Submitted by Leonardo Freitas (leonardo.hfreitas@ufpe.br) on 2015-04-14T13:32:59Z No. of bitstreams: 2 TESE ELVIA BARROS.pdf: 1865050 bytes, checksum: 9d5d80f53c3507afa22244172a691397 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T13:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE ELVIA BARROS.pdf: 1865050 bytes, checksum: 9d5d80f53c3507afa22244172a691397 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-06-12 / CAPES / A imunidade inata e a imunidade adaptativa são ferramentas fundamentais de resposta do sistema imune contra a invasão microbiana. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de polimorfismos nos genes da Beta-defensina-1 (hBD-1), da Lectina de Ligação da Manose 2 (MBL-2), da Interleucina 6 (IL-6) e do Fator de Necrose Tumoral - alfa (TNF-α) em pacientes portadores de alterações pulpares e perirradiculares. Foram incluídos no estudo 73 pacientes, sendo divididos em 4 grupos: 13 pacientes com Pulpite Irreversível, 12 pacientes com Abscesso Periapical Agudo, 23 pacientes com Periodontite Apical Crônica e 25 pacientes sem tratamento endodôntico realizado (Grupo Controle). Foi realizada a coleta de sangue dos pacientes e extração do DNA das amostras. A genotipagem dos Polimorfismos de Único Nucleotídeo dos genes da hBD-1, da MBL-2, da IL-6 e do TNF-α foi realizada através da Técnica de Reação em Cadeia de Polimerase em tempo real (qPCR). Os resultados demonstraram que os indivíduos com o genótipo IL-6 GC possuem 5% menos chance de não ter o quadro clínico de Periodontite Apical Crônica (p = 0,0113). Conclui-se que o genótipo IL-6 (-174G/C) GG mostrou-se associado ao desenvolvimento de alterações perirradiculares crônicas na população estudada. Os Polimorfismos dos genes da hBD1(-44C/G), MBL-2 (codons 52, 54 e 57) e TNF-α (-308) não se mostraram associados ao desenvolvimento de alterações perirradiculares na população estudada. Esta pesquisa sugere que fatores genéticos possam estar relacionados com a susceptibilidade para desenvolver alterações perirradiculares

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:02:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9457_1.pdf: 567516 bytes, checksum: 6a2c440598380b8f4276b0d42882bf4f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / O Papillomavirus humano (HPV) é responsável por afetar anualmente 500 mil mulheres com câncer cervical invasivo. Fatores de risco podem facilitar a persistência do vírus da cérvice uterina. Polimorfismos genéticos em regiões regulatórias e codificadoras de genes de citocinas estão associadas a patogênese de um vasto número de doenças humanas. Este trabalho objetivou determinar se existe relação entre os polimorfismos existentes na região -G308A do gene TNFalfa; e nas regiões -G137C e -C607A do gene IL18 na susceptibilidade a infecção pelo HPV e na progressão das lesões intraepitelial cervical. O estudo foi realizado com 122 mulheres HPV+ e 132 mulheres HPV-(controle). Os polimorfismos dos genes TNFalfa; e IL18 foram analisados pela técnica Specific Sequence Polymosphism (PCR-SSP) e analisadas em gel de agarose a 1,5%. As análises estatísticas para verificar a significância do estudo dos genótipos foram realizadas utilizando o programa BioEstat 5.0. Os resultados mostraram uma prevalência de 49,18% da infecção pelo HPV-16 e 70,49% delas apresentaram lesão cervical de alto grau. Em relação aos polimorfismos houve associação do alelo mutante na região -308A do gene TNFalfa; e -607A do gene IL18 com a susceptibilidade a infecção pelo HPV (p=0,0008; p<0,0001, respectivamente), mas não foi verificada relação destes genes com a susceptibilidade ao desenvolvimento das lesões (p>0,05). Porém não foi encontrada associação significativa em relação a região na região -137 do gene IL-18. Estes resultados sugerem dois possíveis marcadores genéticos de susceptibilidade a infecção pelo HPV na população em estudo e que estes não podem ser usados como marcadores de progressão da lesão cervical.

Orientadores: Marcelo Lopes de Lima, Nelson Rodrigues Netto Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T00:02:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pedro_RenatoNardi_D.pdf: 3805668 bytes, checksum: 8b1ea901163cf75ede5f727e7f455e0c (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O tratamento definitivo das massas renais malignas é primordialmente cirúrgico, sendo a nefrectomia radical eleita por muitos anos a cirurgia padrão para o tratamento do câncer renal localizado. Entretanto, com o envelhecimento populacional, maiores são as preocupações em se manter a capacidade funcional dos órgãos e sistemas do corpo humano. Portanto, a necessidade de se preservar tecido renal sadio durante o tratamento do câncer renal localizado, com auxílio de cirurgias parciais poupadoras de néfrons, se tornou imperativa. O tratamento de lesões renais sólidas pequenas passou a ter diferentes formas de abordagem, que variam desde técnicas de termoablação percutânea ou laparoscópica, nefrectomia parcial laparoscópica e aberta à até tradicional nefrectomia radical aberta. O uso de modalidades de tratamento cirúrgico com mínimo grau de agressão passou a ganhar atenção, devido à rápida recuperação do paciente, ao menor risco de complicações cirúrgicas e aos bons resultados oncológicos. Ablação por radiofreqüência (ARF) tem se mostrado um meio eficiente no tratamento de tumores renais pequenos e exofiticos. Atualmente, sua indicação é restrita a lesões de até 4 cm. O presente estudo foi montado para avaliar o uso conjunto da nanopartícula de ouro e fator alfa de necrose tumoral (TNF alfa) à ARF no tratamento de um modelo experimental de tumor renal. Materiais e Métodos: Trinta e sete coelhos brancos da raça New Zealand tiveram implantados em seus rins, através de uma laparotomia, um fragmento de 1 mm3 de tumor VX-2. Após 14 dias do implante, quando seus rins haviam desenvolvido uma lesão tumoral sólida menor que 1 cm, os animais foram divididos em 3 grupos de 10 e 1 grupo de 7 integrantes (sham) de acordo com o tratamento selecionado para o tumor renal focal: 1) Nanopartícula com TNF alfa; 2) Ablação por radiofreqüência; 3) Nanopartícula com TNF alfa seguido de Ablação por radiofreqüência; 4) Grupo sham. Todos os animais foram submetidos a mesma cronologia de tratamento, composta por 2 laparotomias e eutanásia. Os grupos tratados com as nanopartículas de ouro com fator alfa de necrose tumoral isolada ou complementarmente, as receberam 4 horas