Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1681295 bytes, checksum: 41cbc7f4bb36b7a1d7c8d9f98b41a88f (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / The coati (Nasua nasua) belonging the order Carnivora and the family Procyonidae, does not configure the List of species in Brazilian fauna threatened of extinction from the Ministry of the Environment. On the contrary, its unstoppable population growth near urban areas has been causing economic, environmental and sanitary problems. The detailed study about reproductive characteristics of this species proves to be an important tool in reproductive biotechnologies application concerning to conservation as well as to its population control. The objectives on this work were to describe the stages of the seminiferous epithelium combining the techniques of tubular morphology method and acrossomic system method, besides determining the total duration of seminiferous epithelium cycle (SEC) with the incorporation of bromodeoxyuridine (BrdU). In this experiment six captive adult male animals were used. All six animals were used in the description of the stages, but only two were used in the measurement of SEC duration. The total duration of the seminiferous epithelium cycle in this species was calculated in 8,13 days and, as long as it takes approximately 4,5 cycles so that the whole spermatogenic process is complete, about 36,58 days are spent in the production of spermatozoa from a spermatogonia. / O quati (Nasua nasua) pertencente a ordem Carnívora e a família Procyonidae, não configura a Lista das Espécies da Fauna Brasileira Ameaçada de Extinção do Ministério do Meio Ambiente (MMA). Pelo contrário, seu desenfreado crescimento populacional próximo à áreas urbanas, vem causando transtornos de ordem econômica, ambiental e sanitária. O estudo detalhado acerca das características reprodutivas desta espécie é uma potencial ferramenta na aplicação de biotécnicas reprodutivas voltadas a programas tanto de conservação quanto para seu controle populacional em locais onde atuam sinantropicamente. Os objetivos deste estudo foram descrever os estádios do ciclo do epitélio seminífero associando as primícias do método da morfologia tubular com o método do sistema acrossômico, além de calcular a duração total do ciclo do epitélio seminífero (CES) com incorporação da bromodeoxiuridina (BrdU). Foram utilizados seis animais machos adultos provenientes de cativeiro. Todos os animais foram utilizados na descrição dos estádios, mas somente dois destes para o cálculo da duração do CES. A duração total do ciclo do epitélio seminífero foi calculada em 8,13 dias e com aproximadamente 4,5 ciclos do epitélio seminífero são necessários para que todo o processo espermatogênico seja completado, cerca de 36,58 dias são despendidos na produção de espermatozóides a partir de uma espermatogônia.

Made available in DSpace on 2015-03-26T14:02:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1285438 bytes, checksum: 9ee3885cc388e9abcdec1aac69248461 (MD5) Previous issue date: 2014-06-30 / The aim of this work was to verify the occurrence of bovine brucellosis in dairy cows in the municipalities of Unaí and Buritis using the milk ring test (TAL). 423 milk samples collected were analyzed for the period from February 5 to April 3, 2014, at the dairy receiving platform and in the milk producing communities. Of these 423 samples, 87 were derived from the municipality of Buritis and 336 from Unaí. Of the samples derived in Unaí, 200 were collected in the milk platform of different regions of the municipality; 92 of the community of Pico; and 44 in Associação do Funil. TAL was performed stratifying positive samples in crosses. Of total samples analyzed, 73 showed positive results, corresponding to 17.25% of total. In the samples of the municipalities of Buritis and Unaí, 18.30% and 16.96% of the results were positive, respectively. In the municipality of Unaí, Associação do Funil was the community with the highest occurrence of the disease, 38.64%, while in the community of Pico the incidence was of 16.30% and in the other regions of the municipality, 12.5% of the results were positive. The samples of Associação do Funil, with 38.64% of positive results, are from small farms producing up to 300 L of milk and storing the product in cans. It is likely, therefore, that the low volume of milk, acidification, the presence of milk with mastitis, and even with colostrum, have contributed to an increase in false-positive results in this Associação. The national program for prevention of brucellosis should be intensified in the associations of small milk producers and properties with a positive result with three crosses, since the program more safely reduces the occurrence of false-positive results; however, the AAT test should be performed as confirmatory. / O objetivo neste trabalho foi verificar a ocorrência de brucelose bovina em vacas leiteiras nos municípios de Unaí e Buritis utilizando-se teste do anel do leite (TAL). Foram analisadas 423 amostras de leite coletadas no período de 5 de fevereiro a 3 de abril de 2014,na plataforma de recepção do laticínio e nas comunidades produtoras de leite. Dessas 423 amostras, 87 foram oriundas do município de Buritis e 336, de Unaí. Das amostras obtidas em Unaí, 200 foram coletadas na plataforma de leite de diferentes regiões do município; 92, da comunidade do Pico; e 44, na Associação do Funil. O TAL foi realizado estratificando-se as amostras positivas em cruzes. Do total de amostras analisadas, 73 apresentaram resultados positivos, correspondendo a 17,25% do total. Nas amostras dos municípios de Buritis e Unaí, 18,30% e 16,96% dos resultados foram positivos, respectivamente. No município de Unaí, a Associação do Funil foi a comunidade com maior ocorrência da doença, 38,64%, enquanto na comunidade do Pico a incidência foi de 16,30% e nas outras regiões do município, 12,5% dos resultados foram positivos. As amostras da Associação do Funil, com 38,64% de resultados positivos, são oriundas de pequenas propriedades, produtoras de até 300 L de leite e que armazenam o produto em latões. É provável, portanto, que o baixo volume de leite, a acidificação, a presença de leite com mamite, e até com colostro, tenham contribuído para o aumento de resultados falso-positivos nessa associação. O programa nacional de prevenção à brucelose deve ser intensificado nas associações de pequenos produtores de leite e nas propriedades com resultado positivo com três cruzes, uma vez que o programa reduz com maior segurança a ocorrência de resultados falsos-positivos,no entanto, deve-se realizar o teste AAT como confirmatório.

