Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-05T12:34:31Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1390535 bytes, checksum: d9ba23ff906398ead21fa995e0392ba0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-05T12:34:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1390535 bytes, checksum: d9ba23ff906398ead21fa995e0392ba0 (MD5) Previous issue date: 2015-05-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os fungos endofíticos são micro-organismos que vivem no interior das plantas, colonizando os espaços intercelulares de todos os órgãos e tecidos, sem causar aparentemente qualquer dano ao hospedeiro. Alguns fungos endofíticos apresentam atividade antagonista a fitopatógenos, por meio da competição por nutrientes e espaço ou pela produção de antimicrobianos. Além de poderem exercer diversas funções importantes em benefício do hospedeiro, os fungos endofíticos são potencialmente úteis na agricultura e indústria como fonte de substâncias de interesse econômico, como enzimas, substâncias antimicrobianas entre outros compostos bioativos relacionados com o metabolismo fúngico. Estudos vêm demostrando que a planta Glycine max representa um reservatório para espécies fúngicas endofíticas, incluindo decompositoras, produtoras de compostos bioativos, biocontroladoras de patógenos e espécies fitopatogênicas. O presente trabalho teve como objetivos: (I) isolar fungos endofíticos de folhas e raízes de G. max, identificá-los por meio do ITS-PCR, que correspondente ao sequenciamento dos espaçadores de transcrito interno (ITS) e por taxonomia morfológica; (II) estudar a diversidade dos fungos isolados em meio de cultura e por meio de eletroforese em gel de gradiente desnaturante (DGGE); (III) avaliar a atividade de fungos biocontroladores isolados de G. max contra fitopatógenos selecionados (Phomopsis sp., Sclerotinia sclerotorium, Fusarium oxysporium, Fusarium solani e Colletotrichum trucatum); (IV) extrair os metabólitos de um fungo endofítico selecionado no teste de biocontrole de fitopatógenos (Guignardia mangiferae) e analisar os compostos antimicrobianos por meio de fracionamento em coluna de sílica gel; (V) avaliar as diferenças existentes entre isolados do fungo endofítico G. mangiferae coletados de dois diferentes hospedeiros (G. max e Vaccinium virgatum) e regiões geográficas (Brasil e Nova Zelandia) em relação ao perfil metabólico e metaboloma. O trabalho foi iniciado com o isolamento de fungos endofíticos de G. max, que foram caracterizados com base em características morfológicas e moleculares (regiões ribossomais ITS1, 5.8 e ITS2). Foram isolados 229 fungos de G. max, sendo 187 isolados nas folhas e 42 nas raízes. Fungos como Ampelomyces sp., Cladosporium cladosporioides, Colletotricum gloeosporioides, Diaporthe helianthi, G. mangiferae, Phoma sp. foram isolados mais frequentemente das folhas, enquanto que nas raízes houve predominância dos fungos F. oxysporum, F. solani e Fusarium sp. Na análise dos fungos isolados, os índices de riqueza correspondentes ao índice de Simpson, Shannon e equitabilidade apresentaram os maiores valores para as folhas em relação às raízes, enquanto o índice de dominância foi maior nas raízes. Entretanto, a avaliação por meio do perfil de bandas gerados por meio da técnica PCR-DGGE, indicou que a riqueza era maior nas raízes do que nas folhas. Por meio dos testes de cultura pareada entre os fungos endofíticos isolados de G. max e fungos fitopatogênicos, foi observado que 38, 20% dos isolados inibiram o crescimento de um ou mais fitopatógenos, sendo um isolado da espécie G. mangiferae capaz de inibir o crescimento de S. sclerotorium e Phomopsis sp. O Fungo G. mangiferae foi então selecionado para a análise de seus metabólitos e após a extração metabólica, a atividade antifúngica de G. mangiferae foi perdida. Entretanto foi constatada atividade antibacteriana contra Staphylococcus aureus e Lactococcus lactis. Essa fração contendo atividade antibacteriana foi analisada por LC-MS e não foram detectadas massas moleculares específicas para compostos antibacterianos já descritos e isolados de G. mangiferae (ácido guignárdico e guignardone I). Na análise de perfil metabólico e metaboloma por meio de GC-MS e LC-MS entre os dois isolados de G. mangiferae, isolados de diferentes hospedeiros e regiões geográficas, variações metabólicas foram verificadas entre os dois isolados, tanto pela análise dos cromatogramas de íons quanto nos compostos detectados e por meio da análise dos componentes principais. Por meio do perfil metabólico e intensidade relativa de cada íon específico detectado entre os dois isolados da espécie G. mangiferae, foi possível verificar que o fungo F75 (G. max, Brasil) produziu em maior quantidade o hormônio vegetal GABA e 2,3-butanodiol (composto usado na produção de borracha sintética, solventes e drogas farmacêuticas), enquanto o isolado ICMP 15453(V. virgatum, Nova Zelândia) apresentou uma maior produção para o antifúngico benzofurano. Além disso, foi detectado uma grande quantidade de ácido fumárico e málico em ambos os isolados. Esses resultados demonstram que existe uma grande diversidade na comunidade fúngica endofítica associada a G. max e que alguns dentre os fungos endofíticos são potencialmente promissores como controladores de fungos fitopatógenos e produtores de compostos antimicrobianos, bioativos e de interesse industrial. Além disso, foi verificado que a mesma espécie isolada de hospedeiros e regiões diferentes apresenta variações em seus metabolismos. / The endophytic fungi are microorganisms that live inside the plants, colonizing the intercellular spaces of all organs and tissues, without apparently causing any damage to the host. Some endophytic fungi show activity as phytopathogens controller, through competition for nutrients and space or for the production of antibiotics. In addition fungi perform several important functions to the host, the endophytic fungi are potentially useful in agriculture and industry to become a viable alternative for obtaining substances of economic interest, such as enzymes, antibiotics, and other bioactive compounds related to the fungal metabolism. Studies have demonstrated that plant Glycine max is a reservoir for endophytic fungal species and between these species there are decomposers, producers of bioactive compounds, biocontrollers of pathogens and phytopathogenic species. This study aimed to (I) isolate endophytic fungi G. max leaves and roots, identify them by ITS-PCR, which corresponds to the internal transcribed spaces (ITS) and morphological taxonomy; (II) to study the diversity of fungi isolated in culture medium and by denaturing gradient gel elecrophoresis (DGGE); (III) to evaluate the activity of G. max isolated biocontrollers fungi against phytopathogens (Phomopsis sp., Sclerotinia sclerotorium, Fusarium oxysporium, Fusarium solani and Colletotrichum trucatum); (IV) to extract metabolites of the endophytic fungus selected in biocontrol of phytopathogens test (Guignardia mangiferae) and to analyze the antimicrobial compounds by fractionation on silica gel column; (V) to evaluate the differences between isolates of endophytic fungus G. mangiferae collected from different hosts (G. max and Vaccinium virgatum) and geographical regions (Brazil and New Zealand) in relation to the metabolic profile and metabolome. The study was initiated with the isolation of endophytic fungi from G. max, which were characterized based on morphological and molecular characteristics (ribosomal regions ITS1, 5.8 and ITS2). 