Determina la efectividad del tratamiento antiproteinúrico del enalapril y el losartán, y al compararlos, determinar la mejor alternativa terapéutica para los pacientes con nefropatía diabética en el Servicio de Nefrología del Hospital Nacional PNP Luis N. Sáenz. Realiza un estudio de diseño experimental y comparativo. Se evaluaron 28 pacientes, de ambos sexos, de 44 años a 63 años, con diabetes mellitus tipo 2 y proteinuria mayor a 30 mg/día. Recibieron tratamiento antiproteinúrico con enalapril 10 mg/día y losartán 50 mg/día durante 12 semanas, divididos en dos grupos conformados por 14 pacientes cada uno. Encuentra que en el grupo Losartán, la reducción de la proteinuria fue superior al 25% en 9 pacientes (27.83%-42%), a diferencia del grupo Enalapril en el que dicha reducción ocurre en 8 pacientes (26.56%-39.64%). En el grupo Enalapril, 4 variables presentaron diferencias estadísticamente significativas respecto a sus controles basales: proteinuria de 24 horas (203.9±48.08 a 146.6±36.54), HbA1c (6.892±0.40 a 6.828±0.26), PAM (89.28±1.953 a 86.92±0.725) y el efecto antiproteinúrico (12.43±5.350 a 26.13±5.393), a diferencia del grupo Losartán que presentó 3 variables con diferencias estadísticamente significativas: proteinuria de 24 horas (210.2±31.1 a 157.1±28.5), HbA1c (13.16±12.5 a 6.728±0.70) y el efecto antiproteinúrico (15.79±6.142 a 28.82±3.704). No se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre la proteinuria de 24 horas, la HbA1c y el efecto antiproteinúrico, entre ambos tratamientos. Se realizó el cálculo del Odds Ratio con intervalo de confianza del 95%. Los pacientes tratados con Losartán presentaron 1.34 veces más efectividad de tratamiento antiproteinúrico que con Enalapril (OR=1.34 IC95% [0.29-6.18]). Se evidenció una elevada tasa de adherencia al tratamiento antiproteinúrico en ambos grupos de estudio. Concluye que Enalapril y Losartán fueron efectivos como tratamiento antiproteinúrico en 57.14% y 64.29% de 14 pacientes diabéticos tipo 2 con nefropatía diabética, respectivamente. No existieron diferencias significativas entre la efectividad del tratamiento antiproteinúrico con enalapril o losartán, siendo ambos medicamentos una excelente alternativa terapéutica para los pacientes diabéticos tipo 2 con nefropatía diabética en el servicio de Nefrología del Hospital Nacional PNP Luis N. Sáenz. / Tesis

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-09-25T11:33:13Z No. of bitstreams: 1 475172 - Texto Completo.pdf: 1033533 bytes, checksum: 3695eeb1d157f2c6ed87073d37aa8b1e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-09-25T11:33:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 475172 - Texto Completo.pdf: 1033533 bytes, checksum: 3695eeb1d157f2c6ed87073d37aa8b1e (MD5) Previous issue date: 2015-07-10 / Tuberculosis (TB) caused predominantly by Mycobacterium tuberculosis is an infectious disease responsible for a significantly number of deaths worldwide. The first line TB drugs that are currently used, and others available, present several problems, such as duration and complexity of treatment, and adverse effects, factors that decrease the patient adherence to treatment regimen. These problems increase the number of cases of drug resistant TB. The pentacyano(isoniazid)ferrate(II) (IQG-607) compound is an inorganic complex designed to treat INH-resistant strains of M. tuberculosis containing mutations in catalase-peroxidase gene, katG. The compound appears to be a promising anti-TB drug candidate according to previous studies that demonstrated its effectiveness both in vitro and in vivo. However, the difficulties encountered in the development of an analytical method for detection and quantification of the compound, due to its chemical properties, were impeding further studies, such as the pharmacokinetic studies. In this context, the present study describes two analytical methods for the detection of IQG-607 for the first time. The voltammetric method was shown to be a powerful analytical tool for quantification of IQG-607 and may be used to monitoring the stability and quality control. The proposed method, together with enzymatic inhibition assay, shown that the IQG-607 is stable for at least 1week at 4 ?C. The detection of IQG-607 by high performance liquid chromatography (HPLC) was also described, and we were able to observe the retention of the compound on the stationary phase of a chromatography column for the first time in this work. In addition, the analysis of IQG-607 in mouse plasma by HPLC was also demonstrated. Therefore, this conventional method will be optimized and validated to conduct pharmacokinetics studies. / A tuberculose (TB) causada predominantemente por Mycobacterium tuberculosis ? uma doen?a infecciosa respons?vel por um n?mero consider?vel de mortes em todo o mundo. Os medicamentos utilizados no tratamento de primeira linha atual, e os demais dispon?veis, apresentam diversos problemas, como a dura??o, complexidade, e efeitos adversos, dificultando a ades?o dos pacientes ao regime terap?utico. Isto favorece o aumento do n?mero de casos de TB resistente a medicamentos. O pentaciano(isoniazida)ferrato(II) (IQG-607) ? um composto proposto para agir contra casos de TB resistentes ? INH devido a infec??o com cepas que possuem muta??es no gene katG. O composto demonstrou ser um promissor agente anti-TB em estudos pr?vios, e a sua efic?cia in vitro e in vivo foi comprovada. No entanto, as dificuldades encontradas no desenvolvimento de um m?todo anal?tico para a detec??o e quantifica??o do composto devido as suas caracter?sticas qu?micas estavam impedindo a realiza??o de outros estudos, e dentre eles, a determina??o de par?metros farmacocin?ticos. Tendo isto em vista, o presente trabalho descreve, pela primeira vez, dois m?todos anal?ticos para detec??o de IQG-607. O m?todo voltam?trico mostrou potencialidade na quantifica??o do composto, podendo ser utilizado para monitorar a estabilidade e em controle de qualidade. Observamos, por meio deste m?todo, juntamente com ensaios de inibi??o enzim?tica, que o IQG-607 ? est?vel em solu??o por at? 1 semana se for mantido a 4?C. A detec??o do IQG-607 por cromatografia l?quida de alta efici?ncia (CLAE) tamb?m foi demonstrada, e, pela primeira vez, observamos a intera??o do composto em coluna cromatogr?fica. Ainda, por CLAE, demonstramos a detec??o do IQG-607 no plasma de camundongos, e por ser um m?todo convencional, ser? otimizado e validado para a realiza??o de futuros estudos de farmacocin?tica.

Introdução: nas quatro últimas décadas, os medicamentos psicotrópicos assumiram uma significativa importância na vida de milhões de pessoas. Os custos diretos e indiretos associados aos psicotrópicos são frequentemente desconhecidos. Aspectos econômicos dos psicotrópicos foram estudados em outros países, mas essas informações ainda são escassas no Brasil. Uma fonte de dados para estudos sobre despesas familiares e gastos em saúde é a Pesquisa de Orçamentos Familiares. Objetivos: desenhar o perfil de brasileiros que adquirem medicamentos psicotrópicos, bem como, avaliar o gasto com esses medicamentos e o seu impacto no orçamento familiar brasileiro nos últimos anos. Métodos: estudo transversal, onde os dados utilizados são provenientes da Pesquisa de Orçamentos Familiares de 2002-2003 e de 2008-2009, envolvendo entrevistas de uma amostra complexa, composta por 48.470 domicílios pesquisados em 2003, 128.300 pessoas e 55.970 domicílios visitados em 2009. Modelos de regressão multivariáveis de Poisson com variância robusta foram construídos através do SAS/SUDAAN 10.0.1. Todos os rendimentos e despesas foram convertidos para valores mensais e corrigidos para a inflação do período. Resultados: a prevalência de aquisição de psicotrópicos pela população brasileira em 2008-2009 foi de 5,2% (IC95%=5,0-5,5), resultando em um gasto anual de R$507 milhões. Essa aquisição foi mais frequente em mulheres, indivíduos brancos, de idades mais avançadas, que não vivem com o cônjuge, com grau mais 9 elevado de instrução e de maior renda. Indivíduos que gastaram com psicotrópicos apresentaram despesas maiores com plano de saúde (RP=1,40, IC95%: 1,30-1,50) e consultas médicas (RP=2,51, IC95%: 2,32-2,72). A média mensal de despesas com psicotrópicos, por domicílio, aumentou de R$ 54,38 em 2003 para R$ 78,73 em 2009, com os valores já corrigidos pela inflação. Entre os domicílios que não gastaram com psicotrópicos, a renda média mensal per capita foi de R$1.026,73 e os gastos mensais per capita foram de, em média, R$73,92 com saúde, R$130,17 com alimentação e