A família paraoxonase (PON1, PON2 e PON3) tem sido objeto de grande interesse por prevenir o estresse oxidativo e o processo inflamatório, condições importantes na carcinogênese. O Linfoma Difuso de Grandes Células B (LDGCB) consiste no subtipo histológico mais comum dentre os linfomas, doenças que se originam a partir das células do tecido linfoide e exibem distintos comportamentos clínicos, fatores patológicos e características epidemiológicas. Há escassez de dados sobre a atuação das paraoxonases na susceptibilidade diferencial ao risco de linfomas. Deste modo, o objetivo do presente estudo foi investigar a frequência alélica e genotípica dos polimorfismos 192QR e 55LM, no gene da PON1, e 148AG e 311SC, no gene da PON2 e o efeito desses polimorfismos sobre as atividades da enzima PON e perfil lipídico em 182 indivíduos (78 pacientes com LDGCB e 104 indivíduos saudáveis). O sangue foi coletado, em 4 momentos, para a determinação do perfil lipídico e das atividades arilesterase e paraoxonase da PON. O DNA foi extraído de leucócitos do sangue periférico pelo método de extração salina. A análise dos polimorfismos foi realizada por PCR/RFLP. Não houve diferença estatística na distribuição de genótipos e frequência de alelos dos polimorfismos nos genes da PON1 e PON2. A atividade sérica da arilesterase apresentou valores significativamente maiores apenas entre os indivíduos saudáveis (p=0,001). As variantes 55MM e 192QQ, do gene da PON1, influenciaram as atividades arilesterase (p=0,011) e paraoxonase (0,001). O polimorfismo PON2 311SS associou-se a atividade arilesterase (p=0,021). A concentração de autoanticorpos oxLDL foi alterada, pela presença do genótipo 55LM (p=0,037) nos indivíduos com LDGCB / The paraoxonase family (PON1, PON2 and PON3) have been the subject of great interest, since they are responsible for preventing oxidative stress and inflammation, conditions important in carcinogenesis. The Diffuse Large B Cell Lymphoma (DLBCL) is the most common histological subtype among lymphomas, diseases that originate from cells of the lymphoid tissue and exhibit clinically distinct behaviors and pathological and epidemiological factors. There are paucity of data on the activity of paraoxonase in the differential susceptibility to the risk of lymphoma. Thus, the objective of this study was to investigate the genotypic and allelic frequency of polymorphisms 192QR and 55LM, in the PON1 gene and 148AG and 311SC, in the PON2 gene and the effect of these polymorphisms on PON enzyme activities and lipid profile in 182 subjects (78 patients with DLBCL and 104 healthy subjects). Blood was collected in four moments for the determination of lipid profile and paraoxonase and arylesterase activities of PON. The DNA was extracted from peripheral blood leukocytes by salt extraction method. The analysis of polymorphisms was performed by PCR/RFLP. There was no statistical difference in the distribution of genotypes and allele frequencies of polymorphisms in the PON1 and PON2 genes. The serum arylesterase activity was significantly higher only among healthy subjects (p=0.001). 192QQ and 55MM variants of the PON1 gene, influenced arylesterase (p=0.011) and paraoxonase (0.001) activities. The PON2 polymorphism was associated with 311SS arylesterase activity (p = 0.021). The concentration of oxLDL autoantibodies was altered by the presence of 55LM genotype (p = 0.037) in patients with DLBCL

Duplicação genica é uma das principais forças levando a evolução dos genomas eucarioto. O impacto de duplicações gênicas/genômicas vem sendo investigado a muito tempo em humanos e outros primatas. Um segundo mecanismo de duplicação gênica, a retrotransposição baseada em RNA maduros, vem sendo menos estudada devido ao seu potencial menor de gerar cópias funcionais. No entanto, recentemente, publicações descreveram retrocópias funcionais em humanos, roedores e mosca de fruta. Nesta tese, para investigar sobre retrocópias causando variabilidade genética no genoma de primatas, nós desenvolvemos a implementamos os métodos para detectar estas inserções. Utilizando nove genomas e transcriptomas publicamente disponíveis (sete primatas e dois roedores) nós confirmamos um número similar, porém, com origem independente, de retrocópias em primatas e roedores. Nós também encontramos um enriquecimento de retrocópias no genoma de Platyrrhini, possivelmente explicado pela expansão de L1PA7 e L1P3 nestes genomas. Posteriormente, nós analisamos a ortologia de retrocópias no genoma de primatas e encontramos 127 eventos específicos à linhagem humana. Nós também exploramos dados do projeto 1000 Genomes para detectar retrocópias polimórficas (retroCNVs germinativos) e encontramos 17 eventos, presentes no genoma referência humano, mas ausentes em mais de um indivíduo. Similarmente, nós investigamos novas retroduplicações de mRNAs no genoma humano, detectando 21 eventos ausentes do genoma referência. Finalmente, investigamos a existência de retroCNVs somáticos e descrevemos sete possíveis retrocópias somáticas. Apesar de sua possível insignificância, nós encontramos que algumas retrocópias compartilhadas entre todos os primatas, espécie específicas, e polimórficas podem ser expressas per se ou como transcritos quiméricos com genes hospedeiros. Sobretudo, nós encontramos que retrocópias são um fator importante da variabilidade genética inter-espécie, intra-espécie e intra-indivíduo e podem estar influenciando a evolução de mamíferos ao criar reservatórios de duplicações potencialmente funcionais. / Gene duplication is a major driving force of evolution in eukaryotic genome. The impact of gene/genomic duplication has long been investigated in human and other primates. A second mechanism of gene duplication, retrotransposition, which is based on mature RNA, has been traditionally less studied due to their lower potential to generate functional copies. Recently, however, publications described functional retrocopies in humans, murines and drosophila. Here, to gain