Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-25Bitstream added on 2015-05-14T16:59:20Z : No. of bitstreams: 1 000826506_20160824.pdf: 153918 bytes, checksum: d5ded8370e2d61cb9c08c67b2aa9b8b7 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-08-29T14:25:02Z: 000826506_20160824.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-29T14:25:39Z : No. of bitstreams: 1 000826506.pdf: 566712 bytes, checksum: 85576a500370f23bba238b3ce890a33e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O papilomavírus humano (HPV) vem sendo associado ao carcinoma espinocelular (CEC) de orofaringe, como um possível fator etiológico. As oncoproteínas virais E6 e E7 são capazes de inibir a produção de citocinas do padrão Th1 e iniciar a produção de citocinas do padrão Th2, prejudicando a resposta celular frente à infecção. O propósito deste trabalho é avaliar o efeito das oncoproteínas virais E6 e E7 do HPV-16 sobre a resposta de células T (CD4 e CD8) de pacientes com e sem CEC de cabeça e pescoço. Foram recrutados para o estudo 20 indivíduos, sendo 10 pacientes com diagnóstico de CEC de cabeça e pescoço e 10 indivíduos sem câncer. Para avaliar a proliferação celular e liberação de citocinas (TNF-α, IFN-γ, IL-2, IL-4 e IL-10) das células T CD4 e CD8 frente ao estímulo com os peptídeos sintéticos dos genes E6 e E7 do HPV-16, a técnica ELISA foi utilizada. O mapeamento do DNA do HPV-16 foi realizado em amostras de plasma e saliva pela técnica de PCR em tempo real. Os resultados mostraram que o peptídeo E7 do HPV-16 inibiu a produção das citocinas pelas células T CD4 e CD8 derivadas dos indivíduos sem câncer (6/10) e pacientes com CEC de cabeça e pescoço (5/10) (p<0,05). A proteína Concanavaliana A induziu a proliferação das células T CD4 e CD8 dos indivíduos sem câncer e pacientes com CEC de cabeça e pescoço (p<0,05). As respostas celulares quanto à atividade proliferativa e a produção de citocinas dos pacientes com CEC de cabeça e pescoço foram semelhantes às respostas dos indivíduos sem câncer / The human papillomavirus (HPV) has been associated with squamous cell carcinoma (SCC) of the oropharynx, as a possible etiologic factor. The viral oncoproteins, E6 and E7 are able to inhibit the production of Th1 cytokines and initiate the production of Th2 cytokines, damaging the cellular response to infection. The purpose of this study is to evaluate the effect of viral oncoproteins E6 and E7 of HPV-16 on the response of T cells (CD4+ and CD8+) in patients with or without SCC of the head and neck. It was recruited for the study, 20 individuals, 10 patients with SCC of the head and neck and 10 individuals without cancer. To assess cell proliferation and cytokine release (TNF-α, IFN-γ, IL-2, IL-4 and IL-10) of CD4 and CD8 stimulation against synthetic peptides of the HPV-16 E6 and E7 genes, ELISA technique was used. The mapping of the HPV-16 DNA was performed in plasma and saliva samples by real time PCR. The results showed that the HPV-16 E7 peptide inhibited the production of cytokines by CD4 and CD8 T cells derived from subjects without cancer (6/10) and patients with SCC of the head and neck (5/10) (p <0, 05). The concavaline A protein induced proliferation of CD4 and CD8 T cells from individuals without cancer and patients with SCC of the head and neck (p <0.05). Cellular responses as to proliferative activity and cytokine production in patients with SCC of the head and neck were similar to the responses of individuals without cancer / FAPESP: 12/05381-0

Orientador: Valéria Marçal Félix de Lima / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Hiro Goto / Resumo: O objetivo desde estudo foi avaliar a apoptose de linfócitos T do baço e do sangue periférico de cães naturalmente infectados com leishmaniose visceral (LV) apresentado sintomas clínicos da doença e comparar ao observado em cães saudáveis. Treze cães provenientes do CCZA de Araçatuba (SP) área endêmica para leishmaniose visceral canina foram diagnosticados como positivos para a doença utilizando dos três métodos: o ELISA indireto utilizando antígeno total, a imunocromatografia com antígeno rK39 e a PCR. No grupo controle foram utilizados seis cães oriundos de área não endêmica que apresentaram resultados negativos nos testes para Leishmania spp e apresentaram hemograma normal. Após