R$12,77 com lazer. Entre os domicílios que adquiriram psicotrópicos, a renda média mensal per capita foi de R$1.154,40 e, suas despesas mensais médias, per capita, de R$210,38 com saúde, R$162,08 com alimentação e R$15,45 com lazer. Conclusões: houve um aumento acima da inflação nos gastos com medicamentos psicotrópicos entre os anos avaliados. A aquisição desses medicamentos está relacionada a famílias de níveis socioeconômicos mais elevados. As diferenças encontradas podem representar diferentes níveis tanto de acesso aos serviços médicos de diagnóstico e tratamento quanto aos próprios medicamentos. O orçamento das famílias brasileiras não parece mostrar remanejamento de recursos em função da compra de psicotrópicos. Se a mudança epidemiológica, em sua primeira etapa, representou a transição das doenças infecciosas para as doenças crônicas não transmissíveis, o quadro que pode representar o futuro seriam as doenças neurodegenerativas, mantidas as tendências de aumento da expectativa de vida. / Introduction: over the past four decades the use of psychotropic drugs increased its relevancy to the lives of millions of people. The direct and indirect costs associated to psychotropics are usually unknown. Economic aspects of psychotropic medicine have been studied in other countries, although such information is still scarce in Brazil. A data source for studies about household expenditure and health care costs is the Survey on Household Budgets. Objectives: to draw a profile of Brazilian people that acquire psychotropic drugs, as well as evaluate spends with these medicine and its impacts on the Brazilian household budget on the recent years. Methods: a cross-sectional study, with data used are from the Survey on Household Budgets from 2002-2003 and from 2008-2009, which involved interviews of a complex sample made of 48,470 households on 2003, 128,300 people and 55.970 homes in 2009. Poisson multilevel regression models with robust variance were made by SAS/SUDAAN 10.0.1. All income and spends were adjusted to a monthly basis and indexed by inflation. Results: the prevalence of psychotropics acquisition in the Brazilian population in 2008-2009 was of 5.2% (CI95%=5.0-5.5), resulting in an annual expenditure of R$507 millions. The use of psychotropic drugs was more frequent among women, white people, older people, do not co-habit with a spouse or partner, more schooled and wealthier. Individuals that spent with psycotropics had more 11 spends with health insurance (PR=1.40, CI95%: 1.30-1.50) and medical consults (PR=2.51, CI95%: 2.32-2.72). The average monthly spends with psychotropics per household increased from R$54.38 in 2003 to R$78.73 in 2009, with values indexed by inflation. Among the households that did not purchase psychotropics, the average monthly per capita income was of R$1,026.73 and the monthly per capita spends were, in average, of R$73.92 with health care, R$103.17 with food and R$12.77 with leisure. Among the household that presented expenditure with psychotropics, the average monthly per capita income was of R$1,154.40 and its average monthly per capita spends were of R$210.38 with health care, R$162.087 with food and R$15.45 with leisure. Conclusion: there was an above inflation increase in the psychotropic drugs spends between the evaluated years. The psychotropics acquisition relates to higher socio-economic leveled families. The differences that were found may represent different levels of access to medical diagnose and treatment and to medication. The Brazilian household budgets do not seem to re-adequate resources to meet the purchase of psychotropics. If the epidemiologic change, at its first stage, represented the transition from infectious diseases to non-transmissive chronic illnesses. the picture that can represent the future would be the neurodegenerative diseases, if the trend of increasing life expectancy is kept.

O presente trabalho objetiva o desenvolvimento de uma formulação racional e justificável, bem como o estudo de uma tecnologia adequada para a preparação da Cefalexina monoidratada em Suspensão oral. Objetiva, ainda, a avaliação da biodisponibilidade, toxicidade, estabilidade físico-química e determinação do tempo de vida ail do principio ativo na forma farmaceutica proposta.

