Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T22:29:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_FabioHenriqueda_M.pdf: 928654 bytes, checksum: 7b8e558bfec3bcbb3386e2a22c892123 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A prevalência de obesidade vem aumentando a cada ano, sendo um dos principais problemas de saúde pública. A obesidade é considerada importante fator de risco para o surgimento de resistência à insulina, dislipidemia, diabetes tipo 2 e hipertensão arterial. Estes fatores podem atuar de maneira sinérgica no desenvolvimento da disfunção erétil. Entretanto, até o momento, poucos estudos procuraram avaliar os mecanismos envolvidos na disfunção erétil causada pela obesidade. Por isso, utilizando o modelo de obesidade induzida por dieta hiperlipídica em camundongos, o presente trabalho procurou caracterizar a disfunção erétil nestes animais. Para tanto, utilizamos experimentos funcionais in vivo e in vitro, assim como ensaios bioquímicos e morfológicos. Especificamente, realizamos os seguintes experimentos nos corpos cavernosos dos camundongos controles e tratados com dieta hiperlipídica por 10 semanas: 1) curvas concentração-efeito in vitro a agentes relaxantes dependente (acetilcolina) e doador de óxido nítrico (nitroprussiato de sódio), assim como à estimulação elétrica (relaxamento nitrérgico); 2) curvas concentração-efeito in vitro a agentes contráteis como fenilefrina (agonista 'alfa' 1-adrenérgico) e endotelina-1, assim como a estimulação elétrica (contração neurogênica); 3) medida da pressão intracavernosa in vivo; 4) determinação dos níveis de GMPc; e 5) análise histomorfométrica. Os animais tratados com dieta hiperlipídica apresentaram aumento do peso corporal, da gordura epididimal, dos níveis séricos de colesterol total e LDL, e resistência à insulina. Os animais tratados com dieta hiperlipídica apresentaram redução da pressão intracavernosa (in vivo). Os relaxamentos nitrérgico e dependente de endotélio foram menores nos corpos cavernosos dos camundongos obesos. Por outro lado, as respostas contrateis induzidas pela fenilefrina, endotelina-1 e estimulação elétrica foram maiores nestes animais. Os níveis de GMPc nos corpos cavernosos dos animais tratados com dieta hiperlipídica foram significantemente menores do que nos tecidos de animais controles. Os corpos cavernosos dos animais tratados com dieta hiperlipídica não sofreram alterações histomorfométricas. Para investigar o efeito da resistência à insulina na função erétil, tratamos os animais com o sensibilizador de insulina, metformina, por 14 dias (300 mg/Kg/dia). O tratamento com metformina restaurou o relaxamento nitrérgico, o relaxa- mento dependente de endotélio, e o aumento da resposta contrátil à fenilefrina dos corpos cavernosos dos animais tratados com dieta hiperlipídica, sem alterar o peso corporal e a gordura epididimal. Em suma, nossos resultados mostram que o tratamento com dieta hiperlipídica por 10 semanas causa redução da pressão intracavernosa, assim como do relaxamento nitrérgico e dependente de endotélio e, concomitantemente, aumento da resposta contrátil in vitro. O tratamento com metformina reverteu a sensibilidade à insulina e o quadro de disfunção erétil, sugerindo que a disfunção erétil nos camundongos tratados com dieta hiperlipídica é resultante da resistência à insulina associada à obesidade / Abstract: The prevalence of obesity is increasing every year, and a becoming a major public health problem. Obesity is considered an important risk factor for development of insulin resistance, dyslipidemia, diabetes mellitus type 2 and arterial hypertension. These are risk factors that act synergistically in the development of erectile dysfunction. However, so far few studies have investigated the mechanisms involved in erectile dysfunction caused by obesity. Therefore, using a model of obesity induced high-fat diet in mice, the present study searched to characterize erectile dysfunction in these animals. Thus, we used functional experiments in vivo and in vitro, biochemical and morphological test. Specifically, the following experiments were performed in corpus cavernosum of control and high-fat fed mice. 1) concentration response curves in vitro to relaxing agents endothelium-dependent (acetylcholine) and NO donor (sodium nitroprusside), as well as to electrical-field stimulation (EFS) (nitrergic relaxations); 2) Concentration-response curves in vitro to the contractile agents phenylephrine ('alfa'-1 adrenergic receptor agonist) and endothelin-1, as well as to EFS (neurogenic contraction; 3) measurement of intracavernous pressure in vivo; 4) determination of cGMP levels; 5) hystomorfometric measurement. Mice treated with high-fat diet showed increased body weight, epididimal fat, total choles-terol and LDL, and insulin resistance. The corpus cavernosum of high-fat fed mice showed impaired intracavernous pressure. The endothelial and nitrergic relaxations were lower in corpus cavernosum of high-fat fed mice. Moreover, the contractile responses induced by phenylephrine, endothelin-1 and electrical stimulation were increase in this animals. The cGMP levels were lower in corpus cavernosum of high-fat fed mice in comparison with control mice. There were no morphological alterations in erectile tissue of mice treated with high-fat diet. To investigate the effect of insulin resistance in erectile function, we treated the animals with insulin sensitizer, metformin, for 14 days (300 mg /kg/day). Metformin treatment restored the impaired endothelium-dependent and nitrergic relaxations, and the enhanced contractile response to phenylephrine in the corpus cavernosum of high-fat fed mice, without affecting the body weight and epididymal fat. In conclusion, our data shows that treatment with high-fat diet for 10 weeks reduces the intracavernous pressure, as well as the endothelial and nitrergic cavernosal relaxations. Concomitantly, this treatment increases the contractile responses, in vitro. Metformin treatment restored the insulin sensitivity and the erectile dysfunction, suggesting that erectile dysfunction in high-fat fed mice is the result of insulin resistance associated with obesity. / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Orientador: Mario José Abdalla Saad / Tese (Doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T23:38:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caricilli_AndreaMoro_D.pdf: 5503303 