antes do procedimento cirúrgico na dose de 200 µm/Kg. A análise de resultados foi realizada com medidas macroscópicas e microscópicas do volume da área de ablação ou tumoral, segundo a fórmula do volume de uma elipsóide. Avaliação estatística foi realizada com Teste T Student, sendo considerado significante p<0.05. Resultados: O grupo que recebeu a nanopartícula com fator alfa de necrose tumoral e depois foi submetido à ARF apresentou maior zona de morte celular completa quando comparado ao grupo tratado somente com ablação por radiofreqüência (0.30 ± 0.07 vs 0.23 ± 0.03 mL, P=.03). A zona de transição foi menor no grupo que recebeu a nanopartícula com fator alfa de necrose tumoral e ablação por radiofreqüência quando comparada ao grupo tratado somente com ablação por radiofreqüência (0.08 ± 0.02 vs 0.13 ± 0.05 mL, P =.01). Conclusão: O presente estudo demonstrou que o uso da nanopartícula de ouro com TNF alfa sensibiliza o insulto térmico sofrido por tumores sólidos decorrentes da ablação por radiofreqüência / Abstract: Radical nephrectomy has long been considered as gold standard treatment for localized renal tumors. However due to an increase in life expectation, organ sparing surgeries have emerged with the purpose of preserving as much healthy tissue as possible. Therefore, nephron sparing surgeries have become another valid option for localized renal tumors. There are different modalities of nephron sparing procedures, including open partial nephrectomy, laparoscopic nephrectomy and termoablative procedures. The later is associated with less morbidity and fast patient recovery. Radiofrequency ablation (RFA) is a well-known termoablative procedure and it has been most effective when the tumors are small, exophytic, and away from vital structures. The present study was designed to analyze the adjuvant use of gold nanoparticle with tumor necrosis factor alpha prior to radiofrequency ablation in a translational model of localized renal tumor. Material and Methods: A total of 37 New Zealand White rabbits had VX-2 tumors implanted into their kidneys; they were allowed to grow for 14 days, when a tumor mass of less than 1 cm could be detected. The animals were then split into 3 treatment groups of 10 rabbits each and a sham group of 7 rabbits as follows: (1) Tumor necrosis factor alpha plus nanoparticle, (2) Radiofrequency ablation, (3) Tumor necrosis factor alpha nanoparticle (200 µm/Kg) followed 4 hours later by radiofrequency ablation. All groups were subjected to the same milestones of the experiment which was comprised of 2 laparotomies and sacrification. Gross and microscopic measurements of the ablation size as well as histological analysis using hematoxylin and eosin staining were performed to determine the effect of TNF alpha nanoparticle on the ablation. Statistical analysis was performed with Student's T test, considering p < 0.05 as significant. Results: The RFA plus TNF alpha nanoparticle group had a larger zone of complete cell death than the RFA-only group (0.30 ± 0.07 vs 0.23 ± 0.03 mL, P=.03). The zone of partially ablated tissue was smaller in the RFA plus TNF alpha nanoparticle group than in the RFA-only group (0.08 ± 0.02 vs 0.13 ± 0.05 mL, P =.01). Conclusions: We have demonstrated the efficacy of TNF alpha nanoparticle in enhancing RFA in a translational kidney tumor model. The potential usage of TNF alpha nanoparticle to improve RFA of renal cell carcinoma merits further study / Doutorado / Fisiopatologia Cirúrgica / Doutor em Ciências

Orientador: Selma Giorgio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T22:06:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Albuquerque_MarcosEduardoLamasde_M.pdf: 618346 bytes, checksum: d8a7d01dacd5919516d8000db3c0e660 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A leishmaniose tegumentar é uma parasitose causada por protozoários do gênero Leishmania que acomete preferencialmente a pele e/ou as mucosas e caracteriza-se pelo aparecimento de lesões ulcerosas. Histologicamente, esta lesão caracteriza-se pela desintegração da epiderme e da membrana basal, com grande incidência de histiócitos, linfócitos, granulomas e proliferação de parasitos. Como conseqüência, a região lesada apresenta redistribuição de vasos sanguíneos, e dificuldades na difusão de oxigênio, resultando em microambiente hipóxico. Macrófagos se adaptam a hipóxia, alterando seu metabolismo, produção de linfocinas e atividade fagocítica. No presente trabalho comparamos os efeitos da hipóxia (6% O2) e da normóxia (21% O2) na infecção in vitro de macrófagos humanos obtidos de monócitos de sangue periférico com o parasito Leishmania amazonensis. Culturas de macrófagos humanos expostos a hipóxia antes da infecção com L. amazonensis mostraram redução na porcentagem de células infectadas quando comparadas com culturas de macrófagos humanos que permaneceram em normóxia. Nós também investigamos se a hipóxia estaria inviabilizando a sobrevivência dos macrófagos (teste do MTT) e induzindo a produção da linfocina TNF-a (boiensaio com células L929). Macrófagos humanos submetidos à hipóxia não mostraram diferenças significativas em relação viabilidade quando comparados aos macrófagos que permaneceram em ambiente normóxico culturas de macrófagos humanos estimulados com LPS e submetidos a períodos de hipóxia produziram mais TNF- a do que culturas de macrófagos estimulados com LPS que permaneceram em normóxia. Porém quando infectados com L. amazonensis, macrófagos estimulados com LPS em hipóxia mostraram produção significativamente menor de TNF- a quando comparados a macrófagos não infectados e estimulados por LPS, em ambiente hipóxico. Verificamos também que a produção de TNF- a nas culturas de macrófagos infectados com L. amazonensis, estimuladas com LPS, em hipóxia foi similar a produção de TNF- a dos macrófagos infectados com L. amazonensis, estimulados com LPS, mas que permaneceram em normóxia. Nossos resultados indicam que hipóxia altera a susceptibilidade de macrófagos humanos obtidos de monócitos de sangue periférico para a infecção com L. amazonensis, e que a produção de TNF- a não está envolvida no mecanismo pelo qual estas células controlam a carga parasitária / Abstract: The tegumentary leishmaniasis is a parasitic disease caused by protozoa Leishmania which attacks skin and/or mucosal tissues. The lesions are histologically characterized by degeneration of epidermal and the basal membranes with infiltration