O interesse em efeitos sinérgicos ou antagônicos através de experiências com associações cresceu imensamente nas últimas décadas. Com o objetivo de estudar a associação de dois herbicidas inibidores da ALS (sulfometuron-methyl e chlorimuron-ethyl) em Digitaria insularis, empregou-se dos métodos estatísticos fornecidos por meio das curvas dose-resposta e isobologramas. O conceito de curvas dose-resposta tem sido amplamente utilizado para avaliar os resultados das experiências com herbicidas. No entanto, a abordagem estatística em torno das curvas deve ser cuidadosa; cosiderar as curvas dose-resposta semelhantes quando elas não são pode influenciar muito na comparação entre as moléculas e afetar o cálculo da potência relativa. A potência relativa ajuda a entender qual é a relação de potência entre as moléculas, esse conhecimento é fundamental para os estudos com os herbicidas em associação. Sabendo-se disso foram conduzidos experimentos do tipo dose-resposta em dois tipos de substratos utilizando Digitaria insularis como planta daninha indicadora. Os experimentos foram conduzidos em casa de vegetação do Centro de Pesquisa e Desenvolvimento da DuPont em Paulínia (SP). Para cada molécula foram aplicadas, em pré-emergência, oito doses com quatro repetições cada e quatro plantas testemunha nos diferentes substratos. O substrato A é somente substrato comercial (marca Tropstrato HT®) puro; E o substrato B é uma mistura de solo arenoso, peneirado e livre de contaminação mais substrato comercial na proporção 3:1 v/v. Neste caso ficou evidente a maior capacidade do sulfometuronmethyl em reduzir a biomassa da espécie, as curvas dose-resposta foram descritas pelo modelo log-logístico com os valores de ED50 e as declividades de cada curva variando livremente, pois as hipóteses testadas nos diferentes substratos de curvas paralelas foram rejeitadas. O valor calculado da potência relativa para o nível de resposta de 50% entre os herbicidas CLASSIC® (chlorimuron-ethyl) e CURAVIAL® (sulfometuron-methyl) nas condições desse estudo foi de 8,596 e 44,047 nos Substrato A e B respectivamente. A partir dessa informação foram utilizadas as mesmas condições do experimento anterior para o experimento com as isoboles dos herbicidas em associação, cinco curvas dose-resposta, foram propostas, duas curvas para os produtos isolados e três curvas para as associações em diferentes proporções [(25% : 75%); (50% : 50%); (75% : 25%)] chlorimuron-ethyl / sulfometuron-methyl, totalizando 144 parcelas. Vários modelos isoboles foram testados, o modelo de Concentração Aditiva foi significativamente descartado, mas foi levado em consideração para testar teoricamente o grau de sinergia ou antagonismo que modelos mais complexos podiam fornecer. O modelo de isobole proposto por Hewlett e Plackett (1959) teve ajuste significativo e parâmetro de interação menor que um (λ=0,33). O modelo que mais se ajustou aos dados foi o proposto por Vølund e os resultados também mostraram que nessas condições a associação de sulfometuron-methyl com chlorimuron-ethyl foi antagônica; as isoboles são potentes ferramentas para capturar e descrever associações de herbicidas. Entretanto a literatura mostra que associar duas moléculas e testar em um sistema biológico complexo sofrendo variações das diferentes condições ambientais possíveis pode gerar respostas variáveis, portanto esses resultados devem ser repetidos em outras condições para validar as conclusões ou então serem executados em condições controladas de laboratório e usar organismos vivos de menor complexidade como bioindicador. / The interest in synergistic or antagonistic effects through experiences with associations has immensely grown in recent decades. In order to study the association of two ALS inhibitor herbicides (sulfometuron-methyl and chlorimuronethyl) in Digitaria insularis, the statistical methods provided by the dose-response curves and isobolograms were used. The concept of dose-response curves has been widely used to evaluate the results of herbicide experiments. However, the statistical approach around curves must be careful; considering the dose-response curves when they are not can greatly influence the comparison between molecules and affect the calculation of relative potency. Relative potency helps to understand what the power ratio is between molecules, this knowledge is fundamental for studies with herbicides in association. Knowing this, dose-response experiments were conducted on two types of substrates using Digitaria insularis as an indicator weed. The experiments were conducted in a greenhouse of the DuPont Research and Development Center in Paulínia (SP). For each molecule were applied, in pre-emergence, eight doses with four replicates each and four control plants on different substrates. Substrate A is pure commercial substrate (brand Tropstrato HT®); and substrate B is a mixture of sandy soil, sifted and contamination-free plus commercial substrate in the ratio 3:1 v/v. In this case it was evident the greater capacity of the sulfometuron-methyl to reduce the biomass of the species, the dose-response curves were described by the log-logistic model with the values of ED50 and the slopes of each curve varying freely, since the hypotheses tested in the different substrates of parallel curves were rejected. The calculated value of relative potency for the 50% response level between CLASSIC® (chlorimuron-ethyl) and CURAVIAL® (sulfometuron-methyl) herbicides under the conditions of this study was 8.596 and 44.047 on Substrate A and B respectively. From this information the same conditions of the previous experiment for the isoboles of the herbicides in association were used, five doseresponse curves were proposed, two curves for the isolated products and three curves for the associations in different ratios [25% : 75%); (50% : 50%); (75% : 25%)] chlorimuron-ethyl / sulfometuron-methyl, totaling 144 plots. Isoboles models were tested, the Concentration Additive model was significantly discarded, but was taken into account to theoretically test the degree of synergy or antagonism that more complex models could provide. The isobole model proposed by Hewlett and Plackett (1959) had a significant adjustment and interaction parameter smaller than 1 (λ = 0.33). The model that best fit the data was the one proposed by Vølund and the results also showed that under these conditions the association of sulfometuronmethyl with chlorimuron-ethyl was antagonistic; isoboles are potent tools for capturing and describing herbicide associations. So these results must be repeated in other conditions to validate the conclusions or to be executed in controlled laboratory conditions and to use living organisms of lesser complexity as a bioindicator.

