LIMA, José Vinícius Leite. Populações microbianas e antagonismo de actinobactérias sobre rizóbios em solos do semiárido. 2017. 81 f. Tese (Doutorado em Ecologia e Recursos Naturais)-Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by ELAINE PEREIRA (ellainec.pereira@gmail.com) on 2017-09-19T17:31:18Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_jvllima.pdf: 1448998 bytes, checksum: 2c2b1578a9568ad79222074a03a8f266 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-09-22T17:59:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_jvllima.pdf: 1448998 bytes, checksum: 2c2b1578a9568ad79222074a03a8f266 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-22T17:59:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_jvllima.pdf: 1448998 bytes, checksum: 2c2b1578a9568ad79222074a03a8f266 (MD5) Previous issue date: 2017 / The structure of the communities living in the soil is driven by various mechanisms and the ecological interactions established between the living organisms. In the same way, the components of the microbiota present harmonic or non-harmonic relationships, for example, between actinobacteria and rhizobia. Interspecific competition among microorganisms occurs when many species require the same resources, and the negative effect on the availability of common resources adversely affects the others. In this context, the objective of this study was to quantify the microbial population in the soil and leaf litter in the vegetation of the caatinga and carrasco in the Brazilian semiarid region (Chapter I) and to characterize and evaluate the antagonistic effect of actinobacteria on rhizobia (Chapter II). The soil samples were collected at the Ecological Station of Aiuaba (Aiuaba, Ceará), characterized by the vegetation of caatinga and carrasco. In chapter I, the population density of the microbial community was evaluated by sampling of soil and litter in the vegetation of caatinga and carrasco at the Aiuaba Ecological Station. The microorganisms were isolated from the soil samples in flasks containing 0.8% saline solution and cultured, after consecutive dilutions, in culturing media specific to cultivable populations of total bacteria, actinobacteria, cellulolytic bacteria, phosphate solubilizing bacteria and fungi. Population estimation was then performed by standard counting on plates and the values were expressed in CFU.g-1. The microbial populations from the soil and leaf litter differed each other quantitatively and in the two vegetations, but in general were greater in the leaf litter. Thus, the knowledge of the population structure of the microbial community can be extended to the semiarid soils. In Chapter II, the strains of actinobacteria isolated in the first study were characterized and tested for “in vitro” inhibitory effect on strains of rhizobia also isolated from semiarid soils. The actinobacteria were purified in their respective culture medium (CDA medium). The strains were characterized for their color and morphology of the colonies, tolerance to pH levels, production of melanin and use of carbon sources. The “in vitro” antagonism of actinobacteria on rhizobia was evaluated in Petri dish containing yeast mannitol agar (YMA) medium by the formation of inhibition zone. The actinobacteria and rhizobia that had greater antagonistic effect or did not presented inhibition zones were molecularly identified. Sixty strains were identified in seven genera of actinobacteria in which had tolerance to variations in pH, low melanin production and generalist use of carbon sources. It was also observed “in vitro” antagonism of actinobacteria species, standing out the genus Streptomyces, on strains of Rhizobium tropici, Bradyrhizobium yuanmingense and two other rhizobia strains not identified. This is the first work that addresses this ecological interaction between microorganisms of the Brazilian semiarid region and reveals the occurrence of new species related to this negative interaction. Thus, the presence of antagonism among these organisms may lead to “in vivo” studies, contributing to future agricultural and/or ecological uses. / A estrutura das comunidades que vivem no solo é direcionada por vários mecanismos e as interações ecológicas estabelecidas entre os organismos. Da mesma forma, os componentes da microbiota apresentam relações harmônicas ou não entre si, como por exemplo, entre actinobactérias e rizóbios. A competição interespecífica entre os micro-organismos acontece quando muitas espécies procuram pelos mesmos recursos, e o efeito depressor que cada uma tem na disponibilidade dos recursos comuns afeta adversamente os outros. Neste contexto, teve-se como objetivo neste estudo quantificar em região semiárida a população microbiana no solo e serrapilheira nas fisionomias vegetais de caatinga e carrasco (Capítulo I) e caracterizar e avaliar o efeito antagônico de actinobactérias sobre rizóbios do semiárido (Capítulo II). O estudo foi realizado na Estação Ecológica de Aiuaba (Aiuaba, Ceará) caracterizada pelas fisionomias de caatinga e carrasco. No capítulo I, avaliou-se a densidade populacional da comunidade microbiana por meio de coleta de amostras do solo e serrapilheira nas fisionomias vegetais de caatinga e carrasco na Estação Ecológica de Aiuaba. Os micro-organismos foram isolados das amostras em solução salina 0,8% e cultivados, após diluições seriadas, em meios de cultura específicos para populações cultiváveis de bactérias totais, actinobactérias, bactérias celulolíticas, bactérias solubilizadoras de fosfato e fungos. Em seguida foi realizada a contagem das populações pela contagem padrão em placas usando a técnica de espalhamento em superfície, e os valores foram expressos em UFC.g-1. As populações microbianas oriundas do solo e serrapilheira diferiram quantitativamente entre elas e nas duas fisionomias vegetais, mas no geral foram maiores na serrapilheira. Dessa forma, pode-se ampliar o conhecimento da estrutura populacional da comunidade microbiana em solos de clima semiárido. No capítulo II, caracterizaram-se as cepas de actinobactérias isoladas das populações obtidas do primeiro estudo e testou-as para efeito inibidor in vitro sobre estirpes de rizóbios também oriundas de solos semiáridos. As actinobactérias foram purificadas no seu respectivo meio de cultura (meio CDA). As cepas foram caracterizadas quanto a atributos cromogênicos e morfológicos, para tolerância a níveis de pH, na produção de melanina e uso de fontes de carbono. O antagonismo das actinobactérias in vitro sobre rizóbios foi avaliado em meio de cultura ágar manitol levedura (YMA) pela formação de halo de inibição em placa de Petri. Em seguida, as actinobactérias e rizóbios que tiveram maior efeito antagônico ou que não formaram halo inibidor foram caracterizadas molecularmente. Foram obtidas 60 cepas identificados em sete gêneros de actinobactérias que tiveram tolerância a variações de pH, baixa produção de melanina e uso generalista de fontes de carbono. Foi observado antagonismo in vitro com formação de halo inibidor de espécies de actinobactérias, com destaque para o gênero Streptomyces, sobre os rizóbios Rhizobium tropici, Bradyrhizobium yuanmingense e outras duas estirpes não identificadas. Este é o primeiro trabalho que aborda essa relação ecológica em micro-organismos do semiárido e revela a ocorrência de novas espécies relacionados com essa interação negativa. Com isso, confirma-se a presença de antagonismo entre esses organismos que pode direcionar estudos de certificação in vivo, contribuindo para futuros usos agrícolas e/ou ecológicos.

