Evidence suggests that root cell walls are a target of low pH stress. Severe low pH stress causes cell death in the root tip. The walls of these cells are highly dynamic. Our hypothesis is that in these cells low pH causes stress in the cell wall due to excessive loosening. Thus, a certain level of turgor pressure should be required to cause cell death. Here, we aimed to investigate the role of the cell wall in low pH stress leading to cell death. We looked for the possible involvement of players such as class III peroxidases and ethylene signaling, which could promote changes in the cell wall and cause differential sensitivity to low pH. Arabidopsis thaliana and mutants in the genetic background of Col-0 were grown in a medium containing agar (0.8%) and half the concentration of Hoagland\'s nutrient medium. Five-day-old seedlings were exposed to low pH in a solution composed of 0.5 mM CaCl2 and 0.6 mM Homopipes buffer. Treatment of roots at pH 4.6 caused death of cells in the transition zone (TZ) and meristematic zone (MZ). However, cell death was negligible when plants were treated at pH 4.6 in an hyperosmotic solution (Ψs = -0.37 MPa), thereby decreasing cell wall tension. Also, an hypoosmotic treatment (HO) caused cell death at pH 5.8 in TZ. Cell death was accelerated when HO was performed in a low pH solution. The mutant of a cell wall integrity sensor protein, wak-1, displayed reduced cell death when exposed to low pH. Also, cell death seems to occur through a programmed cell death mechanism. Thus, low-pH induced cell death appears to be triggered by perception of cell wall stress. We examined published data to search for class III peroxidases possibly involved in cell death due to low pH. The gene for AtPrx62 is induced 8.37-fold in low pH exposed roots. The atprx62 KO mutant was less sensitive to low pH than Col-0 roots. The mRNA of AtPRX62 accumulated in the same zone that cell death occurred due to low pH. This strongly suggests that AtPRX62 is positive regulator of low-pH induced cell death. Also, ethylene pretreatment induced subsequent tolerance of roots to low pH and this was dependent of its receptor ETR1. Together we show that a cell wall stress caused by low pH causes cell death. This death was in part due AtPRX62 activity and was also suppressed by ethylene. / Evidencias recentes sugerem que a parede celular é um alvo direto do estresse por baixo pH em raízes. Estresse severo por baixo pH rapidamente causa a morte de células do ápice radicular, onde a parede é altamente dinâmica. Nossa hipótese é de que nessas células, o baixo pH cause mudanças na parede celular, como afrouxamento excessivo. Assim, a pressão de turgor sobre a parede deve ser necessária para causar danos que levam à morte das células. Neste trabalho, nós investigamos o papel da parede celular no estresse por baixo pH e na consequente morte de células radiculares. Além disso, tambem foi investigado o papel de peroxidases de classe III e sinalização por etileno, que promovem mudanças na parede celular as quais podem gerar sensibilidade diferenciada a baixo pH. Plântulas de Arabidopsis thaliana e mutantes no background de Col-0 foram crescidas em meio contendo ágar (0.8%) e metade da concentração dos nutirentes do meio de Hoagland. Plântulas com 5 dias de idade foram expostas a baixo pH em uma solução composta por 0.5 mM de CaCl2 e 0.6 mM de tampão Homopipes. O tratamento de raízes a pH 4.6 causou morte em células da zona de transição (TZ) e zona meristemática (MZ). Entretanto, a morte celular foi negligível quando as plantas foram tratadas a pH 4.6 simultaneamente com a diminuição da tensão na parede celular, através de solução com potencial de - 0.37 MPa. Além disso, um choque repentino na pressão de tugor por intermédio de tratamento hiposmótico (HO) causou morte celular a pH 5.8 na TZ. A morte celular foi acelerada quando HO foi realizado em uma solução a baixo pH. A morte celular foi reduzida no mutante wak-1 exposto a baixo pH. WAK-1 é um receptor de parede que atua no sistema de monitoramento de integridade da parede celular. A morte das células provavelmente ocorreu por meio de morte celular programada. Juntos, esses dados trazem evidências que a parede celular é crucial para percepção do estresse causado por baixo pH e essa percepção possivelmente está envolvida em repostas que causam a morte celular. Nós examinamos dados publicados procurando por peroxidases classe III possivelmente envolvidas com a morte celular devido baixo pH. O gene codante para AtPRX62 foi induzido 8.37 vezes em raízes expostas a baixo pH. O mutante KO atprx62 foi menos sensível a baixo pH que raízes de Col-0. O mRNA de AtPRX62 acumulou-se na mesma zona de morte celular devido baixo pH em raízes de Col-0. Isso sugere que a atividade de AtPRX62 está relacionada com a morte celular devido baixo pH. Além disso, o pré-tratamento com etileno induziu tolerância de raízes à exposição subsequente a baixo pH. Esta indução foi dependente de sinalização via ETR1. No conjunto, nós mostramos que um estresse causado na parede celular pelo baixo pH causa a morte celular. Essa morte é em parte devido a atividade de AtPRX62 mas pode ser aliviada por etileno.