229 fungi were isolated from G. max, 187 being isolated in leaves and 42 in roots. Fungi as Ampelomyces sp., Cladosporium cladosporioides, Colletotricum gloeosporioides, Diaporthe helianthi, G.mangiferae and Phoma sp. were more frequently isolated from the leaves while the roots predominated fungi like F. oxysporum, F. solani and Fusarium sp. In the analysis of fungi isolated, the richness, Simpson, Shannon and equitability indeces showed the highest values for the leaves in relation to the roots, while the dominance indices were higher in the roots. However, the evaluation through band profile generated by PCR-DGGE technique showed that the richness has been higher in roots than in leaves. Through the paired culture tests between endophytic fungi isolated from G. max and phytopathogenic fungi it was observed that 38.20% were able to inhibit the growth of phytopathogens, one isolated from the species G. mangiferae was able to inhibit the growth of S. sclerotorium and Phomopsis sp. The fungus G. mangiferae was selected for the analysis of metabolites and after the metabolic extraction, the antifungal activity of G. mangiferae was lost. However it was detected antibacterial activity against Staphylococcus aureus and Lactococcus lactis. This fraction containing antibacterial activity was analyzed by LC-MS and specific compounds described and isolated from G. mangiferae (guignardic acid and guignardone I) have not been detected in antibacterial fraction. In the metabolic profile and metabolome analysis by GC-MS and LC-MS between the two isolates of G. mangiferae isolated from different hosts and geographic regions, metabolic changes were observed between the two isolated both through the ion chromatograms and the principal components analysis. Through the metabolic profile and relative intensity of each specific ions detected between two isolates species of the G. mangiferae, the fungus F75 (G. max, Brazil) produced the largest amount of plant hormone GABA and 2,3-butanediol (compound used in synthetic rubber production, solvents and pharmaceutical drugs) while ICMP 15453 (V. virgatum, New Zealand) isolate had a higher production for the antifungal benzofuran. In addition, has been detected a large production of fumaric and malic acid in both isolates. These results demonstrate that there is a great diversity in fungal community associated with G. max and that these endophytic fungi are potentially promising as biocontrollers of phytopathogens and producers of antimicrobial and bioactive compounds. In addition, we find that the same species isolated from different hosts and regions have variations in their metabolisms.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T21:19:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 328841.pdf: 2986945 bytes, checksum: 4033a44bd5eb5793f2bbbfc569a1570f (MD5) Previous issue date: 2014 / Organismo geneticamente modificado (OGM) é um organismo cujo material genético foi manipulado através da utilização de técnicas de DNA recombinante. Apesar da adoção generalizada de OGMs por muitos países, a necessidade de pesquisas em biossegurança continua sendo uma preocupação. As técnicas de transformação genética atualmente utilizadas para o desenvolvimento de plantas geneticamente modificadas inserem construções transgênicas em regiões aleatórias no genoma da planta hospedeira e são muitas vezes integradas perto de elementos genéticos importantes, como retrotransposons e sequências repetidas. Isto impõe riscos adicionais devido à introdução de novas sequências reguladoras, que podem conduzir a alterações espaciais e temporais na expressão de genes endógenos. Estas imprevisibilidades podem ter efeitos adversos sobre a estabilidade genética em longo prazo, bem como no valor nutricional, alergenicidade e toxicidade do OGM. Estes processos genéticos representam áreas de pesquisa omitida, bem como lacunas no conhecimento relacionado a potenciais efeitos na saúde e meio-ambiente. Além disso, a abordagem atual para a avaliação de possíveis efeitos indesejados de OGMs é baseada na suposição de que um OGM é composto por duas partes, a planta e a proteína transgênica, que funcionam de forma linear e aditiva. Esta abordagem, que se baseia no conceito de "equivalência substancial", é altamente criticada pela comunidade científica e carece de hipóteses científicas bem fundamentadas. Assim, o objetivo deste trabalho foi testar dois novos modelos metodológicos para caracterizar os potenciais efeitos adversos dos OGMs em nível molecular. A primeira abordagem é baseada na análise comparativa do perfil proteico e níveis de transcrição transgênica de uma variedade de milho GM contendo duas inserções transgênicas, outra contendo apenas uma inserção sob o mesmo background genético e a variedade convencional correspondente. Este modelo biológico proporciona uma oportunidade única de rastreamento de potenciais alterações no proteoma que derivam da combinação dos dois transgenes. A segunda abordagem baseia-se na utilização da ferramenta de interferência por RNA para o silenciamento gênico. Esta ferramenta fornece um meio para estudar genótipos transgênicos sem a acumulação de proteínas transgênicas, isolando assim os efeitos da inserção per se. O desenvolvimento dessas metodologias também acarretou em uma extensa revisão da literatura sobre ensaios de interferência por RNA expressas de maneira transiente e estável em plantas. Os resultados observados demonstram que as construções transgênicas não funcionam de forma linear e aditiva. Mas influenciam a expressão global de genes endógenos, principalmente relacionados ao metabolismo energético e de estresse, dependendo do número de cópias e da natureza do transgene inserido. A presença de mais de um inserto no genoma hospedeiro também altera os níveis de expressão do transgene. Ainda, a análise proteômica de plantas transgênicas silenciadas revelou um baixo número de proteínas endógenas alteradas, indicando que o acúmulo de proteína transgênica é um dos principais fatores que influenciam a modulação do proteoma da planta hospedeira. Portanto, conclui-se que as novas abordagens metodológicas descritas e testadas podem fornecer uma metodologia científica útil e robusta para avaliações de risco de OGMs. Por fim, sugerimos que as agências regulatórias de biossegurança de OGMs considerem que este tipo de estudo seja obrigatório e parte dos documentos produzidos pelos proponentes da tecnologia que visam a liberação comercial de novos eventos de transformação genética.