of histiocytes, lymphocytes, granuloma and parasite proliferation. Cutaneous lesions are associated with rearrangement of the blood vessels and decreased oxygen diffusion, resulting in a hypoxic microenvironment. Macrophages adapt to hypoxia altering their metabolism, lymphocytes production and phagocytosis activity. In the present study we have compared the effect of hypoxia (6% O2) with normoxia (21% O2) in human macrophages, derived from peripheral blood monocytes, infected with Leishmania amazonensis. Human macrophages exposed to hypoxia before infection with L. amazonensis showed a reduction of the percentage of infected cells. Cell viability was tested by MTT and TNF- a production was detected by bioassay using cell line L929. Human macrophages exposed to hypoxia showed similar viability when compared with human macrophages in normoxia. Human macrophages stimulated with LPS and exposed to hypoxia increased TNF- a production when compared with macrophage timulated by LPS cultured in normoxia. However, macrophage, infected with L. amazonensis stimulated with LPS and exposed to hypoxia showed a reduction in TNF- a production when compared with non infected macrophage, stimulated with LPS and exposed to hypoxia. We also observed that TNF- a production in L. amazonensis infected macrophages stimulated with LPS and exposed to hypoxia was similar to TNF- a production of infected macrophages stimulated with LPS, in normoxia. Our data indicated that hypoxia cam alter human macrophages susceptibility to L. amazonensis infection and no correlation between TNF-a production and control of parasite infection in this cells under hypoxia conditions / Mestrado / Mestre em Parasitologia

Orientador: Ibsen Bellini Coimbra / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T21:15:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sartori_AngelicaRossi_D.pdf: 3838547 bytes, checksum: 0be815456ed0b3b8faf496ae6738da31 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O Fator Induzido por Hipóxia-1 (Hypoxia Inducible Factor-1 - HIF-1) é um fator de transcrição responsável por transcrever genes relacionados às alterações nas concentrações de oxigênio e sobrevivência celular. A cartilagem articular é um tecido avascular e o ambiente dos condrócitos é caracterizado por condições de hipóxia dentro da matriz. Nestas condições a proteína HIF-1alfa do Fator de transcrição Induzido por Hipóxia-1alfa (HIF-1alfa) é necessário para controlar o metabolismo e a integridade funcional da cartilagem. Além da hipóxia algumas citocinas como IL-1? e TNF? são também capazes de estabilizar HIF-1?, além de serem consideradas as principais mediadoras da osteoartrite (OA). Objetivo: Verificar a participação da IL-1? na regulação do HIF-1? em condições normais de oxigênio; Verificar a utilização da via da Fosfatidil-Inositol-3-Kinase (PI-3K) pelo HIF-1? e analisar a participação HIF-1? na expressão de colágeno tipo II e agrecano e a sua regulação pelas citocinas TNF-? e da IL-1?. Material e Métodos: Condrócitos humanos provenientes de pacientes em OA, submetidos à artroplastia de joelho, foram cutivados em suspensão e em monocamada, submetidos ou não ao silenciamento do gene do HIF-1? pela técnica de Interferência por RNA e estimulados com IL-1?, TNF? e LY294002, o inibidor da via da PI-3K em condições normais de oxigênio e em hipóxia e foram submetidos à extração de proteína nuclear, extração de RNA e precipitação das proteínas do meio de cultura das células. A análise das proteínas foi feita por meio da técnica de Western Blotting para a detecção da proteína nuclear HIF-1? e do colágeno tipo II no meio de cultura das células. O RNA foi analisado pela técnica de PCR em Tempo Real para a quantificaçãos dos genes do HIF-1?, Colágeno tipo II e Agrecano. Resultados: IL-1? aumentou a expressão da proteína nuclear HIF-1?, mas não alterou a expressão do RNAm. Essa modulação utilizou a via da PI-3K. A hipóxia aumentou as concentrações do RNAm do HIF-1? em comparação com as condições normais de oxigênio, mas IL-1? e TNF? não alteraram o RNAm do HIF- 1? em condições normais de oxigênio e em associação com a hipóxia, inibiram o efeito regulatório positivo desta sobre o HIF-1?. A hipóxia isoladamente também aumentou RNAm de colágeno tipo II, o que foi anulado pelo estímulo associado com a IL-1?. Nos grupos de condrócitos com deficiência do HIF-1? (silenciados), em quaisquer condições de oxigênio, IL-1? e TNF? não alteraram significativamente a expressão de HIF-1?, mas em hipóxia, a expressão de colágeno tipo II foi regulada negativamente nesses grupos. A associação entre a falta do HIF-1? e as citocinas diminuiu ainda mais a expressão do colágeno tipo II em condições de hipóxia. Em todas as análises não foram observadas diferenças significativas nas expressões do RNAm do agrecano e na análise do colágeno tipo II das proteínas precipitadas dos meios de cultura das células. Conclusão: IL-1? aumentou a expressão da proteína nuclear HIF-1? pós-transcrição. A regulação do HIF-1? pela IL-1? em situação normal de oxigênio ocorreu, ao menos em parte, pela PI-3K. O HIF-1? se relacionou positivamente com a expressão do gene do colágeno tipo II, principalmente em hipóxia, mas não com os níveis da proteína. Não houve associação com a expressão do gene do agrecano / Abstract: Introduction: Hypoxia Inducible Factor -1 (HIF-1) is a transcription factor that regulates the expression of genes related with oxygen concentration e cellular survive. Articular cartilage is a non-vascular tissue and the condrocytes microenviroment are caracterized by hypoxic conditions inside the extracelluar matrix. In this condition, the protein HIF-1?, from HIF-1 is necessary to the metabolism control and cartilage functional intengrity. Some citokines like IL-1? and TNF?, as well as hypoxia, are capable to stabilize HIF-1? and are essential in oateoarthritis (OA) progression disease. Objective: To verify the participation of IL-1? in the HIF-1? regulation under normal conditions of oxygen; To verify if the pathway of phosphatidilynositol-3-Kinase (PI-3K) is used in this modulation; To analyse HIF-1? participation in the collagen type II and aggrecan gene expression and your regulation by TNF-? and IL-1?. Material and Methods: Human OA chondrocytes were obtained from patients with OA that underwent total knee joint replacement surgery, were cultured either in suspension or monolayer. They were submitted to HIF-1? gene