Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniv. / Härtill 5 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniversitet, 2006. / Härtill 5 uppsatser.

Thesis (Ph. D.)--University of Alabama at Birmingham, 2006. / Additional advisors: Vithal K. Ghanta, Denise R. Shaw, Stephen A. Watts, Bradley K. Yoder. Description based on contents viewed Feb. 20, 2009; title from PDF t.p. Includes bibliographical references.

A coleta de sêmen da cauda do epidídimo é a última oportunidade de obter espermatozoides de garanhões valiosos, sendo que durante a criopreservação, a etapa de centrifugação é considerada um ponto crítico. A principal hipótese é que a centrifugação com coloides pode melhorar a qualidade dos espermatozoides coletados da cauda do epidídimo de garanhões. Para avaliação da hipótese foram realizados dois experimentos. O experimento um teve por objetivo avaliar o efeito da centrifugação com cushion e com coloide em camada única (SLC) na motilidade de sêmen do epidídimo de garanhões após a etapa de centrifugação. O experimento dois teve o objetivo de determinar o efeito da SLC prévio ao congelamento e após o descongelamento. Experimento 1) Oito garanhões foram submetidos à orquiectomia bilateral e o sêmen foi coletado da cauda dos epidídimos (n=16). Após a coleta, as amostras foram submetidas a três protocolos de centrifugação: Convencional (20 minutos a 600xg), cushioned (20 minutos a 900xg) e SLC (20 minutos a 300xg). Os pellets foram ressuspendidos e as amostras foram submetidas à avaliação laboratorial de motilidade e morfologia espermática. Experimento 2) Dez garanhões foram submetidos a orquiectomia bilateral e o sêmen foi coletado da cauda dos epidídimos (n=20). Para criopreservação, as amostras foram submetidas a: centrifugação convencional (20 minutos a 600xg), SLC prévio a criopreservação (SLC-Pre) (20 minutos a 300xg) e SLC após a criopreservação (SLC+) (20 minutos a 600xg seguidos de uma segunda centrifugação descrita após descongelamento). Os pellets foram ressuspendidos em diluente de congelamento, submetidos ao processo de congelamento em nitrogênio líquido e descongelamento. Os grupos de 6 centrifugação convencional e SLC-Pre foram avaliados imediatamente após descongelamento. O grupo SLC+ foi descongelado e submetido à SLC (20 minutos a 300xg) e ressupendido em diluente de congelamento (SLC+F) ou resfriamento (SLC+C). A motilidade total e a motilidade progressiva das amostras foram avaliadas com análise computadorizada do movimento espermático. A morfologia foi avaliada com auxílio de microscópio com contraste de fase. Funcionalidade de mitocôndria, integridade de membrana e DNA foram avaliados com auxílio de microscópio de fluorescência. Os dados foram analisados por estatística descritiva, simple one-way ANOVA e Teste de Tukey. Experimento 1) a motilidade de espermatozoide submetidos à SLC (p<0,05) e cushion (p>0,05) foi superior do que os submetidos a centrifugação convencional. Experimento 2) SLC-Pre e SLC+F apresentaram maior motilidade total, enquanto SLC+F apresentou maior motilidade progressiva. O percentual de espermatozoides com morfologia normal foi maior em SLC-Pre e SLC+F. A funcionalidade de mitocôndria foi maior em todos grupos com SLC, enquanto a integridade de membrana foi maior em SLC-Pre. A centrifugação com coloides melhorou a qualidade de espermatozoides coletados da cauda do epidídimo de garanhões, tanto no momento prévio ao congelamento como após o descongelamento. / Epididymis cauda sperm recovery and cryopreservation are last opportunity to obtain spermatozoa from a valuable animal, even though during cryopreservation centrifugation step is considered as a critical point. It is hypothesized that colloidal centrifugation could enhance epididymal stallion sperm parameters. To evaluate this hypothesis two experiments were performed. In experiment one, the objective was to evaluate the effect of cushioned and Single Layer Centrifugation (SLC) on epididymal stallion sperm motility postcentrifugation. In experiment two, the objective was to determine the effect of SLC on epididymal stallion sperm quality pre-freezing and post-thawing. Experiment 1) Eight stallions were submitted to bilateral orchiectomy and the resulting epididymal cauda (n = 16) were flushed with semen extender. After harvesting, samples were submitted to three centrifugation protocols: conventional (20 minutes at 600xg), cushioned (20 minutes at 900xg), and SLC (20 minutes at 300xg). Pellets were resuspended, motility and morphology were evaluated. Experiment 2) Ten stallions were submitted to bilateral orchiectomy and epididymal cauda (n=20) were harvested. For cryopreservation, epididymal sperm were submitted to: conventional centrifugation (20 minutes at 600xg), Single Layer Centrifugation prior cryopreservation (SLC-Pre) (20 minutes at 300xg) and Single Layer Centrifugation after cryopreservation (SLC+) (20 minutes at 600xg followed by a second centrifugation described after thawing). Pellets were resuspended in freezing extender, submitted to cryopreservation process in liquid nitrogen and thawed. Conventional and SLC-Pre were evaluated immediately after thawing. SLC+ samples were thawed, submitted to SLC (20 minutes at 300xg) and the pellets were resuspended with freezing (SLC+F) and cooling extender (SLC+C). Total motility (TM) and progressive 8 motility (PM) were evaluated with computer-assisted semen analyses. Sperm morphology was evaluated under a phase-contrast microscope. Mitochondrial functionality, membrane e DNA integrity were evaluated with an epifluorescence microscope. Data was evaluated by descriptive statistics, simple one-way ANOVA and comparison between means by Tukey test. Significance was assigned to all values p<0.05. Experiment 1) Motility of spermatozoa recovered by SLC (p<0.05) and cushioned centrifugation (p>0.05) were higher than those recovered by conventional centrifugation. Experiment 2) SLC-Pre and SLC+F yielded the highest TM, while SLC+F yielded the highest PM. Higher morphological normal sperm was observed in SLC-Pre and SLC+F. Mitochondrial functionality was significantly higher in all treatments with SLC, while membrane integrity was higher in SLC-Pre. Colloidal centrifugation improved epididymal sperm quality before freezing and after thawing.