<br> / Abstract: Genetically modified organism (GMO) is an organism whose genetic material has been altered through the use of recombinant DNA techniques. Despite the widespread adoption of GMOs by many countries, the need for biosafety research remains a concern. Actual plant transformation methods include integration of transgenic constructs that take place at random locations in the recipient plant genome and are often close to important genetic elements, such as retrotransposons and repeated sequences. This poses additional risks due to the introduction of new promoter sequences, which may lead to altered spatial and temporal expression patterns of plant endogenous genes. All these events may have unpredictable effects on the long-term genetic stability of the GMO, as well as on their nutritional value, allergenicity and toxicant contents. These putative processes represent areas of omitted research with regard to health and environmental effects of GMOs. In addition, the current approach for the assessment of potential unintended effects of GM crops is based on the assumption that a GMO consists of two parts that function in a linear additive fashion, being that the crop and the novel GM transgene product. Based on the "substantial equivalence" concept, this approach is highly disputed in the scientific community and lacks a well founded scientifically driven hypothesis testing. In this work, two different new methodological models were used to characterize potential adverse effects of GMOs at the molecular level. The first approach is based on the comparative proteomic analysis and transgenic transcript level quantification of a stacked GM maize variety containing two transgenic inserts versus the two single transgenic parental varieties. This biological model provides a unique opportunity to track potential changes in the host proteome that derived from the combination of two transgenes. The second approach is based on the use of RNA interference tool prior to the comparative analysis. By enabling transgene silencing, this tool provides a means to study transgenic genotypes without the accumulation of transgenic protein, thus isolating insertional effects. The development of all these methodologies lead to an extensive literature review on transient and stable RNAi experiment in plants, which then resulted in a review article on this subject. The obtained results showed that transgene constructs do not function in a linear additive fashion, but instead alter endogenous proteome profile. These protein modulations are mainly related to energetic and stress metabolism, which then depended on the number of copies and the nature of inserted transgene sequences. The presence of more than one inserted sequences also affects the levels of transgene expression. In addition, the proteomic analysis of silenced transgenic plants showed a low number of altered endogenous proteins, indicating that the accumulation of transgenic protein is one of the main factors that influence the modulation of the host plant proteome. Therefore, it is concluded that the new methodological approaches described and tested can provide a useful and robust scientific methodology for risk assessment of GMOs. Finally, we suggest that GMO safety regulatory bodies take into account this kind of study and requires that it becomes part of the documentation produced by technology proponents intend to commercialize new genetic transformation events.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-09-22T04:08:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334739.pdf: 3684799 bytes, checksum: 0ddc65eb696ceae8a137240cbd733eab (MD5) Previous issue date: 2015 / Uma importante questão ainda muito polêmica no mundo está relacionada com os riscos da liberação comercial de organismos geneticamente modificados (OGM), particularmente o impacto ambiental que as plantas geneticamente modificadas podem gerar. Este trabalho tem como objetivo geral investigar as possíveis alterações bioquímicas e dos produtos da expressão gênica de uma variedade comercial de milho transgênico tolerante ao Roundup Ready® (evento NK603), submetida a condições de déficit hídrico e aplicação de herbicida. O primeiro ensaio realizado, denominado Ensaio sem herbicida, foi um ensaio em blocos ao acaso com distribuição trifatorial (Transgenia x Estresse x Ambiente). Este ensaio foi realizado em casa de vegetação (cv) e câmara de crescimento (cc) (fator Ambiente), composto por híbridos transgênicos (T) e sua isolinha convencional (C) (fator Transgenia), submetidos a rega controle (CONT) ou seca (SECA) (fator Estresse). O segundo ensaio, denominado Ensaio com herbicida, foi um ensaio em blocos ao acaso unifatorial, o qual foi formado também por três blocos, sendo cada unidade experimental composta por um grupo de três vasos (uma planta por vaso), com dois tratamentos: Milho Transgênico submetido a seca com aplicação de herbicida (TSECA RR); Milho Transgênico submetido a seca sem aplicação de herbicida (TSECA). A análise proteômica comparativa DIGE demonstrou diferença na expressão de proteínas entre as plantas de milho transgênicas (NK603) e sua isolinha convencional mais próxima (31 spots). O fato de terem sido detectadas proteínas diferencialmente expressas entre os tratamentos CCONT x TCONT (17 spots) e CSECA x TSECA (14 spots), leva a conclusão de que estas plantas não diferem entre si apenas pela expressão da proteína alvo da transformação genética (CP4 EPSPS) conforme proposto pela empresa proponente desta tecnologia e assim levado em consideração pelas agências regulatórias. Além disso, apesar do nível de variação causada pelo modificação genética não se diferir do nível da variação causada pelo ambiente (em termos de número total de proteínas diferenciais), as plantas transgênicas respondem diferencialmente com relação a sua linha isogênica quando cultivadas no mesmo ambiente, o que apoia a ideia da existência de efeitos pleiotrópicos oriundo da inserção da sequência exógena para o evento NK603. A análise comparativa do proteoma no segundo ensaio ainda revelou que a aplicação de herbicida nas plantas transgênicas em situação de estresse por desidratação resulta no aumento da expressão de algumas proteínas e até no provável silenciamento de um ou mais genes responsável pela transcrição de uma proteína. As análises de quantificação de alguns dos principais fitormônios envolvidos nos mecanismos de defesa a estresse pelas plantas, revelou que a concentração de ABA, MeJA, SA, CA e GA3 foi diferente entre as plantas transformadas e não-transformadas, bem como as interações foram significativas