Bactérias Gram-negativas não fermentadoras são frequentemente encontradas em águas superficiais, sendo muitas vezes carregadoras de múltipla resistência. O presente trabalho teve como objetivo principal analisar a participação de Pseudomonas sp. e Acinetobacter sp. na manutenção da resistência a antimicrobianos em quatro pontos na laguna de Tramandaí e se a presença deles poderia contribuir para a sua permanência. As amostras de água superficial foram coletadas em quatro pontos de coleta na laguna e submetidas a tratamento com os antimicrobianos: ácido nalidíxico, ceftazidima, imipenem e tetraciclina na concentração de 20mg/L. Em cada ponto de coleta uma das alíquotas não foi suplementada com os mesmos sendo utilizada como controle. Os isolados de Pseudomonas sp. foram identificados por provas bioquímicas e MALDI-TOF MS, enquanto que os isolados de Acinetobacter sp. somente por provas bioquímicas. O perfil de suscetibilidade de ambos foi avaliado pela técnica de disco-difusão e a produção de ESBL pela técnica de disco combinado. Os pontos 3 e 4 foram os que exibiram maior número de isolados resistentes. Os maiores percentuais de resistência estiveram associados às amostras submetidas ao tratamento com antimicrobianos. Em todos os pontos de coleta foram encontrados isolados de P. aeruginosa e Acinetobacter sp. multirresistentes. Ambas amostras (com e sem tratamento) exibiram diferentes padrões de resistência nos diferentes pontos de coleta e tanto isolados de P. aeruginosa como de Acinetobacter sp. exibiram isolados produtores de ESBL. A presença de P. aeruginosa e Acinetobacter sp. multirresistentes na Laguna de Tramandaí atenta para o risco de disseminação de resistência neste ambiente e que o mesmo pode estar atuando como reservatório de resistência. / Non-fermenting Gram-negative bacteria are often found in surface water, and are often carriers of multiple resistance to antimicrobials. The present work had as main objective to analyze the role of Pseudomonas sp. and Acinetobacter sp. in maintaining antimicrobial resistance at four points in the Tramandaí lagoon. The surface water samples were collected at four sampling points in the lagoon and treated with the antimicrobials: nalidixic acid, ceftazidime, imipenem and tetracycline at a concentration of 20mg/L. At each collection point, one of the aliquots was not supplemented with the antimicrobial and were used as the control for the treatment. The isolates of Pseudomonas sp. were identified by biochemical tests and MALDITOF MS, whereas the isolates of Acinetobacter sp. were identified only by biochemical tests. The susceptibility profile of both was evaluated by the disc diffusion method and the ESBL production by the combined disk method. Sampling points 3 and 4 showed the highest number of resistant isolates. The highest percentages of resistance were associated with the samples that were submitted to antimicrobial treatment. In all sampling points, multiresistant P. aeruginosa and Acinetobacter were isolated. Both samples (with and without treatment) showed different resistance patterns within the sampling points. P. aeruginosa and Acinetobacter sp. isolates exhibited ESBL producers. The presence of multiresistant P. aeruginosa and Acinetobacter sp. in the Tramandaí Lagoon attempted to the risk of spreading resistance in the aquatic environment, since it can act as a reservoir of resistance.

Apesar da importância ambiental dos morcegos em ambientes urbanos, poucos estudos relatam a presença de enterococos nestes animais. Este estudo teve como objetivos: a) isolar, identificar as espécies e detectar a presença de genes de resistência e fatores de virulência em enterococos isolados de fezes de morcegos Tadarida brasiliensis; e b) avaliar a distribuição das espécies de enterococos por qPCR e dos genes de resistência por PCR nas amostras de fezes de morcegos T. brasiliensis. Quatro pools de fezes de morcegos foram coletados em três municípios do Estado do Rio Grande do Sul e foram analisados por metodologias utilizando técnicas de microbiologia e moleculares. A partir das análises dos enterococos isolados das fezes, foram identificadas 4 espécies, sendo Enterococcus faecalis a mais frequente (83,6%), seguida de E. casseliflavus (13,7%), E. gallinarum (1,35%) e E. mundtii (1,35%). As cepas apresentaram perfil de resistência para rifampicina, eritromicina, norfloxacina, ciprofloxacina e tetraciclina. Dentre as 32 cepas resistentes à eritromicina, 28 apresentaram o gene ermC. Das 13 cepas resistentes à ciprofloxacina e norfloxacina nenhuma foi positiva para o gene gyrA. A única cepa resistente à tetraciclina apresentou o gene tetM. Os genes vanC1 e vanC2-3 foram observados em cepas de E. faecalis Quanto à presença dos genes de virulência, maior incidência foi observada para os genes gelE (97,3%) e ace (91,8%), seguido por agg (49,3%), cylA (5,5%) e esp (2,7%). A análise por qPCR permitiu identificar as espécies E. casseliflavus, E. faecalis, E. faecium, E. gallinarum e E. hirae nas fezes dos morcegos. Os genes de resistência ermC, gyrA, vanA, vanB, vanC1 e vanC2-3 foram detectados por PCR. Em conclusão, diferentes espécies de enterococos fazem parte da microbiota do trato gastrointestinal de morcegos T.brasiliensis e a presença de elementos de resistência e virulência podem estar relacionadas a fatores antropogênicos ou ter origem no resistoma ambiental. / Despite the environmental importance of bats in urban environments, few studies have reported the presence of enterococci in these animals. This study aimed: a) isolate, to identify the species and to detect the presence of resistance genes and virulence factors in enterococci isolated from feces of Tadarida brasiliensis bats; b) to evaluate the distribution of the enterococci species by qPCR and the resistance genes by PCR in the faecal samples of T. brasiliensis bats. Four pools of bats feces were collected in three places of the Rio Grande do Sul State and analyzed using microbiology and molecular methodologies. From the analysis of enterococci isolated from feces, 4 species were identified, being Enterococcus faecalis the most frequent (83.6%), followed by E. casseliflavus (13.7%), E. gallinarum (1.35%) and E. mundtii (1.35%). The strains showed a resistance profile to rifampicin, erythromycin, norfloxacin, ciprofloxacin and tetracycline. Of the 32 strains resistant to erythromycin, 28 presented the ermC gene. Of the 13 strains resistant to ciprofloxacin and norfloxacin, none were positive for the gyrA gene. The single tetracycline resistant strain showed the tetM gene. The vanC1 and vanC2-3 genes were observed in E. faecalis strains. As regards the presence of virulence genes, higher incidence was observed for to gelE (97.3%) and ace (91.8%) genes, followed by agg (49.3%), cylA (5.5%) and esp (2.7%). The qPCR analysis allowed to identify the E. casseliflavus, E. faecalis, E. faecium, E. gallinarum and E. hirae species in the bats feces. The ermC, gyrA, vanA, vanB, vanC1 and vanC2-3 resistance genes were detected by PCR. In conclusion, different species of enterococci are part of the gastrointestinal tract microbiota of T. brasiliensis bats and the presence of resistance and virulence elements may be related to anthropogenic factors or originate from the environmental resistome.

