suppressed TNFa production by these cells. We concluded that the protection by HO-1is able to modulate DC inflammatory response, diminishing TNFa.

Submitted by Rose Suellen (rosesuellen@ufpa.br) on 2018-02-22T13:41:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_DistribuicaoTecidualNeuroprotecao.pdf: 2857758 bytes, checksum: d55aa1894aa3b223cbd2de8ac1b5a61b (MD5) / Approved for entry into archive by Rose Suellen (rosesuellen@ufpa.br) on 2018-02-22T13:44:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_DistribuicaoTecidualNeuroprotecao.pdf: 2857758 bytes, checksum: d55aa1894aa3b223cbd2de8ac1b5a61b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-22T13:44:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_DistribuicaoTecidualNeuroprotecao.pdf: 2857758 bytes, checksum: d55aa1894aa3b223cbd2de8ac1b5a61b (MD5) Previous issue date: 2017-04-05 / O acidente vascular encefálico isquêmico (AVEi) é uma das principais causas de morbidade e mortalidade em adultos no mundo inteiro. Atualmente, a única terapia farmacológica disponível para tratar essa desordem neural aguda emprega um agente trombolítico de custo elevado, que deve ser administrado em até 4 horas do início dos sintomas, trazendo consigo o significativo risco de transformar a área inicialmente oligêmica em uma hemorragia cerebral de proporções catastróficas. Nas últimas décadas, nanopartículas especialmente configuradas para ter maior afinidade com certos tecidos e maior difusibilidade através de barreiras biológicas têm sido empregadas como veículos para carrear agentes terapêuticos. Entre estas, a nanopartícula lipídica lipossomal LDE, conjugada ao agente Metotrexato (cLDE/MTX), tem sido testada com sucesso em vários modelos experimentais de inflamação, revelando resultados promissores. Considerando que a modulação do processo inflamatório que acompanha o infarto cerebral possui relevância prognóstica, a presente pesquisa investigou os efeitos do cLDE/MTX em um modelo experimental de isquemia cerebral induzida pelo agente vasoconstrictor endotelina-1 (ET-1) no córtex cerebral de ratos adultos. Na primeira fase do estudo, foi investigado por meio de cintilografia o comportamento da LDE triciada (LDE3H+), injetada pela via caudal, frente à barreira hematoencefálica (BHE) em animais sham (N=18) e em animais submetidos à isquemia focal com injeção de ET-1 (80pMol/μl) diretamente no córtex frontal (N=5). Em seguida, avaliaram-se os efeitos anti-inflamatórios e neuroprotetores do cLDE/MTX (1 mg/kg) injetado pela veia caudal, em animais isquêmicos (N=5), com o grupo controle que recebeu apenas LDE. Todos os animais foram perfundidos com solução salina a 0,9%; e paraformaldeído, a 4%, 7 dias após a indução isquêmica. Os achados histopatológicos foram avaliados pela coloração com violeta de cresila e imuno-histoquímica para corpos neuronais adultos (anti-NeuN), astrócitos (anti-GFAP) e micróglia (anti-Iba1). Os resultados encontrados demonstraram que a LDE3H+ atravessa a BHE tanto nos animais sham quanto nos animais isquêmicos, e o tratamento com cLDE/MTX não reduz a área total de infarto primário, mas reduz consideravelmente a ativação microglial no centro da lesão, induzindo, ainda, a preservação neuronal na periferia do infarto, quando comparado com os animais controles, injetados apenas com a LDE não conjugada (P<0.01). Por fim, a astrocitose normalmente observada na isquemia cerebral manteve-se inalterada. Os resultados indicam que o cLDE/MTX é um promissor agente anti-inflamatório e neuroprotetor neste modelo experimental de acidente vascular encefálico isquêmico. Estudos futuros são desejáveis para ampliar os conhecimentos acerca desses resultados, incluindo modelos animais com sobrevida mais prolongada. / Ischemic stroke is one of the leading causes of morbidity and mortality in adults worldwide. Currently, there is only a single pharmacological therapy available to treat such neural disorder, using a high-cost thrombolytic agent, which must be administered within 4 hours of the onset of symptoms, but with a significant risk of transforming the initially oligoemic area into a catastrophic cerebral haemorrhage. In the last decades, nanoparticles with high affinity for certain types of tissues and specially configured with an enhanced diffusibility through biological barriers, have been employed as vehicles to carry therapeutic agents. Among these, the novel liposomal nanoparticle LDE conjugated to the agent methotrexate (cLDE / MTX) has been successfully tested in several experimental models of inflammation, with promising results. Considering