Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 417689.pdf: 446640 bytes, checksum: ad192136c1369a936420f7ce2238c5eb (MD5) Previous issue date: 2009-08-26 / A tuberculose ? uma das principais causas de morte ao redor do mundo envolvendo um ?nico agente infeccioso, o Mycobacterium tuberculosis. A severidade desta epidemia global ? exacerbada pela co-infec??o com o HIV, que alterou drasticamente a epidemiologia da mesma, causando um aumento na din?mica de transmiss?o, morbidade e mortalidade dos infectados, e com o surgimento de cepas multi-resistentes a drogas. No Brasil, praticamente um milh?o de pessoas est? infectado. Com o avan?o da gen?tica e biologia molecular, diversos tipos de m?todos laboratoriais v?m sendo utilizados para o r?pido diagn?stico e estudo da patogenicidade de doen?as infecciosas de diversos microorganismos. A disponibilidade de seq??ncias gen?micas de um grande n?mero de microrganismos patog?nicos prover? uma melhor compreens?o de sua gen?tica evolutiva, virul?ncia e intera??es com o hospedeiro. O presente estudo tratou da implementac?o de um teste para detecc?o e quantifica??o absoluta de Micobacterium sp. a partir do emprego da rea??o em cadeia da polimerase associada a fluoresc?ncia. Para tanto, o gene da enoil-ACP redutase NADHdependente (inhA) foi selecionado como gene identificador e primers e sonda marcada com fluor?foro (TaqMan?) foram desenhados. Padr?es para quantifica??o absoluta foram produzidos a partir da clonagem da sequencia identificadora em plasm?dios, sendo posteriormente empregados em ensaios para quantificac?o de amostras de DNA isoladas de escarro de pacientes portadores de tuberculose e c?lulas de M. tuberculosis em cultura. Os resultados mostraram que o sistema utilizando a inhA como gene identificador nas condi??es implementadas foi capaz de amplificar de 106 a 101 c?lulas de M.tuberculosis em cultura. Comparativamente ao m?todo da espectrofotometria, o ensaio em tempo real empregando o gene da inhA foi mais sens?vel, apresentando menor varia??o em n?mero absolutos. Amostras de DNA (n=13) isoladas de escarro de pacientes portadores de tuberculose de ++ e +++ foram submetidas ao ensaio e foram postivamente detectadas com varia??o de tr?s ordens de magnitude. Amostras de indiv?duos controle saud?veis n?o apresentaram sinal positivo, atestando a especificidade do sistema.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 424947.pdf: 989171 bytes, checksum: 8bf9e0904b8511d8e311bb590a23d7ff (MD5) Previous issue date: 2010-06-28 / O adenocarcinoma colorretal ? uma das neoplasias mais incidentes no ser humano. A express?o do Fator Tecidual (FT) foi associada ao desenvolvimento de met?stases e a um pior progn?stico em v?rias neoplasias malignas, sendo considerado um dos mais importantes fatores pr?-angiog?nicos. Este estudo teve como objetivo principal demonstrar a express?o diferencial do FT em adenocarcinomas colorretais atrav?s da t?cnica de quantifica??o de ?cidos nucl?icos (mRNA) por Rea??o de Cadeia da Polimerase em Tempo Real (RT-PCR), Foram estudados blocos de parafina de 19 pacientes com tumor (casos) e 15 sem tumor (controles) do banco de dados, do Servi?o de Colo-proctologia do Hospital S?o Lucas da PUCRS. A intensidade da express?o do TF foi comparada com a DMV e com dados cl?nicos e anatomo-patol?gicos. O grupo tumor apresentou express?o do FT maior do que o grupo controle (p< 0,001), e teve uma express?o do FT em m?dia 7,33 vezes maior do que o grupo controle. Houve associa??o significativa entre a presen?a de met?stase e a express?o aumentada do FT (p= 0,001), bem como entre a idade e a express?o do FT nos pacientes com tumor (p=0,026); entretanto, n?o foi encontrada associa??o entre a express?o do Fator Tecidual e a Densidade microvascular, (p=0,67), e em rela??o a localiza??o dos tumores e sexo dos pacientes. Em conclus?o, a express?o diferencial do FT do grupo tumor foi significativamente mais alta do que no grupo controle. Apresentou ainda uma associa??o positiva com a idade mais elevada dos pacientes e com a presen?a de met?stases.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 444782.pdf: 1327290 bytes, checksum: 51c0bcf62b76809d6ed98fd7aca7d6b9 (MD5) Previous issue date: 2011-03-15 / The Wilms Tumors (WT) is the most frequent renal tumors of children, and although curable, fatal outcomes may occur. A number a genetic alterations have been suggested as associated factors but still, the exact pathogenesis of WT remains to be fully characterized. Tissue factor (TF) is a glycoprotein which happens to be a key receptor for factor VII/VIIa and is the primary initiator of blood coagulation. Also important, TF has been associated with processes that lead to angiogenesis. It is widely expressed among cells and tissues and recent evidences pointed out an important role for TF in cancer progression and metastasis. Recent evidences suggested that TF may have a role in WT since its