Submitted by Carvalho Dias João Paulo (joao.dias@famerp.br) on 2018-04-10T17:56:49Z No. of bitstreams: 1 fernandadcbraojosbraga_tese.pdf: 7246857 bytes, checksum: 371a625b93c8304fbef8864abf3dbdc8 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-10T17:56:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fernandadcbraojosbraga_tese.pdf: 7246857 bytes, checksum: 371a625b93c8304fbef8864abf3dbdc8 (MD5) Previous issue date: 2016-11-01 / Background - Closing defects of the anterior body wall consists of a large group of congenital anomalies characterized by herniation of one or more viscera to the amniotic cavity by a ventral hole, with an incidence of one in 2,000 live births. Malformations included in this group are gastroschisis, omphalocele, ectopia cordis and Pentalogy of Cantrell, limb-body wall complex and bladder/cloacal extrophy. The common origin of the body closing failures, except omphalocele, is based on an unifying embryological hypothesis, in which the defects are the consequences of a failure in the process of fusion between the two lateral body folds. To understand this mechanism is necessary a comprehension of the formation of folds of the body wall. Objectives - To characterize the body wall closure defects in fetuses by MRI and to evaluate the MRI contribution as a method complementary to ultrasonography in indication of surgical method. Patients and Methods - This is a longitudinal/ prospective study comprinsing 31 pregnant women with fetuses diagnosed with anterior body wall closure defects distributed in: Group 1 (G1) - pregnant women in medical care at the Base Hospital ( HB / FAMERP ) in the period from January 2009 to July 2014; Group 2 (G2 ) - pregnant women in medical care at the HB / FAMERP from September 2014 to December 2015. Gastroschisis, omphalocele, ectopia cordis, Pentalogy Cantrell, limb-body wall complex, and bladder exstrophy were included among these defects. Results - The evaluation of fetal MRI allowed the anatomic - morphological characterization of the conceptus and of the anterior body wall defect regarding to its location, extent and herniated contents and detection of birth defects associated with the diagnosis of anterior body wall defect. Conclusion - The understanding of embryonic development as a dynamic process is essential in characterizing the closure defects of the anterior body wall on MRI, reflecting the accuracy of diagnosis and, consequently, the course of pregnancy and planning of surgical treatment. In addition, the excellent spatial resolution of MRI and spontaneous contrast of structures help in detecting other associated malformations and complications of the evolution of body closure defects. Thus, MRI contributes to the preparation of family and multidisciplinary hospital staff. / Introdução - Os defeitos de fechamento da parede corporal anterior consistem em um grupo amplo de anomalias congênitas, caracterizados por herniação de uma ou mais vísceras para a cavidade amniótica por um orifício ventral, com incidência de um em cada 2.000 nascidos vivos. As malformações incluídas neste grupo são gastrosquise, onfalocele, ectopia cordis, pentalogia de Cantrell, complexo membro parede e extrofias de bexiga e cloaca. A origem comum das falhas de fechamento corporal, com exceção da Onfalocele, se baseia em uma hipótese embriológica unificadora, na qual os defeitos são consequências de uma falha no processo de fusão entre as duas pregas laterais. Para entender este mecanismo é necessária a compreensão da formação das pregas da parede corporal anterior. Objetivos: Caracterizar os defeitos de fechamento de parede corporal anterior em fetos por ressonância magnética, visando avaliar a contribuição da RM como método complementar à ultrassonografia e na indicação do método cirúrgico. Casuística e Métodos - Trata-se de um estudo transversal / prospectivo longitudinal constituído por 31 gestantes entre 18 e 36 semanas e 1 dia com fetos diagnosticados com defeitos de fechamento da parede corporal anterior distribuídos em: Grupo 1 (G1) - gestantes atendidas no Hospital de Base (HB/FAMERP) da Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto no período de janeiro de 2009 a julho de 2014; Grupo 2 (G2) - gestantes atendidas no HB/FAMERP de setembro de 2014 a dezembro de 2015. Incluem-se entre os referidos defeitos gastrosquise, onfalocele, ectopia cordis e pentalogia de Cantrell, complexo membro-parede, além de extrofia de bexiga. Resultados - A avaliação dos fetos por RM permitiu a caracterização anátomo - morfológica do concepto e do defeito de parede corporal anterior, com relação à sua localização, extensão e conteúdo herniado e a detecção de defeitos congênitos associados ao diagnóstico de defeito de fechamento da parede corporal anterior. Conclusão - A compreensão do desenvolvimento embrionário como um processo dinâmico é essencial na caracterização dos defeitos de fechamento da parede corporal anterior na RM, refletindo na precisão do diagnóstico e, consequentemente, na condução clínica da gestação e no planejamento do tratamento cirúrgico. Além disso a excelente resolução espacial da RM e o contraste espontâneo do conteúdo das alças intestinais auxiliam na detecção de outras malformações associadas e complicações da evolução dos defeitos de fechamento corporal anterior. Desta forma, a RM contribui para a preparação da família e da equipe hospitalar multidisciplinar.

