Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2011. / Submitted by Matheus Denezine (matheusdenezine@yahoo.com.br) on 2011-06-20T14:45:33Z No. of bitstreams: 1 2011_KellianeAlmeidadeMedeiros.pdf: 2006761 bytes, checksum: 44c20b9f14190fe83440b45c88cac36e (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-06-20T19:11:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_KellianeAlmeidadeMedeiros.pdf: 2006761 bytes, checksum: 44c20b9f14190fe83440b45c88cac36e (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-20T19:11:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_KellianeAlmeidadeMedeiros.pdf: 2006761 bytes, checksum: 44c20b9f14190fe83440b45c88cac36e (MD5) / As alternativas comuns para o tratamento do câncer têm sido a quimioterapia e a radioterapia apesar destas terapias destruírem células tumorais e não tumorais, sendo necessária a busca por novas alternativas. Entretanto, muitas novas moléculas também podem causar toxicidade em células não tumorais, sendo necessários seus encapsulamentos em sistemas de liberação controlada. Uma das estratégias para a liberação controlada é o uso de nanopartículas com composição e natureza variadas para confinar o composto. O presente estudo tem como objetivo identificar peptídeos com função antitumoral a partir de bibliotecas de sequências (EMBRAPA) de moléculas, encapsular os peptídeos em nanopartícula contendo em sua composição quitosana e desenvolver um sistema de liberação controlada em células tumorais. Foram selecionados dois peptídeos encontrados em anfíbios (H-ALWKDLLKNVGIAAGKAVLNKVTDMVNQ-OH e H-YIGWGYHDY-OH), um fragmento de uma proteína supressora de metástase (H-FINKAGKLQSQLRTTVVAAAAFLDAFQKVA-NH2) e um peptídeo de veneno de abelha, como controle positivo (H-GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ-NH2). Os peptídeos foram sintetizados manualmente pelo método da fase sólida e purificados em RP-HPLC. Tiveram pureza e identidade molecular aferidas em espectrômetro de massa MALDI-TOF/TOF e foram avaliados quanto à eficácia e potência in vitro contra as linhagens de células tumorais B16F10, MCF7, HeLa e HSG e contra a linhagem não tumoral de fibroblasto por meio de ensaio de viabilidade celular (MTT). Foram escolhidos para os ensaios seguintes, um dos peptídeos de anfíbio e a linhagem HeLa, por este peptídeo ter sido mais ativo sobre esta linhagem. Verificou-se que o peptídeo age sobre a membrana da célula e a mitocondrial hiperpolarizando-a. Em seguida, o peptídeo foi encapsulado pelo método de geleificação iônica. Obteve-se eficiência de encapsulamento de 73 e 80% para nanopartículas de quitosana e peptídeo e as de quitosana, polietilenoglicol e peptídeo, respectivamente. As nanopartículas mostraram-se polidispersas, com tamanho médio de 100 a 200 nm, estabilidade coloidal excelente a moderada e de liberação controlada lenta. Estas nanopartículas foram pouco mais ativas sobre a linhagem tumoral HeLa do que o peptídeo livre, apesar de tendo o mesmo resultado sobre a linhagem não tumoral de fibroblasto. Assim, este sistema foi eficiente no encapsulamento do peptídeo podendo vir a ser entregue a alvo específico em estudos posteriores. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The common alternatives for the cancer treatment have been chemotherapy and radiation therapies despite these therapies destroy tumor and healthy cells, being necessary to search for new alternatives. However, many new molecules can also cause toxicity in non-tumor cells, requiring their encapsulation in controlled release systems. One strategy for the controlled release is the use of nanoparticles with varied composition and nature to confine the compound. The present study aims to identify peptides with antitumor function from sequence libraries (EMBRAPA) of molecules, encapsulate the peptides in nanoparticles containing chitosan in its composition and develop a controlled release system in tumor cells. We selected two peptides found in amphibians (H-ALWKDLLKNVGIAAGKAVLNKVTDMVNQ-OH and H-YIGWGYHDY-OH), a fragment of a metastasis suppressor protein (H-FINKAGKLQSQLRTTVVAAAAFLDAFQKVA-NH2) and a bee venom peptide, as positive control (H -GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ-NH2). The peptides were synthesized manually by solid phase method and purified by RP-HPLC. Molecular identity and purity were measured in MALDI-TOF/TOF mass spectrometer and were evaluated for efficacy and potency in vitro against B16F10, MCF7, HeLa and HSG tumor cell lines, and against the healthy fibroblast cell line through cell viability test (MTT). For all other experiments, it was chosen a peptide of amphibian and the HeLa cell line due to the fact that this peptide was the more active against this cell line. It was found that the peptide acts on the cell membrane and promote mitochondrial hyperpolarization. Then, the peptide was encapsulated by the ionic gelation method. It was obtained efficiency of encapsulation of 73 and 80% for peptide and chitosan, and chitosan, PEG and peptide nanoparticles, respectively. The nanoparticles were polydisperse, with average size ranging from 100 to 200 nm, exhibited excellent colloidal stability, and moderately slow and controlled release. These nanoparticles were little bit more active on HeLa tumor cell line than free peptide, despite the fact that had the same effect on healthy fibroblast lineage cells. Thus, this system was efficient in encapsulating the peptide that may ultimately be delivered to specific target in future studies.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, São José dos Pinhais, 2009 / Inclui bibliografias / Atualmente a sobrevida dos animais de companhia vem aumentando, também em relação ao número de pacientes geriátricos atendidos na rotina clínica-hospitalar veterinária. Devido a esta ascensão, torna-se necessário estabelecer novas condutas de abordagens c / Now the survival time of the company animals is increasing, also in relation to the number of patient geriatric assisted in the routine clinic-hospitalar veterinary. Due to this ascension, she becomes necessary to establish new conducts of clinical, labor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-03-17T19:32:38Z No. of bitstreams: 1 2010_MarthadeSouzaTeixeiradaRocha.pdf: 2949468 bytes, checksum: 88d5bae32f31cab05aeb1760125b3462 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2011-03-21T12:50:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_MarthadeSouzaTeixeiradaRocha.pdf: 2949468 bytes, checksum: 88d5bae32f31cab05aeb1760125b3462 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-03-21T12:50:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_MarthadeSouzaTeixeiradaRocha.pdf: 2949468 bytes, checksum: 88d5bae32f31cab05aeb1760125b3462 (MD5) / O câncer de mama representa o neoplasma maligno mais comum nas cadelas e o tratamento atualmente consiste na sua excisão, associado ou não à quimioterapia adjuvante que pode ser eficaz ou não. Conseqüentemente é crescente a busca por alternativas terapêuticas que cessem ou retardem o crescimento tumoral. Uma terapia promissora, difundida para o tratamento de alguns tipos de é a terapia fotodinâmica que se baseia na combinação de um fármaco fotossensibilizante que quando ativado provoca morte celular. O objetivo do trabalho foi avaliar a aplicação e citotoxicidade da Terapia Fotofinâmica mediada pelo Alumínio-Cloro-Ftalocianina em formulação liposomal (TFD-AlClFt) em um sistema de tratamento experimental in vitro de amostras tumorais extraídas de carcinoma mamário de cadela submetida ao tratamento cirúrgico tradicional. Para isso foram formados 04 grupos experimentais: grupo controle, LED, fármaco fotossensibilizador AlClFt 2,5μM e TFD. O grupo O controle (1) foi aquele em que as células não foram submetidas a nenhum tratamento; O grupo LED (2) recebeu iluminação com a fonte de luz LED na intensidade 10 J/cm2 e comprimento de onda 660nm. O grupo AlClFt (3) apenas administração do fármaco AlClFt e grupo TFD (4), que consistiu na terapia fotodinâmica. Foram analisados viabilidade celular, citotoxicidade, via de morte celular e possíveis alterações morfológicas através dos ensaios ciitotóxicos; azul tripan, dupla coloração de alaranjado de acridina e brometo de etídio, MTT e avaliações morfológicas que evidenciaram efetividade da TFD nas condições experimentais deste trabalho. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Breast cancer is the most common malignant neoplasm in dogs and treatment currently consists of surgical excision, with or without adjuvant chemotherapy. However, the search for alternative therapies to stop completely or to slow down tumor growth is increasing. Photodynamic therapy (PDT) is based on the combination of a photosensitizing agent that once activated causes cell death. The objective of this study was to evaluate PDT mediated by Aluminum-Chlorine-Phtalocyanine (AlClPc) in an experimental in vitro treatment system of tumor samples taken from mammary carcinoma of dogs subjected to surgical excision . The primary cell culture was divided into four experimental groups: control, LED, photosensitizer AlClPc 2.5 μM and PDT. The control group (1) represented the cells which had not undergone any treatment, the LED group (2) was exposed to a LED light source of 10 J/cm2 intensity and wavelength of 660nm. The AlClPc group (3) was treated with only the photosensitizer agent and the PDT group (4), was the one that undergone the photodynamic therapy. Cell viability, cytotoxicity and cell death pathways were evaluated through the cytotoxicity assays: trypan blue, double staining of acridine orange and ethidium bromide and MTT. Cultures were also subjected to morphological evaluation by optic microscopy. It can be observed from the results that the amount of cell death was significantly higher (P <0.05) in the PDT group when compared to the other groups by all tests, and the cell death was due to necrosis. It can be concluded that the PDT is an effective treatment in cell culture of canine mammary carcinoma.

A quimioterapia metronômica é uma modalidade terapêutica onde o agente quimioterápico é administrado em baixas doses, em curtos intervalos e continuamente, diferente da quimioterapia em dose máxima tolerada. Dirigida contra células tumorais e outros tipos de células, como as endoteliais e do sistema imunológico, a metronômica altera o microambiente tumoral e suprime características inatas que apoiam o crescimento dos tumores. O objetivo deste trabalho foi analisar prospectivamente o uso da quimioterapia metronômica com lomustina em pacientes com mastocitoma cutâneo, seus efeitos adversos e comparar com o protocolo de vimblastina e prednisona. Para tanto foram incluídos neste estudo 40 neoplasias obtidas de 32 cães de ambos os sexos e idades variadas, com o diagnóstico citológico e histopatológico de mastocitoma cutâneo, os mesmos foram divididos em dois grupos de forma randomizada. O grupo VP foi tratado com vimblastina na dose de 2mg/m² e prednisona por 12 sessões e o grupo LP foi tratado a metronômica com lomustina na dose de 2,84mg/m²/VO por 4 meses. Quanto à classificação histopatológica dos tumores estudados 67,5% (27/40) das formações mostrou graduação intermediária, correspondendo a grau II/baixo grau. Os efeitos adversos foram avaliados de acordo com os critérios do VCOG. Dos pacientes pertencentes ao grupo VP 62,5% (5/16) apresentaram algum tipo de efeito adverso, sendo os mais frequente os efeitos sob o trato gastrointestinal como: disorexia, anorexia, êmese e diarreia ocorrendo em cinco pacientes (5/16), seguido de leucopenia em três animais (3/16). No grupo LP 50% (8/16) dos pacientes tiveram algum tipo de efeito adverso, o mais comum foi êmese, sendo que apenas um cão apresentou efeito adverso classificado em grau III. Os dois protocolos foram bem tolerados pelos pacientes e não houve significância estatística sobre os efeitos adversos de ambos os grupos (p=0,715). A trombocitose foi a síndrome paraneoplásica mais observada, acometendo 25% de todos os animais (8/32), apresentando significância estatística em relação ao temo de sobrevida global (p=0,000049). A média de sobrevida do grupo VP foi de 404,25 dias (104-815dias) enquanto que do grupo LP foi de 320,25 dias (83-669). Não houve diferença estatística entre os grupos de acordo com o tempo de sobrevida (p=0,662) e o tempo livre de recorrência (p=1). A quimioterapia metronômica com lomustina teve boa aceitação junto aos proprietários dos animais, já que é administrada por via oral e os efeitos adversos foram toleráveis e pouco