insights of the genetic variability arising from retrocopies on primate genomes, we developed and implemented the methods to detect these insertions. Using nine publicly available reference genomes and transcriptomes (seven primates and two rodents) we described a similar number independently arisen retrocopies in primates and rodents. We also found an enrichment of retrocopies in Platyrhinni genomes, putatively explained by the expansion of L1PA7 and L1P3 in these genomes. Next, we evaluated the orthology of retrocopies in primate genomes and found 127 events specific to human lineage. We also explored 1000 Genomes Project data to detect polymorphic events (germinative retroCNVs) on human populations and found 17 events, present on the reference genome, absent in more than one individual. Conversely, we also investigated new insertions of mRNA retroduplications in the human genome, detecting 21 events absent to the human reference genome. Finally, we evaluated the existence of somatic retroCNVs and described seven putative somatic retrocopies. Despite their putative insignificance, we found that some of these shared, specie-specific and polymorphic events may be expressed per se and as chimeric transcripts within host genes. Taken together, we found that retrocopies are a great factor of genetic variation interspecie, intraspecie e intraindividual and may be affecting mammal evolution by creating reservoirs of potentially functional duplications

Introdução: A hipertensão arterial (HA) tem tomado proporções significativas nas sociedades atuais, sendo uma das principais causas de mortalidade na população idosa. Alguns estudos têm mostrado que é devido ao alto grau de complexidade da HA e partindo do pressuposto que a variação interindividual dos valores da pressão arterial (PA) é, em parte, determinada geneticamente, algumas abordagens vêm sendo utilizadas para identificar os genes que participam da etiologia da HA. Essa estratégia baseia-se no princípio de que alterações genéticas, envolvidas em funções fisiológicas específicas, contribuem para a variação da PA. Alguns polimorfismos que têm sido estudados são os relacionados com os sistemas reninaangiotensina-aldosterona e o da sintase endotelial do óxido nítrico. Contrapondo-se aos efeitos dos polimorfismos, o exercício físico é considerado umas das principais ferramentas não farmacológicas para o controle da hipertensão. Objetivo: Desta forma, o objetivo deste estudo é investigar de forma integrada a relação dos polimorfismos sistemas renina-angiotensina e da síntese endotelial do óxido nítrico no controle da PA de idosos normotensos e hipertensos e, como esta relação pode ser modulada pelo nível de condicionamento físico (CF). Método: Trata-se de um estudo transversal realizado em Bauru, SP o qual participaram do estudo 155 idosos com idade média 66,94 (6,83) anos, que realizaram os seguintes testes: Bateria de testes para determinar nível de CF por meio do índice de aptidão funcional geral (IAFG), pressão arterial sistólica (PAS) e diastólica (PAD), coleta de sangue para extração do DNA (QIAamp DNA Mini Kit) e posterior análise dos polimorfismos do gene da eNOS -786T>C; INTRON 4 e 894G>T e M235T do Gene do Angiotensinogênio; D/I do Gene da ECA; A1166C Gene do Receptor AT1 do SRAA e, quantificações da atividade da ECA (Ensaio fluorimétrico) e nitrito (Método da quimioluminescência). Resultado e Conclusão: O IAFG é a variável que parece exercer maior influência nas variáveis antropométrica, hemodinâmicos e humorais. Notou-se também uma associação entre os haplótipos dos genes do SRAA, MDA, TIA e TIC, ao risco de HA. E ainda, identificou-se um modelo de interação significativo entre o gene eNOS e AGT em hipertensos comparados a normotensos obtidos pelo método MDR. / Background: Hypertension (HA) has taken significant proportions in contemporary societies, one of the leading causes of mortality in the elderly population. Some studies have shown that it is due to the high complexity of HA, assuming that the interindividual variation in blood preswsure (BP) are in part genetically determined. There are some approaches which have been used to identify genes that participate in the origin of HA. This strategy is based on the principle of genetic alterations involved in specific physiological functions that contribute to the variation of the BP. Some polymorphisms that have been studied are related to the renin-angiotensinaldosterone system (RAAS) and the syntase of endothelial nitric oxide (eNOS). Opposed to the effects of polymorphisms, physical exercise is considered one of the main tools for non-pharmacological management for HA. Objectives: The purpose of this study was to investigate the relationship between eNOS and RAAS polymorphisms and the effect of these interaction in the BP control in hypertensive and normotensive elderly people, and, how this relationship can be modulated by the level of physical fitness. Methods: This is a cross-sectional study developed in Bauru-SP. Participated in this study 155 elderly (66.94±6.83 years old), who underwent the following tests: battery test to determine the fitness level through the general functional fitness index (GFFI), systolic and diastolic blood pressure (SBPand DBP) , blood collection for DNA extraction (QIAamp DNA Mini Kit) and subsequent analysis of polymorphisms of the eNOS gene -786T> C; INTRON 4 and 894G> T and M235T of angiotensinogen gene; D / I of the ACE gene; A1166C Gene AT1 Receptor RAAS and quantifications of ACE activity (fluorimetric assay) and nitrite concentration (chemiluminescence Method). Results and Conclusion: The GFFI is the variable that appears to exert greater influence on anthropometric, hemodynamic and humoral values. It was noted an association between the haplotypes of RAAS genes, MDA, TIA and TIC and the risk of hypertension. Additionally, it was identified a significant interaction model between eNOS and AGT gene in hypertensive compared to normotensive obtained by MDR method.