immunodetection was associated with poor prognosis. In the present investigation the differential expression of TF was assessed in WT using real-time PCR of RNA retrieved from paraffin sections using microdissection. Different histological components of WT - (blastema, epithelial and stromal) were analysed and the results revealed that TF in blastema and epithelial components was upregulated (14.38 and 16.02-fold respectively, P<0.001). Stroma and control non neoplasic tissues expressed similar levels of expression (P>0.05). TF expression in metastatic lesions from WT was also singificantly upregulated compared to non metastatic lesions. Microvessel density was positively correlated with TF expression (r=0.721). As described for other tumors, TF seems to play a role in malignancy or WT. Further investigations are warranted to better understand the pathways by which TF exerts its effects on tumor progression. Noteworthy, pharmacological strategies that aim at controlling angiogenesis through regulation of TF may be very promising / Esta pesqusisa teve como objetivo demonstrar a express?o diferencial do fator tecidual (FT) em tumor de Wilms (TW), atrav?s de um estudo do tipo transversal. O TW ? a neoplasia renal maligna mais comum na inf?ncia. Os estudos sobre angiog?nese em neoplasias malignas pedi?tricas apresentam poss?veis vias de terapias antiangiog?nicas, com menor agressividade e melhor especificidade tumoral. E, entre os fatores angiog?nicos poss?veis, foi estudo o Fator Tecidual (FT), prote?na transmebrana com sua principal fun??o no processo de hemostasia, mas que demonstra ter importante papel nos processos patol?gicos de tumorig?nese, angiog?nese e microambiente tumoral favor?vel ? dissemina??o neopl?sica. Sua express?o vem sendo associada ?s met?stases e piora no progn?stico. Contuto, s? a partir da pesquisa de Maciel et al (1) que a associa??o do FT com TW foi observada, onde se encontrou, utilizando imunoistoqu?mica, a correla??o positiva entre a express?o do FT, recidiva tumoral e ?bito. Ent?o, a partir desses dados iniciais, a presente pesquisa analisou uma amostra com 27 esp?cimes fixadas em parafina de TW e 26 controles (?rea sem TW), para demonstrar a express?o diferencial do FT em TW, atrav?s da t?cnica de quantifica??o de ?cidos nucl?icos (RNAm) por Rea??o Cadeia de DNA Polimerase em Tempo Real (RT-PCR), avaliar a express?o do FT em diferentes componentes tumorais, com a densidade microvascular (DMV) do TW e a ocorr?ncia de met?stases. Foi observado aumento da express?o diferencial do FT no TW, sua maior varia??o do FT foi encontrada nos componentes blastematoso e epitelial, enquanto no componente estromal apresentou varia??o m?nima em rela??o ao tecido n?o tumoral, em les?es metast?ticas o FT se mostrou significativamente mais elevado, sugerindo um papel importante para essa prote?na no processo de dissemina??o dessas c?lulas malignas, o aumento da DMV apresentou associa??o positiva com a express?o do FT. Os resultados apresentados corroboram os achados de Maciel et al (1) de forma mais concisa e quantitativa, enfatizando a import?ncia do FT na biologia do TW

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-04-03T23:22:20Z No. of bitstreams: 1 MarianaLinharesAlmeida_DISSERT.pdf: 1889702 bytes, checksum: ef1e5b69f2c491bf3e68bbe58a250218 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-04-12T18:32:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MarianaLinharesAlmeida_DISSERT.pdf: 1889702 bytes, checksum: ef1e5b69f2c491bf3e68bbe58a250218 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T18:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarianaLinharesAlmeida_DISSERT.pdf: 1889702 bytes, checksum: ef1e5b69f2c491bf3e68bbe58a250218 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A rela??o entre a doen?a periodontal (DP) e a diabetes mellitus (DM) ? bidirecional, por?m, existe a necessidade de maiores evid?ncias em rela??o ao tratamento periodontal b?sico sobre os aspectos cl?nicos e a presen?a de bact?rias em pacientes com e sem diabetes. Dessa forma, portanto, o presente estudo teve por objetivo avaliar a influ?ncia da diabetes mellitus tipo II na efic?cia do tratamento periodontal b?sico atrav?s dos par?metros cl?nicos e microbiol?gicos da saliva. Foram tratados 51 pacientes entre 30 e 65 anos atrav?s da t?cnica ?Full Mouth Disinfection? (FMD), sendo 17 do grupo diab?tico (GD) e grupo n?o diab?tico (GND). Esses pacientes foram avaliados antes do in?cio do tratamento periodontal, aos 6 e 12 meses ap?s a sua conclus?o. No exame periodontal foram avaliados o ?ndice de Sangramento a Sondagem (ISS), ?ndice de Placa Vis?vel (IPV), Profundidade de Sondagem (PS), Recess?o Gengival (RG) e N?vel Cl?nico de Inser??o (NCI). Os par?metros sangu?neos avaliados foram glicose em jejum e hemoglobina glicada (HbA1C) apenas para o GD. As amostras de saliva foram coletadas antes da realiza??o de cada exame periodontal. Foi