Orientador: Angelo Berchieri Junior / Coorientador: Hélio José Montassier / Banca: Rosângela Zacarias Machado / Banca: Luiz Felipe Caron / Banca: Raphael Lucio Andreatti Filho / Banca: Marcelo Brocchi / Resumo: Salmonella Enteritidis (SE) causa doença transmitida por alimentos (DTA) em humanos. Carne de frango e ovos frequentemente estão associados a esses casos. O controle da infecção em aves, baseia-se em medidas de biossegurança, incluindo-se a vacinação. Tem sido comum a utilização de vacinas vivas (VV) e inativadas (Bacterinas - BA), porém pouco se sabe sobre os mecanismos imunes desencadeados pelas vacinas contra SE. Neste estudo, utilizaram-se quatroprogramas vacinais (VV; VV+VV; BA; VV+BA) em galinhas leves de variedade branca para postura de ovos de mesa, vacinadas com 5 e/ou 25 dias de vida, e desafiadas aos 45 dias de vida com SE. No dia anterior à infecção (1 DAI) e 1, 6 e 9 dias pós-infecção (DPI), cinco aves/grupo foram sacrificadas para amostragem. A população de linfócitos CD4+ e CD8+ foi avaliada por imuno-histoquímica em tonsilas cecais e fígado; citocinas foram quantificadas por RT-qPCR em tempo real em tonsilas cecais e baço; níveis de IgG e IgM foram mensurados por ELISA no soro e IgA em lavado intestinal. Os níveis de imunoglobulina (IgG, IgM e IgA) estavam significativamente mais altos em aves vacinadas com BA, do 1 DAI ao 9 DPI, em comparação aos grupos vacinados somente com VV. Os níveis de IFN-γ, na tonsila cecal, eram similares em todos os grupos após o desafio. Antes do desafio (1 DAI), IL-10 foi altamente expressa em baço de aves que receberam somente BA (25 dias de vida), sugerindo o desenvolvimento de resposta por linfócitos T CD4+ auxiliar 2 (Ta2), reforçado pelos altos níveis de IgG encontrados neste grupo (p<0.05). Os níveis de TGF-β4 e das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNFSF15 eram bastante elevados no grupo que recebeu VV+VV. A vacinação por via oral com VV aumentou significativamente o fluxo de linfócitos T CD8+ para as tonsilas cecais após o desafio. Isso poderia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Salmonella Enteritidis (SE) causes foodborne infection in humans. Poultry meat and eggs are frequently associated with these cases. The control of this bacterium is based on sanitary measures and mainly, vaccination of chicken flocks. Vaccine programs are used worldwide to control SE in poultry flocks. Live (LV) and killed vaccines (KV) are often combined, although few studies regarding immune mechanisms developed by SE vaccines are available. In this work, four vaccine programs were studied (LV; LV+LV; KV; LV+KV) in white layer-hens vaccinated at 5 and/or 25 days-old and challenged at 45 days-old with SE. At 1 day before (dbi) and 1, 6 and 9 days post-infection (DPI), five birds/group were sacrificed for sampling. The population of CD4+ and CD8+ T cells was evaluated by immunohistochemistry in caecal tonsils and liver, cytokines were quantified by real time RT-qPCR in caecal tonsils and spleen; IgG, IgM and IgA levels were measured by ELISA in serum and the latter in intestinal washes. The immunoglobulin levels (IgG, IgM and IgA) were significantly higher in birds vaccinated with KV, from 1 dbi to 9 DPI, than in groups that received only LV. In caecal tonsils, IFN-γ levels were similar in all groups after challenge. Before challenge (1 dbi), IL-10 was highly expressed in spleen of birds that received only KV (25 days-old), suggesting the development of the T CD4+ helper 2 (Th2) type of immune response, reinforced by high IgG levels against SE seen in this group (p<0.05). TGF-β4 and the proinflammatory cytokines IL-6 and TNFSF15 were higher in caecal tonsils in the group that received LV+LV. Vaccination by oral route with LV clearly increased the influx of CD8+ T cells in caecal tonsils after challenge. This could be correlated with the better control of SE noticed in groups that received at least one dose of LV, including... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Mary Marcondes / Banca: Gisele Fabrino Machado / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: A Leishmaniose visceral em cães é descrita como uma doença de caráter crônico na qual os principais sintomas são perda progressiva de peso, caquexia, lesões dermatológicas, e recentemente, a doença tem sido relacionada com quadros neurológicos. Um total de 41 cães portadores de leishmaniose visceral, foram divididos em dois grupos. O primeiro composto por cães sem sintomas neurológicos (n=31) e o segundo grupo composto por cães com sintomas neurológicos (n=10). Amostras de encéfalo foram coletadas e armazenadas em formalina tamponada, para realização de imunoistoquímica para a pesquisa de formas amastigotas da Leishmania sp., linfócitos T CD3+, CD4+ e CD8+ e macrófagos. Não foram observadas formas amastigotas de Leishmania sp. Linfócitos T CD3+ estavam presentes em 24/31 (77,4%) dos cães sem sintomas neurológicos e em todos os cães do segundo grupo (p=0,0011). Linfócitos T CD4+ e CD8+ raramente foram observados, apresentando imunomarcação para CD4+ em 10/41 (24,3%) dos cães e em metade dos animais do grupo neurológico (p=0,0090). A presença de CD8+ foi detectada em 4/10 (40%) dos cães com doenças neurológicas (p=0,0021). Macrófagos foram observados em 38/41 (92,6%) cães, sem diferença estatística significante entre os dois grupos (p= 0,7664) / Abstract: Visceral leishmaniasis in dogs is described as a chronic disease whose main symptoms are progressive weigth loss, dermatologic lesions and, recently, the disease has been associated to neurologic disorders in dogs. A total of 41 Leishmania chagasi infected dogs were divided into two groups. The first composed of dogs without neurological signs (n=31) and the second by dogs with neurological disorders (n=10). Brain samples were collected, stored in 10% buffered formalin and subjected to immunohistochemical examination for amastigotes forms of Leishmania sp, CD3+, CD4+ and CD8+ T lymphocytes and macrophages. Imunnohistochemistry not revealed amastigote any forms of Leishmania sp. CD3+ T lymphocytes were present in 24/31 (77,4%) dogs without neurological signs and in all dogs from the second group (p=0.0011). CD4+ and CD8+ were rarely observed, with CD4+ immunostaining in 10/41 (24,3%) dogs, from which half of them had neurological disease (p=0.0090). The presence of CD8+ was detected only in 4/10 (40%) dogs from neurological group (p=0.0021). Macrophages were detected in 38/40 (92,6%) dogs, without significant differences between groups (p=0.7664) / Mestre

Seminario de Título entregado a la Universidad de Chile en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al Título de Ingeniera en Biotecnología Molecular. / El desarrollo de una respuesta inmune anti-tumoral requiere de la comunicación entre diferentes células del sistema inmune, así como del reconocimiento de la célula tumoral. Una vez que los Linfocitos T Citotóxicos (CTL) y las células Natural Killers (NK) reconocen la célula tumoral, forman la Sinapsis Inmunológica Citotóxica (SIC), una estructura supramolecular altamente especializada que resulta fundamental para la liberación localizada de los gránulos citotóxicos y la eliminación específica de la célula tumoral. Recientemente, se ha descrito la participación de canales Gap Junction (GJ) formados por la isoforma Cx43 (GJ-Cx43) en la actividad citotóxica de las células NK durante la SIC. A pesar de las similitudes funcionales y estructurales presentadas por la SIC mediada por las células NK y por CTL, la participación de los canales GJ-Cx43 en la sinapsis mediada por CTL aún no ha sido determinada. En este trabajo se estudió el rol de los canales GJ-Cx43 en la actividad de la SIC entre CTL obtenidos desde ratones pMEL-1 y células de melanoma murino B16F10. Primero, se evaluó la polarización de Cx43 hacia la zona de contacto entre CTL pMEL-1 y células B16F10, durante la SIC. Se determinó que Cx43 se acumula en el sitio de contacto entre estas células de manera antígeno específica y que esta polarización es dependiente de la activación de los CTL. Luego, se disminuyó la expresión de Cx43 en células B16F10 utilizando un RNA interferente contra Cx43 y luego se evaluó la participación de Cx43 en la formación de canales GJ mediante ensayos de transferencia de calceína y en la actividad citotóxica de los CTL, mediante ensayos de actividad de Granzima B (GrzB). Se observó que los CTL transfieren calceína a las células B16F10 formando canales GJ funcionales, al contrario de