Cette thèse étudie la trajectoire de Festivals de Violeiros realisées dans le Nord-est du Brésil, en ayant comme fil conducteur de la recherche la poétique orale, notamment la cantoria improvisée. Pour construire une cartographie des festivals, on réfléchit sur les changements sociaux qui ont motivé l'émergence de cette structure plus moderne, le festival, avec des éléments dirigés au spectacle urbain comme transformation d'une pratique plus traditionnelle, o pé de parede, qui avait lieu dans les régions rurales. Le trajet entre la permanence d'une modalité et le renforcement de l'autre passe par la production de rencontres et de congrès qui occupent les espaces de cantoria improvisée, connu aussi como repente. La première partie, intitulé Improviso e pé-de-parede, met en évidence la nature structurelle de ce type de poésie orale, en mettant l'accent sur le processus de création des vers improvisés, ainsi comme la réflexion sur la performance à partir du trépied: la voix, le corps et l'image, qui module la figure du repentista. On offre également une discussion sur la participation des chanteurs et chanteuses dans l'univers de la cantoria depuis l'enfance, à partir de l'analyse des entrevues réalisées au cours de la recherche. La deuxième partie, intitulée Festivals: entre les routes et les vagues, se concentre sur les festivals et cherche à présenter une trajectoire à partir des événements organisées en Europe et comme le modèle adopté au Brésil a cherché son inspiration dans la manière en vogue dans les festivals de musique populaire brésilienne, par exemple. Bien que la structure était utilisé dans une grande tradition de congrès et de rencontres réalisées encore dans les années 1940, le nom festival n’était adopté que dans les années 1970. La recherche a mis en évidence l'existence de routes qui conduisent le mouvement des festivals. Dans le même temps, il était aperçu des changements dans la configuration des événements, en tranformant l’esthétique par rapport à la viola, au vers et à la voix ainsi que leur inclusion dans le circuit de l’industrie culturelle, encourageant la création de spectacles dirigés à la consommation de masse et de l'utilisation des médias comme réseaux de permanence et d'expansion. / This thesis investigates the trajectory of Violeiros Festivals held in Northeast Brazil having as common thread of the research the oral poetry, notably the improvisation singing. To build a cartography of these festivals, the research reflects on the social changes that led to the emergence of this more modern structure, the festival, with elements facing the urban spectacle as a transformation from a more traditional practice, o pé de parede, which occurred in rural areas. The route between the permanence of a modality and the strengthening of other involves the production of meetings and conferences which occupy the spaces of improvised singing, known as repente. The first part, entitled Improvisation and pé de parede, aims at the structural nature of this type of oral poetry, focusing on the process of creating improvised verses, as well as thinking about performance from the tripod voice, body and image, which modulates the “repentista” profile. It also offers a discussion of the involvement of the singers and “cantadoras” with the universe of “cantoria” since childhood, from the analysis of the interviews conducted during the research. The second part, entitled Festivals: between routes and waves, addresses festivals and aims at presenting a trajectory from the events held in Europe and how the model adopted in Brazil found inspiration in the pattern still in practice in Brazilian Popular Music Festivals for example. Although the structure had already been used in a wide tradition of conferences and meetings performed in the 1940s, the noun “festival” started to be adopted only from the 1970s. The research revealed the existence of routes that drive the movement of the festivals. At the same time, there are changes in the configuration of events, changing aesthetics in relation to the viola, the verse and the voice as well as the inclusion in the cultural circuit industry, encouraging the creation of shows geared for mass consumption and making use of the media as maintenance and expansion channels.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / A deformidade musculo-aponeurotica da parede abdominal decorrente da gestacao e multidirecional. A tecnica mais utilizada para sua correcao e a plicatura da aponeurose anterior. Seria desejavel obter ao mesmo tempo uma correcao transversal e longitudinal. O objetivo deste estudo e avaliar o eixo vertical do plano musculo-aponeurotico apos o uso da sutura triangular na correcao da diastase de retos. Metodos: Foram selecionadas 31 pacientes com deformidade abdominal tipo III/A de Nahas, divididas em dois grupos (GST- grupo sutura triangular e GSC u grupo sutura continua). Estas foram submetidas a abdominoplastia e correcao da diastase dos musculos retos com plicatura longitudinal mediana, feita entre dois clipes metalicos implantados. Os dois tipos de sutura foram realizados em todas as pacientes. No GST, apos a realizacao da sutura continua, foi realizada e mantida a sutura triangular e o oposto ocorreu no GSC. Apos cada sutura a distancia entre os clipes foi medida. Foram realizadas radiografias de abdome tres semanas e seis meses apos a cirurgia quando foi medida a distancia entre os clipes. Os dados foram comparados utilizando-se Analise de Variancia de Friedman e teste de Wilcoxon. Resultados: A sutura triangular promoveu reducao significante do eixo vertical da aponeurose quando comparada a sutura continua e a situacao sem sutura no periodo intraoperatorio (Wilcoxon p<0,001). Esta diferenca manteve-se nas radiografias de seis meses (Wilcoxon p<0,001). Conclusao: A sutura triangular produziu encurtamento do eixo vertical do plano musculo-aponeurotico da parede abdominal em longo