Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-05Bitstream added on 2014-06-13T18:39:12Z : No. of bitstreams: 1 ferreira_bls_me_botfmvz.pdf: 426406 bytes, checksum: d04fb7d403ffb9808a22ed5d0f84af3d (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência de dois tipos de sistemas de produção sobre a produção de leite e a ocorrência de mastite em ovelhas da raça Bergamácia. Também foram analisados no leite os níveis de proteína, gordura, sólidos totais e lactose. Determinou-se no sangue e no leite os níveis dos seguintes minerais: cálcio (Ca), zinco (Zn), sódio (Na), potássio (K) e fósforo (P), e as vitaminas A e E. Foram utilizadas 35 ovelhas distribuídas em dois grupos: Grupo 1 (G1;n=16) em sistema de pasto rotacionado (Panicum maximum cv. Tanzânia) e o Grupo 2 (G2;n=19) em confinamento com dieta balanceada, contendo silagem de milho e concentrado. Os dois grupos foram avaliados por um período de 8 semanas. Nos dois sistemas de produção os cordeiros foram separados das mães 48 horas após o nascimento. Para o diagnóstico da mastite clínica utilizou-se diariamente o teste da caneca telada, e semanalmente, o California Mastitis Test (CMT) e a contagem de células somáticas (CCS) para a mastite subclínica. Observaram-se os seguintes valores médios para os minerais, analisados a cada 15 dias em amostras de leite e plasma, nos grupos G1 e G2, respectivamente: Ca (1,55g/L e 0,24g/L; 1,57g/L e 0,23g/L); Zn (0,025g/L e 0,003g/L; 0,027g/L e 0,003g/L); Na (0,75g/L e 3,44g/L; 0,73g/L e 3,34g/L); K (1,43g/L e 0,24g/L; 1,48g/L e 0,91g/L) e P (4,49g/L e 0,027g/L; 4,59g/L e 0,025g/L). Os valores médios para vitamina A no leite e sangue, respectivamente: G1 (1,025μmol/L e 2,445μmol/L) e G2 (0,915μmol/L e 2,518μmol/L). Os valores médios para vitamina E no leite e sangue, respectivamente: G1 (17,513μmol/L e 35,568μmol/L) e G2 (17,982μmol/L e 35,318μmol/L). Conclui-se que os animais confinados apresentaram produção de leite maior quando comparado com os animais a pasto, entretanto, estatisticamente não significativo. A ocorrência de mastite subclínica infecciosa... / The aim of this study was to evaluate the influence of two types of systems on dairy production and the occurrence of mastitis in Bergamacia ewes. The levels of protein, fat, total solids and lactose were also assessed in milk. The following minerals had their levels quantified in blood and milk: calcium (Ca), zinc (Zn), sodium (Na), potassium (K) and phosphorus (P), as well as the vitamins A and E. Thirty-five ewes were distributed into two groups: Group 1 (G1; n=16) in rotational grazing system (Panicum maximum cv. Tanzânia) and Group 2 (G2; n=19) in confinement, with a balanced diet containing corn silage and concentrate. Both groups were evaluated for 8 weeks, so that lambs were separated from their mothers 48h after birth. To diagnose clinical mastitis, strip cup test was daily performed. In addition, California Mastitis Test (CMT) and somatic cell count (SCC) were weekly assessed to evaluate subclinical mastitis. The following mean values were detected for minerals, which were analyzed every 15 days in milk and plasma samples from G1 and G2, respectively: Ca (1.55g/L and 0.24g/L; 1.57g/L and 0.23g/L); Zn (0.025g/L and 0.003g/L; 0.027g/L and 0.003g/L); Na (0.75g/L and 3.44g/L; 0.73g/L and 3.34g/L); K (1.43g/L and 0.24g/L; 1.48g/L and 0.91g/L) and P (4.49g/L and 0.027g/L; 4.59g/L and 0.025g/L). The mean values for vitamin A in milk and blood were, respectively: G1 (1.025μmol/L and 2.445μmol/L) and G2 (0.915μmol/L and 2.518μmol/L). For vitamin E, the mean values in milk and blood were, respectively: G1 (17.513μmol/L and 35.568μmol/L) and G2 (17.982μmol/L and 35.318μmol/L). We concluded that confined animals had higher dairy production, compared to those in grazing system, although there was no statistical difference. Infectious subclinical mastitis was 25.0% for grazing animals and 31.5% for confined ones. The agents isolated from the latter were Streptococcus spp. (83.3%)... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo: Considerando-se que portadores de anemia falciforme apresentam relatado aumento da suscetibilidade às infecções e que reservatórios bucais de microrganismos patogênicos podem representar uma porta de entrada para doenças, a avaliação da microbiota bucal potencialmente patogênica ganha relevância. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de leveduras do gênero Candida, estafilococos, enterobactérias e Pseudomonas spp. na cavidade bucal de pacientes com anemia falciforme em tratamento com hidroxiuréia, comparando os resultados com indivíduos controle. Foram incluídos no estudo 69 pacientes, com idades entre 15 a 60 anos, portadores de anemia falciforme, confirmados por exames clínicos e laboratoriais. Estes foram divididos em dois grupos: em tratamento com hidroxiuréia (HU) por no mínimo 90 dias (n=30); sem tratamento com HU (n=39). Foram também incluídos dois grupos controle pareados (controle I e II, respectivamente), sendo indivíduos saudáveis com perfil semelhante (quanto à idade, sexo e condições bucais) aos dos grupos em estudo. Não foram incluídos pacientes diabéticos, portadores de próteses bucais totais, outras doenças sistêmicas e que estivessem sob terapia com medicamentos que podem interferir com as condições bucais. Foram realizados exame clínico, anamnese e coleta de enxágüe bucal de cada paciente. Este foi semeado em meios de cultura específicos para cada microrganismo e, após incubação, foram obtidos valores de UFC/mL. Os isolados foram identificados pelo sistema API. A prevalência das espécies de microrganismos isolados foi comparada entre os grupos anemia falciforme com HU (AnF/HU+), sem HU (AnF/HU-) com seus respectivos controles. Foram realizados testes de suscetibilidade aos antimicrobianos segundo metodologia CLSI. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre as contagens de estafilococos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Considering that sickle cell anemia patients have reported increased susceptibility to infections and oral reservoirs of pathogens may represent a gateway for disease, evaluation of potentially pathogenic oral flora becomes relevant. The aim of this study was to evaluate the presence of Candida species, staphylococci, Enterobacteriaceae and Pseudomonas spp. in the oral cavity of patients with sickle cell disease under treatment with hidroxyurea (HU), comparing the results with control subjects. The study included 69 patients aged 15-60 years, with sickle cell disease, confirmed by clinical and laboratory examinations. These were divided into two groups:under treatment with HU for at least 90 days (n=30), and without HU (n=39). Two matched controls (control I and II, respectively), composed of healthy individuals with similar profile (age, gender and oral conditions) to the study groups were included. Diabetic patients, patients with dentures, and other systemic diseases and those under treatment with medications that can interfere with oral conditions were not included. Clinical examination and anamnese were performed and mouthrinse sample was collected from each patient. The sample was plated into specific culture media for each microorganism and, after incubation values of cfu/ml were obtained. Isolates were identified by API system. The prevalence of the species were compared between groups with sickle cell anemia HU (AnF/HU+) and without HU (AnF/HU-) and the respective control groups. Antimicrobial susceptibility testings were performed according to the CLSI methodology. There were no statistically significant differences counts of staphylococci and Enterobacteriaceae/Pseudomonas between the groups AnF/HU+ and AnF/HU- and the respective control groups. Significant differences in the counts of yeasts were observed between AnF/HU- group and the respective control, however... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Cristiane Yumi Koga Ito / Coorientador: Maria Stella Figueiredo / Banca: Fernanda Lourenção Brigheti / Banca: Karen Regina Carim da Costa / Mestre

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: José Luiz De Lorenzo / Banca: Cristiane Yumi Koga Ito / Banca: Jamil Awad Shibli / Banca: Leonardo Marchini / Resumo: O objetivo desse trabalho foi analisar in vitro a aderência de Streptococcus sanguinis, Candida albicans e associações destes microrganismos com Streptococcus mutans às superfícies dos implantes dentários tratados com jateamento de fosfato de cálcio, anodização, duplo ataque ácido e os de superfície lisa, com ou sem a prévia incubação em saliva ou plasma sanguíneo. Foram selecionados 120 implantes, sendo 30 de cada superfície para cada microrganismo e associações estudadas. Para análise da aderência, foram preparadas suspensões de microrganismos contendo 106 células/ml em espectrofotômetro. Além disso, cada microrganismo e associações foram divididos em três grupos: em um, o implante foi removido da embalagem e colocado diretamente no caldo, em outro, foi previamente embebido em saliva humana por uma hora e no último em plasma humano, também por uma hora. Os implantes foram acondicionados separadamente em poços de placas de cultura de células contendo caldo sacarosado (placa in vitro) e a suspensão do microrganismo. Após 24h de incubação a 37 °C e 5% de CO2, os implantes foram lavados três vezes durante um minuto em solução salina estéril e colocados em sonicador com 10 ml de salina para dispersão das células aderidas. A seguir, foram realizadas diluições seriadas e semeaduras em meios de cultura específico para cada microrganismo. Após 48h de incubação a 37 °C e 5% de CO2, foi realizada a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/ml) e os dados foram submetidos a análise de variância (ANOVA), teste de tukey, com nível de significância de 5%. Para ilustrar a aderência dos microrganismos, foram selecionados o microrganismo Streptococcus sanguinis, e as associações Streptococcus sanguinis e Candida albicans e Streptococcus sanguinis, Streptococcus mutans... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study has been to analyze, in vitro the adherence of Streptococcus sanguinis, Candida albicans and associations of those microorganisms with Streptococcus mutans to the surfaces of dental implants treated with calcium phosphate jetting, anodization, double acid attack and to those of smooth surface, with or without previous saliva or blood plasma incubation. Ten implants from each surface were selected for every studied microorganism and association. In order to analyze the adherence, suspensions of microorganisms bearing 106 viable cells/ml in spectrophotometer were prepared. Additionally, every microorganism and association was divided in three groups: in the first, an implant was removed from its wrap and put right away into the sauce; the second, it was previously drenched into saliva for one hour; and the last one, into plasma, for one hour, as well. The implants were separately placed in culturing plaque wells of cells containing saccharose sauce (in vitro plaque) and the microorganism's suspension. After 24 hours of incubation time at 37 °C and 5% of CO2, the implants were taken washed three times for a minute in saline sterile solution and put in a sonicator holding 10 ml of saline in order to disperse adherent cells. Then, seriated dilutions were done, and sowing in culture media specific for each of the. After a 48hincubation time at 37°C and 5% of CO2, a counting was carried, of the colony forming units (UFC/ml) and the data were submitted to the ANOVA, Tukey test, at a significance level of 5%. To illustrate the adherence of the microorganisms, some samples were exposed to electronic sweeping microscopy. The results did show great microorganism adherence to the surfaces studied, mainly when associated forming a biofilm. The anodized surface... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luiz Francisco Prata / Banca: Ana Maria Centola Vidal Martins / Banca: Angela Cleusa de Fátima Banzatto de Carvalho / Resumo: Este trabalho teve o objetivo de avaliar a eficácia de uma nova ferramenta de gestão da qualidade do leite cru refrigerado, comparativamente à utilização dos testes tradicionais de controle, nas condições da Instrução Normativa 51 (IN 51). Foram utilizadas 374 amostras individuais de leite cru refrigerado (produtor) e 125 amostras de leite cru de conjunto (bocas de tanques de caminhões transportadores, referindo-se a leites desses mesmos produtores). As amostras foram submetidas a duas análises microbiológicas, sendo as individuais submetidas à prova rápida de redução em tubos - o "Tetra-Test", com o objetivo de estimar a carga microbiana do leite e a microbiota predominante, enquanto as amostras de conjunto foram submetidas à contagem padrão em placas (CPP) como método de referência. Paralelamente, buscou-se verificar os efeitos do processo de centrifugação nas características e/ou propriedades da matériaprima industrial durante a execução do processo por Ultra Alta Temperatura (UAT). Foram utilizadas 56 amostras de leite provenientes da linha de processamento, tomadas imediatamente antes e depois da etapa de centrifugação interposta no início do processo, as quais foram submetidas a ambos os testes microbiológicos ("Tetra- Test" e CPP), além da determinação da variabilidade da composição do leite e determinação do índice proteolítico da k-caseína. O "Tetra-test" se mostrou eficaz na avaliação da qualidade microbiológica do leite cru podendo ser utilizado como uma ferramenta de gestão, uma vez que seus resultados se correlacionaram proporcionalmente aos obtidos pela CPP e possibilitaram informações complementares sobre as características da microbiota dominante, oferecendo vantagens sobre os tradicionais testes de redução. Os resultados mostraram que grande... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to evaluate the efficacy of a new tool for quality management of refrigerated raw milk, compared to traditional control tests in accordance to the Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA) Normative Instruction No. 51. A total of 374 individual samples of refrigerated raw milk (from producers) and 125 samples of bulk raw milk (from milk transport tankers from these same producers) were studied. Samples were submitted to microbiological analyses, being individual samples submitted to rapid reduction in test tubes - the "Tetra-Test", in order to estimate the microbial load of milk and predominant microbiota, while the bulk samples were analyzed by standard plate count as a reference method. At the same time, it was investigated the effects of the centrifugation on the characteristics and/or properties of industrial raw material into the incoming of UHT process. Were analyzed 56 samples of milk from the processing line, obtained immediately before and after centrifugation performed early in the process. Both of them were subjected to microbiological tests ("Tetra-Test" and PCA). In addition it was determined the variability of milk composition and proteolytic rate of k-casein. The "Tetra-test" showed to be effective in assessing the microbiological quality of raw milk and can be used as a management tool, since its results correlated proportionally with those obtained by standard plate count and make possible to obtain more information about predominant... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Os métodos de tratamento para a obesidade em cães e gatos focam na restrição calórica, seja restringindo a ingestão de alimento ou alimentando o animal com dietas hipocalóricas. Entretanto, esses métodos frequentemente falham, sendo necessárias estratégias alternativas para promover a perda de peso. O objetivo desse estudo foi investigar as diferenças na microbiota fecal entre animais magros e obesos e determinar se a castração e/ou a perda de peso estão associadas com mudanças na população microbiana. No primeiro experimento, a composição da microbiota fecal foi avaliada nos gatos magros inteiros, magros castrados e obesos castrados, antes e depois da perda de peso. Os gatos obesos foram submetidos a seis semanas de restrição energética e apresentaram redução na massa gorda após a perda de peso (P<0,001), embora o peso corporal não tenha mudado (P>0,05). Firmicutes, seguido de Bacteroidetes foram os filos predominantes em todos os grupos. O grupo dos magros castrados tiveram o perfil de bactérias que era esperado para os obesos, com maior abundância de Firmicutes e menor de Bacteroidetes (P<0,05). Não foram observadas diferenças entre os grupos magros inteiros e obesos castrados. A população microbiana dos gatos obesos mostrou poucas alterações com a perda de peso. No segundo experimento, o teste foi realizado quando os cães estavam magros, após consumo ad libitum para promover o ganho de peso e após a perda de peso. As seguintes concentrações séricas foram analisadas: glicose, colesterol, triglicerídeos, albumina, creatinina, fosfatase alcalina (FA), alanina aminotransferase (ALT), proteínas totais (PT), insulina e leptina. As amostras de fezes foram analisadas para determinar a abundância de Bacteroidetes e Firmicutes. As concentrações de triglicerídeos, colesterol, albumina, FA, ALT e PT foram maiores (P<0,05) nos cães obesos quando comparados aos magros. Bacteroidetes foi mais abundante (P<0,001) nos magros e Firmicutes não diferiu entre os grupos (P>0,05). Após a perda de peso, os níveis de colesterol e PT e a abundância de Bacteroidetes permaneceram inalteradas estatisticamente. Conclui-se então que, nos modelos testados, há diferenças na microbiota fecal entre os grupos dos estudos realizados. Entretanto, no estudo com os gatos a obesidade pareceu não influenciar o crescimento das diferentes populações de microorganismos. / Treatment methods for obesity in dogs and cats focus on calorie restriction, either by restricting the calorie intake of the animal, or by feeding energy diluted diets. However, these methods often fail, requiring additional strategies to promote weight loss. The objective of this study was to investigate differences in the gut microbiota between lean and obese animals and determine whether neutering and/or weight loss are associated with changes in the microbial populations. In the first experiment, the composition of the faecal microbiota was evaluated in lean intact, lean neutered and obese neutered cats, before and after weight loss. The obese cats were submitted to six weeks of energy restriction and showed less fat body mass after weight loss (p<0.001), although the body weight has not changed (P>0.05). Firmicutes followed by Bacteroidetes were the predominant bacterial phyla in all groups. The lean neutered cats had a bacterial profile of what one would expect from the obese cats, with greater abundance (P<0.05) of Firmicutes and lower abundance (P<0.05) of Bacteroidetes. There were no significant differences between lean intact and obese neutered. The microbe populations of obese cats showed very few changes with weight loss. In the second experiment, testing was performed when the dogs were lean, after ad libitum feeding to promote weight gain and after weight loss. Serum concentrations were analyzed: glucose, cholesterol, triglycerides, albumin, creatinine, alkaline phosphatase (ALP), alanine aminotransferase (ALT), total proteins (TP), insulin and leptin. Faecal samples were analyzed to determine the abundances of Bacteroidetes and Firmicutes. Triglycerides, cholesterol, albumin, PA, ALT and TP were greater (P<0.05) in obese dogs when compared to the lean. The abundance of Bacteroidetes was greater (P<0.001) in the lean group and the phylum Firmicutes showed no differences among the groups (P>0.05). After weight loss, the levels of cholesterol and TP and the abundance of Bacteroidetes remained unchanged statistically. In conclusion, differences in the faecal microbiota were observed among the groups of both studies. However, in the study with cats, obesity seems not to influence the growth of diverse populations of microrganisms.