silencing by RNA Interference and lately stimulated with IL-1?, TNF? and LY294002, a specific inhibitor to Phosphatidilinosiltol - 3- Kinase (PI-3K) pathway in normal conditions of oxygen and in hypoxia. The condrocytes were submitted to protein nuclear extraction, RNA extraction and protein precipitation of culture media from the experiments. The proteins were analyzed by Western Blotting to HIF-1? detection in nuclear extraction and collagen type II detection in precipitated media. The RNA were analized by Real Time PCR to HIF- 1?, collagen type II and aggrecan gene quantification. Results: HIF-1? expression is up-regulated by IL-1? at the protein level but not in the mRNA expression. This modulation used, at least in part, the PI-3K pathway. Hypoxia enhanced the mRNA concentrations of HIF-1? when compared with normal conditions of oxygen, but in this cases IL-1? and TNF? did not change mRNA expression of HIF-1?. In association with hypoxia, these citokines inhibited the positive regulatory effect under HIF-1? mRNA expression. Hypoxia up-regulated collagen type II gene expression and that was inhibited by the association with IL-1?. In the groups with lack of HIF-1? (silenced), in both oxygen conditions, IL-1? and TNF? did not cause any significant change of the HIF-1? mRNA expression, but in hypoxia, collagen type II was up-regulated in those groups. The association between the lack of HIF- 1? and citokines down-regulated more strongly collagen type II in hypoxia. In all analyzes it was not observed significant differences in the aggrecan mRNA expression and collagen tipe II protein from cultured media of the cells Conclusion: IL-1? post-trancriptionaly up-regulated the HIF-1? protein level. HIF- 1? regulation by IL-1? in normal conditions of oxygen used, at least in part, the PI- 3K pathway. HIF-1? positively related with gene expression, but not with the protein levels, of collagen type II, mainly in hypoxia. There was no relation in the HIF-1? and aggrecan gene expression / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Luis Carlos Spolidorio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T20:01:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Neves_KarinaAntunes_D.pdf: 1751187 bytes, checksum: adac4b09e6d649c2ec3a0006d3b1ae83 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Vários relatos na literatura sugerem que a Ciclosporina A (CsA) aumenta a remodelação óssea com a reabsorção excedendo a formação, resultando em perda óssea. Os mecanismos da perda óssea associada à CsA são complexos e envolvem marcadores ósseos celulares e produtos dos osteoblastos e osteoclastos. Dentre os mediadores imunológicos, a CsA parece ter efeitos na produção de óxido nítrico (NO), o qual exerce efeitos bifásicos sobre o osso. O objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos da CsA sobre o osso através da mensuração da densidade mineral óssea (BMD), análise bioquímica (fosfatase alcalina total, cálcio sérico e fósforo) e relacionar com a expressão de NO e TNFa pelos macrófagos peritoniais de camundongos. Sessenta camundongos foram divididos em 4 grupos e receberam injeções subcutâneas diárias de CsA 50mg/kg peso corporal, durante os períodos de 7, 14, 28 e 60 dias (n=lO) e o controle recebeu solução salina (n=5). Amostras sanguíneas foram obtidas através de punção cardíaca e foram analisados: cálcio sérico, fósforo e fosfatase alcalina. Os macrófagos peritoniais foram obtidos de cada camundongo, 3 dias após a injeção intraperitonial de tioglicolato de sódio. As células foram incubadas com lipopolossacarídeo . (LPS) e os sobrenadantes foram usados para o ensaio de produção de NO e TNFa. As radiografias digitais dos fêmures foram obtidas através de um sistema de imagem digital, CDRR. A densidade mineral óssea -(BMD) foi avaliada com o auxílio do software Photoshop 7,0 (Microsoft, 2003). A concentração dos marcadores séricos ósseos variou com o tempo de administração da CsA. Houve diminuição de cálcio após 28 dias e fósforo e ALP após 7 dias. A BMD diminuiu significativamente na epífise distal dos fêmures, a partir de 14 dias e na epífise proximal, somente após 60 dias, nos camundongos submetidos ao tratamento com CsA. A produção de NO e TNF-a aumentou significativamente nos camundongos tratados com CsA (período de 7 e 14 dias). A partir dos resultados do presente trabalho confirmamos que a CsA induziu perda óssea. Houve um sinergismo entre a perda óssea e a diminuição de ALP' cálcio e fósforo sérico, assim como o aumento dos níveis de NO e TNF-a / Abstract: Several reports suggest that Cyclosporin A (CsA) causes increased bone turnover and remodeling with resorption exceeding formation, resulting in bone loss. The mechanism of CsA-induced bone loss is complex and can involve cellular bone markers and osteoblasts and osteoclasts products. CsA seems to have effects on nitric oxide (NO) production, which has a biphasic effect on osteoclastic bone resorption. The aim of the present study was to evaluate the effects of the CsA on bone by Bone Mineral Density (BMD), biochemical analysis (Total Alkaline Phosphatase - ALP and serum calcium) and to relate them with the expression of NO and Tumor necrosis factor alpha (TNFa.) by peritoneal macrophage of mice. Sixty male mice were distributed into 4 groups and CsA (Sandimmun Novartis) was injected subcutaneously in a daily dose of 50mg/kg body weight during the periods of 7, 14, 28 and 60 days (n=10), whereas control mice received saline solution (n=5). Blood samples were obtained by direct cardiac puncture. Serum calcium and total alkaline phosphatase levels were obtained. Macrophages were obtained trom the peritoneal cavities of treated and control mice 3 days after intraperitoneal administration of sodium thyoglycollate. Cells were incubated with lipopolysaccharide (LPS). After incubation, the culture supernatants were used for NO-and TNFa production assays. Digital radiographs of femurs were obtained with the use of a computerized imaging system, CDR R. Bone mineral density (BMD) measurements were made with the help of the software Photoshop 7,0 (Microsoft, 2003). The concentration of serum bone markers varied with the period of CsA administration. There was a significant decrease in the calcium levels after 28 days and ALP after 7 days. The BMD decreased significantly on distal epiphysis of femurs after 14 days and on proximal epiphysis after 60 days, in the mice submitted to CsA therapy. NO and TNF-a production had a significant increase in mice treated with CsA (7 and 14 days). Based on the results ofthe present study we confirmed that CsA induces bone loss in vivo. There was a synergism between the bone loss and the decrease of alkaline phosphatase, and calcium, and the increase ofNO and TNF-a / Doutorado / Patologia / Doutor em Estomatopatologia