frequentes. / Metronomic chemotherapy is a therapeutic modality where the chemotherapeutic agent is administered in low doses, continuously for short and regular periods, as opposed to the chemotherapy in maximum tolerated dose. Directed against tumor cells and other cell types, such as endothelial cells and immune system cells, the metronomic chemotherapy alters the tumor microenvironment and suppresses innate features that support the growth of tumors. The aim of this study is to prospectively analyze the use of metronomic chemotherapy with lomustine in patients with mast cell tumors, evaluate the therapeutic action and adverse effects and compare with the chemotherapy protocol with vinblastine and prednisone. For this, 40 neoplasms obtained from 32 dogs of both sexes and varied ages, with cytological and histopathological diagnosis of mast cell tumor, were divided into two groups in a randomized fashion. The VP group was treated with vinblastine at a dose of 2mg/m² and prednisone for 12 sessions and the LP group was treated with metronomic chemotherapy with lomustine at a dose of 2.84mg/m²/ VO for 4 months. Regarding the histopathological classification of the studied tumors, 67.5% (27/40) of the formations showed an intermediate degree, corresponding to grade II / low grade. Adverse effects were assessed according to the VCOG criteria. Of the patients belonging to the VP group 62.5% (5/16) presented some type of adverse effect, being the most frequent the effects under the gastrointestinal tract as: dysorexia, anorexia, emesis and diarrhea occurring in five patients (5/16), Followed by leukopenia in three animals (3/16). In the LP group 50% (8/16) of the patients had some type of adverse effect, the most common was emesis, and only one dog presented grade III adverse effect. The two chemotherapeutic protocols were well tolerated by the patients and there was no statistical significance regarding the adverse effects of both groups (p = 0.715). Thrombocytosis was the most observed paraneoplastic syndrome, affecting 25% of all animals (8/32), presenting statistical significance in relation to the overall survival rate (p = 0.000049). The mean survival time of the PV group was 404.25 days (104-815 days) while the LP group was 320.25 days (83-669). There was no statistical difference between the groups according to the survival time (p = 0.662) and the free time of recurrence (p = 1). Metronomic chemotherapy with lomustine was well accepted by animal owners, since it is administered orally and the adverse effects were tolerable and infrequent.

O câncer é a maior causa de morbidade e mortalidade em animais idosos de companhia, sendo a dor o principal sintoma relatado no homem. Objetivou-se, neste estudo, avaliar o emprego do tramadol para analgesia em cães com dor oncológica. Foram avaliados cães com câncer no período de agosto de 2004 a março de 2006, encaminhados ao Grupo de Dor do Serviço de Anestesia. Incluiu-se no estudo cães que permaneceram no mínimo 15 dias em tratamento e que, no momento de instituição da terapêutica com o tramadol, apresentaram dor igual ou maior que 4, de acordo com Escala Numérica Verbal (ENV) quando já medicados com dipirona associada ou não a antiinflamatórios não esteroidais ou esteroidais há mais de 10 (dez) dias. Avaliou-se a dor com a ENV e o escore de qualidade de vida (QV) através de escala validada para cães (Yazbek; Fantoni, 2000). Foram avaliados para o estudo 130 animais com câncer, 53 machos e 77 fêmeas, dos quais 37 obedeceram aos critérios de inclusão para análise da terapia analgésica. De acordo com a avaliação dos proprietários, a média de dor dos animais avaliados pela da ENV no momento de instituição da terapêutica com o tramadol foi de 6,11 ± 1,81 e o escore de qualidade de vida foi 21,95 ± 5,96. No primeiro retomo velificou-se melhora da dor em 31 (83,78%) animais. Neste momento foi realizada adequação da dose do tramadol, considerando-se a intensidade da dor em 20 (54,05%) dos 37 cães era superior a 4. No segundo retomo 34 (91,89%) dos animais apresentaram alívio da dor em relação à consulta inicial, sendo que 28 (75,68%) destes obtiveram ENV inferior a 4. A dose inicial