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2018-05-22T16:51:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_josiane_feijo.pdf: 1901281 bytes, checksum: 4995490ffaaf74c8692c66cfb785d3df (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-22T16:58:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_josiane_feijo.pdf: 1901281 bytes, checksum: 4995490ffaaf74c8692c66cfb785d3df (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-22T16:58:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_josiane_feijo.pdf: 1901281 bytes, checksum: 4995490ffaaf74c8692c66cfb785d3df (MD5) Previous issue date: 2016-07-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O cálcio é um mineral essencial para uma variedade de processos fisiológicos do organismo da vaca leiteira, sua deficiência pode causar vários distúrbios metabólicos, que levam a redução do desempenho produtivo e reprodutivo, com consequentes perdas econômicas. Atualmente há no mercado veterinário algumas estratégias para a prevenção da hipocalcemia, como: dieta aniônica, dieta deficiente de cálcio, administração de vitamina D3 no pré-parto e tratamento com cálcio oral no pós-parto recente, mas todas essas requerem ajustes a serem melhorados. Com isso, o objetivo desta Tese, é desenvolver uma estratégia farmacêutica eficiente no pré-parto, para prevenir a hipocalcemia subclínica (HSC) no pós-parto, para tal foi realizado dois experimentos in vivo, aprovados pelo Comitê de Ética de Experimentação animal da Universidade Federal de Pelotas. O primeiro foi relacionar a queda do cálcio no periparto com a síntese de proteínas de fase aguda, observamos que vacas com concentrações de cálcio  8,5 mg/dL alteram a síntese de proteínas de fase aguda já no pré-parto, causando diminuição no escore de condição corporal, no peso e na produção de leite. O segundo experimento foi analisar o efeito da suplementação de diferentes dietas cátion-anionica no pré-parto e relacionar com a hemogasometria e concentrações de cálcio sanguíneo. Observamos que a suplementação com dieta aniônica, proporciona um aumento na concentração de cálcio ionizado disponível no plasma e redução nas globulinas, demonstrando que o pH levemente ácido provavelmente altera a síntese de glubulinas. / Calcium is an essential mineral for a variety of physiological processes in the body of the dairy cow, its deficiency can cause various metabolic disorders, leading to reduced production and reproductive performance, with consequent economic losses. There are currently in the veterinary market some strategies for the prevention of hypocalcemia, such as anionic diet, deficient in dietary calcium, vitamin D3 administration in pre-partum and treatment with oral calcium in the recent post-partum, but all of these require adjustments to be improved. Thus, the aim of this thesis is to develop an effective strategy in the pre-partum to prevent subclinical hypocalcemia (HSC) postpartum, for this was done two in vivo experiments, approved by the Animal Experimentation Ethics Committee of the University Federal of the Pelotas. The first was to correlate the drop of calcium in the peripartum with the synthesis of acute phase proteins, we observed that cows in concentrations of calcium  8.5 mg / dL alter the synthesis of acute phase proteins, causing decrease in body condition score, in weight and milk production. The second experiment was to evaluate the effect of supplementation of different cation-anion diets in prepartum and relate to the blood gas analysis and blood calcium levels. We observed that supplementation with dietary anion, provides an increase in concentration of available calcium in ionized plasma and reduction in globulins, demonstrating that pH may change glubulinas synthesis.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_augusto_schneider.pdf: 2025669 bytes, checksum: bde04bd1476df3f35564859c10477bca (MD5) Previous issue date: 2008-11-28 / In non-ovarian tissues GHR expression is regulated by insulin concentrations and is correlated to IGF-I expression. In the ovary IGF-I expression is also related to insulin levels, however no correlation with GHR was demonstrated until now. The aim of this study was to investigate the effect of fasting or insulin administration on blood concentrations of glucose, nonsterified fatty acids, insulin, insulin like growth factor I (IGF-I) and estradiol and on follicular expression of growth hormone receptor (GHR) and IGF-I mRNA in ewes. Fifteen ewes received an intravaginal progesterone releasing device that was removed 6 days later (Day 0). In Day -2 the ewes were divided in: control group, which received maintenance diet, insulin group, which received insulin injections every 12 hours from Day -2 to 2 and fasting group, which was submitted to fasting from Day -2 to 2. The results of the current study revealed that insulin administration or fasting during the development of a follicular wave did not affect (P=0.22) follicular diameter, although insulin injection increased (P=0.02) estradiol production. There was no difference among groups for GHR or IGF-I mRNA expression in granulosa (P=0.62, 0.43) or theca cells (P=0.92, 0.43). For fasting group there was a positive correlation between glucose and estradiol (r=0.97, P=0.006) and granulosa cell IGF mRNA (r=0.96, P=0.03). For insulin group estradiol was positive correlated to follicular diameter (r=0.93, P=0.02) and granulosa cell GHR (r=0.87, P=0.05) and IGF-I mRNA (r=0.79, P=0.10). In conclusion, exogenous insulin or fasting did not affect follicular diameter and expression of GHR and IGF-I mRNA in the pre-ovulatory follicle, although exogenous insulin increased estradiol production. / Em tecidos não ovarianos a expressão do receptor do hormônio do crescimento (GHR) é regulada pelas concentrações de insulina e está correlacionada a expressão de fator de crescimento semelhante a insulina tipo I (IGF-I). No ovário a expressão de IGF-I também está relacionada aos níveis de insulina, porém ainda não foi demonstrada sua correlação com a expressão de GHR. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito do jejum ou administração de insulina nos níveis de glucose, ácidos graxos não esterificados, uréia, IGF-I, insulina e estradiol e na expressão folicular de RNAm para GHR e IGF-I em ovelhas. Quinze ovelhas receberam um dispositivo intravaginal liberador de progesterona, que foi removido após seis dias (Dia 0). No Dia -2 as ovelhas foram dividas em: grupo controle, que recebeu uma dieta de manutenção; grupo insulina, que recebeu injeções de insulina a cada 12 horas do Dia -2 ao Dia 2 e grupo jejum, que foi submetido à dieta hídrica do Dia -2 ao Dia 2. Os resultados revelaram que a administração de insulina ou o jejum durante o desenvolvimento de uma onda folicular não influenciaram (P=0,22) o diâmetro folicular, no entanto a administração de insulina aumentou (P=0,02) a produção de estradiol. Não houve diferença entre os grupos para a expressão de RNAm para GHR e IGF-I nas células da granulosa(P=0,62; 0,43) ou teca (P=0,92; 0.43). Para o grupo jejum houve uma correlção positiva entre glucose e estradiol (r=0,97, P=0,006) e RNAm IGF-I nas células da granulosa (r=0,96, P=0,03). Para o grupo insulina o estradiol foi positivamente correlacionado ao diâmetro folicular (r=0,93, P=0,02) e expressão de RNAm para GHR (r=0,87, P=0,05) e IGF-I (r=0,79, P=0,10)nas células da granulosa. Em conclusão, a insulina exógena ou o jejum não afetaram o diâmetro folicular e a expressão de mRNA para GHR e IGF-I no folículo pré-ovulatório, apesar da insulina exógena ter aumentado a produção de estradiol.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcello de Aguiar Rodrigues Cembranelli.pdf: 194658 bytes, checksum: 96ad43f9ea940a3c13431279e5bdc24b (MD5) Previous issue date: 2005-08-02 / Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nïvel Superior / The synchronization of estrus in bovines through the administration of luteolytic agents as prostaglandin F2 (PGF2) or its analogues has been widely used in reproductive programs of embryos transfer (ET) The luteolytic agents cause lysis of the corpus luteum resulting in the manifestation of estrus It is a practical and less expensive method when compared to other synchronization techniques and exhibits fertility indexes which are similar to the natural ones since there is no interference of factors such as bodily condition and nutrition among others The purpose of this paper was to verify the efficiency of the intramuscular administration of different doses (normal and reduced) of a luteolytic agent in different phases of the estrous cycle (dioestrus) and the responsivity time (interval administration-estrus) The experiment was carried out in Água Limpa farm in the city of Fama State of Minas Gerais Brazil in the period between November 2004 and January 2005 Two-hundred and eighty-eight applications of sodic D-cloprostenol were made whit the aim of synchronizing the estrus in crossbred heifers used as receptors in an embryo-transfer program The animals were observed in the natural estrus classified and grouped in accordance with the day of the cycle Group A corresponded to the animals injected on the 6th-8th day of deoestrus day 0 being considered as estrus Group B on the 9th-11th day Group C on the 12th-14th day and Group D the heifers on the 15th-17th day of dioestrus All the groups were subdivided into two some animals received 75 g (1ML) of sodic d-cloprostenol by intramuscular injection others received 150 g (2ML) As for total efficiency the 2ML dose showed a better response (p<0,01) 77,15% than the 1ML dose 50,55% Groups A (6 to 8) and B (9 to 11) showed nearly equal values (p<0,05) for total efficiency 66,67% for 2ML and 36.36% for 1ML in Group A and 78.43% and 56.67% respectively for Group B Groups C (12 to 14) and D (15 to 17) showed no differences (p<0,05) in efficiency between groups or doses 73.58% (2ML) and 52.00% (1ML) for Group C and 73.58% and 52.00% respectively for Group D For interval application to the beginning of estrus the following results were found Group A presented an average interval of 58 hours significantly differing (p<0,05) from the other groups 73.43 hours for Group B 79.06 hours for Group C and 75.23 hours for Group D The present study demonstrated that the dose of 1ML of D-cloprostenol is similar to the dose of 2ML as of the 12th day of the cycle Therefore a subdose may be an alternative to reduce costs in an ET program since one knows the stage of the estral cycle of the females / A sincronização do estro em bovinos através da aplicação de agentes luteolíticos como prostaglandina F2 beta (PGF2 beta) ou seus análogos tem sido amplamente utilizadas em programas reprodutivos e de transferência de embriões (TE)Os agentes luteolíticos causam lise do corpo lúteo resultando na manifestação de estro Consiste de um método prático e de menor custo quando comparado a outros métodos de sincronização e apresenta índices de fertilidade comparados ao natural desde que não haja interferências de fatores como condição corporal nutrição entre outros O objetivo deste trabalho foi o de verificar a eficiência da aplicação de diferentes doses (normal e reduzida) de um agente luteolítico via intramuscular em diferentes fases do ciclo estral (diestro) bem como o tempo de responsividade (intervalo aplicação-estro) O experimento foi realizado na fazenda Água Limpa no município de Fama-MG no período de novembro de 2004 a janeiro de 2005 Foram realizadas 288 aplicações de D-Cloprostenol sódico visando à sincronização de estro em novilhas mestiças utilizadas como receptoras num programa de transferência de embriões Os animais foram observados em estro natural classificados e distribuídos para o experimento de acordo com o dia do ciclo O grupo A correspondeu aos animais que estavam no dia da aplicação do 6° ao 8° dia do diestro considerando dia 0 como o estro O grupo B do 9° ao 11° dia do diestro O grupo C do 12° ao 14° dia do diestro e o grupo D as novilhas do 15° ao 17° dia do diestroTodos os grupos foram subdivididos em dois onde alguns animais receberam 75 miligramas (1ML) de D-cloprostenol sódico via intramuscular e o restante recebeu 150 miligramas (2ML) de D-cloprostenol sódico também intramuscular Para eficiência total a dose de 2ML apresentou melhor resposta (p<0,01) de 77,15% contra 50,55% da dose de 1ML Os grupos A (6 a 8) e B (9 a 11) apresentaram resultados próximos (p<0,05) da eficiência total sendo de 66,67% para 2ML e 36,36% para 1ML no grupo A e 78,43% e 56,67% respectivamente para o grupo B Portanto com melhor eficiência para o grupo que recebeu 2ML Os grupos C (12 a 14) e D (15 a 17) não mostraram diferença (p<0,05) na eficiência entre os grupos ou entre as doses com os seguintes resultados 73,58% (2ML) e 52,00% (1ML) para o grupo C e 73,58% e 52,00% respectivamente para o grupo D Para intervalo aplicação ao início do estro encontraram-se os seguintes resultados o grupo A apresentou intervalo médio de 58 horas diferindo significativamente (p<0,05) dos demais grupos que resultaram em 73,43 horas para o grupo B 79,06 para o grupo C e 75,23 para o grupo D O presente estudo mostrou que a utilização da dose de 1ML de D-cloprostenol sódico é semelhante à dose de 2ML a partir do decimo segundo dia do ciclo Portanto a utilização da subdose pode ser mais uma alternativa para se reduzir custos em um programa de TE desde que se conheça o momento da fase do ciclo estral das receptoras envolvidas no programa