Os ramnolipídeos (RL) são biossurfatantes que apresentam características de grande interesse para a indústria de alimentos, tais como alta biodegradabilidade, baixa toxicidade e propriedades emulsionantes. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana do ramnolipídeo comercial (RL-Com - Jeneil Co.) e do ramnolipídeo produzido e purificado no Laboratório de Biotecnologia Microbiana (RL-LBM) sobre culturas de Listeria monocytogenes, através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) utilizando o método de microdiluição em caldo. Os valores de CIM dos RLs variaram entre 78,1 μg mL-1 e 2500 μg mL-1 sendo que a CIM predominante foi de 2500 μg mL-1. Dentre as 32 L. monocytogenes testadas 68,7% foram sensíveis ao RL-LBM e 90,6% sensíveis ao RL-Com. O efeito do ramnolipídeo sobre L. monocytogenes mostrou-se predominantemente bacteriostático. O RL aumentou a permeabilidade celular de L. monocytogenes, contudo este efeito não foi relacionado à sua atividade antimicrobiana. A interação entre os antimicrobianos RL-Com e nisina foi avaliada sobre dois isolados de L. monocytogenes com sensibilidades diferentes ao RL, o L17 menos sensível, com CIM de 2500 μg mL-1, e o L12 mais sensível, com CIM de 156,2 μg mL-1. O índice CIF obtido para os isolados foi de 0,078 e 0,18 , para L17 e L12 respectivamente, caracterizando o efeito sinérgico da combinação entre RL e nisina. As curvas de sobrevivência dos isolados L12 e L17 mostraram que a interação entre a nisina e o RL foi bactericida em concentrações menores que as obtidas individualmente para cada antimicrobiano. Para a L12 a combinação de 78,1 μg mL-1 de RL e 160 UI mL-1 de nisina reduziu completamente a população em 30 min de tratamento, e para a L17 a combinação de 156,2 μg mL-1 de RL e 320 UI mL-1 de nisina foi bactericida após 2 h. Os resultados obtidos neste trabalho demonstraram que o ramnolipídeo possui potencial como agente de controle de L. monocytogenes assim como efeito sinérgico quando combinado à nisina. / The rhamnolipids (RL) are biodegradable biosurfactants which have low toxicity and surface activity properties that can be useful for food processing industries. The objective of this study was to evaluate the susceptibility of Listeria monocytogenes with two rhamnolipids products: the rhamnolipid from P. aeruginosa LBI that was produced and purified in the Microbial Biotechnology Laboratory (RLMBL) and a commercial product (RL-Com - Jeneil Co.). Susceptibility tests were performed by the minimal inhibitory concentration (MIC) using the micro-broth dilution technique. The MIC values varied from 78.1 μg mL-1 to 2500 μg mL-1 and the 2500 μg mL-1 concentration was the predominant value . Among the 32 tested cultures, 68.7% were susceptible to RL-MBL and 90.6% to RL-Com. Results showed that the rhamnolipid activity was primarily bacteriostatic. The RL increases the membrane permeability of L. monocytogenes, however this effect was not directly related to its antimicrobial activity. The combined effect of nisin and RL-Com was evaluated against two wild-type isolates of L. monocytogenes, L12 more sensitive (MIC 156.2 μg mL-1) and L17 less sensitive (2500 μg mL-1). The FIC index for the isolates were 0.18 and 0.078 for L12 and L17 respectively, indicating a particular synergistic effect. The survival curve of isolates L12 and L17 showed that the combination between nisin and RL was bactericidal at lower concentration than for the individual antimicrobials. For L12 isolate 78.1 μg mL-1 of RL and 160 UI mL-1 of nisin eliminated the population after 30 min of incubation. The combination of 156.2 μg mL-1 of RL and 320 UI mL-1 of nisin reduced completely L17 population after 2 h of incubation. This work demonstrated the potential antimicrobial activity of rhamnolipids against L. monocytogenes, as well as the synergistic effect of this biosurfactant with nisin.