SOUZA, Carlos Eduardo Azevedo. Análise proteômica do plasma seminal e secreções do epidídimo em ruminantes: potenciais associações com o desenvolvimento sexual, parâmetros seminais e função espermatica. 2007. 185 f. Tese (doutorado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2007. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-07T19:20:05Z No. of bitstreams: 1 2007_tese_ceasouza.pdf: 1841396 bytes, checksum: 739bf3cd94874396bf0fb93e6971b775 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-25T19:34:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_tese_ceasouza.pdf: 1841396 bytes, checksum: 739bf3cd94874396bf0fb93e6971b775 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-25T19:34:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_tese_ceasouza.pdf: 1841396 bytes, checksum: 739bf3cd94874396bf0fb93e6971b775 (MD5) Previous issue date: 2007 / This research includes three different studies, evaluating distinct aspects about the composition of proteins expressed in the ruminant reproductive tract fluids. The first study describes variations in the seminal plasma protein profile of Santa Inês rams. The second identifies proteins present in the cauda epididymal fluid of Holstein bulls, and the third study details the binding pattern of BSPs and osteopontin to bovine sperm membrane. In Study 1, semen samples of sixteen rams were collected and centrifuged to obtain seminal plasma. A volume containing 150 μg of proteins was used to prepare the 2D gels, which were scanned and electronically analyzed. The quantification of the protein spots was given as PPM of the total integrated optical density. We detected 186 ± 10 spots in the gels prepared with the 48 weeks samples, similar to the amount found in the gels obtained from samples of 34 (183) and 30 (179) weeks of age. Maps representing 34 and 48 weeks showed a train of spots with 63 kDa (pI 4.2 to 5.0) that was not present in early ages. New proteins were detected in the gels as the rams matured. In the maps of 20 weeks, high molecular weight trains (158 to 160 kDa) were detected compared to other gels obtained before that age. Quantitative changes in the spots with age were more evident before puberty. We also described a relationship between the intensity of some spots in the 48-week maps and semen scores. We conclude that protein secretion in the seminal plasma of hairy rams is synchronized with a series of complex changes during the sexual development of the males. The objective of Study 2 was to describe the binding pattern of OPN and BSP proteins to the membrane of ejaculated bovine sperm and after in vitro exposure of these cells to bovine oviductal fluid. Semen samples of five Holstein bulls were obtained and subjected to the following treatments: 1. Ejaculated sperm; 2. Ejaculated sperm incubated with isthmus oviductal fluid; 3. Ejaculated sperm incubated sequentially with isthmus and ampullary oviductal fluid. From each of these treatments, sperm samples were subjected to immunocytochemistry and confocal microscopy. Positive reaction for BSP-A1/A2 was detected in the midpiece, equatorial and post-equatorial regions and acrosome, in all treatments. The signal was higher in the midpiece compared to the rest of the cells, irrespective of the treatment. The binding pattern of BSP-30kDa was similar to that observed for BSP-A1/A2. Additionally, sperm with a reacted acrosome showed a reduction in the signal of 4.9 and 3.6 times, after exposure to isthmic and ampullary fluids, respectively. OPN binding was detected in the post-equatorial region and acrosome of ejaculated sperm, with higher intensity in the acrosome. A greater amount of capacitated sperm and capable of acrosome reaction in response to LPC was seen after exposure to isthmic (39.8% and 79%) and ampullary (20.5% and 69.3%, respectively) compared to sperm exposed to MTMS alone (12.3% and 49.3%) or heparin (23.7% and 38.9%). We conclude that sperm exposure to oviductal fluids influences interactions between seminal plasma proteins and sperm membrane, possibly modulating sperm function. In Study 3, we used a proteomic approach to identify the proteins present in cauda epididymal fluid (CEF) of Holstein bulls. CEF samples were obtained from 11 bulls and used to prepare 2D gels. The spots were cut and identified using mass spectrometry. This first analysis showed that albumin composed almost 21% of the total intensity of the spots, interfering with the identification of low abundance proteins. To improve resolution, we depleted albumin from the samples using affinity spin columns and new maps were prepared. Spots detected after depletion not seen before were also identified. We observed 114 ± 3 spots before albumin detection. We identified 55 of them, comprising 23 different proteins. Based on the optical density, the most abundant