A resistência antimicrobiana e fatores de virulência são importantes mecanismos de sobrevivência das bactérias, através deles elas se tornaram capazes de escapar da ação das adversidades do ambiente. O presente trabalho teve como objetivo principal analisar os fatores de virulência e genes de resistência de isolados de Klebsiella sp. e sua participação na manutenção de populações bacterianas resistentes em pontos na Laguna de Tramandaí. As amostragens foram realizadas em agosto de 2014 e janeiro de 2015 em quatro pontos distintos com diferentes graus de impacto ambiental. Foram analisados 272 isolados bacterianos das amostras de água da laguna de Tramandaí. Estes isolados foram submetidos a testes bioquímicos e microbiológicos para identificação e foram encontrados 37 isolados de Klebsiella sp. Estes isolados foram submetidos a testes de susceptibilidade antimicrobiana por disco-difusão, análise fenotípica de fatores de virulência e genes de resistência e pesquisa de genes de resistência (blaCTX-M, blaSHV, blaTEM) através de PCR e similaridade através do ERIC-PCR. Através da análise por MALDI-TOF, os 37 isolados foram identificados como quatro K. oxytoca, seis K. pneumoniae e 27 K. variicola. Todos os isolados foram suscetíveis a imipenem, ertapenem, piperacilina/tazobactam e polimixina B Ampicilina e amoxacilina foram os antimicrobianos com maior índice de resistência, o gene blashv foi o mais encontrado dentre os genes pesquisados. Todos os isolados apresentaram cápsula polissacarídica, 56,7% dos isolados apresentaram fímbrias do tipo 1, 56,7% demonstraram serem capazes de produzir biofilmes, 78,4% foram capazes de inativar os fatores bactericidas do soro e 81,1% sintetizaram sideróforos. A análise por ERIC-PCR e MALDI-TOF geraram dendrogramas de alta heterogeneidade e baixos índices de similaridade, indicando que diferentes populações de Klebsiella estão se mantendo naquele ambiente. Ficou evidenciado neste estudo, através dos isolados encontrados e suas características genéticas e fenotípicas de resistência bacteriana, que eles podem estar contribuindo para a manutenção e disseminação da resistência aos antimicrobianos no ambiente. / Antimicrobial resistance and virulence factors are important mechanisms for the survival of bacteria, through which they have become capable of escaping from the adversities of the environment. The present work had as main objective to analyze the virulence factors and resistance genes of Klebsiella sp. And its participation in the maintenance of resistant bacterial populations in points in Tramandaí Lagoon. Samplings were carried out in August 2014 and January 2015 at four different points with different degrees of environmental impact. A total of 272 bacterial isolates from the Tramandaí lagoon water samples were analyzed. These isolates were submitted to biochemical and microbiological tests for identification and 37 isolates of Klebsiella sp. These isolates were submitted to antimicrobial susceptibility tests by disc-diffusion, phenotypic analysis of virulence factors and and resistance gene (blaCTX-M, blaSHV, blaTEM) search by PCR and similarity through ERIC-PCR. Through the use of MALDI-TOF, the 37 isolates were identified as four of K. oxytoca, six of K. pneumoniae and 27 of K. variicola. All the isolates were suscetible to imipenem, ertapenem, piperacilin/tazobactam e polimixin B Ampicillin and amoxicillin were the most resistant antimicrobials, the blaSHV gene was the most found among the genes studied. All isolates presented a polysaccharide capsule, 56.7% of the isolates had type 1 fimbriae, 56.7% were able to produce biofilms, 78.4% were able to inactivate serum bactericidal factors and 81.1% synthesized siderophores. Analysis by ERIC-PCR and MALDI-TOF generated dendrograms with high diversity and low similarity indexes, indicating that different populations of Klebsiella are remaining in that environment. It was evidenced in this study, through the isolates found and their genetic and phenotypic characteristics of bacterial resistance that they may be contributing to the maintenance and dissemination of antimicrobial resistance.