prazo / Background: Diastasis recti secondary to pregnancy is multidirectional. Plication of the anterior rectus sheath is the most widely used technique for correction of this condition. However, it would be desirable to simultaneously perform the transverse and longitudinal repair of the defect. The aim of this study was to assess changes in the length of the musculoaponeurotic layer after diastasis recti repair using triangular sutures. Methods: Thirty-one women with Nahas’ type III/A deformity were divided into two groups: the triangular suture (TS) group and the continuous suture (CS) group. All patients underwent conventional abdominoplasty and diastasis recti repair with medial longitudinal plication performed between two metal clips. The two types of suture were used in both groups. In the TS group, after a continuous suture was performed and removed, triangular sutures were used and maintained in place. In the CS group, the order of suture placement was reversed. The distance between clips was measured before and immediately after suturing, and at 3 weeks and 6 months postoperatively using plain abdominal radiographs. Statistical analysis was conducted with the Friedman analysis of variance and Wilcoxon test. Results: The use of triangular sutures significantly reduced the length of the aponeurosis compared with both the intraoperative Abstract | 87 situation without suture (P < 0.001) and the use of continuous suture (intraoperatively and 6 months after surgery; P < 0.001). Conclusion: The repair of diastasis recti using triangular sutures resulted in vertical shortening of musculoaponeurotic layer immediately after the procedure and in the long term. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3002168 bytes, checksum: 936461b9e52c3ed25ff8924c9843452e (MD5) Previous issue date: 2013-10-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Basidiospores of the ectomycorrhizal fungus P. microcarpus are characterized by impermeable, hydrophobic cell walls. These features are possibly related to the low germination percentages of these propagules and make it difficult the isolation of monokaryons and the use of these spores as inoculants. Sodium hypochlorite can be used as a permeabilizing agent of the cell wall of fungal spores. The aim of this study was to evaluate the effects of permeabilization treatments with commercial bleach on the cell wall ultrastructure and hydrophobicity, and on the viability and germination of P. microcarpus basidiospores. For this, fungal basidiospores, from fruiting bodies associated with Eucalyptus spp., were collected and permeabilized using different concentrations of bleach and times of exposure. After permeabilization, the basidiospores were analyzed by scanning and transmission electron microscopy. Surface hydrophobicity, viability, and germination of these propagules were also analyzed. The percentage of permeabilized basidiospores of P. microcarpus was proportional to the increases in bleach concentration and the exposure time. Basidiospores from different fruiting bodies differed significantly in their susceptibility to the permeabilization treatments with bleach and in the decrease of cell surface hydrophobicity after permeabilization. Changes in the ultrastructure of permeabilized basidiospores were observed at bleach concentrations of 15 and 50 %, with an exposure time of 40 s. For one basidiocarp, after permeabilization with bleach at 5 % for 40 s, 80% of the permeabilized basidiospores were viable. The plating of basidiospores permeabilized with 10% bleach for 40 s resulted in the production of colonies of P. microcarpus. The colonies appeared after 15 days of incubation of the permeabilized basidiospores in the presence of the host plant, E. citriodora. The germination percentage obtained, 0,001 %, was similar to those reported for non-permeabilized basidiospores. This work is the first report on the ultrastructure of the cell wall of basidiospores of P. microcarpus and contributes to the understanding of the recalcitrance of these propagules to germination. / Basidiósporos do fungo ectomicorrízico P. microcarpus apresentam parede celular impermeável e hidrofóbica. Essas características estão possivelmente relacionadas às baixas porcentagens de germinação desses propágulos, dificultando a obtenção de monocários e a utilização desses esporos em inoculantes. O hipoclorito de sódio pode ser usado como agente permeabilizador da parede celular de esporos fúngicos. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do tratamento de permeabilização com água sanitária sobre a ultraestrutura e hidrofobicidade da parede celular, a viabilidade e a capacidade de germinação de basidiósporos de P. microcarpus. Para isso, basidiósporos fúngicos, oriundos de corpos de frutificações associados a plantas de Eucalyptus spp., foram coletados e permeabilizados utilizando-se diferentes concentrações de água sanitária e tempos de exposição ao composto. Após a permeabilização, os basidiósporos foram analisados por microscopia eletrônica de varredura e de transmissão. A hidrofobicidade superficial, a viabilidade e a germinação desses propágulos também foram analisadas. A porcentagem de basidiósporos de P. microcarpus permeabilizados foi proporcional ao aumento na concentração de água sanitária e ao tempo de exposição. Basidiósporos oriundos de diferentes basidiocarpos diferiram de forma significativa na susceptibilidade ao tratamento de permeabilização com água sanitária e na redução da hidrofobicidade da superfície celular após esse tratamento. Alterações da ultraestrutura dos basidiósporos permeabilizados foram observadas nas concentrações de 15 e 50 % de água sanitária pelo tempo de exposição de 40 s. Para um dos basidiocarpos avaliados e após a permeabilização com água sanitária a 5 % por 40 s, 80 % dos esporos permeabilizados encontravam-se viáveis. O inóculo dos basidiósporos permeabilizados com água sanitária a 10 % por 40 s resultou na produção de algumas colônias de P. microcarpus. As colônias apareceram após 15 dias de incubação dos basidiósporos permeabilizados na presença da planta hospedeira, Eucalyptus citriodora. A porcentagem de germinação obtida, 0,001%, foi semelhante àquelas relatadas na literatura para basidiósporos não-permeabilizados. Este trabalho é o primeiro relato sobre a ultraestrutura da parede celular dos basidiósporos de P. microcarpus e contribui para a compreensão da recalcitrância desses propágulos à germinação.