Submitted by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-28T21:54:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Patricia_Costa.pdf: 751161 bytes, checksum: e817a14f53a6b9a7c3652132bcc1750f (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-28T21:55:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Patricia_Costa.pdf: 751161 bytes, checksum: e817a14f53a6b9a7c3652132bcc1750f (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-28T21:55:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Patricia_Costa.pdf: 751161 bytes, checksum: e817a14f53a6b9a7c3652132bcc1750f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-28T21:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Patricia_Costa.pdf: 751161 bytes, checksum: e817a14f53a6b9a7c3652132bcc1750f (MD5) Previous issue date: 2017-03-20 / Sem bolsa / O estado nutricional está diretamente ligado à saúde da criança, influenciando no seu processo de crescimento e desenvolvimento. O estudo teve por objetivo investigar o estado nutricional e identificar a existência da associação com os polimorfismo R577X da ACTN3 e ECA I/D, em escolares do ensino da rede pública e privada. É um estudo com delineamento transversal no período de novembro de 2015 a julho de 2016. Foram incluídos no estudo todos os escolares matriculados e que estavam frequentando regularmente as aulas. Para a coleta dos dados foi realizada avaliação antropométrica por meio das medidas de peso e estatura. Posteriormente, os dados foram analisados através da utilização do programa Stata 13.0. Após a avaliação dos dados pode-se observar os seguintes resultados, em relação ao estado nutricional observa-se que apenas 0,2% (n=1) foram classificados com magreza e 57,8% como eutróficos, enquanto que 16,5% (n=76) e 23,7% (n=109) foram classificados com sobrepeso e obesidade, respectivamente. Em relação ao polimorfismo da ECA, encontrou-se 223 indivíduos DD (52,5%), 131 ID (30,8%) e 71 II (16,70). A prevalência do alelo D foi de 68% e do alelo I foi de 32%. Quanto ao polimorfismo da ACTN3 observou-se 155 indivíduos RR (38,8%), 161 RX (40,25%) e 84 XX (21%). A prevalência do alelo R de 59% e do alelo X foi de 41%. Não foi encontrada associação entre o estado nutricional das crianças e os polimorfismos estudados. Os dois genes apresentaram estarem em desequilíbrio de distribuição quanto a Hardy-Weinberg na amostra, o que deverá ser estudado para verificar se este desequilíbrio também reflete a população adulta de Arroio Grande. / The nutritional status is directed to the health of the child, influencing its process of growth and development. The objective of the study was to investigate the nutritional status and to identify the existence of the association with ACTN3 (R577X) and ECA I / D gene polymorphisms in public and private school students. It is a study with a crosssectional design from November 2015 to July 2016. All the studies enrolled in school are included and are frequently considered as classes. To collect the data on an anthropometric evaluation by means of measures of weight and height. Subsequently, the data were analyzed for the use of the Stata 13.0 program. After an evaluation of the results, the following results can be observed regarding nutritional status, observing that only 0.6% (n = 1) were evaluated with 57.8% as eutrophic, while 16.5% (N = 76) and 23.7% (n = 109) were overweight and obese. Regarding the RCT polymorphism, 223 individuals were found to be DD (52.5%), 131 ID (30.8%) and 71 II (16.70). The prevalence of the D allele was 68% and the I allele was 32%. Regarding the ACTN3 polymorphism, 155 RR (38.8%), 161 RX (40.25%) and 84 XX (21%) individuals were observed. The prevalence of the 59% R allele and the X allele was 41%. No association was found between the nutritional status of the children and the polymorphisms studied. The two genes show a balance of distribution disequilibrium for Hardy-Weinberg in the sample, which should be studied to verify if this imbalance also reflects an adult population of Arroio Grande.

Analisar a associação recíproca entre fatores de risco cardiometabólico, níveis de adipocitocinas (leptina e adiponectina de alto peso molecular), endocanabinoides (anandamida [AEA] e 2-araquidonoilglicerol [2-AG]), compostos canabimiméticos (N-oleoiletanolamina [OEA] e N-palmitoiletanolamina [PEA]) e polimorfismos em genes codificadores de componentes do sistema endocanabinoide (enzima de degradação de endocanabinoides FAAH [gene FAAH] e receptor endocanabinoide CB1 [gene CNR1]) e do receptor PPAR-&#945; [gene PPARA], em indivíduos com diferentes graus de adiposidade. Duzentos indivíduos, entre 18 e 60 anos, com diferentes graus de índice de massa corporal (IMC) compuseram a amostra, dividida em dois grupos: cem eutróficos (IMC < 25 kg/m2) e 100 obesos (IMC &#8805; 30 kg/m2), com 50 homens e 50 mulheres em cada grupo. Os obesos ficaram assim distribuídos: grau 1, com IMC < 35 kg/m2 (n=54), 27 homens e 27 mulheres; grau 2, com IMC < 40 kg/m2 (n=32), 16 homens e 16 mulheres e grau 3, com IMC &#8805; 40 kg/m2 (n=14), 7 homens e 7 mulheres. Todos os indivíduos foram recrutados entre funcionários, estudantes e residentes do Hospital Universitário Pedro Ernesto, bem como voluntários do quadro da Polícia Militar do Estado do Rio de Janeiro e selecionados com base em amostra de conveniência. Todos foram avaliados por parâmetros antropométricos, determinação da pressão arterial, análises laboratoriais e genotipagem, para determinar seu perfil metabólico, níveis de endocanabinoides e adipocitocinas e rastreamento dos polimorfismos FAAH 385C>A, CNR1 3813A>G e PPARA 484C>G. Foram excluídos do estudo aqueles com história de comorbidades crônicas, doenças inflamatórias agudas, dependência de drogas de qualquer natureza e em uso de medicação nos dez dias anteriores à entrada no estudo. A atividade inflamatória, avaliada pela proteína C reativa ultrassensível (PCRUS), acompanhou o grau de resistência insulínica. Os níveis de PEA se associaram negativamente com a adiposidade visceral e resistência insulínica, sugerindo um