that modulation of the inflammatory process that accompanies cerebral infarction is of prognostic significance, the present study investigated the effects of cLDE / MTX upon an experimental model of cerebral ischemia induced by the vasoconstrictor agent endothelin-1 (ET-1) in the cerebral cortex of adults rats. During the first phase of the study, the behavior of tritiated LDE particles (LDE3H+) concerning the blood-brain barrier (BBB), once injected through the caudal vein, was evaluated in either sham animals (N = 18) and animals submited to ET-1 injection (80pMol / Μl) directly into the frontal cortex (N = 5). Further, the anti-inflammatory and neuroprotective effects of cLDE / MTX (1 mg / kg), also injected by caudal vein, were investigated in ischemic animals (N = 5), with the control group (N = 5) receiving only free LDE. All animals were perfused with 0.9% saline and 4% paraformaldehyde 7 days after ischemic induction. Histopathological findings were evaluated by staining with cresyl violet and immunohistochemistry for adult neuronal bodies (anti-NeuN), astrocytes (anti-GFAP) and microglia (anti-Iba1). The results showed that LDE3H+ positively crosses BBB in both sham animals and ischemic animals, and that cLDE / MTX treatment, despite the fact that it reduces not the total area of primary infarction, was able to considerably reduces microglial activation phenomenon at the center of the lesion, inducing as well a significant neuronal preservation at the periphery of the infarction, when compared to the control animals, injected only with unconjugated LDE (P <0.01). At last, the astrocytosis phenomena usually encountered in cerebral ischemia remained unchanged. The results indicate that cLDE / MTX is a promising anti-inflammatory and neuroprotective agent in such experimental model of ischemic stroke. Future studies are desirable in order to increase knowledge about these outcomes, including in animal models with longer survivals.

Submitted by Eunice Novais (enovais@uepg.br) on 2018-08-17T19:14:59Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Rafael Inacio Brandão.pdf: 6353891 bytes, checksum: 8e384db8b4012f1f363df49c4c1b65b2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-17T19:14:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Rafael Inacio Brandão.pdf: 6353891 bytes, checksum: 8e384db8b4012f1f363df49c4c1b65b2 (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / A isquemia é um dos problemas mais frequentes e desafiadores com que os cirurgiões vasculares se defrontam e é ao mesmo tempo paradoxal, pois, ao restabelecer o fluxo sanguíneo para um tecido podem ser desencadeadas alterações locais ou sistêmicas mais intensas que a isquemia per se. Estas complicações estão relacionadas com a liberação de radicais livres de oxigênio. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do antioxidante alopurinol e do pós condicionamento isquêmico (PCi), que são ciclos de reperfusão intercalados com ciclos de isquemia, sobre as consequências deletérias da isquemia seguida de reperfusão em um modelo de isquemia padronizado em membros caudais de ratos. Este estudo foi aprovado pelo CEUA da Universidade Estadual de Ponta Grossa. Para tanto foram utilizados 30 ratos da linhagem Wistar, fêmeas, com aproximadamente 3 meses de idade. Os animais foram aleatoriamente distribuídos em cinco grupos: Grupo A (SHAM): animais que não foram submetidos a isquemia dos membros caudais; Grupo B : animais submetidos a 2 horas de isquemia e reperfusão apenas uma vez; Grupo C : animais receberam, por gavagem a dose de 100 mg/kg de alopurinol, uma hora antes do procedimento cirúrgico, depois foram submetidos a 2 horas de isquemia e reperfusão apenas uma vez; Grupo D: animais foram submetidos a 2 horas de isquemia e três ciclos de reperfusão (dois minutos cada) intercalados com três ciclos de isquemia (dois minutos cada) e Grupo E : animais receberam dose de 100 mg/kg de alopurinol, uma hora antes do procedimento cirúrgico, depois submetidos a 2 horas de isquemia e três ciclos de reperfusão (dois minutos cada) intercalados com três ciclos de isquemia (dois minutos cada). Três dias após foram coletadas amostras de sangue para análises bioquímicas: Ureia, Creatinina, Aspartato aminotransferase, Alanina aminotransferase, Creatinoquinase, Lactato e mensuração da capacidade antioxidante total pelo método baseado no 2,2”- azinobis 3-etilbenzotiazolina-6-ácido sulfônico (ABTS) e coleta de segmentos do intestino delgado para análises histológicas. Foi observado efeito protetor do uso de alopurinol e do Pós condicionamento