Submitted in partial fulfillment of the requirements for the degree of Masters in Technology in Chemistry, M.L. Sultan Technikon, 2000. / Mycotoxins are a group of natural poisons produced by certain strains of fungal species when they grow under favourable conditions on a wide variety of different substrates. These toxins have been implicated in a wide range of acute diseases in man and animals. Their toxic effects include oesophageal cancer and liver diseases in humans, and carcinogenic effects in experimental rats and poultry. Hence, there is a need to monitor toxin levels in food commodities. / M

Manguezais são ecossistemas costeiros que ocorrem na transição entre os ambientes terrestres e marinhos, ao longo das regiões tropicais e subtropicais, sofrendo influência direta do regime das marés. A comunidade microbiana diversificada é fundamental para a ocorrência da ciclagem de nutrientes e, portanto, manutenção da biodiversidade faunística e florística nestes ambientes. As actinobactérias correspondem um grupo heterogêneo de bactérias filamentosas, que naturalmente habitam o solo, adaptam-se às diversas condições do ambiente, produzem antibióticos e são capazes de colonizar a rizosfera e tecidos internos das plantas. Neste trabalho foi possível observar a diversidade de actinobactérias rizosféricas isoladas nos manguezais de Cananéia e Bertioga SP; avaliar a produção de metabólitos secundários antifúngicos desses microrganismos; analisar o perfil químico dos extratos orgânicos das actinobactérias por espectrômetro de massas, seguidos de avaliação dos constituintes químicos desses extratos por cromatografia em camada delgada e coluna preparativa para separação dos mesmos, onde após os bioensaios com as frações ativas, foi determinado a concentração inibitória mínima dessas frações. / Mangroves are coastal ecosystems which occur in the areas of transition between marine and terrestrial environments throughout the tropical and subtropical regions, suffering direct tide influence. The diverse microbial communities are important to the nutrient cycling occurrence and consequently to the maintenance of these environments fauna and flora biodiversity. The Actinobacteria are a heterogeneous group of filamentous bacteria that naturally inhabit the soil. They can easily adapt to different environmental conditions, producing antibiotics and colonizing the rhizosphere and plants internal tissues. This study aims were: to allow the assessment of the diversity of the diversity of rhizosphere Actinobacteria isolated from mangroves located in Cananeia and Bertioga, cities under the jurisdiction of Sao Paulo State; to evaluate the production of antifungal secondary metabolites of these microorganisms; to analyze the chemical profile of organic extracts of Actionobacteria by mass spectrometry, followed by the evaluation of the chemical components of theses extracts through thin-layer chromatography and preparative column for their separation. After this process minimum inhibitory concentration of the active fractions of the bioassays were determined.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Os produtos naturais apresentam um papel fundamental na descoberta de novos fÃrmacos. Nesse contexto, os produtos naturais marinhos apresentam um grande potencial quÃmico e farmacolÃgico. Resultados prÃvios demonstraram um potencial quÃmico e farmacolÃgico promissor do zoantÃdeo Protopalythoa variabilis encontrado no litoral cearense. Por outro lado, fortes indÃcios apontam que os microrganismos associados sejam os verdadeiros responsÃveis pelo elaborado arsenal de metabÃlitos secundÃrios isolados de invertebrados marinhos. Dessa forma surgiu o interesse em estudar o potencial biomÃdico da microbiota associada ao P. variabilis. Os esforÃos para isolar as bactÃrias renderam um total de 10 colÃnias. Destas, 3 apresentaram padrÃes morfolÃgicos tÃpicos de actinomicetos e 2 delas foram estudadas neste trabalho. A cepa BRA-035 foi identificada como pertencente ao gÃnero de actinomicetos Streptomyces, e seu extrato acetato de etila, resultante da fermentaÃÃo em meio A1, causou alta inibiÃÃo do crescimento celular contra a linhagem