melhor perfil metabólico, enquanto que os níveis de 2-AG se associaram positivamente com a PCRUS, apontando para piora nesse perfil. Os polimorfismos estudados não se associaram com o fenótipo obeso ou insulinorresistente. A presença do alelo 3813G no gene CNR1 mostrou associação independente com níveis reduzidos de adiponectina em obesos, sugerindo pior perfil metabólico nesse grupo. A presença do alelo 484G no gene PPARA, associando-se com níveis mais elevados de IMC e LDL-colesterol nos eutróficos pode indicar maior predisposição desses indivíduos para o desenvolvimento de obesidade e dislipidemia aterosclerótica. O genótipo homozigoto AA na posição 385 do gene FAAH e os níveis de PCRUS foram as principais associações, diretas e independentes, com os níveis de AEA, indicando claramente disfunção da enzima de degradação da AEA e, possivelmente, contribuindo para um perfil cardiometabólico mais vulnerável em portadores dessa variante genética. / To analyze the reciprocal association of cardiometabolic risk factors, levels of adipocytokines (leptin and high molecular weight adiponectin), endocannabinoids (anandamide [AEA] and 2-arachidonoylglycerol [2-AG]), cannabimimetic compounds (N-oleoylethanolamine [OEA] and N-palmitoylethanolamine [PEA]) and polymorphisms in genes encoding components of the endocannabinoid system (endocannabinoid degradation enzyme FAAH [FAAH gene] and endocannabinoid receptor CB1 [CNR1 gene]) and the PPAR-&#945; receptor (PPARA gene) in subjects with varying degrees of adiposity. Two hundred individuals between 18 and 60 years with varying degrees of body mass index (BMI) comprised the sample, divided in two groups: one hundred eutrophic (BMI < 25 kg/m2) and 100 obese (BMI &#8805; 30 kg/m2), 50 men and 50 women per group. The obese were distributed as follows: grade 1, with BMI < 35 kg/m2 (n = 54), 27 men and 27 women; grade 2, with BMI between &#8805; 35 and < 40 kg/m2 (n = 32), 16 men and 16 women and grade 3, with BMI &#8805; 40 kg/m2 (n = 14), 7 men and 7 women. All subjects were recruited from staff, students and residents of Pedro Ernesto University Hospital, as well as volunteers from Military Police of Rio de Janeiro State and selected based on a convenience sample. All were evaluated by anthropometric parameters, blood pressure determination, laboratory analysis and genotyping, to determine their metabolic profile, endocannabinoid and adipocytokine levels and investigate the polymorphisms FAAH 385C>A, CNR1 3813G>A and PPARA 484C>G. Those with a history of chronic comorbidities, acute inflammatory diseases, drug addiction of any kind and on medication in the ten days prior to study entry were withdrawn from the study. The inflammatory activity as assessed by high sensitive C reactive protein (hsCRP), accompanied the degree of insulin resistance. The levels of PEA negatively associated with visceral adiposity and insulin resistance, suggesting a better metabolic profile, whereas 2-AG levels were positively associated with hsCRP, pointing to a worse metabolic profile. The polymorphisms studied were not associated with the obese or insulin resistant phenotype. The presence of the allele 3813G in the CNR1 gene was independently associated with reduced levels of adiponectin in obese patients, suggesting a worse metabolic profile in this group. The presence of the allele 484G in the PPARA gene associating with higher levels of BMI and LDL-cholesterol in eutrophics may indicate a predisposition for the development of obesity and atherosclerotic dyslipidemia in these individuals. The homozygous genotype AA in position 385 of the FAAH gene, along with levels of hsCRP, were the main direct and independent associations with AEA levels, clearly indicating dysfunction of the degradation enzyme of AEA and possibly contributing to a more vulnerable cardiometabolic profile in individuals with this variant genotype.

Introdução: A artrite reumatóide (AR) é uma artropatia autoimune, de caráter inflamatório, com prevalência em torno de 1% da população. O tabagismo é considerado o principal fator de risco para o desenvolvimento da AR. O receptor de hidrocarbonetos de arila (AhR), um fator de transcrição intracelular ativado por hidrocarbonetos aromáticos componentes da fumaça do cigarro, foi identificado como alvo de regulação da diferenciação de células Th17. Objetivos: Avaliar se os polimorfismos genéticos do AhR estariam associados ao desenvolvimento da AR , e se este receptor estaria mais expresso em pacientes com AR. Pacientes e Métodos: Nós analisamos sete polimorfismos genéticos por mudança de única base (SNP) por PCR em tempo real utilizando sondas TaqMan em 138 pacientes com AR e 129 indivíduos saudáveis. A quantificação da expressão do mRNA do AhR em células mononucleares isoladas de pacientes com AR e indivíduos saudáveis foi realizada por PCR em tempo real. Resultados: Identificamos que haplótipos formados por SNPs no AhR estariam associados com desenvolvimento da AR, podendo ser fator protetor ou de risco para a doença. Em adição, os pacientes com haplótipos de risco apresentavam doença com índice de atividade elevado, principalmente quando o tabagismo estava presente. De fato, pacientes com AR apresentaram aumento na expressão de AhR (mRNA) em relação a indivíduos saudáveis. Conclusões: Em conjunto estes resultados sugerem que o AhR possui um papel importante para o desenvolvimento da artrite reumatóide. Possivelmente mutações neste receptor podem estar relacionadas com alterações na sua atividade e conseqüentemente na diferenciação de células Th17 e a susceptibilidade a AR. / Introduction: Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic autoimmune arthropaty with inflammatory characteristics and prevalence around 1% in the population. Tabagism is the main risk factor to RA development. The aryl hydrocarbon receptor (AhR) is an intracellular transcription factor activated by aromatic hydrocarbons present in smoking, whichwas identified to be a target of regulation of Th17 differentiation. Purpose: Study the relationship of genetic polymorphisms