proteins in the CEF samples were albumin (21.1%), cholesterol binding proteins (6 low molecular weight isoforms; 10.5%), prostaglandin D synthase (7.6%) and gelsolin (6%), accounting for 45.2% of the proteins. Another 36 spots were also identified, corresponding to 13 different proteins. After albumin depletion, the intensity of the albumin spot in the gels was reduced to 10%, and the number of spots in the maps increased to 137 ± 4. Also, 48 spots were at least 3 times more abundant after depletion. The identity of those proteins suggest a wide range of functions, including sperm metabolism regulation, changes in membrane and sperm protection against oxidative damage during epididymal storage. / Este trabalho se compõe de três estudos distintos, avaliando diferentes enfoques da composição das proteínas expressas nos fluidos reprodutivos de ruminantes. O primeiro estudo descreve as variações no perfil protéico do plasma seminal de ovinos Santa Inês. O segundo avalia as proteínas presentes no fluido da cauda do epidídimo de touros Holandês maduros. A terceira parte mostra detalhes da distribuição topográfica e intensidade de ligação das BSPs e da osteopontina à membrana de espermatozóides bovinos. No estudo 1, amostras de sêmen de dezesseis cordeiros da raça Santa Inês foram colhidas. As amostras foram centrifugadas para obtenção do plasma seminal. Um volume contendo 150 µg de proteínas foi utilizado para a preparação de géis bidimensionais, que foram digitalizados e analisados. A quantificação das proteínas nos géis foi dada como PPM da densidade óptica total integrada de todas as proteínas, de acordo com o programa. Foram encontrados 186 ± 10 spots protéicos nos géis oriundos de amostras coletadas às 48 sem., semelhante ao encontrado às 34 (183) e 30 (179) semanas de idade. Os mapas representando 34 e 48 semanas apresentaram uma seqüência de spots de 63 kDa (pI 4,2 a 5,0) que não estava presente nas idades mais jovens. À medida que os animais amadureceram, novas proteínas foram detectadas no plasma seminal. Nos mapas de 20 semanas de idade, seqüências de elevada massa molecular (158 a 160 kDa) foram detectadas, diferentemente dos mapas obtidos em idades mais jovens. Mudanças quantitativas na secreção dos spots em função da idade foram mais evidentes durante a fase pré-púbere. Detectaram-se também relações entre a intensidade de alguns spots nos mapas protéicos de amostras obtidas às 48 sem. de idade e parâmetros espermáticos. Portanto, a secreção de proteínas no plasma seminal em cordeiros Santa Inês ocorre de forma sincronizada com uma série de alterações complexas no desenvolvimento sexual como um todo. Estas mudanças foram mais marcantes na fase de pré-puberdade, justamente quando os espermatozóides começaram a adquirir motilidade progressiva. O objetivo do estudo 2 foi avaliar a distribuição topográfica e a intensidade de ligação das proteínas BSP A1/A2, BSP-30kDa e OPN à membrana de espermatozóides ejaculados e após exposição destas células in vitro às secreções do oviduto. O padrão de ligação das proteínas BSP-A1/A2, BSP-30kDa e osteopontina foi avaliado em espermatozóides obtidos de sêmen fresco e exposto seqüencialmente aos fluidos do istmo (IODF) e da ampola (AODF) do oviduto. Foram utilizadas amostras de sêmen de cinco touros Holandês, submetidos às seguintes condições: 1. Espermatozóides ejaculados; 2. Espermatozóides ejaculados incubados com IODF; 3. Espermatozóides ejaculados + IODF incubados com AODF. De cada um desses tratamentos foram colhidas alíquotas de células espermáticas para o procedimento de imunocitoquímica e análise por microscopia confocal. Uma reação positiva para BSP-A1/A2 foi detectada na peça intermediária, regiões equatorial e pós-equatorial e acrossomo dos espermatozóides, em todos os tratamentos. A análise dos diferentes planos de várias células mostrou fluorescência significativamente mais intensa na peça intermediária, em comparação com o restante das células, independente das condições de incubação. O modelo de ligação da BSP-30kDa aos espermatozóides foi semelhante àquele observado para a BSP-A1/A2. Além disso, nos espermatozóides com acrossomo reagido, a fluorescência apresentou redução de 4,9 e 3,6 vezes após exposição aos fluidos do istmo e da ampola, respectivamente. A ligação da osteopontina foi identificada na região pós-equatorial e na extremidade do acrossomo em espermatozóides ejaculados, apresentando fluorescência mais intensa no acrossomo em comparação com o segmento pós-equatorial. A maior percentagem de células capacitadas e capazes de reação acrossômica em resposta ao LPC ocorreu após exposição das células aos fluidos do istmo (39,8% e 79%) e ampola (20,5% e 69,3%, respectivamente) em comparação aos espermatozóides expostos apenas ao MTMS (12,3% e 49,3%) e à heparina (23,7% e 38,9%). Conclui-se que a