Orientadores: Stephen Hyslop, Maria Cristina Cintra Gomes Marcondes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T19:23:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Saccon_CassiaMariaToledo_M.pdf: 7279478 bytes, checksum: eb7fda24e7d486cd0267a344badc1b36 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O acidente causado por serpentes botrópicas produz intensa hemorragia e mionecrose local, com perda e degradação tecidual. Neste trabalho, investigamos as atividades do proteossomo (via seletiva da degradação protéica), catepsinas (proteases lisossomais) e calpaína (protease neutra dependente de cálcio) no envenenamento causado por peçonha de Bothrops jararacussu. Também analisamos a capacidade do MG-132, inibidor proteossômico, em atenuar os efeitos causados pela peçonha. A peçonha (25 µg e 75 µg) foi injetada em músculo gastrocnêmio de camundongos, que foram sacrificados 1, 3, 6, 12, 24, 48, 72 h e 7, 14, 21, 28 dias após o envenenamento. Os músculos tratados e contralaterais foram retirados e processados para histologia e para ensaios fluorimétricos e colorimétricos das enzimas e o sangue foi coletado para quantificação da creatina quinase (CK, indicador da mionecrose). A peçonha de B. jararacussu causou hemorragia e mionecrose (fase 1, até 6 h a 12 h pós-envenenamento - p.e.), a presença de infiltrado inflamatório e desencadeou a formação de miotubos e mioblastos (fase 2, de 12 h a 72 h p.e.) e o aparecimento de células regenerativas com maior deposição de colágeno ao redor dessas células (fase 3, 7-28 dias p.e.). De modo geral, as alterações mais marcantes ocorreram com a dose maior da peçonha. O dano tecidual agudo foi confirmado pelo aumento nos níveis plasmáticos de CK entre 1 h e 6 h p.e., com pico em 3 h. Houve redução na concentração de aminoácidos livres do músculo durante as primeiras 24 h, seguida por retorno a níveis normais. Também houve redução significativa na atividade proteossomal (até 48 h) nos músculos envenenados seguida por recuperação e aumento significativo em alguns períodos da regeneração. Nesses períodos de regeneração, houve aumento da expressão das subunidades 20Sa e 11S do proteossomo, principalmente com a dose maior da peçonha. O inibidor proteossômico diminuiu a atividade quimiotripsina e o número de células regenerativas, mas esses efeitos também foram observados no grupo que recebeu apenas o veículo do inibidor (DMSO). A calpaína foi ativada nas primeiras 6 h após o envenenamento somente com a dose maior da peçonha. As catepsinas (B e H) exibiram ativação significativa no período de regeneração (de 48 h até 28 dias) nas duas doses aplicadas. Esses resultados indicam que a peçonha de B. jararacussu afetou diferencialmente as vias proteolíticas estudadas. É possível que a calpaína esteja envolvida na fase 1 do dano tecidual e que as catepsinas estejam relacionadas à presença de infiltrado inflamatório (fase 2) ou à regeneração (fase 3). O proteossomo parece não estar relacionado à fase aguda de degradação tecidual, mas pode estar envolvido na regeneração muscular embora isso ainda precise ser confirmado / Abstract: Bites by Bothrops snakes produce intense local hemorrhage and myonecrosis, often with extensive tissue degradation. In this work, we investigated the activities of the proteasome (pathway for selective protein degradation), cathepsins (lysosomal proteinases) and calpains (neutral, calcium-dependent proteinases) in envenoming by Bothrops jararacussu. We also examined the ability of MG-132, a proteasome inhibitor, to attenuate the venom-induced effects. Mice were injected with venom (25 µg or 75 µg) in the left gastrocnemius muscle and then killed 1, 3, 6, 12, 24, 48, 72 h and 7, 14, 21 and 28 days post-venom. The venom-injected and contralateral muscles were removed and processed for histological analysis or enzymatic assays using fluorimetric or colorimetric substrates. Blood was also collected for the quantification of plasma creatine kinase (CK, an indicator of myonecrosis). Bothrops jararacussu venom caused hemorrhage and necrosis (phase 1, up to 6-12 h post-venom), an inflammatory cell infiltrate and it generated the formation of myotubes and myoblasts (phase 2, 12-72 h post-venom), and the appearance of regenerative cells with increase of collagen deposition around these cells (phase 3, 7-28 days post-venom). The alterations were generally more marked with the higher dose of venom. The early tissue damage was confirmed by an increase in plasma CK levels 1-6 h post-venom, with a peak at 3 h. The muscle content of free amino acids decreased during the first 24 h, followed by a return to normal levels. Proteasomal activity was significantly inhibited for up to 48 h post-venom, followed by recuperation and a significant increase during muscle regeneration. During regeneration, there was also an increase in the expression of the 20Sa and 11S proteasomal subunits, mainly with the highest dose of venom. The proteasomal inhibitor reduced the chymotrypsin activity of the proteasome and the number of regenerating cells, but these effects were also seen in mice that received vehicle (DMSO) alone. The highest dose of venom caused an increase in calpain activity in the first 6 h whereas both of the venom doses significantly increased the activities of cathepsins B and H during the regeneration phase (48 h¿28 days post-venom). These results indicate that B. jararacussu venom differentially affects the proteolytic activities studied. Calpain may be involved in phase 1 of tissue damage and cathepsin activity may be related to the presence of an inflammatory infiltrate (phase 2) and/or regeneration (phase 3). The lack of proteasomal activation in the early stages of envenoming suggests that this proteolytic pathway is not involved in early venom-induced muscle damage. However, the involvement of proteasomal activity during muscle regeneration remains to be established. / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