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:30:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 452974.pdf: 3097525 bytes, checksum: fb30a932f49f0911b5cf750d9aaf97e9 (MD5) Previous issue date: 2013-11-01 / The aims of this study were: (a) establish, through a review of the literature, the state of the art regarding the use of photodynamic therapy for the disinfection of the root canal system as well as future prospects, (b) evaluate the periapical tissues response on rats teeth with apical periodontitis, to photodynamic therapy as an adjunct to endodontic treatment through histological, microbiological and radiological analysis. Therefore, 32 left lower rats molars were exposed to the oral environment for 21 days to induce apical periodontitis. The animals were randomly divided into four groups according to proposed treatment: endodontic treatment in one session (G1); endodontic treatment in two sessions with with calcium hydroxide [Ca(OH)2] dressing for 14 days (G2) ; endodontic treatment in one session associated with photodynamic therapy (PDT) (G3) and endodontic treatment in two sessions with Ca(OH)2 for 14 days, associated with PDT (G4). After 28 days, the animals were killed and the jaws prepared for evaluation. For microbiological analysis samples were collected before and after each treatment step. Quantification of CFU/mL were analyzed using linear mixed models, showing significant microbial reduction after all proposed treatments, compared to the initial collection, although no significant difference between groups were found. The radiographic results were submitted to ANOVA, showing no statistically significant difference between groups. For histological data, Kruskal-Wallis test were used, followed by Mann-Whitney U test for those cases where differences were detected. These differences were found in neutrophils and eosinophils populations in groups where PDT was used and macrophages and giant cells when Ca(OH)2 was used, with or without PDT. These data seem to point to a better repair quality when PDT is applied, caused by laser biomodulator effect in periapical tissues. The association of PDT with an interappointment dressing with Ca(OH)2 produces better conditions to stimulate repair, being more research needed to determine this relationship. / Os objetivos deste estudo foram: (a) estabelecer, atrav?s de revis?o da literatura, o estado da arte na aplicabilidade da terapia fotodin?mica para a desinfec??o do sistema de canais radiculares bem como as perspectivas futuras; (b) avaliar a resposta dos tecidos periapicais de dentes de ratos, portadores de periodontite apical, ? terapia fotodin?mica como coadjuvante ao tratamento endod?ntico, atrav?s de an?lise histol?gica, microbiol?gica e radiogr?fica. Para tanto, 32 molares inferiores esquerdos de ratos foram expostos ao meio bucal por 21 dias, para indu??o da periodontite apical. Ap?s, foram divididos aleatoriamente em quatro grupos conforme o tratamento proposto: tratamento endod?ntico em sess?o ?nica (G1); tratamento endod?ntico em duas sess?es com medica??o intracanal ? base de hidr?xido de c?lcio [Ca(OH)2] por 14 dias (G2); tratamento endod?ntico em sess?o ?nica, associado ? terapia fotodin?mica (PDT) (G3) e tratamento endod?ntico em duas sess?es com Ca(OH)2 por 14 dias, associado ? PDT (G4). Ap?s 28 dias, os animais foram mortos e as mand?bulas preparadas para avalia??o. Para avalia??o microbiol?gica foram realizadas coletas antes e ap?s cada etapa de tratamento. As quantifica??es de UFC/mL foram analisadas atrav?s de modelos mistos lineares, mostrando significativa redu??o microbiana ap?s todos os tratamentos propostos, quando comparados ? coleta inicial, n?o havendo por?m diferen?a significativa entre os grupos. Os resultados radiogr?ficos foram submetidos a ANOVA, n?o havendo diferen?a estatisticamente significativas entre os grupos. Para os dados histol?gicos, foi utilizado o teste de Kruskall-Wallis seguido por Mann-Whitney U para aqueles casos onde diferen?as foram detectadas. Estas diferen?as foram encontradas nas popula??es de neutr?filos e eosin?filos nos grupos onde a PDT foi utilizada e para macr?fagos e c?lulas gigantes quando o Ca(OH)2 foi utilizado, independentemente da PDT. Os dados parecem apontar para uma melhor condi??o de reparo quando da utiliza??o da PDT, pelo efeito biomodulador do laser nos tecidos periapicais. A associa??o da PDT com MIC com Ca(OH)2 parece propiciar os melhores resultados, sendo necess?rios mais estudos para determinar esta rela??o.