exposição dos espermatozóides aos fluidos do oviduto modifica as interações entre as BSPs, a osteopontina e a membrana espermática, sendo potencialmente um mecanismo modulatório da função espermática. No estudo 3, o objetivo foi utilizar uma abordagem proteômica para identificar detalhadamente as proteínas presentes no fluido epididimal de touros sexualmente maduros. Foram obtidas amostras de fluido da cauda do epidídimo (CEF) de 11 touros Holandês maduros, canulados nos ductos deferentes. As amostras foram utilizadas para a preparação de mapas protéicos, através de eletroforese 2D, os quais foram analisados pelo software PDQuest, sendo os spots identificados por espectrometria de massa. Esta primeira análise do CEF mostrou que cerca de 21% da intensidade de todos os spots dos géis era composta por albumina, prejudicando a identificação de proteínas menos abundantes. Para contornar esse obstáculo, a albumina foi parcialmente removida das amostras utilizando-se cromatografia de afinidade e foram preparados novos mapas bidimensionais, novamente sujeitos à análise computadorizada. Os spots detectados nesses novos géis, não identificados nos mapas anteriores foram também sujeitos a espectrometria de massa. Foram detectados 114 ± 3 spots, nas amostras antes da depleção de albumina, dos quais foram identificados 55, representando 23 proteínas. Com base na densidade óptica integrada dos spots, as proteínas mais abundantes no CEF foram albumina (21,1%), proteínas ligadoras de colesterol (6 isoformas de baixa massa molecular; 10,5%), prostaglandina D sintetase (PGDS; 7,6%), e gelsolina (6%), totalizando quase a metade (45,2%) do total de proteínas. Outros 36 spots também foram identificados, correspondendo a 13 diferentes proteínas. Após a depleção da albumina, o número de spots detectados nos mapas passou para 137 ± 4 spots. Comparação dos géis antes e após o procedimento de depleção, mostrou que a intensidade da albumina foi reduzida para 1/10 da intensidade nos géis não submetidos à depleção. Além do aumento no número de spots, 48 deles tiveram sua intensidade aumentada em 3X, pelo menos, nos géis depletados em comparação aos originais. A identidade dessas proteínas sugere que elas apresentam uma enorme gama de funções, incluindo a modulação do metabolismo espermático, participação na modificação superficial da membrana e proteção dos espermatozóides durante seu armazenamento na cauda epididimal.

Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A leptina tem um papel importante na regulação do sistema reprodutivo além de seu papel principal na regulação do peso corporal e ingestão alimentar. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração de leptina durante o período neonatal na função testicular da prole adulta. Vinte e quatro filhotes de 12 mães foram divididos em 2 grupos: Grupo leptina: injetados com 50 L de leptina (80ng/gPC, subcutânea) nos primeiros 10 dias de vida e Grupo Controle: injetados com o mesmo volume de solução salina. Todos os animais foram sacrificados aos 90 dias de vida. Parâmetros analisados: consumo alimentar, massa corporal, crescimento linear, data de início da puberdade, perfil lipídico, níveis séricos de estradiol e testosterona, expressão gênica (PCR em tempo real) e expressão proteica (Western blot) de ObRa, OBRb, aromatase, AR, ER, morfometria testicular, número, morfologia e viabilidade de espermatozoides. Os dados foram expressos como média erro padrão. A significância estatística foi determinada pelo teste t de Student. A Injeção de leptina levou a uma redução (p&#8804;0,008) no consumo alimentar a partir do dia 26 ao 40 e do dia 70 em diante, enquanto que a massa corporal (p&#8804;0,03) e o crescimento linear (p&#8804;0,05) foram reduzidos do dia 26 até o dia 45. O peso da hipófise (p&#8804;0,0006), hipotálamo (p&#8804;0,01), próstata (p&#8804;0,003), testículo (p&#8804;0,008) e epidídimo (p&#8804;0,004) e bexiga (p&#8804;0,009) foram significativamente reduzidos pela injeção de leptina. A Injeção de leptina adiantou o início da puberdade (C=45,0 0,3; L=41,6 0,3; dias, P&#8804;0,0001). Em relação ao perfil lipídico, a administração de leptina gerou um aumento nos níveis séricos de TG (C= 116,5 15,9; L=172,6 19,7; ng/dL, P&#8804;0,05) e uma redução nos níveis de HDL (C=33 1,5; L = 24 3,5; ng/dL, P&#8804;0,02). Os níveis séricos de testosterona também foram reduzidos pela leptina (C=5,2 1,0; L=1,1 0,3; ng/mL, P&#8804;0,003). Todos os genes avaliados por PCR em tempo real mostraram um aumento na sua expressão: Obra (C=0,32 0,04; L=0,69 0,16; P&#8804;0,04), OBRb (C=0,37 0,06; L=0,71 0,16; P&#8804;0,03), AR (C=0,28 0,02; L=0,71 0,16; P&#8804;0,02), Aromatase (C=0,31 0,04; L=0,53 0,09; P&#8804;0,04), ER-&#945; (C=0,79 0,03; L=0,93 0,03; P&#8804;0,01), ER-&#946; (C=0,29 0,03; L=0,73 0,16; P&#8804; 0,02). Por outro lado, a