de carcinoma de prÃstata metastÃtico PC-3/M, com concentraÃÃo inibitÃria mÃdia (CI50 ) na ordem de pg/mL. O fracionamento bioguiado levou ao isolamento dos compostos glicopiericidina A, piercidina D, e piericidina A, sendo que esta Ãltima apresentou elevada atividade antiproliferativa em linhagens tumorais de cÃncer de ovÃrio (OVCAR-8), cÃncer de cÃlon (HCT-116) e PC-3/M, com CI50 encontradas na ordem de pico atà fento molar. Apesar de jà ter sido amplamente estudada, esta pode ser a primeira ocorrÃncia de atividade antiproliferativa de Piericidina A contra as linhagens testadas neste trabalho, assim como a ordem de grandeza de sua potÃncia. Outra cepa selecionada para estudo, a BRA-060, tambÃm foi identificada como pertencente ao gÃrero Streptomyces. Sua fermentaÃÃo foi otimizada em meio Marine Broth para produÃÃo de extrato acetato de etila com citotoxicidade contra a linhagem de leucemia promielocÃtica HL-60 em ng/mL. O fracionamento bioguiado deste extrato resultou no isolamento de trÃs dicetopiperazinas: a ciclo (L-Tyr-trans-L-Pro), a ciclo(L-Phe-cis-4-OH-D-Pro) e a ciclo(L-Phe-trans-4-OH-L-Pro). As dicetopiperazinas isoladas apresentaram potente atividade citotÃxica contra as linhagens de glioblastoma (SF-295), cÃncer de ovÃrio (OVCAR-8), HCT-116 e HL-60 e outra leceumia K-562, com valores de CI50 variando de nano a micro molar. Embora suas estruturas jà terem sido descritas pela literatura, nenhum trabalho foi feito quanto a suas atividades citotÃxicas, podendo este ser o primeiro relato sobre suas propriedades antitumorais. Esses resultados ressaltam a importÃncia da microbiota associada ao zoantÃdeo P. variabilis, encontrado no litoral cearense, como fonte de compostos com potencial anticÃncer. / Natural products exhibit a fundamental role in the discovery of new medicines. Marine natural products possess a huge chemical and pharmacological potential to yield new leads. Previous results support the promising chemical and pharmacological potential of the zoanthid Protopalythoa variabilis from the coast of Ceara State. On the other hand, strong evidences have indicated that associated microorganisms are the producers of the elaborate arsenal of secondary metabolites isolated from marine invertebrates. Then this study aimed to investigate the biomedical potential of associated microbiota to P. variabilis. The efforts to isolate associated bacteria yielded 10 different strains, and 3 of them showed typical actinomycete morphology. Here 2 of these actinomcetes had their anticancer potential studied. The strain BRA-035 belongs to the genus Streptomyces. BRA-035 culture using A1 broth yielded an acetate extract with potent cytotoxicity against a prostatic carcinoma cell line (PC-3/M), with inhibitory concetrantion mean (IC50) value in pg/mL. The bioguided fractionation led to the isolation of glucopiericidin A, piericidin D and piericidin A, and the later showed high antiprolifetative activity against ovarian cancer (OVCAR-8), colon cancer (HCT-116) and PC-3/M with IC50 values ranging from pico to fentomolar. Although Piericidin A has been widely studied, this might be the first report of cytotoxic activity against the lineages tested in this work, as well as the magnitude of its potency. Another strain selected for this study, BRA-060, was identified as belong to the genus Streptomyces also. The fermentation was optimized in marine broth to produce an acetate extract highly cytotoxic against a leukemia cell line (HL-60). The bioguided fractionation of these extracts yielded three diketopiperazines: cyclo (L-Try-trans-L-Pro); cyclo (L-Phe-cis-4-OH-D-Pro) and cyclo (L-Phe-trans-4-OH-D-Pro). The diketopiperazines isolated showed potent cytotoxic activity against glioblastoma (SF-295), ovarian cancer (OVCAR-8), HCT-116, HL-60 and another leukemia (K-562) The IC50 values ranging from nanomolar and micromolar. Althought their structures have already been described in the literature, there was no previous report of their cytotoxic acitivities. Altogether, these results emphasize the value of microbiota associated with the zoanthid P. variabilis, found on the coast of Cearà State, as a source of active compounds.