A coleta de sêmen da cauda do epidídimo é a última oportunidade de obter espermatozoides de garanhões valiosos, sendo que durante a criopreservação, a etapa de centrifugação é considerada um ponto crítico. A principal hipótese é que a centrifugação com coloides pode melhorar a qualidade dos espermatozoides coletados da cauda do epidídimo de garanhões. Para avaliação da hipótese foram realizados dois experimentos. O experimento um teve por objetivo avaliar o efeito da centrifugação com cushion e com coloide em camada única (SLC) na motilidade de sêmen do epidídimo de garanhões após a etapa de centrifugação. O experimento dois teve o objetivo de determinar o efeito da SLC prévio ao congelamento e após o descongelamento. Experimento 1) Oito garanhões foram submetidos à orquiectomia bilateral e o sêmen foi coletado da cauda dos epidídimos (n=16). Após a coleta, as amostras foram submetidas a três protocolos de centrifugação: Convencional (20 minutos a 600xg), cushioned (20 minutos a 900xg) e SLC (20 minutos a 300xg). Os pellets foram ressuspendidos e as amostras foram submetidas à avaliação laboratorial de motilidade e morfologia espermática. Experimento 2) Dez garanhões foram submetidos a orquiectomia bilateral e o sêmen foi coletado da cauda dos epidídimos (n=20). Para criopreservação, as amostras foram submetidas a: centrifugação convencional (20 minutos a 600xg), SLC prévio a criopreservação (SLC-Pre) (20 minutos a 300xg) e SLC após a criopreservação (SLC+) (20 minutos a 600xg seguidos de uma segunda centrifugação descrita após descongelamento). Os pellets foram ressuspendidos em diluente de congelamento, submetidos ao processo de congelamento em nitrogênio líquido e descongelamento. Os grupos de 6 centrifugação convencional e SLC-Pre foram avaliados imediatamente após descongelamento. O grupo SLC+ foi descongelado e submetido à SLC (20 minutos a 300xg) e ressupendido em diluente de congelamento (SLC+F) ou resfriamento (SLC+C). A motilidade total e a motilidade progressiva das amostras foram avaliadas com análise computadorizada do movimento espermático. A morfologia foi avaliada com auxílio de microscópio com contraste de fase. Funcionalidade de mitocôndria, integridade de membrana e DNA foram avaliados com auxílio de microscópio de fluorescência. Os dados foram analisados por estatística descritiva, simple one-way ANOVA e Teste de Tukey. Experimento 1) a motilidade de espermatozoide submetidos à SLC (p<0,05) e cushion (p>0,05) foi superior do que os submetidos a centrifugação convencional. Experimento 2) SLC-Pre e SLC+F apresentaram maior motilidade total, enquanto SLC+F apresentou maior motilidade progressiva. O percentual de espermatozoides com morfologia normal foi maior em SLC-Pre e SLC+F. A funcionalidade de mitocôndria foi maior em todos grupos com SLC, enquanto a integridade de membrana foi maior em SLC-Pre. A centrifugação com coloides melhorou a qualidade de espermatozoides coletados da cauda do epidídimo de garanhões, tanto no momento prévio ao congelamento como após o descongelamento. / Epididymis cauda sperm recovery and cryopreservation are last opportunity to obtain spermatozoa from a valuable animal, even though during cryopreservation centrifugation step is considered as a critical point. It is hypothesized that colloidal centrifugation could enhance epididymal stallion sperm parameters. To evaluate this hypothesis two experiments were performed. In experiment one, the objective was to evaluate the effect of cushioned and Single Layer Centrifugation (SLC) on epididymal stallion sperm motility postcentrifugation. In experiment two, the objective was to determine the effect of SLC on epididymal stallion sperm quality pre-freezing and post-thawing. Experiment 1) Eight stallions were submitted to bilateral orchiectomy and the resulting epididymal cauda (n = 16) were flushed with semen extender. After harvesting, samples were submitted to three centrifugation protocols: conventional (20 minutes at 600xg), cushioned (20 minutes at 900xg), and SLC (20 minutes at 300xg). Pellets were resuspended, motility and morphology were evaluated. Experiment 2) Ten stallions were submitted to bilateral orchiectomy and epididymal cauda (n=20) were harvested. For cryopreservation, epididymal sperm were submitted to: conventional centrifugation (20 minutes at 600xg), Single Layer Centrifugation prior cryopreservation (SLC-Pre) (20 minutes at 300xg) and Single Layer Centrifugation after cryopreservation (SLC+) (20 minutes at 600xg followed by a second centrifugation described after thawing). Pellets were resuspended in freezing extender, submitted to cryopreservation process in liquid nitrogen and thawed. Conventional and SLC-Pre were evaluated immediately after thawing. SLC+ samples were thawed, submitted to SLC (20 minutes at 300xg) and the pellets were resuspended with freezing (SLC+F) and cooling extender (SLC+C). Total motility (TM) and progressive 8 motility (PM) were evaluated with computer-assisted semen analyses. Sperm morphology was evaluated under a phase-contrast microscope. Mitochondrial functionality, membrane e DNA integrity were evaluated with an epifluorescence microscope. Data was evaluated by descriptive statistics, simple one-way ANOVA and comparison between means by Tukey test. Significance was assigned to all values p<0.05. Experiment 1) Motility of spermatozoa recovered by SLC (p<0.05) and cushioned centrifugation (p>0.05) were higher than those recovered by conventional centrifugation. Experiment 2) SLC-Pre and SLC+F yielded the highest TM, while SLC+F yielded the highest PM. Higher morphological normal sperm was observed in SLC-Pre and SLC+F. Mitochondrial functionality was significantly higher in all treatments with SLC, while membrane integrity was higher in SLC-Pre. Colloidal centrifugation improved epididymal sperm quality before freezing and after thawing.