Camila Alencar Moreira. Atividade in vitro de agentes antimicrobianos contra biofilmes de Staphylococcus ssp. de otite canina. 2011. 103 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-06-17T14:04:10Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_camoreira.pdf: 3719314 bytes, checksum: d72587f50967ba4b42036432a799459a (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-06-18T15:37:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_camoreira.pdf: 3719314 bytes, checksum: d72587f50967ba4b42036432a799459a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-18T15:37:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_camoreira.pdf: 3719314 bytes, checksum: d72587f50967ba4b42036432a799459a (MD5) Previous issue date: 2011 / Historically, bacteria have been seen as isolated organisms; however, it is now clear that the vast majority of bacteria exist in complex communities known as biofilms. Bacteria in biofilms are adhered to various surfaces, both abiotic and biotic (teeth, bones, mucosa), often forming a highly dynamic ecosystem, which is structured and organized. An example of infection, which can involve the formation of biofilm is otitis - defined as an acute or chronic inflammation of the ear, which may extend from the external ear canal to the inner ear. Described as the most common disease of the external ear canal in dogs, it has a multifactorial etiology, including fungi and bacteria, especially of the genus Staphylococcus. Bacteria of this genus are commensal to skin and mucous membranes, but can act as opportunistic pathogens in favorable conditions and are often associated with a wide variety of infections in humans and animals with many reports of refractoriness to usual treatments. In biofilm, bacteria can be ten to a hundred times more resistant to antibiotics when compared to the same bacteria in planktonic growth. The struggle to fight infections involving bacterial biofilms is a major challenge of microbiology today, which, in turn, leads to the search for new therapeutic options. Thus, this study aimed to evaluate the in vitro inhibitory effect of six substances – three classic antimicrobial agents ciprofloxacin, chloramphenicol, gentamicin; and three non-classic antimicrobial agents thymol, carvacrol, hydrogen peroxide (H2O2) - against staphylococcal strains from canine otitis in planktonic growth and in biofilm. We analyzed 54 clinical strains isolated from purulent secretion of canine otitis, divided into five species: S. intermedius, S. simulans, S. haemolyticus, S.epidermidis and S. lugdunensis. The 16 strains classified as biofilm producers (11 S. intermedius and five S. simulans), according to result obtained by the Congo red agar test and confirmed by scanning electron microscopy (SEM), were used in broth microdilution assay for determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum biofilm inhibitory concentration (MBIC). With regards to the biofilm-producing strains, the following results were observed: the values for ciprofloxacin were 0,12 ≤MIC≤0,5 mcg/mL (mean 0,28 mcg/mL) and 0,5≤MBIC≤8 mcg/mL (mean 1,79 mcg/mL); for chloramphenicol 2≤MIC≤16 mcg/mL (mean 7,41 mcg/mL) and 8≤MBIC≤32 mcg/mL (mean 20,71 mcg/mL); for gentamicin 0,5≤MIC≤4 mcg/mL (mean 2,09 mcg/mL) and 4≤MBIC≤64 mcg/mL (mean 24,24 mcg/mL); for thymol 32≤MIC≤512 mcg/mL (mean 137,41 mcg/mL) and 256≤MBIC≤2048 mcg/mL (mean 768 mcg/mL); carvacrol 32≤MIC≤512 mcg/mL (mean 128 mcg/mL) and 256≤MBIC≤4096 mcg/mL (mean 993,88 mcg/mL); and for H2O2 for 32≤MIC≤128 mcg/mL (mean 99,76 ppm) and 128≤MBIC≤4096 ppm (mean 1874,82 ppm). The presented data indicates the therapeutic potential of the six antibiotics studied in the treatment of staphylococcal infections associated with biofilm, which warrants further studies to investigate the mechanisms of action of these drugs on biofilms and the design of in vivo experiments to confirm the significance of these findings. / Historicamente, as bactérias foram vistas como organismos que vivem isolados, no entanto, é claro, agora, que a grande maioria de bactérias existe em comunidades complexas, conhecidas como biofilmes. As bactérias em biofilmes se encontram aderidas a superfícies diversas, tanto abióticas como bióticas (dente, osso, mucosa), compondo um ecossistema altamente estruturado, dinâmico e organizado. Um exemplo de infecção que pode envolver a presença formação de biofilme é a otite - definida como inflamação aguda ou crônica da orelha, podendo se estender desde o epitélio do conduto auditivo externo até a orelha interna. Descrita como a doença mais comum do canal auditivo externo em cães, possui uma etiologia multifatorial, que inclui fungos e bactérias, principalmente do gênero Staphylococcus. Bactérias desse gênero são comensais de pele e mucosas, mas podem atuar como patógenos oportunistas em condições propícias e são frequentemente associadas a uma ampla variedade de infecções em seres humanos e animais com vários relatos de refratariedade aos tratamentos usuais. Em um biofilme, as bactérias podem ser dezenas de vezes mais resistentes aos antibióticos, quando comparadas às mesmas bactérias em crescimento planctônico. O combate a infecções envolvendo bactérias em biofilme é um grande desafio da microbiologia mundial, que leva à busca de novas opções terapêuticas. Com efeito, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito inibitório in vitro de seis substâncias – três agentes antimicrobianos clássicos, ciprofloxacina, cloranfenicol, gentamicina; e três agentes antimicrobianos não-clássicos timol, carvacrol, peróxido de hidrogênio (H2O2) – contra cepas estafilocócicas de otite canina em crescimento planctônico e em biofilme. Foram avaliadas 54 cepas clínicas isoladas de secreção purulenta de cães com otite, divididas entre cinco espécies: S. intermedius, S. simulans, S. haemolyticus, S. epidermidis e S. lugdunensis. As 16 cepas classificadas como produtoras de biofilme (11 de S. intermedius e cinco de S. simulans), segundo resultado obtido pelo teste do ágar vermelho Congo e confirmação por microscopia eletrônica de varredura (MEV), foram usadas em ensaios de microdiluição em caldo para determinação de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração inibitória mínima em biofilme (CIMB). Com relação às cepas produtoras de biofilme, foram observados os seguintes resultados: os valores para ciprofloxacina foram 0,12 ≤CIM≤0,5 mcg/mL (média 0,28 mcg/mL) e 0,5≤CIMB≤8 mcg/mL (média 1,79 mcg/mL); para cloranfenicol 2≤CIM≤16 mcg/mL (média 7,41 mcg/mL) e 8≤CIMB≤32 mcg/mL (média 20,71 mcg/mL); para gentamicina 0,5≤CIM≤4 mcg/mL (média 2,09 mcg/mL) e 4≤CIMB≤64 mcg/mL (média 24,24 mcg/mL); para timol 32≤CIM≤512 mcg/mL (média 137,41 mcg/mL) e 256≤CIMB≤2048 mcg/mL (média 768 mcg/mL); carvacrol 32≤CIM≤512 mcg/mL (média 128 mcg/mL) e 256≤CIMB≤4096 mcg/mL (média 993,88 mcg/mL); e para H2O2 32≤CIM≤128 ppm (média 99,76 ppm) e 128≤CIMB≤4096 ppm (média 1874,82 ppm). Os dados obtidos apontam para o potencial terapêutico dos seis antibióticos estudados no tratamento de infecções estafilocócicas associadas a biofilme, sendo necessários novos estudos para investigar os mecanismos de ação dessas drogas sobre o biofilme, bem como o delineamento de experimentos in vivo para confirmar a significância desses achados.