expressão proteica de OBR (C=4,4 0,29; L=6,6 0,84; P&#8804;0,05), ER-&#945; (C=0,4 0,02; L=0,6 0,05; P&#8804;0,03) e aromatase (C=0,4 0,03; L=0,5 0,02; P&#8804;0,04) aumentaram, enquanto que a expressão proteica de AR (C=0,16 0,01; L=0,09 0,01; P&#8804;0,009) foi reduzida pela administração de leptina. A análise morfométrica mostrou que a leptina levou a um aumento da área total do túbulo seminífero (C=64,6 3,1; L=56,1 2,1;&#956;m, P&#8804;0,01), aumento da área luminal (C=40,6 2,3; L= 48,7 0,9; &#956;m P&#8804; 0,004) e na altura do epitélio (C=21,5 1,2; L=24,6 1,1; &#956;m, P&#8804;0,03), enquanto que o comprimento do túbulo seminífero foi reduzido no grupo tratado (C=2200 350; L= 1100 110;cm, P&#8804;0,006). A administração de leptina levou a um aumento no número total de espermatozoides (C=20x107 2x107; L=30x107 5x107;Cls/mL, P&#8804;0,009) e no número de anormalidades (C=40,6 1,9; L=45,8 1,2, P&#8804;0,049). Podemos concluir que a leptina tem um papel importante na morfologia e função testicular. A leptina parece ter efeito direto neste tecido uma vez que a expressão gênica e proteica de OBR, AR, ER e aromatase foram alterados pela administração da leptina. / Leptin has an important role in regulating the reproductive system besides its main role in the regulation of body weight and food intake. The aim of this study was to evaluate the effect of leptin administration during the neonatal period in the testis function of the adult offspring. Twenty-four pups from 12 dams were separated into 2 groups: Leptin group: injected with 50&#956;L of leptin (80ng/gBW, subcutaneous); control group: injected with the same volume of saline solution for the first 10 days of life. All animals were killed at 90 days of life. Parameters analyzed: Body weight, linear growth and food consumption; onset of puberty, lipid profile, testosterone and estradiol serum levels, gene (Real time PCR) and protein expression (Western blot) of OBRa, OBRb, aromatase, AR, ER, testicular morphometry, spermatozoa number, morphology and viability. Data were expressed as mean standard error. Statistical significance was determined by students t-test. Leptin injection led to a reduction in food consumption (p&#8804;0.008) from day 26 to 40 and from day 70 onward while body weight (p&#8804;0.03) and linear growth (p&#8804;0.05) were reduced from 26 to 45 days of life. Pituitary (p&#8804;0.0006), hypothalamus (p&#8804;0.01), prostate(p&#8804;0.003), testis (p&#8804;0.008), epididymis(p&#8804;0.004) and bladder (p&#8804;0.009) weights were significantly reduced by leptin injection. Leptin injection also advanced the onset of puberty (C=45.0 0.3; L=41.6 0.3; days, P&#8804;0.0001). In relation to lipid profile, leptin administration led to an increase in TG (C=116.5 15.9; L=172.6 19.7; ng/dL, P&#8804;0.05) and a reduction in HDL (C=33 1.5; L=24 3.5; ng/dL, P&#8804;0.02) serum levels. Testosterone serum levels (C=5.2 1.0; L=1.1 0.28; ng/mL, P&#8804;0.003) were also reduced by leptin. All gene evaluated by real time PCR showed an increase in its expression: OBRa (C=0.32 0.04; L=0.69 0.16; P&#8804;0.04), OBRb (C=0.37 0.06; L=0.70 0.16; P&#8804;0.03), AR (C=0.28 0.02; L=0.71 0.16; P&#8804;0.02), Aromatase (C=0.31 0.04; L=0.53 0.09; P&#8804;0.04), ER-&#945; (C=0.79 0.03; L=0.92 0.03; P&#8804;0.01), ER-&#946; (C=0.29 0.03; L=0.7286 0.16; P&#8804;0.02). On the other hand, the protein expression of OBR (C=4.4 0.29; L=6.6 0.84; P&#8804;0.05), ER-&#945; (C=0.4 0.02; L=0.44 0.02; P&#8804;0.03) and aromatase (C=0.4 0.03; L=0.5 0.01;AU, P&#8804;0.04) were increased while AR (C=0.16 0.01; L=0.09 0.01; P&#8804;0.009) was reduced by leptin administration. The morphometric analysis showed that leptin led to an increase in the total area (C=64.6 3.1; L=56.1 2.1; &#956;m P&#8804;0.01) and luminal areas (C=40.6 2.3; L=48.7 0.9; &#956;m P&#8804;0.004) and in the epithelial height (C=21.5 1.2; L=24.6 1.1; &#956;m P&#8804;0.03), while the length of seminiferous tubule was reduced (C=2200 350; L= 1100 110; cm P&#8804;0.006). Leptin administration led to an increase in the total number of spermatozoa (C=20x107 2x107; L=30x107 5x107; P&#8804;0.009) and in the number of abnormalities (C=40.6 1.9; L=45.8 1.2; P&#8804;0.049). We can conclude that leptin has an important role in the morphology and testis function. The leptin effect seems to be direct in this tissue since the gene and protein expression of OBR, AR, ER and aromatase and spermatozoa number were changed by leptin administration.