A proposta do experimento baseia-se na análise uterina de éguas distribuídas em três graus de fibrose, conforme estabelecido em 1978 por Kenney (grupo I – endométrio saudável; grupo II, endométrio saudável ou com poucas alterações; grupo III – endométrio com alterações severas). Portanto, o estudo tem por objetivo determinar o perfil da expressão gênica de possíveis genes causadores da fibrose, conhecidos pelo o envolvimento em outros órgãos e espécies, no endométrio de éguas classificadas com diferentes graus de saúde uterina. Uma amostra de tecido endometrial foi colhida por meio de biopsia uterina e seccionada em dois fragmentos para posterior análise. Para os exames laboratoriais, a primeira amostra foi destinada à avaliação histopatológica e a segunda à validação de genes-alvo por reação polimerase em tempo real (qPCR). No exame histopatológico, o grau de fibrose e fase do ciclo estral foram estimados para distribuir as fêmeas nos grupos, além disso, o histórico reprodutivo foi analisado e a partir dos dados do exame histopatológico e histórico foram selecionadas 20 fêmeas para realização do qPCR (grupo I = 11; grupo II = 6; grupo III = 3). A segunda amostra de tecido foi armazenada em nitrogênio líquido imediatamente após a coleta, sendo posteriormente armazenada em freezer -80°C. Após o processamento das amostras, a quantificação relativa da abundância dos transcritos de Fator de Transformação do Crescimento-β1 (TGF-β1), Fator de Crescimento do Tecido Conjuntivo (CTGF), Colágeno tipo I (COL-I), α actina de músculo liso (αSMA), Molécula de Adesão Intercelular-1 (ICAM-1), e Cluster de Diferenciação 147 (CD147) foi comparada entre os grupos. A expressão de αSMA (P = 0,78), COL-I (P = 0,57) e ICAM-1 (P = 0,98) não resultou em diferença entre os grupos; e a de TGF-β1 e CTGF foi maior no grupo I (P = 0,04). Nos casos de fibrose severa, a transcrição de mRNA de CD147 foi maior em comparação com o grupo I (P = 0,04). Desta forma, acredita-se que a partir da avaliação de genes expressos do endométrio de éguas com diferentes graus de fibrose pode ser possível identificar genes marcadores que aumentam a precisão da classificação previamente proposta. / The purpose of the experiment was to analyze the uterus of mares distributed in three degrees of fibrosis, as established by Kenney in 1978 (group I - healthy endometrium; group II, healthy endometrium or with few alterations; group III - endometrium with severe changes). A sample of endometrial tissue was collected by biopsy which was sectioned into two fragments for further analysis. For the laboratory tests, the first sample was used for histopathological evaluation and the second for the validation of target genes by quantitative polymerase chain reaction (qPCR). In the histopathological examination, the degree of fibrosis and phase of the estrous cycle were estimated to distribute the females into groups; in addition, the reproductive history was analyzed and from the obtained data of histopathological evaluation and history 20 mares were selected for qPCR (group I = 11; Group II = 6, group III = 3). The second tissue sample was stored in liquid nitrogen immediately after collection and stored in a freezer at -80 ° C. After the samples were processed, the relative abundance quantification of Transforming Growth Factor-β1 (TGF-β1), Connective Growth Factor (CTGF), α Smooth Muscle Actin (αSMA), Intercellular Adhesion Molecule-1 (ICAM-1), Type I Collagen (COL-I), and Differentiation Cluster 147 (CD147) was carried out. The expression of αSMA (P = 0.78), COL-I (P = 0.57) and ICAM-1 (P = 0.98) did not resulted in difference between the groups; and TGF-β1 and CTGF were higher in group I (P = 0.04). In severe cases of fibrosis, CD147 mRNA transcription was higher in comparison to the group I (P = 0.04). Thus, it is believed that from the evaluation of expressed endometrial genes in the mare with different degrees of fibrosis it may be possible to identify marker genes that increase the accuracy of the previously proposed classification.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-01-27T17:29:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoDiferentesDiluentes.pdf: 451946 bytes, checksum: b6bb12018b8669ca3ca54a5f62e4c2cb (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-01-28T13:47:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoDiferentesDiluentes.pdf: 451946 bytes, checksum: b6bb12018b8669ca3ca54a5f62e4c2cb (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-28T13:47:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoDiferentesDiluentes.pdf: 451946 bytes, checksum: b6bb12018b8669ca3ca54a5f62e4c2cb (MD5) Previous issue date: 2010 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Durante a criopreservação são inúmeras as alterações sofridas pelas células espermáticas, o que conduz à queda na motilidade e perda da sua viabilidade pós-descongelação. Por este motivo, surge a necessidade de aperfeiçoar os processos de tecnologia do sêmen, principalmente quanto ao uso de diluentes. O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade de espermatozóides ovinos, submetidos ao processo de diluição e criopreservação, utilizando-se 3 diluentes (TES, TRIS e PBS) e 3 tempos de equilíbrio (4h, 8h e 12h), sendo o estudo dividido em 9 grupos: TES-4h, TES-8h, TES-12h, TRIS-4h, TRIS-8h, TRIS-12h, PBS-4h, PBS-8h e PBS-12h. Após a colheita, o sêmen foi avaliado macro e microscopicamente, e prédiluído nas soluções TES, TRIS e PBS, no entanto sem a adição dos crioprotetores (Solução A), onde permaneceram por 1h. Posteriormente, o sêmen foi diluído com as soluções TES, TRIS e PBS, já contendo os crioprotetores, novamente avaliado, para então ser envasado, sendo