BANDEIRA, Tereza de Jesus Pinheiro Gomes. Ocorrência e perfil de resistência aos antimicrobianos de bactérias isoladas de lavado broncoalveolar de pacientes internados em hospitais de Fortaleza no período de janeiro de 1996 a dezembro de 2001. 2002. 101 f. Dissertação (Mestrado em Saúde Pública) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2002. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-01-09T11:30:37Z No. of bitstreams: 1 2002_dis_tjpgbandeira.pdf: 498204 bytes, checksum: 67001cfec7eb472cdd6f1a0d43c53a79 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-01-09T11:31:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2002_dis_tjpgbandeira.pdf: 498204 bytes, checksum: 67001cfec7eb472cdd6f1a0d43c53a79 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-09T11:31:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2002_dis_tjpgbandeira.pdf: 498204 bytes, checksum: 67001cfec7eb472cdd6f1a0d43c53a79 (MD5) Previous issue date: 2002 / Hospital acquired pneumonia (HAP) is associated with high morbidity and mortality in hospitalized patients. Early, appropriate, and adequate empiric antibiotic therapy can save lives of more than half of all HAP patients and must be based on local data. This study will provide local patterns of antibiotic resistance. Practically all primary therapy of HAP is empiric and information from surveillance program of a given hospital is very important. We studied 588 Bronchoalveolar lavage cultures results from hospitalized patients performed in a private lab during a period of 6 years from 1996 to 2001. As a result of searching patient’s records, two groups were assigned: Group 1, n=147, patients with HAP notified by Nosocomial Infection Commission according to Center for Disease Control and Prevention-CDC; Group 2, n=382, patients with No-Nosocomial Pneumonia. Bacteriologic cultures were done quantitatively with a threshold of >= 105 according to Kahn and Jones (1987), Salataet al. (1987) and Carvalho (1997). Identification and susceptibility tests were performed on VITEK BioMerrieux except for Streptococcus pneumoniae and Stenotrophomonas maltophilia. In patients from Group 1, the five most frequent agents were: P. aeruginosa 56 cases (38,1%), S.aureus 24 (16,3%), K. pneumonia 12 (8,2%), Acinetobacter spp 12 (8,2%) and S. marcescens 10 (6,8%). Group 2 shows: P. aeruginosa 113 (29,6%), Staphylococcus aureus 89 (23,3%), Klebsiella pneumoniae 32 (8,4%), Acinetobacter spp 31 (8,1%) and Candida spp 20 (5,2%). There was no significant difference between resistance profile of isolates when distributed in two groups except S. aureus/Oxacilina (p=0,027), P.aeruginosa/Piperacilina/Tazobactam (p=0,003). The resistance profile in total (n=751) was: P. aeruginosa/Imipenem 40,8%, Acinetobacter spp/Imipenem 10,0%, Acinetobacter spp/AmpicilinaSulbactam 44,3% e S. aureus/Oxacilina 67,3%. The time between admission date and culture request was more than 7days in 60,18% in both groups. Conclusion: a) drug-resistance in lower respiratory tract infection(LRTI) is a serious concern mainly with high prevalence of multi-R gram-negative like P. aeruginosa and Acinetobacter with high resistance for Imipenem and other β- Iactâmic and S. aureus with high resistance to Oxacilina. There was no significant difference between the two groups. Group 2 did not show characteristics of Community-Acquired Pneumoniae (CAP) maybe because of large intervals of time between admission and request of culture, or this kind of patient had either severe CAP with no response to prior multiple antimicrobial therapy or previous hospitalizations or even had recent hospitalization and consequent colonization. Forwards molecular studies should be performed on isolates to provide better characterization of lower respiratory tract pathogens. / Justificativa – A pneumonia hospitalar (PH) é causa de morbidade e mortalidade elevadas em pacientes hospitalizados. A terapia antimicrobiana empírica adequada e precoce pode salvar a vida de mais da metade dos pacientes com PH e deve ser baseada em padrões locais de sensibilidade a antimicrobianos. Praticamente todo tratamento de PH é, inicialmente, empírico. O objetivo deste trabalho é contribuir com o conhecimento do padrão regional de resistência de microrganismos nesse contexto. Metodologia – Foram estudados 588 resultados de culturas de lavado bronco-alveolar (LBA) de pacientes internados em Fortaleza, processados na rotina de um laboratório privado, no período de janeiro de 1996 a dezembro de 2001. Como resultado de pesquisa aos prontuários médicos desses pacientes, dois grupos foram criados: Grupo 1, com n=147, composto por pacientes com pneumonia hospitalar (PH) notificada segundo os critérios do Center for Disease Control and Prevention (CDC); Grupo 2, com n=382, pacientes com pneumonia não-hospitalar (PNH). Utilizou-se a técnica quantitativa de cultivo descrita nos trabalhos de Kahn e Jones (1987), Salata et al. (1987) e Carvalho (1997). Identificação e antibiogramas foram realizados no equipamento VITEK BioMerrieux, exceto para Streptococcus pneumoniae e Stenotrophomonas maltophilia cujos antibiogramas foram realizados pelo método Kirby-Bauer e E-test respectivamente. Resultados – No Grupo 1, os cinco microrganismos mais freqüentes foram Pseudomonas aeruginosa [56 casos (38,1%)], Staphylococcus aureus [24 casos (16,3%)], Klebsiella pneumoniae [12 casos (8,2%)], Acinetobacter spp [12 casos (8,2%)] e Serratia marcescens [10 casos (6,8%)]. No Grupo 2, encontraram-se, mais freqüentemente, Pseudomonas aeruginosa [113 casos (29,6%)], Staphylococcus aureus [89 casos (23,3%)], Klebsiella pneumoniae [32 casos (8,4%)] e Acinetobacter spp [31 casos (8,1%)]. Não foi observada diferença significativa entre os dois grupos para a etiologia. O mesmo ocorreu com o perfil de resistência dos organismos, exceto para o Grupo 1 com S. aureus/oxacilina (p=0,027) e P. aeruginosa/piperacilina/tazobactam (p=0,003). No perfil de resistência do conjunto total de amostras (n=751), destaca-se a de P. aeruginosa ao imipenem, de 40,8%; de Acinetobacter spp ao imipenem, de 10,0%; de Acinetobacter spp a Ampicilina/Sulbactam, de 44,3%; e de S. aureus a oxacilina, de 67,3%. O intervalo de tempo entre a data de internação e a realização da cultura foi maior do que 7 dias em 60,18% dos casos. Conclusão - no trato respiratório, o problema da multiresistência bacteriana é evidente e preocupante com alta prevalência de bacilos gram-negativos multiresistentes, marcadamente P. aeruginosa e Acinetobacter spp., assim como elevada resistência a oxacilina nas amostras de Staphylococcus aureus. O Grupo 2 não possui características de pneumonia comunitária (PC), provavelmente, porque o tempo entre a internação e a realização da cultura foi longo o suficiente para permitir a colonização do trato respiratório superior pela microflora do ambiente hospitalar. É possível que o Grupo 2 seja constituído por pacientes com pneumonia comunitária severa refratária à antibioticoterapia que necessita internação, ou que tiveram várias internações anteriores, com conseqüente colonização por microflora hospitalar. Investigações subseqüentes devem conferir atenção especial a esse aspecto. Pode ser útil, neste contexto, o emprego de técnicas de Biologia Molecular para melhor caracterização dos microrganismos isolados.