isquêmico através da mensuração da creatinina, AST, ALT e lactato, que preveniram o aumento causado pela isquemia. Com relação a Capacidade Antioxidante Total, ficou evidente o benefício do PCi, mas não do alopurinol. Em relação as análises histológicas, ambos os métodos foram eficazes em minimizar os efeitos lesivos do processo de isquemia e reperfusão mesentérica. Logo pode-se concluir que, o alopurinol e mais notadamente o PCi exerceram efeito protetor, alcançando significância estatística. / Ischemia is one of the most common and challenging problems that vascular surgeons are facing and is at the same time paradoxical, therefore, to restore blood flow to a tissue can be triggered local or systemic changes more intense than ischemia per se. These complications are related to release of oxygen free radicals. The aim of this study was to evaluate the effects of allopurinol antioxidant and post ischemic conditioning on the deleterious effects of ischemia followed by reperfusion in a standardized ischemia model in rat members’ flows. This study was approved by CEUA the State University of Ponta Grossa. Therefore, we used 30 Wistar rats, female, approximately 3 months old. The animals were randomly divided into five groups: Group A (SHAM ): Animals that were not subjected to ischemia of the caudal members; Group B: Animals subjected to 2 hours of ischemia and reperfusion only once; Group C: animals were given by gavage at a dose of 100 mg / kg of allopurinol, one hour before surgery, they were then subjected to 2 hours of ischemia and reperfusion only once; Group D: Animals were subjected to 2 hours of ischemia and three reperfusion cycles (two minutes each) interleaved with three ischemia cycles (two minutes each) and Group E: Animals received 100 mg / kg of allopurinol, one hour before the surgical procedure, then subjected to 2 hours of ischemia and reperfusion for three cycles (two minutes each) interleaved with three cycles of ischemia (two minutes each). Three days after Blood samples were collected for biochemical analysis: Urea, Creatinine, Aspartate aminotransferase, Alanine aminotransferase, Creatine kinase, Lactate and measurement of the total antioxidant capacity by the method based on 2.2”- azinobis 3- ethylbenzothiazoline -6- acid sulfonic (ABTS) and collection segments of the small intestine for histological analysis. It was observed protective effect of the use of allopurinol and Post conditioning (PCi) ischemic by measuring creatinine, AST, ALT and lactate, which did not show a significant increase. Regarding the Total Antioxidant Capacity was evident the benefit of PCi, but not of allopurinol. As to the histological analyzes, both methods were effective in minimizing the harmful effects of ischemia and reperfusion process mesenteric. As a result it can be concluded that allopurinol and especially PCI exerted a protective effect, reaching statistical significance.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 455935.pdf: 11635887 bytes, checksum: 0a9f28950e212538501de3a72ecfaa0c (MD5) Previous issue date: 2014-01-02 / Aims: The aim of the present study was to evaluate possible preventative effects of glutamine in an animal model of gut ischemia/reperfusion (I/R). Materials and methods: Twenty male Wistar rats were divided into four experimental groups: (1) control group (Control) rats underwent exploratory laparotomy; (2) control + glutamine group (Control-GLU) rats were subjected to laparotomy and treated intraperitoneally with glutamine 24 and 48 h prior to surgery; (3) ischemia/reperfusion group (I/R) rats were subjected to occlusion of the superior mesenteric artery for 30 min followed by 15 min of reperfusion; and (4) ischemia/reperfusion + glutamine group (G+I/R) rats were treated intraperitoneally with glutamine 24 and 48 h before I/R. Local and systemic injuries were determined by evaluating intestinal and lung segments for oxidative stress using lipid peroxidation and the activity of superoxide dismutase (SOD), interleukin-6 (IL-6) and nuclear factor kappa beta (NF-&#954;B) after mesenteric I/R. Results: The animals from the G+I/R group exhibited reduced levels of lipid peroxidation, IL-6 and NF-KB and increased SOD activity when compared with the group of rats submitted to I/R without GLU. The findings were statistically significant (p < 0.05). Conclusions: These results demonstrate that pretreatment with glutamine prevents mucosal injury and improves gut and lung recovery after I/R injury in rats. / Objetivos: O objetivo principal do presente estudo foi avaliar a a??o