submetido aos diferentes tempos de equilíbrio, e em seguida, congelado. Após a descongelação, foi avaliado a motilidade e o vigor, e após o TTR, a motilidade, o vigor e o desprendimento do acrossoma. Na criopreservação com TRIS, a motilidade e o vigor foram estatisticamente similares (p>0,05) no sêmen congelado com equilíbrio de 4h (17,2% e 1,6), 8h (22,4% e 2,1) e 12h (14,8% e 1,6) (p>0,05). Após o TTR não foi observado diferença estatística (p>0,05) para a motilidade e o vigor em 4h (10,4% e 1,1) e em 12h (10,0% e 1,2) de equilíbrio, porém houve um aumento em 8h (15,6% e 1,6) (p<0,05). Não houve diferença estatística (p>0,05) no índice de desprendimento do acrossoma entre 4h (35,1) e 12h (37,6) de equilíbrio, havendo uma redução nestes índices em 8h (30,4) (p<0,05). Na criopreservação com TES, a motilidade do sêmen congelado com equilíbrio de 4h (24,8%) e 12h (27,6%) foram estatisticamente similares (p>0,05), sendo que o tempo de 8h (40,4%) diferiu estatisticamente dos demais. O vigor foi estatisticamente similar (p>0,05) para o sêmen descongelado com equilíbrio de 4h (2,0), 8h (2,6) e 12h (2,3), não diferindo estatisticamente (p>0,05). Após o TTR não foi observado diferença estatística (p>0,05) para a motilidade em 4h (18,8%) e em 12h (17,4%) de equilíbrio, porém houve um aumento em 8h (29,6%) (p<0,05). Em relação ao vigor e ao desprendimento do acrossoma não houve diferença estatística (p>0,05) em 4h (2,0 e 35,8), 8h (2,1 e 33,4) e 12h (1,8 e 42,2) de equilíbrio. Na criopreservação com o PBS, não foram observados motilidade e vigor após a descongelação. Esses resultados indicam que o diluente à base de TES e o tempo de equilíbrio de 8h mostraram-se mais adequados para a diluição e congelação de sêmen ovino. / During cryopreservation are numerous changes experienced by the sperm cells, which leads to the decrease in motility and loss of viability after thawing. For this reason, there arises the need to refine the process technology of semen, especially regarding the use of diluents. The aim of this study was to evaluate the viability of spermatozoa undergoing the process of cryopreservation and dilution, using three extenders (TES, TRIS and PBS) and three years of stability (4h, 8h and 12h), and the study was divided into nine groups: TES-4h-8h TES, TES- 12h, TRIS-4h-8h TRIS, TRIS-12h-4h PBS, PBS and PBS-8h-12h. After collection, semen was evaluated macro and microscopically, and pre-diluted solutions in TES, TRIS and PBS, but without the addition of cryoprotectants (Solution A), where they remained for 1 hour. Subsequently, semen was diluted with solutions TES, TRIS and PBS, already containing the cryoprotectants, again assessed to be so packed, and subjected to different periods of equilibrium, and then frozen. After thawing, motility was assessed and vigor, and after the TTR, motility, vigor and detachment of the acrosome. On cryopreservation with TRIS, motility and vigor were statistically similar (p> 0.05) in semen frozen with a balance of 4h (17.2% and 1.6), 8h (22.4% and 2.1) and 12h (14.8% and 1.6) (p> 0.05). After the TTR was not observed statistical difference (p> 0.05) in motility and vigor in 4h (10.4% and 1.1) and 12h (10.0% and 1.2) of balance, but there was an increase in 8h (15.6% and 1.6) (p <0.05). There was no statistical difference (p> 0.05) in the rate of detachment of the acrosome between 4h (35.1) and 12 (37.6) equilibrium, with a reduction in these indices at 8 am (30.4) (p <0 , 2005). On cryopreservation with ERT, the motility of frozen semen with a balance of 4h (24.8%) and 12h (27.6%) were statistically similar (p> 0.05), although the time of 8h (40.4% ) differed significantly from the others. The force was statistically similar (p> 0.05) for thawed-balanced 4h (2.0), 8h (2.6) and 12h (2.3), not statistically different (p> 0.05) . After the TTR was not observed statistical difference (p> 0.05) for sperm motility in 4h (18.8%) and 12h (17.4%) of balance, but there was an increase in 8h (29.6%) (p <0.05). In relation to the force and the detachment of the acrosome was no statistical difference (p> 0.05) 4h (2.0 and 35.8), 8h (2.1 and 33.4) and 12h (1.8 and 42 , 2) equilibrium. On cryopreservation with PBS, showed no motility and vigor after thawing. These results indicate that solvent-based TES and the equilibrium time of 8h were more suitable for dilution and freezing of ram semen.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-01-27T17:38:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_ExpressaoGenicaViabilidade.pdf: 1020011 bytes, checksum: 6d7d985ee1bbd74238e1030e0549c524 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-01-29T14:04:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_ExpressaoGenicaViabilidade.pdf: 1020011 bytes, checksum: 6d7d985ee1bbd74238e1030e0549c524 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-29T14:04:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_ExpressaoGenicaViabilidade.pdf: 1020011 bytes, checksum: 6d7d985ee1bbd74238e1030e0549c524 (MD5) Previous issue date: 2011 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo desse trabalho foi analisar a ativação e o crescimento de folículos préantrais de Sapajus apella, submetidos a um sistema de cultivo in vitro em curto-prazo. Nesse sentido, dois experimentos foram realizados neste trabalho. Experimento I: exposição à fresco e à crioprotetores de biopsias de fragmentos do córtex ovariano. Ambos os fragmentos ovarianos foram submetidos à extração total de RNA e síntese de cDNA. Após a amplificação do cDNA por PCR em tempo-real (RT-PCR), os software GeNorm, bestkeeper e Normfinder foram usados para avaliar a estabilidade dos genes GAPDH (glyceraldehyde-2-phosphate dehydrogenase), HPRT1 (hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1) e TBP (TATA-binding protein). Experimento II: o tecido do córtex ovariano de quatro fêmeas foi oletado e dividido em nove pedaços de 1 mm³. Um fragmento ovariano (grupo controle) foi imediatamente dividido em dois pedaços, os quais foram destinados para análise da viabilidade ou por RT-PCR. Os 8 fragmentos restantes foram individualmente cultivados in vitro em um meio constituído de TCM suplementado com 100 ng/mL EGF (T1), com adição de 10 μM de BME (T2), 100 ng/mL de BMP4 (T3), 25 IU de PMSG (T4), 10 μM de BME e 100 ng/mL de BMP4 (T5), 10 μM de BME, 25 IU de PMSG (T6), 100 ng/mL de BMP4, 25 IU de PMSG (T7) ou 10 μM de BME, 100 ng/mL de BMP4, 25 IU de PMSG (T8). Os resultados demonstraram que no tecido do córtex ovariano de S. apella, os genes HPRT1 e TBP foram os mais apropriados como genes de referência, podendo ser usados como parâmetro para normalizar dados em estudos futuros. Ao contrário, o GAPDH se apresentou como menos estável dos genes de referencia testados. Após o cultivo in vitro, todos os tratamentos alcançaram percentuais similares da viabilidade de folículos pré-antrais. O tecido ovariano cultivado na presença de GF+BME/BMP4/PMSG resultou no aumento da taxa de ativação e crescimento folicular, assim como no aumento da expressão de AMH, BMP15 e GDF9, genes conhecidos como indicadores específicos de desenvolvimento folicular. Dessa forma, o HPRT1 e TBP são os genes de referência mais estáveis, na exposição à crioprotetores, a fresco e no o cultivo de tecidos de córtex ovariano de S. apella. Os folículos pré-antrais são capazes de desenvolverem-se in vitro quando cultivados em meio suplementado com PMSG, BME e BMP4. A viabilidade folicular, entretanto, permaneceu independentemente do meio de cultivo in vitro e o uso de fatores de crescimento, como marcadores de desenvolvimento folicular, foi crucial para identificar o melhor meio de cultivo in vitro. / The aim of the present study was to investigate the stability of three reference genes in the ovarian tissue of capuchin monkeys (Sapajus apella) and to develop a short-term in vitro culture system for the activation and growth of preantral follicles from capuchin monkeys. To this end two experiment were conducted as follow. Experiment I: Fresh and cryoprotectant exposed ovarian biopsies were used. Both fresh and exposed ovarian tissues were subjected to total RNA extraction and synthesis of cDNA. After amplification of cDNA by real-time PCR, the GeNorm, Bestkeeper and Normfinder software were used to evaluate the stability of glyceraldehyde-2-phosphate dehydrogenase (GAPDH), hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1 (HPRT1) and TATA-binding protein (TBP). Experiment II: Ovarian tissue from four healthy mature females were collected and divided into nine ovarian cortical pieces of 1 mm³. One ovarian fragment (control) was immediately divided in two pieces, which were subjected to viability analysis or qRT-PCR. The remaining 8 fragments were individually cultured in vitro in a medium consisting of TCM supplemented with 100 ng/mL EGF (T1), either or not added with 10 μM BME (T2), 100 ng/mL BMP4 (T3), 25 IU PMSG (T4), 10 μM BME and 100 ng/mL BMP4 (T5), 10 μM BME, 25 IU PMSG (T6), 100 ng/mL BMP4, 25 IU PMSG (T7) or 10 μM BME, 100 ng/mL BMP4, 25 IU PMSG (T8). Results demonstrated that, in the ovarian tissue from capuchin monkeys, HPRT1 and TBP were the most suitable reference genes and thus could be used as parameters to normalize data in future studies. In contrast, GAPDH appeared as the least stable gene among the tested reference genes. After in vitro culture, all treatments resulted in similar percentages of viable preantral follicles. Ovarian tissue cultured in the presence of EGF + BME/BMP4/PMSG resulted in an increased rate of follicular activation and growth, as well as in the up regulation of AMH, BMP15 and GDF9, specific markers of follicular development. In conclusion, HPRT1 and TBP are the most stable reference genes in fresh and cryoprotectant exposed ovarian tissue from capuchin monkeys. Preantral follicles are able to develop in vitro when cultured in a medium supplemented with PMSG, BME and BMP4. Follicular viability, however, was maintained independently on the culture medium. The use of growth factors as markers of follicular development was crucial to identify the best culture medium.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-06-09T17:14:08Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_TransporteSimuladoOocitos.pdf: 194042 bytes, checksum: e90d60d2b3fb2015816cf5c7755de51a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-07-01T14:33:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_TransporteSimuladoOocitos.pdf: 194042 bytes, checksum: e90d60d2b3fb2015816cf5c7755de51a (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-01T14:33:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_TransporteSimuladoOocitos.pdf: 194042 bytes, checksum: e90d60d2b3fb2015816cf5c7755de51a (MD5) Previous issue date: 2009 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O transporte dos oócitos até ao laboratório é um fator determinante que tem limitado a difusão comercial da técnica de Produção in vitro de embriões (PIVE). Por este motivo, a utilização de um meio de transporte-maturação que forneça maior viabilidade aos oócitos durante o transporte é fundamental. O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade do transporte simulado de oócitos bovinos em meio quimicamente definido, por diferentes períodos de tempo sem o controle da atmosfera gasosa, e a necessidade da adição de hormônios neste meio. Oócitos bovinos imaturos (n=989) obtidos de