O déficit hídrico é o principal fator limitante na produtividade das culturas agrícolas. A exposição das plantas a este estresse pode resultar em dano oxidativo devido ao aumento na produção de espécies ativas de oxigênio (EAOs). O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos do déficit hídrico, em 20 variedades de cana-deaçúcar, através da resposta do sistema antioxidante. O déficit hídrico foi imposto pela supressão da irrigação durante 3, 10 e 20 dias. A peroxidação lipídica, mensurada através do conteúdo de MDA, e a concentração de peróxido de hidrogênio (H2O2) foram utilizados como indicativos da ocorrência de estresse oxidativo. A resposta do sistema antioxidante variou em função das variedades estudadas e da intensidade do estresse aplicado. Todavia, após 3 dias de supressão da irrigação não ocorreu variação no perfil protéico em SDS-PAGE, no conteúdo de MDA, H2O2, prolina e na atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), ascorbato peroxidase (APX), guaiacol peroxidase (GPOX) e glutationa redutase (GR), para a maioria das variedades estudadas. Entretanto, aos 10 dias de supressão da irrigação, com exceção da GR, a maioria das variedades demonstrou incremento nestes parâmetros. Após 20 dias todos os genótipos demonstraram incremento no conteúdo de MDA, em relação ao controle, refletindo os danos causados pelo estresse oxidativo. As variedades que demonstraram redução na atividade das enzimas SOD e APX, 20 dias após a suspensão da irrigação, apresentaram maior incremento na peroxidação lipídica e conteúdo de H2O2. Estes resultados sugerem que sob déficit hídrico moderado, a maioria das variedades foi capaz de induzir a atividade das enzimas antioxidantes. Entretanto, à medida que o déficit hídrico torna-se mais severo pode ocorrer o colapso do sistema de defesa antioxidante, sendo a SOD e APX as enzimas mais afetadas. / Water deficit is the major yield-limiting factor of crop plants. Plant exposure to this abiotic stress can result in oxidative damage due to the over production of reactive oxygen species (ROS). The aim of this work was to study the effects of water deficit in 20 sugarcane genotypes in response of the antioxidant system. Water deficit was imposed by withholding irrigation during 3, 10 and 20 days. Lipid peroxidation, measured as MDA content, and hydrogen peroxide (H2O2) was used as oxidative stress markers. Antioxidant system response ranged according to genotypes and stress intensity. After 3 days of withholding irrigation, no variation in protein profile (SDSPAGE), MDA content, H2O2, proline and activity of antioxidant enzymes superoxido dismutase (SOD), catalase (CAT), ascorbate peroxidase (APX), guaiacol peroxidase (GPOX) and glutathione reductase (GR) was observed, in the majority of genotypes. However, 10 days after withholding irrigation, the majority of genotypes showed increase in these parameters. After 20 days, all genotypes showed increase in MDA content, compared with control plants, reflecting the damage caused by oxidative stress. Genotypes that showed decrease in the activity of SOD and APX, 20 days after withholding irrigation, presented high increase in lipid peroxidation and H2O2 content. These results suggest that under moderate water deficit, the majority of genotypes were able to induce the activity of antioxidant enzymes. However, as the water deficit became more severe the collapse of antioxidant system can occur, being SOD and APX the more affected enzymes.

A proteína dissulfeto isomerase (PDI) foi identificada como uma possível reguladora da NADPH oxidase (Nox) vascular, principal enzima responsável pela produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) na hipertensão arterial. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar o papel da PDI na geração de EROs em leitos vasculares de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) durante o desenvolvimento da hipertensão arterial. Os resultados demonstraram um aumento na geração de EROs, expressão de Nox1 e PDI, em artérias mesentéricas, coronárias e pulmonares de animais SHR com 8 e 12 semanas. Os animais foram tratados com Losartan, que reduziu a pressão arterial, a geração de EROs e a expressão de PDI e Nox1 em artérias mesentéricas, coronárias e artérias pulmonares de animais SHR; e também com Nifedipino, que embora tenha reduzido a pressão arterial e a geração de EROs e a expressão de Nox4, não reduziu a expressão de PDI. Os dados obtidos sugerem que a PDI poderia contribuir para o estresse oxidativo e disfunção vascular durante o desenvolvimento da hipertensão arterial. / Protein disulfide isomerase (PDI) was identified as a possible regulator of NADPH oxidase (Nox) vascular, major enzyme responsible for the reactive oxygen species (ROS) production in hypertension. The aim of this study was to investigate the role of PDI in ROS generation in spontaneously hypertensive rats (SHR) vascular beds during hypertension development. The results showed an increase in ROS generation, Nox1 and PDI expression in mesenteric, coronary and pulmonary arteries from SHR with 8 and 12 weeks old. The animals were treated with Losartan, which reduced blood pressure, the generation of ROS and expression of PDI and Nox1 in mesenteric arteries, coronary and pulmonary arteries of SHR, and also with Nifedipine, that also reduce blood pressure and ROS generation and Nox4 expression but did not reduce PDI expression. The data suggest that PDI could contribute to oxidative stress and vascular dysfunction during the development of hypertension.