antioxidante da glutamina no tecido intestinal e pulmonar de ratos submetidos ? isquemia e reperfus?o (I/R) mesent?rica. Os objetivos secund?rios foram: avaliar o estresse oxidativo e atividade inflamat?ria pela an?lise da lipoperoxida??o; avaliar a atividade de uma enzima antioxidante, a super?xido dismutase (SOD); determinar o papel do Fator de Transcri??o Nuclear Kappa B (NF-KB); e da interleucina 6 (IL-6). Material e M?todos: Ratos machos da ra?a Wistar foram mantidos em caixas pl?sticas, em ciclo de 12 horas claro/escuro, com ?gua e ra??o administradas ad libitum. Foram utilizados Vinte ratos divididos, de forma randomizada, em quatro grupos experimentais: (1) grupo controle (Controle) os ratos foram submetidos ? laparotomia exploradora; (2) grupo controle + glutamina (Controle-GLU) os ratos foram submetidos ? laparotomia e tratados, por via intraperitoneal, com glutamina 24h e 48h antes da cirurgia; (3) grupo isquemia/reperfus?o ( I/R ) os ratos foram submetidos a oclus?o da art?ria mesent?rica superior, durante 30 min seguido por 15 min de reperfus?o; e (4) grupo isquemia/reperfus?o + glutamina (G + I/R) - os ratos foram tratados, por via intraperitoneal, com glutamina 24h e 48h antes da I/R. As les?es locais e sist?micas foram determinadas por meio da avalia??o dos segmentos intestinais e pulmonares para o estresse oxidativo, atrav?s da lipoperoxida??o e da atividade da enzima SOD, a interleucina IL-6 e o NF-KB ap?s a I/R mesent?rica. Resultados: A lipoperoxida??o da membrana foi mais expressiva no grupo de animais submetidos ? I/R (p < 0.05). Entretanto, o grupo que recebeu a glutamina 24h e 48h antes do evento I/R, mostrou n?veis de lipoperoxida??o da membrana, de forma similar aos grupos controles (p < 0.05). A atividade da enzima antioxidante SOD estava diminu?da no intestino dos animais submetidos ? I/R, quando comparada a encontrada nos grupos controles sem a I/R (p < 0.05). Por outro lado, o grupo que recebeu a glutamina 24h e 48h antes da I/R, mostrou a atividade da SOD de forma similar a encontrada nos controles (com e sem a glutamina) (p < 0.05). A m?dia da ?rea, dosada atrav?s do m?todo de imunoistoqu?mica, de express?o do NF-KB para os grupos controles, foi similar. O grupo submetido ? I/R mostrou a maior ?rea de concentra??o do NF-KB. O grupo G + I/R foi o que teve a segunda maior ?rea, por?m com valores menores do que os encontrados no grupo do evento I/R (p < 0.05). Para a IL-6, os grupos controles, com e sem a glutamina, mostraram ?reas similares. O grupo da I/R apresentou a maior ?rea de express?o da IL-6, seguido pelo grupo G + I/R; por?m, esta ?rea foi significativamente menor do que a do grupo submetido ? I/R sem a glutamina (p < 0.05). Conclus?es: Estes resultados demonstram que, o pr?-tratamento com glutamina, previne a les?o da mucosa do intestino e dos pulm?es, ap?s I/R mesent?rica em ratos.

A hipóxia-isquemia neonatal (HI) é um dos principais motivos de mortalidade e morbidade perinatal. Diferentes causas estão associadas à HI, tais como: interrupção do fluxo sanguíneo, ineficientes trocas gasosas pela placenta, prematuridade, pré-eclâmpsia (PE), entre outras. Achados prévios do nosso grupo, utilizando o ácido fólico (AF) como estratégia terapêutica na HI, mostraram que o tratamento foi efetivo em amenizar alguns danos em animais submetidos ao modelo de encefalopatia hipóxico-isquêmica (EHI). Os objetivos do presente estudo foram investigar os efeitos/consequências do tratamento/suplementação com AF durante: (i) a EHI em ratos submetidos ao modelo Rice-Vannucci, e (ii) o tratamento com tert-butil-hidroperóxido (TBH) em células trofoblásticas humanas (linhagem BeWo e HTR-8 SV/neo), simulando o estresse oxidativo ocasionado por PE. Para a realização do experimento in vivo, aos sete dias de vida ratos Wistar foram divididos em quatro grupos experimentais: controle salina (CT-S), controle ácido fólico (CT-AF), hipóxico-isquêmico salina (HI-S) e hipóxico-isquêmico ácido fólico (HI-AF). Para o experimento in vitro células das linhagens BeWo e HTR-8 SV/neo foram cultivadas, suplementadas com três distintas concentrações de AF (deficiente, fisiológica e supra-fisiológica) e expostas durante 24 horas ao TBH. Nossos resultados demonstraram que a EHI dificultou a memória e aprendizado nos testes do labirinto aquático de Morris e do ox-maze, reduziu a atividade da Na+, K+-ATPase em animais adultos, causou atrofia em importantes áreas encefálicas como estriado e hipocampo, contribuiu para o desequilíbrio das enzimas antioxidantes SOD e CAT, além de causar um aumento da reatividade astrocitária