entre os fatores  Estresse e  Ambiente . Verificou-se também que a situação de estresse e o cultivo em diferentes ambientes resultaram na variação no conteúdo de todos os fitormônios analisados. Com relação a análise quantitativa de lignina, a transformação genética também provocou alterações no teor de LTGA, pois assim como encontrado por outros autores em diferentes eventos de transformação, as plantas transformadas (NK603) apresentaram teores de lignina superior aos das plantas não transformadas.Além disso, a análise de lignina nos tratamentos do segundo ensaio revelou que a aplicação de herbicida em plantas transgênicas em situação de déficit hídrico provocou ainda mais o aumento no teor de lignina. O tratamento TSECA RR apresentou em média um aumento de 33% na concentração de LTGA em comparação ao tratamento TSECA. Portanto, os resultados encontrados neste trabalho concordam com resultados de outros estudos sobre a existência de efeitos pleiotrópicos relacionados a expressão proteica, aumento nos teores de fitormônios e lignina em plantas geneticamente modificadas (evento NK603), submetidas a diferentes condições de cultivo.<br> / Abstract : A worldwide important issue still very controversial is related to the risks of commercial release of genetically modified organisms (GMO), particularly the environmental impact that genetically modified (GM) plants can generate. This study aims to investigate possible biochemical changes of a commercial hybrid of GM maize (event NK603) and its counterpart, subjected to drought stress conditions and herbicide application. The first experiment, called experiment without herbicide, was a factorial experiment being the plots arranged in a three randomized block design (Transgenic x Stress x Environment). This experiment was conducted in a greenhouse (cv) and growth chamber (cc) (Environment factor), composed of transgenic hybrid (T) and its conventional isogenic line (C) (Transgenic factor), subject to water control (CONT) or drought stress conditions (SECA) (Stress factor). The second experiment, called Experiment with herbicide application, was an experiment in a randomized block design, with three repetitions. In that case each experimental unit was composed of a group of three pots (one plant per pot) with two treatments: GM maize submitted to drought stress and herbicide application (TSECA RR); GM maize subjected to drought stress without herbicide application (TSECA). The comparative proteomic DIGE showed difference in protein expression between transgenic maize (NK603) and its conventional isoline (31 spots). The fact that differentially expressed proteins detected between CCONT x TCONT treatments (17 spots) and CSECA x TSECA (14 spots), leads to the conclusion that these plants do not differ only by the expression of the target gene transformation (CP4 EPSPS) as proposed by the proponent of the technology. Furthermore, although the level of variation caused by genetic modification does not differ from the level of variation caused by the environment (in terms of total number of differential proteins), transgenic plants respond differentially in respect to their isogenic line when grown in the same environment, which supports the idea of pleiotropic effects from the genetic transformation for the NK603 event. The comparative analysis of the proteome in the second experiment also showed that herbicide application in transgenic plants under drought stress results in increased expression of some proteins and in a probable silencing of one or more genes responsible for the transcription of a protein. Quantification analyzes of some of the major plant hormones involved in defense mechanisms to stress in plants, showed that the concentration of ABA, MeJA, SA, CA and GA3 were different between the GM plants and non-GM, as well as interactions between "Stress" and "Environment" were significants. It was also verified that the stress situation and cultivation in different environments resulted in variation in the content of all plant hormones analyzed. Regarding the quantitative analysis of lignin, the genetic transformation also changed lignin content. Similarly to other studies done in different events of genetic transformation, the GM NK603 plants presented higher lignin content than the non-GM plants. In addition, the lignin analysis in the second experiment revealed that the herbicide application in transgenic plants under drought stress situation causes increase in lignin content. The TSECA RR treatment showed 33% increase in the concentration of LTGA compared to TSECA treatment. Therefore, the findings of this study agree with the results found by other studies about the presence of pleiotropic effects related to protein expression, plant hormones synthesis and lignin content in plants of the event NK603, under different growing conditions.

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:50:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000005.pdf: 966313 bytes, checksum: c413bb917dd566382f90432606995490 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A técnica de PCR em Tempo Real é uma poderosa ferramenta de quantificação de OGM em alimentos, mas ainda é muito influenciada por fatores como amostragem, eficiência daextração do DNA, presença de substâncias inibidoras da reação de PCR, pelo nível de degradação do DNA e pelo próprio genoma vegetal. Atualmente, a quantificação de soja GM está relativamente limitada ao uso de kits sendo um dos mais utilizados, o que tem como sequência alvo o promotor p35S. A quantificação de soja RR em matrizes complexas que possam conter esse elemento genético oriundo de outros vegetais pode resultar em falso positivos ou em níveis superestimados de OGM. O desenvolvimento de métodos evento específicos visa à quantificação dessas matrizes com maior confiabilidade. Este trabalho teve como objetivos principais o desenvolvimento de um método evento específico que tem com alvo a região de integração do p35S e o genoma da soja; a avaliação de alguns indicadores de desempenho e quantificação de duas matrizes com o método desenvolvido; a avaliação do desempenho do kit TaqMan GMO 35S Soy Detection que tem como alvo o p35S, utilizado na rotina; a determinação do conteúdo de OGM em alimentos processsados pelo kit; e a avaliação do efeito de dois protocolos de extração de DNA na reação de PCR em tempo real. Os resultados mostraram que tanto o método de extração pelo CTAB como o kit DNeasy® (Qiagen) foram eficientes na extração de DNA das amostras de diferentes graus de processamento e que as análises comparativas das curvas analíticas da amplificação da lectina e do p35S não revelaram influência significativa dos métodos de extração na eficiência da PCR em tempo real. Os parâmetros de desempenho do kit de quantificação demonstraram linearidade, eficiência e sensibilidade e LOD em torno de 0,0125% e LOQ de 0,05%.