O aumento da complexidade dos resíduos produzidos nos processos de mineração, que acompanha a crescente expansão deste setor no Brasil, tem revelado a necessidade de novas técnicas para o tratamento ecologicamente correto dos rejeitos de mineração. Desta forma, a biorremediação, uma técnica de baixo custo que utiliza microrganismos extremófilos na recuperação de metais tóxicos, se apresenta como um método economicamente viável no tratamento dos rejeitos contendo íons metálicos. Assim, mediante uma análise proteômica dos fungo isolados do ambiente de mineração, quando submetidos a estresse com ions de cobre, podemos compreender seu comportamento fisiológico no processo de biorremediação. Para isso, Aspergillus niger VC e Rhizopus microsporus VC, isolados do ambiente de mineração foram incubados junto a íons de cobre e mediante analise proteômica foram identificados biomarcadores de estresse oxidativo nos fungos. O proteoma realizado utilizando a técnica de NanoLC-ESI-Q-TOF identificou a expressão de proteínas que mudaram sob a influência do cobre em comparação a seus respectivos controles. Os resultados mostraram que as duas cepas obtidas do ambiente de mineração possuem diferentes mecanismos de resistência. Sendo assim, A.niger VC apresentou uma redução na expressão proteica, das quais 132 foram diferencialmente expressas na presença de íons Cu2+. Por sua vez, a cepa R.microsporus VC exibiu uma superexpressão proteica, com 389 proteínas expressas na presença do metal. Nestes cultivos foram identificadas proteínas relacionadas ao choque térmico e à adsorção de metais, conhecidas como proteínas de choque térmico (HSPs) e metaloproteínas, produzidas em resposta ao estresse imposto pela presença do agente indutor de estresse. No entanto, as enzimas envolvidas na defesa contra o estresse oxidativo, identificadas na ausência de metal, são um indicativo de adaptação metabólica em resposta ao ambiente de mineração. Assim concluímos que tanto A.niger VC como R.microsporus VC, são fungos que apresentam importantes características que permitem sua utilização como agentes de biorremediação dos rejeitos de mineração. / The increase in the complexity of the waste produced in the mining process, with the growing expansion of this sector in Brazil, has revealed the need for new techniques for the ecologically correct treatment of this toxic waste. Therefore, bioremediation, a low cost technique that uses endophilic microorganisms in the recovery of toxic metals, presented as an economically viable method in the treatment of metal ion-containing wastes. In this way, through proteomic analysis of the isolated fungus from the mining environment, when submitted to stress with copper ions, we can understand their physiological behavior in the bioremediation process. In this regard, Aspergillus niger VC and Rhizopus microsporus VC, isolated from the mining environment were incubated with copper ions and in result of proteomic analysis, biomarkers of oxidative stress were identified in the fungus. The proteome performed using the NanoLC-ESI-Q-TOF technique identified the expression of proteins that changed under the copper influence compared to their respective controls. The results showed that the two strains obtained from the mining environment have different resistance mechanisms. Thus, A.niger VC presented a reduction in protein expression, of which 132 were differentially expressed in the presence of Cu2+ ions. In turn, the strain R.microsporus VC exhibited a protein overexpression, with 389 proteins expressed in the metal presence. In these cultivations, proteins related to thermal shock and the adsorption of metals, known as HSPs and metalloproteins, produced in response to the stress imposed by the presence of the stress-inducing agent. However, the enzymes involved in defense against oxidative stress, identified in absence of metal, are indicative of metabolic adaptation in response to the mining environment. Therefore we conclude that both A.niger VC and R.microsporus VC are fungus that present important characteristics that allow their to be used as bioremediation agents for mining waste.