a eutanásia dos cães infectados, o sangue periférico e fragmentos de baço foram coletados para análise da apoptose. As amostras de baço do grupo controle foram retiradas por excisão cirúrgica após sedação, o sangue foi obtido por punção venosa, e coletado em tubos contendo EDTA. As amostras dos dois grupos foram processadas imediatamente após a coleta para determinação de apoptose utilizando dois marcadores diferentes e simultânea marcação para CD3 com anticorpo monoclonal. Nos cães infectados os linfócitos T do sangue periférico e do tecido esplênico mostram um aumento significativo dos níveis de apoptose comparado com o observado em cães controles. Esses resultados sugerem que em cães infectados a imunossupressão da resposta celular associada à infecção crônica pode ser conseqüência da aceleração das taxas de apoptose de células T, esses dados contribuem para o entendimento da resposta imune em cães infectados com L. (L.) chagasi, que pode levar ao desenvolvimento de medidas profiláticas ou preventivas para estes animais / Abstract: The aim of this study was to evaluate the apoptosis of T lymphocytes in the spleen and peripheral blood of dogs naturally infected with visceral leishmaniasis demonstrating symptoms of the disease and comparing to those observed in healthy dogs. Thirteen dogs from CCZA of Araçatuba, SP endemic area for canine visceral leishmaniasis were diagnosed as positive for the disease using three methods: ELISA using total antigen, the antigen rK39 immunochromatography and PCR. Six dogs from non-endemic area were tested negative in tests for Leishmania spp and had normal blood account. After euthanasia of infected dogs, the peripheral blood and fragments of spleen were collected for analysis of apoptosis. Samples of spleen in the control group were removed by surgical excision after sedation; blood was obtained by venipuncture and collected into tubes containing EDTA. Samples of both groups were processed immediately after collection to determinate of apoptosis using two different markers and simultaneous marking with CD3 monoclonal antibody. In dogs infected T lymphocytes from peripheral blood and spleen tissue showed a significant increasing in levels of apoptosis compared to those seen in control dogs. These results were supposed to be about those dogs in the immunosuppression of the cellular response associated with chronic infection being a consequence of accelerated rates of apoptosis of T cells, these data contributed to understanding the immune response in dogs infected with L. (L.) chagasi, which may lead to the development of prophylactic or preventive procedures for these animals / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-19Bitstream added on 2014-06-13T20:50:08Z : No. of bitstreams: 1 schweigert_a_me_araca.pdf: 714062 bytes, checksum: 9d2cbde1f9ebd958c778197ccd0452e5 (MD5) / As neoplasias mamárias em gatas representam o terceiro tipo neoplásico mais frequente nesta espécie. A maioria destas neoplasias são malignas, e exibem alto potencial metastático. Devido a isto, e a escassez de trabalhos referentes ao prognóstico de gatas com câncer de mama, foram avaliados em 32 amostras de neoplasia mamária de gatas, a expressão imuno- histoquímica de alguns marcadores de prognóstico. As amostras foram segregadas em grupos seguindo os parâmetros de classificação da organização mundial de saúde em carcinomas tubulopapilares, cribriformes e sólidos e de acordo com o método de Nottighan modificado em graus I, II e III. Os cortes histológicos foram submetidos a processamento imuno-histoquímico para avaliação da expressão da metaloproteinase 9 (MMP-9), do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), da proteína de proliferação celular Ki- 67 e de linfócitos TCD3+, CD79+ e macrófagos, afim de se avaliar os diferentes padrões de classificação. Os resultados da marcação imuno- histoquímica foram avaliados com auxílio de um sistema de análise de imagem computadorizada para determinar a porcentagem da área imunomarcada. Em relação à classificação morfológica observou-se diferença significativa entre a densidade de linfócitos TCD3+ entre os grupos. Durante a análise nas amostras segregadas de acordo com a gradação histológica verificou-se diferença significativa entre a imunomarcação da MMP-9, entre a