realizada a quantifica??o das esp?cies bacterianas Treponema denticola, Porphyromonas gingivalis, e Tannerella forsythia atrav?s da t?cnica Rea??o em cadeia da pol?meras em tempo real (PCR real-time). Os resultados mostraram quanto aos par?metros cl?nicos que houve uma melhora significativa para ISS, IPV e PS para ambos os grupos, enquanto que para o NCI apenas para o GD (p=0,023). Em rela??o aos par?metros microbiol?gicos, n?o houve diferen?as entre o grupo com diabetes e sem diabetes nos per?odos avaliados, apenas a esp?cie Tanerella forsythia apresentou diferen?a estat?stica significativa no per?odo de 12 meses (p=0,004), com maior mediana para o grupo GND. Na an?lise intragrupo, apenas o GD apresentou diferen?a estat?stica para todas as esp?cies avaliadas (p<0,05), na qual houve redu??o ap?s o tratamento, mas aumento ap?s a avalia??o de 6 meses. A esp?cie Porphyromonas gingivalis aumentou significativamente ap?s 12 meses, nesse per?odo de avalia??o obteve mediana maior que o baseline. A diabetes n?o influenciou na resposta do tratamento periodontal, ambos os grupos apresentaram melhora dos par?metros cl?nicos avaliados. / The relationship between periodontal disease (PD) and diabetes mellitus (DM) is bidirectional, however, there is a need for more evidence regarding basic periodontal treatment on clinical aspects and the presence of bacteria in patients with and without diabetes. Thus, the present study aimed to evaluate the influence of type II diabetes mellitus (DM) on the efficacy of basic periodontal treatment through the clinical and microbiological parameters of saliva. Fifty-one patients were treated between 30 and 65 years of age using the "Full Mouth Disinfection" (FMD) technique, 17 in the diabetic group (DG) and non-diabetic group (NDG). These patients were evaluated before the beginning of the periodontal treatment, at 6 and 12 months after its conclusion. In the periodontal examination, the Bleeding on Probing (BOP), Visible Plaque Index (VPI), Probing Depth (PD), Gingival Recession (RG) and Clinical Attachment Level (CAL) were evaluated. The blood parameters evaluated were fasting glucose and glycated hemoglobin (HbA1C) only for DG. Saliva samples were collected before each periodontal examination. Quantification of the bacterial species Treponema denticola, Porphyromonas gingivalis, and Tannerella forsythia through the real-time polymer chain reaction (PCR) technique was performed. The results showed that the clinical parameters showed a significant improvement for ISS, IPV and PS for both groups, whereas for NCI only for GD (p = 0.023). Regarding the microbiological parameters, there were no differences between the group with diabetes and no diabetes in the evaluated periods, only Tanerella forsythia presented a statistically significant difference in the 12-month period (p = 0.004), with a higher median for the NDD group. In the intragroup analysis, only the DG presented statistical difference for all species evaluated (p <0.05), in which there was reduction after treatment, but increase after the evaluation of 6 months. The species Porphyromonas gingivalis increased significantly after 12 months, in this period of evaluation it obtained median higher than baseline.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 432089.pdf: 1649266 bytes, checksum: 3e3046dcd0a44006a99c0bdc29d77364 (MD5) Previous issue date: 2011-03-23 / Nos tempos atuais, os m?todos mais utilizados no diagn?stico da Tuberculose (TB) promovem um atraso inaceit?vel na libera??o dos resultados, um elevado n?mero de resultados falso-negativo e muitos n?o s?o sens?veis para formas paucibacilares da doen?a. Este fato se torna cr?tico uma vez que pacientes infectados continuam n?o tratados na comunidade aumentando a probabilidade de transmiss?o da doen?a e agravo da epidemia, o que corrobora a necessidade de aprimoramento ou desenvolvimento de novas metodologias. Diante deste fato, propusemos implementar um diagn?stico de DNA quantitativo para tuberculose paucibacilar, permitindo uma r?pida identifica??o e quantifica??o de bacilos vi?veis do Mycobacterium tuberculsosis (Mt) em amostras biol?gicas com o aux?lio da PCR em Tempo Real (R-T PCR). A regi?o interg?nica do gene inhA-mabA, possui c?pia ?nica no genoma do Mt e devido ? sua import?ncia na bioss?ntese de ?cidos mic?licos, foi escolhida como regi?o alvo para o desenho de primers e sondas espec?ficos acoplados a fluor?foros (TaqMan). A constru??o de padr?es de DNA sint?ticos do Mt serviram como refer?ncia para a quantifica??o absoluta dos ?cidos nucleicos, com alvo na regi?o interg?nica descrita acima. Eles foram amplificados do DNA gen?mico do Mt utilizando primers espec?ficos, clonados e o DNA plasmidial foi purificado e quantificado para o desenvolvimento de uma curva padr?o. Ap?s a morte celular o DNA pode permanecer ?ntegro; assim, m?todos de diagn?stico molecular podem superestimar o n?mero real de c?lulas vi?veis em uma amostra. Culturas de Mt H37Rv foram tratadas com diferentes concentra??es de EMA e PMA, intercalantes de DNA que se ligam no DNA de c?lulas mortas tornan-do o insol?vel e desta forma impedindo a sua amplifica??o. A concentra??o de 100OM de PMA foi escolhida para tratar amostras de escarro de pacientes em tratamento, ou com suspeita de TB. Nosso m?todo de diagn?stico mostrou uma alta sensibilidade (96,1%) quando comparado a amostras de escarro com baciloscopia positiva e se mostrou 47% mais sens?vel que a colora??o Ziehl-Neelsen para amostras com baciloscopia negativa