Em 2006, a Diálise Peritoneal representou, no Brasil, o método de tratamento de 9,3% dos pacientes com Insuficiência Renal Crônica Terminal. A terapia dialítica provoca uma lesão na membrana peritoneal de característica inflamatória, com grave desbalanço do processo oxidativo. Associa alto transporte de solutos e perda da capacidade de ultrafiltração da membrana. Vários fatores contribuem para a lesão, tais como a bioincompatibilidade das soluções de diálise peritoneal e sua elevada concentração de glicose. O objetivo do presente estudo é avaliar o efeito protetor da N-acetilcisteína na lesão provocada pelo uso de solução dialítica hipertônica em modelo experimental de diálise peritoneal. Foram estudados 22 ratos Wistar, machos, não-urêmicos, divididos em quatro grupos, sendo: um grupo-controle, não submetido à infusão de SDP; o grupo RL, que recebeu infusão diária de solução ringer lactato; o grupo SDH, que recebeu infusão de SDP e, finalmente, o grupo SDH+NAC, que recebeu infusão de SDP e tratamento com N-acetilcisteína via oral, diariamente (600mg/L). Após seis semanas, foi realizada avaliação funcional da membrana peritoneal pela relação uréia do dialisato, com uma hora de permanência na cavidade peritoneal, e plasma (D/P uréia), assim como pela razão entre a concentração de glicose no líquido peritoneal após uma hora de permanência na cavidade e a concentração de glicose na solução de diálise infundida (G1/G0). As substâncias reativas do ácido tiobarbitúrico (TBARS) foram utilizadas como marcadores no processo oxidativo. A concentração de TBARS foi avaliada em amostra de urina 24hs e dosagem no plasma. Comparada ao grupo-controle, a avaliação funcional do grupo SDH apresentou aumento do transporte peritoneal com D/P uréia de 0,67±0,1 vs 0,46 ± 0,05 (p: 0,03) e G1/G0 de 0,27±0,07 vs 0,44±0,08 (p: 0,01), demonstrando lesão funcional importante. Quando avaliado o grupo SDH+NAC, tratado com N-acetilcisteína e o grupo não tratado SDH, foi observado maior transporte de solutos do grupo não tratado, com D/P uréia 0,67±0,1 vs 0,51 ± 1(p: 0,03) e G1/G0 de 0,27± 0,07 vs 0,35 ± 0,06 (p:0,01). Portanto, foi constatada maior lesão de membrana comparada ao grupo tratado. Comparados ao controle, os grupos SDH e SDH+NAC apresentaram maiores concentrações de TBARS, seja pela dosagem urinária (p:0,002), seja pelo TBARS plasmático (p:0,0001). O grupo tratado SDH+NAC apresentou menores concentrações de TBARS, comparado ao grupo não tratado SDH, provavelmente por um efeito protetor da Nacetilcisteína. Quando avaliada a membrana peritoneal parietal, o grupo tratado apresentou menor espessamento de membrana, medido em micrômetro, em relação ao grupo não tratado (p:0,01) O presente estudo sugere que a lesão da membrana peritoneal provocada pelo uso de solução dialítica hipertônica sofre uma forte influência do processo oxidativo e que o uso contínuo de N-acetilcisteína, por via oral, pode ter efeito redutor dessa lesão. / Peritoneal Dialysis represents the modality of treatment for 9.3% of end stage renal disease patients in Brazil. During the period of treatment, the solution induced a peritoneal membrane lesion of inflammatory characteristic. Oxidative stress has been implicated in the development of endothelial damage. It associates the high transport of solutes and loss of ultrafiltration capacity of the membrane. The lesion is caused by several factors as follows: peritoneal dialysis solution incompatibility (PDS) and its increased concentration of glucose. The aim of the present study was to evaluate the N-acetylcysteine protecting effect on lesion aggravated by the use of hypertonic dialytic solution in peritoneal dialysis experimental model. Twenty two male, non-uremic Wistar rats were divided in four groups as follows: (I) control group, not submitted to PDS infusion; (II) RL group receiving daily infusion of ringer lactate; (III) HDS group, receiving PDS infusion, and; (IV) HDS+NAC group receiving PDS infusion and treated with N-acetylcysteine (600mg/L) orally. The peritoneal membrane functional evaluation was performed six weeks later by the dialisate-to-plasma urea, ratio (D/P), and glucose reabsorption determined by the ratio of glucose concentration in peritoneal fluid after one hour of solution permanence in the cavity (G1/GO). The thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) were used as markers on studying the oxidative process. The TBARS concentration was assessed in 24h sampling urine and plasmatic dosage. The functional evaluation for the HDS group showed increased peritoneal transport compared to the control group with urea D/P of 0.67±0.1 versus 0.46±0.05 (p:0.03), and G1/GO 0.27±0.07 versus 0.44±0.08 (p:0.01), demonstrating functional lesion. When evaluating the HDS+NAC group, treated with N-acetylcysteine and the HDS non-treated group, a greater transport of solutes was observed for the non-treated group, with urea D/P 0.67±0.1 versus 0.51 ± 1 (p: 0.03), and G1/GO 0.27±0.07 versus 0.35±0.06 (p: 0.01), therefore greater lesion present on the membrane than for the treated group. Compared to the control group, the HDS and HDS+NAC presented greater TBARS concentrations either for urine dosage (p: 0.002) or for plasmatic TBARS (p: 0.0001). The HDS+NAC treated group showed lower TBARS concentrations compared to the non-treated HDS group, a probable protective effect of Nacetylcysteine on the treatment. In the treated group, peritoneal membrane demonstrate lower trickiness compared with untreated group.(p:0,01) The present study suggests that the peritoneal membrane lesion induced by the use of hypertonic dialytic solution undergoes strong influence from the oxidative process and that the continuous use of N-acetylcysteine can preserve these alterations by inhibiting the oxidative stress within the peritoneal membrane.