in AhR with RA development, and if this receptor expression is upregulated in RA patients. Patients and Methods: We analyzed seven genetic single nucleotide polymorphisms by Real-Time PCR using TaqMan probes in 138 patients with Rheumatoid Arthritis and 129 healthy controls. The AhR mRNA quantization in mononuclear cells isolated from AR patients and healthy controls has been done by Realt-Time PCR. Results: We identified that AhR haplotypes were associated with RA development and that they could be protector or risk factors to disease. In addition, patients with risk haplotypes showed higher disease activity index, mainly when smoking was present. Indeed, patients with RA showed upregulation in the AhR expression (mRNA) when compared with healthy controls. Conclusions: These results suggest that AhR has an important role in AR development. Probably, mutations in this receptor could be related with alterations in its activity and consequently in the differentiation of Th17 cells and RA susceptibility.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-09-04T19:33:18Z No. of bitstreams: 2 Batista, Mariana Pedrosa - Avaliação citogenética e molecular de indivíduos ocupacionalmente expostos aos agrotóxicos - 2014.pdf: 1556018 bytes, checksum: 89fbad76ace350a8cf9c7db5c92f015d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-04T19:33:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Batista, Mariana Pedrosa - Avaliação citogenética e molecular de indivíduos ocupacionalmente expostos aos agrotóxicos - 2014.pdf: 1556018 bytes, checksum: 89fbad76ace350a8cf9c7db5c92f015d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Rural workers are constantly exposed to pesticides they use on crops, and this exposure may be responsible for genetic damage causing a health risk. A problem with the use of pesticides is the genotoxicity, which can lead to the onset of disease. Little is known about the relationship between genotoxicity and the variation of genetic polymorphisms of xenobiotic metabolism that may modify individual susceptibility to the possible genotoxic effects of pesticides. Therefore, there is a need to study genes as glutathione-S-transferase mu (GSTM1) and theta glutathione S-transferase (GSTT1) encoding detoxification enzymes of genotoxic compounds. Another important assessment in individuals exposed to pesticides is the presence of chromosomal translocation t(14;18) (q31,q21), which can be investigated at the molecular level. Thus, this study evaluated the polymorphisms of GSTM1 and GSTT1 genes in 120 individuals occupationally exposed to pesticides and 115 controls (without exposure to pesticides), by real-time PCR. The frequencies of GSTM1 and GSTT1 genotypes were found in 49 % and 18 %, respectively in the exposed group and 37 % and 18 %, respectively, for the control group. It has been found that there is a greater possibility of poisoning in workers who have null genotypes. There was no statistically significant correlation between the increased risk of intoxication and alcohol consumption, smoking and use of PPE. In addition, 29 workers exposed to pesticides for more than 15 years and with null genotypes in GSTT1 and / or GSTM1, were evaluated for the presence of the t (14;18)(q31, q21), in 100 nuclei, by fluorescent in situ hybridization (FISH) . The translocation was observed in only one individual, which may have been caused by prolonged exposure to pesticides, increasing age or alcohol consumption. Thus, the study of genetic polymorphisms and translocations as biomarkers of susceptibility is of fundamental importance in understanding the processes involved in genotype distribution mutagenesis and carcinogenesis and could help minimize the risks for susceptible individuals who are exposed to pesticides. / Os trabalhadores rurais estão constantemente expostos aos agrotóxicos que utilizam nas lavouras, e esta exposição pode ser responsável por danos genéticos causando um risco para a saúde. Um dos problemas da utilização de agrotóxicos é a genotoxicidade, que pode levar ao aparecimento de doenças. Pouco se sabe sobre a relação entre a genotoxicidade e a variação de polimorfismos genéticos de metabolização de xenobióticos que podem modificar a suscetibilidade individual aos possíveis efeitos genotóxicos dos agrotóxicos. Por isso, há a necessidade do estudo de genes como a glutationa-S-tranferase mu (GSTM1) e glutationa-S–transferase teta (GSTT1) que codificam enzimas de detoxificação de compostos genotóxicos. Outra avaliação importante em indivíduos expostos a agrotóxicos é a pesquisa da translocação cromossômica t(14;18)(q31;q21), a qual pode ser investigada em nível molecular. Nesse sentido, esse estudo avaliou os polimorfismos dos genes GSTT1 e GSTM1, em 120 indivíduos ocupacionalmente expostos aos agrotóxicos e de 115 controles (sem exposição aos agrotóxicos), pela metodologia de PCR em tempo real. As frequências de genótipos GSTM1 e GSTT1 encontradas foram de 49% e 18%, respectivamente, para o grupo exposto e 37% e 18%, respectivamente, para o grupo controle. Verificou-se que não há maior possibilidade de intoxicação em trabalhadores que apresentam genótipos nulos. Não houve correlação estatisticamente significativa entre o aumento do risco de intoxicação e o consumo de álcool, tabaco e uso de EPI. Além disso, 29 trabalhadores, expostos a agrotóxicos por mais de 15 anos e com genótipos nulos, GSTT1 e/ou GSTM1, foram avaliados quanto à presença da translocação t(14;18)(q31; q21), pela análise de 100 células, por Hibridação Fluorescente in situ (FISH). Com essa análise, a translocação foi observada em apenas um indivíduo, a qual pode ter sido causada pela exposição prolongada a agrotóxicos, aumento da idade ou consumo de álcool. Dessa forma, o estudo de polimorfismos genéticos e translocações, como biomarcadores de suscetibilidade é de importância fundamental na compreensão dos processos de distribuição genotípica envolvidos na mutagênese e carcinogênese e poderia ajudar a minimizar os riscos para indivíduos suscetíveis que são expostos a agrotóxicos.