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 448547.pdf: 664963 bytes, checksum: 65aa603337ed5626e1f7e96bf42a9364 (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / Abdominal angiostrongyliasis is a zoonotic infection caused by Angiostrongylus costaricensis, a nematode with intravascular location in the mesentery. Humans become accidentally infected by ingesting food or water contaminated with third stage larvae present in mucus secreted by intermediate hosts, terrestrial mollusks. The confirmed diagnosis of human infection is made only through histopathology of biopsies or mesenteric tissues removed during surgical treatment. There are many cases in which the pathology is very suggestive however there is no evidence of parasite structures in the sections. Thus, the goal of this study was to standardize the extraction of DNA from formalin fixed paraffin embedded (FFPE) tissues from mice experimentally infected with Angiostrongylus costaricensis for DNA detection and future study of human angiostrongyliasis suspected cases. Materials and methods: 45 samples of each tissue of liver, lung, intestine and mesentery, totalizing 180 samples from 15 infected mice with A.costaricensis. Worms of Angiostrongylus cantonensis were separately embedded in paraffin as controls. From embedded tissues, histological sections of 3 &#956;m were performed and stained with HE to confirm the presence of parasite structures under the microscope. Approximately 24 to 31 sections of 10 &#956;m were used for DNA extraction. Worms were embedded in paraffin under different conditions such as fixative chemicals, time of fixation and types of paraffin. Specific DNA of Angiostrongylus was detected by Polymerase Chain Reaction (PCR) to amplify a sequence of 232bp, previously designed for detection in human serum assays. There was a positive amplification in 33 samples from liver, 12 from lung, 45 from mesentery and 36 from intestine wall. For different conditions of embedment, the amplification of the DNA with the buffered formalin fixative was more efficient compared to the unbuffered one; the time of fixation and the commercial brand of wax did not affect the detection of nucleic acids, however, the ratio of paraffin to tissue appears to influence the performance of the method since samples with residual paraffin no amplification was obtained. The 232bp segment also was not visualized in samples where there was no evidence of presence of parasite structures, suggesting that histopathology findings should guide the choice of the samples for DNA extraction, and those most likely to have parasite structures surrounding the lesion, even if degraded. The description of the performance of PCR in paraffin embedded tissues as a diagnostic tool in human abdominal angiostrongyliasis depends on the detailed evaluation criteria in histopathology and their association with a positive amplification of the specific probe. / Angiostrongil?ase abdominal ? uma infec??o zoon?tica causada por Angiostrongylus costaricensis, um nemat?deo com localiza??o intravascular no mesent?rio. O homem se infecta acidentalmente ao ingerir alimentos ou ?gua contaminados com larvas de terceiro est?gio presentes no muco secretado por moluscos terrestres, hospedeiros intermedi?rios. O diagn?stico confirmado da infec??o humana ? feito pelo exame histopatol?gico de bi?psias ou segmentos ressecados durante o tratamento cir?rgico de casos complicados. H? muitos casos em que a histopatologia ? muito sugestiva, por?m sem evidenciarem-se estruturas do parasito nos cortes. Desse modo, o objetivo foi padronizar a extra??o de DNA em tecidos embebidos em parafina em modelo murino visando ? detec??o de ?cidos nucl?icos e posterior utiliza??o no estudo de casos suspeitos a partir do exame histopatol?gico em humanos. Materiais e M?todos: 45 amostras de cada tecido de f?gado, pulm?o, mesent?rio e intestino, totalizando 180 amostras de 15 camundongos infectados com Angiostrongylus costaricensis; e vermes de Angiostrongylus cantonensis foram embebidos separadamente em parafina e nesses blocos contendo os tecidos foram realizados cortes histol?gicos de 3 &#956;m para colora??o por Hematoxilina-Eosina, e confirmado a presen?a de estruturas parasit?rias, foram coletados de 24 a 31 cortes de 10 &#956;m em um microtubo para