bytes, checksum: dd944e8e65716f9ac4355ff0fbc95248 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Fatores ambientais e genéticos do hospedeiro interagem para controlar a microbiota intestinal, que pode ter um papel no desenvolvimento da obesidade e da resistência à insulina. Camundongos deficientes em TLR2, sob condições livres de microorganismos, estão protegidos da resistência à insulina induzida por dieta. Inibição aguda do TLR2 (4 dias de tratamento) com oligonucleotídeo antisense em camundongos alimentados com dieta hiperlipídica leva a um aumento da sensibilidade e da sinalização da insulina em tecido adiposo e muscular. É possível que a presença da microbiota intestinal possa reverter o fenótipo de um animal, induzindo resistência à insulina em um animal geneticamente determinado a ter aumento da sensibilidade à insulina, tal como o camundongo deficiente para TLR2. No presente estudo, nós investigamos a influência da microbiota intestinal nos parâmetros metabólicos, tolerância à glicose, sensibilidade e sinalização da insulina em camundongos deficientes para TLR2. A microbiota intestinal foi investigada (por metagenômica), as características metabólicas e a sinalização da insulina em camundongos deficientes para TLR2 em um biotério convencional. Os resultados mostraram que a perda do TLR2 em camundongos de biotério convencional resulta em fenótipo semelhante ao da síndrome metabólica, caracterizado por diferenças na microbiota intestinal, com um aumento de três vezes na proporção de Firmicutes e um pequeno aumento na de Bacteroidetes, em comparação com os controles. Essas alterações na microbiota foram acompanhadas por um aumento na absorção de LPS, inflamação subclínica, resistência à insulina, intolerância à glicose e posterior obesidade. Essa seqüência de eventos foi reproduzida em camundongos do tipo selvagem por transplante de microbiota intestinal e revertida pelo tratamento com antibióticos. Em nível molecular, o mecanismo demonstrou-se único, com ativação do TLR4, associado com estresse de retículo endoplasmático e ativação da JNK, sem, porém, ativação da via IKK?-I?B-NF?B. Nossos resultados também mostraram que, em camundongos deficientes para TLR2, houve redução de células T regulatórias em tecido adiposo visceral, sugerindo que essa regulação pode contribuir para a resistência à insulina nesses animais. Nesse sentido, nossos resultados enfatizam o papel da microbiota na complexa rede de interações moleculares e celulares que ligam genótipo e fenótipo, e suas potenciais implicações em alterações humanas envolvendo obesidade, diabetes e outras doenças imunológicas / Abstract: Environmental factors and host genetics interact to control the gut microbiota, which may have a role in the development of obesity and insulin resistance. TLR2 deficient mice, under germ-free conditions are protected from diet-induced insulin resistance. Diet-induced obese mice, acutely treated with TLR2 oligonucleotide antisense during 4 days showed increased insulin sensitivity and signaling in muscle and white adipose tissue. It is possible that the presence of gut microbiota could reverse the phenotype of an animal, inducing insulin resistance in an animal genetically determined to have increased insulin sensitivity, such as the TLR2 KO mice. In the present study, we investigated the influence of gut microbiota on metabolic parameters, glucose tolerance, insulin sensitivity and signaling of TLR2-deficient mice. We investigated the gut microbiota (by metagenomics), the metabolic characteristics and insulin signaling in TLR2 knockout (KO) mice in a non-germ free-facility. Results showed that the loss of TLR2 in conventionalized mice results in a phenotype reminiscent of metabolic syndrome, characterized by differences in the gut microbiota, with a 3-fold increase in Firmicutes and a slight increase in Bacteroidetes compared with controls. These changes in gut microbiota were accompanied by an increase in LPS absorption, subclinical inflammation, insulin resistance, glucose intolerance and, later, obesity. In addition, this sequence of events was reproduced in WT mice by microbiota transplantation and was also reversed by antibiotics. At molecular level the mechanism was unique with activation of TLR4, associated with ER stress and JNK activation, but no activation of the IKK?-I?B-NF?B pathway. Our data also showed that in TLR2 KO mice there was a reduction in regulatory T cell in visceral fat suggesting that this modulation may also contribute to the insulin resistance of these animals. Our results emphasize the role of microbiota in the complex network of molecular and cellular interactions that link genotype to phenotype and have potential implications for common human disorders involving obesity, diabetes and even other immunological disorders / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Ciências

Orientador: Mário José Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campionas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-20T00:12:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_BrunodeMelo_D.pdf: 4847412 bytes, checksum: e05413650182e8b4049ebd41d6f06e7b (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A ingestão de alimentos ricos em gordura leva à obesidade e inflamação crônica sub-clínica, a qual desenvolve papel importante na resistência à insulina. Aumentados níveis circulantes de citocinas pró-inflamatórias, ácidos graxos livres e lipopolissacarídeos ativam o sistema imune inato, que desencadeia inflamação e aumento na expressão de citocinas, levando à resistência à insulina. Dessa forma, nós investigamos o efeito da modulação da flora intestinal, na resistência à insulina e avaliamos o baço como uma nova fonte de inflamação e células do sistema imune, responsáveis pela resistência à insulina induzida por obesidade, cujas funções ainda não estão completamente determinadas. Para investigar os efeitos da modulação da flora intestinal, nós submetemos camundongos a dieta hiperlipídica com antibióticos ou em regime de pair-feeding por oito semanas e realizamos análises metagenômicas de amostras de DNA provenientes das fezes dos camundongos. A fim de avaliar a influência do baço no metabolismo, nós realizamos esplenectomia em camundongos e induzimos obesidade com a utilização de dieta rica em gordura, além de fazer abordagens proteômicas para determinar novas moléculas que poderiam estar envolvidas na inflamação e migração de