Nesta dissertação, identificou-se que as drogas esqualestatina, fosmidomicina, risedronato e nerolidol apresentam atividades sinérgicas e aditivas quando administradas em cultura de P. falciparum. Esses resultados contribuem para a compreensão da biologia do parasita e abrem estudos para possíveis antimaláricos. Identificou-se a especificidade da droga esqualestatina inibidora da enzima fitoeno sintase por meio de marcações metabólicas utilizando precursor radioativo ([3H]GGPP), e análise pela técnica de cromatografia (RP-HPLC). Realizou-se testes de inibição para determinar o valor da IC50 na linhagem pRM2-Fito-HA, a qual encontra-se super expressando enzima fitoeno sintase e encontrou-se um valor IC50 de 5 <font face=\"Symbol\">mM para o isolado 3D7 enquanto que para a linhagem pRM2-Fito-HA foi de 30 <font face=\"Symbol\">mM. Demonstrando assim que a enzima fitoeno sintase é o principal, senão único alvo da esqualestatina em P. falciparum, o que sugere que este composto ou derivado do mesmo são potenciais antimalaricos. / In this thesis, we found that the drug squalestatin, fosmidomicina, risedronate, nerolidol have synergistic and additive activity when administered in cultured P. falciparum. These results contribute to the understanding of the biology of the parasite and open studies for potential antimalarials. We identified the specific drug squalestatin inhibiting phytoene synthase enzyme by using metabolic markers radioactive precursor ([3H] GGPP) by the technique of analysis and chromatography (RP-HPLC). Held inhibition tests to determine the IC50 value of the strain in pRM2-Phyto-HA, which is super expressing phytoene synthase enzyme and met an IC50 value of 5 microM to isolate 3D7 whereas for strain pRM2 -Phyto-HA was 30 <font face=\"Symbol\">mM. Thus demonstrating that the enzyme phytoene synthase is the primary, if not sole target of squalestatin in P. falciparum, which suggests that this compound or derivative thereof as potential antimalarials.

Os ramnolipídeos (RL) são biossurfatantes que apresentam características de grande interesse para a indústria de alimentos, tais como alta biodegradabilidade, baixa toxicidade e propriedades emulsionantes. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana do ramnolipídeo comercial (RL-Com - Jeneil Co.) e do ramnolipídeo produzido e purificado no Laboratório de Biotecnologia Microbiana (RL-LBM) sobre culturas de Listeria monocytogenes, através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) utilizando o método de microdiluição em caldo. Os valores de CIM dos RLs variaram entre 78,1 &mu;g mL-1 e 2500 &mu;g mL-1 sendo que a CIM predominante foi de 2500 &mu;g mL-1. Dentre as 32 L. monocytogenes testadas 68,7% foram sensíveis ao RL-LBM e 90,6% sensíveis ao RL-Com. O efeito do ramnolipídeo sobre L. monocytogenes mostrou-se predominantemente bacteriostático. O RL aumentou a permeabilidade celular de L. monocytogenes, contudo este efeito não foi relacionado à sua atividade antimicrobiana. A interação entre os antimicrobianos RL-Com e nisina foi avaliada sobre dois isolados de L. monocytogenes com sensibilidades diferentes ao RL, o L17 menos sensível, com CIM de 2500 &mu;g mL-1, e o L12 mais sensível, com CIM de 156,2 &mu;g mL-1. O índice CIF obtido para os isolados foi de 0,078 e 0,18 , para L17 e L12 respectivamente, caracterizando o efeito sinérgico da combinação entre RL e nisina. As curvas de sobrevivência dos isolados L12 e L17 mostraram que a interação entre a nisina e o RL foi bactericida em concentrações menores que as obtidas individualmente para cada antimicrobiano. Para a L12 a combinação de 78,1 &mu;g mL-1 de RL e 160 UI mL-1 de nisina reduziu completamente a população em 30 min de tratamento, e para a L17 a combinação de 156,2 &mu;g mL-1 de RL e 320 UI mL-1 de nisina foi bactericida após 2 h. Os resultados obtidos neste trabalho demonstraram que o ramnolipídeo possui potencial como agente de controle de L. monocytogenes assim como efeito sinérgico quando combinado à nisina. / The rhamnolipids (RL) are biodegradable biosurfactants which have low toxicity and surface activity properties that can be useful for food processing industries. The objective of this study was to evaluate the susceptibility of Listeria monocytogenes with two rhamnolipids products: the rhamnolipid from P. aeruginosa LBI that was produced and purified in the Microbial Biotechnology Laboratory (RLMBL) and a commercial product (RL-Com - Jeneil Co.). Susceptibility tests were performed by the minimal inhibitory concentration (MIC) using the micro-broth dilution technique. The MIC values varied from 78.1 &mu;g mL-1 to 2500 &mu;g mL-1 and the 2500 &mu;g mL-1 concentration was the predominant value . Among the 32 tested cultures, 68.7% were susceptible to RL-MBL and 90.6% to RL-Com. Results showed that the rhamnolipid activity was primarily bacteriostatic. The RL increases the membrane permeability of L. monocytogenes, however this effect was not directly related to its antimicrobial activity. The combined effect of nisin and RL-Com was evaluated against two wild-type isolates of L. monocytogenes, L12 more sensitive (MIC 156.2 &mu;g mL-1) and L17 less sensitive (2500 &mu;g mL-1). The FIC index for the isolates were 0.18 and 0.078 for L12 and L17 respectively, indicating a particular synergistic effect. The survival curve of isolates L12 and L17 showed that the combination between nisin and RL was bactericidal at lower concentration than for the individual antimicrobials. For L12 isolate 78.1 &mu;g mL-1 of RL and 160 UI mL-1 of nisin eliminated the population after 30 min of incubation. The combination of 156.2 &mu;g mL-1 of RL and 320 UI mL-1 of nisin reduced completely L17 population after 2 h of incubation. This work demonstrated the potential antimicrobial activity of rhamnolipids against L. monocytogenes, as well as the synergistic effect of this biosurfactant with nisin.