cuando se utilizan LT CD8+ vírgenes como células efectoras. Además, cuando se utilizaron las células B16F10 que expresan bajos niveles de Cx43 como células blanco, se observó una disminución en la transferencia de calceína y en la actividad de GrzB en comparación al control. Nuestros resultados demuestran que durante el reconocimiento citotóxico se forman canales GJ-Cx43 entre CTL y células B16F10 y que la formación de estos canales durante la SIC son importantes para la eliminación de células tumorales mediada por CTL. / Development of antitumor immune responses requires communication between different immune cells, and specific immune recognition of tumor cells. Upon tumor cell recognition, CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTL) and natural killer (NK) cells form the “Cytotoxic Immunological Synapse (SIC)”, a specialized molecular structure fundamental for the polarized delivery of cytotoxic granules and the specific tumor cell killing. Recently, it has been described the participation of Gap Junction Intercellular Communications formed by Connexin 43 (GJIC-Cx43) in the NK cell SIC activity. Despite that CTL and NK cells present functional and structural similarities in SIC formation, the participation of GJIC-Cx43 in CTL-mediated SIC remains unclear. In this work we studied the role of GJIC-Cx43 in the activity of SIC formed between CTL from pMEL-1 mice and B16F10 murine melanoma cells. First, we evaluated by immunofluorescence the polarization of Cx43 to contact site between CTL and B16F10 during SIC. We found that this protein localizes at the contact site of SIC and this polarization dependent on activation of CTL and is an antigenic-specific process. Then, we decrease Cx43 expression in B16F10 cells using interference RNA against Cx43 and we evaluated the participation of Cx43 in the formation of functional GJ channels by calcein transfer assay and in the cytotoxic activity of CTL by Granzyme B (GrzB) activity assay. We found that CTL transfer calcein to B16F10 forming functional GJ in contrast with when we used a naïve CD8+ T cells as an effector cells. In addition, when we used a B16F10 that express low levels of Cx43 as target cells, we observed a decrease in calcein transfer and GrzB activity in comparison to the control. Our results demonstrate that GJIC-Cx43 are formed between CTL and B16F10 during SIC, and suggest that their formation is important for tumor cells-killing by CTL

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia / Made available in DSpace on 2012-10-23T05:32:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 238945.pdf: 16959863 bytes, checksum: bec6807482c3930e51f82b9197812244 (MD5) / A lesão periapical é resultado de uma reação inflamatória local causada por microrganismos do canal radicular infectado e seus produtos. A interação entre as células inflamatórias e os microrganismos suscita uma resposta imune específica e inespecífica. Reações imunológicas mediadas por linfócitos T e B e macrófagos têm sido implicadas em lesões periapicais em dentes permanentes. Devido à falta de estudos relacionados à participação do sistema imune em lesões perirradiculares em dentes decíduos e à própria imaturidade do sistema imunológico da criança, esta pesquisa propôs verificar a presença de linfócitos T, linfócitos B e macrófagos em lesões perirradiculares de dentes decíduos. Quartorze lesões perirradiculares (abcesso agudo, abcesso crônico e granuloma) foram analisadas. A técnica de imuno-histoquímica foi realizada para identificar linfócitos T, linfócitos B e macrófagos, utilizando anticorpos monoclonais específicos anti-humanos CD45RO, CD20 e CD68, respectivamente. As células foram quantificadas por meio de análise microscópica dos cortes histológicos. Os dados revelaram que a média da porcentagem de células positivas CD45RO foi de 11,76; de células CD20 positivas foi de 5,25; células positivas CD68 foi de 10,92. Os resultados indicam que linfócitos T e B e macrófagos constituem a maior parte do infiltrado inflamatório em lesões perirraridulares em dentes decíduos indicando que a reação imune humoral e mediada por células está presente. É relevante a participação do sistema imune nos processos inflamatórios perirradiculares em dentes decíduos.