células. Em ambos os experimentos, glicose, insulina e citocinas circulantes foram avaliadas, assim como as vias de sinalização da insulina e inflamatória em fígado, músculo e tecido adiposo, como também avaliamos a infiltração de macrófagos no fígado e no tecido adiposo. A flora intestinal estava extremamente modificada pelo tratamento com antibióticos, reduzindo a prevalência de Bacteroidetes e Firmicutes, a quantidade de bactérias no intestino e LPS circulante, bem como glicemia, insulinemia e citocinas. Este quadro também apresentou regulação negativa do TLR4 e redução na inflamação, a qual induziu aumento na sensibilidade à insulina, além da notável redução de macrófagos infiltrados nos tecidos dos camundongos tratados com antibióticos. Em camundongos obesos esplenectomizados, houve grande aumento na sensibilidade à insulina, refletida por redução na glicemia, insulinemia e TNF-'alfa' circulante quando comparado com camundongos obesos. A inflamação estava reduzida no fígado, músculo e tecido adiposo dos camundongos obesos esplenectomizados, e como consequência, a via de sinalização de insulina estava mais ativa em comparação aos camundongos obesos que tiveram os baços mantidos. Também houve uma imensa redução na infiltração de macrófagos, no fígado e no tecido adiposo dos camundongos esplenectomizados após a indução de obesidade, quadro semelhante ao encontrado na indução da infiltração de macrófagos pela lipólise. A análise proteômica do baço indicou que GMF-'gama' está mais expresso nos camundongos obesos em relação aos magros, dado confirmado por immunoblot. Concluindo, a modulação da flora intestinal por uma terapia com antibióticos reduziu os níveis circulantes de LPS, inflamação e infiltração de macrófagos, aumentando a sensibilidade à insulina em camundongos alimentados com dieta hiperlipídica. Além disso, a esplenectomia também reduziu a inflamação e promoveu melhora na sensibilidade à insulina, bem como inibiu a infiltração de macrófagos induzida pela obesidade, fenômeno que pode ser coordenado pelo baço e quimiocinas, e possivelmente pelo GMF-'gama', uma nova proteína, que estariam envolvidas na regulação da migração celular e estabelecimento de resistência à insulina / Abstract: A high-fat diet intake induces obesity and chronic subclinical inflammation, which play important roles in insulin resistance. Increased circulating levels of proinflammatory cytokines, free fatty acids and lipopolysaccharides activate innate immune system, which triggers inflammation and cytokine expression, leading to insulin resistance. Thus, we investigated the effect of gut microbiota modulation, on insulin resistance and evaluated the spleen as a novel source of inflammation and immune cells, responsible for the obesity-induced insulin resistance, which roles are not yet fully understood. To investigate microbiota modulation effects, we submitted Swiss mice to a high-fat diet with antibiotics or pair-feeding for eight weeks and performed metagenomic analyses from mice fecal DNA samples. In order to evaluate the spleen influence over the metabolism, we performed splenectomy in Swiss mice and induced obesity with a high-fat diet and performed proteomic approaches to determine novel molecules that could promote inflammation and immune cell migration. In both experiments, blood glucose, serum insulin and cytokines were evaluated, as well as liver, muscle and adipose tissue insulin and inflammatory signaling pathway, and liver and adipose tissue macrophage infiltration. Gut microbiota was greatly modified by the antibiotic treatment, reducing Bacteroidetes and Firmicutes prevalence, overall bacterial count and circulating LPS, as well as fasting blood glucose and serum insulin and cytokines. It also promoted TLR4 downregulation and reduction in inflammation, which promoted improvement in insulin sensitivity, besides a striking reduction in macrophage infiltration in antibiotic-treated mice. In splenectomized obese mice, a great improvement in insulin sensitivity was seen, reflected by blood glucose, serum insulin and TNF-'alpha' levels reduction. Inflammation was reduced in the liver, muscle and adipose tissue of obese splenectomized mice, in consequence, insulin signaling was improved when compared to obese mice that maintained the spleen. There was an immense reduction in liver and adipose tissue macrophage infiltration in splenectomized mice after obesity induction, which was repeated when we observed lipolysis-induced adipose tissue macrophage infiltration. Spleen proteomic studies indicated that GMF-'gamma' is overexpressed in obese mice compared to lean ones. In conclusion, gut microbiota modulation by antibiotic therapy reduced circulating LPS levels, inflammation and macrophage infiltration, improving insulin sensitivity in mice fed a high-fat diet. In addition, splenectomy also reduced inflammation and promoted insulin sensitization, as well as inhibited obesity-induced macrophage infiltration, which can be ruled by the spleen and chemokines, and possibly by GMF-'gamma', a novel protein, that could be involved in the regulation of cell migration and insulin resistance settlement / Doutorado / Fisiopatologia Médica / Doutor em Ciências

Orientador: Mário José Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-20T04:12:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_KellyLimaCalistoda_D.pdf: 12319373 bytes, checksum: 35117c7c04d7b9af2c03f2af293482d1 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Na sepse o sistema imune torna-se hiperativo, levando a excessiva produção de mediadores pró-inflamatórios. Tanto componentes bacterianos, como o LPS, quanto citocinas pro-inflamatórias resultantes da resposta imune, podem ativar mecanismos intracelulares associados à resistência à insulina, como a via IKK'beta'/NF'capa'B e a via da JNK. Hiperglicemia e resistência à insulina ocorrem durante a sepse, como consequência dos efeitos metabólicos da excessiva produção de mediadores pró-inflamatórios. Sabe-se que a resistência à insulina pode agravar ainda mais o quadro da sepse, todavia a manutenção da normoglicemia com a insulinoterapia reduz os índices de morbidade e mortalidade. Por esta razão, o objetivo do presente estudo foi investigar o efeito de fármacos (atorvastatina e diacereína) sobre a sobrevivência, sinalização inflamatória e, paralelamente, a sua ação sobre a via de sinalização da insulina em ratos com sepse induzida por peritonite. Nossos