Os objetivos desse trabalho foram avaliar se provas de enduro de diferentes distâncias causam estresse em equinos treinados, avaliar os efeitos das provas de enduro de diferentes distâncias sobre a atividade dos linfócitos e a relação com a imunocompetência dos equinos atletas e investigar a suplementação alimentar com glutamina como possível atenuante desse efeito depressivo do estresse sobre o sistema imunológico. Foram utilizados 33 cavalos treinados para enduro, 13 em 80 km, 14 em 120 km e 6 em 160 km, avaliados em 4 provas. Metade dos cavalos de cada categoria recebeu suplementação com glutamina via oral 30 dias antes e 14 dias após as provas. Amostras de sangue venoso foram colhidas antes (M0), imediatamente após a última inspeção veterinária (M1), 3 horas depois (M2) e nos haras 3 (M3), 7 (M4), e 14 dias (M5). Houve aumento dos níveis de cortisol, amônia, neutrófilos, aumento da relação neutrófilos/linfócitos e diminuição da contagem de linfócitos em M1 e M2 em todos os cavalos. Houve diminuição da relação CD4/CD8 nos animais de 120 (M2, M3 e M4) e 160 km (M3) que não receberam suplementação e diminuição de IFN em todos os cavalos. Nos suplementados, houve diminuição da relação CD4/CD8 em 80 (M2), 120 (M2 e M3) e 160 km (M3 e M4) e aumento tardio de IFN (M4 e M5) nos cavalos de 80 e 120 km. As concentrações de IL-2, IL-4 e IL-10 aumentaram após a prova em todos os cavalos, porém, nos suplementados o aumento foi maior ou mais prolongado. Com base nesses resultados, não foi possível observar estresse nos animais, nem imunodepressão, embora a suplementação tenha exercido efeito sobre os linfócitos. / The objectives of this study were to assess whether a different distances endurance races cause stress in trained horses, assess the effects of different distances an endurance races on the lymphocytes and relationship with the immune competence of equine athletes and investigate dietary supplementation with glutamine as possible mitigating this depressive effect of stress on the immune system . 33 well trained endurance horses were used, 13 at 80 km, 14 and 120 km and 6 in 160 km in 4 endurance rides . Half of the horses in each category received oral supplementation with glutamine to 30 days before and 14 days after the race. Venous blood samples were collected before (M0), immediately after the last veterinary inspection (M1), 3 hours after (M2) and in their farms 3 (M3), 7 (M4) and 14 days (M5) after. There was an increase in cortisol levels, ammonia and neutrophils, increase in neutrophils / lymphocytes ratio and reduction in lymphocyte counts at M1 and M2 in all horses. There was a decrease in LT CD4/CD8 ratio in 120 (M2, M3 and M4) and 160 km (M3) without supplementation and either a decreased in IFN in all animals. Horses that had received glutamine supplementation showed a decreased in CD4/CD8 ratio in 80 (M2), 120 (M2 and M3) and 160 km (M3 and M4) and late increase of IFN (M4 and M5) in 80 and 120 km. INF production was increased later (7 and 14 days) in 80 and 120 km horses that received supplementation and decreased in all 160 km. The concentrations of IL-2 , IL-4 and IL-10 increased after the race on all horses , but the increase was greater or more prolonged in supplemented ones. Based on these results, it was not possible to observe stress in these animals, or immunosuppression either, although supplementation has exerted effects on lymphocytes.

Les homéoprotéines sont des facteurs de transcription qui en plus de leur rôle important durant le développement des métazoaires, bénéficient de fonctions autonome et non autonome-cellulaire dans le cerveau adulte. Parmi ces homéoprotéines, Engrailed1/2 (collectivement Engrailed) est exprimée dans les neurones dopaminergiques mésencéphaliques adulte, ceux-là même qui dégénèrent dans la maladie de Parkinson. Chez les souris délétées d’une copie du gène (En1+/-), une dégénérescence progressive des neurones dopaminergiques s’accompagne de symptômes moteurs et non moteurs rappelant la maladie de Parkinson, ce qui pourrait faire de ces souris un modèle nouveau et intéressant de cette maladie neurodégénérative. Des expériences de transduction de la protéine En1 dans les cellules du mésencéphale de souris démontrent son effet neuroprotecteur dans des modèles toxicologiques de la maladie de Parkinson et chez les souris En1+/-, menant à l’hypothèse qu’Engrailed est important dans la physiopathologie de cette maladie. L’essentiel de ce travail de thèse s’inscrit dans la compréhension des mécanismes d’action de l’homéoprotéine Engrailed dans les neurones dopaminergiques mésencéphaliques. L’activité physiologique importante de ces neurones et le stress métabolique oxydant qui est généré touche plusieurs compartiments cellulaires, dont le noyau. La stabilité du génome semble être un aspect majeur de l’action d’Engrailed dans ces neurones. D’abord contre les effets délétères du stress oxydatif sur l’intégrité de l’ADN et la structure de la chromatine, ensuite, contre l’activité génotoxique des éléments transposables LINE-1. / Homeoproteins are a major class of transcription factors that exert some of their functions through non-cell autonomous activity, due to their ability to transfer between cells. Two of these homeoproteins, En1 and En2 (collectively Engrailed) are responsible for midbrain dopaminergic (mDA) neuron development, and maintenance during adulthood. En1+/- mice display a selective and progressive degeneration of the mDA neurons, reminiscent of Parkinson disease (PD). Engrailed infusion confers neurotection against cell death in several mouse models of PD, leading to the hypothesis that Engrailed could be implicated in the physiopathology of the disease. To dissect the mechanisms underlying Engrailed-mediated protection, the transcriptome of mDA neurons in En1+/- was analyzed. It was found that the loss of one En1 allele leads to severe alterations in the expression of DNA damage response and chromatin remodeling genes. The same alterations were detected and amplified in an acute mouse model of oxidative stress, suggesting that mDA neurons from En1+/- mice are less resistant to oxidative stress and, conversely, that Engrailed may protect them against oxidative stress. Indeed, Engrailed transduction into mDA neurons saves them from cell death and restores all DNA damage and epigenetic marks. A second mechanism neuroprotection by Engrailed concerns LINE-1 elements. These retrotransposons have the ability to create genomic instability through their endonuclease activity. Their direct repression by Engrailed could be part of a general protective activity against genomic instability.