a extra??o de DNA. Para a padroniza??o do m?todo, vermes foram embebidos em parafina em diferentes condi??es tais como o tipo de fixador, tempo de fixa??o e marcas comerciais de parafina. A partir dos cortes foram realizadas as extra??es de DNA com o Kit Quiagen DNEasy tissue. Para a detec??o de DNA espec?fico de Angiostrongylus foi utilizado a Rea??o em Cadeia da Polimerase (PCR), para amplifica??o de uma sequ?ncia de 232pb, previamente desenhada para ensaios de detec??o em soro humano. Em 33 amostras de f?gado, 12 de pulm?o, 45 de mesent?rio e 36 da parede intestinal houve amplifica??o do segmento de 232pb. Para as diferentes condi??es de emblocamento, as amplifica??es do DNA das amostras a partir do fixador formalina tamponada foram mais frequentes quando comparado com a formalina n?o tamponada; o tempo de fixa??o e o tipo de parafina n?o interferiram na detec??o de ?cidos nucl?icos, entretanto, a quantidade de parafina no tecido parece influenciar no desempenho do m?todo, pois nas amostras onde havia excesso de parafina n?o houve amplifica??o. O segmento de 232pb tamb?m n?o foi visualizado nas amostras onde n?o foi evidenciada a presen?a de estruturas parasit?rias, sugerindo que a informa??o provinda da histopatologia deve orientar a retirada da amostra para extra??o de DNA, como aquelas de maior probabilidade de possuir estruturas parasit?rias nas proximidades da les?o, mesmo que degradadas. A descri??o do desempenho da PCR como recurso diagn?stico da infec??o humana, em material embebido em parafina, depende da avalia??o detalhada dos crit?rios de suspeita na histopatologia correlacionada com a frequ?ncia e reprodutibilidade do resultado da extra??o de DNA e sua amplifica??o.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 438174.pdf: 7206240 bytes, checksum: f165d17261aed0c4f2179085d14a7f93 (MD5) Previous issue date: 2012-03-19 / Considering the high incidence of epilepsy (2-3% of world population) and the high rate of resistance to treatment with available antiepileptic drugs (20-30%) it is essential to be considered and made available new therapeutic options. In epilepsy, like other central nervous system disorders, there is loss of neuronal subpopulations, which represents an important consequence in the pathogenesis of the disease. Therapeutic strategies involving the transplantation of stem cells and gene therapy have been studied in experimental models of epilepsy. The genetic model of EL/Suz epilepsy mouse highlights among the experimental models. In this model, seizures originate close to the parietal lobe and spread to other brain regions such as the hippocampus. Some of the behavioral manifestations that they show are the manipulations of seizures associated with handling and vestibular stimulation, and this behavior is exacerbated by the increase with age of the animal. In order to exploit this potential, our study was to evaluate the effect of administration of bone marrow mononuclear cells in the treatment of genetics epilepsy by peripheral injection of these C57BL/6-EGFP cells in EL/Suz mice. The study was distributed in four groups: I) EL+Control (C), II) EL+Saline (S); III) EL+Bone Marrow Mononuclear Cells Inactivated (BMMCI), IV) EL+Bone Marrow Mononuclear Cells (BMMC). The animals were stimulated from birth with direct observation of behavioral manifestations from 30 days of life. Observation and stimulation of the animals were held once a week with the movement up and down the animal and commuting (goaround) in the four directions. To verify the presence of BMMC transplanted in the hippocampus and other brain structures, other agencies use the technique of polymerase chain reaction (PCR). The observation of the pro-and post-transplant groups was used as a parameter to infer that the transplanted mononuclear cells were able to migrate to the nerve tissue and reduce the number of seizures. Counting the number of seizures was evaluated in the pre and post-transplant record electroencephalographic (EEG) in groups EL+Saline and EL+BMMC for intensity control of seizures. Electrophysiological recordings in brain slices were done to evaluate the synaptic response using the paradigm of paired pulse stimulation. Our results show a gradual reduction in seizure frequency over a period of 240 days reaching 50%. To compare our findings to reduce crises we study the brain electrical activity by recording EEG in which we observed a higher intensity of ictal phase in EL+Saline group compared with the group EL+BMMC. We observed that the animals in the EL+Saline showed a significantly higher neuronal excitability compared to the control group and EL+BMMC proving the therapeutic effect of BMC. In the study of stimulus condition we saw that the three groups were facilitated induction of longterm potentiation (LTP) with a greater amplitude of excitatory postsynaptic potential in the group EL+Saline. Based on data obtained in this