dados demonstram que os tratamentos com atorvastatina e diacereína aumentam a sobrevida, com um efeito benéfico sobre a sensibilidade à insulina, melhorando a sinalização da insulina dos animais sépticos. Ademais, os tratamentos reduziram a ativação de JNK e IKK e consequente expressão de citocinas pró-inflamatórias, e em paralelo reduziram estresse do retículo endoplasmático induzido pela sepse. Com isso, podemos sugerir que a restauração da sinalização da insulina demonstrada pela reativação da via PI3K/Akt induzida pelos tratamentos, desempenhou um papel fundamental no aumento da sobrevida na sepse. Neste contexto, acreditamos que a melhora na via de sinalização da insulina, induzida pelos tratamentos com atorvastatina e diacereína, em paralelo com uma atenuação da inflamação nos tecidos, pode ajudar a predizer a eficácia destes tratamentos na sepse / Abstract: During the onset of sepsis, the inflammatory system becomes hyperactive, and the persistent activating stimuli induce cells to produce excessive amounts of cytokines and mediators that lead to tissue damage. Both bacterial components and proinflammatory cytokines can directly activate pro-inflammatory pathways as IKK'beta'/NF'kappa'B and JNK that seem to be associated to disruption on insulin signaling. Hyperglycemia and insulin resistance occur during sepsis, as a consequence of the metabolic effects of stress hormone and cytokine production. Studies indicate that insulin resistance may aggravate sepsis. Furthermore, it was demonstrated that the maintenance of normoglycemia with insulin therapy reduces morbidity and mortality rates in sepsis. The aim of the present study was to investigate the effect of drugs (atorvastatin and diacerhein) on survival, inflammatory signaling and insulin signaling pathway in rat model of CLP-induced sepsis. Our data demonstrate that atorvastatin and diacerhein treatment improves survival in septic rats and this improvement is accompanied by a marked improvement in insulin sensitivity. Sepsis induced an increase in JNK and IKK/NF-'kappa'B activation, and blunted insulin-induced insulin signaling in liver, muscle and adipose tissue; atorvastatin and diacerhein reversed all these alterations in parallel with a decrease sepsis-induced endoplasmic stress reticulum and circulating levels proinflammatory cytokines. The improvement insulin signaling pathway through PI3K/Akt induced by treatments with atorvastatin and diacerhein, in parallel with a decrease in tissue inflammation, may play a central role in regulation of insulin signaling and survival in sepsis insult / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Bruno Geloneze Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T14:11:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Calixto_AntonioRamos_M.pdf: 1368625 bytes, checksum: 6dca3f38a1874198b0d47f5c57f139da (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Objetivo: O principal objetivo deste estudo foi avaliar as relações das concentrações enzimáticas da DPP-4 com adiposidade e o grau de tolerância à glicose. Métodos: Foram avaliados 227 indivíduos (Mulheres: 64,8% Homens: 35,2%) de ambos os sexos, 73 indivíduos com DM2, com idade entre 18-80 anos e com IMC entre 18,5 a 47 kg/m². Os indivíduos foram divididos em 4 grupos: Não Obesos Normoglicêmicos (nOb-NG), Não Obesos Hiperglicêmico (nOb-HG), Obesos Normoglicêmicos (Ob-NG) e Obesos Hiperglicêmicos ( Ob-HG). Foram considerados obesos indivíduos com IMC>30 e hiperglicêmicos HbA1c >6,0. Resultados: Observamos um aumento na concentração da DPP-4 no grupo de Ob-HG (p>0,05), comparado à outros três grupos (nOb-NG, nOb-HG e Ob-NG); houve correlação positiva entre a concentração da DPP-4 e HbA1c (p>0,05), nos grupos separados em: Não Obesos, Obesos, Normoglicêmicos e hiperglicêmicos; entre as mulheres, a concentração de DPP-4 teve correlação negativa (p<0,05) com a circunferência do quadril e a circunferência da coxa em mulheres; correlação positiva (p<0,05) com as razões pescoço/coxa e cintura/coxa; entre os homens a concentração da DPP-4 teve correlação negativa com a massa magra. Conclusões: Pacientes obesos e com hiperglicemia apresentam a concentração da DPP-4 elevada, quando comparados com indivíduos normoglicêmicos magros ou obesos. Existe uma associação entre a distribuição centrípeta do tecido adiposo e o aumento da concentração da DPP-4, cuja causalidade não está caracterizada até o presente momento. Nosso trabalho fornece bases fisiopatológicas para o tratamento do DM2 baseado na inibição da DPP-4 corroborando com os achados clínicos em ensaios randomizados e na prática clínica. De fato, as terapias baseadas em incretinas, em destaque para a inibição da DPP-4, tem se mostrado efetivas no tratamento do DM2 / Abstract: Objective: the aim of this study was to evaluate the relationship between enzymatic concentrations of DPP-4 and the level of adiposity and glucose tolerance. Methods: we assessed 227 participants (women: 64,8% male: 35,2%) of both sexes, 73 subjects with T2DM, aged between 18 and 80 years, with BMI between 18,5 and 47 kg / m². The subjects were divided into 4 groups: normoglycemic nonobese (NG-NOB), hyperglycemic nonobese (HG-NOB), normoglycemic obese (Ob-NG) and hyperglycemic obese (Ob-HG). Were considered obese subjects with BMI> 30 and hyperglycemic A1c> 6,0. Results: We reported an increased enzymatic concentration of DPP-4 in Ob-HG group (p> 0.05) compared to the other three groups (NG-NOB, NOB and Ob-HG-NG); a positive correlation was found between concentration of DPP -4 and HbA1c (p> 0.05) in groups: not obese, obese, normoglycemic and hyperglycemic; among women, the concentration of DPP-4 had a negative correlation (p <0.05) and hip and thigh circumferences; positive correlation (p <0.05) with neck-to-thigh and waist-to-thigh ratio; among men, the concentration of DPP-4 had a negative correlation with lean mass. Conclusions: obese patients with hyperglycemia have higher concentrations of DPP-4 compared with normoglycemic lean or obese individuals. There is an association between the centripetal distribution of body fat and increasing concentrations of DPP-4, whose mechanisms remain unclear. Our work provides pathophysiological bases for treatment of T2DM based on inhibition of DPP-4 confirming findings of randomized clinical trials and clinical practice. In fact, incretin-based therapies, in particular the inhibition of DPP-4, has proven effective in the