Diante do aumento global da resistência microbiana, cada vez mais as combinações de antimicrobianos são utilizadas na tentativa de obter uma atividade sinérgica eficaz que possa ser utilizada na prática clínica. O objetivo deste trabalho foi comparar a atividade de polimixina B isoladamente e em combinação com tigeciclina e carbapenêmicos (ertapenem e meropenem), frente a isolados de Enterobacter sp. resistentes aos carbapenêmicos. Foram selecionados quatro isolados de Enterobacter sp. resistentes aos carbapenêmicos, sendo três isolados produtores de carbapenemases (KPC, NDM, OXA-48-like) e um não produtor de carbapenemases (NPC). A avaliação da atividade sinérgica antimicrobiana foi realizada por ensaio de time-kill com as seguintes concentrações de cada antimicrobiano: tigeciclina 1mg/L, meropenem 1mg/L e ertapenem 0,5mg/L, que correspondem aos pontos de corte de sensibilidade do CLSI (2016). Para polimixina B, foram utilizadas diferentes concentrações de acordo com o perfil de susceptibilidade do isolado: para os isolados sensíveis, utilizou-se 0,5x; 1x e 2x a CIM do isolado; para o isolado resistente, foram utilizados 0,5x; 1x e 2x o ponto de corte de sensibilidade do CLSI (2 mg/L). Foi considerada sinérgica a combinação com redução ≥ 2 logs do inoculo inicial em comparação ao antimicrobiano sozinho mais ativo. As combinações de polimixina B em diferentes concentrações (0,5; 1 e 2mg/L) com meropenem apresentaram atividade sinérgica para a cepa produtora de NDM (CIM polimixina B 1 mg/L; CIM meropenem 8 mg/L) As combinações de polimixina B com tigeciclina foram sinérgicas apenas na concentração de polimixina B de 0,125 mg/L para cepa produtora de OXA-48-like (CIM polimixina B 0,25 mg/L; CIM tigeciclina 2 mg/L) e na concentração de 1 mg/L para a cepa produtora de NDM. Para a cepa NPC (CIM polimixina B 0,5 mg/L; CIM tigeciclina 4 mg/L; CIM meropenem 4 mg/L), apenas a tripla combinação com polimixina B (1 mg/L), tigeciclina e meropenem apresentou atividade sinérgica. A combinação de dois carbapenêmicos não apresentou atividade sinérgica para nenhum isolado, porém, quando acrescentado tigeciclina ao esquema, observou-se sinergismo no isolado produtor de OXA-48-like, o que leva ao questionamento da efetividade da terapia “carbapenem suicida”. Para o isolado produtor de KPC e com padrão de resistência a polimixina B, nenhuma das combinações testadas apresentou sinergismo. Esta situação é bastante preocupante devido à alta prevalência de infecções por bactérias produtoras de KPC nos hospitais brasileiros, juntamente com as crescentes taxas de resistência as polimixinas. / Due to the increase in microbial resistance, combinations of antimicrobials are increasingly being used to improve the therapeutic response. The objective of this study was to compare the activity of polymyxin B alone and in combination with tigecycline and carbapenem (ertapenem and meropenem) against to carbapenem-resistant Enterobacter sp isolates. Four isolates were selected, three were carbapenemase-producing (KPC, NDM, OXA-48-like) and a non-carbapenemase-producing (NCP). The evaluation of synergistic antimicrobial activity was performed by time-kill assay with the following concentrations of each antimicrobial: tigecycline 1mg/L, meropenem 1mg/L and ertapenem 0.5mg/L, which correspond to the breakpoints of CLSI (2016). For polymyxin B, different concentrations were used according to the susceptibility profile of the isolate: for susceptible isolates, it was used 0.5x; 1x and 2x the MIC of the isolate, for the resistant isolates it was used 0.5x; 1x and 2x the breakpoint of CLSI (2 mg/L). The combination with reduction ≥ 2 logs of the initial inoculum compared to the most active antimicrobial alone was considered synergies. Combinations of polymyxin B at different concentrations (0.5; 1 and 2 mg/L) with meropenem showed synergistic activity for the NDM-producing isolate (MIC polymyxin B 1 mg/L, MIC meropenem 8 mg/L) Combinations of polymyxin B with tigecycline were synergistic only at the concentration of polymyxin B of 0.125 mg/L for the OXA-48-like-producing isolate (MIC polymyxin B 0.25 mg/L, MIC tigecycline 2 mg/L) and at the concentration of 1 mg/L for the NDM-producing isolate. For the NCP isolate (MIC polymyxin B 0.5 mg/L; MIC tigecycline 4 mg/L; MIC meropenem 4 mg/L), only the triple combination of polymyxin B (1 mg/L) plus tigecycline and meropenem presented synergistic activity. The combination of two carbapenems was not synergic for the four isolates; however, when tigecycline was added to the regimen, synergies for the OXA-48-like-producing isolate were observed. Therefore, the so called, "carbapenem suicide" therapy was not effective in vitro against our isolates. For the KPC-producing isolate that it is polymyxin B resistant, none of the combinations tested showed synergies. This situation is very worrisome due to high prevalence of infections by KPC-producing in the Brazilian hospitals, associate with the increasing rates of polymyxins resistance.