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mirelle Bb.pdf: 2549462 bytes, checksum: 7f8ae645314de6fb536a8445eb69e03e (MD5) Previous issue date: 2010-01-29 / Paracoccidioides brasiliensis is a thermodimorphic fungus that causes paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic mycosis prevalent in South America. In humans, infection starts by inhalation of fungal propagules that reach the pulmonary epithelium. The cell wall presents an essential role in the pathobiology of P. brasiliensis, since it is involved in the morphogenetic changes associated with the life cycle of this pathogen. The biosynthesis and remodeling of the cell wall polysaccharide network is required for fungal growth and glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored proteins are involved in these processes. The enzymes of the glucan-elongating (GEL) family are GPI-anchored proteins which have beta-1,3-glucanosyltransferase activity and play important role in the cross-linking of cell wall components in fungi. The P. brasiliensis genome possess 3 genes that encode for beta-1,3-glucanosyltransferases (Gel1p, Gel2p e Gel3p). With the aim of searching for other possible functions for beta-1,3-glucanosyltransferase 3 (PbGel3p) in P. brasiliensis, the interactions between this protein and others proteins of the fungus were investigated through the Saccharomyces cerevisiae two-hybrid system and pull-down assay. The two-hybrid system enables the study of interactions in vivo and, through this approach, 8 proteins which interact with PbGel3p were identified. The interaction with phosphatidylinositol- 4-phosphate 5-kinase its3 and protein kinase Dsk1p suggest the participation of PbGel3p in the cell division cycle. The RNA helicase Dbp5p, whose interaction with PbGel3p was in vitro confirmed by coimunoprecipitation, and the 5'-3' exoribonuclease are involved in the mRNA metabolism suggesting a function for PbGel3p in this process. The interaction between PbGel3p and the lipase/serine esterase, which participates on the biosynthesis of the GPI-anchor, was also confirmed by coimunoprecipitation. PbGel3p also interacts with the transcription factor Ctf1Bp and the 3-oxoacyl reductase enzyme, which suggests its involvement in the lipid metabolism. The interaction with the leptomycin B resistance protein Pmd1p suggests a role for PbGel3p in the response to antifungal drugs. The in vitro pull-down assay resulted in the identification of P. brasiliensis 70 kDa heat shock protein. The interaction with this protein suggests that PbGel3p may act in the response to stress conditions, as in the temperature increase. On basis of these data, functional studies may be carried out in order to confirm the Gel3p multifunctionality in P. brasiliensis. / Paracoccidioides brasiliensis é um fungo termodimórfico, causador da paracoccidioidomicose, uma micose sistêmica prevalente na América do Sul. A infecção em humanos inicia-se com a inalação de propágulos fúngicos que atingem o epitélio pulmonar. A parede celular desempenha um papel importante na patobiologia do P. brasiliensis, pois está envolvida nas mudanças morfogenéticas associadas com o ciclo de vida deste patógeno. A biossíntese e o remodelamento dos polissacarídeos da parede celular são essenciais para o crescimento do fungo e proteínas glicosilfosfatidilinositol (GPI)-ancoradas estão envolvidas nesses processos. As enzimas da família glicanosiltransferase alongando glicana (GEL) são proteínas GPI-ancoradas que possuem atividade de beta-1,3-glicanosiltransferase e desempenham um importante papel nas ligações cruzadas dos componentes da parede celular em fungos. O genoma de P. brasiliensis possui 3 genes codificantes para beta-1,3-glicanosiltransferases (Gel1p, Gel2p e Gel3p). Com o objetivo de se buscar outras possíveis funções da beta- 1,3-glicanosiltransferase 3 (PbGel3p) em P. brasiliensis, as interações entre essa proteína e outras proteínas do fungo foram investigadas através do sistema de duplohíbrido em Saccharomyces cerevisiae e do ensaio de pull-down. O sistema duplohíbrido permite o estudo das interações in vivo e, através dele, foram identificadas 8 proteínas que interagem com PbGel3p. A interação com a fosfatidilinositol-4-fosfato 5- quinase its3 e com a Dsk1 proteína quinase sugere a participação de PbGel3p no ciclo de divisão celular. A RNA helicase Dbp5p, cuja interação com PbGel3p foi confirmada in vitro através do ensaio de coimunoprecipitação, e a 5'-3' exoribonuclease estão envolvidas no metabolismo de RNAm, sugerindo uma função para PbGel3p nesse processo. A interação entre PbGel3p e a enzima serina esterase/lipase, que participa da via de biossíntese da âncora GPI, também foi confirmada por coimunoprecipitação. PbGel3p interage com o fator de transcrição Ctf1Bp e enzima 3-oxoacil redutase, fato que sugere seu envolvimento no metabolismo de lipídeos de P. brasiliensis. A interação com a proteína de resistência à leptomicina B Pmd1p sugere um papel para PbGel3p na resposta à agentes antifúngicos. O ensaio de pull-down in vitro resultou na identificação da proteína de choque térmico de 70 kDa de P. brasiliensis. A interação com essa proteína sugere que PbGel3p pode atuar na resposta à condições de estresse, como o aumento de temperatura. Com base nesses dados, estudos funcionais devem ser realizados para confirmar a multifuncionalidade de Gel3p em P. brasiliensis.