treatment of T2DM / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Mario José Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T17:03:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Araujo_TiagoGomes_D.pdf: 9136785 bytes, checksum: 25c68d3dd56714d164986b415f98070d (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A resistência à insulina está presente na obesidade e na diabetes tipo 2, e está associada à hiperplasia das ilhotas pancreáticas e hiperinsulinemia como resposta compensatória, entretanto, as forças motrizes por trás desse mecanismo compensatório não são totalmente compreendidos. Dados anteriores sugeriram o envolvimento de um fator circulante desconhecido que na resistência à insulina atua como um fator de crescimento das células ?. Neste contexto, procurando por candidatos a serem este fator circulante, percebemos que o fator de crescimento de hepatócitos (HGF) é um forte candidato a ser este elo entre a resistência à insulina e o aumento da massa de ilhotas / hiperinsulinemia. Nossa abordagem teve como objetivo mostrar uma possível relação de causa-efeito entre o aumento dos níveis circulantes de HGF e a hiperplasia da ilhota / hiperinsulinemia compensatória, assim mostrando a força da associação. Ainda, se esta associação, apresenta ou não uma resposta dose-dependente, temporalidade, consistência, plausibilidade e reversibilidade. Nesse sentido, os nossos dados mostraram: a) uma correlação forte e consistente entre o HGF e o mecanismo de compensação em três modelos animais de resistência à insulina; b) o HGF aumenta a massa de célula ? de uma forma dose-dependente; c) o bloqueio do HGF interrompe os mecanismos de compensação; d) o aumento nos níveis de HGF precede a resposta compensatória associada com a resistência à insulina, indicando que estes eventos ocorrem em um modo sequencial. Além disso, o bloqueio do receptor de HGF (Met) piorou a já prejudicada sinalização da insulina no fígado de ratos obesos induzidos por dieta. Em geral, os nossos dados indicam que o HGF é um fator de crescimento que desempenha um papel fundamental no aumento da massa de ilhotas e hiperinsulinemia em ratos obesos induzidos por dieta, e sugerem um efeito protetor da interação HGF-Met na sinalização de insulina no fígado / Abstract: Insulin resistance is present in obesity and in type 2 diabetes, and is associated with islet cell hyperplasia and hyperinsulinemia but the driving forces behind this compensatory mechanism are incompletely understood. Previous data have suggested the involvement of an unknown circulating insulin resistance-related ?-cell growth-factor. In this context, looking for candidates to be a circulating factor, we realized that hepatocyte growth factor (HGF) is a strong candidate as a link between insulin resistance and increased mass of islets/hyperinsulinemia. Our approach aimed to show a possible cause-effect relationship between increase in circulating HGF levels and compensatory islet hyperplasia/hyperinsulinemia by showing the strength of the association, whether or not is a dose-dependent response, the temporality, consistency, plausibility and reversibility of the association. In this regard, our data showed: a) a strong and consistent correlation between HGF and the compensatory mechanism in three animal models of insulin resistance; b) HGF increases ?-cell mass in a dose-dependent manner; c) blocking HGF shuts down the compensatory mechanisms; d) an increase in HGF levels seems to precede the compensatory response associated with insulin resistance, indicating that these events occur in a sequential mode. Additionally, blockages of HGF receptor (Met) worsen the impaired insulin-induced insulin signaling in liver of diet-induced obesity rats. Overall, our data indicate that HGF is a growth factor playing a key role in islet mass increase and hyperinsulinemia in diet-induced obesity rats, and suggest a protective effect of the HGF-Met axis on insulin signaling in the liver / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Ciências

Orientador: Mário Roberto Maróstica Júnior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-21T19:40:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marques_AnneyCastro_D.pdf: 1629886 bytes, checksum: bb0b5aff44e4b4964882ed30eee5c23a (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: As mudanças no estilo de vida da população, tais como as alterações no hábito alimentar e o maior sedentarismo, levam ao aumento da prevalência de doenças crônicas não transmissíveis, entre as quais se destaca a obesidade. Com o intuito de controlar esse grande problema de saúde pública, vários compostos bioativos têm sido investigados. O ácido linoleico conjugado (CLA), família de isômeros do ácido linoleico, apresenta diversas funções biológicas positivas, tais como anticarcinogênico, imunomodulador e regulador do balanço energético e da composição corporal. Apesar de sua potencialidade na redução do peso corporal, o CLA também apresenta efeitos biológicos adversos (resistência à insulina e aumento da oxidação lipídica), os quais limitam sua utilização. Os fitosterois, lipídios encontrados em alimentos de origem vegetal, reduzem os níveis de colesterol sérico, a inflamação e o risco de doenças cardiovasculares. Por se tratarem de substâncias com comprovado efeito biológico, é possível que a interação entre CLA e fitosterois melhore ou potencialize seus efeitos. Este trabalho teve como objetivo investigar a ação destes compostos na prevenção da obesidade induzida por dieta rica em gordura. Quarenta camundongos Swiss machos receberam dietas hiperlipídicas suplementadas com CLA e/ou fitosterois, na concentração de 2%, por nove semanas. Foram avaliados ingestão energética, ganho de peso, composição corporal, perfil lipídico sérico (colesterol total, HDL-colesterol, triglicérides e ácidos graxos livres), leptina sérica, testes de tolerância à glicose e à insulina, via da insulina no fígado e no tecido adiposo (proteínas Akt, FoxO e JAK-2), inflamação no fígado, tecido adiposo e hipotálamo (JNK, IL-1?, IL-6, IL-10 e TNF-?), além da modulação dos receptores ativados por proliferadores peroxissômicos (PPARs) ? e ? no fígado, tecido adiposo e hipotálamo. Os dados paramétricos foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e os dados não paramétricos foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis. Quando aplicável (p < 0,05), foram realizados os respectivos testes post-hoc (Tukey ou Dunns). A suplementação concomitante de CLA e fitosterois não alterou a ingestão energética, mas reduziu significativamente o ganho de peso, e aumentou a concentração de massa magra e de minerais. Foram reduzidos os níveis de massa gorda, de leptina sérica e dos PPARs no fígado e no tecido adiposo dos animais. Neste grupo não se observou alteração no perfil lipídico. Apesar dos animais terem desenvolvido resistência à insulina, a utilização de CLA mais fitosterois apresentou efeito sinérgico, com redução da inflamação hepática e melhora na via insulínica no fígado e no tecido adiposo, em relação ao grupo obeso. A suplementação de CLA e fitosterois reduziu, em camundongos, os danos causados pela ingestão de dieta hiperlipídica, entretanto mais estudos são necessários para compreender os mecanismos de ação e definir as melhores doses / Abstract: The changes in the population lifestyle, such as bad eating habits and more sedentarism, led to increased prevalence of chronic diseases, including obesity. Various compounds have been investigated in order to control this major public health problem. Conjugated linoleic acid (CLA), a family of isomers of linoleic acid, has various positive biological functions, such as anticarcinogenic, immunomodulatory and energy balance and body composition regulations. Despite the potential in reducing body weight, CLA also has adverse biological effects (insulin resistance and increased fat oxidation), which limit it use. Phytosterols, lipids found in vegetable foods, reduce serum cholesterol levels, inflammation and cardiovascular disease risk. CLA and phytosterols are related to substances with proven biological effect. It is possible that the interaction between then improves and/or enhance these effects. This study aimed to investigate the action of these compounds in the prevention of obesity induced by high-fat diet. Forty male Swiss mice received a high-fat diet supplemented with CLA and/or phytosterols, at a concentration of 2%, for nine weeks. Energy intake, weight gain, body composition, serum lipid profile (total cholesterol, HDLcholesterol, triglycerides and free fatty acids), serum leptin, glucose and insulin tolerance tests, insulin pathway in liver and adipose tissue (Akt, FoxO and JAK-2 proteins), inflammation in liver, adipose tissue and hypothalamus (JNK, IL-1?, IL-6, IL-10 and TNF-?), and modulation of peroxisomal proliferator activated receptors (PPARs) ? and ? in liver, adipose tissue and hypothalamus were assessed. Parametric data were subjected to analysis of variance (ANOVA) and nonparametric data were analyzed by Kruskal-Wallis test. When applicable (p <0.05) were performed its post-hoc tests (Tukey or Dunns). Concomitant supplementation of phytosterols and CLA did not alter energy intake, but significantly reduced weight gain, and increased lean mass and minerals concentration. Fat mass, serum leptin and PPARs, in liver and adipose tissue, were reduced in the animals. In CLA plus phytosterols group there was no change in lipid profile. Although the animals have developed insulin resistance, the use of CLA plus phytosterols showed a synergistic effect, with reduction in hepatic inflammation and improvement in the insulin pathway in liver and adipose tissue, compared to the obese group. CLA and phytosterols supplementation reduced, in mice, the damage caused by the intake of high-fat diet, however, more studies are needed to understand the mechanisms of action and define the best doses / Doutorado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Doutora em Alimentos e Nutrição

Orientador: Everardo Magalhães Carneiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T18:31:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Batista_ThiagoMartins_D.pdf: 2133170 bytes, checksum: 76495b990085ea3c1a065839c27b8bfe (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A resistência a insulina é um fator de risco para o diabetes mellitus tipo 2 (DM2) e é caracterizada pelo aumento da produção hepática de glicose, pela menor captação desse açúcar pelos músculos e tecido adiposo e pela hipersecreção de insulina pelas células beta pancreáticas. Estudos populacionais correlacionam o aporte insuficiente de nutrientes na fase gestacional e pós-natal com o desenvolvimento da resistência a insulina e do DM2 na vida adulta. Essas duas condições são frequentemente associadas a alterações no perfil de aminoácidos plasmáticos. Alguns estudos evidenciam menor concentração do aminoácido sulfurado, taurina, no plasma de humanos e camundongos diabéticos. Neste trabalho, investigamos o desenvolvimento da obesidade, da resistência a insulina e as alterações morfofisiológicas no pâncreas endócrino de camundongos submetidos a restrição protéica após o desmame e em seguida alimentados com dieta hiperlipídica. Também tivemos como objetivo verificar os efeitos da suplementação com taurina sobre o controle da homeostase glicêmica nesse modelo animal. Nossos resultados mostram que camundongos desnutridos respondem ao tratamento com dieta hiperlipídica de maneira semelhante aos camundongos alimentados com dieta normoprotéica. Ambos os grupos se tornaram obesos, hiperleptinêmicos e hipercolesterolêmicos; apresentou maior ingestão calórica, maior produção hepática de glicose e hipersecreção de insulina em ilhotas isoladas. A suplementação com taurina melhorou esses parâmetros com maior intensidade nos camundongos alimentados com dieta normoprotéica. Esses efeitos da taurina foram associados com maior fosforilação da proteína homóloga ao timoma viral (Akt) no fígado dos camundongos controles, e nos desnutridos houve maior fosforilação da proteína quinase ativada por AMP (AMPK). Em conclusão, a desnutrição pós desmame não acelera ou potencializa o desenvolvimento da resistência a insulina induzida por dieta hiperlipídica, porém confere resistência aos efeitos da suplementação com taurina / Abstract: Insulin resistance is a risk factor for type 2 diabetes mellitus (T2DM) and is characterized by increased hepatic glucose output, the lower uptake of this sugar by muscle and adipose tissue and by hypersecretion of insulin by pancreatic beta cells. Population studies correlate the insufficient nutrient intake during pregnancy and early life stages with the development of insulin resistance and T2DM in adulthood. These two conditions are often associated with changes in plasma amino acid profile. Some studies show lower concentration