Made available in DSpace on 2014-09-09T12:30:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 78.pdf: 966313 bytes, checksum: c413bb917dd566382f90432606995490 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A técnica de PCR em Tempo Real é uma poderosa ferramenta de quantificação de OGM em alimentos, mas ainda é muito influenciada por fatores como amostragem, eficiência daextração do DNA, presença de substâncias inibidoras da reação de PCR, pelo nível de degradação do DNA e pelo próprio genoma vegetal. Atualmente, a quantificação de soja GM está relativamente limitada ao uso de kits sendo um dos mais utilizados, o que tem como sequência alvo o promotor p35S. A quantificação de soja RR em matrizes complexas que possam conter esse elemento genético oriundo de outros vegetais pode resultar em falso positivos ou em níveis superestimados de OGM. O desenvolvimento de métodos evento específicos visa à quantificação dessas matrizes com maior confiabilidade. Este trabalho teve como objetivos principais o desenvolvimento de um método evento específico que tem com alvo a região de integração do p35S e o genoma da soja; a avaliação de alguns indicadores de desempenho e quantificação de duas matrizes com o método desenvolvido; a avaliação do desempenho do kit TaqMan GMO 35S Soy Detection que tem como alvo o p35S, utilizado na rotina; a determinação do conteúdo de OGM em alimentos processsados pelo kit; e a avaliação do efeito de dois protocolos de extração de DNA na reação de PCR em tempo real. Os resultados mostraram que tanto o método de extração pelo CTAB como o kit DNeasy® (Qiagen) foram eficientes na extração de DNA das amostras de diferentes graus de processamento e que as análises comparativas das curvas analíticas da amplificação da lectina e do p35S não revelaram influência significativa dos métodos de extração na eficiência da PCR em tempo real. Os parâmetros de desempenho do kit de quantificação demonstraram linearidade, eficiência e sensibilidade e LOD em torno de 0,0125% e LOQ de 0,05%. / Real-Time PCR is a powerful tool for GMO quantification in food, but is influenced by factors such as sampling, DNA extraction methods, presence of PCR inhibitors, the degree of DNA degradation and by the plant genome. Currently, the quantification of GM soybean is relatively limited to the use of kits and one of the most used has as target sequence the promoter p35S. The quantification of RR soy in complex matrices that may contain this genetic element originated from other plants may result in false positives or overestimated levels of GMOs. The development of methods event specific aims at quantifying these matrices reliably. This work had as main goals the development of an event specific method targeting the p35S integration region/soybean genome; the evaluation of some performance criteria and quantification of some matrices using the developed method; the performance evaluation of the "TaqMan® GMO 35S Soy Detection kit”, targeting the p35S, used in the routine; the determination of the GMO content in foods using this kit; and the evaluation of the influence of two DNA extraction methods on the real time PCR. The results showed that either the extraction method by CTAB or DNeasy® kit (Qiagen) were efficient providing DNA from samples with different degree of processing, and the comparative analysis of lectin and p35S calibration curves did not reveal significant influence of the DNA extraction method on real time PCR efficiency. The performance criteria of the TaqMan® GMO 35S Soy Detection kit indicated linearity, efficiency and sensitivity, LOD around 0.0125% and LOQ of 0.05%. Analysis of food samples revealed GMO contents ranging from 0.05 to 1% in 63.2% and more than 1% in 36.8% of samples. The event specific method developed for the quantification of RR soybeans was linear, showed PCR efficiency ranging from 86% to 109%, accuracy in quantifying the number of copies of the MRC from 3.6% to 12.7%, and the Cts values were highly reproducible. The results of the quantification of GMO content in samples of biscuit, mixture of flours and MRC 0.5%, using the primers and probes designed, demonstrated accuracy of the developed method indicating that studies should be continued with other matrices with different contents of RR soy for further validation. This method will enable the differential quantification between RR soybeans and the two others events of soybeans tolerant to ammonium glifosinate herbicide, approved in Brazil, since the method used in INCQS is based on the amplification of p35S, used in the construction of these three events.

Submitted by Mario Mesquita (mbarroso@fiocruz.br) on 2014-11-06T10:49:42Z No. of bitstreams: 1 Nelson_Pinheiro_EPSJV_Mestrado_2012.pdf: 634753 bytes, checksum: 802aec65f3c41fe197b50862303090ec (MD5) / Approved for entry into archive by Mario Mesquita (mbarroso@fiocruz.br) on 2014-11-06T12:07:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Nelson_Pinheiro_EPSJV_Mestrado_2012.pdf: 634753 bytes, checksum: 802aec65f3c41fe197b50862303090ec (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-06T12:07:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nelson_Pinheiro_EPSJV_Mestrado_2012.pdf: 634753 bytes, checksum: 802aec65f3c41fe197b50862303090ec (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Escola Politécnica de Saúde Joaquim Venâncio. Programa de Pós-Graduação em Educação Profissional em Saúde. / O presente estudo tenciona captar as relações entre o conteúdo dos documentos da política de Educação Técnica Profissional no Brasil, no período de 1996 a 2004, realizada por meio da Lei 9394/96, Decretos 2208/97 e 5514/04, Parecer CNE/CEB 16/99 e Resolução CNE/CEB 04/99 e a influencia do pensamento educacional dos organismos internacionais, particularmente o PREAL (Programa de Promoção da Reforma Educativa da América Latina e Caribe). Pretende-se identificar as relações entre o ideário empresarial e os documentos oficiais brasileiros nesse período. Esse organismo se insere na política educacional brasileira a partir de 1996, juntamente com o neoliberalismo avançando sobre a nossa economia. Será discutida sua intencionalidade hegemônica e sua finalidade mantenedora meritocrática no mundo do trabalho. A sua atuação na gestão educacional vem, de forma velada, conformar decisões de Estado e gestão público/privada, promovendo a organização curricular descentralizada que deveria ser, exclusivamente, uma atribuição do Estado. O método da pesquisa será qualitativo, com levantamento bibliográfico de textos produzidos por esse organismo e, ainda publicações de terceiros afixados em sua página virtual. Pretende-se analisar as estratégias utilizadas por esse organismo, analisando o conteúdo de seu discurso e as consequências para a área educacional quando, esses organismos, passam a atuar de forma velada nas decisões de Estado. O estudo será feito considerando o materialismo histórico dialético. / Este estudio tiene la intención de captar las relaciones entre el contenido de los documentos de política de la Educación Técnico Profesional en Brasil de 1996 a 2004, realizadas a través dela Ley 9394/96, Decreto 2208/97 y 5514/04, Opinión CNE/CEB 16/99 y Resolución CNE/CEB 04/99 y de la influencia del pensamiento educativo de las organizaciones internacionales, en particular el PREAL (Programa de Promoción de la Reforma Educativa en América Latina y el Caribe). Se pretende identificar las relaciones entre las ideas de negocio y documentos oficiales sobre educación profesional técnica brasileña en ese período. Esta agencia es parte de la política educativa brasileña desde 1996, junto con el neoliberalismo avanzando en nuestra economía. Se discutirá la intencionalidad hegemónica y guardián propósito meritocrático en el mundo del trabajo. Su actuación en la administración educativa viene, secretamente, para ajustarse a las decisiones del Estado y la organización de la gestión pública/privada que promueve currículo descentralizado que debe ser, exclusivamente, una función del Estado. El método de investigación es de tipo cualitativo, con bibliografía de los textos producidos por el cuerpo y también las publicaciones de terceros publicado en sus páginas web. Se pretende analizar las estrategias utilizadas por el cuerpo a través del análisis del contenido de su discurso y sus consecuencias para la educación cuando estos organismos vienen a actuar de forma encubierta en las decisiones del Estado. El estudio se llevará a cabo teniendo en cuenta el materialismo histórico y dialéctico.