preconizada do tramadol foi de 2mg/Kg a cada 8 horas, por via oral, sendo esta dose reajustada no retomo caso o valor de ENV fosse maior que 4. Classificando a eficácia do tratamento realizado com o tramadol em três categorias: alívio da dor (ENVinicial > ENVfinal e ENVfinal < 4), melhora insatisfatória (ENVinicial > ENVfinal e ENVfinal > 4) e ausência de melhora (ENVinicial &le; ENVfinal) pode-se afirmar que no primeiro retomo 83,78% e 78,28% dos pacientes, na opinião de proprietário e pesquisador respectivamente, experimentaram alguma melhora da dor. Seguindo esta mesma classificação observou-se que, no segundo retomo após acerto da dose do tramadol, o alívio da dor foi obtido em 28 (75,68%) animais na opinião de proprietário e pesquisador e melhora insatisfatória em 6 (16,21%) e 7 (18,91%) pacientes, de acordo com o proprietário e pesquisador respectivamente. Quando comparados os grupos separadamente verifica-se que o grupo DAINET (dipirona, AINE, tramadol) apresentou significante alívio da dor em relação aos primeiro retorno e a avaliação final, já os grupos DT (dipirona, tramadol) e DET (dipirona, esteróide, tramadol) apresentaram alívio da dor apenas em relação a avaliação final. Com base no alívio da dor e no aumento da qualidade de vida, pode-se concluir que o tramadol foi eficiente no tratamento da dor de grau moderada à intensa em cães portadores de câncer. / Cancer is the main cause of morbidity and mortality in companion aged dogs, being pain the principal symptom described in humans. This study aimed to evaluate the use of tramadol for analgesia in dogs with oncologic pain. Between august 2004 and marc 2006, dogs with cancer referred to the Pain Group of the Anesthesia Service were evaluated. In this study , dogs with at least fifteen days of treatment were included and that at the moment at tramadol administration, presented pain equal or above 4 according the Visual Analogue Scale (VAS) when treated with dypirona associated our not to non-esteroidal anti-inflammatory analgesics or steroidal for more than 10 days. Pain evaluated with the VAS and the quality of life (QV) score validated for dogs (Yazbek; Fantoni, 2000) were used. One hundred and thirty seven dogs with cancer were evaluated, but only 37 could be included the evaluation of analgesic therapy. According to the owner of the animals by means of the VAS at the begging of tramadol was 6,11 ± 1,81 and the QV score was 21,95 ± 5,96. At the first return, an improvement in pain was verified in 31 animals (83,78%). In this moment, adequacy of tramadol dose was performed, since the intensity of pain was above 4 in 20 (54,05%) animals. At the second returns 34 (91,89%) of the animals presented pain relief in relation to the first visit, being that 28 (75,68%) of the animal presented a VAS bellow 4 the initial dose o tramadol was 2mg/Kg each 8 hours orally, and the dose was readjusted in the return who the animal presented VAS above 4. Efficacy of treatment was classified in the three steps pain relief: successful pain relief (initial VAS > final VAS and final VAS < 4), unsuccessful pain relief (initial VAS > final VAS and final VAS > 4) and no pain relief (initial VAS &le; final VAS). It could be inferred that at the first return 83,78% and 78,28% of patients regarding owner and researcher opinion respectively obtained some pain relief. Following this some classification, it was observed that at the second return after adjusting the tramadol dosage, pain relieve was achieved in 28 (75,68%) of the animals the according to the owner and researcher and that an unsuccessful relief in 6 (16,21%) and 7 (18,91%) of patients respectively. When the groups were compared separately it was verified that the group DAINET (dypirona, AINE and tramadol) showed a significant pain relief in relation to the final evaluation, whereas the other two groups (DT - dypirona plus tramadol - and DET - dypirona, steroidal anti-inflammatory analgesic and tramadol) presented pain relief only in relation to the final evaluation. Based on the results of pain relief and QV it could be concluded that tramadol was efficient regarding the treatment of moderate to severe pain in dogs with cancer.