of the sulfur-containing amino acid, taurine, in plasma of diabetic humans and mice. In this project, we investigate the development of obesity; insulin resistance and morphophysiological changes in the endocrine pancreas of mice subjected to protein restriction after weaning and then fed a high-fat diet. We also aimed to investigate the effects of taurine supplementation on the control of glucose homeostasis in this animal model. Our results show that undernourished mice respond to treatment with high fat diet similarly to mice fed a normal protein diet. Both groups became obese, hypercholesterolemic, hyperleptinemic, had higher caloric intake, increased hepatic glucose output and insulin hypersecretion in isolated islets. The taurine supplementation improved these parameters with greater intensity in mice fed a normal protein diet. These effects of taurine were associated with increased phosphorylation of thymoma viral oncogene homolog (Akt) in the liver of control mice and in malnourished mice; the phosphorylation of the AMP-activated protein kinase (AMPK) was increased. In conclusion, malnutrition after weaning doesn't accelerate nor potentiate the development of insulin resistance induced by high fat diet, but confers resistance to the effects of taurine supplementation / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Jose Barreto Campello Carvalheira / Tese (Doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-22T00:26:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flores_MarceloBeneditodaSilva_D.pdf: 2957448 bytes, checksum: f168cee98307f1e264e0d77d10a83423 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O câncer colorretal é um dos maiores problemas de saúde em todo o mundo acometendo 1 milhão de pessoas por ano. O índice de morte associado a essa doença é de aproximadamente 33% no mundo desenvolvido. A associação entre a obesidade e o risco para o desenvolvimento desse câncer é observada tanto em homens quanto em mulheres. A inflamação e a hiperinsulinemia, condições verificadas na obesidade podem contribuir, a princípio, para o risco de desenvolvimento do câncer colorretal. O fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa) é um dos mais importantes mediadores da resposta inflamatória e sua alta expressão pelo tecido adiposo é verificada nas condições de obesidade tanto em modelos animais quanto em humanos. O TNF-alfa contribui para a desregulação da via da sinalização insulínica através da fosforilação em serina dos substratos do receptor desse hormônio (IRS) mediada pela ativação de quinases como c-jun N terminal quinase (JNK) e da quinase inibidora do fator nuclear NF-kB (IKK). A ativação dessas quinases induz a fosforilação inibitória do substrato 1 do receptor de insulina (IRS-1) através da serina 307 (Ser307). Esse mecanismo reduz a ativação da via da fosfatidilinositol 3-quinase (PI3K)/Akt e da proteína alvo da rapamicina em mamíferos (mTOR) mediada pela insulina. TNF-alfa foi, a princípio, identificado como um agente antitumoral. Atualmente essa citoquina é reconhecida como uma promotora da tumorigênese e que associa a inflamação ao câncer. A importância do TNF-alfa e de seus mediadores intracelulares, JNK e IKK, como promotores do câncer de cólon é corroborada por estudos farmacológicos que utilizaram o azoximetano (AOM) ou AOM associado ao dextran sulfato de sódio (DSS) como indutores do câncer colorretal. Ademais, o aumento das concentrações do TNF-alfa associado à obesidade é um mecanismo comprovado de aumento do câncer de fígado em modelos animais. Embora as evidências de que a inflamação e a hiperinsulinemia tenham um envolvimento em potencial na gênese tumoral mediada pela obesidade, à avaliação sistemática da contribuição independente desses fatores para o desenvolvimento do câncer colorretal ainda é inconsistente. Neste trabalho, foi avaliado se a obesidade modulou a sinalização insulínica e a inflamação em tecido colônico e nos tumores colorretais. Foi mostrado que a resposta inflamatória anormal induzida pela obesidade promoveu de forma contundente o câncer colorretal / Abstract: Colorectal cancer (CRC) remains a major health burden with more than 1 million cases worldwide and a disease-specific mortality of approximately 33% in the developed world. The association between obesity and the risk for CRC development is observed in both men and women. In addition to its association with obesity, inflammation and hyperinsulinemia also primarily may contribute to the risk for development of CRC. Among the major mediators of the inflammatory response is tumor necrosis factor (TNF-alfa), whose overexpression in adipose tissue is a common feature in human and animal models of obesity. TNF-alfa contributes to the deregulation of the insulin-signaling pathway, including serine phosphorylation of insulin-receptor substrate (IRS) proteins by kinases such as c-jun N terminal kinase (JNK) and inhibitor of nuclear factor-kB kinase (IKK). JNK and IKK activation induce inhibitory serine 307(Ser307) phosphorylation of IRS-1, which decreases insulin-mediated phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt/mammalian target of rapamycin (mTOR) pathway activation. TNF-alfa, first identified as an antitumor agent, now also is recognized as a tumor-promoting cytokine that links inflammation and cancer. The importance of TNF-alfa and its intracellular mediators, such as JNK and IKK, as colonic tumorigenic promoters is strengthened by knockout and pharmacologic studies, using azoxymethane (AOM) or AOM combined with dextran sulfate sodium (DSS) as inducers of colorectal carcinogenesis. Furthermore, the increased TNF-alfa levels associated with obesity are a potent liver tumor promoter in mice. Although the evidence for the potential involvement of inflammation and hyperinsulinemia in the development of obesity-mediated cancer is quite extensive, a systematic evaluation of the independent contribution of these factors to CRC development is lacking. Here, we examined whether obesity modulates insulin signaling and inflammation in the colon and CRC. We show that the obesity induced abnormal inflammatory response strongly promotes CRC / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientadores: Cristina Laguna Benetti Pinto, Cássia Raquel Teatin Juliato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-20T21:48:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Piccolo_VanessaRibeiroSantanaBerini_M.pdf: 