Doctor en Ciencias con Mención en Biología Molecular, Celular y Neurociencias / El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad autoinmune caracterizada por la producción de autoanticuerpos que forman complejos inmunes, los cuales son los responsables de la inflamación y daño tisular. En el LES, los linfocitos B son mediadores claves en el desarrollo de la enfermedad, dado que se diferencian a células plasmáticas secretoras de anticuerpos. Sin embargo, se ha demostrado que los linfocitos T también cumplen un papel importante en esta enfermedad ya que proveen a los linfocitos B de señales para activarse y diferenciarse a células plasmáticas secretoras de anticuerpos. El timo es un órgano linfoide primario dedicado a la generación y maduración de linfocitos T. Antecedentes recientes de la literatura han demostrado que el timo de personas adultas no sólo cumpliría una función en el desarrollo de los linfocitos T, sino que además el timo alojaría linfocitos B e incluso actuaría como nicho de células plasmáticas productoras de anticuerpos anti antígenos virales. Más aún, estudios previos de nuestro laboratorio en el modelo murino de LES NZBWF1, han demostrado que el timo de ratones enfermos de lupus presenta importantes alteraciones en las poblaciones celulares, como cambios en las proporciones de linfocitos T e interesantemente un aumento en la población de linfocitos B en comparación a animales sanos. El conjunto de estos antecedentes nos llevó a estudiar la contribución de los linfocitos T y B presentes en el timo de ratones lúpicos NZBWF1 en el desarrollo de la respuesta humoral autoinmune. 2 Nuestros resultados indican que animales enfermos presentan una involución tímica exacerbada en comparación a animales que no se han enfermado, junto con una pérdida de la estructura normal del timo determinada por las zonas de corteza y médula. Asociado a este fenómeno, observamos alteraciones en las subpoblaciones de timocitos, que son las células en diferenciación que originarán finalmente a los linfocitos T. En ratones enfermos, observamos que los timocitos CD4+ en vías de diferenciación disminuyen y aumentan los linfocitos T CD4+ de memoria y linfocitos T foliculares. Por otro lado, existe un aumento en la frecuencia de linfocitos B en el timo previo al desarrollo de la enfermedad, pero el aumento más significativo de linfocitos B en el timo ocurre una vez que se desarrolla el LES. De manera interesante, los linfocitos B cambian su distribución en el timo de ratones enfermos, formando estructuras similares a un centro germinal. Mas aún, en el timo de ratones enfermos existe un mayor número de linfocitos B que expresan Ki-67 comparado a ratones sanos, indicando que estos linfocitos se encuentran proliferando. Además demostramos que en el timo de animales enfermos hay un aumento de células que secretan anticuerpos de tipo IgG e IgM, entre las cuales una proporción de ellas producía autoanticuerpos IgG contra ADN, un autoantígeno del LES. Dado que los linfocitos T foliculares presentes en el timo del ratón lúpico activan in vitro a los linfocitos B, nuestros resultados sugieren que en el timo de los ratones enfermos existen linfocitos B que se están diferenciando en células plasmáticas productoras de autoanticuerpos. Finalmente, demostramos in vitro que los linfocitos B del timo de ratones lúpicos favorecen la diferenciación de timocitos a linfocitos T foliculares. 3 En conclusión, la acumulación de linfocitos B en el timo de ratones lúpicos participaría en la expansión de linfocitos T foliculares en este órgano, los que a su vez podrían favorecer la diferenciación de linfocitos B a células plasmáticas autorreactivas. Nuestros resultados sugieren que el timo constituye un nicho que promueve la mantención de la respuesta humoral autoinmune en el modelo murino NZBWF1 de lupus. / Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease characterized by the production of antibodies that form immune complexes, which induce inflammation and tissue damage. In SLE, B cells are key mediators of the disease development, since they differentiate into antibody-secreting cells. However, it has been demonstrated that T cells also play an important role in this disease, by delivering signals that activate and differentiate B cells into