intensidade de infiltração de células TCD3+ e uma tendência de variação na proteína Ki-67. Observamos também correlação positiva entre os níveis de expressão da MMP-9 e da Ki-67, da MMP-9 e células TCD3, e da proteína Ki-67 com as células TCD3. Desta forma concluímos que classificação histológica dos carcinomas de mama em gatas não é um bom parâmetro para determinação do prognóstico da doença... / The mammary tumors in cats represent the third most common tumor type in the species. Most of these are malignant neoplasms exhibit a high metastatic potential. Because of this and the lack of studies regarding the prognosis for cats with breast cancer were evaluated 32 samples of breast cancer in cats. These samples were grouped according to morphological and histological classification, and the sections were submitted to immunohistochemical processing to evaluate the expression of metalloproteinase 9 (MMP-9), the vascular endothelial growth factor (VEGF) protein of cell proliferation Ki-67 and CD3 + T lymphocytes, and CD79 + macrophages in order to evaluate differences in the different grading standards. The results of immunohistochemical marking were evaluated by using a system of computerized image analysis to assess the percentage of area immunomarked. Regarding the morphological classification showed a significant difference between the amount of T lymphocytes CD3 + between the groups. During analysis the samples segregated according to histologic grading there was significant difference between the immunostaining of MMP-9, between the intensity of infiltration of T cells CD3 + and a tendency of variation in the Ki-67 protein. We also observed a positive correlation between the expression levels of MMP-9 and Ki-67, MMP-9 and TCD3 cells, and Ki-67 protein in cells T CD3+. Thus we conclude that histologic classification of breast carcinomas in cats is not a good parameter for determining the prognosis of the disease when evaluated together with the levels of immunohistochemical expression of MMP- 9, VEGF and Ki67. The best best parameters for determining the prognosis was observed when the histological grade was considered . The higher was the proliferative index determined by the positivity of Ki-67 protein from neoplastic cells, the greater... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Danielle Cardoso Geraldo Maia / Banca: Lucia Helena Faccioli / Resumo: Os organismos marinhos da costa brasileira são pouco explorados como fonte de metabólitos secundários para aplicação farmacológica. São conhecidas aproximadamente 10.000 substâncias do metabolismo secundário de invertebrados e microrganismos marinhos. Dentre os organismos marinhos estudados do ponto de vista químico e farmacológico, destacam-se as esponjas, as ascídias, os briozoários e os octocorais. No entanto, pouco se sabe quanto ao potencial imunomodulador de compostos isolados de microrganismos marinhos, em especial da costa brasileira. Neste estudo, nós identificamos o composto DR(A)6 com potencial anti-inflamatório e após fracionamento foi isolado a substância pura majoritária denominada Pyrenocine A (1), oriunda do fungo marinho Penicillium paxill.O conjunto de resultados demonstra que Pyrenocine A é capaz de inibir tanto de maneira profilática como terapêutica a ativação de macrófagos induzida por LPS através da inibição da síntese de nitrito, produção de citocinas inflamatórias e PGE2, porém de maneira independente da modulação de COX- 2. Os efeito supressores desta substância também pode ser comprovado quanto a expressão de moléculas diretamente relacionadas com a migração celular (CD11b) assim como moléculas imprescindíveis para o processo de ativação de linfócitos (B7.1 e B7.2), porém não foi observado a inibição da expressão do receptor TLR4. A inibição da síntese de nitrito pela Pyrenocine A em macrófagos estimulados com CpG, mas não com Poly I:C, sugere que a via de sinalização intracelular pela qual a Pyrenocine A atua é via MyD88. Além disso, nós demonstramos que... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Marine organisms from Brazilian coast are unexploited as a source of secondary metabolites in applying biotechnology. There are approximately 10,000 known substances from the secondary metabolites from microorganisms and marine invertebrates. Among the marine organisms studied from chemical and pharmacological aproauchs sponges, sea squirts, bryozoans and octocorals are the relevant source of drugs. However, little is known about the immunomodulatory potential of compounds isolated from marine microorganisms, in particular from Brazilian coast. In this study, we identified the compound DR (A) 6 with potential anti-inflammatory and after fractionation, we identificated the majority pure substance, called Pyrenocine A (1), derived from the marine fungus Penicillium paxilli. Our results demonstrates that the Pyrenocine A is able to inhibit by both prophylactically and therapeutic approach the macrophages activation induced by LPS through inhibition of nitrite, synthesis of inflammatory cytokines and PGE2 but independently of modulation of COX-2. The anti-inflammatory effect of Pyrenocine A can also be observed by the expression of molecules directly related to cell migration (CD11b) as well as molecules evolved in the process of lymphocyte activation (B7.1 and B7.2), but there was no inhibition of the TLR4 expression. The inhibition of nitrite by Pyrenocine A in macrophages stimulated with CpG, but not in the presence of Poly I: C, suggesting that Pyrenocine A act by MyD88 intracellular signaling pathway. Furthermore, we demonstrate that the addition of Pyrenocine A exert a suppressive effect on cells from innate immune response is also able to inhibit of B cells proliferation. However, the mechanisms by which this compound exerts its anti-inflammatory functions as well as their pharmacological application in various experimental... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Beatriz Maria Machado de Medeiros / Banca: Dagmar Ruth Stach Machado / Banca: Alexandrina Sartori / Resumo: As proteínas Yops. formam uma família de proteínas secretadas por Yersinia spp que incluem efetores intracelulares (seis efetores foram identificados: YopE, YopH, YopM, YpkA/YopO, YopJ/YopP e YopT) e vários componentes do aparato de secreção-translocação que são liberado pela bactéria sob quelação de Ca2+. As .Yops. efetoras têm sido relacionadas a uma série de propriedades de virulência, incluindo resistência à fagocitose, citotoxicidade e desfosforilação de proteínas do hospedeiro. Porém, a interação das .Yops. de Yersinia com a resposta imune específica do hospedeiro não está bem esclarecida. O objetivo deste estudo foi investigar o papel imunomodulador das "Yops" secretadas por amostras de Yersinia pseudotuberculosis sobre a produção de anticorpos e autoanticorpos por linfócitos B. Para tanto camundongos foram infectados com uma amostra selvagem de Y. pseudotuberculosis (YpIII) e com amostras mutantes, defectivas na secreção de determinadas .Yops. efetoras (YopH, YopE, YopM, YpkA e YopJ). Foram obtidas células esplênicas destes animais, e as células secretoras de imunoglobulinas inespecíficas e específicas (anti-Yersinia e anti-.Yops.) foram quantificadas através do teste ELISPOT. A presença de anticorpos específicos anti-Yersinia e anti-.Yops. no soro dos animais infectados foi analisada através do teste ELISA. A presença de auto-anticorpos séricos foi analisada através do teste DOT-BLOT. Não se observou nenhuma diferença entre o número de células secretoras de imunoglobulinas (Igs) inespecíficas dos animais inoculados com a amostra selvagem, YpIIIpIB102 (wt), em relação aos controles. Já a amostra YpIII pIB522, embora defectiva na secreção de YopE, provocou uma redução dos linfócitos B secretores de IgG2a, IgM e IgA. A única ativação observada ocorreu para o isotipo IgG2a (aumento de 1,7 vezes)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The "Yops" proteins form a protein family secreted by Yersinia spp that includes intracellular effectors (six effectors had been identified: YopE , YopH, YopM, YpkA/YopO, YopJ/YopP and YopT) and some components of the secretion-translocation apparatus that are released by the bacteria under Ca2+ quelation. The "Yops" effectors have been related to a series of virulence properties, including resistance to phagocytosis, citotoxicity and desfosforilation of host proteins. However, the interaction of the Yersinia "Yops" with the host specific immune response is not well defined. The objective of this study was to investigate the immunomodulatory role