study, we conclude that the mononuclear bone marrow may have therapeutic effect on epilepsy genetics in the mouse model of EL/Suz. / Considerando-se a elevada incid?ncia da epilepsia (2-3% da popula??o mundial) e o alto ?ndice de refratariedade ao tratamento com f?rmacos antiepil?pticos dispon?veis (20-30%) torna-se fundamental que sejam estudadas e disponibilizadas novas alternativas terap?uticas. Na epilepsia, a exemplo de outros dist?rbios do sistema nervoso central, h? perda de sub-popula??es neuronais, o que representa uma consequ?ncia importante na patogenia da doen?a. Estrat?gias terap?uticas envolvendo o transplante de c?lulas-tronco e terapia g?nica come?am a ser estudadas em modelos experimentais de epilepsia. Entre os modelos experimentais destaca-se o modelo de epilepsia gen?tica do camundongo EL/Suz. Neste modelo, as crises se originam pr?ximos ao lobo parietal e se propagam para as outras regi?es do c?rebro como o hipocampo. Algumas das manifesta??es comportamentais que os animais apresentam s?o as manipula??es de crises associadas ? estimula??o vestibular, sendo que este comportamento ? exacerbado com o aumento com a idade do animal. Visando explorar este potencial, nosso estudo se prop?s a verificar o efeito da administra??o de c?lulas mononucleares da medula ?ssea no tratamento da epilepsia gen?tica atrav?s da inje??o perif?rica destas c?lulas (C57BL/6-EGFP) em camundongos EL/Suz. O estudo foi distribu?do em 4 grupos: I) EL+Controle (C); II) EL+Salina (S); III) EL+C?lulas-Inativadas (CI); IV) EL+C?lulas Mononucleares (CMMO). Os animais foram estimulados desde o nascimento com observa??o direta das manifesta??es comportamentais a partir de 30 dias de vida. A observa??o e a estimula??o dos animais foram realizadas uma vez por semana com o movimento de subida e descida do animal e movimentos pendulares (ir-vir) nas quatro dire??es. Para verificar a presen?a de CMMO transplantadas no hipocampo bem como em outras estruturas encef?licas e outros ?rg?os utilizamos a t?cnica da polymerase chain reaction (PCR). A observa??o dos grupos pr? e p?s-transplante foi usada como par?metro para que se infira que as c?lulas mononucleares transplantadas foram capazes de migrar para o tecido nervoso e diminuir o n?mero de crises convulsivas. A contagem do n?mero de crises foi avaliada no per?odo pr? e p?s-transplante com registro eletroencefalogr?fico (EEG) nos grupos EL+Salina e EL+CMMO para controle de intensidade das crises. Os registros eletrofisiol?gicos in vitro avaliaram a resposta sin?ptica utilizando o paradigma de estimula??o por pulso pareado em fatias de c?rebro. Nossos resultados mostram uma redu??o gradual da frequ?ncia de crises num per?odo de 240 dias chegando a 50%. Para comparar nossos achados de redu??o de crises fizemos estudo da atividade el?trica cerebral atrav?s do registro EEG onde observamos nos tra?ados eletroencefalogr?ficos uma intensidade maior da fase ictal no grupo EL+Salina comparado com o grupo EL+CMMO. Observamos que os animais do grupo EL+Salina apresentaram uma excitabilidade neuronal significamente maior comparado ao grupo controle e o grupo EL+CMMO comprovando o efeito terap?utico das CMMO. No estudo de est?mulo condicionante podemos observar que os tr?s grupos apresentaram indu??o facilitada de potencia??o de longa dura??o (LTP) com uma maior amplitude do potencial p?ssin?ptico excitat?rio no grupo EL+Salina. Com base nos dados obtidos no presente estudo, conclu?mos que as c?lulas mononucleares da medula ?ssea podem ter efeito terap?utico na epilepsia gen?tica no modelo do camundongo EL/Suz.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 401022.pdf: 970049 bytes, checksum: 1fc17227f3815a94113f9cadc1efc0e4 (MD5) Previous issue date: 2008-03-19 / Fosfodiesterase (PDE) ? uma super fam?lia de enzimas respons?veis pela degrada??o dos segundos mensageiros intracelulares adenosina monofosfato c?clico (AMPc) e guanosina monofosfato c?clico (GMPc). Como reguladoras essenciais na sinaliza??o de segundos mensageiros c?clicos com diversas fun??es fisiol?gicas as PDEs s?o alvo de drogas para o tratamento de diversas doen?as. Dentre estas est?o insufici?ncia card?aca, depress?o, asma, inflama??o e disfun??o er?til. Dentre as 11 fam?lias de genes de PDE, a fosfodiesterase 5 (PDE5) ? espec?fica para GMPc, sendo respons?vel pela atividade de hidr?lise que sofre o GMPc dentro dos tecidos dos corpos cavernosos penianos dos homens. A PDE5 ? amplamente conhecida por ser alvo de diversas drogas utilizadas no tratamento da disfun??o er?til, como por exemplo, o sildenafil (Viagra?). Este trabalho tem por objetivo a s?ntese da regi?o codificante, clonagem, express?o e purifica??o do dom?nio catal?tico da PDE5 humana. A s?ntese da regi?o codificante do polipept?deo alvo foi realizada atrav?s da t?cnica de overlap, utilizando 24 oligonucleot?deos que foram unidos atrav?s da rea??o em cadeia da polimerase (PCR). A constru??o foi