LOPES, Eva Dayana Oliveira Rios. Efeito da água produzida nos atributos microbiológicos do solo sob cultivo de plantas no semiárido. 2013. 55 f. Dissertação (Mestrado em ecologia e recursos naturais)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2013. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-05-19T20:20:06Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_edorlopes.pdf: 951633 bytes, checksum: eb905fc184592cb0c4bc4f03338b7291 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-27T20:14:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_edorlopes.pdf: 951633 bytes, checksum: eb905fc184592cb0c4bc4f03338b7291 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T20:14:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_edorlopes.pdf: 951633 bytes, checksum: eb905fc184592cb0c4bc4f03338b7291 (MD5) Previous issue date: 2013 / Environmental degradation and water restrictions in semiarid regions undertake agricultural production and reinforce the need for water management to maintain crop productivity. Researchers suggest the use of produced water, obtained in the process of oil extraction, as alternative of irrigation, especially in areas close to oil fields with water scarcity. However, there have been limitations on application this water due to the common presence of salts, metals and toxic compounds that may to impact negatively the soil. This study aimed to evaluate soil microbiological attributes in areas under cultivation of bioenergy plants irrigated with different waters (underground and produced water) and compare them with controls uncultivated and native vegetation soils. Experiments with species of sunflower and castor beans irrigated with water collected from underground (AC), produced water treated with simple filtering (APF), produced water treated by reverse osmosis (APO) and uncultivated soil (NCNI) were conducted on Belém farm, Aracati, Ceará state, Brazil. The surface layer of soil (0-10 cm) was collected in the ranks of pre-planting and planting during the growing and flowering plants, and evaluated by the population density of filamentous fungi and cultivable bacterias, organic carbon (COT), microbial biomass carbon (CBM), basal respiration (RB), metabolic quotient (qCO2) and enzyme activity. The results of this study revealed that treatment with APF and APO affect differently soil attributes, with the first positively changing the number of microorganisms and enzyme activity, while the second reduces dehydrogenase and populations of fungi and bacterias of soil. However, treatments with AC and APF had similar effects on indicators studied. Differences were not found between treatments when analyzed soil parameters of management COT, CBM, RB and qCO2 in first crop cycle. The values of most microbiological indicators evaluated were similar in native forest and areas cultivated with bionergy plants irrigated. / A degradação ambiental e as restrições hídricas de regiões semiáridas comprometem a produção agrícola e reforçam a necessidade de manejo da água para manutenção da produtividade das culturas. Pesquisas sugerem o uso de água produzida, obtida no processo de extração do petróleo, como alternativa de irrigação, especialmente em áreas próximas aos campos petrolíferos com escassez de água. No entanto, têm-se limitações da aplicação dessa água devido à presença comum de sais, compostos tóxicos e metais que podem impactar negativamente o solo. Este estudo teve por objetivo avaliar atributos microbiológicos do solo cultivado com oleíferas irrigadas com diferentes águas (subsolo e água produzida) e compará-los com solos controles não cultivados e sob vegetação nativa. Experimentos com espécies de girassol e mamona irrigadas com água captada do subsolo (AC), água produzida tratada com filtragem simples (APF), água produzida tratada por osmose reversa (APO) e solo não cultivado (NCNI) foram conduzidos na fazenda Belém, Aracati, Ceará. O solo rizosférico da camada superficial (0-10 cm) foi coletado nos períodos pré-plantio e durante as fases de crescimento e florescimento das culturas, e avaliado através das variáveis densidade populacional de fungos filamentosos e bactérias cultiváveis, carbono orgânico (COT), carbono da biomassa microbiana (CBM), respiração basal (RB), quociente metabólico (qCO2) e atividade enzimática. A partir dos resultados pôde-se concluir que tratamentos com APF e APO afetam de forma distinta os atributos do solo, com o primeiro alterando positivamente o número de micro-organismos e a atividade enzimática, enquanto o segundo reduz a desidrogenase e as populações de fungos e bactérias do solo. A irrigação com AC e APF teve efeitos semelhantes sobre os indicadores estudados. Não foram detectadas diferenças entre tratamentos de manejo do solo quando analisados os parâmetros COT, CBM, RB e qCO2 no primeiro ciclo das culturas. Os valores da maioria dos indicadores microbiológicos avaliados foram similares na mata nativa e nas áreas cultivadas com oleíferas irrigadas.