O presente estudo teve como objetivos comparar o sêmen de cães jovens e senis, por avaliação morfo-funcional, estresse oxidativo e quantificação de produtos avançados de glicação (AGEs); comparar a congelabilidade seminal de cães jovens e senis e verificar a ação dos produtos avançados de glicação, oxidação proteica e estresse oxidativo na criopreservação seminal de cães senis. Foram selecionados 22 cães, alocados em dois grupos experimentais de acordo com a idade: Grupo Jovem (n=11) e Grupo Senil (n=11). Os grupos foram adicionalmente subdivididos em Grupo Sêmen Fresco e Grupo Sêmen Criopreservado. A divisão etária foi realizada de acordo com o porte dos animais, sendo porte pequeno considerado senil a partir de 8 anos de idade, porte médio a partir de 7 anos de idade e porte grande acima de 6 anos de idade. Independentemente do porte, os cães jovens em idade reprodutiva foram considerados entre 1 e 5 anos de idade. O Grupo Fresco foi submetido a avaliações seminais imediatas, incluindo volume, cor, aspecto do ejaculado, concentração espermática e análise computadorizada da motilidade (CASA). Logo após, foram realizadas avaliações morfo-funcionais, incluindo atividade mitocondrial dos espermatozoides, estresse oxidativo lipídico, estresse oxidativo proteico, dosagem de produtos avançados de glicação e dosagem de concentração proteica, citometria de fluxo utilizando as sondas fluorescentes para a avaliação espermática da integridade de membrana plasmática e acrossomal e de potencial de membrana mitocondrial e análise de fragmentação de DNA. O Grupo Congelado foi submetido ao protocolo de congelação em uma etapa e após, no mínimo uma semana, as amostras foram descongeladas a 37ºC por 30 segundos e, então, avaliadas quanto à concentração espermática, análise computadorizada da motilidade (CASA) e as mesmas avaliações morfo-funcionais realizadas para o Grupo Jovem. Como resultados, os machos do Grupo Jovem apresentaram maior escore de libido, parâmetros da motilidade espermática, alta atividade mitocondrial dos espermatozoides e menores valores de atividade mitocondrial média, defeitos espermáticos totais, defeitos espermáticos maiores e gota citoplasmática proximal. No sêmen fresco, o Grupo Jovem obteve maiores valores de integridade da membrana acrossomal dos espermatozoides e baixo potencial de membrana mitocondrial, assim como menores valores de integridade da membrana plasmática e acrossomal e alto potencial de membrana mitocondrial. No sêmen descongelado, o Grupo Jovem apresentou maiores valores de integridade de membrana acrossomal dos espermatozoides. No sêmen de cães jovens, o Sub-grupo Fresco obteve maiores valores de integridade de membrana acrossomal e integridade de membrana acrossomal com lesão de membrana plasmática. No sêmen de cães senis, o Sub-grupo Fresco apresentou maiores valores de integridade de membrana acrossomal, integridade de membrana plasmática e acrossomal e alto potencial de membrana mitocondrial, assim como menor porcentagem de espermatozoides com baixo potencial de membrana mitocondrial. Na comparação entre os sub-grupos, houve maiores valores para parâmetros da motilidade espermática, integridade de membrana plasmática com lesão de acrossomo, médio potencial de membrana mitocondrial, integridade de membrana plasmática, alta atividade mitocondrial e estresse oxidativo no Sub-grupo Descongelado, além de maiores valores de amplitude de deslocamento lateral da cabeça, espermatozoides estáticos, lesão de membrana acrossomal e plasmática, média atividade mitocondrial e concentração de proteínas no pellet de espermatozoides. A partir de tais resultados, é possível concluir que o sêmen de cães senis apresenta qualidade inferior ao de cães jovens, bem como reduzida congelabilidade. Nos cães senis, possivelmente, a falha na eliminação da gota citoplasmática dos espermatozoides promova disfunções mitocondriais, culminando na alteração da motilidade espermática. Por fim, as avaliações de parâmetros oxidativos não se mostram acuradas para a avaliação do impacto da senescência reprodutiva. / This study aimed to compare the semen of young and senile dogs, through the evaluation of morphological and functional attributes, oxidative stress and quantification of advanced glycation ending products (AGEs); compare the seminal freezability of young and senile dogs and evaluate the effects of advanced glycation ending products, oxidation protein and oxidative stress on seminal cryopreservation of senile dogs. Twenty two dogs were selected and allocated into two experimental groups according to their age: Young Group (n=11) and Senile Group (n=11). These groups were additionally divided into Fresh Semen Group and Frozen Semen Group. Age distribution was performed according to the size of the animals, being small animals considered senile from 8 years of age onwards, medium size from 7 years old and large size over 6 years old. Regardless of the body size, dogs were considered young if they were at reproductive maturity from 1 to 5 years old. The Fresh Group was subjected to immediate seminal assessments, including volume, color, aspect of the ejaculate, sperm concentration and computer analysis