Lentilhas d´água são as menores angiospermas aquáticas monocotiledôneas, as quais são classificadas em duas subfamílias (Lemnoideae e Wolffioideae) que contemplam trinta e sete espécies representando cinco gêneros: Spirodela, Landoltia, Lemna, Wolffiella e Wolffia (APPENROTH; BORISJUK; LAM, 2013; BORISJUK et al ., 2015; FAO, 1999; LANDOLT, 1992, LES et al ., 2002). Essas plantas apresentam rápida reprodução vegetativa o que implica no acúmulo acelerado de carboidratos e proteínas, que por sua vez, confere uma enorme aplicação industrial e biotecnológica, especialmente na bioenergia (APPENROTH; BORISJUK; LAM, 2013; FAO, 1999). O balanço de carbono no crescimento relaciona-se com à assimilação fotossintética, armazenamento e consumo desses compostos, que são influenciados pela intensidade de luz (SMITH; STITT, 2007; STITT; ZEEMAN, 2012). O maior dreno de carbono assimilado é para a síntese de parede celular e sacarose, portanto, conhecendo a composição dos polissacarídeos e suas interações junto com o conteúdo de carboidratos não estruturais impacta a produção de combustíveis alternativos. O presente trabalho visou quantificar e analisar os carboidratos estruturais (açúcares de parede celular apiose, arabinose, fucose, ramnose, glicose, xilose, galactose e manose) e não estruturais (açúcares solúveis e de armazenamento sacarose, frutose, rafinose, glicose e amido) de três espécies de Lemnoideae e duas Wolffioideae comparando com as taxas de crescimento dessas plantas. / Duckweeds are the smallest aquatic monocots classified in two subfamilies (Lemnoideae and Wolffioideae) that contemplates thirty-seven species representing five genera: Spirodela, Lemna, Landoltia, Wolffia and Wolffiella . These plants display fast vegetative reproduction, which implies a rapid accumulation of carbohydrates and protein, conferring them biotechnological and industrial applications, especially in bioenergy. Carbon balance among growth is related to photosynthetic assimilation, storage, and consume of compounds which are influenced by light intensity. The major sink of the carbon assimilated is to cell wall and sucrose synthesis, thereby knowing the polysaccharides composition and their interactions together with the non-structural carbohydrates content may impact the alternative fuels production. The present work aimed to quantify and comparative analyze structural (cell wall sugars apiose, arabinose, fucose, rhamnose, glucose, xylose, galactose, and mannose) and nonstructural (storage and soluble sugars starch, sucrose, glucose, raffinose, and fructose) carbohydrates of three Lemnoideae and two Wolffioideae species correlating to its growth rates.

This study provides information to support the use of plant cell wall, from sugarcane bagasse, to produce cellulosic ethanol. Therewith, cell wall proteins from sugarcane cells cultures, leaves and culms were identified. To do so, different protocols were used. Using two-month-old leaves and culms, the extractions were performed using a destructive method, based on griding the tissues, submitting them to a growing gradient of succrose and centrifugation, being the cell wall extract later isolated by washing on a nylon net. After that, the cell wall proteins were extracted using two salts, 0,2 M CaCl2 and 2 M LiCl. Using cultured cells, a similar protocol was used, but it had a previous step of separation of the cell wall through grinding and precipitation in glycerol 15%. Using culms of the same age, a nondestructive protocol was tested based on vacuum infiltration of the tissues in the same salts already described, 0,2 M CaCl2 and 2 M LiCl, and posterior centrifugation. Two replicates were used from two-month-old plants and three in the case of suspension cells. The complex samples were digested, fractionated and sequenced through mass spectrometry, using SYNAPT G2HDMS coupled to nanoACQUITY, both from Waters. Peptides were processed using ProteinLynx 2.5 Global Server against sugarcane translated-EST database. Using bioinformatic programs, such as Blast2GO, it was possible to find the annotation and classification of similar proteins. Only proteins equally found in all repetitions were considered in the main analysis. SignalP, WolfPSORT, TargetP, TMHMM and Predotar were used to predict the subcellular location, both from ESTs and blasted proteins, and only the proteins predicted to be secreted in two or more programs were considered as cell wall proteins. Altogether, 157 different SAS related to sugarcane cell wall were found. Among these, 101 different cell wall proteins were characterized from eight functional classes. The method based on vacuum infiltration seems to be the most efficient one, since it had almost half, 48,84% of the proteins predicted to be secreted, which is a good percentage when comparing to other studies. From secreted proteins most of them were related to lipid metabolism, as lipid-transfer proteins, oxido-reductases, such as peroxidases, cell wall modifying enzymes, like glycoside-hydrolases, proteases, proteins with interacting domains, signaling proteins and several others. Results are in agreement with the expected role of the extracellular matrix in polysaccharide metabolism and signaling phenomena. Therefore, this work provided valuable information about sugarcane cell wall that can lead to future studies to enhance cellulosic ethanol production. / Este estudo fornece informação para auxiliar o uso da parede celular vegetal, a partir do bagaço de cana, para a produção de etanol celulósico. Com isso, as proteínas da parede celular de folhas, colmos e células em suspensão foram identificadas. Para isso, foram utilizados diferentes protocolos. Utilizando folhas e colmos de cana-de-açúcar de dois meses de idade, as extracções