CHAVES, Francisco Ítalo Barbosa. Dinâmica de fitoplâncton e variáveis limnológicas no reservatório de General Sampaio, semiárido do Ceará. 2013. 108 f. Tese (Doutorado em ecologia e recursos naturais)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2013. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-05-27T19:26:33Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_fibchaves.pdf: 9361887 bytes, checksum: 87f834d4cc1b0bd1d4731b627a70839d (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-27T20:59:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_fibchaves.pdf: 9361887 bytes, checksum: 87f834d4cc1b0bd1d4731b627a70839d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T20:59:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_fibchaves.pdf: 9361887 bytes, checksum: 87f834d4cc1b0bd1d4731b627a70839d (MD5) Previous issue date: 2013 / Temporal fluctuations as those derived from seasonal variations and disturbances, may have an important role in maintaining the structure and diversity of biota. The Intermediate Disturbance Hypothesis states that the general characteristics of communities and population dynamics, especially the species richness may change the face of disturbances in ecosystems. Aquatic environments are subject to high temporal variability as a result of interactions between physical, chemical, and biological parameters. Consequently, species composition and relative abundance of populations and communities are subject to frequent rearrangements. This study aimed to evaluate the trophic conditions of the General Sampaio Reservoir, which is situated in the semiarid Ceará State of Brazil. We used the Trophic State Index (TSI) proposed by Toledo et al. (1983), and related it to species diversity, the relative abundance of phytoplankton and the variation of annual rainfall. We obtained climatic and physics data, Secchi disc transparency, total phosphorus, orthophosphate, nitrate, nitrite, ammonia, total nitrogen and chlorophyll a, in parallel to the sampling of phytoplankton for species identification and the calculation of the number counts. There was seasonal variability in the variables that were analyzed for the rainy versus dry climatic periods. Trophic conditions indicated the presence of oligotrophic to eutrophic conditions during the research in this reservoir. This variation facilitated favorable conditions for Chlorophyceae dominance during the rains periods, and for cyanobacteria dominance during the dry periods. Thus, it may be argued that the trophic state and relative abundance of phytoplankton is related to seasonal fluctuations in the hydrology of the reservoir system, which reflects a unique feature of semiarid regions. / Flutuações temporais como as originadas de variações sazonais e perturbações climáticas, possuem função importante na manutenção da estrutura e da diversidade nas comunidades bióticas. A Hipótese do Distúrbio Intermediário explica que as características gerais das comunidades e a dinâmica das populações, especialmente a riqueza de espécies, pode sofrer alterações diante de distúrbios nos ecossistemas. Ambientes aquáticos estão sujeitos à variabilidade temporal elevada, como resultado de interações entre parâmetros físicos, químicos e biológicos. Consequentemente, a composição de espécies e abundância relativa das populações e comunidades está sujeita a rearranjos frequentes. Este estudo teve como objetivo avaliar as condições tróficas do reservatório de General Sampaio, que está situado no estado do Ceará, semiárido do Brasil. Utilizou o Índice de Estado Trófico (TSI) proposto por Toledo et al. (1983), e o relacionou à abundância relativa, à dominância de fitoplâncton e à variação anual da pluviosidade. Foram obtidos dados climáticos, físicos, para a transparência do disco de Secchi, fósforo total, ortofosfato, nitrato, nitrito, amônia, nitrogênio total e clorofila a, em paralelo com a amostragem de fitoplâncton para identificação e cálculo de contagem do número de indivíduos componentes das espécies. Houve variabilidade estacional das variáveis que foram analisadas para os períodos climáticos chuvoso e seco. Condições tróficas indicaram a presença de condições oligotróficas à eutróficas durante o período analisado. Esta variação promoveu condições favoráveis para um padrão de dominância do grupo Chlorophyceae, durante as estações chuvosas, e de cianofíceas durante as estações secas. Assim, pode-se argumentar que estado trófico e abundância relativa das espécies de fitoplâncton estão relacionados com as flutuações sazonais na hidrologia do sistema deste reservatório, que reflete uma característica exclusiva de regiões semiáridas.

Este trabalho se insere, de maneira geral, na esteira das discussões sobre a relação sociedade-natureza, tendo como centralidade temática as biotecnologias transgênicas, em especial as plantas geneticamente modificadas. Esse tema é entendido em meio ao desenvolvimento de estudos que se referem ao conhecimento sobre a vida e que têm ganhado visibilidade nas últimas décadas. A expansão de pesquisas em biologia molecular, fisiologia, bioquímica, microbiologia e, fundamentalmente, engenharia genética se comungam na tentativa de propor novas formas coletivas de organização do cotidiano. Inúmeras controvérsias em torno dos organismos geneticamente modificados (OGMs) fazem emergir uma vasta gama heterogênea de agentes os quais se articulam uns aos outros na tentativa de recompor o coletivo. A atividade científica, assim, passa a ser visualizada por meio da produção conjunta entre estes mediadores. O que se deseja, portanto, não é falar de ideias e conceitos, mas das condições de possibilidade de existência das biotecnologias transgênicas mediante as práticas dos agentes nelas envolvidos. Entende-se que essas novas tecnologias sobre a vida são construídas por múltiplos processos de mediação, operando nos mais diversos espaços e locais, entrelaçando laboratórios, grupos econômicos e políticos, companhias privadas, agricultores, donas de casa, genes, bactérias, lavouras, insetos, parlamentos e tribunais judiciários, entre outros. Pretende-se, dessa forma, realizar uma cartografia das associações e dos modos de ação desses mediadores, recortada a partir das controvérsias sobre transgênicos ocorridas no sul do Brasil. Para tanto é preciso seguir os mediadores à medida que seus movimentos se estratificam com o objetivo de compor essas cadeias e instaurar uma diferença. Metodologicamente, a pesquisa foi conduzida em meio a observações e entrevistas com cientistas, técnicos, agricultores e Organizações Não-Governamentais que têm se ocupado com o tema nos últimos anos. Explorando os conceitos de mediação, tradução e agenciamento espera-se produzir uma análise que : a) registre as variações pelas quais os agentes se apresentam ao se associarem uns aos outros; b) demarque as diferenças que tais acoplamentos visam instaurar; e c) problematize o próprio quadro ontológico e metodológico que a sociologia se encontra. Pretende-se, com isso, expandir o debate e abrir outros pontos de partida entre a confluência de uma postura acadêmica e um agir politicamente orientado. / This work fits in in the framework that follows, in a general way, the discussions about the relation nature-society, having transgenics biotecnologies, specially genetic modified plants, as a theme core. This theme is understood by the development of studies that refer to the knowledge of life and have being acquiring visibility in the past recent decades. The expasion of researches in the fields of molecular biology, fisiology, biochemistry, microbiology and, fundamentally, genetic engeneering assembles together in proposing new colective ways of organization of the daily bases. Numerous controversies surrounding genetically modified organisms (GMOs) are emerging out a wide range of heterogeneous agents which are linked to each other in an attempt to restore the collective. The scientific activity, thus, becomes viewed as one joint production of these mediators. What is in question, therefore, it is not talking about ideas and concepts, but about the possible conditions of existence of transgenic biotechnologies