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:55:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 256712 bytes, checksum: 96078d7a918b47a581d54f5c6c68b221 (MD5) Previous issue date: 2006-08-14 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The aim of this study was to evaluate the effect of different cooling rates, equilibration times and permeating cryoprotectants on motility characteristics and plasma membrane integrity of cryopreserved goat spermatozoa. Three experiments were designed. In the first one was evaluated the effect of different cooling methods on goat semen cryopreservation. A total of 20 ejaculates from Saanen (n = 2) and Alpine (n = 2) goats were frozen using a standard dry skim milk yolk diluent with 5% glycerol. Aliquots of the extended semen were then cooled using two different cooling methods (PR1; Becker or PR2; Fürst, 2002), before being frozen in liquid nitrogen. The semen was evaluated by total motility, vigor and the response to hypoosmotic solution test (HOST), live/dead stain and thermo-resistance test (TRT), before and after thaw. In this experiment the cooling method PR2 protected cell viability better them PR1 during the criopreservation process, reducing cold shock damage and improving the cryosurvival of goat spermatozoa. In the second experiment was evaluated the effect of different equilibration times on motility characteristics and plasma membrane integrity of cryopreserved goat spermatozoa. A total of 20 ejaculates from Saanen (n = 2) and Alpine (n = 2) goats were frozen using a standard dry skim milk yolk diluent with 5% glycerol. Aliquots of the extended semen were then cooled using the cooling methodology described by Fürst (2002) and remained at the temperature of 5-4 °C by a period of 15 minutes (TE1) or 75 minutes (TE2). The semen was evaluated by total motility, vigor and the response to hypoosmotic solution test (HOST), live/dead stain and thermoresistance test (TRT), before and after thaw. In this experiment the equilibration time of 75 minutes protected the cell viability better than the period of 15 minutes during the criopreservation process, improving the cryosurvival of goat spermatozoa. In the third experiment was evaluated the effect of the glycerol (G) and ethylene glycol (EG), on motility characteristics of cryopreserved goat spermatozoa by the in vitro semen analyses. A total of 20 ejaculates from Saanen (n = 2) and Alpine (n = 2) goats were frozen using a standard dry skim milk-yolk diluent with 5% glycerol. Aliquots of the extended semen were then cooled using the cooling methodology described by Fürst (2002). The semen was evaluated by total motility, vigor and the response to hypoosmotic solution test (HOST), live/dead stain and thermo-resistance test (TRT), before and after thaw. In this experiment EG promoted a better protection of the spermatic cell viability during the cryopreservation than the G. In conclusion the use of the cooling method PR2 associated with the one hour equilibration period and the ethylene glycol improved the motility characteristics and integrity of plasma membrane, increasing the number of viable goat spermatozoa after cryopreservation. / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de diferentes protocolos de resfriamento, tempos de equilíbrio e crioprotetores permeáveis sobre as características de motilidade e integridade de membrana de espermatozóides caprinos criopreservados. Para tal, foram delineados três experimentos. No experimento 1, avaliou-se o efeito de diferentes protocolos de resfriamento sobre a criopreservação de sêmen caprino. Um total de 20 ejaculados de bodes das raças Saanen (n = 2) e Alpina (n = 2) foram congelados utilizandose um meio à base de leite desnatado-gema, acrescido de 5% de glicerol. Alíquotas do sêmen, então, diluído, foram resfriadas até 5 °C, utilizando dois protocolos de resfriamento diferentes (PR1; média de -0,12 °C/min e PR2; média de -0,4 °C/min), antes de serem congeladas em nitrogênio liquido. O sêmen foi avaliado quanto à sua motilidade espermática progressiva, vigor, taxa de recuperação da motilidade, resposta ao teste hiposmótico (HOST) e coloração. Nesse experimento, a curva de resfriamento PR2 promoveu uma melhor proteção aos efeitos causados pelo choque térmico durante a criopreservação do sêmen caprino, que a curva PR1. No experimento 2, avaliou-se o efeito de dois períodos de equilíbrio sobre as características de motilidade e integridade de membrana de espermatozóides caprinos criopreservados. Um total de 20 ejaculados de animais da raça Saanen (n = 2) e Alpina (n = 2) foram congelados utilizando-se um meio à base de leite desnatado-gema, acrescido de 5% de glicerol. Alíquotas do sêmen diluído foram, então, resfriadas segundo Fürst (2002), e mantidas a temperatura de 5 °C, por um período de 15 minutos (TE1) ou 75 minutos (TE2) antes de serem congeladas em nitrogênio liquido. O sêmen foi avaliado quanto à sua motilidade espermática progressiva, vigor, resposta ao teste hiposmótico (HOST), ao teste supravital e ao teste de termorresistência (TTR), antes e após o congelamento. Nesse experimento, o tempo de equilíbrio de 75 minutos