foram realizadas por meio de método destrutivo, com base na trituração dos tecidos, submetendo-os a gradiente crescente de sacarose e centrifugação, sendo a parede da célula extraída e depois isolada por lavagem sobre uma rede de nylon. Depois disso, as proteínas de parede celular foram extraídas utilizando dois sais, 0,2 M de CaCl2 e 2 M de LiCl. Para células em suspensão, um protocolo semelhante foi utilizado, contendo, no entanto, um passo anterior de separação da parede celular por meio de maceração e precipitação em glicerol 15%. Usando colmos da mesma idade, dois meses, um protocolo não destrutivo foi testado com base na infiltração a vácuo dos tecidos nos mesmos sais já descritos, 0,2 M de CaCl2 e 2 M de LiCl, e posterior centrifugação. Duas repetições foram usadas nos experimentos com plantas de dois meses de idade, e três, no caso de células em suspensão. As amostras complexas foram digeridas, fracionadas e seqüenciadas por espectrometria de massas, utilizando o equipamento SYNAPT G2HDMS acoplado ao cromatógrafo nanoACQUITY, ambos da Waters. Os peptídeos foram processadas utilizando ProteinLynx 2,5 comparando com a base de dados de ESTs traduzidos da cana. Utilizando programas de bioinformática, como Blast2GO, foi possível encontrar a anotação e classificação de proteínas semelhantes. Apenas proteínas igualmente encontradas em todas as repetições foram consideradas na análise principal. SignalP, WolfPSORT, TargetP, TMHMM e Predotar foram softwares utilizados para prever a localização subcelular, tanto para ESTs como proteínas, e apenas as proteínas preditas para serem secretadas por dois ou mais programas foram consideradas como proteínas de parede celular. Ao todo, 157 SAS diferentes relacionados à parede celular da cana foram encontrados. Dentre eles, 101 diferentes proteínas de parede foram caracterizadas em oito classes funcionais. O método baseado na infiltração a vácuo mostrou-se o mais eficiente, uma vez que apresentou quase metade, 48,84%, das proteínas preditas para serem secretadas, o que é um bom valor quando comparado com outros estudos. A maioria das proteínas secretadas estava relacionada com o metabolismo lipídico, como proteínas de transporte de lípidos, oxido-redutases, tais como peroxidases, enzimas modificadoras da parede, como as glicosil-hidrolases, proteases, proteínas com domínios de interação, proteínas sinalizadoras, entre outras. Os resultados estão de acordo com o papel que se espera da matriz extracelular no metabolismo de polissacarídeos e fenômenos de sinalização. Portanto, este trabalho forneceu informações valiosas sobre a parede celular da cana, tornando possível a utilização desses dados em futuros estudos para otimizar a produção de etanol celulósico.

Fitoplasmas são organismos procarióticos desprovidos de parede celular, parasitas intracelulares obrigatórios de floema e patogênicos às plantas. Numerosas doenças associadas a este tipo de agentes patogênicos têm sido frequentemente relatadas em espécies cultivadas e plantas daninhas. No presente estudo, sintomas tipicamente induzidos por fitoplasmas, tais como clorose e avermelhamento foliar, redução no tamanho das folhas, diminuição dos órgãos florais, superbrotamento de ramos e declínio da planta, foram observados em pomares de fruteiras de caroço como pessegueiro e nectarineira. Além disto, em campos de couve-flor, plantas daninhas conhecidas como mostarda-do-campo também manifestaram sintomas que pareciam ter sido provocados por fitoplamas, expressados por superbrotamento de ramos finos e redução no tamanho de folhas e flores. Assim, o presente trabalho teve por objetivos detectar, identificar e classificar a nível molecular os possíveis fitoplasmas associados às plantas sintomáticas citadas anteriormente, utilizando as técnicas de PCR, análise de RFLP virtual e o método de classificação on-line denominado de iPhyclassifier. Para tanto, o DNA das amostras das fruteiras de caroço e da erva daninha foi extraído com o auxílio de um kit comercial ou através do protocolo 2X CTAB. A detecção dos fitoplasmas foi conduzida por duplo PCR com os primers universais R16mF2/mR1 e SN910601/SN011119 na primeira reação e com o par R16F2n/R2 na segunda reação. Para a mostarda, a identificação dos fitoplasmas também foi realizada através de duplo PCR com os primers e R16(III)F2/R16(III)R1 específicos para fitoplasmas do grupo 16SrIII. A aplicação de PCR com primers universais permitiu a detecção consistente desses agentes nos tecidos das plantas sintomáticas de pessegueiro, nectarineira e mostarda-do-campo pela amplificação de um fragmento genômico de 1250 pb, correspondente ao gene 16S rRNA. Para todos os hospedeiros analisados, os produtos amplificados por duplo PCR com os primers universais foram purificados, clonados em Escherichia coli e submetidos ao sequenciamento. A análise de RFLP virtual e iPhyclassifier permitiram classificar os fitoplasmas encontrados em mostarda nos grupos 16SrIII e 16SrVII. Os fitoplasmas detectados na mostarda-do-campo, foram definitivamente classificados como representantes dos subgrupos 16SrIII-B, 16SrIII-J e 16SrIII-U e 16SrVII-B. Em relação aos fitoplasmas encontrados no pessegueiro e nectarineira, foi possível classificar os fitoplasmas nos grupos 16SrI e 16SrIII, sendo definitivamente classificados como representantes dos subgrupos 16SrI-B em pessegueiro, e em nectarineira, classificados em 16SrI-B e 16SrIII-J. / Phytoplasmas are prokaryotic organisms devoid of cell wall, obligate intracellular phloem parasites and pathogenic to plants. Numerous diseases associated with this type of pathogen have been frequently reported in cultivated species of plants and weeds. In this present study, symptoms typically induced by phytoplasmas, such a yellowing an