clonada em vetor pCRBlunt? e sequenciada para confirmar sua identidade e a aus?ncia de muta??es. O fragmento foi subclonado em vetor de express?o pET23a(+) com s?tios de restri??o NdeI e BamHI, para o N terminal e C terminal, respectivamente. C?lulas eletrocompetentes de E. coli Rosetta (DE3) foram transformadas com o plasm?deo recombinante, a regi?o que codifica para o dom?nio catal?tico da PDE5 foi expressa em sua forma sol?vel e ativa na presen?a de 0,1 mM do indutor IPTG. Quando o dom?nio catal?tico da PDE5 foi isolado, um rendimento de 2,39 mg.mL-1 foi obtido atrav?s de 3 passos de purifica??o. O dom?nio catal?tico da PDE5 puro permitir? a realiza??o de uma triagem de extratos vegetais oriundos da biodiversidade brasileira. Com o intuito de buscar novos compostos que possam se tornar poss?veis inibidores de PDE5, e assim serem utilizados no tratamento da disfun??o er?til.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339322.pdf: 1653589 bytes, checksum: d689038c4289a5fddd155a2613f7d033 (MD5) Previous issue date: 2005-08-29 / O v?rus da Hepatite B (HBV), mesmo depois de eliminado, deixa marcas sorol?gicas que podem demonstrar esse contato pr?vio ou infec??o oculta. O perfil de marcadores permite identificar os diferentes est?gios da infec??o pelo HBV. O objetivo do presente estudo foi definir o perfil sorol?gico e molecular de indiv?duos de uma ?rea de baixa endemicidade para o HBV exclu?dos de doa??o de sangue por apresentarem anticorpos contra o ant?geno do cerne do HBV (anti-HBc total), apesar de negativos para o ant?geno de superf?cie do HBV (HBsAg). Um estudo transversal foi delineado para avaliar o perfil sorol?gico e molecular de indiv?duos anti-HBc total reagente e HBsAg negativo impedidos da doa??o sang??nea no Banco de Sangue do HSL-PUCRS. No per?odo de mar?o/2003 a maio/2005 foram selecionados 244 indiv?duos, todos apenas anti-HBc total reagente, com os demais marcadores rotineiramente testados negativos. As vari?veis do estudo foram os seguintes marcadores: t?tulo de anticorpos contra o HBsAg (anti-HBs), ant?geno e do HBV (HBeAg), anticorpos contra o HBeAg (anti-HBe) e HBV-DNA. Os marcadores sorol?gicos foram determinados utilizando kits comerciais Elecsys (Roche Diagnostics) e a pesquisa molecular de HBV foi realizada atrav?s da rea??o em cadeia de polimerase (PCR). A amostra do estudo foi composta por 244 impedimentos, sendo que 85,7% j? apresentavam t?tulos de anti-HBs 10 UI/L. Em rela??o aos marcadores relacionados com a replica??o viral, das 164 amostras testadas, todas foram HBeAg n?o-reagentes e 66,5% apresentavam anti-HBe reagente. Todas amostras testadas para o HBV-DNA (n=241) foram negativas. A an?lise estat?stica mostrou uma associa??o significativa entre anti-HBe e t?tulos de anti-HBs, onde os indiv?duos anti-HBe reagente apresentaram uma associa??o positiva com t?tulos anti-HBs forte-protetores (P=0,026). A partir dos dados do presente estudo, ? poss?vel concluir que estes indiv?duos de uma zona considerada de baixa endemicidade para o HBV, exclu?dos de doa??o sang??nea por apresentarem anti-HBc total reagente isolado, apresentaram, na maioria das vezes, t?tulos de anti-HBs que lhe conferem imunidade contra o HBV, al?m de n?o apresentarem HBV-DNA circulante.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007- Katia Roberta Fernandes.pdf: 2143619 bytes, checksum: 6ff7127f4642317cf1f53d7aceb93f1f (MD5) Previous issue date: 2007-02-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The aim of the present study was to evaluate the natural and experimental infection of B. equi in nymphs and adult Boophilus microplus using optical microscopy and molecular analysis. The experimental infection was observed in nymphs, males and females of B. microplus fed on equines chronically infected with B. equi and in non fed larvae and eggs. For the experiments two equines, of not defined breed, proven to be infected with B. equi were used. The animals were infested with B. microplus larvae of generation F4 obtained from a laboratory maintained population, known to be free of Babesia spp. infection. Daily collections of ticks were realized using as starting point the ecdisys to nymph state. After the collection the hemolymph was examined and the intestine and salivary glands were dissected, smashed on glass slides for microscopy, methanol treated and stained with Giemsa. There were dissected 860 specimens (432 nymphs, 280 females and 148 males). The dissected salivary glands were divided into two parts. The first one was smashed on microscopy glass slides, stained and examined by optical microscopy for morphologic analyses. From the second part was realized DNA extraction and PCR with specific primers for the 18S rRNA. On optical microscopy of nymph hemolymph was possible to be observed the presence of kinetes with claviform aspect characteristic for the genus Babesia. In the salivary glands of B. microplus nymphs the morphology