of sperm motility (CASA). Then morpho-functional assessments were carried out, including sperm mitochondrial activity, lipid oxidative stress, protein oxidative stress, dosage of advanced glycation ending products and of protein concentration, flow cytometry using fluorescent probes to evaluate plasmatic and acrosomal membrane integrity and mitochondrial membrane potential and DNA fragmentation analysis. The semen from the Frozen Group was submitted to one step freezing protocol and samples were thawed after not less than 1 week at 37°C for 30 seconds and evaluated for sperm concentration, motility computerized analysis (CASA) and same the morpho-functional analysis performed for the Young Group. Male dogs from the Young Group presented higher libido score, parameters of sperm motility, percentage of sperm with high mitochondrial activity and lower percentage of sperm of medium mitochondrial activity, total spermatic defects, major spermatic defects and proximal cytoplasmic droplet. For the fresh semen of the Young Group, higher values of acrosomal membrane integrity and low mitochondrial membrane potential, as well as lower values of plasma and acrosomal membrane integrity and high mitochondrial membrane potential were noticed. In the post-thaw semen, the Young Group showed higher values of spermatic acrosomal membrane integrity. For the semen of young dogs, the Fresh Group had higher values of acrosomal membrane integrity and acrosomal membrane integrity with plasma membrane damage. In the semen of senile dogs, the Fresh Group presented higher values of acrosomal membrane integrity, plasma and acrosomal membrane integrity and high mitochondrial membrane potential, as well as lower percentage of sperm with low mitochondrial membrane potential. Comparing sub-groups, higher values for sperm motility parameters, plasma membrane integrity with acrosome injury, medium mitochondrial membrane potential, plasmatic membrane integrity, high mitochondrial activity and oxidative stress was noticed for the Thawed group, as well as greater values of lateral displacement amplitude of the sperm head, static spermatozoa, acrosomal and plasmatic membrane lesions, medium mitochondrial activity and protein concentration in the spermatozoa pellet. Based on the present results, it is possible to conclude that the semen of senile dogs presents inferior quality compared to young dogs, as well as less freezability. The possible failure to eliminate the sperm cytoplasmic droplet in senile dogs sperm promotes mitochondrial dysfunctions, culminating to alterations on sperm motility. Finally, the evaluation of oxidative parameters is not feasible for the impact evaluation of reproductive senescence.

O objetivo desse trabalho foi avaliar o estado nutricional de mulheres obesas em relação ao zinco (Zn) e a associação com marcadores do estresse oxidativo e com polimorfismos em genes das enzimas antioxidantes SOD1 e SOD3. A amostra foi composta por 60 mulheres obesas (OB) e por um grupo controle composto por 55 mulheres eutróficas (CON). Amostras de sangue e urina de 24 horas foram coletadas para análise de zinco, malondialdeído (MDA), 8-isoprostano urinário, atividade antioxidante das enzimas superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx). Foram avaliados dois polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) presentes nas enzimas SOD1 e SOD3, o +35A/C e Arg213Gli. Foram aplicados três recordatórios alimentares de 24 horas, incluindo um dia de final de semana. As comparações entre os grupos foram feitas pelos testes qui-quadrado, t-Student, ANOVA e Mann-Whitney. As associações entre as variáveis quantitativas foram realizadas por meio do coeficiente de correlação r de Pearson. Modelo de regressão linear multivariada backward foi feito a fim de se analisar as regressões das variáveis desfecho zinco plasmático, MDA e 8-isoprostano. O equilíbrio de Hardy-Weinberg foi calculado pelo teste do qui-quadrado. A média da ingestão de zinco foi de 6,8 mg/dia e 7,4 mg/dia no grupo CON e OB, respectivamente. As concentrações de Zn plasmático e eritrocitário e a atividade das enzimas SOD e GPx não apresentaram diferença entre os grupos. Ambos os grupos apresentaram deficiência no Zn plasmático. As concentrações de MDA e 8-isoprostano foram maiores no grupo CON, enquanto as concentrações de creatinina e Zn urinários foram maiores no grupo OB. No grupo CON, foram verificadas associações negativas entre Zn plasmático e MDA (p=0,002) e glicemia (p<0,0001). A regressão multivariada mostrou correlação negativa entre o Zn plasmático e o MDA. O 8-isoprostano sofreu influência negativa da creatinina urinária e positiva da atividade física. Já a glicemia e o consumo de energia e de lipídio apresentaram correlação positiva com o MDA. Na análise dos SNPs, foram encontradas apenas duas participantes heterozigotas para o SNP +35A/C e nenhuma participante com o alelo variante para o SNP Arg213Gli. Concluiu-se que os indivíduos obesos e eutróficos apresentaram deficiência de Zn, o que pode estar relacionado ao estresse oxidativo. O estresse oxidativo foi mais intenso para o grupo controle e não foi observada associação entre o IMC e