Introdução: A hipertensão arterial (HA) tem tomado proporções significativas nas sociedades atuais, sendo uma das principais causas de mortalidade na população idosa. Alguns estudos têm mostrado que é devido ao alto grau de complexidade da HA e partindo do pressuposto que a variação interindividual dos valores da pressão arterial (PA) é, em parte, determinada geneticamente, algumas abordagens vêm sendo utilizadas para identificar os genes que participam da etiologia da HA. Essa estratégia baseia-se no princípio de que alterações genéticas, envolvidas em funções fisiológicas específicas, contribuem para a variação da PA. Alguns polimorfismos que têm sido estudados são os relacionados com os sistemas reninaangiotensina-aldosterona e o da sintase endotelial do óxido nítrico. Contrapondo-se aos efeitos dos polimorfismos, o exercício físico é considerado umas das principais ferramentas não farmacológicas para o controle da hipertensão. Objetivo: Desta forma, o objetivo deste estudo é investigar de forma integrada a relação dos polimorfismos sistemas renina-angiotensina e da síntese endotelial do óxido nítrico no controle da PA de idosos normotensos e hipertensos e, como esta relação pode ser modulada pelo nível de condicionamento físico (CF). Método: Trata-se de um estudo transversal realizado em Bauru, SP o qual participaram do estudo 155 idosos com idade média 66,94 (6,83) anos, que realizaram os seguintes testes: Bateria de testes para determinar nível de CF por meio do índice de aptidão funcional geral (IAFG), pressão arterial sistólica (PAS) e diastólica (PAD), coleta de sangue para extração do DNA (QIAamp DNA Mini Kit) e posterior análise dos polimorfismos do gene da eNOS -786T>C; INTRON 4 e 894G>T e M235T do Gene do Angiotensinogênio; D/I do Gene da ECA; A1166C Gene do Receptor AT1 do SRAA e, quantificações da atividade da ECA (Ensaio fluorimétrico) e nitrito (Método da quimioluminescência). Resultado e Conclusão: O IAFG é a variável que parece exercer maior influência nas variáveis antropométrica, hemodinâmicos e humorais. Notou-se também uma associação entre os haplótipos dos genes do SRAA, MDA, TIA e TIC, ao risco de HA. E ainda, identificou-se um modelo de interação significativo entre o gene eNOS e AGT em hipertensos comparados a normotensos obtidos pelo método MDR. / Background: Hypertension (HA) has taken significant proportions in contemporary societies, one of the leading causes of mortality in the elderly population. Some studies have shown that it is due to the high complexity of HA, assuming that the interindividual variation in blood preswsure (BP) are in part genetically determined. There are some approaches which have been used to identify genes that participate in the origin of HA. This strategy is based on the principle of genetic alterations involved in specific physiological functions that contribute to the variation of the BP. Some polymorphisms that have been studied are related to the renin-angiotensinaldosterone system (RAAS) and the syntase of endothelial nitric oxide (eNOS). Opposed to the effects of polymorphisms, physical exercise is considered one of the main tools for non-pharmacological management for HA. Objectives: The purpose of this study was to investigate the relationship between eNOS and RAAS polymorphisms and the effect of these interaction in the BP control in hypertensive and normotensive elderly people, and, how this relationship can be modulated by the level of physical fitness. Methods: This is a cross-sectional study developed in Bauru-SP. Participated in this study 155 elderly (66.94±6.83 years old), who underwent the following tests: battery test to determine the fitness level through the general functional fitness index (GFFI), systolic and diastolic blood pressure (SBPand DBP) , blood collection for DNA extraction (QIAamp DNA Mini Kit) and subsequent analysis of polymorphisms of the eNOS gene -786T> C; INTRON 4 and 894G> T and M235T of angiotensinogen gene; D / I of the ACE gene; A1166C Gene AT1 Receptor RAAS and quantifications of ACE activity (fluorimetric assay) and nitrite concentration (chemiluminescence Method). Results and Conclusion: The GFFI is the variable that appears to exert greater influence on anthropometric, hemodynamic and humoral values. It was noted an association between the haplotypes of RAAS genes, MDA, TIA and TIC and the risk of hypertension. Additionally, it was identified a significant interaction model between eNOS and AGT gene in hypertensive compared to normotensive obtained by MDR method.

Introdução: Fatores genéticos estão entre os determinantes de obesidade, podendo influenciar a resposta a intervenções em estilo de vida. O impacto de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) na resposta de biomarcadores a intervenções não é claro. Objetivo: Este estudo examinou as associações de seis SNPs FTO T/A, PPAR Pro12Ala, Apo A1 -75G/A, TNF- -308G/A, IL-6 - 174G/C e AdipoQ 45T/G com mudanças induzidas por uma intervenção em amostra de brasileiros de risco cardiometabólico. Métodos: Em um programa de nove meses de orientações em hábitos alimentares e atividade física, 180 indivíduos com prediabetes ou síndrome metabólica foram genotipados e agrupados segundo a presença do alelo variante de cada SNP e comparados quanto a variáveis antropométricas, metabólicas e inflamatórias. Resultados: A intervenção resultou em redução do consumo calórico, aumento da atividade física, melhora na antropometria e outros biomarcadores. Estratificando pelos SNPs, os principais achados estão contidos em dois artigos. Artigo 1: Houve melhor resposta do perfil glicêmico após a intervenção nos portadores do alelo variante do SNP TNF -308 G/A. Observou-se melhora das variáveis lipídicas nos portadores do alelo variante do SNP IL-6 -174 G/C, enquanto que aqueles com o genótipo referência obtiveram melhora no metabolismo da glicose. Carreadores do SNP AdipoQ 45T/G não obtiveram melhora no perfil lipídico nem no glicêmico.Artigo 2: O alelo variante do FTO T/A associou-se a melhores perfis 9 inflamatório e glicêmico em resposta à intervenção. Portadores do alelo variante do SNP