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Uma nova linhagem de arroz, que se utiliza de outro modo de ação de herbicidas (inibidores da ACCase), desta vez, está prestes a ser lançada no mercado e se oferece como uma nova ferramenta no processo de combate ao arroz-daninho. Aliada a essa ferramenta, existe a possibilidade de aumento no espectro de controle de plantas daninhas do arroz com associação a outros herbicidas. Para isso é necessário conhecer os efeitos dos produtos associados e a seletividade do arroz frente às associações, pois há possibilidade do surgimento de interações sinérgicas ou antagônicas na associação de latifolicidas com herbicidas desse mecanismo de ação. Embora não seja uma prática prevista em lei, a associação de herbicidas é mais uma alternativa para os orizicultores no manejo de plantas daninhas resistentes. Os objetivos deste estudo foram: efetuar uma revisão de literatura acerca do modo de ação dos herbicidas registrados para o arroz e os efeitos da interação ocasionados pela interação de herbicidas (Capítulo I); elucidar as interações decorrentes da associação entre quizalofop e haloxyfop com herbicidas registrados para o arroz (Capítulo II); e estudar os efeitos de duas linhagens de arroz (suscetível e resistente a inibidores da ACCase) sujeito à aplicação de herbicidas previamente antagônicos (Capítulo III). Os resultados obtidos indicam que houve redução da eficiência de controle do arroz com todas as doses avaliadas na maioria das associações de quizalofop e haloxyfop. Houve suposto antagonismo ou efeito aditivo nas associações de quizalofop com todos os produtos em todas as doses em Aeschynomene denticulata. Outros estudos devem ser realizados com o uso de curvas de dose resposta e montagem de isobologramas para a comprovação da suposição da interação. Os resultados evidenciam suposta interação antagônica entre o 2,4-D e o quizalofop e entre o quizalofop e o propanil nos três biótipos estudados. / Irrigated rice (Oryza sativa) is a crop that feeds billions of people worldwide, with record-breaking yields. However, weeds still represent problems for rice to express its productive potential, especially weedy-rice, of the same species as the cultivated one. Last years, with Clearfield® (CL) technology, many producers have taken a technology as a solution of the weedy-rice problems. However, the possibility of gene flow of CL rice to a weed brought problems with a technology. A new strain of rice, which uses another mode of action of herbicides (inhibitors of ACCase), this time, is about to be launched in the market and aims to be a new tool in the process of combating weedyrice. Allied to this tool, there is a point of increase without control of weed control of the rice with the advent and a legalization of the association of herbicides in the country. For this it is necessary to know the effects of the associated products and a selectivity of the rice in front of the associations, since there is a possibility of synergistic or antagonic interactions in the association of latifolicides with herbicides of this mechanism of action. Although not a legal practice, the association of herbicides is one more alternative for the rice producers in the fight against the problems with resistance of weeds. The objectives of this study were: to carry out a literature review about the mode of action of the herbicides registered for rice and the interaction effects caused by the interaction of herbicides (Chapter I); To elucidate the interactions resulting from the association between quizalofop and haloxyfop with herbicides registered for rice (Chapter II); And to study the effects on rice of two strains (susceptible and resistant to ACCase inhibitors) subject to the application of supposedly antagonistic herbicides (Chapter III). The results indicate that rice control efficiency was reduced with all doses evaluated in most associations of quizalofop and haloxyfop. There was supposed antagonism or additive effect on the associations of quizalofop with all products at all doses in Aeschynomene denticulata. Other studies should be performed using dose response curves and isobolograms assembly to prove the assumption of the interaction verified. The results evidenced the supposed antagonistic interaction between 2,4-D and quizalofop and between quizalofop and propanil in the three studied biotypes.