O Papilomavírus Bovino do tipo 1 (BPV-1) causa fibropapilomas em bovinos e sarcóide em equinos, associados à expressão de oncoproteínas virais, principalmente E6 e E7. A purificação de oncoproteínas a partir de sistema recombinante possibilita seu estudo. Os objetivos foram expressar o gene E6 do BPV-1, purificar e analisar in silico a proteína recombinante obtida. O amplificado foi clonado em E. coli e os plasmídeos foram sequenciados, confirmando a matriz correta de leitura. Após indução da expressão, a proteína recombinante foi identificada e purificada. A microscopia eletrônica mostrou a formação de corpúsculos de inclusão. As análises in silico apontaram as mutações das sequências gênica e proteica de E6-1 em relação às depositadas. Foi realizada a predição tridimensional da estrutura da proteína recombinante e identificadas as regiões conservadas, antigênicas e capazes de realizar ligações cátion-<font face=\"Symbol\">p. Logo, a proteína recombinante E6 do BPV-1 foi obtida e purificada com sucesso, possibilitando o início de novos experimentos e estudos mais detalhados. / Bovine Papillomavirus type 1 (BPV-1) causes fibropapillomas in cattle and sarcoid in equines, associated with the expression of viral oncoproteins, E6 and E7 particularly. Purification of oncoproteins from recombinant system allows their study. The aim of this study was cloning and expressing BPV-1 E6 gene, purify and analyze in silico recombinant protein. Amplicon was cloned into E. coli and the plasmids were sequenced to confirm the correct reading frame. After induction of expression, the recombinant protein was identified and purified. Electron microscopy showed the inclusion bodies formation. In silico analysis showed mutations in E6-1 gene and protein sequences when there were compared to sequences available in current database. Three-dimensional structure prediction of the recombinant protein was performed and conserved, antigenic and cation-<font face=\"Symbol\">p interaction regions were identified. Therefore, BPV-1 E6 recombinant protein was obtained and successfully purified enabling new experiments and more detailed studies.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, São José dos Pinais, 2010 / Inclui bibliografias / O Carcinoma de Células Escamosas (CCE) ou carcinomas epidermóides são neoplasias malignas de células epiteliais comuns em todas as espécies. Ocorre principalmente em áreas mais despigmentadas da pele, sendo que a exposição crônica à radiação ultravioleta / O Carcinoma de Células Escamosas (CCE) ou carcinomas epidermóides são neoplasias malignas de células epiteliais comuns em todas as espécies. Ocorre principalmente em áreas mais despigmentadas da pele, sendo que a exposição crônica à radiação ultravioleta

O câncer é a maior causa de morbidade e mortalidade em animais idosos de companhia, sendo a dor o principal sintoma relatado no homem. Objetivou-se, neste estudo, avaliar o emprego do tramadol para analgesia em cães com dor oncológica. Foram avaliados cães com câncer no período de agosto de 2004 a março de 2006, encaminhados ao Grupo de Dor do Serviço de Anestesia. Incluiu-se no estudo cães que permaneceram no mínimo 15 dias em tratamento e que, no momento de instituição da terapêutica com o tramadol, apresentaram dor igual ou maior que 4, de acordo com Escala Numérica Verbal (ENV) quando já medicados com dipirona associada ou não a antiinflamatórios não esteroidais ou esteroidais há mais de 10 (dez) dias. Avaliou-se a dor com a ENV e o escore de qualidade de vida (QV) através de escala validada para cães (Yazbek; Fantoni, 2000). Foram avaliados para o estudo 130 animais com câncer, 53 machos e 77 fêmeas, dos quais 37 obedeceram aos critérios de inclusão para análise da terapia analgésica. De acordo com a avaliação dos proprietários, a média de dor dos animais avaliados pela da ENV no momento de instituição da terapêutica com o tramadol foi de 6,11 ± 1,81 e o escore de qualidade de vida foi 21,95 ± 5,96. No primeiro retomo velificou-se melhora da dor em 31 (83,78%) animais. Neste momento foi realizada adequação da dose do tramadol, considerando-se a intensidade da dor em 20 (54,05%) dos 37 cães era superior a 4. No segundo retomo 34 (91,89%) dos animais apresentaram alívio da dor em relação à