os marcadores MDA e 8-isoprostano. Não foi possível fazer correlação dos polimorfismos com os parâmetros avaliados / The aim of this study was to assess the nutritional zinc status and its association with oxidative stress markers and with polymorphisms in genes of SOD1 and SOD3 in obese women. The sample consisted of 60 obese women (OB) and a control group of 55 normal-weight women (CON). Blood samples and 24-hour urine were collected for analysis of zinc, malondialdehyde (MDA), urinary 8-isoprostane, antioxidant activity of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx). Two single nucleotide polymorphisms (SNP) were evaluated in the genes of SOD1 and SOD3 enzymes, +35A/C and Arg213Gly. Three food 24-hour recalls, including one weekend day were applied. Comparisons between groups were made by chi-square test, Student\'s t - test, ANOVA and Mann-Whitney. Associations between means of quantitative variables were performed by the correlation coefficient r of Pearson. Backward multivariate linear regression was done in order to analyze the regressions of outcome variables plasma zinc, MDA and 8-isoprostane. The Hardy-Weinberg equilibrium was calculated by chi-square. The mean zinc intake was 6.8 mg/day and 7.4 mg/day in CON and OB groups, respectively. Concentrations of plasma and erythrocyte Zn and activity of SOD and GPx enzymes showed no difference between groups. Both groups showed a deficiency in plasma Zn. The concentrations of MDA and 8-isoprostane were higher in the CON group, whereas the concentrations of creatinine and urinary Zn were higher in the OB group. In the CON group, negative associations between plasma Zn and MDA (p = 0.002) and glucose (p < 0.0001) were observed. Multivariate regression analysis showed a negative correlation between plasma Zn and MDA. The 8-isoprostane suffered negative influence of urinary creatinine and positive influence of physical activity. Blood sugar and energy and lipid consumption showed a positive correlation with MDA. In the analysis of SNPs, were found only two heterozygous participants for the SNP +35A/C and no participant with the variant allele for the SNP Arg213Gly. It was concluded that obese and normal subjects showed Zn deficiency, which may be related to oxidative stress. Oxidative stress was higher in the control group and no association was observed between BMI and MDA and 8-isoprostane markers. It was not possible to correlate polymorphisms with evaluated parameters.

A artrite reumatoide (AR) é uma doença auto-imune de etiologia desconhecida caracterizada por uma inflamação poliarticular simétrica da membrana sinovial que acomete com maior frequência as articulações das mãos, punhos e pés. Estudos mostram que há um aumento do estresse oxidativo nestes pacientes e este fato pode ser atribuído à diminuição da ingestão de substâncias antioxidantes refletindo no aumento da produção de espécies reativas de oxigênio (ERO). Além disso, a presença de polimorfismos em enzimas antioxidantes como o Arg213Gli no gene da enzima superóxido dismutase 3 podem influenciar neste dano oxidativo. Portanto, o estudo teve como objetivo avaliar o estado nutricional relativo ao zinco de pacientes com artrite reumatoide e sua relação com o estresse oxidativo e o polimorfismo Arg213Gli no gene da SOD3. Foram selecionadas 59 mulheres diagnosticadas com AR (59,9±18,3 anos) atendidas no Setor de Reumatologia do Hospital São Paulo/Universidade Federal de São Paulo, que fizeram parte do grupo caso, e 56 mulheres saudáveis (35,5±9,9 anos) recrutadas no campus da Universidade de São Paulo, que fizeram parte do grupo controle. A coleta de sangue venoso foi destinada para avaliação das concentrações plasmática e eritrocitária de zinco, da atividade das enzimas glutationa peroxidase (GPx) e superóxido dismutase (SOD), e do polimorfismo Arg213Gli. A urina de 24 horas foi coletada para as análises de zinco, creatinina e 8-isoprostanos. A avaliação do consumo dietético de zinco foi feita por meio de três recordatórios alimentares de 24 horas. A análise estatística foi feita no software SPSS 14.0 por meio de testes de comparações de médias e correlações selecionados de acordo com a distribuição da normalidade e considerando p significativo menor que 5%. As concentrações plasmáticas de zinco foram significativamente menores para o grupo caso quando comparadas ao grupo controle (53,4±9,8 &#181;g/dL e 58,2±10,1 &#181;g/dL, respectivamente; p=0,011). Com relação às concentrações de zinco eritrocitário e urinário não houve diferença significativa entre os grupos (p=0,219 e p=0,695, respectivamente). O percentual de inadequação do consumo de zinco foi de 98,9% para o grupo caso e 58% para o grupo controle. A atividade da SOD foi significativamente menor no grupo caso (1333,8 ±420,8 U/gHb) do que no grupo controle (1755,0 ±525,5 U/gHb) (p<0,001), assim como a atividade da GPx (38,2 ±17,0 U/gHb e 52,6 ±14,4 U/gHB, respectivamente) (p<0,001). As concentrações de 8-isoprostanos não diferiram entre os grupos caso e controle, (133,8 ±175,4 ng/mmol de creatinina e 139,3 ± 52,7 ng/mmol de creatinina; p=0,836, respectivamente). Em relação à genotipagem do SNP Arg213Gli não foi encontrado