1012178 bytes, checksum: 3e14c4b6d744f4a349f66711137e183d (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Introdução: A síndrome dos ovários policísticos (SOP) associa-se, em 50% a 70% dos casos, ao hiperinsulinismo, obesidade e síndrome metabólica. A relação entre resistência insulínica (RI) e função tireoidiana é ainda pouco estudada, embora se considere haver interação entre disfunção tireoidiana e metabolismo lipídico. Objetivo: avaliar a partir de que nível sérico de hormônio estimulador da tireoide (TSH) há maior prevalência de RI e a relação entre TSH e diferentes parâmetros clínicos e metabólicos em mulheres com SOP. Sujeitos e Métodos: Foi avaliada a associação do TSH e RI em 168 mulheres com SOP atendidas no ambulatório de ginecologia endócrina do Departamento de Tocoginecologia da Faculdade de Ciências Médicas, UNICAMP não hipotireoideas. Avaliaram-se também as variáveis: índice de Ferriman-Galley, índice de massa corpórea (IMC), pressão arterial sistólica (PAS), pressão arterial diastólica (PAD), circunferência abdominal (CA), circunferência do quadril (CQ), níveis séricos de testosterona total, testosterona livre, glicemia em jejum, insulina em jejum, índice de HOMA (HOMA-IR), colesterol total, HDL colesterol (HDL) e LDL colesterol (LDL), triglicérides (TRIG). Para determinar o ponto de corte que maximize a sensibilidade e a especificidade foi empregada curva ROC para os níveis de TSH, considerando resistência insulínica quando HOMA-IR ? 2,71. As variáveis foram comparadas segundo o ponto de corte do TSH determinado pela curva ROC e pela classificação de hipotireoidismo subclínico (HSC) com valores de TSH ? 4,5 e <10mIU/L, bem como pela presença de RI. Foi estudada também a correlação das variáveis com TSH e HOMA-IR. Resultados: As 168 mulheres com SOP tinham média de idade de 24,2 ± 5,8 anos. A associação entre TSH e RI mostrou um valor de corte de TSH ? 2,77mUI/L, com sensibilidade de 47,9% e especificidade de 65,3% para correlação de RI. Os parâmetros clínicos, hormonais e metabólicos foram avaliados e comparados para TSH < 2,77mUI/L e TSH entre 2,77 e 10mUI/L, sem diferença significativa entre as variáveis estudadas. Foram então comparadas mulheres com e sem RI, com valores significativamente maiores para peso, IMC, PAS, PAD, CA e CQ entre as com RI. As mesmas variáveis foram comparadas entre mulheres com função tireoidiana normal ou HSC. Observaram-se valores significativamente maiores de prolactina (PRL) e LDL nas com HSC. Realizadas as correlações entre os parâmetros estudados, observou-se correlação positiva apenas entre TSH e LDL. O HOMA-IR mostrou correlação positiva com peso, IMC, PAS, PAD, CA, CQ e TRIG. Conclusão: Há maior associação entre a concentração de TSH ? 2,77mUI/L e a presença de RI, porém sem alteração nos parâmetros clínicos e laboratoriais que indique mudança de conduta. Porém, quanto maior a RI, observou-se piora nos parâmetros clínicos relacionados à síndrome metabólica. As mulheres com SOP e HSC apresentaram valores de LDL e PRL significativamente maiores do que nas com níveis de TSH < 4,5 mUI/L / Abstract: Introduction: Polycystic ovary syndrome (PCOS) is associated with hyperinsulinism, obesity and the metabolic syndrome in 50-70% of cases. The association between insulin resistance (IR) and thyroid function has yet to be fully clarified, although an interaction between thyroid dysfunction and lipid metabolism is recognized. Objective: To evaluate the serum level of thyroid-stimulating hormone (TSH) that results in a greater prevalence of IR and the relationship between TSH and different clinical and metabolic parameters in women with PCOS. Subjects and methods: The association of TSH and IR was evaluated in 168 women with PCOS without overt hypothyroidism attending a gynecological endocrinology outpatient clinic at the Department of Obstetrics and Gynecology, School of Medical Sciences, University of Campinas (UNICAMP). Other variables evaluated were: the Ferriman-Gallwey Index, body mass index (BMI), systolic blood pressure (SBP), diastolic blood pressure (DBP), waist circumference, hip circumference, serum levels of total testosterone, free testosterone, fasting glucose and fasting insulin, the homeostatic model assessment of insulin resistance (HOMA-IR), total cholesterol, high-density lipoprotein cholesterol (HDL-c), low-density lipoprotein cholesterol (LDL-c) and triglycerides (TRIG). To determine the cut-off point that would maximize sensitivity and specificity, a receiver-operating characteristic (ROC) curve was used for TSH levels, with insulin resistance being defined as HOMA-IR ? 2.71. The variables were compared based on the cut-off point for TSH determined by the ROC curve, the classification of subclinical hypothyroidism (SCH) as defined by TSH values ? 4.5 and < 10 mIU/L, and the presence of IR. The correlation between the variables, TSH and HOMA-IR, was also assessed. Results: The mean age of the 168 women with PCOS was 24.2 ± 5.8 years. The association between TSH and IR revealed a cut-off value for TSH ? 2.77 mIU/L, with sensitivity of 47.9% and specificity of 65.3% for the correlation with IR. The clinical, hormonal and metabolic parameters were evaluated and compared for TSH levels < 2.77mIU/L and for TSH levels of 2.77 - 10mIU/L, with no statistically significant differences being found between the variables studied. The women with IR were then compared with those without IR, with significantly higher values being found for weight, BMI, SBP, DBP, waist and hip circumference among women with IR. The same variables were compared between the women with normal thyroid function and those with SCH. Significantly higher values of prolactin and LDL-c were found in the women with SCH. Evaluation of the parameters studied showed a positive correlation only between TSH and LDL-c. HOMA-IR correlated positively with weight, BMI, SBP, DBP, waist and hip circumference and TRIG. Conclusion: There is a stronger association between TSH levels ? 2.77mIU/L and the presence of IR; however, no abnormalities were found in the clinical or laboratory parameters that would warrant a change in clinical management. Nevertheless, the higher the IR, the poorer the clinical parameters related to the metabolic syndrome. The women with PCOS and SCH had significantly higher LDL-c and PRL levels compared to women with TSH levels < 4.5 mIU/L / Mestrado / Fisiopatologia Ginecológica / Mestra em Ciências da Saúde