consulta inicial, sendo que 28 (75,68%) destes obtiveram ENV inferior a 4. A dose inicial preconizada do tramadol foi de 2mg/Kg a cada 8 horas, por via oral, sendo esta dose reajustada no retomo caso o valor de ENV fosse maior que 4. Classificando a eficácia do tratamento realizado com o tramadol em três categorias: alívio da dor (ENVinicial > ENVfinal e ENVfinal < 4), melhora insatisfatória (ENVinicial > ENVfinal e ENVfinal > 4) e ausência de melhora (ENVinicial &le; ENVfinal) pode-se afirmar que no primeiro retomo 83,78% e 78,28% dos pacientes, na opinião de proprietário e pesquisador respectivamente, experimentaram alguma melhora da dor. Seguindo esta mesma classificação observou-se que, no segundo retomo após acerto da dose do tramadol, o alívio da dor foi obtido em 28 (75,68%) animais na opinião de proprietário e pesquisador e melhora insatisfatória em 6 (16,21%) e 7 (18,91%) pacientes, de acordo com o proprietário e pesquisador respectivamente. Quando comparados os grupos separadamente verifica-se que o grupo DAINET (dipirona, AINE, tramadol) apresentou significante alívio da dor em relação aos primeiro retorno e a avaliação final, já os grupos DT (dipirona, tramadol) e DET (dipirona, esteróide, tramadol) apresentaram alívio da dor apenas em relação a avaliação final. Com base no alívio da dor e no aumento da qualidade de vida, pode-se concluir que o tramadol foi eficiente no tratamento da dor de grau moderada à intensa em cães portadores de câncer. / Cancer is the main cause of morbidity and mortality in companion aged dogs, being pain the principal symptom described in humans. This study aimed to evaluate the use of tramadol for analgesia in dogs with oncologic pain. Between august 2004 and marc 2006, dogs with cancer referred to the Pain Group of the Anesthesia Service were evaluated. In this study , dogs with at least fifteen days of treatment were included and that at the moment at tramadol administration, presented pain equal or above 4 according the Visual Analogue Scale (VAS) when treated with dypirona associated our not to non-esteroidal anti-inflammatory analgesics or steroidal for more than 10 days. Pain evaluated with the VAS and the quality of life (QV) score validated for dogs (Yazbek; Fantoni, 2000) were used. One hundred and thirty seven dogs with cancer were evaluated, but only 37 could be included the evaluation of analgesic therapy. According to the owner of the animals by means of the VAS at the begging of tramadol was 6,11 ± 1,81 and the QV score was 21,95 ± 5,96. At the first return, an improvement in pain was verified in 31 animals (83,78%). In this moment, adequacy of tramadol dose was performed, since the intensity of pain was above 4 in 20 (54,05%) animals. At the second returns 34 (91,89%) of the animals presented pain relief in relation to the first visit, being that 28 (75,68%) of the animal presented a VAS bellow 4 the initial dose o tramadol was 2mg/Kg each 8 hours orally, and the dose was readjusted in the return who the animal presented VAS above 4. Efficacy of treatment was classified in the three steps pain relief: successful pain relief (initial VAS > final VAS and final VAS < 4), unsuccessful pain relief (initial VAS > final VAS and final VAS > 4) and no pain relief (initial VAS &le; final VAS). It could be inferred that at the first return 83,78% and 78,28% of patients regarding owner and researcher opinion respectively obtained some pain relief. Following this some classification, it was observed that at the second return after adjusting the tramadol dosage, pain relieve was achieved in 28 (75,68%) of the animals the according to the owner and researcher and that an unsuccessful relief in 6 (16,21%) and 7 (18,91%) of patients respectively. When the groups were compared separately it was verified that the group DAINET (dypirona, AINE and tramadol) showed a significant pain relief in relation to the final evaluation, whereas the other two groups (DT - dypirona plus tramadol - and DET - dypirona, steroidal anti-inflammatory analgesic and tramadol) presented pain relief only in relation to the final evaluation. Based on the results of pain relief and QV it could be concluded that tramadol was efficient regarding the treatment of moderate to severe pain in dogs with cancer.