ovários de vacas abatidas em frigorífico, foram selecionados e distribuídos aleatoriamente em 2 experimentos. No experimento I, 649 oócitos foram distribuídos em 5 grupos. No grupo controle (0h), os oócitos foram maturados por 24h em meio de maturação, em estufa de CO2 a 38,5°C. Os oócitos foram transportados em uma incubadora portátil sem controle da atmosfera gasosa a 38,5°C, por 3, 6, 9 e 12h. Os oócitos dos grupos experimentais completaram a maturação nas mesmas condições do grupo 0h. No experimento II, 340 oócitos foram distribuídos em 5 grupos. No grupo controle (0h), os oócitos foram maturados nas mesmas condições do grupo 0h do experimento I. Nos grupos experimentais, os oócitos foram transportados nas mesmas condições do experimento I, no entanto o meio de transporte-maturação foi suplementado ou não com hormônios, e o transporte ocorreu por 3h (com e sem hormônios) e 6h (com e sem hormônios). Os oócitos dos grupos experimentais completaram a maturação nas mesmas condições do grupo 0h. A fecundação foi efetuada em meio Talp-Stock por 18 a 22h e o cultivo por 7 dias em meio SOF. No experimento I, as taxas de clivagem foram estatisticamente similares (p>0,05) para os grupos 0h (64,9%) e 3h (56,2%), porém houve uma redução destas taxas nos grupos 6h (45,8%), 9h (47,1%) e 12h (44,0%), que foram semelhantes entre si. A produção de blastocistos no experimento I, não foi estatisticamente diferente (p>0,05) para os grupos 0h (38,0%) e 3h (32,3%), porém houve uma redução nestas taxas nos grupos 6h (27,3%), 9h (24,8%) e 12h (18,9%), no entanto, as taxas de blastocistos assemelham-se entre os grupos 3, 6 e 9h. No experimento II, as taxas de clivagem foram estatisticamente similares (p>0,05) para os grupos 0h (71,4%) e 3h com hormônios (70,3%), porém houve uma redução destas taxas nos grupos 3h sem hormônios (64,8%), 6h com (56,0%) e sem (54,1%) hormônios, que foram diferentes entre si. A produção de blastocistos no experimento II, foi estatisticamente similar (p>0,05) para os grupos 0h (46,1%) e 3h com hormônios (45,8%), porém houve uma redução destas taxas nos grupos 3h sem hormônios (41,1%), 6h com (35,5%) e sem (33,5%) hormônios, que foram diferentes entre si. Esses resultados indicam a possibilidade do transporte de oócitos bovinos, em meio quimicamente definido, utilizando incubadora portátil, sem controle da atmosfera gasosa, a 38,5ºC, pelo período de até 9h, e que a adição de hormônios neste meio pode aumentar os índices de blastocistos. / The transport of the oocytes until the laboratory is a determining factor that has limited the commercial diffusion of the Production in vitro embryo technique (PIVE). For this reason, the use of a means of transport-maturation to provide greater viability to the oocytes during the transport is fundamental. The objective of this study was to evaluate the viability of the simulated transport of the bovine oocytes in chemically defined medium, by different periods of time without the gaseous atmosphere control, and the need for the addition of hormones in this medium. Immature bovine oocytes (n=989) obtained from bovine ovaries of cows slaughtered in a refrigerator, were selected and randomly distributed in 2 experiments. In experiment I, 649 oocytes were distributed into 5 groups. In the control group (0h), the oocytes were borne during 24h by means of maturation, in a CO2 incubator at 38,5ºC. The oocytes were transported in an incubator portable without gaseous atmosphere control at 38,5°C for 3, 6, 9 and 12h. The oocytes of experimental groups completed the maturation under the same conditions of the group 0h. In experiment II, 340 oocytes were distributed into 5 groups. In the control group (0h), the oocytes were matured during the same conditions of the group 0h of the experiment I. The experimental groups, the oocytes were transported under the same conditions of the experiment I, however the means of transport-maturation was supplemented or not with hormones, and the transport occurred in 3h (with and without hormones) and 6h (with and without hormones). The oocytes of experimental groups completed the maturation under the same conditions of the of the group 0h. The fertilization was performed in Talp-Stock by 18 to 22h and growing by 7 days in SOF medium. In experiment I, the rates of cleavage were statistically similar (p>0,05) to the groups 0h (64,9%) and 3h (56,2%), although there was a reduction in these rates in the groups 6h (45,8%), 9h (47,1%) and 12h (44,0%), which were similar among themselves. The production of blastocysts in experiment I, was not statistically different (p>0,05) for the groups 0h (38,0%) and 3h (32,3%), but there was a reduction in these rates in groups 6h (27,3%), 9h (24,8%) and 12h (18,9%), however, the rates of blastocysts are similar among the groups 3h, 6h and 9h. In experiment II, the rates of cleavage were statistically similar (p>0,05) to the groups 0h (71,4%) and 3h with hormones (70,3%), but there was a reduction in these rates in groups 3h without hormones (64,8%), 6h with (56,0%) and without (54,1%) hormones, which were different among themselves. The production of blastocysts in experiment II, was statistically similar (p>0.05) for the groups 0h (46,1%) and 3h with hormones (45,8%), but there was a reduction in these rates in groups 3h without hormones (41,1%), 6h with (35,5%) and without (33,5%) hormones, which were different among themselves. These results indicate the possibility of the transport of bovine oocytes, in chemically defined medium, using incubator portable, without gaseous atmosphere control, at 38,5ºC, for the period of up to 9h, and that the addition of hormones in this medium may increase the rates of blastocysts.