Orientadores: Renata de Oliveira Mattos-Graner, Edgard Graner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T08:12:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Negrini_ThaisdeCassia_M.pdf: 1172330 bytes, checksum: 91a509113d532e152ab6ac6d4232f85f (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Streptococcus mutans é o principal patógeno da cárie dentária. Antígenos (Ags) secretados ou associados à superfície celular de S. mutans participam deste processo e incluem a proteína ligante de glucano B (GbpB), a qual pode influenciar na susceptibilidade à infecção por S. mutans. Estudos recentes indicam que a expressão de antígenos de superfície reconhecida por fagócitos é controlada por sistemas de dois componentes (SDC) em espécies relacionadas a S. mutans. O objetivo deste projeto foi investigar o efeito de variações na produção de GbpB e a influência de dois SDC, Cov (de control of virulence) e Vic (de virulence control), no padrão de internalização de S.mutans por macrófagos de camundongos. Foram avaliadas 10 cepas clínicas distintas previamente caracterizadas quanto ao padrão de síntese de GbpB e quatro mutantes knock-out de dois SDC: dois mutantes covR- e dois mutantes vicH-. Para isto, macrófagos murinos da linhagem Balb/c foram cultivados em meio RPMI e expostos a diferentes cepas de S. mutans. Os níveis de internalização bacteriana por macrófagos foram determinados através da contagem de macrófagos com bactérias internalizadas, com auxílio de microscópio óptico. Os mecanismos de internalização foram caracterizados em ensaios semelhantes com macrófagos previamente tratados com inibidores específicos dos processos de fagocitose, macropinocitose e endocitose mediada por clatrina e em análises de microscopia eletrônica de transmissão. Não houve diferença estatisticamente significante nos níveis de internalização das cepas que variavam quanto à produção de GbpB. Os mutantes vicH- foram significativamente menos internalizados quando comparados às cepas selvagens e aos mutantes covR. As análises de MET e ensaios com inibidores de processos específicos de internalização indicam que, na ausência de opsoninas, S. mutans pode ser internalizado por diferentes mecanismos incluindo-se fagocitose, macropinocitose e endocitose mediada por clatrina. Esses dados poderão auxiliar na compreensão dos mecanismos de captação e processamento de S. mutans por células apresentadoras de antígenos e dos fatores que influenciam no padrão de resposta imune adaptativa a estes microrganismos / Abstract: Streptococcus mutans are the main pathogens of dental caries. Antigens (Ags) secreted or associated with the bacterial cell surface may influence in the susceptibility to infection by S. mutans. These include the virulence protein Glucan-binding protein B (GbpB). Recent studies indicate that the expression of surface antigens recognized by phagocytes is controlled by systems of two components (TCS, Two Component System) in several streptococci species. The objective of this project was to investigate the effect of variations in the production of GbpB and the influence of the two-component systems (TCS), Cov and Vic, in the pattern of internalization of S. mutans by macrophages from mice under the absence of opsonins. Thus, levels of bacterial internalization by macrophages were evaluated in 10 different clinical strains of S. mutans previously characterized regarding the patterns of GbpB production, and in four knockout mutants of the TCS, two covR- mutants and two vicH- mutants. To this purpose, murine macrophages of the lineage Balb/c were cultured in RPMI medium and exposed to different strains of S. mutans. The levels of macrophages with internalized bacteria were determined with the help of an optical microscope. Patterns of bacteria internalization were analyzed in similar assays using macrophages previously treated with inhibitors of specific mechanisms of internalization (phagocytosis, macropinocytosis and endocytosis mediated by clathrin) and by electron transmission microscopy (ETM) analyses. There was no statistically significant difference in the efficiency of internalization between the strains that differed regarding production of GbpB. The mutants vicH- was significantly less internalized when compared with the respective wild type strains and mutants covR-. Analyses with specific inhibitors and ETM indicated that S. mutans can be internalized by phagocytosis, macropinocytosis and endocytosis mediated by clathrin. These data may help to understand the mechanisms by which S. mutans is internalized and processed by antigen-presenting cells and the factors affecting patterns of adaptative immune response to these bacteria / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