of the "Yops" secreted by strains of Yersinia pseudotuberculosis on the production of antibodies and autoantibodies by splenic B lymphocytes. To this end, mice were infected with wild-type Y. pseudotuberculosis (YpIII) or with mutant strains, unable to secrete specific "Yops" (YopH, YopE, YopM, YpkA and YopJ). Spleen cells were obtained, and the cells secreting nonspecific and specific immunoglobulins (anti-Yersinia and anti-"Yops") was quantified by the ELISPOT technique. The presence of anti-Yersinia and anti- .Yops. specific antibodies in infected mice serum was investigated by ELISA and the presence of autoantibodies by DOT-BLOT assay. It was not observed neither difference between the number of nonspecific Igs-secreting cells of the animals infected with YpIIIpIB102 (wt) in relation to the controls. The strain YpIII pIB522, although defective in YopE secretion, provoked a reduction in the B lymphocytes secreting IgG2a, IgM and IgA. The unique activation observed was that of IgG2a isotype (an increase of 1.7-fold) on the 7th day post infection. The YopH- strain, YpIII pIB29, provoked an increase in the number of IgG1-, IgG2a- and IgG3- secreting cells (between 1.4 to 2.4-fold), on the 7th and 14th days post infection... (Complete abstract, click electronic address below) / Mestre

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Banca: Ana Paula Massae Nakage Canesin / Banca: Maria Angélica Dias / Banca: Márcia Rita Fernandes Canola / Banca: Julio Carlos Canola / Resumo: Apesar da importância do sangue do cordão umbilical (SCU) como fonte de células tronco e do advento da imunofenotipagem de linfócitos, não existem estudos sobre a imunofenotipagem de linfócitos do sangue do cordão umbilical eqüino. Este estudo visou determinar os valores eritroleucométricos e quantificar as subpopulações de linfócitos-T no SCU e no sangue obtido por venipunção da jugular de eqüinos neonatos da raça Brasileiro de Hipismo. Para tanto, foram realizadas as colheitas de SCU e da jugular de 20 potros ao nascimento. As amostras foram submetidas às determinações dos valores eritroleucométricos e à quantificação de subpopulações de linfócitos-T, pela técnica citofluorométrica. Não foram verificadas diferenças significativas (p>0,05) entre os valores médios obtidos para tais parâmetros quando comparados o sangue central e o SCU de neonatos eqüinos. Os valores eritrométricos encontrados no SCU e da jugular de neonatos equinos, exceto o VCM, se situaram na faixa de normalidade para animais adultos e foram inferiores aos valores reportados para eqüinos neonatos. O valor absoluto para neutrófilos segmentados, no SCU e no sangue da jugular dos neonatos, foi inferior ao reportado para eqüinos ao nascimento. As contagens de linfócitos CD5+ e CD4+ no SCU e jugular de neonatos eqüinos foram inferiores àquelas reportadas para o sangue periférico de eqüinos adultos, indicando um componente imunológico imaturo. No entanto, a contagem de linfócitos CD8+ foi semelhante à reportada para o sangue periférico de eqüinos adultos. A proporção CD4:CD8 obtida neste ensaio, tanto para o SCU (2,64l0,91) quanto para o sangue obtido por venipunção jugular (2,41l0,81), em eqüinos neonatos demonstrou dominância das células T CD4+ sobre os linfócitos T CD8+. / Abstract: Although the importance of umbilical cord blood as source of stem cells and the advent of Iymphocytes immunophenotyping, no studies have been performed on the immunophenotyping of equine UCB Iymphocytes. The objective of the present work was to determine erythrometric and leukometric values and quantify subpopulations of Iymphocytes in UCB and jugular blood of neonatal horses. UCB and jugular blood were collected from 20 foals of the Brasilian of Hipism breed at birth and processed for determination of erythrometric and leukometric values and quantification of subpopulations of T Iymphocytes by cytofluorometry. No significant difterences (p<0.05) were observed between average values in jugular blood of neonates and UCB of horses. Erythrometric values, except for mean corpuscular volume (MCV), were within the normal range seen in adult animais and below those reported for foal's circulating blood. Total values observed for segmented neutrophils in UCB and jugular blood of neonates were below those reported for horses at birth. CD5+ and CD4+ Iymphocytes were in lower frequencies in UCB and jugular blood of neonates than in peripheral blood of adult horses, indicating an immature immunological component. The frequency of CD8+ Iymphocytes, however, was similar to that described for the peripheral blood of adult horses. The CD4:CD8 proportion observed in the present study, for UCB (2.64:1:0.91) as well as for neonatal jugular blood (2.41:1:0.81), showed predominance of CD4+ T cells over CD8+ T Iymphocytes. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-19Bitstream added on 2014-06-13T19:18:55Z : No. of bitstreams: 1 maia_jml_me_arafcf.pdf: 491989 bytes, checksum: 76c75c0de1431ea6c8ce3ff67f4446d3 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / As proteínas Yops. formam uma família de proteínas secretadas por Yersinia spp que incluem efetores intracelulares (seis efetores foram identificados: YopE, YopH, YopM, YpkA/YopO, YopJ/YopP e YopT) e vários componentes do aparato de secreção-translocação que são liberado pela bactéria sob quelação de Ca2+. As .Yops. efetoras têm sido relacionadas a uma série de propriedades de virulência, incluindo resistência à fagocitose, citotoxicidade e desfosforilação de proteínas do hospedeiro. Porém, a interação das .Yops. de Yersinia com a resposta imune específica do hospedeiro não está bem esclarecida. O objetivo deste estudo foi investigar o papel imunomodulador das Yops secretadas por amostras de Yersinia pseudotuberculosis sobre a produção de anticorpos e autoanticorpos por linfócitos B. Para tanto camundongos foram infectados com uma amostra selvagem de Y. pseudotuberculosis (YpIII) e com amostras mutantes, defectivas na secreção de determinadas .Yops. efetoras (YopH, YopE, YopM, YpkA e YopJ). Foram obtidas células esplênicas destes animais, e as células secretoras de imunoglobulinas inespecíficas e específicas (anti-Yersinia e anti-.Yops.) foram quantificadas através do teste ELISPOT. A presença de anticorpos específicos anti-Yersinia e anti-.Yops. no soro dos animais infectados foi analisada através do teste ELISA. A presença de auto-anticorpos séricos foi analisada através do teste DOT-BLOT. Não se observou nenhuma diferença entre o número de células secretoras de imunoglobulinas (Igs) inespecíficas dos animais inoculados com a amostra selvagem, YpIIIpIB102 (wt), em relação aos controles. Já a amostra YpIII pIB522, embora defectiva na secreção de YopE, provocou uma redução dos linfócitos B secretores de IgG2a, IgM e IgA. A única ativação observada ocorreu para o isotipo IgG2a (aumento de 1,7 vezes)... / The Yops proteins form a protein family secreted by Yersinia spp that includes intracellular effectors (six effectors had been identified: YopE , YopH, YopM, YpkA/YopO, YopJ/YopP and YopT) and some components of the secretion-translocation apparatus that are released by the bacteria under Ca2+ quelation. The Yops effectors have been related to a series of virulence properties, including resistance to phagocytosis, citotoxicity and desfosforilation of host proteins. However, the interaction of the Yersinia Yops with the host specific immune response is not well defined. The objective of this study was to investigate the immunomodulatory role of the Yops secreted by strains of Yersinia pseudotuberculosis on the production of antibodies and autoantibodies by splenic B lymphocytes. To this end, mice were infected with wild-type Y. pseudotuberculosis (YpIII) or with mutant strains, unable to secrete specific Yops (YopH, YopE, YopM, YpkA and YopJ). Spleen cells were obtained, and the cells secreting nonspecific and specific immunoglobulins (anti-Yersinia and anti-Yops) was quantified by the ELISPOT technique. The presence of anti-Yersinia and anti- .Yops. specific antibodies in infected mice serum was investigated by ELISA and the presence of autoantibodies by DOT-BLOT assay. It was not observed neither difference between the number of nonspecific Igs-secreting cells of the animals infected with YpIIIpIB102 (wt) in relation to the controls. The strain YpIII pIB522, although defective in YopE secretion, provoked a reduction in the B lymphocytes secreting IgG2a, IgM and IgA. The unique activation observed was that of IgG2a isotype (an increase of 1.7-fold) on the 7th day post infection. The YopH- strain, YpIII pIB29, provoked an increase in the number of IgG1-, IgG2a- and IgG3- secreting cells (between 1.4 to 2.4-fold), on the 7th and 14th days post infection... (Complete abstract, click electronic address below)