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 450257.pdf: 1851494 bytes, checksum: 45b94fe1b9cb73399670961f3d6d6798 (MD5) Previous issue date: 2013-03-25 / Human tuberculosis (TB), an illness that results from Mycobacterium tuberculosis infection, remains a major health problem worldwide, accounting for an estimated 8.7 million new cases globally in 2011. Problems related to treatment of M. tuberculosis infection are related to its ability to persist latently in host tissues, getting protection against drug treatment and creating a reservoir of disease. Addictionaly, the emergence of multi, extensively and totally drug-resistant strains, TB-HIV co-infection and the complexity of the treatment currently used, underline the need of new antitubercular drugs, with novel mechanisms of action. The enzyme adenylosuccinate lyase (ASL) is involved in both de novo and salvage pathways of purine biosynthesis. Here we describe M. tuberculosis ASL (MtASL) cloning and expression in Escherichia coli. N-terminal amino acid sequencing and electrospray ionization mass spectrometry analyses confirmed the identity of homogeneous MtASL. Size exclusion chromatography showed that the protein is a homotetramer in solution. Steady-state kinetics revealed that MtASL exhibits hyperbolic kinetics and confirmed that the recombinant enzyme indeed catalyses the cleavage of S-AMP in AMP and fumarate. The pH-rate profile showed that MtASL follows an overall acid-basic mechanism of catalysis and these studies, combined with multiple sequence alignment analysis led us to propose what amino acid residues are involved in the MtASL chemical reaction. In addition, product inhibition studies and isothermal titration calorimetry of binding products allowed us to propose the MtASL kinetic mechanism. The results here reported could lead to the identification of nucleoside analogs that potently inhibit M. tuberculosis viability, with minor damages to the human host. / A tuberculose humana (TB) ? uma doen?a infectocontagiosa provocada principalmente pelo Mycobacterium tuberculosis e permanece sendo um importante problema mundial de sa?de. Estima-se que 8,7 milh?es de novos casos tenham ocorrido em 2011. Problemas relacionados ao tratamento da infec??o ocorrem devido ? sua habilidade de persistir de forma latente no hospedeiro criando um reservat?rio da doen?a. Adicionalmente, a emerg?ncia de cepas multi, extensivamente e totalmente resistentes, a coinfec??o TB-HIV e a complexidade do tratamento utilizado atualmente, alertam para a necessidade de novos medicamentos, que possuam novos mecanismos de a??o. A enzima adenilossuccinato liase (ASL) est? envolvida em ambas as vias de bioss?ntese de purinas. Neste trabalho, n?s descrevemos a amplifica??o, clonagem da ASL de M. tuberculosis (MtASL) e express?o em Escherichia coli. O sequenciamento N-terminal juntamente com an?lises por espectrometria de massas confirmaram a identidade da MtASL homog?nea. Foi demonstrado atrav?s de cromatografia de exclus?o por tamanho que a prote?na ? um homotetr?mero em solu??o. Ensaios de cin?tica no estado estacion?rio revelaram que a MtASL exibe um modelo de cin?tica hiperb?lica e que catalisa a clivagem de S-AMP a AMP e fumarato. Estudos de perfil de pH demonstraram que a MtASL realiza um mecanismo catal?tico ?cido-b?sico e, tais estudos, combinados ao alinhamento m?ltiplo de sequ?ncias, permitiram propor os res?duos de amino?cidos envolvidos na rea??o. Adicionalmente, estudos de inibi??o pelos produtos somados a estudos de calorimetria de titula??o isot?rmica da liga??o dos mesmos, permitiram propor o mecanismo cin?tico da MtASL. Os resultados deste trabalho podem auxiliar na posterior identifica??o de an?logos de nucleot?deos que sejam capazes de inibir a viabilidade do M. tuberculosis, com poucos danos ao hospedeiro humano.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 452946.pdf: 4295769 bytes, checksum: 7a8634a037c064cad84539c03a441c4a (MD5) Previous issue date: 2013-11-26 / Human thymidine phosphorylase (hTP) also known as platelet-derived endothelial cell growth factor (PD-ECGF) or gliostatin, has an important role in nucleotide metabolism. hTP is a molecular target for anticancer drug development since it is overexpressed in certain solid tumours, and its catalityc activity has been shown to be essencial to promote angiogenesis. This work describes amplification, cloning, and recombinant expression in E. coli, purification to homogeinity of both precursor and mature protein hTP. Mass spectrometry analysis