O objetivo deste estudo foi avaliar a suplementação de um probiótico composto por cepas de Bacillus subtilis e Bacillus licheniformis, fornecidos via sucedâneo lácteo, no que se refere ao escore e pH fecal, contagem de microrganismos intestinais, parâmetros sanguíneos e desempenho geral dos animais. Foram utilizados 24 animais da raça Holandês que receberam 4L/dia de sucedâneo comercial (15PB:15EE), além de livre acesso a água e concentrado inicial. O desaleitamento ocorreu na 8ª semana de vida. Os animais foram distribuídos em delineamento de blocos casualizados, em dois tratamentos: 1) Controle - sem a suplementação de probiótico; 2) Suplementação de 2g/d (1,6 x 109 UFC) de Bacillus subtilis e Bacillus licheniformis via sucedâneo lácteo. Semanalmente foram realizadas pesagens e aferições de medidas corporais (altura de cernelha, perímetro torácico e largura de garupa); e colheitas de sangue para determinação de glicose, proteína total, ureia e albumina, além de determinação de hematócrito. Foram colhidas amostras semanalmente para contagem de bactérias ácido láticas e enterobactérias e determinação de pH fecal. O monitoramento do consumo de concentrado e do escore fecal foi realizado diariamente. O peso corporal, o ganho de peso médio diário e as medidas corporais não foram alteradas (P>0,05) pela suplementação do probiótico contendo Bacillus subtilis e Bacillus licheniformis; muito embora tenham apresentado efeito significativo de idade dos animais (P<0,001). O escore fecal, pH fecal e consumo de concentrado diário também não foram afetados pela suplementação com probiótico. No entanto, o consumo de concentrado e o pH fecal sofreram influência da idade em resposta ao crescimento natural dos bezerros. A contagem de bactérias ácido láticas foi maior que número de enterobactérias durante todo o período (P<0,05). Apenas as enterobactérias sofreram efeito da idade (P<0,05), enquanto as bactérias ácido láticas permaneceram variando, porém dentro de um padrão constante. Os parâmetros sanguíneos também não foram afetados pela suplementação com probiótico (P>0,05) mas todos, com a exceção da albumina, tiveram influência da idade (P<0,001). A suplementação com o probiótico contendo Bacillus subtilis e Bacillus licheniformis via sucedâneo não apresentou benefícios no desempenho ou no metabolismo de bezerros leiteiros, bem como não reduziu a ocorrência de casos de diarreia. / The objective of this study was to evaluate the supplementation of a probiotic containing strains of Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis, supplied via milk replacer, with regard to fecal score and pH, intestinal microorganisms count, blood parameters and overall performance of the animals. Twenty-four Holstein calves were utilized and received 4L/d of liquid diet consisting of commercial milk replacer (20CP:15EE), and had free access to water and starter concentrate. Weaning occurred at the 8th week of age. Animals were distributed in a randomized block design, in the following treatments: 1) Control - without supplementation with probiotic, 2) Supplementation: 2g/d of Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis (1.6 x 109 CFU), via milk replacer. Every week calves were weighted and body measurements were taken (hip width, withers height and heart girth). Blood samples were drawn weekly for determination of hematocrit, glucose, total protein, urea and albumin. Fecal samples were weekly collected for lactic acid bacteria and enterobacteria couting and fecal pH determination. Concentrate starter intake and fecal scores were monitored daily. Body weight, average daily gain, and corporal measurements were not affected (P>0,05) by the supplementation of probiotic; however, presented a significant age effect (P<0,001). The fecal score, fecal pH and starter intake were not affected by probiotic supplementation (P>0.05). However, starter intake and fecal pH were affected by age due to calves\' natural growth. The acid lactic bacteria count was higher than the count of enterobacteria during the whole evaluation period. Only enterobacteria were affected by the age of animals, while acid lactic bacteria remained constant despite little variations. Blood parameters were also not affect by supplementation of probiotic (P>0.05), but all of them, except albumin concentrations, were influenced by age (P<0,001). The supplementation with probiotic containing Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis via milk replacer presented no benefits in dairy calves performance or metabolism and did not reduced the occurrence of diarrhea.