O interesse em efeitos sinérgicos ou antagônicos através de experiências com associações cresceu imensamente nas últimas décadas. Com o objetivo de estudar a associação de dois herbicidas inibidores da ALS (sulfometuron-methyl e chlorimuron-ethyl) em Digitaria insularis, empregou-se dos métodos estatísticos fornecidos por meio das curvas dose-resposta e isobologramas. O conceito de curvas dose-resposta tem sido amplamente utilizado para avaliar os resultados das experiências com herbicidas. No entanto, a abordagem estatística em torno das curvas deve ser cuidadosa; cosiderar as curvas dose-resposta semelhantes quando elas não são pode influenciar muito na comparação entre as moléculas e afetar o cálculo da potência relativa. A potência relativa ajuda a entender qual é a relação de potência entre as moléculas, esse conhecimento é fundamental para os estudos com os herbicidas em associação. Sabendo-se disso foram conduzidos experimentos do tipo dose-resposta em dois tipos de substratos utilizando Digitaria insularis como planta daninha indicadora. Os experimentos foram conduzidos em casa de vegetação do Centro de Pesquisa e Desenvolvimento da DuPont em Paulínia (SP). Para cada molécula foram aplicadas, em pré-emergência, oito doses com quatro repetições cada e quatro plantas testemunha nos diferentes substratos. O substrato A é somente substrato comercial (marca Tropstrato HT&reg;) puro; E o substrato B é uma mistura de solo arenoso, peneirado e livre de contaminação mais substrato comercial na proporção 3:1 v/v. Neste caso ficou evidente a maior capacidade do sulfometuronmethyl em reduzir a biomassa da espécie, as curvas dose-resposta foram descritas pelo modelo log-logístico com os valores de ED50 e as declividades de cada curva variando livremente, pois as hipóteses testadas nos diferentes substratos de curvas paralelas foram rejeitadas. O valor calculado da potência relativa para o nível de resposta de 50% entre os herbicidas CLASSIC&reg; (chlorimuron-ethyl) e CURAVIAL&reg; (sulfometuron-methyl) nas condições desse estudo foi de 8,596 e 44,047 nos Substrato A e B respectivamente. A partir dessa informação foram utilizadas as mesmas condições do experimento anterior para o experimento com as isoboles dos herbicidas em associação, cinco curvas dose-resposta, foram propostas, duas curvas para os produtos isolados e três curvas para as associações em diferentes proporções [(25% : 75%); (50% : 50%); (75% : 25%)] chlorimuron-ethyl / sulfometuron-methyl, totalizando 144 parcelas. Vários modelos isoboles foram testados, o modelo de Concentração Aditiva foi significativamente descartado, mas foi levado em consideração para testar teoricamente o grau de sinergia ou antagonismo que modelos mais complexos podiam fornecer. O modelo de isobole proposto por Hewlett e Plackett (1959) teve ajuste significativo e parâmetro de interação menor que um (&lambda;=0,33). O modelo que mais se ajustou aos dados foi o proposto por Vølund e os resultados também mostraram que nessas condições a associação de sulfometuron-methyl com chlorimuron-ethyl foi antagônica; as isoboles são potentes ferramentas para capturar e descrever associações de herbicidas. Entretanto a literatura mostra que associar duas moléculas e testar em um sistema biológico complexo sofrendo variações das diferentes condições ambientais possíveis pode gerar respostas variáveis, portanto esses resultados devem ser repetidos em outras condições para validar as conclusões ou então serem executados em condições controladas de laboratório e usar organismos vivos de menor complexidade como bioindicador. / The interest in synergistic or antagonistic effects through experiences with associations has immensely grown in recent decades. In order to study the association of two ALS inhibitor herbicides (sulfometuron-methyl and chlorimuronethyl) in Digitaria insularis, the statistical methods provided by the dose-response curves and isobolograms were used. The concept of dose-response curves has been widely used to evaluate the results of herbicide experiments. However, the statistical approach around curves must be careful; considering the dose-response curves when they are not can greatly influence the comparison between molecules and affect the calculation of relative potency. Relative potency helps to understand what the power ratio is between molecules, this knowledge is fundamental for studies with herbicides in association. Knowing this, dose-response experiments were conducted on two types of substrates using Digitaria insularis as an indicator weed. The experiments were conducted in a greenhouse of the DuPont Research and Development Center in Paulínia (SP). For each molecule were applied, in pre-emergence, eight doses with four replicates each and four control plants on different substrates. Substrate A is pure commercial substrate (brand Tropstrato HT&reg;); and substrate B is a mixture of sandy soil, sifted and contamination-free plus commercial substrate in the ratio 3:1 v/v. In this case it was evident the greater capacity of the sulfometuron-methyl to reduce the biomass of the species, the dose-response curves were described by the log-logistic model with the values of ED50 and the slopes of each curve varying freely, since the hypotheses tested in the different substrates of parallel curves were rejected. The calculated value of relative potency for the 50% response level between CLASSIC&reg; (chlorimuron-ethyl) and CURAVIAL&reg; (sulfometuron-methyl) herbicides under the conditions of this study was 8.596 and 44.047 on Substrate A and B respectively. From this information the same conditions