antibody-secreting plasma cells. The thymus is a primary lymphoid organ dedicated to T cell generation and maturation. Recent reports in the literature have shown that the thymus of adult individuals, not only maintains its role in T cell development, but also harbors B cells and even acts as a niche of plasma cells that produce antibodies against viral antigens. Moreover, previous work in our laboratory using the SLE murine model NZBWF1, found that the thymus of lupus-diseased mice have important alterations in its cellular composition, such as changes in T cells proportions and a remarkable increase in B cells compared to healthy mice. This converging evidence led us to study the contribution of T and B cells present in the thymus of diseased NZBWF1 mice during the development of the autoimmune humoral response. Our results indicate that diseased mice show an exacerbated thymic involution compared to animals that have not yet developed the diseased, together with a loss of normal thymic structure composed of cortex and medulla. Associated to this phenomenon, we observed alterations in the thymocyte subpopulations, which are cells 5 undergoing differentiation that give rise to T cells. In diseased mice, we observed that immature CD4+ thymocytes decrease while memory CD4+ T cells and follicular T cells are increased. On the other hand, there is a higher frequency of B cells in the thymus prior to the onset of the disease, but the most significant increase occurs once mice have developed SLE. Interestingly, B cells change their distribution in the thymus of diseased mice, forming germinal center-like structures. Moreover, in the thymus of diseased mice thymus there is a higher number of B cells expressing Ki-67 compared to healthy mice, indicating that B cells are proliferating. Also, we demonstrated that in the thymus of diseased mice there is an increase of cells that secrete IgG and IgM antibodies among which a fraction produced IgG autoantibodies against DNA, an autoantigen of SLE. Follicular T cells present in the lupic mouse thymus were shown to induce B cells activation in vitro, suggesting that the thymus of diseased mice contains B cells that are differentiating in antibody-producing plasma cells. Finally, in vitro we demonstrated that thymic B cells from lupic mice favour the differentiation of follicular T cells from thymocytes. In conclusion, the accumulation of B cells in the thymus of lupic mice could participate in the expansion of follicular helper T cells in this organ, which may in turn promote the activation and differentiation of B cells into autoreactive plasma cells. Our results present novel findings which suggesting that the thymus constitutes a niche that promotes the maintenance of the autoimmune humoral response in the lupus murine model NZBWF1. / financiamiento de mi beca CONICYT 21130598 y de los proyectos FONDECYT 1140431, FONDECYT 1180385, PFB-16 y AFB 170004. / Septiembre 2019

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Ciência da Computação. / Made available in DSpace on 2012-10-19T13:50:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 188164.pdf: 1010685 bytes, checksum: b3903b172bcb163966738ae67f5d3e51 (MD5) / Neste trabalho foi implementada uma rede neural artificial para reconhecer, classificar e contar núcleos de linfócitos do sangue periférico humano. Foram utilizadas técnicas para o processamento da imagem digital, como segmentação e extração de características relevantes da imagem, assim como desenvolveu-se um conteúdo teórico a respeito de redes neurais diretas com múltiplas camadas e algoritmo de aprendizagem de retropropagação. Também foi desenvolvida, nesta pesquisa, uma solução utilizando Algoritmo Genético para evoluir o conjunto de treinamento da rede neural utilizada, na tentativa de aumentar o desempenho desta.