A desnutrição pode induzir lesão celular, comprometendo os mecanismos envolvidos de proliferação, diferenciação e morte celular. Estudos de nosso laboratório tem demonstrado, em modelo murino de desnutrição protéica e protéico-energética, hipoplasia medular com evidências histológicas de alteração da matriz extra celular. Nosso objetivo foi avaliar a eventual participação dos processos de apoptose, necrose e autofagia no desenvolvimento da hipoplasia medular observada nesse modelo. Para isso foram utilizados dois grupos de camundongos C57BL/6J machos, adultos, mantidos em gaioleiros metabólicos. O grupo controle (C) recebeu ração normoproteíca contendo 12% de proteína e o grupo desnutrido (D), alimentado com ração hipoprotéica contendo 2% de proteína. A fonte protéica utilizada foi a caseína. O período de indução da desnutrição foi cerca de cinco semanas, definido pela perda de 20 a 25 % de peso corpóreo por parte dos animais do grupo desnutrido. Após esse período, os animais de ambos os grupos foram anestesiados e realizada a coleta das amostras biológicas para avaliação nutricional e hematológica e coletadas células da medula óssea para avaliação da apoptose, necrose e autofagia. Para avaliação da apoptose e necrose as células foram duplamente marcadas com Annexina V, PI e caspase 3 que foram analisadas por citometria de fluxo . A expressão da protéina BCL-2 foi quantificada pela técnica de Western Blotting. A análise não demonstrou diferença estatística entre os grupos para esses parâmetros. Para avaliação da autofagia extraiu-se proteínas das células da medula óssea e avaliou-se a expressão das proteínas Akt e mTOR total e fosforilado , os complexos de mTor (Raptor, Rictor e G&#946;l) , Beclin-1 e LC3II. Os resultados demonstraram aumento significativo de mTOR total ,Raptor , Beclin-1 e LC3II e diminuição na fosforilação de mTOR nas células oriundas de animais desnutridos em relação ao grupo controle. A desnutrição não modificou a expressão de Akt total, porém houve diminuição da fosforilação de Akt e diminuição na expressão das proteínas Rictor e G&#946;l nas células analisadas. Como os processos apoptóticos e autofágicos podem ser de difícil detecção in vivo, também refizemos os experimentos in vitro, estimulando as células com compostos pró-apoptóticos (campotecina) e pró-autofágicos (tamoxifeno). Nesses experimentos observamos que, apenas quando estimulamos as células de animais desnutridos com camptotecina, as mesmas, no período de 12 horas apresentaram maior percentagem de apoptose inicial em relação a 0 horas , sugerindo que há um período em que as células desnutridas são sinalizadas para via apoptótica sendo mais susceptível ao estimulo. As células de animal desnutrido estimulado apresentaram após 12 horas aumento significativo da apoptose tardia em relação ao controle estimulado , indicando que nesse período há um aumento da apoptose tanto em processo inicial , tanto em processo tardio. Avaliamos a autofagia em uma cinética de 0, 2, 6, 18 e 24 horas in vitro e observamos aumento significativo da autofagia em células da medula óssea de animais desnutridos em 0 horas e após 18 horas de estímulo com tamoxifeno (20 &#181;M) em relação ao respectivo controle, demonstrando que nesse período a autofagia começa a ser induzida através do estimulo mais facilmente do que o controle. Autofagia é um dos principais contribuintes para o metabolismo celular, fornecendo nutrientes quando os mesmos estão indisponíveis, e, portanto, no nosso modelo de desnutrição protéica a hipoplasia medular estaria em processo autofágico como mecanismo de reparo e sobrevivência. / Malnutrition can induce cell damage, compromising the mechanisms involved in proliferation, differentiation and cell death. Studies from our laboratory have demonstrated, in a murine model of protein malnutrition and protein-energy, marrow hypoplasia with histologic evidence of alteration of the extracellular matrix. Our objective was to evaluate the possible involvement of the processes of apoptosis, necrosis and autophagy in the development of bone marrow hypoplasia observed in this model. For this we used two groups of C57BL/6J adult male kept in metabolic gaioleiro. The control group (C) received normal protein diet containing 12% protein and undernourished group (D), fed low protein diet containing 2% protein. The protein source used was casein. The induction period of undernutrition was approximately five weeks, as defined by loss of 20 to 25% of body weight per part of group malnourished. After this period, the animals of both groups were anesthetized and held the collection of biological samples for nutritional assessment and hematology and bone marrow cells collected for evaluation of apoptosis, necrosis and autophagy. For assessment of apoptosis and necrosis of the cells were double labeled with Annexina V and PI caspase 3 were analyzed by flow cytometry. The expression of Bcl-2 was quantified by Western Blotting technique. The analysis revealed no statistical difference between the groups for these parameters. For evaluation of autophagy proteins extracted from bone marrow cells and evaluated the expression of proteins Akt and phosphorylated and total mTOR, complexes of mTOR (Raptor, and Rictor G&#946;l), Beclin-1 and LC3II. The results showed significant increase in overall mTOR, Raptor, and LC3II Beclin-1 and decreased phosphorylation of mTOR in cells derived from malnourished animals compared to the control group. Malnutrition did not modify the expression of Akt total, but decreased phosphorylation of Akt and decreased expression of the protein Rictor and G&#946;l cells analyzed. As apoptotic and autophagic processes can be difficult to detect in vivo, also redid the experiments in vitro, stimulating the cells with pro-apoptotic compounds (campotecina) and pro-autophagic (tamoxifen). In these experiments we observed that, when only stimulate cells with camptothecin malnourished, the same at 12 hours had a higher percentage of initial apoptosis compared to 0 hours, suggesting that there is a period in which cells are signaled to via malnourished being more susceptible to apoptotic stimuli. The animals starved cells stimulated after 12 h showed significant increase in apoptosis compared to control late stimulated, indicating that at that time there is an increase in apoptosis both in the initial process, both late process. Autophagy evaluated in kinetics of 0, 2, 6, 18 and 24 hours in vitro and observed a significant increase in autophagy in bone marrow cells of malnourished at 0 hours and after 18 hours stimulation with tamoxifen (20 microM) than the respective control, demonstrating that this period autophagy begins to be induced by stimulating more easily than the control. Autophagy is a major contributor to cellular metabolism, providing nutrients when they are unavailable, and therefore in our model of protein malnutrition in the marrow hypoplasia would autophagic process as a mechanism for survival and repair.