nenhuma participante com o genótipo homozigoto (Gli/Gli) para o polimorfismo. No grupo caso, apenas uma participante apresentou o genótipo heterozigoto (Arg/Gli). Os resultados apresentados indicam que as pacientes com AR estão deficientes em zinco e apresentam um aumento do estresse oxidativo, sugerindo a necessidade de uma suplementação deste mineral. / Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune disease of unknown etiology characterized by a symmetrical polyarticular inflammation of synovial membrane that affects most often the joints of the hands, wrists and feet. Studies show that there is an increase of oxidative stress in these patients and this fact can be attributed to decreased intake of antioxidants reflecting in the increased production of reactive oxygen species (ROS). Furthermore, the presence of polymorphisms in antioxidant enzymes such as Arg213Gli in the superoxide dismutase gene may influence this oxidative damage. Thus, the study aimed to evaluate the nutritional status of zinc in patients with rheumatoid arthritis and its relation to oxidative stress and the polymorphism Arg213Gli in SOD3 gene. We selected 59 women diagnosed with RA ( 59.9 ± 18.3 years) which make clinical monitoring at the Hospital São Paulo/Federal University of São Paulo, who were part of the case group, and 56 healthy women ( 35.5 ± 9 , 9 years) recruited on the campus of the University of São Paulo, who were part of the control group. The venous blood collection was destined to evaluate plasma and erythrocyte zinc, activity of glutathione peroxidase (GPx) and superoxide dismutase (SOD), and the polymorphism Arg213Gli. The 24-hour urine was collected for the analyzes of zinc, creatinine and 8- isoprostane. The assessment of dietary intake of zinc was performed by three 24-hour dietary recall. Statistical analysis was performed with SPSS 14.0 by testing of mean comparisons and correlations selected according to the distribution of normality and considering significant p less than 5 %. The plasma zinc concentrations were significantly lower in the case group compared to the control group (53.4 ± 9.8 &#181;g/dL and 58.2 ± 10.1&#181;g/dL, respectively, p= 0.011). In relation to the concentrations of erythrocyte and urinary zinc, no significant difference was observed between groups (p= 0.219 and p=0.695, respectively). The percentage of inadequate zinc intake was 98.9% for the case group and 58% for the control group . The SOD activity was significantly lower in the case group (1333.8 ± 420.8 U/gHb) than in the control group (1755.0 ± 525.5 U/gHb) (p < 0.001), as well as the activity of GPx (38.2 ± 17.0 U/gHb and 52.6 ± 14.4 U/gHb, respectively) (p< 0.001). The 8-isoprostane concentrations did not differ between case and control groups (133.8 ± 175.4 ng/mmol creatinine and 139.3 ± 52.7 ng/mmol creatinine, p= 0.836, respectively). Regarding Arg213Gli SNP genotyping was not found any participant with the homozygous genotype (Gly/Gly) for the polymorphism. In case group, only one participant had the heterozygous genotype (Arg/Gly). The presented results indicate that RA patients are deficient in zinc and have an increased oxidative stress, suggesting the need for a supplementation of this mineral.

Trabalhos experimentais demonstram o envolvimento de estresse oxidativo como mecanismo responsável pelas lesões cerebrais e hepáticas que acompanham a intoxicação pelo cloreto de metilmercúrio (CH3HgCI). A N-acetilcisteína (NAC) é capaz de ligar-se a metais e sequestrar radicais livres. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da NAC sobre os níveis de mercúrio (Hg) e no estresse oxidativo induzido pelo metilmercúrio. Neste trabalho em ratos preconizamos a exposição oral a 20 mg de CH3HgCl/kg e intraperitoneal (ip) a 200 mg/kg de NAC, avaliados após 6, 12 e 24 horas e exposição oral a 0,5 mg de CH3HgCI/kg e doses de NAC (i.p.). Não houve aumento de TBARS hepático e cerebral após exposição aguda e sub-crônica. Dos antioxidantes apenas o ácido ascórbico mostrou-se diminuído após 12 horas da exposição. A NAC apresentou-se eficaz apenas na exposição sub-crônica com animais apresentando níveis de Hg reduzidos em fígado e cérebro / Experimental studies show oxidative stress to cause cerebral and hepatic lesions after methylmercury intoxication. N-acetylcysteine (NAC) is capable of binding to metals and scavenges free radicals. In this study we evaluated the influence of NAC on the levels of mercury (Hg) and on oxidative stress parameters after methylmercury chloride (CH3HgCI) exposure. A group of rats were treated by gavage with 20mg of CH3HgCl/kg body weight (b.w.) and 200mg/kg b.w. of NAC by intraperitoneal (ip) injection. These animals were killed after 6, 12 and 24hours. A second group received 0,5mg of CH3HgCl/kg b.w. by gavage during four weeks and five doses of NAC (200mg/kg b.w. ip) in the last week of exposure to CH3HgCI. There was no increase in hepatic and cerebral TBARS after the acute and subchronic exposure. Considering antioxidants, only ascorbic acid was reduced in liver after 12hours. NAC was effective decreasing mercury levels in brain, liver and kidney after subchronic exposure to CH3HgCI.