through the practices of agents involved in this matter. It is understood that these new technologies are built for multiple mediation processes, operating in various spaces, connecting laboratories, economic and political groups, private companies, farmers, housewives, genes, bacteria, crops, insects, parliaments and courts of justice, among others. The aim is to perform a cartography of associations and modes of action of these mediators, having as empirical terrain the controversies over transgenic crops occurred in southern Brazil. To follow these mediators as they stratify their moves in order to compose these chains and establish a difference is needed. Methodologically, this research was conducted by observations and interviews with scientists, technicians, farmers and non-governmental organizations that have been making their presence in the subject in recent years. Exploring the concepts of mediation, translation and agency is expected to produce an analysis that: a) tracks the variations that the agents assume in the act of join each other; b) tracks the differences such couplings aimed to establish; and c) problematize own the ontological and methodological framework that sociology currently occupies. It is intended, therefore, to expand the debate and open some points of departure between the confluence of an academic posture and the need of an action politically oriented.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T05:05:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339561.pdf: 2519282 bytes, checksum: 82b63d82508ac6d22bd2ec93f83608fe (MD5) Previous issue date: 2016 / Organismo Geneticamente Modificado (OGM) é definido como um organismo cujo material genético ? DNA/RNA - tenha sido modificado por qualquer técnica de engenharia genética e, portanto, pode apresentar riscos advindos da sua manipulação. Para minimizar estes riscos, órgãos reguladores internacionais exigem que o OGM desenvolvido seja submetido à uma análise de risco para a identificação e prevenção de efeitos adversos que podem levar a mudanças não intencionais pela presença de transgene(s) tanto em aspectos moleculares, quanto aspectos ecológicos e de saúde humana e animal. A principal abordagem em análises de risco envolve o conceito de equivalência substancial, onde as características do organis o odi icado são co paradas co a s a linha parental considerado seg ro para sos de ali entação h ana e ani al , en ol endo est dos de per or ance agron ica, fenot pica e ali entação ani al, ou ainda de composição ica e n tricional. proble a e an lises baseadas na e i al ncia s bstancial não le a e consideração as poss eis danças não intencionais geradas pela própria odi icação gen tica, a qual poderia causar potenciais alterações e prote nas (ou seja, poss eis prod tos t icos e alerg nicos). Portanto, o objetivo deste trabalho foi testar duas novas abordagens moleculares para caracteri ar os potenciais e eitos sin rgicos e antagonistas dos s e n el olec lar. A primeira abordagem visou avaliar comparativamente o perfil de expressão gênica (transcriptoma) de uma variedade de milho GM estaqueada (contendo duas proteínas inseticidas CRY e duas proteínas EPSPS que conferem tolerância ao herbicida glifosato), seus parentais GM simples e a linha isogênica não modificada, todas sob o mesmo background genético. Está combinação de genótipos permite isolar as potenciais alterações no transcriptoma que derivam da combinação dos dois transgenes na variedade estaqueada. A segunda abordagem visou avaliar comparativamente o perfil de expressão de micro RNAs (miRNAs) na mesma combinação de genótipos GMs de milho. miRNAs possuem a capacidade de regular a expressão gênica de diversos genes endógenos e, portanto, desempenham papéis fundamentais em diversos processos biológicos em um organismo. Os resultados das análises demonstraram que, para o perfil transcriptômico, diversos processos biológicos apresentaram diferenças em regulação, principalmente àqueles envolvidos em vias de redox, modificações pós-transducionais e regulação da transcrição gênica. Já para a análise dos perfis de expressão de miRNAs, alguns apresentaram uma regulação diferencial, e estesdemonstraram ser responsáveis pela regulação de fatores de transcrição endógenos, principalmente àqueles envolvidos em desenvolvimento foliar, mecanismos de resistência à estresse, transdução de sinais e processamento e tradução de RNA. Portanto, conclui-se que as abordagens moleculares utilizadas podem ser aplicadas como ferramentas úteis para aumentar a abrangência e confiabilidade em avaliações de riscos de OGMs. Por fim, recomendamos que outras investigações, visando compreender mais detalhadamente a relevância das mudanças encontradas, se a reali adas, al de s gerir e as ag ncias reg lat rias de biosseg rança de s considere e este tipo de estudo em futuras avaliações de risco para a liberação comercial de novos OGMs.<br> / Abstract : Genetically Modified Organism (GMO) is defined as an organism in which the genetic material ? DNA/RNA ? has been modified by any technique of genetic engineering and, therefore, could present risks resulting from its manipulation. In order to minimize these risks, international regulatory bodies demand that the newly developed GMO is submitted to a risk assessment in order to identify and prevent adverse effects of transgene(s) that could lead to unintended changes in the GMOs, both at molecular level and ecological and human and animal health aspects. However, the main approach used in risk assessment involves the concept of substantial equivalence, where the characteristics of the modified organism are compared to its parental line (considered safe for animal and human food and feed uses), involving studies of agronomic, phenotypic and animal feeding performances, as well as chemical and nutritional compositions. The problem is that analyses based on substantial equivalence do not take in consideration the possible non-intended changes generated by the genetic modification itself, which could cause potential alterations in proteins (i.e. possible toxic and allergenic products). Therefore, the goal of this study was to test two new molecular approaches to characterize the potential synergic and antagonistic effects of GMOs at the molecular level. The first approach aimed to comparatively evaluate the gene expression profile (transcriptomics) of a stacked GM maize variety (containing two insecticidal CRY proteins and two EPSPS proteins which confer tolerance to the glyphosate herbicide), its single GM parental and the near-isogenic non-modified line, all of them under the same genetic background. This combination of genotypes allows isolating the potential alterations in the transcriptomics that derive from the combination of the two transgenes in the stacked variety. The second approach aimed to comparatively evaluate the expression profile of micro RNAs (miRNAs) in the same combination of GM maize genotypes. miRNAs have the ability of regulating gene expression of several endogenous genes and, therefore, play major role in a range of biological processes in an organism. The results of the analyses demonstrated that, for the transcriptomic profile, several biological processes showed differences in regulation, particularly those involved in redox pathways, post-translational modifications and regulations of transcription. On the other side, the analysis of the miRNAs expression profiles showed a differential regulation, responsible for targeting endogenous transcription factors, particularly those involved in leafdevelopment, mechanisms of stress resistance, signal transduction and RNA processing and translation. Therefore, it is concluded that the used molecular approaches could be applied as useful tools to increase broadness and confidence in risk assessments of GMOs. At last, we recommend that other investigations, aiming to address in more detail the relevance of such changes, should be conducted, besides suggesting that GMO safety regulatory bodies take into consideration these types of studies and require that it becomes mandatory in the risk assessment for the releasing of new GMOs.