confirmed the identity of homogeneous hTP and size exclusion chromatography showed that hTP proteins are a dimer in solution. Kinetic studies allowed the determination of apparent and true kinetic constants for forward reaction, and showed that enzymes displayed substrate inhibition for thymidine. Initial velocity and isothermal titration calorimetry (ITC) studies suggested that hTP catalysis follows a rapid-equilibrium random bi-bi kinetic mechanism. Thermodynamics constants and discrimination profile allowed natural enzyme s substrates/products binding patterns identification. Additionally, these studies showed differences in the kinetic constants and the thermodynamic parameters between the precursor and the mature protein and these differences were revealed by structural analysis using molecular modeling. The pH-rate profiles suggested that maximal enzyme activity was achieved at low pH values, and functional groups with a pK values of 5.1 5.2 and 9.0 9.2 are involved in thymidine binding, and groups with pK value of 6.1 6.2 and 7.8 8.6 are involved in phosphate binding. The enzyme characterization provides additional data that may be useful for the rational design of novel inhibitors hTP. Chemical compounds designed and synthesized as potential inhibitors against hTP activity were active in both forms of the enzyme, whereas the compound 5g showed the best inhibitory potential. The compound 5g was characterized as noncompetitive inhibitor towards hTP substrates thymidine and phosphate. The noncompetitive inhibiton mechanism points to the existence of an allosteric binding site at hTP, different from the substrate binding sites. This allosteric site could be considered an important molecular target for the development of potent and selective hTP inhibitors. / A Timidina fosforilase humana (hTP), tamb?m conhecida como PD-ECGF e gliostatina, ? uma enzima importante no metabolismo de nucleot?deos. A hTP ? um alvo molecular para o desenho de inibidores enzim?ticos com poss?vel uso na terapia do c?ncer, visto que essa enzima encontra-se superexpressa em alguns tipos de tumores s?lidos e sua atividade catal?tica ? essencial para promo??o da angiog?nse. Esta tese descreve a amplifica??o, clonagem, express?o heter?loga em E. coli, purifica??o e caracteriza??o bioqu?mica do precursor e da prote?na madura hTP. An?lises de espectrometria de massa confirmaram a identidade das prote?nas recombinantes e ensaios de cromatografia de exclus?o por tamanho revelaram que ambas as enzimas encontram-se como d?meros em solu??o. Estudos cin?ticos permitiram a determina??o das constantes cin?ticas aparentes e verdadeiras para a rea??o direta e mostraram que as enzimas apresentam inibi??o pelo substrato tidimina. Estudos espectofotom?tricos de velocidade inicial e estudos de liga??o por microcalorimetria de titutala??o isot?rmica (ITC) sugerem que a cat?lise enzim?tica segue um mecanismo cin?tico bi-bi aleat?rio de r?pido equil?brio. As constantes termodin?micas e o perfil de discrimina??o termodin?mica permitiram a identifica??o dos modos de intera??o dos substratos/produtos naturais das enzimas com seus s?tios de liga??o. Al?m disto, esses estudos revelaram diferen?as nas constantes cin?ticas e nos par?metros termodin?micos entre o precursor e a prote?na madura e tais diferen?as foram evidenciadas por meio da an?lise estrutural de ambas as enzimas. O perfil de pH mostrou que a atividade enzim?tica m?xima foi obtida em valores de pH baixos, e que grupamentos funcionais com valores de pK de 5,1 5,2 e 9,0 9,2 est?o envolvidos na liga??o ? timidina e grupamentos com valores de pK de 6,1 6,2 e 7,8 8,6 est?o envolvidos na liga??o ao fosfato. Os resultados da caracteriza??o da enzima fornecem dados adicionais que podem ser ?teis para o desenho racional de novos inibidores da hTP. Os compostos qu?micos planejados e sintetizados como poss?veis inibidores da atividade da hTP foram ativos em ambas as formas da enzima, sendo que o composto 5g apresentou o melhor potencial inibit?rio. O composto 5g foi caracterizado como um inibidor n?o competitivo em rela??o aos substratos naturais timidina e fosfato. O mecanismo de inibi??o n?o competitiva sugere a exist?ncia de um sit?o de liga??o alost?rico na hTP, diferente dos s?tios de liga??o aos substratos, podendo ser considerado um alvo molecular importante para a busca de inibidores potentes e seletivos para hTP.