PPAR Pro12Ala obtiveram melhora na pressão arterial, enquanto que indivíduos com o genótipo referência melhoraram o metabolismo lipídico. Carreadores do alelo variante do SNP Apo A1 -75G/A apresentaram melhora no perfil lipídico que, após ajuste para medicação, não se manteve significante. Conclusões: SNPs relacionados à obesidade e comorbidades podem influenciar a resposta de marcadores metabólicos e inflamatórios a intervenções em hábitos de vida em brasileiros. O SNP TNF -308G/A parece favorecer um melhor perfil glicêmico. O SNP IL-6 -174G/C pode conferir efeito benéfico no perfil lipídico, mas não na glicemia. O SNP AdipoQ 45T/G compromete a resposta à intervenção em indivíduos de risco cardiometabólico no nosso meio. O SNP FTO T/A pode favorecer a resposta do metabolismo da glicose e a atenuação da inflamação. O SNP PPAR Pro12Ala pode ter impacto benéfico na pressão arterial, mas não no metabolismo lipídico. Em contraste com a literatura, o SNP Apo A1 -75G/A não parece influenciar resposta dos lípides à intervenção. Mais estudos envolvendo estes SNPs são necessários para possível direcionamento de intervenções a subgrupos específicos de indivíduos de risco. / Introduction: Genetic factors are one of the determinants of obesity and may influence the response to interventions. The impact of single nucleotide polymorphisms (SNPs) in weight loss and inflammatory response to interventions is not clear. Objective: This study examined associations of six polymorphisms FTO T/A, PPAR Pro12Ala, Apo A1 -75G/A, TNF- -308G/A, IL-6 -174G/C and AdipoQ 45T/G with changes induced by lifestyle intervention in Brazilians at cardiometabolic risk. Methods: In a 9-month intervention on diet and physical activity, 180 individuals with prediabetes or metabolic syndrome were genotyped and compared according the presence of variant allele of the SNPs and antrophometric, metabolic and inflammatory variables. Results: The intervention resulted in lower energy intake and greater total physical activity as well as improvement in anthropometry and several biomarkers. Stratified by SNPs, the main findings are covered in two articles. Article 1: Variant allele carriers of TNF -308 G/A SNP decreased plasma glucose after intervention. Lipid profile improved after intervention in variant allele carriers of IL-6 -174 G/C, while individuals with reference genotype had better plasma glucose response. Variant allele carriers of AdipoQ 45T/G did not improve lipid and glycemic profile. Article 2: Only variant allele carriers of FTO T/A decreased fasting plasma glucose and C-reactive protein concentration after intervention. Blood pressure reduced after intervention in variant allele carriers of the PPAR Pro12Ala, while the reference genotype increased Apo A1. Apparent favorable response of lipid profile to intervention in variant allele carriers of Apo A1 -75G/A was not maintained after adjustments for lipid-lowering medication. Conclusions: SNPs associated with obesity and comorbidities may influence the response of metabolic and inflammatory markers after lifestyle intervention. The TNF -308G/A may predispose a better response of glucose metabolism. The IL-6 -174 G/C SNP may confer a beneficial effect on lipid profile but not in glucose metabolism. Our findings reinforce unfavorable effects of the AdipoQ 45T/G SNP in lipid and glucose metabolism after lifestyle intervention in Brazilians at cardiometabolic risk. FTO T/A SNP induces a favorable impact on inflammatory status and glucose metabolism. The reference genotype of PPAR Pro12Ala seems to favor a better lipid profile, while the variant allele to decrease blood pressure. In contrast to literature, our data did not support benefits on lipid profile of the variant allele of Apo A1 -75G/A SNP. Further studies of these SNPs are needed to direct interventions to specific subgroups of at-risk individuals.

Introdução: no contexto das doenças crônicas não transmissíveis (DCNT), vários estudos associam a presença de determinados polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) ao risco de desfechos metabólicos, como a obesidade e a dislipidemia. Objetivo: avaliar a presença de SNP associados à adiposidade corporal e ao metabolismo lipídico sobre o índice de massa corporal (IMC), o consumo alimentar, o perfil lipídico e a concentração plasmática de biomarcadores inflamatórios em indivíduos adultos participantes do estudo de base populacional (ISA-Capital). Métodos: 244 indivíduos adultos de ambos os gêneros (idade entre 20-59 anos) participaram do estudo, no qual foram realizadas as avaliações antropométricas e do consumo alimentar por meio do questionário de 24 horas (R24h) e a coleta de sangue para avaliação da concentração de biomarcadores inflamatórios. O índice de qualidade da dieta revisado (IQDR) foi utilizado no estudo. Foi realizada a genotipagem de oito genes e 13 SNP (FTO rs9939609, rs8050136, rs9930506; LDLR rs688, rs5925; APOB rs693, rs1367117, APOA5 rs662799; LIPC rs2070895, rs1800588; FADS1 rs174546; MYRF rs174537 e ELOVL2 rs953413) pelo sistema TaqMan Open Array. A partir dos resultados da genotipagem, foi elaborado um escore de risco genético (ERG). Resultados: foi verificada associação negativa entre o consumo de vegetais totais (P=0,004) e vegetais verdes-escuros e alaranjados e leguminosas (P=0,002) e leite e derivados (P=0,009) com o IMC. O consumo de cereais totais (P=0,029) e de carboidratos totais (P=0,011) mostrou interação negativa para o ERG, enquanto o consumo de carnes, ovos e leguminosas teve interação positiva (P=0,028) ao influenciar o IMC. As concentrações plasmáticas de HDL-c tiveram associação negativa (P=0,026) com o IQDR e associação positiva (P=0,007) com o componente Gord_AA (valor energético proveniente da gordura sólida, álcool e açúcar de adição). Foi encontrada interação significativa entre o consumo de óleos (lipídios insaturados) (P=0,019) e de Gord_AA (P<0,001). Concentrações plasmáticas de HDL-c e de LDL-c são significativamente menores nos carreadores do alelo variante T para os SNP que correspondem às atividades das enzimas dessaturases (FADS1 e MYRF). As concentrações