MELO, Charlline Vládia Silva de. Atividade antifúngica in vitro e mecanismo de ação de análogos químicos da isoniazida frente a Coccidioides posadasii. 2014. 80 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by Eliene Nascimento (elienegvn@hotmail.com) on 2015-03-11T14:16:58Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvlmelo.pdf: 1418913 bytes, checksum: 8e7ca0b761e03c5831be6c466907127d (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-03-11T14:19:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvlmelo.pdf: 1418913 bytes, checksum: 8e7ca0b761e03c5831be6c466907127d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T14:19:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvlmelo.pdf: 1418913 bytes, checksum: 8e7ca0b761e03c5831be6c466907127d (MD5) Previous issue date: 2014 / Coccidioidomicose é uma micose sistêmica que acomete o homem e outros animais domésticos e silvestres, causada pelo fungo dimórfico geofílico Coccidioides posadasii. Nos últimos anos, a melhoria dos métodos de diagnóstico micológico e o aumento da ocorrência de doenças imunossupressoras causaram grande impacto na incidência das micoses profundas e oportunistas no mundo. Apesar da existência de terapias antifúngicas eficazes contra a coccidioidomicose, a busca por novas drogas para o tratamento desta doença se faz necessária. O objetivo desse estudo foi determinar o efeito inibitório, in vitro, e o mecanismo de ação dos análogos químicos da isoniazida, isolados e em combinação com os antifúngicos anfotericina B (AMB) e itraconazol (ITC), frente a cepas de Coccidioides posadasii (n=12). Para isso 12 cepas de C.posadasii, foram repicadas em ágar dextrose batata e utilizadas na realização dos testes de sensibilidade frente ao agente antituberculose isoniazida (INH) e seus análogos químicos. Os ensaios foram conduzidos por meio do teste de macrodiluição em caldo ou definição da concentração inibitória mínima (CIM) e o sinergismo foi avaliado pelo método do tabuleiro. Os análogos químicos inibiram o crescimento de todas as cepas de C. posadasii testadas isoladamente, com valores de CIM para cada composto que variaram de 100 a 400 µg/mL, para os análogos P3-[N’-(1- (4-methoxifeniletilideno) isonicotinohidrazida] P5- [N’- (1-m-tolileilidene) isonicotinohidrazida] e P6- [N’-(1-(4-metilfenil) etilideno) isonicotinohidrazida], de 25 a 100 µg/mL para a PACT- N’- (1-feniletilideno) isonicotinohidrazida e de 0,0625 a 0,125 µg/mL para AMB e 0,125 a 0,5 µg/mL para ITC. Quanto a combinação entre as drogas antifúngicas e os análogos químicos da droga isoniazida, todos foram capazes de inibir o crescimento in vitro das cepas de C. posadasii. Sinergismo foi detectado em 8 combinações não sendo observado nenhum antagonismo em nenhuma delas. Os análogos da isoniazida apresentaram valores de CIM de 2, 4, 8, 16, 32 vezes superior à atividade da droga antituberculose padrão. A extração dos esteróis e a permeabilidade da membrana fúngica foram averiguadas, respectivamente, por saponificação com aquecimento e por meio da leitura do sobrenadante da suspensão fúngica em comprimento de onda de 260 e 280 nm. Todos os compostos inibiram o crescimento in vitro das cepas de C. posadasii. Foi observado que os análogos da isoniazida isolados e em combinação com antifúngicos foram capazes de causar redução do teor de ergosterol celular; apenas os análogos P3 e P6 foram capazes de alterar a permeabilidade da membrana plasmática nas condições testadas. Em conclusão, os resultados mostram que os análogos derivados da isoniazida possuem atividade inibitória frente a C. posadasii

OLIVEIRA, Jonathas Sales de. Sensibilidade a antifúngicos, atividade exoenzimática e produção de biofilme por cepas de Candida tropicalis de origem animal. 2013. 73 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T13:14:07Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_jsoliveira.pdf: 1514038 bytes, checksum: 3a341580d1179e9935016a3b2969f3c8 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T13:27:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_jsoliveira.pdf: 1514038 bytes, checksum: 3a341580d1179e9935016a3b2969f3c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T13:27:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_jsoliveira.pdf: 1514038 bytes, checksum: 3a341580d1179e9935016a3b2969f3c8 (MD5) Previous issue date: 2013 / In recent years there has been a significant increase in the incidence of fungal infections caused by Candida species. Although C. albicans be considered the principal representing of the genus, other species have been gaining prominence. C. tropicalis, for example, has been associated with serious invasive cadidiases, being the first or second type of non-Candida albicans Candida most commonly isolated in humans with candidemia and candiduria and is frequently isolated from healthy animals and animals with candidiasis. To establish infection, C. tropicalis expresses many virulence factors such as the secretion of enzymes phospholipases and proteases, biofilm production, among others. This study aimed to evaluate the in vitro antifungal susceptibility profile and production of virulence factors in strains of C. tropicalis (n=100) isolated from several animal species. The strains were subjected to in vitro susceptibility testing by broth microdilution test, M27-A3 protocol, standardized by the Clinical and Laboratory Standards Institute against amphotericin B, itraconazole and fluconazole. We also evaluated the virulence attributes, such as proteases and phospholipases production and biofilm formation. Regarding the susceptibility of C. tropicalis strains, 38% were resistant to itraconazole, 40% were resistant to fluconazole and 34% were resistant to both azoles. None of the strains were resistant to amphotericin B. Regarding the production of proteases, 84% of the strains secreted these enzymes in the medium with pH 5.0, whereas only 40% of the strains were active at pH 3.5. Only 8% of the strains produced phospholipases. The strains showed different pattern in biofilm production, which 63,2% were strong producers, 17,6% were moderate producers, and 13,3% were weak producers. In sumary, the C. tropicalis strains isolated from animals showed high rate of resistance to azoles and expressed important virulence factors, indicating a potential threat to human and animal health. / Nos últimos anos houve um aumento significativo na incidência de infecções fúngicas causadas por leveduras do gênero Candida. Apesar de C. albicans ser considerada a principal representante do gênero, outras espécies vêm ganhando destaque. C. tropicalis, por exemplo, tem sido associada à cadidíases invasivas graves, sendo a primeira ou segunda espécie de Candida não-albicans mais comumente isolada em candidemia e candidúria em humanos, além de ser frequentemente isolada da microbiota de animais saudáveis e com candidíase. Para estabelecer a infecção, C. tropicalis expressa diversos fatores de virulência, como a secreção de enzimas protease e fosfolipase, a produção de biofilme, dentre outros. O presente trabalho buscou avaliar o perfil de sensibilidade antifúngica in vitro e produção de fatores de virulência de cepas de C. tropicalis (n=100) isoladas de diferentes espécies animais. As cepas foram submetidas a teste de sensibilidade in vitro por meio do método de microdiluição em caldo, protocolo M27-A3, padronizado pelo Clinical and Laboratory Standards Institute, frente anfotericina B, itraconazol e fluconazol. Foram avaliados ainda os atributos de virulência: produção de enzimas proteases e fosfolipases e produção de biofilme. Quanto ao perfil de sensibilidade das cepas de C. tropicalis, 38% foram resistentes a itraconazol, 40% resistentes a fluconazol e 34% foram resistentes a ambos os derivados azólicos. Nenhuma cepa apresentou resistência a anfotericina B. Quanto a produção de proteases, 84% das cepas secretaram estas enzimas em meio com pH 5,0, enquanto somente 40% das cepas foram ativas em pH 3,5. Somente 8% das cepas produziram fosfolipases. As cepas apresentaram padrão diferenciado na produção de biofilme, em que 63,2% foram consideradas fortes produtoras, 17,6% foram consideradas moderadas produtoras e 13,3% foram consideradas fracas produtoras. Em suma, os isolados de C. tropicalis provenientes de animais apresentaram resistência a derivados azólicos e expressaram fatores de virulência importantes, indicando potencial risco à saúde humana e animal.