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-14Bitstream added on 2014-06-13T19:53:32Z : No. of bitstreams: 1 schwardt_tf_me_araca.pdf: 288540 bytes, checksum: f6b713d25bd498b2a46d22b12adc7738 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Leishmaniose visceral em cães é descrita como uma doença de caráter crônico na qual os principais sintomas são perda progressiva de peso, caquexia, lesões dermatológicas, e recentemente, a doença tem sido relacionada com quadros neurológicos. Um total de 41 cães portadores de leishmaniose visceral, foram divididos em dois grupos. O primeiro composto por cães sem sintomas neurológicos (n=31) e o segundo grupo composto por cães com sintomas neurológicos (n=10). Amostras de encéfalo foram coletadas e armazenadas em formalina tamponada, para realização de imunoistoquímica para a pesquisa de formas amastigotas da Leishmania sp., linfócitos T CD3+, CD4+ e CD8+ e macrófagos. Não foram observadas formas amastigotas de Leishmania sp. Linfócitos T CD3+ estavam presentes em 24/31 (77,4%) dos cães sem sintomas neurológicos e em todos os cães do segundo grupo (p=0,0011). Linfócitos T CD4+ e CD8+ raramente foram observados, apresentando imunomarcação para CD4+ em 10/41 (24,3%) dos cães e em metade dos animais do grupo neurológico (p=0,0090). A presença de CD8+ foi detectada em 4/10 (40%) dos cães com doenças neurológicas (p=0,0021). Macrófagos foram observados em 38/41 (92,6%) cães, sem diferença estatística significante entre os dois grupos (p= 0,7664) / Visceral leishmaniasis in dogs is described as a chronic disease whose main symptoms are progressive weigth loss, dermatologic lesions and, recently, the disease has been associated to neurologic disorders in dogs. A total of 41 Leishmania chagasi infected dogs were divided into two groups. The first composed of dogs without neurological signs (n=31) and the second by dogs with neurological disorders (n=10). Brain samples were collected, stored in 10% buffered formalin and subjected to immunohistochemical examination for amastigotes forms of Leishmania sp, CD3+, CD4+ and CD8+ T lymphocytes and macrophages. Imunnohistochemistry not revealed amastigote any forms of Leishmania sp. CD3+ T lymphocytes were present in 24/31 (77,4%) dogs without neurological signs and in all dogs from the second group (p=0.0011). CD4+ and CD8+ were rarely observed, with CD4+ immunostaining in 10/41 (24,3%) dogs, from which half of them had neurological disease (p=0.0090). The presence of CD8+ was detected only in 4/10 (40%) dogs from neurological group (p=0.0021). Macrophages were detected in 38/40 (92,6%) dogs, without significant differences between groups (p=0.7664)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-04Bitstream added on 2014-06-13T18:53:47Z : No. of bitstreams: 1 sakamoto_kp_me_araca.pdf: 546031 bytes, checksum: 6e34a6b9bbf11432d68486ead636a2f8 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Leishmaniose visceral é uma enfermidade que possui uma grande variabilidade de manifestações clínicas, em humanos como em cães. Cães cronicamente infectados podem desenvolver desordens neurológicas, contudo, há poucos relatos que caracterizam as lesões e elucidam a patogenia da leishmaniose cerebral canina. Considerando a imunossupressão associada à leishmaniose visceral e que os patógenos oportunistas Toxoplasma gondii e Neospora caninum podem colaborar para a ocorrência de lesões no sistema nervoso central de cães naturalmente infectados por Leishmania chagasi, as populações de linfócitos B (CD79+) e T (CD3+) foram avaliadas no tecido nervoso de cães portadores de leishmaniose visceral e que possuem soropositividade para T. gondii e N. caninum. Lesões inflamatórias, caracterizadas por acúmulos de células mononucleares compostos principalmente por linfócitos T CD3+ predominaram em diversas regiões encefálicas dos cães infectados (P = 0,0012). Linfócitos B CD79+ foram detectados em pequena intensidade, não havendo diferença entre os grupos (P = 0,3604). Os resultados obtidos sugerem que a co-presença de leishmaniose visceral, toxoplasmose e neosporose é importante para o agravamento das lesões encefálicas, e que a imunossupressão gerada pela infecção por Leishmania não somente favorece a infecção por outros patógenos, mas colabora com esses, ocasionando lesões mais severas no tecido nervoso / Visceral leishmaniasis is a disease with great variability regarding the clinical manifestations, in humans as in dogs. Chronically infected dogs may develop neurological disorders, however, there are few reports that characterise the lesions and make clear the pathogenesis of the canine cerebral leishmaniasis. Considering the immunossupression associated to visceral leishmaniasis and that the opportunist pathogens