em diferentes períodos do desenvolvimento animal. No entanto, quando observado o efeito do tratamento com AF nos diferentes parâmetros analisados foi constatado que este contribuiu para o déficit cognitivo no teste do labirinto aquático, enquanto que esse efeito foi amenizado no teste do ox-maze. Também, observou-se que, enquanto o tratamento com AF contribuiu para a inibição da enzima Na+, K+ -ATPase nos animais HI adolescentes, este foi efetivo em reverter essa inibição nos adultos. Além do mais, o tratamento com AF promoveu a recuperação parcial da atrofia hipocampal, aumentou a atividade das enzimas SOD e CAT e atrasou a formação da cicatriz glial. No modelo in vitro com exposição ao TBH, o tratamento com AF foi responsável pelo aumento da peroxidação lipídica, da carbonilação proteica e dos níveis de glutationas. Além disso, houve também um efeito antiproliferativo, antimigratório e citotóxico. Interessantemente, todos esses resultados foram intensificados quando observados nas células cultivadas sob a concentração supra-fisiológica de AF. Tendo em vista que cerca de 1 a 8% das gestantes desenvolvem pré-eclâmpsia e essas normalmente estão expostas a altas dosagens de AF devido à suplementação e à ingestão de alimentos fortificados, mais atenção é necessária especialmente na população de risco para essa doença. Os resultados obtidos neste estudo contribuem para o avanço das pesquisas nesta área e destacam a importância de mais investigações a fim de esclarecer até que ponto a suplementação com AF e sua dosagem adequada trariam benefícios para neonatos com EHI e gestantes com PE. / Hypoxia-ischemia (HI) is one of the main causes of perinatal death and morbidity. There are many imbalances related to the onset of HI, such as: interrupted blood flow, placenta gas exchange insufficiency, prematurity, preeclampsia (PE), among others. Previously, our group have investigated folic acid (FA) as a therapeutic agent of HI and showed it was able to reduce some deficits observed in animals submitted to the hypoxic-ischemic encephalopathy model (HIE). The aim of this study was the investigation of the effects and consequences of the treatment/supplementation with FA during (i) the HIE in rats subject to the Rice-Vannucci model, and (ii) the treatment of human trophoblastic cells (BeWo and HTR-8SV/neo) with tert-butyl-hydroperoxide (TBH) chemical agent, which mimics the oxidative stress during PE. During the in vivo experiment, seven-days Wistar rats were divided into four groups, as follows: control saline (CT-S), control folic acid (CT-FA), hypoxia-ischemia saline (HI-S) and hypoxia-ischemia folic acid (HI-FA). During the in vitro experiment BeWo and HTR-8 SV/neo cells were cultured under three distinct FA concentrations (deficient/physiological/supra-physiological) and exposed to TBH during 24 hours. Results showed HIE promoted memory and learning impairments as observed during the Moris water maze and ox-maze tests, reduced the activity of Na+, K+ -ATPase in adult rats, promoted atrophy in important areas as striatum and hippocampus, contributed to the imbalances in the oxidative enzymes SOD and CAT, and promoted the increase of astrocytic reactivity in distinct periods of development. Nevertheless, the treatment with FA contributed to the cognitive deficits observed in the water maze, while this effect was reduced in the ox-maze test. It was also observed that while FA treatment contributed to the inhibition of Na+, K+ -ATPase in HI adolescent rats, it was effective to recover this activity in HI adult rats. Moreover, FA treatment was able to partially recover hippocampal atrophy, to increase the activity of SOD and CAT enzymes and to delay the glial scar. The FA treatment in the in vitro model, where cells were challenged with TBH, was responsible for the increase in lipid peroxidation, protein cabonilation and glutathione levels. Moreover, it was observed antiproliferative, antimigration and cytotoxic effect. Interestingly, these outcomes were more intense when cells were cultured under a supra-physiological concentration of FA. Considering that about 1-8% of pregnant women suffer from PE and are often exposed to high doses of FA due to the supplementation and the ingestion of fortified food, more attention should be given to this group of risk. Results obtained during this work contribute to the improvement of research in this field and highlight the need of further studies to better understand to each extent the FA supplementation and daily dose intake are beneficial to EHI newborns and pregnant women with PE.