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese2011_Luciana_Bradstetter.pdf: 2039765 bytes, checksum: fc789f9ab9e7cf36309b7d69f8c21304 (MD5) Previous issue date: 201-11-18 / Mechanic obstruction of blood vessels that irrigate the intestine leads to ischemia and intense reduction of oxygenation and tissue perfusion. If oxygenated blood flow returns abruptly to tissues before cellular death reperfusion injury occurs; this can be initiated by several mechanisms resulting in inflammatory response. Intestinal ischemia/reperfusion (I/R) injury has been widely associated to cell necrosis, although another distinct biochemical and morphological type of cell death, called apoptosis, is involved. Such conditions are mediated by signaling molecules in cellular surface, which lead to long term changes in gene expression. In the majority of cells, MAP (Mitogen Activated Protein) kinases (MAPK), which are part of a group of cytoplasmic enzymes, will transmit mitogenic and cell differentiation signs. Three MAPK that have been identified in mammalian cells participate in the signaling pathway: ERK, p38 and JNK. Activated p38 and JNK are usually related to apoptosis, while activated ERK 1/2 (P44/42) have a protection function inhibiting apoptosis. With the purpose of minimizing reperfusion injury after liver transplant, Carolina Rinse Solution (CRS) was designed by North Carolina University, USA. Although this solution has been used in horses to attenuate I/R injury in horse intestine, little is known about the eventual tissue protection mechanism. The present study aimed to investigate the effects of topical and intraluminal CRS in I/R injury, and the activation profile of p38 and ERK 1/2 MAPK, in rabbit jejunum. Fifteen New Zealand rabbits were allocated to three groups: Sham-operated (A), Ischemia and reperfusion (B) and CRS (C). Groups B and C were subjected to one hour of jejunal ischemia and two hours of reperfusion. In group C, ten minutes prior to reperfusion, the bowel lumen was filled with CRS, and the segment was immersed in CRS until reperfusion onset. Changes such as degeneration, necrosis, edema, hemorrhage, PMN infiltration and margination were not significantly different between groups B and C, showing that topical and intraluminal CRS did not attenuate deleterious effects of I/R in small intestinal of rabbits. I/R stimulated the phosphorylation of p44/42 MAPK and p38 MAPK pathways in some layers of jejunum. Progressive activation of p44/42 MAPK was chiefly localized to the crypts of Lieberkühn, circular and longitudinal muscle layers, whereas p38 MAPK was prominently activated in myenteric plexus and both muscle layers. All layers that did respond to I/R insult with activation increase of ERK 1/2 and p38, in all groups, showed low baseline phosphorylation levels as compared to those that did not react to the insult. The results of this work indicate that topical and intraluminal CRS does not interfere in ERK 1/2 and p38 activation profile in rabbit jejunum subjected to I/R. / A obstrução mecânica de vasos sanguíneos que irrigam o intestino leva à isquemia, com redução na oxigenação e perfusão teciduais. Se o fluxo sanguíneo oxigenado retorna aos tecidos bruscamente antes da morte celular, ocorre a chamada injúria de reperfusão, a qual pode ser iniciada por vários mecanismos, levando a uma resposta inflamatória. A injúria de isquemia e reperfusão (I/R) tem sido amplamente associada à necrose celular, apesar de um tipo bioquímico e morfológico distinto de morte celular, chamada de apoptose, também esteja envolvida. Tais processos são mediados por moléculas de sinalização na superfície das células, as quais levam a mudanças na expressão dos genes. Na maioria das células, as MAP (Mitogen Activated Protein) quinases (MAPK), as quais são parte de um grupo de enzimas citoplasmáticas, transmitem os sinais mitogênicos e de diferenciação. Três MAPK que foram identificadas em células de mamíferos participam do mecanismo de sinalização: ERK, p38 e JNK. As MAPK p38 e JNK ativadas normalmente estão associadas à apoptose, enquanto ERK 1/2 (P44/42) ativada tem função de inibição da apoptose. Com o propósito de minimizar a injúria de reperfusão após o transplante de fígado, a solução de Carolina Rinse (CRS) foi desenvolvida pela Universidade da Carolina do Norte nos EUA. Essa solução tem sido utilizada para minimizar os efeitos da I/R em intestino de eqüinos, mas pouco se sabe do seu possível mecanismo de ação protetora. O presente estudo objetivou investigar os efeitos do uso tópico e intraluminal da CRS na injúria de I/R e no perfil de ativação das MAPK p38 e ERK 1/2 no jejuno de coelhos. Quinze coelhos da raça Nova Zelândia foram alocados em três grupos: Instrumentado (A), Isquemia e reperfusão (B) e CRS (C). Os grupos B e C foram submetidos a uma hora de isquemia e duas horas de reperfusão de jejuno. No grupo C, dez minutos antes da reperfusão, o lumen do segmento foi preenchido com CRS e o mesmo foi imerso em CRS até o início da reperfusão. Mudanças como degeneração, necrose, edema, hemorragia, infiltrado e marginação de PMN não foram significativamente diferentes entre os grupos B e C, o que mostra que o uso tópico e intraluminal da CRS não atenuou os efeitos deletérios da I/R no intestino delgado de coelhos. A I/R estimulou a fosforilação das MAPK p44/42 e p38 em algumas camadas do jejuno. A ativação progressiva de p44/42 ocorreu principalmente nas criptas de Lieberkühn e nas camadas musculares circular e longitudinal, enquanto a MAPK p38 foi ativada principalmente no plexo mioentérico e em ambas as camadas musculares. Todas as camadas que responderam ao insulto da I/R com aumento da ativação de ERK 1/2 e p38, em todos os grupos, apresentaram baixos níveis basais de fosforilação, quando comparados àquelas que não responderam ao insulto. Os resultados desse estudo indicam que o uso tópico e intraluminal da CRS não interfere no perfil de ativação de ERK 1/2 e p38 no jejuno de coelhos submetidos à I/R.