Orientador: Maria Marluce dos Santos Vilela / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T09:35:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ramalho_VanessaDomingues_M.pdf: 1157730 bytes, checksum: 0cd719050713e1b2340be47d4d5f5b38 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A agamaglobulinemia ligada ao X (XLA; OMIM#300755) é uma imunodeficiência primária humoral caracterizada por um bloqueio na diferenciação dos linfócitos B na medula óssea, levando à profunda hipogamaglobulinemia e reduzido número ou ausência de células B periféricas. Os pacientes com XLA são susceptíveis a infecções recorrentes por bactérias encapsuladas e enterovírus devido à deficiência de anticorpos. Mutações no gene codificante da tirosina quinase de Bruton (Btk) são responsáveis pela doença. Btk é uma tirosina quinase citoplasmática da família Tec importante no desenvolvimento, na diferenciação e na sinalização dos linfócitos B. A detecção de mutações no gene btk possibilita o diagnóstico definitivo de XLA. O objetivo deste estudo foi identificar e caracterizar mutações em btk. Foram incluídos 6 pacientes conforme os critérios do PAGID e ESID: indivíduos do sexo masculino com menos de 2% de linfócitos B periféricos, hipogamaglobulinemia e história de infecções bacterianas de repetição. A triagem de mutações foi realizada com a técnica de SSCP e possíveis mutações foram confirmadas por seqüenciamento. A expressão de Btk nos pacientes e mães foi avaliada em monócitos por citometria de fluxo. Dentre os pacientes analisados as principais manifestações clínicas foram as infecções do trato respiratório. Todos tiveram início dos sintomas durante o primeiro ano de vida, linfócitos B periféricos abaixo de 2% e hipogamaglobulinemia anterior ao início da terapia de reposição de imunoglobulinas. Foram identificadas cinco mutações em btk, três novas (p.Ala347fsX55, p.I355T e p.Thr324fsX24) e duas já descritas na literatura (p.Q196X e p.E441X). A detecção das mutações nos pacientes permitiu a análise mutacional de mães, avós e tias maternas. Três mães e uma avó foram confirmadas portadoras de XLA. Em adição, os valores de expressão de Btk obtidos mostraram deficiência da proteína (4,5% a 65,2%) nos pacientes e um padrão bimodal de expressão de Btk foi observado nas mães, indicando o estado de portadora de XLA. Em um dos pacientes não foi identificada mutação, entretanto a expressão de Btk mostrou-se reduzida. O uso combinado da análise genética e da avaliação da expressão de Btk por citometria de fluxo possibilitou o diagnóstico definitivo de XLA e a identificação de portadoras da doença. / Abstract: X-linked agammaglobulinemia (XLA; OMIM# 300755) is a primary humoral immunodeficiency characterized by a block in early B cell differentiation, leading to profound hypogammaglobulinemia and few or no circulating B cells. Patients with XLA are susceptible to recurrent infections by encapsulated bacteria and enteroviruses due to antibody deficiency. Mutations in the Bruton tyrosine kinase (Btk) gene have been identified as responsible for XLA. Btk is a cytoplasmic tyrosine kinase of the Tec family important in B-lymphocyte development, differentiation, and signaling. Detection of a btk mutation allows definitive diagnosis of XLA. The aim of this study was to identify and characterize mutations in btk. Six patients were included according to the criteria of PAGID and ESID: males with less than 2% of circulating B cells, hypogammaglobulinemia and a history of recurrent bacterial infections. Mutation screening was performed with SSCP technique and possible mutations were confirmed by sequencing. Expression of Btk protein in patients and mothers was assessed in monocytes by flow cytometry. The major clinical manifestations among patients were respiratory tract infections. All had onset of symptoms during the first year of life, circulating B cells below 2% and hypogammaglobulinemia before the start of immunoglobulin replacement therapy. We identified five mutations in btk, three novel (p.Ala347fsX55, p.I355T and p.Thr324fsX24) and two recurrent mutations (p.Q196X and p.E441X). The btk mutations detection in patients enabled the screening of mothers, grandmothers and maternal aunts. Three mothers and one grandmother were confirmed XLA carriers. In addition, flow cytometric evaluation of Btk expression in monocytes revealed that Btk deficiency (4,5% a 65,2%) was present in patients and a bimodal pattern of Btk expression was observed in mothers, indicating that they were XLA carriers. In one patient no mutation was identified, but his Btk expression was reduced. The combined use of genetic analysis and flow cytometric assay of Btk protein expression allowed the definitive diagnosis of XLA and its carriers detection. / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

Compara los valores absolutos y porcentuales de las células NKT en pacientes con VIH y controles normales, así como los otros conjuntos de linfocitos. Es un estudio de tipo descriptivo, observacional y de corte transversal realizado en los laboratorios de epidemiología molecular del Instituto de Medicina Tropical de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, con muestras recolectadas del Hospital Nacional Dos de Mayo. Las muestras de sangre total anticoagulada con EDTA pertenecen a una población mixta y sin rangos de edad, atendidos y diagnosticados con VIH en el servicio de infectología del Hospital Nacional Dos de Mayo y a una población control. Determina las células NKT, así como los demás subconjuntos celulares gracias a la técnica de citometría de flujo utilizando el reactivo MultiTEST CD3 FITC/CD16 + CD56 PE/CD45 PERCP/CD19 APC de BD y tubos Trucount para el recuento absoluto. Utiliza el software del equipo Accuri C6 para la adquisición y análisis de las muestras. El análisis estadístico se llevó a cabo utilizando STATA 10 donde se determinó la normalidad de las variables con la prueba de Shapiro-Wilk y se realizó la prueba de t de student para comparar medias. Encuentra que los recuentos absolutos de NKT en controles sanos son mayores que en pacientes infectados. Obtiene de medias 233.03 células/μL y 80.79 células/μL respectivamente, siendo las diferencias de estas estadísticamente significativas. Lo mismo ocurre con los valores porcentuales de este grupo celular. Del mismo modo se observa disminución en linfocitos totales y linfocitos CD3. Las células NK se mantienen en pacientes con VIH en este estudio. Concluye que las células NKT se ven disminuidas en pacientes recientemente infectados con VIH en comparación a un grupo control. No sucede lo mismo con células NK. Se recomienda que este estudio sea el primer paso a nuevos trabajos que involucre células NKT y VIH, así como su implicancia en la aparición de infecciones oportunistas en el Perú. / Tesis

Evalúa la correlación de los tres parámetros más reportados del Ensayo Cometa Alcalino (Tail intensity, Tail Length y Olive Tail Moment) usando cuatro dosis de radiación ionizante, para evidenciar la capacidad de cada uno de ellos en la detección de niveles de daño en el ADN de células mononucleares (linfocitos y monocitos). Para este propósito se construyen seis curvas dosis-efecto, por cada parámetro. Las células mononucleares irradiadas (mediante irradiación gamma de una fuente de Co-60 con dosis de 0, 2.5, 5 y 7 Gy) provinieron de muestras sanguíneas extraídas a seis donantes aparentemente sanos. Los resultados muestran una correlación altamente significativa para cada uno de los parámetros. El R2 promedio obtenido con el parámetro Tail Intensity (TI), R2 = 0.977, DE = 0.007 fue superior comparado con los hallados con el Olive Tail Moment (OTM), R2=0.937 DE=0.036 y el Tail Length (TL), R2 = 0.92 DE= 0.075. Del mismo modo, en la variabilidad de las pendientes, el TI fue menor (CV=25.48 %) seguido del OTM (CV=46.6 %) y TL (CV=41.78 %). Se concluye que existe buena correlación entre los parámetros del ensayo cometa y las dosis de radiación ionizante. Entre ellos, los parámetros TI y OTM son los indicadores de daño al ADN que tiene mejor correlación con el aumento de dosis de radiación. El primero es particularmente preferido debido a la menor variabilidad de las pendientes de curvas y las características propias en la expresión de resultados. Se sugiere realizar más estudios para evaluar las limitaciones de la técnica y sus posibles aplicaciones. / Tesis