MEDRANO, Delia Jessica Astete. Perfil de sensibilidade e genotipagem de leveduras isoladas de pacientes com candidemia em dois hospitais de referência terciária de Fortaleza - Ceará. 2004. 146 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2004. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-04T15:52:19Z No. of bitstreams: 1 2004_dis_djamedrano.pdf: 1543027 bytes, checksum: bf8abffaae3f0d8ea1a8c267957fc295 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:19:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2004_dis_djamedrano.pdf: 1543027 bytes, checksum: bf8abffaae3f0d8ea1a8c267957fc295 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:19:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004_dis_djamedrano.pdf: 1543027 bytes, checksum: bf8abffaae3f0d8ea1a8c267957fc295 (MD5) Previous issue date: 2004 / The systemic infections caused by yeasts of the genus Candida are considered opportunist mycoses of high risk in hospital environments. These infections represent important therapeutical challenge, by reason of arising of species resistent to some antifungals, associated with high rate of mortality. Therefore, this work sought: To verify the frequency of fungemias at Dr. César Cals Hospital and Albert Sabin Children Hospital; identify the etiological agents implicated; determine the sensitivety profile to antifulgal and evaluate the genotypical profile of the species isolated from patients with recurrency. For this, were recuperated from 4627 hemcultures, 55 yeast-positive hemocultures at HGCC and from 5316 hemocultures 87 yeast-positive hemocultures at HIAS. From them, 23 patients at HGCC and from 43 at HIAS that had clinical histories with complet data entered this study. The mycological diagnosis was performed through biochemical and morphological characteristics of the etiological isolated. The test of sensitivety to antifungal- amphotericin B, fluconazole, itraconazole and cetoconazole- utilized the microdilution method in broth, reported in the document M27-A2 of the NCCLS. The genotyping techniques were performed through PFGE (Pulsed Field Gel Electrophresis), RAPD (Randomly amplified polymorphic DNA analysis). Within the period from june of 2000, to june of 2002 at HGCC, were analysed 4627 hemocultures, being positives 1051, of which 55 (5,2%) were positive for yeast of the genus Candida. On the other hand, in the period from june of 2001 to july of 2002 at HIAS, were analysed 5316 hemocultures, of which 87 (5,72%) were yeast-positive of the genus Candida and Rhodotorula.The main specie involved in the genus Candida, was C. parapsilosis with 36% and 42% of the cases at HGCC and HIAS respectively. The main risk factors associated with candidemia, were: the previous antibiotic therapy, central venous catheter, parenteral nutrition, gastric probe, mechanical ventilation, surgery and prematurity. About the resistance to antifungals drugs was observed that amphotericin B showed a resistance level of 4%, fluconazole-56%, itraconazole-52% and cetoconazole- 86%. The PFGE technique caracterized a cromossomic profile of 6 bands for C. parapsilosis and 4 for C. tropicalis. This technique permited the diferentiation of one cepa with changed pattern of bands for the last episode of the patient 4. The technique of RAPD chacacterized a distribution pattern of predominant bands for C. parapsilosis and was capable of characterize 4 genetical profiles, denoting reinfection in 3 patients and 2 genomic profiles were found for C. tropicalis. This assay shows the emergency of the non- albicans Candida, specially the C. parapsilosis, as main responsible for the cases of candidemia in the two hospitals of tertiary indication of Fortaleza, associated with a high resistance in vitro to antifungals. The genetical variability found in C. parapsilosis and C. tropicalis through the PFGE and RAPD techniques, revealed reinfection pictures, which rises the possibility that these be due to a contamination among patients or indirectly through the healthy workers. / As infecções fúngicas sistêmicas causadas por leveduras do gênero Candida são consideradas micoses oportunistas de alto risco em ambientes hospitalares. Essas infecções representam importante desafio terapêutico, em razão do surgimento de espécies resistentes a antifúngicos, associados a altos índices de mortalidade. Por esta razão, este trabalho objetivou: Verificar a freqüência de fungemias no Hospital Geral Dr. César Cals (HGCC) e Hospital Infantil Albert Sabin (HIAS); identificar os agentes etiológicos implicados; determinar o perfil de sensibilidade aos antifúngicos e avaliar o perfil genotípico das espécies isoladas de pacientes com quadros de recorrência. Para isso foram recuperadas, de 4 627 hemoculturas, 55 hemoculturas positivas para leveduras do HGCC, e, de 5 316 hemoculturas, 87 positivas para leveduras do HIAS. Destas, 23 do HGCC e 43 pacientes do HIAS que possuíam histórias clínicas com dados completos entraram neste estudo. O diagnóstico micológico foi realizado por meio das características bioquímicas e morfológicas dos agentes etiológicos isolados. O teste de sensibilidade aos antifúngicos - anfotericina B, fluconazol, itraconazol e cetoconazol - utilizou o método de microdiluição em caldo, descrito no documento M27-A2 do NCCLS. As técnicas de genotipagem foram realizadas por eletroforese em campo pulsátil (PFGE) e amplificação aleatória do DNA (RAPD). Entre o período do junho do 2000 a junho do 2002, no HGCC, foram analisadas 4 627 hemoculturas, sendo positivas 1051, das quais 55 (5,2%) foram positivas para leveduras do gênero Candida. Em contrapartida, no período de junho do 2001 a junho do 2002, no HIAS, foram analisadas 5316 hemoculturas, sendo positivas 1520 amostras, das quais 87 (5,72%) foram positivas para leveduras dos gêneros Candida e Rhodotorula. A principal espécie envolvida, dentro do gênero Candida, foi a C. parapsilosis com 36% e 42% no HGCC e HIAS, respectivamente. Os principais fatores de risco foram: a antibioticoterapia prévia (n=19; 90%), cateter venoso central, nutrição parenteral, sondagem gástrica , ventilação mecânica, cirurgia e prematuridade. Quanto à resistência a drogas antifúngicas, foi observado que anfotericina B apresentou um índice de resistência de 4%, fluconazol- 52%, itraconazol- 50% e cetoconazol- 86%. A técnica do PFGE caracterizou um perfil cromossômico de 6 bandas para C. parapsilosis e 4 para C. tropicalis. Esta técnica permitiu a diferenciação de uma cepa com padrão de bandas alterado para o último episódio do paciente 4. A técnica de RAPD caracterizou um padrão de distribuição de bandas predominante para C. parapsilosis e foi capaz de caracterizar 4 perfis genômicos, indicando re-infecção em 3 pacientes e 2 perfis genômicos foram encontrados para C. tropicalis . Este ensaio demonstra a emergência das Candida não-albicans, especialmente a C. parapsilosis, como principal responsável pelos casos de candidemias em dois hospitais de indicação terciária de Fortaleza, associado a uma alta resistência in vitro aos antifúngicos. A variabilidade genética encontrada nas C. parapsilosis e C. tropicalis, mediante as técnicas do PFGE e RAPD, revelaram quadros de re-infecção, os quais erguem a possibilidade de que estas sejam decorrentes de uma contaminação entre pacientes ou indiretamente, por intermédio de trabalhadores da saúde.