do ácido oleico foram maiores nos indivíduos com genótipo CT/TT no gene da FADS1 e AG/GG no gene da ELOVL2 em relação aos genótipos selvagens. Apenas os carreadores do alelo T tanto em FADS1 quanto em MYRF tiveram concentrações de ácido linoleico e linolênico superiores em relação aos genótipos selvagens. Por outro lado, as concentrações de ácido araquidônico, de ácido docosapentaenoico (DPA), de ácidos graxos saturados e de poli-insaturados totais foram menores nos indivíduos carreadores dos alelos variantes para os três polimorfismos avaliados. O conteúdo de ácido eicosapentaenoico (EPA) foi menor nos carreadores do alelo T dos genes FADS1 e MYRF, enquanto o conteúdo de ácido esteárico foi menor apenas nos carreadores do alelo G do gene ELOVL2, sendo que nestes indivíduos as concentrações plasmáticas do conteúdo total de ácidos monoinsaturados foram significativamente maiores quando comparados ao genótipo selvagem (AA). Observou-se também que a atividade estimada da enzima estearoil CoA dessaturase (SDC_18) é maior nos genótipos CT/TT da FADS1 e da ELOVL2. Contudo, a estimativa da atividade da enzima delta-5 dessaturase (D5D) foi estatisticamente menor na presença do alelo polimórfico para os três SNP estudados (FADS1 CT/TT; MYRF GT/TT; ELOVL2 AG/GG). Apenas para os carreadores do alelo T da FADS1 (CT/TT), a estimativa da atividade da enzima delta-6 dessaturase (D6D) foi estatisticamente menor em relação ao genótipo selvagem CC. Conclusões: a presença dos SNP estudados na população de São Paulo mostraram associações em relação ao aumento do risco para adiposidade corporal e dislipidemias, podendo também apresentar associações com a qualidade da dieta dos participantes. Nesse sentido, a aplicação do IQDR junto com o ERG pode ser uma ferramenta útil na identificação de associações entre gene-nutriente e o impacto nas doenças metabólicas. / Introduction: excess weight and changes in lipid profile may be associated with environmental factors, such as diet quality, and non-modifiable factors, such as genetic inheritance. In the context of chronic noncommunicable diseases (NCDs), several studies associate the presence of certain single nucleotide polymorphisms (SNP) to the risk of metabolic outcomes, such as obesity and dyslipidemia. Objective: to evaluate the presence of SNP associated with body fat and lipid metabolism on body mass index (BMI), dietary intake, lipid profile and plasma concentration of inflammatory biomarkers in adult individuals participating in the population-based study (ISA-Capital). Methods: 244 adult subjects of both genders (ages 20-59 years) participated in the study, in which the anthropometric traits were evaluated, and food consumption evaluations were performed using the 24- hour questionnaire (R24h) and blood collection for evaluation of concentration of inflammatory biomarkers. The Brazilian healthy eating index revised (BHEIR) was used in the study. Genotyping of eight genes and 13 SNP (FTO rs9939609, rs8050136, rs9930506; LDLR rs688, rs5925; APOB rs693, rs1367117, APOA5 rs662799; LIPC rs2070895, rs1800588; FADS1 rs174546; MYRF rs174537 and ELOVL2 rs953413) were performed by the TaqMan Open Array system. From the results of the genotyping, a genetic risk score (GRS) was elaborated. Results: there was a negative association between the consumption of total vegetables (p = 0.004) and dark green and orange vegetables and legumes (p = 0.002), milk and dairy (p=0.009) with BMI. Total cereal consumption (p = 0.029) and total carbohydrates (p = 0.011) showed negative interaction for GRS (categories 3 to 5), while meat, egg and legume consumption had a positive interaction (p = 0.028) influence BMI. Of the BHEIR components, plasma HDL-c concentrations were negatively associated (p = 0.026) with the BHEIR and positive association (p = 0.007) with the SoFAAS component (energy value from solid fat, alcohol and addition sugar). Significant interaction was observed between the consumption of oils (unsaturated lipids) (p = 0.019) and SoFAAS (p <0.001). About the enzymes associated with biosynthesis of omega 3 and polyunsaturated fatty acids 6, plasma HDL-c and LDL-c plasma concentrations are significantly lower in carriers of the T variant allele for SNP that correspond to the activities of desaturases (FADS1 and MYRF). Oleic acid concentrations were statistically higher in individuals with CT / TT genotypes in the FADS1 and AG / GG gene in the ELOVL2 gene in relation to wild genotypes. In addition, only the T allele carriers in both FADS1 and MYRF had higher concentrations of linoleic and linolenic acid than wild genotypes. The concentrations of arachidonic acid, docosapentaenoic acid (DPA), saturated fatty acids and total polyunsaturated fatty acids were lower in the carriers of the variant alleles for the three evaluated polymorphisms. The eicosapentaenoic acid (EPA) content was lower in the T allele carriers of the FADS1 and MYRF genes, while the stearic acid content was lower only in the G allele carriers of the ELOVL2 gene, where in these individuals the plasma concentrations of the total content of monounsaturated acids were significantly higher when compared to the wild-type (AA) genotype. It was also observed that the estimated activity of the stearoyl CoA desaturase enzyme (SDC_18) is higher in the CT / TT genotypes of FADS1 and ELOVL2. However, the estimate of the activity of the enzyme delta-5 desaturase (D5D) was statistically lower in the presence of the polymorphic allele for the three SNP studied (FADS1 CT/ TT; MYRF GT / TT; ELOVL2 AG / GG). Only for the FADS1 (CT / TT) allele carriers, the estimate of the activity of the enzyme delta-6 desaturase (D6D) was statistically lower than the wild-type CC genotype. Conclusions: the presence of SNP studied in the population of São Paulo showed associations in relation to the increased risk for body fatness and dyslipidemia and may also present associations with the quality of the participants\' diet. In this sense, the application of BHEIR together with GRS may be a useful tool in the identification of genenutrient associations and the impact on metabolic diseases.