reddeling leaves, small leaves and flowers, \"witches\' broom\" appearance on terminal new bud growth, and death in plants, were observed in orchards of stone fruit trees such as peach and nectarines. In addition, in fields of cauliflower, weeds known as mustard-field also exhibited symptoms that appeared to have been caused by phytoplasmas, expressed by thin branches and reduced leaf and flower size. The objective of this present study was to detect, identify and classify at molecular level the phytoplasmas possibly associated with the symptomatic plants. PCR techniques, virtual RFLP analysis and the online method known as iPhyclassifier were used. Total DNA was extracted using a commercial kit or through the CTAB protocol. The detection of phytoplasmas was conducted by nested PCR with the universal primers R16mF2/mR1 and SN910601/SN011119 in the first reaction and R16F2n/R2 pair in the second reaction. For mustard-field, the identification of the phytoplasmas was also performed through nested PCR with the primers R16(III) F2/R16(III) R1, which are specific to detection of 16SrIII group phytoplasmas. The application of PCR with universal primers allowed the consistent detection of these agents in the tissues in symptomatic plants of peach, nectarine and mustard-field by the amplification of a 1250 bp genomic fragment, corresponding to the 16S rRNA gene. For all hosts analyzed, the products amplified by nested PCR with the universal primers were purified, cloned in Escherichia coli and sequenced. The analysis of virtual RFLP and iPhyclassifier allowed to classify the phytoplasmas found in mustard in the 16SrIII and 16SrVII groups. The phytoplasmas detected in mustard-field were definitively classified as representatives of the subgroups 16SrIII-B, 16SrIII-J and 16SrIII-U and 16SrVII-B. The phytoplasmas found in the peach and nectarine were classified within the 16SrI and 16SrIII groups, as representatives of the subgroups 16SrI-B for peach and 16SrI-B and 16SrIII-J for nectarine.

Neste trabalho é apresentado um estudo experimental e numérico acerca do comportamento em situação de incêndio de pilares de aço e mistos de aço e concreto inseridos em paredes. Tendo em vista que o aquecimento ocorre em apenas uma das faces do pilar, são instaurados gradientes térmicos ao longo da seção, adicionando momentos e tensões que alteram significativamente o comportamento termoestrutural do pilar. O estudo experimental foi realizado na Universidade de Coimbra, onde foram realizados ensaios em temperaturas elevadas de pilares de aço e mistos de aço e concreto, considerando o preenchimento entre as mesas do perfil. Dentre os parâmetros analisados, foram considerados dois tipos de perfis metálicos, três espessuras de paredes e a orientação do perfil em relação à parede. Todos os ensaios consideraram o pilar com restrição axial e rotacional nas extremidades. A partir da análise experimental, foi possível observar que os pilares com o gradiente térmico ao longo das mesas do perfil, que desenvolvem um gradiente térmico menos pronunciado, apresentam um comportamento mais semelhante aos pilares aquecidos uniformemente. Já com o gradiente térmico ao longo da alma, o comportamento obtido é bastante diferente, sendo que o desenvolvimento das forças de restrição no pilar apresenta dois ramos ascendentes até o valor de pico. Considerações acerca do efeito térmico e estrutural da espessura da parede e do tipo de perfil utilizado são apresentados no trabalho. Adicionalmente, foram realizadas análise numéricas térmicas e termoestruturais em elementos finitos a fim de compreender melhor o comportamento dos pilares ensaiados previamente. Por fim, em âmbito teórico é apresentada uma metodologia para a obtenção das curvas de interação da força normal e momento fletor para os pilares de aço e mistos de aço e concreto submetidos à gradientes térmicos ao longo das mesas e da alma do perfil. / The present work presents an experimental and numerical study concerning the behaviour in fire of steel and composite steel and concrete columns embedded on walls. Considering that the heating occurs at only one side of the column, thermal gradients are developed along the cross section, adding bending moments and tensions which significantly changes the behaviour of the column in fire. The experimental study was conducted at the University of Coimbra, where tests were carried out at elevated temperatures on steel and composite columns with concrete between the flanges of the profile. Among the analysed parameters, were considered two types of steel profiles, three wall thicknesses and the column position in its two principal direction in comparison to the wall. All tests considered the column with axial and rotational restrictions on its ends. From the experimental analysis, we observed that the columns with the thermal gradient along the profile flanges, which develops a less pronounced thermal gradient, have a more similar behaviour with the columns uniformly heated. Considering the thermal gradient along the web, the behaviour obtained is quite different, with the development of axial forces presenting two ascending branches until the peak value. Considerations concerning the thermal and structural effect of wall thickness and type of profile used are presented along the results discussion. In addition, thermal and thermomechanical finite element analysis were developed in order to better understand the behaviour of the columns previously tested. Finally, in a theoretical scope a methodology for obtaining the normal force and bending moment interaction diagrams (N-M diagrams) for steel and composite columns subjected to thermal gradients along the flanges and the web is presented and compared with the experimental data.