Os herbicidas são destinados ao controle das ervas daninhas e seu uso torna o fornecimento de alimentos abundante e livre de pragas, porém a exposição ocupacional e ambiental a esses compostos pode trazer riscos à saúde. O Brasil é o maior consumidor de praguicidas desde 2008, e os herbicidas correspondem por 45% do volume dessas substâncias. O tebutiurom e a trifluralina são herbicidas muito utilizados em culturas de cana-de-açúcar, e apesar de serem descritos como seletivos em seu mecanismo de ação, seus efeitos em organismos não alvo, como células humanas, são pouco conhecidos. O objetivo do trabalho foi avaliar os efeitos dos herbicidas tebutiuron e trifluralina em organismos não alvo. Para isso, utilizou-se a linhagem celular HepG2, e as concentrações testadas dos herbicidas foram de 1 a 100 ?mol/L e o tempo de exposição variou de 4 h à 14 dias de acordo com o ensaio. Utilizou-se também as linhagens TA98 TA100, TA97a e TA1535 da bactéria S typhimurium. Neste caso, as concentrações testadas dos herbicidas variaram de 0,1 à 5000 ?g/placa e o tempo de exposição foi de 66 h. As análises indicaram que o tebutiurom não apresenta potencial citotóxico, genotóxico, ou mutagênico nas condições testadas, evidenciando sua seletividade. Testes com a trifluralina, no entanto, mostraram que HepG2 apresentaram uma diminuição da capacidade em formar clones quando expostas à 100 ?mol/L por 14 dias, e uma redução na densidade celular quando expostas à 50 e 100 ?mol/L por 24, 48 e 72h. Tais efeitos ocorreram devido a uma diminuição da viabilidade celular, observada em 50 e 100 ?mol/L pelo ensaio MTT, e devido a um bloqueio no ciclo celular na fase S, evidenciado em 100 ?mol/L, ambos nos tempos de 24, 48 e 72h. O tipo de morte celular inicialmente observada foi a apoptose, através da marcação por anexina V em 100 ?mol/L após 48 e 72 h de exposição, e através da condensação e fragmentação nuclear em 100 ?mol/L após 24 e 48 h de exposição. Em 72 h, observou-se também necrose em 100 ?mol/L, por meio dos testes anexina V/PI e liberação de LDH. A morte celular pode estar relacionada à diminuição do potencial de membrana mitocondrial, observada em 50 e 100 ?mol/L após 24, 48 e 72h, e a um aumento na produção de espécies reativas, efeito observado em células expostas à 100 ?mol/L de trifluralina por 24 e 48 h. No entanto, observou-se que a via de resposta ao estresse oxidativo Keap1/Nrf2-ARE não foi ativada no tempo analisado de 24 h. Além disso, os testes de cometa e micronúcleo não indicaram potencial da trifluralina em provocar danos no material genético de HepG2. Complementarmente, o teste de Ames em linhagens de S typhimurium também não evidenciaram potencial mutagênico do herbicida. As análises com a trifluralina mostraram que o herbicida, apesar de não induzir genotoxicidade e mutagenicidade, possui potencial citotóxico em HepG2, indicando que pode afetar organismos não alvo, como células humanas / Herbicides are used to control weeds in agriculture. The use of these chemicals makes possible an abundant and pest free supply of food. However, occupational and environmental exposure to these compounds can lead to health risks. Brazil is the largest consumer of pesticides since 2008, and herbicides match for 45% of the volume of these substances. The tebutiurom and trifluralin herbicides are widely used in sugarcane crops, and although they are described as selective in its mechanism of action, effects on non-target organisms, such as human cells, are are poorly known. The aim of this work was to evaluate the effects of tebuthiuron and trifluralin herbicides on non-target organisms. To this end, we used the cell line HepG2, and herbicides were tested at concentrations of 1 to 100 ?M and the exposure time ranged from 4 h to 14 days in accordance with the assay. We also used the strains TA100 TA98, TA97a and TA1535 of the bacterium S. typhimurium. In this case, the herbicide concentrations tested ranged from 0.1 to 5000 ?g / plate and the exposure time was 66 h. Analyzes indicated that the tebutiurom has no cytotoxic, genotoxic or mutagenic potential at tested conditions, highlighting its selectivity. Tests with the Trifluralin, however, showed that HepG2 had a decreased ability in forming clones when exposed to 100 ?M for 14 days, and a reduction in cell density when exposed to 50 and 100 ?M of the herbicide for 24, 48 and 72h. These effects occurred due a decrease in cell viability observed at 50 and 100 ?M by MTT assay, and due to a block in the cell cycle into S phase, as evidenced in 100 ?M, both at 24, 48 and 72h. The type of cell death detected first was apoptosis. It was observed by staining with annexin V in cells exposed to 100 ?M of trifluralin during 48 and 72 h, and through the nuclear condensation and fragmentation in exposure with 100 ?M during 24 and 48 h of exposure. At 72 h, necrosis was also observed in 100 ?M through the annexin V / PI and LDH assays. Cell death occurrence may be associated with decreased mitochondrial membrane potential observed in 50 and 100 ?M after 24, 48 and 72h of exposure, and also may be associated with incresed production of reactive species, observed in cells exposed to 100 ?M of trifluralin for 24 and 48 h. However, it was observed that the oxidative stress response pathway Keap1 / Nrf2-ARE was not activated within 24 hours. Furthermore, comet assay and micronucleus test indicated no potential of trifluralin in causing DNA damage of HepG2. In addition, the Ames test using S. typhimurium strains also showed no mutagenic potential of the herbicide. The analyzes showed that the trifluralin, despite not induce genotoxicity and mutagenicity, have cytotoxic potential in HepG2, indicating that can affect non-target organisms, such as human cells.