O Papilomavírus Bovino do tipo 1 (BPV-1) causa fibropapilomas em bovinos e sarcóide em equinos, associados à expressão de oncoproteínas virais, principalmente E6 e E7. A purificação de oncoproteínas a partir de sistema recombinante possibilita seu estudo. Os objetivos foram expressar o gene E6 do BPV-1, purificar e analisar in silico a proteína recombinante obtida. O amplificado foi clonado em E. coli e os plasmídeos foram sequenciados, confirmando a matriz correta de leitura. Após indução da expressão, a proteína recombinante foi identificada e purificada. A microscopia eletrônica mostrou a formação de corpúsculos de inclusão. As análises in silico apontaram as mutações das sequências gênica e proteica de E6-1 em relação às depositadas. Foi realizada a predição tridimensional da estrutura da proteína recombinante e identificadas as regiões conservadas, antigênicas e capazes de realizar ligações cátion-<font face=\"Symbol\">p. Logo, a proteína recombinante E6 do BPV-1 foi obtida e purificada com sucesso, possibilitando o início de novos experimentos e estudos mais detalhados. / Bovine Papillomavirus type 1 (BPV-1) causes fibropapillomas in cattle and sarcoid in equines, associated with the expression of viral oncoproteins, E6 and E7 particularly. Purification of oncoproteins from recombinant system allows their study. The aim of this study was cloning and expressing BPV-1 E6 gene, purify and analyze in silico recombinant protein. Amplicon was cloned into E. coli and the plasmids were sequenced to confirm the correct reading frame. After induction of expression, the recombinant protein was identified and purified. Electron microscopy showed the inclusion bodies formation. In silico analysis showed mutations in E6-1 gene and protein sequences when there were compared to sequences available in current database. Three-dimensional structure prediction of the recombinant protein was performed and conserved, antigenic and cation-<font face=\"Symbol\">p interaction regions were identified. Therefore, BPV-1 E6 recombinant protein was obtained and successfully purified enabling new experiments and more detailed studies.

O Papilomavírus bovino (BPV) gera prejuízos à pecuária. O trabalho buscou isolar vírions de BPV de papilomas cutâneos previamente diagnosticados e avaliar o potencial clastogênico do vírus através do ensaio cometa (EC). O DNA tecidual foi extraído e submetido a PCR. As bandas foram purificadas e sequenciadas. As sequências foram analisadas através de bioinformática. A tipagem mostrou a prevalência de BPV-2. A análise histopatológica revelou acantose, coilocitose e hiperqueratose. Foi possível detectar a presença de fibroblastos transformados, sugerindo uma via de infecção através do sangue. A imuno-detecção das proteínas L1 e E7 no estroma sugere atividade transformadora do BPV em fibroblastos. O EC mostrou a ação clastogênica estatisticamente igual entre os tipos virais BPV-2, 5 e 9. O isolamento viral foi realizado através de ultracentrifugação em densidade única de cloreto de césio, empregando uma nova metodologia, que se mostrou menos laboriosa do que as já descritas, permitindo o isolamento de vírions de BPV-2, iniciando o banco de vírus proposto. / The Bovine papillomavirus (BPV) generates losses to livestock. The study sought to isolate BPV virions from cutaneous papillomas previously diagnosed and evaluate the clastogenic potential of the virus through the comet assay (EC). The tissue DNA was extracted and subjected to PCR. The bands were purified and sequenced. Sequences were analyzed using bioinformatics. The typing showed the prevalence of BPV-2. Histopathology showed acanthosis, hyperkeratosis and koilocytosis. It was possible to detect the presence of transformed fibroblasts, suggesting a route of infection through the blood. Immunohistochemical detection of L1 and E7 proteins in the stroma suggests transforming activity of BPV in fibroblasts. The EC clastogenic action showed statistically equal among the virus types BPV-2, 5 and 9. Viral isolation was performed by ultracentrifugation in a single cesium chloride density, using a new method that was less laborious than those already described, allowing the isolation of BPV-2 virions, starting the proposed stock virus.