of the previous experiment for the isoboles of the herbicides in association were used, five doseresponse curves were proposed, two curves for the isolated products and three curves for the associations in different ratios [25% : 75%); (50% : 50%); (75% : 25%)] chlorimuron-ethyl / sulfometuron-methyl, totaling 144 plots. Isoboles models were tested, the Concentration Additive model was significantly discarded, but was taken into account to theoretically test the degree of synergy or antagonism that more complex models could provide. The isobole model proposed by Hewlett and Plackett (1959) had a significant adjustment and interaction parameter smaller than 1 (&lambda; = 0.33). The model that best fit the data was the one proposed by Vølund and the results also showed that under these conditions the association of sulfometuronmethyl with chlorimuron-ethyl was antagonistic; isoboles are potent tools for capturing and describing herbicide associations. So these results must be repeated in other conditions to validate the conclusions or to be executed in controlled laboratory conditions and to use living organisms of lesser complexity as a bioindicator.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / The Lippia alba (Mill.) N. E. Brown species inhabits almost all regions of Brazil, which is plenty used in popular medicine. Studies show that between the Brazilian Northeast three chemotypes of L. alba, the chemotype II (OELaII), produces in its leaves, essential oil with the largest and broadest antimicrobial potential. The objective of this study was to evaluate the interference of the OELaII in the Oxacillin activity and its mechanism of action against Staphylococcus aureus. The antimicrobial activity was performed by determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) by broth microdilution methods of culture and spreading on the surface of agar Plate-Count, respectively. The evaluation of the OELaII interference on antimicrobial oxacillin activity and other antibiotics was performed by using methodology changed disk diffusion. The checkerboard method, calculation of Fractional Inhibitory Concentration Indices and graphing Isobologramas was used to assess the interference OELaII the antimicrobial activity oxacillin. The study of the OELaII mechanism of action on strains of S. aureus was performed by evaluating the OE antimicrobial activity in the phases of exponential growth and stationary as well as by the action of chloramphenicol on the exponential growth. The effect of OELaII, oxacillin and OELaII-OXA exposure time, on strains of S. aureus was observed by tracing curves time of death, was considered synergistic association was found that a reduction in the number of viable cells after 24-48 hours when compared to each compound alone. The results revealed that the MIC and MBC OELaII to the strains of S. aureus oxacillin resistant (ORSA) are equal or very close to those observed for susceptible strains (UR) ranging from 0.312 to 1.25 mg / ml and 1.25 to 5.0 mg / mL for the first, and 0.312 -0.625 mg / mL and 0.625 to 2.5 mg / mL for the second. Oxacillin to the values obtained were 6.25 to 200 mg / ml and 25 and 400 mg / mL and 0.390 to 3.12 for ORSA mg / mL and 0.781 to 6.25 mg / mL for the UR. The study of the evaluation of synergism using the Kirby-Bauer method and checkerboad showed that the interference exerted by the essential oil on the antimicrobial action vary with the type of antibiotic and the type of strain tested. Isobologram charts obtained by checkerboard method suggests a synergism between good and OELaII Oxacillin for all the microorganisms tested. The study of the mechanism of action on inhibition OELaII /death ORSA strains, it was found that the OELaII reduced the number of viable cells in any growth stage. The same was not observed when cell division was halted by the presence of chloramphenicol, suggesting that OE acts mainly in the exponential growth phase (intense cell division). The death curve by microbial activity and OELaII Oxacillin showed a synergistic effect for the association OELaII-OXA, with a logarithmic decrease significantly when compared to treatment done alone. Given this biological potential, this study suggests that the Lippia alba can be used as a pharmaceutical ingredient in preparations of association with antimicrobial drugs in order to diminish the toxicity and increase its spectrum. However, there is the importance of studies on the elucidation of the different molecular targets through knowledge of its mechanism of action and toxicity testing in vitro, thus providing the safety and therapeutic efficacy of this important plant species users. / A espÃcie Lippia alba (Mill.) N. E. Brown habita praticamente todas as regiÃes do Brasil, onde à muito empregada na medicina popular. Estudos mostram que, entre os trÃs quimiotipos de L. alba do Nordeste Brasileiro, o quimiotipo II (OELaII), produz, em suas folhas, o Ãleo essencial com o maior e mais amplo potencial antimicrobiano. O objetivo deste estudo foi avaliar a interferÃncia do OELaII na atividade de Oxacilina e o seu mecanismo de aÃÃo frente a cepas de Staphylococcus aureus. A avaliaÃÃo da atividade antimicrobiana foi realizada pela determinaÃÃo da ConcentraÃÃo InibitÃria MÃnima (CIM) e ConcentraÃÃo Bactericida MÃnima (CBM), pelos mÃtodos de microdiluiÃÃo em caldo de cultura e espalhamento na superfÃcie do Ãgar Plate-Count, respectivamente. A avaliaÃÃo da interferÃncia do OELaII na atividade antimicrobiana da Oxacilina e outros antibiÃticos de uso foi realizada pela metodologia de disco-difusÃo modificado. O mÃtodo de Checkerboard, cÃlculo