MARQUES, Francisca Jakelyne de Farias. Efeito inibitório in vitro de drogas antituberculose, antifúngicas e análogos químicos da isoniazida frente a Histoplasma capsulatum var. capsulatum. 2009. 130 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-04T16:15:53Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_fjfmarques.pdf: 1958302 bytes, checksum: 215586f2e098a7dee17df6403a12292e (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:23:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_fjfmarques.pdf: 1958302 bytes, checksum: 215586f2e098a7dee17df6403a12292e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:23:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_fjfmarques.pdf: 1958302 bytes, checksum: 215586f2e098a7dee17df6403a12292e (MD5) Previous issue date: 2009 / In the past years, the improvement of mycological diagnosis methods and immunosuppressive diseases have caused a great impact in the incidence of opportunistic and deep mycoses all around the world, which motivated the performance of new antifungal drugs prospective studies. Histoplasmosis is a systemic mycosis caused by the fungus Histoplasma capsulatum var. capsulatum, which may mimic tuberculosis, in healthy individuals, concerning clinical and radiological aspects.ome cases of histoplasmosis that are refractory to the treatment with conventional antifungal drugs have been described. The aim of this study was to determine the in vitro inhibitory effect of the antituberculosis drugs: isoniazid (INH), pyrazinamide (PZA) and ethambutol (EMB); antifungal drugs: amphotericin B (AMB), fluconazole (FLC), itraconazole (ITC) and voriconazole (VRZ) and chemical analogs of isoniazid against strains of H. capsulatum (n=30), as well as to evaluate the use of different culture media for the performance of the susceptibility tests. For such, first, the antituberculosis agents INH, PZA and EMB and the analogs of isoniazid were tested isolatedely, and then, in association with the antifungal drugs FLC, ITC and VRZ, against 18 strains of H. capsulatum, previously grown onto BHI agar, through broth macrodilution technique. Each of the 12 remaining strains grown onto potato agar, BHI agar, 2% malt extract agar and lactritmel agar were microscopically analyzed, concerning the presence of tuberculate macroconidia, which were quantified as follows: 0-10, 10-50 and >50 macroconidia/field. Fungal cultures were used to determine the susceptibility of H. capsulatum to the antifungal agents AMB, FLC, ITC and VRZ, through broth microdilution methodology. The antituberculosis drugs inhibited the in vitro growth of the fungal strains, with MICs ranging from 0.04 to 0.30 mg/mL for INH; 0.55 to 3.13 mg/mL for PZA and 1.56 to 6.25 mg/mL for EMB. Concerning antifungal drugs, all the strains were susceptible, with MIC values ranging from 0.0625 to 0.25 µg/mL for AMB; 15.62 to 62.5 µg/mL for FLC; 0.0039 to 0.0312 µg/mL for ITC, and 0.00156 to 0.25 µg/mL for VRZ. When associating antituberculosis drugs with azole derivatives, all associations inhibited the in vitro growth of H. capsulatum strains, and synergy was observed for the nine combinations tested. Analogs of isoniazide presented MICs of 2, 4, 8 and 15-fold better than the standard antituberculosis drug. Basing on micromorphological analysis, the lowest quantification of macroconidia/field (0-10) was observed for 11, 10, 6 and 7 strains previously grown onto potato agar, BHI agar, malt agar and lactritmel agar, respectively. Malt agar was the most adequate medium for the production of macroconidia, 10-50 and >50/field, with a total of six strains; followed by lactritmel agar, with 5 strains. Concerning the relationship between MIC and culture medium used during the test, it was observed that inoculum from strains grown onto malt agar and BHI agar allowed the detection of the MIC for 11 strains. On the other hand, for those inocula grown onto potato agar and lactritmel agar, the MIC values were not detected for 8 and 5 strains, respectively. The results of this study provide additional data on the antifungal potential of antituberculosis drugs and their interactions with azole derivatives. However, new studies are necessary in order to determine the mechanism of action of these compounds on fungal cellular metabolism. / Nos últimos anos, a melhoria dos métodos de diagnóstico micológico e as doenças imunossupressoras causaram grande impacto na incidência das micoses profundas e oportunistas em todo o mundo, fato que impulsionou a realização de estudos de prospecção por novas drogas antifúngicas. A histoplasmose é uma micose sistêmica, causada pelo fungo Histoplasma capsulatum var. capsulatum que, em pacientes hígidos, pode mimetizar a tuberculose quanto aos aspectos clínicos e radiológicos. Alguns casos de histoplasmose refratária ao tratamento com drogas antifúngicas convencionais vêm sendo descritos. O objetivo deste trabalho foi determinar o efeito inibitório, in vitro, das drogas antituberculose: isoniazida (INH), pirazinamida (PZA) e etambutol (EMB); antifúngicas: anfotericina B (AMB), fluconazol (FLC), itraconazol (ITC) e voriconazol (VRZ) e de análogos químicos da isoniazida frente a cepas de H. capsulatum (n=30), assim como avaliar o emprego de diferentes meios de cultura para a realização dos testes de sensibilidade. Para isso, primeiramente, foram repicadas 18 cepas de H. capsulatum em ágar BHI e utilizadas na realização dos testes de sensibilidade frente aos agentes antituberculose citados e análogos químicos da isoniazida, isolados e em combinação com os antifúngicos FLC, ITC e VRZ por meio da técnica de macrodiluição em caldo. Cada uma das 12 cepas restantes foi repicada em ágar batata dextrose, ágar BHI, ágar malte a 2% e ágar lactrimel e, analisadas ao microscópio óptico quanto a presença de macroconídios tuberculados, sendo quantificados de acordo com os parâmetros: (0-10); (10-50); (>50) macroconídios/campo. As culturas foram empregadas na determinação dos testes de sensibilidade frente aos agentes antifúngicos AMB, FLC, ITC e VRZ, utilizando a técnica de microdiluição em caldo. As drogas antituberculose inibiram o crescimento das cepas in vitro com valores de CIM de 0,04 a 0,30 mg/mL para INH, 0,55 a 3,13 mg/mL para PZA e 1,56 a 6,25 mg/mL para EMB. No tocante às drogas antifúngicas, todas as cepas foram sensíveis apresentando valores de CIM que variaram de 0,0625 a 0,25 µg/mL para AMB; 15,62 a 62,5 µg/mL para FLC; 0,0039 a 0,0312 µg/mL para ITC e 0,00156 a 0,25 µg/mL para VRZ. Quanto às combinações entre os fármacos antituberculose e os derivados azólicos, todas foram capazes de inibir o crescimento in vitro das cepas de H. capsulatum, sendo detectado sinergismo nas nove combinações. Os análogos da isoniazida apresentaram valores de CIM 2, 4, 8 e 15 vezes superior a atividade da droga antituberculose padrão. A partir da análise micromorfológica do fungo repicados nos quatro meios de cultura foi identificado a menor quantificação (0-10 macroconídios/campo) para ágar batata, ágar BHI, ágar malte e ágar lactrimel, perfazendo um total de 11, 10, 6 e 7 cepas, respectivamente. O meio de cultura ágar malte foi o mais adequado para produção de macroconídios (10-50) e (>50), norteando um total de 6 cepas, seguido do meio lactrimel, 5 cepas. Em relação a determinação da CIM e o meio de cultura utilizado para o procedimento, observou-se que quando o inóculo era proveniente de cepas em ágar malte e ágar BHI foi possível a visualização da CIM em 11 cepas. Enquanto repiques feitos em ágar batata e lactrimel não foi possível determinar os valores de CIM para 8 e 5 cepas, respectivamente. Os resultados deste estudo fornecem dados adicionais sobre o potencial antifúngico das drogas antituberculose e suas interações com os derivados azólicos. Entretanto, novos estudos se fazem necessário, visando determinar os mecanismos de ação desses compostos no metabolismo celular dos fungos.