Toxoplasma gondii and Neospora caninum may collaborate to the occurrence of lesions in the central nervous system of dogs naturally infected by Leishmania chagasi, we evaluated the population of B (CD79+) and T (CD3+ ) lymphocytes in the nervous tissue of dogs with visceral leishmaniasis and with seropositivity to T. gondii and to N. caninum. Inflammatory lesions, characterised by mononuclear cellsaccumulation, composed mainly by CD3+ T lymphocytes predominated in several encephalic regions of the dogs from the infected groups (P=0.0012). CD79+ B lymphocytes were detected in very small intensity and presented no difference among groups (P=0.3604). The results presented herein suggest that the co-presence of visceral leishmaniasis, toxoplasmosis and neosporosis is important for the worsening of the encephalic lesions, and that the immunossupression caused by Leishmania infection not only propitiates the infection by other pathogens, but collaborate with them, causing more severe lesions in the brain

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-19Bitstream added on 2014-06-13T19:43:15Z : No. of bitstreams: 1 tansini_a_dr_arafcf.pdf: 666076 bytes, checksum: 4a336ba4a2f0d99a602646cc539929be (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A infecção por Y. pseudotuberculosis é uma causa de doenças intestinais e extraintestinais. A resolução da infecção está relacionada à ativação de células Th1, entretanto, pouco se conhece sobre a influência de outras subpopulações de linfócitos T, como Th17 e Treg, na regulação dessa infecção. Células dendríticas são capazes de orientar a resposta imune adaptativa através da produção de citocinas e apresentação de antígenos às células T, tornando essas células essenciais na ativação e diferenciação de linfócitos T. Desse modo, o presente trabalho avaliou o papel de distintas subpopulações de linfócitos T e a influência de células dendríticas no desenvolvimento da resposta imune contra a infecção por Y. pseudotuberculosis. Para tanto, foram avaliadas as subpopulações de linfócitos T CD4+, CD8+ e Foxp3+, presentes durante a infecção por Y. pseudotuberculosis e amostras bacterianas mutantes para fatores de virulência Yops, bem como a expressão de citocinas intracelulares (IL-2, IL-4, IL-10, IL-17, IFN-γ, TNF-α e TGF-β) por estas células. O papel de linfócitos Treg e Th17 no controle da bactéria foi analisado por meio de ensaio de depleção de células CD25+ e neutralização de IL-17. Além disso, a influência de células dendríticas na modulação da resposta imune contra Y. pseudotuberculosis foi estudada através da determinação da produção de citocinas (IL-6, IL-12, IL-10, IL-23, TNF-α e TGF-β) e co-cultivo com linfócitos T obtidos de animais imunizados com antígenos de Y. pseudotuberculosis. Os resultados mostraram redução na produção de citocinas pró-inflamatórias por células dendríticas infectadas com a amostra bacteriana portadora do plasmídeo de virulência, em ambas as linhagens de camundongos estudadas... / Y. pseudotuberculosis infection is a cause of intestinal and extraintestinal diseases. Infection resolution is related to the activation of Th1 cells, however, little is known about the influence of other T cells subsets, like Th17 and Treg, in the control of this infection. Dendritic cells are capable of directing the adaptive immune response by producing cytokines and presenting antigens to T cells, making them essential to T lymphocytes activation and differentiation. Thus, this study evaluated the role of different T lymphocytes subsets and the influence of dendritic cells on the development of the immune response against Y. pseudotuberculosis infection. Here, we evaluated the T cells subsets CD4+, CD8+ and Foxp3+, present during Y. pseudotuberculosis infection and mutant samples bacterial virulence factors, and also the intracellular expression of cytokines (IL-2, IL-4, IL-10, IL-17, IFN-γ, TNF-α and TGF-β) by these cells. The role of Th17 and Treg cells in controlling the bacteria was analyzed by tests of depleted CD25+ cells and IL-17 neutralization. Furthermore, the influence of dendritic cells in modulating the immune response against Y. pseudotuberculosis was studied by determining the cytokine production (IL-6, IL-12, IL-10, IL-23, TNF-α and TGF-β) and co-culture with lymphocytes from animals immunized with Y. pseudotuberculosis antigens. The results showed a reduction in proinflammatory cytokines production by dendritic cells infected with bacteria carrying the bacterial virulence plasmid, in both mice strains studied... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-20Bitstream added on 2014-06-13T21:04:28Z : No. of bitstreams: 1 ramos_op_dr_arafcf.pdf: 948525 bytes, checksum: 0581866624e7c3f57ffffca838856184 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Yersinia pseudotuberculosis e Y. enterocolitica são patógenos que causam desordens gastrintestinais. Estudos utilizando infecção in vitro demonstraram que Y. enterocolitica pode ter como alvo as células dendríticas (DCs), afetando várias de suas funções, incluindo sua maturação e produção de citocinas, e, conseqüentemente, contribuindo para a diminuição da ativação de células T CD4+. O objetivo deste estudo foi investigar o papel das células dendríticas das placas de Peyer (PP) na determinação do padrão de resposta imune, Th1 e Th2, durante a infecção por via intragástrica de camundongos suscetíveis (BALB/c) e resistentes (C57BL/6) com a amostra virulenta de Y. pseudotuberculosis (YpIII pIB1 – Yp+) ou seu par isogênico, curado do plasmídeo de virulência (YpIII – Yp-). As DCs das PP foram obtidas no 1°, 3° e 5° dia pós-infecção, quantificadas e analisadas quanto às suas subpopulações, expressões de moléculas de superfície e capacidade imunoestimulatória por citometria de fluxo, e quanto à secreção de citocinas (IL-4, IL-10, IL-12 e TNF-α) por ELISA. Os linfócitos das PP também foram obtidos no mesmo período e tiveram suas sub-populações e o padrão de citocinas intracelulares Th1/Th2 (IL-2, IL-4, IL-10 e IFN-γ) analisado por citometria de fluxo. A infecção por Yp+ reduziu o número de DCs no 1° dia pós-infecção e aumentou, no período inicial, a expressão de B7.1 e B7.2 nos camundongos BALB/c. Nos camundongos C57BL/6 reduziu o número de DCs durante todo o período analisado, aumentou a expressão de B7.1 e B7.2 no período inicial e a expressão de ICAM-1. A infecção por ambas as amostras provocou redução da sub-população CD8α+ e da expressão de MHC II nas duas linhagens de animais, aumentou a sub-população CD11b+ nos animais suscetíveis e diminuiu nos animais resistentes. Os animais estudados não apresentaram... / Yersinia pseudotuberculosis and Y. enterocolitica are pathogens that cause gastrointestinal disorders. Studies using in vitro infection demonstrated that Y. enterocolitica can have as a target dendritic cells (DCs), affecting several of its functions, including their maturation and production of cytokines, and, consequently, contributing to the diminished activation of the T CD4+ cells. The aim of this study was to investigate the role of dendritic cell from Peyer’s patches (PP) in determining of immune response pattern, Th1 and Th2, during infection by the intragastric route in susceptible (BALB/c) and resistant (C57BL/6) mice with a virulent sample of Yersinia pseudotuberculosis (YpIII pIB1 – Yp+) or its isogenic pair, cured of the virulence plasmid (YpIII – Yp-). The PP DCs were obtained on the 1st, 3rd and 5th days postinfection, quantified and analyzed as far as their subpopulations, expressions of surface molecules and immunostimulatory capacity by flow cytometry, and the cytokines secretion (IL-4, IL-10, IL-12 and TNF-α) by ELISA. The PP lymphocytes were also obtained in the same period, and had their subpopulations and the pattern of intracellular Th1/Th2 cytokines (IL-2, IL-4, IL-10 and IFN-γ) analysed by flow cytometry. The infection by Yp+ reduced the number of DCs on the 1st day post-infection and increased, in the initial period, the expression of B7.1 and B7.2 in BALB/c. In C57BL/6 mice reduced the number of DCs throughout the study period, increased the expression of B7.1 and B7.2 in the initial period and the expression of ICAM-1. The infection by both samples reduced CD8α+ subpopulation and expression of MHC II in both animals, increased CD11b+ sub-population in susceptible animals and reduced the same sub-population in resistant animals. The studied animals did not present important differences as far as secretion of cytokines by the DCs of PP and both... (Complete abstract click electronic access below)