dos Indices da ConcentraÃÃo InibitÃria Fracionada e construÃÃo de grÃficos Isobologramas foi utilizado na avaliaÃÃo da interferÃncia do OELaII na atividade antimicrobiana da Oxacilina. O estudo do mecanismo de aÃÃo do OELaII sobre cepas de S. aureus foi realizado pela avaliaÃÃo da atividade antimicrobiana do OE nas fases de crescimento exponencial e estacionÃrio, bem como pela aÃÃo do cloranfenicol sobre o crescimento exponencial. O efeito do tempo de exposiÃÃo ao OELaII, Oxacilina e OELaII-OXA sobre cepas de S. aureus foi verificado pelo traÃado das curvas de tempo de morte, sendo considerado sinergismo as associaÃÃes em que foi verificado uma reduÃÃo do nÃmero de cÃlulas viÃveis, apÃs 24-48 horas quando comparado a cada composto isoladamente. Os resultados obtidos revelaram que a CIM e CBM do OELaII para cepas de S. aureus oxacilina-resistente (ORSA) sÃo iguais ou muito prÃximas Ãquelas constatadas para as cepas sensÃveis (OSSA), variando de 0,312-1,25 mg/mL e 1,25-5,0 mg/mL para a primeira; e 0,312-0,625 mg/mL e 0,625-2,5 mg/mL para a segunda. Para a Oxacilina os valores encontrados foram de 6,25-200 mg/mL e 25 e 400 mg/mL para as ORSA e 0,390-3,12 mg/mL e 0,781-6,25 mg/mL para as OSSA. O estudo da avaliaÃÃo do sinergismo, pelo mÃtodo de Kirby-Bauer e por checkerboad, mostrou que a interferÃncia exercida pelo Ãleo essencial sobre a aÃÃo dos antimicrobianos varia de acordo com o tipo de antibiÃtico e o tipo de cepa testada. Os grÃficos de isobolograma obtidos pelo mÃtodo de checkerboard sugerem um bom sinergismo entre o OELaII e a Oxacilina para todos os micro-organismos testados. Pelo estudo do mecanismo de aÃÃo do OELaII na inibiÃÃo/morte de cepas ORSA, verificou-se que o OELaII reduziu o nÃmero de cÃlulas viÃveis em qualquer estÃgio de crescimento. O mesmo nÃo foi verificado quando a divisÃo celular foi interrompida pela presenÃa de cloranfenicol, sugerindo que o OE age, principalmente, na fase exponencial de crescimento (intensa divisÃo celular). A curva de morte microbiana pela atividade do OELaII e Oxacilina, mostrou um efeito sinÃrgico para a associaÃÃo OELaII-OXA, com uma reduÃÃo logarÃtima significativa, quando comparado ao tratamento feito isoladamente. Diante desse importante potencial biolÃgico, este estudo sugere que a Lippia alba possa ser utilizado como insumo farmacÃutico em preparaÃÃes de associaÃÃo com medicamentos antimicrobianos visando a diminuir a toxicidade e aumentar o seu espectro de aÃÃo. Todavia, surge a importÃncia de estudos sobre a elucidaÃÃo dos diferentes alvos moleculares atravÃs do conhecimento do seu mecanismo de aÃÃo, bem como testes de toxicidade in vitro, oferecendo assim, seguranÃa e eficÃcia terapÃutica aos usuÃrios dessa importantes espÃcie vegetal

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A.baumannii é um importante patógeno em infecções nosocomiais principalmente por sua capacidade de se tornar resistente aos antimicrobianos. Surtos de A.baumannii resistente aos carbapenêmicos (ABRC) têm sido descritos em todo mundo. Devido à emergência de resistência aos antimicrobianos e ausência de novas opções de tratamento, as polimixinas reemergiram como opção de terapia contra infecções causadas por A.baumannii. O uso de polimixina é associado a maior mortalidade e menor eficácia comparada a outros antimicrobianos. Alguns estudos in vitro têm avaliado a combinação de polimixina com outros antimicrobianos a fim de aumentar a eficácia dos tratamentos. O objetivo deste estudo foi avaliar o sinergismo entre a polimixina B com outros antimicrobianos em isolados de ABRC, pelo método de Curvas Tempo-Morte bacteriana (Time- Kill Curves). Os isolados foram provenientes de banco de amostras e foram avaliadas as combinações de polimixina B com carbapenêmicos (imipenem e meropenem), tigeciclina, rifampicina, amicacina e ceftazidima. As combinações foram testadas nos tempo 0, 30’, 1,4,12 e 24 h. Sinergismo entre polimixina B foi demonstrado contra todos antimicrobianos para ambos isolados, exceto para ceftazidima e imipenem no isolado 1. Nosso estudo mostrou que tigeciclina, amicacina e rifampicina são agentes mais ativos combinados com polimixina B, sendo assim estes agentes podem apresentar efeito benéfico em combinação com a polimixina no tratamento de ABRC. / A.baumannii is an important pathogen in nosocomial infections primarily for its ability to become resistant to antimicrobials. Outbreaks carbapenem- resistant A.baumannii (CRAB) has been described worldwide. Due to the emergence of antimicrobial resistance and the absence of new treatment options, the polymyxins reemerged as an option therapy against infections caused by A.baumannii. The use of polymyxin is associated with higher mortality and lower effectiveness compared to other antimicrobials. In vitro studies have evaluated the combination of polymyxin with other antimicrobial agents to enhance the effectiveness of the treatments. This study was to evaluate the synergy between polymyxin B with other antimicrobials in isolates from ABRC, by Time-Kill Curves. The isolates were from stool samples and were evaluated combinations of polymyxin B with carbapenems (imipenem and meropenem), tigecycline, rifampin, amikacin and ceftazidime. The combinations were tested at time 0, 30 ', 1,4,12 and 24 h. Synergism between polymyxin B was demonstrated against all antimicrobials for both isolates, except for ceftazidime and imipenem in isolated 2. Our study showed that tigecycline, amikacin and rifampicin more active agents are combined with polymyxin B, and thus these agents may have a beneficial effect in combination with a polymyxin in treating CRAB.