and the sequence of developmental stages of B. equi were observed initiating on day 4 after ecdysis, being possible to see in acinary cells the formation of sporoblasts and ovoid sporozoites measuring 1.5 &#956;m of diameter and elongated sporozoites with 3.8 to 5.2&#956;m of length and 0.8 to 1.5 &#956;m of width. The PCR confirmed the presence of B. equi in DNA samples extracted from salivary glands of nymphs, male and female ticks as well as in larvae and eggs. To evaluate the natural infection were collected nymphs and adult B. microplus from two equines naturally infested by these ticks and naturally infected with B. equi. These horses were originated from Seropedica city in the state of Rio de Janeiro. There were dissected 324 specimens (145 nymphs, 138 females and 41 males). The proceedings with the salivary glands were identical to the previously described for the experimental infection. Of the salivary glands submitted to PCR, 70% showed to be infected with B. equi. Microscopical analysis of the salivary glands revealed the presence of sporoblast stages and the development of elongated sporozoites in acinary glands. The morphologic, morphometric and molecular analysis confirmed the experimental and natural infection of the salivary glands of nymphs and adult B. microplus with B. equi. The results of the present study show the ability of B. equi to develop in this tick species. The detection of B. equi DNA in eggs and larvae also suggests the possibility of transovarian transmission in B. microplus. The results allow to consider the tick B. microplus as a potential biologic vector of B. equi in horses from the studied region. / Este trabalho teve como objetivo avaliar a infec??o natural e experimental de Babesia equi em ninfas e adultos de Boophilus microplus por meio de microscopia ?ptica e an?lise molecular. A infec??o experimental foi observada a partir de ninfas, machos, f?meas, ovos e larvas n?o alimentadas de B. microplus alimentados em equinos com infec??o cr?nica por B. equi. Para a realiza??o do experimento foram utilizados dois eq?inos, mesti?os, com infec??o por B. equi. Os animais foram infestados com larvas de B. microplus de gera??o F4 obtidas de col?nia mantida em laborat?rio e livres de infec??o por Babesia spp. A partir da ecdise para ninfa foram realizadas coletas di?rias. Ap?s a coleta foram realizados os exames de hemolinfa e extra??o do intestino e das gl?ndulas salivares os quais foram macerados em l?minas de vidro para microscopia, fixados em metanol e corados com Giemsa. As gl?ndulas salivares dissecadas foram divididas em duas partes. A primeira parte foi macerada em l?minas de vidro para microscopia, corada com corante Giemsa e observada em microsc?pio ?tico para an?lise morfol?gica. A segunda parte foi realizada a extra??o de DNA, sendo submetida a PCR com primers especif?cos para o gene 18S rRNA para B. equi. Foram dissecados 860 esp?cimes (ninfas= 432; f?meas= 280 e machos= 148). Na microscopia ?ptica foi poss?vel observar nas hemolinfas das ninfas a presen?a de cinetos com aspecto claviforme t?picos do g?nero Babesia. Nas gl?ndulas salivares, a morfologia e a seq??ncia dos est?gios de desenvolvimento de B. equi das ninfa s de B. microplus, foram observadas a partir do 4? dia ap?s ecdise, sendo poss?vel observar nos ?cinos celulares a forma??o de esporoblastos e de esporozo?tas ov?ides medindo 1,5 &#956;m de di?metro e alongados medindo 3,8 a 5,2&#956;m de comprimento e 0,8 a 1,5&#956;m de largura. A rea??o em cadeia de polimerase (PCR) confirmou a presen?a de B. equi em DNA de gl?ndulas salivares extra?das de ninfas, machos, f?meas, assim como dos ovos e larva. A infec??o natural foi observada a partir de ninfas e adultos de B. microplus coletados de dois eq?inos naturalmente infestados e comprovadamente infectados por B. equi, procedentes do munic?pio de Serop?dica, Rio de Janeiro. Foram dissecados 324 esp?cimes (ninfas= 145, f?meas= 138 e machos= 41). O processamento das gl?ndulas salivares dissecadas foi semelhante ao descrito para infec??o experimental. Das gl?ndulas salivares submetidas a PCR, 70% apresentaram resultados positivos para B. equi. As an?lises por microscopia ?ptica das gl?ndulas salivares das ninfas e dos adultos revelaram a presen?a nos ?cinos celulares os est?gios de esporoblastos e o desenvolvimento de esporozo?tas alongados. As an?lises morfol?gicas, morfom?tricas e moleculares confirmaram a infec??o experimental e natural das gl?ndulas salivares de ninfas e adultos de B. microplus por B. equi. Os resultados deste estudo demonstram a capacidade de multiplica??o de B. equi em gl?ndulas salivares de ninfas e adultos de B. microplus. A detec??o de DNA de B. equi em ovos e larvas de B. microplus tamb?m sugere a possibilidade da transmiss?o transovariana nesta esp?cie de carrapato. Estes resultados sugerem que o carrapato B. microplus ? vetor biol?gico de B. equi na regi?o estudada.