LARANJEIRA, Bruno Jaegger. Resistência antimicrobiana, genotipagem capsular e deteção de genes de resistência de Streptococcus pneumoniae isolados de crianças não vacinadas usuárias de creches em Fortaleza. 2014. 95 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-15T11:20:19Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_bjlaranjeira.pdf: 5609827 bytes, checksum: 2006edd7762a610c0d9005923ea51ce0 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-15T12:39:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_bjlaranjeira.pdf: 5609827 bytes, checksum: 2006edd7762a610c0d9005923ea51ce0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-15T12:39:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_bjlaranjeira.pdf: 5609827 bytes, checksum: 2006edd7762a610c0d9005923ea51ce0 (MD5) Previous issue date: 2014 / Streptococcus ( S. ) pneumoniae is considered the principal causative agent of mor bidity and mortality in children younger than five years of ag e. All pneumococcal diseases are initiated by establishing a S. pneumoniae colonization in nasopharynx. The main risk factor for colonization is crowding, as in children attending day care. During the last decades, the increasing amount of resistant S. pneumoniae strains to β -lactams and other classes of antimicrobials has modified the treatment of pneumo coccal infection. At present, nearly 13 serotypes respond for more than 85% of invasive iso lates. The 10-valent pneumococcal polysaccharide-conjugated vaccine (PCV-10) has rece ntly been included in the national vaccination schedule. The aims of this study were t o determine the prevalence, antimicrobial resistance and genotypes of S. pneumoniae isolated of carriage children attending day care centers in Fortaleza, Brazil, as well as to assess the potential coverage of the PCV-10. Between January and December of 2011, isolates from carrier children were recovered by nasopharyngeal swabs. Susceptibility to penicillin, amoxicillin, erythromycin, sulfamethoxazole-trimethoprim, clindamycin, were de termined by e-test method. Detection of penicillin resistance genes was performed by PCR as say. Capsular genotyping of carriage isolates was performed by multiplex PCR assay. S. pneumoniae were isolated in 165 (87.3 %) of 291 samples of children attending day care cente rs. Of the 162 isolates from carriage was found a resistance rate of 27.8% for penicillin, 75 .3% to trimethoprim / sulfamethoxazole, 13.6% to erythromycin and 10.5% to clindamycin. No resistance was detected to ceftriaxone and amoxicillin. The percentage of S. pneumoniae isolates at least one mutation in the penicillin resistance genes was 68.2%. Capsular Gen otypes was indentified in 115 isolates, of 129 tested. Genotypes most common were 6A/6B, 14, 1 5B/15C, 19F and 23F, with serotypes 6A/6B, 14, 19F and 23F more associated with resista nce. The estimated coverage for VPC-10 was 74.4%. This study showed that the rate of S. pneumoniae carriers is high, as well as resistance to antibiotics penicillin and sulfametho xazole / trimethoprim, and the potential cover of VPC-10 is raised against S. pneumoniae genotypes identified isolated from children attending day care centers in Fortaleza. / O Streptococcus (S.) pneumoniae é considerado como o principal agente causador de morbidade e mortalidade em crianças menores de cinco anos de idade. As doenças pneumocócicas começam com o estabelecimento da colonização do S. pneumoniae na nasofaringe. O principal fator de risco para colonização é o confinamento, como em crianças que frequentam creches. Nas últimas décadas, o aumento do número de cepas de S. pneumoniae resistentes à antibióticos β-lactâmicos e a outras classes de antimicrobianos tem dificultado o tratamento da infecção pneumocócica. Atualmente cerca de 13 sorotipos de S. pneumoniae respondem por mais de 85% dos isolados invasivos. A vacina pneumocócica polissacarídica conjugada 10-valente (VPC-10) foi recentemente incluída no calendário de vacinação nacional. Os objetivos desse estudo foram determinar a prevalência, a resistência antimicrobiana, os genótipos de S. pneumoniae que colonizam a nasofaringe de crianças usuárias de creches em Fortaleza, Brasil, bem como para avaliar a cobertura potencial da VPC-10. Entre janeiro e dezembro de 2011, os isolados de crianças portadores foram recuperados a partir de swabs de nasofaringe. Foram determinadas as sensibilidades para penicilina, ceftriaxona, sulfametoxazol/trimetoprim, amoxilina, clindamicina e eritromicina, das cepas isoladas utilizando-se o método de e-test.. A detecção dos genes de resistência à penicilina foi realizada por PCR. A genotipagem capsular dos isolados de portadores foi realizada pela técnica de multiplex PCR. Foram isolados S. pneumoniae em 165 (56,7%) das 291 crianças saudáveis usuárias de creches. Dos 162 isolados de portadores, submetidos à determinação da concentração inibitória mínima, foi encontrada uma taxa resistência de 27,8% para penicilina, 75,3% para sulfametoxazol/trimetoprim, 13,6% para eritromicina e 10,5% para clindamicina. Não foi detectada resistência à ceftriaxona e à amoxicilina. A porcentagem de isolados de S. pneumoniae com mutação em pelo menos um dos genes que determinam resistência à penicilina foi de 68,2%. Os genótipos capsulares de 115 isolados foram identificados em 129 viáveis. Os genótipos mais comuns foram 6A/6B, 14, 15B/15C, 19F e 23F, com os sorotipos 6A/6B, 14, 19F e 23F mais associados com a resistência. A cobertura estimada para VPC-10 foi de 74.4%. O presente estudo verificou que a taxa de portadores de S. pneumoniae é alta, assim como a resistência aos antimicrobianos penicilina e sulfametoxazol/trimetoprima, e que a cobertura potencial da VPC-10 é elevada frente aos genótipos de S. pneumoniae identificados, isolados de crianças usuárias de creches em Fortaleza.

Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias mención Medicina Preventiva Animal. / Listeria monocytogenes es una bacteria ubicua, ampliamente distribuida en la naturaleza. Agente etiológico de la enfermedad llamada listeriosis, que puede transmitirse a tráves del consumo de alimentos contaminados o por el contacto directo con animales enfermos. La listeriosis presenta una alta tasa de letalidad en grupos susceptibles como mujeres embarazadas, niños y ancianos. En Chile, no existen antecedentes de resistencia antimicrobiana en aislamientos de Listeria monocytogenes obtenidos desde alimentos. Por lo anterior, es relevante analizar cepas aisladas desde esta matriz y casos clínicos, contemporáneos a los brotes ocurridos entre los años 2008 y 2009 en Chile. El objetivo de este trabajo fue caracterizar la resistencia antimicrobiana fenotípica en cepas de L. monocytogenes, analizar sus perfiles de resistencia y evaluar la posible asociación entre resistencia antimicrobiana, matriz alimentaria, origen y serotipo. Fueron analizadas 222 cepas de L. monocytogenes, 182 aisladas desde alimentos y 40, desde casos clínicos. Como screening, se utilizó la metodologia cualitativa de Kirby Bauer (KB) para evaluar la sensibilidad a distintos antibióticos, y luego la metodología cuantitativa, concentración inhibitoria mínima (CIM). Por ambas metodologías se analizaron 8 antimicrobianos: ciprofloxacino, gentamicina, sulfametoxazol-trimetoprim, eritromicina, cefalotina, ampicilina, penicilina-G y tetraciclina. Se obtuvieron 45 cepas resistentes que correspondieron al 20,3% del total de cepas analizadas. El tipo de resistencia más frecuente, fue a un sólo antimicrobiano, correspondiendo a un 58% de las cepas resistentes. El antimicrobiano que presentó mayor resistencia fue ciprofloxacino con un 51%. Se realizó un análisis multivariado de conglomerados mediante el cual se obtuvieron 5 grupos o cluster. El cluster que agrupó mayor número de cepas presentó un perfil de resistencia a: gentamicina, eritromicina, sulfametoxazol-trimetroprim, y se encontró asociación entre el fenotipo de resistencia antimicrobiana y la matriz alimentaria. Estos resultados contribuirán al conocimiento de resistencia antimicrobiana de L. monocytogenes en Chile, información fundamental a la hora de diseñar políticas públicas en cuanto a la prevención de la resistencia antimicrobiana. / Listeria monocytogenes is an ubiquitous bacteria widely distributed in nature, being the etiological agent of the listeriosis, which can be transmitted through consumption of contaminated food or by direct contact with sick animals. Listeriosis occurs with a high lethality rate in susceptible groups, such as pregnant women, children and the elderly. There are not previous reports of antimicrobial resistance in L. monocytogenes isolated from food in Chile. Therefore, is relevant to analyze strains obtained from these food types and isolates from contemporary clinical cases outbreaks reported in 2008 and 2009 in Chile. The aim of this study was to characterize the phenotypic antimicrobial resistance in L. monocytogenes strains, analyze their resistance profiles and evaluate the possible association between antimicrobial resistance and food types, origin of strains and serotype. Two hundred and twenty two L. monocytogenes strains were analyzed (182 obtained from food and 40 from clinical cases). Kirby Bauer (KB) test was used as qualitative screening, and minimum inhibitory concentration (MIC) as quantitative test to evaluate antimicrobial resistance. Eight antibiotics were tested: ciprofloxacin, gentamicin, trimethoprim/sulfamethoxazole, erythromycin, cephalothin, ampicillin, penicillin-G, tetracycline. Forty-five (20.3%) strains were resistant, and 58% of them were resistant to just one antibiotic, being these the most common resistance profile. The antibiotic associated with the highest resistance was ciprofloxacin (51% of resistant strains). A multivariate cluster analysis identified 5 clusters, the main cluster grouped strains resistant to gentamicin, erythromycin and trimethoprim/sulfamethoxazole. Association was found just between antimicrobial resistance and food types. Results of this study will contribute to the knowledge of antimicrobial resistance of L. monocytogenes in Chile, information that is needed for the development of public health policies to prevent antimicrobial resistance. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 11110200.

Células de combustível microbianas despertaram interesse nos últimos anos devido à aplicação em tratamento de águas, biorremediação e geração de eletricidade. Um dos organismos que tem sido estudado a fundo para a aplicação em células de combustível microbianas é a Geobacter sulfurreducens. Esta espécie de Geobacter, que gera eletricidade pela oxidação de compostos, mostrou gerar uma quantidade significativa de energia devido a múltiplos mecanismos extracelulares de transferência de elétrons através de pilis ou citocromos do tipo C. Outra espécie de Geobacter que desperta grande interesse é a Geobacter metallireducens por ser capaz de oxidar compostos aromáticos e reduzir metais nocivos solúveis (até mesmo radioativos) à forma inofensiva insolúvel. Porém, o aumento na densidade de potência destes dispositivos é essencial para que sejam competitivos com outras fontes de energia renovável. Neste trabalho foi feito o estudo da melhor configuração visando a ausência de limitações catódicas para aumento da densidade de potência nas células, o que demostrou que medidas como diminuição do tamanho no ânodo, proximidade dos eletrodos e substituição do cátodo de oxigênio por ferricianeto melhoram a desempenho da célula. Também foram feitas comparações de densidade de potência em células de combustível microbianas de culturas puras de G. metalirreducens e G. sulfurreducens e uma cocultura das duas espécies. Essa comparação demonstrou que G. metallireducens além de poder ser utilizada para biorremediação apresenta uma densidade de potência elevada, podendo ser usada também como cultura pura em células de combustível microbianas, para a produção de eletricidade. Também se pode perceber uma relação direta entre a espessura do biofilme e a potência produzida nas três células. A espécie G. metallireducens demonstrou ainda ser útil na utilização de glicerol como fonte de carbono, podendo servir como espécie remediadora para este resíduo. / Microbial fuel cells aroused interest in recent years due to the application in water treatment, bioremediation and electricity generation. One of the microorganisms that has been studied thoroughly for application in microbial fuel cells is the Geobacter sulfurreducens. This specie of Geobacter, which generates electricity by oxidizing compounds, showed generate a significant amount of energy due to multiple mechanisms of extracellular electron transfer through Pilis or c type cytochromes. Another specie of Geobacter that arouses great interest is the Geobacter metallireducens by being able to oxidize aromatic compounds and soluble reducing harmful metals to insoluble harmless. However, the increased power density of these devices is essential to be competitive with other renewable energy sources. This present work studied the best configuration aiming the absence of cathodic limitations to increasing power density of the cells. Measurements have shown that reduced anode size, location of the electrodes and replacement of oxygen by ferricyanide, improves the performance of the cells. Comparisons of power density between pure cultures of G. sulfurreducens and G. metalirreducens and a coculture of the two species were also made. This comparison showed that G. metallireducens can be used for bioremediation and also in a microbial fuel cell to produce electricity due the high power density produced. Direct relationships between the thickness of the biofilm and the power produced in the three cells have been notice. The specie G. metallireducens also showed to use glycerol as a carbon source, which may be an alternative for glycerol consumption.