promoveu uma melhor criopreservação do sêmen caprino que o tempo de equilíbrio curto, de 15 minutos. No experimento 3, avaliou-se o efeito do glicerol e etileno glicol sobre a criopreservação de sêmen caprino, por meio de análises in vitro do sêmen. Um total de 20 ejaculados de animais da raça Saanen (n = 2) e Alpina (n = 2) foram congelados utilizando-se um meio à base de leite desnatado-gema, acrescido de 5% de glicerol. Alíquotas do sêmen diluído foram, então, resfriadas, utilizando-se a metodologia descrita por Fürst (2002). O sêmen foi avaliado quanto à sua motilidade espermática progressiva, vigor, resposta ao teste hiposmótico (HOST), ao teste supravital e ao teste de termorresistência (TTR), antes e após o congelamento. Nesse experimento, o uso do EG como crioprotetor permeável promoveu uma melhor proteção à viabilidade da célula espermática, durante o processo de criopreservação, que o glicerol. Em conclusão, o uso do protocolo de resfriamento 2, associado a um período de equilíbrio de 1 hora e ao uso do etileno glycol, promoveu uma melhor proteção das características de motilidade e integridade de membrana, aumentando a viabilidade dos espermatozóides caprinos congelados.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-30Bitstream added on 2014-06-13T19:59:07Z : No. of bitstreams: 1 silva_rb_me_jabo.pdf: 1298125 bytes, checksum: 1ad82f6104f2a03b81c31c4de310d4d7 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Foram investigados os efeitos da irradiação com diodos lasers operando em 780 nm (infravermelho) e 660 nm (visível) na maturação, fertilização e cultivo in vitro de embriões bovinos. Verificou-se que a irradiação de oócitos com ambos os lasers, durante 30, 60, 120 e 180 segundos (L30, L60, L120, L180) não afetou (p>0,05) as taxas de maturação nuclear (Infravermelho: L30 - 88,92% vs. C30 – 81,84%; L60 – 83,56% vs. C60 – 87,40%; L120 – 76,06% vs. C120 – 85,30%; L180 – 77,42% vs. C180 - 80,16%; e Visível: L30 – 65,81% vs. C30 – 71,59%; L60 – 62,75% vs. C60 – 69,62%; L120 – 70,38% vs. C120 – 64,04%; L180 – 56,72% vs. C180 – 67,41%), e de maturação citoplasmática, avaliada por meio da distribuição dos grânulos corticais (Infravermelho: L30 – 86,18% vs. C30 – 61,04%; L60 – 66,03% vs. C60 – 56,16%; L120 – 53,75% vs. C120 – 79,81%; L180 – 57,70% vs. C180 – 82,04% e Visível: L30 – 81,08% vs. C30 – 74,42%; L60 – 68,11% vs. C60 – 61,63%; L120 – 75,95% vs. C120 – 48,33%; L180 – 77,77% vs. C180 – 59,52%). As porcentagens de produção embrionária ao sétimo dia de cultivo in vitro não foram alteradas (p>0,05) após a irradiação de oócitos com laser infravermelho (L30 – 29,20% vs. C30 – 42,60%; L60 – 32,0% vs. C60 – 31,0%; L120 – 38,0% vs. C120 – 35,0%; L180 – 37,0% vs. C180 – 32,0%), mas foram reduzidas após a irradiação com laser visível durante 180 seg. (L180 – 36,0% vs. C180 – 56,0 %). A irradiação em espermatozóides com ambos os lasers não afetou (p>0,05) as taxas de clivagem ao terceiro dia de cultivo in vitro (Infravermelho: L30 – 90,0% vs. C30 – 95,83%; L60 – 85,56% vs. C60 – 98,33%; L120 – 90,83% vs. C120 – 90,83%; L180 – 89,72% vs. C180 – 97,50%; e Visível: L30 – 82,96% vs. C30 – 85,61%; L60 – 82,10% vs. C60 – 82,53%; L120 – 80,48% vs. C120 – 82,44%;... / The diodo lasers irradiation effects, operating in 780nm (infrared light) and 660 nm (visible light), were evaluated on in vitro maturation, fertilization and culture rates of bovine embryos. Both infrared and visible laser irradiation on oocytes, during 30, 60, 120 and 180 seconds (30, 60, 120, 180) did not change (p>0,05) the rates of nuclear maturation (Infrared: L30 – 88.92% vs. C30 – 81.84%; L60 – 83.56% vs. C60 – 87.40%; L120 – 76.06% vs. C120 – 85.30%; L180 – 77.42% vs. C180 – 80.16%; and Visible: L30 – 65.81% vs. C30 – 71.59%; L60 – 62.75% vs. C60 – 69.62%; L120 – 70.38% vs. C120 – 64.04%; L180 – 56.72% vs. C180 – 67.41%), and the cytoplasmic cortical granule distribution (Infrared: L30 – 86.18% vs. C30 – 61.04%; L60 – 66.03% vs. C60 – 56.16%; L120 – 53.75% vs. C120 – 79.81%; L180 – 57.70% vs. C180 – 82.04% and Visible: L30 – 81.08% vs. C30 – 74.42%; L60 – 68.11% vs. C60 – 61.63%; L120 – 75.95% vs. C120 – 48.33%; L180 – 77.77% vs. C180 – 59.52%). The in vitro embryo production rates measured on seventh day of culture were not changed (p.0,05) after the infrared laser irradiation (L30 – 29.20% vs. C30 – 42.60%; L60 – 32.0% vs. C60 – 31.0%; L120 – 38.0% vs. C120 – 35.0%; L180 – 37.0% vs. C180 – 32.0%), but they were reduced (p<0,05) after the visible laser irradiation during 180 seconds (L180 – 36.0% vs. C180 – 56.0 %). When spermatozoa were irradiated, both lasers did not change the rates of cleavage (p>0,05) on third day of in vitro culture (Infrared: L30 – 90.0% vs. C30 – 95.83%; L60 – 85.56% vs. C60 – 98.33%; L120 – 90.83% vs. C120 – 90.83%; L180 – 89.72% vs. C180 – 97.50%; and Visible: L30 – 82.96% vs. C30 – 85.61%; L60 – 82.10% vs. C60 – 82.53%; L120 – 80.48% vs. C120 – 82.44%; L180 – 83.53% vs. C180 – 87.15%), the embryo production percentages on seventh day ...(Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-17Bitstream added on 2014-06-13T20:59:38Z : No. of bitstreams: 1 gonzalescadavid_v_me_jabo.pdf: 429592 bytes, checksum: 2cf62512218e0651d7acdf97deb6dd74 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O experimento foi realizado em uma suinocultura de produção comercial da linhagem Topigs, utilizando dez machos reprodutores, com o objetivo de avaliar o efeito das suplementações intramusculares com vitaminas e minerais (Selen- Fos® e Zimag®) na qualidade espermática do sêmen in natura e após a congelação. Foram realizadas duas análises estatísticas: Multivariada para descrição das alterações observadas; ANOVA utilizando o modelo inteiramente casualizado. As variáveis seminais analisadas foram: volume, concentração, turbilhonamento, motilidade, vigor, porcentagem de espermatozóides vivos, mortos, e vivos sem acrossomo, morfologia e integridade da membrana (Teste hiposmótico). O experimento foi dividido em duas fases. Na primeira fase o sêmen in natura dos 10 cachaços foi avaliado e posteriormente congelado. Uma vez terminada esta fase iniciou-se a segunda fase onde sete animais receberam as suplementações com vitaminas e minerais via intravenosa e três permaneceram sem recebê-las. Após um período de 60 dias contados a partir do dia da administração das vitaminas e dos minerais se iniciaram novamente as coletas de sêmen e as avaliações tanto in natura como o descongelado. O sêmen in natura apresentou melhor qualidade espermática quando comparado com o sêmen descongelado e o sêmen dos cachaços que receberam as suplementações tiveram melhora (p 0,05) significativa na qualidade do sêmen e na criotolerância / The experiment was conducted in a commercial swine production using ten boars of Topigs® line. The aim was to evaluate the effect of intramuscular supplementation of vitamins and minerals (Selen-Fos® and Zimag®) on fresh semen quality and after freezing. Two statistical analysis were used: multivariate description of the observed changes and ANOVA with randomized design. Analyzed seminal variables were: concentration, turbilhamento, motility, vigor, percentage of live sperm, dead and alive without acrosome, morphology and membrane integrity (HO). The experiment was divided into two phases. In the first phase, the fresh semen of 10 boars was evaluated and subsequently frozen. About three days after the freezing process, the semen was thawed and the quality was assessed. After this in the second phase, seven boars received intramuscular supplementation of minerals and vitamins and three boars received without the supplementation for control. About 60 days later, all these boars were submitted to semen collection and the semen was again evaluated both, fresh and thawed. The fresh semen showed better quality than the frozenthawed in the two phases of the experiment (p< 0,05). The semen of boars that received the supplementation had a significant improvement on semen quality and freezing resistant (p< 0,05)

Resumo: Foram investigados os efeitos da irradiação com diodos lasers operando em 780 nm (infravermelho) e 660 nm (visível) na maturação, fertilização e cultivo in vitro de embriões bovinos. Verificou-se que a irradiação de oócitos com ambos os lasers, durante 30, 60, 120 e 180 segundos (L30, L60, L120, L180) não afetou (p>0,05) as taxas de maturação nuclear (Infravermelho: L30 - 88,92% vs. C30 - 81,84%; L60 - 83,56% vs. C60 - 87,40%; L120 - 76,06% vs. C120 - 85,30%; L180 - 77,42% vs. C180 - 80,16%; e Visível: L30 - 65,81% vs. C30 - 71,59%; L60 - 62,75% vs. C60 - 69,62%; L120 - 70,38% vs. C120 - 64,04%; L180 - 56,72% vs. C180 - 67,41%), e de maturação citoplasmática, avaliada por meio da distribuição dos grânulos corticais (Infravermelho: L30 - 86,18% vs. C30 - 61,04%; L60 - 66,03% vs. C60 - 56,16%; L120 - 53,75% vs. C120 - 79,81%; L180 - 57,70% vs. C180 - 82,04% e Visível: L30 - 81,08% vs. C30 - 74,42%; L60 - 68,11% vs. C60 - 61,63%; L120 - 75,95% vs. C120 - 48,33%; L180 - 77,77% vs. C180 - 59,52%). As porcentagens de produção embrionária ao sétimo dia de cultivo in vitro não foram alteradas (p>0,05) após a irradiação de oócitos com laser infravermelho (L30 - 29,20% vs. C30 - 42,60%; L60 - 32,0% vs. C60 - 31,0%; L120 - 38,0% vs. C120 - 35,0%; L180 - 37,0% vs. C180 - 32,0%), mas foram reduzidas após a irradiação com laser visível durante 180 seg. (L180 - 36,0% vs. C180 - 56,0 %). A irradiação em espermatozóides com ambos os lasers não afetou (p>0,05) as taxas de clivagem ao terceiro dia de cultivo in vitro (Infravermelho: L30 - 90,0% vs. C30 - 95,83%; L60 - 85,56% vs. C60 - 98,33%; L120 - 90,83% vs. C120 - 90,83%; L180 - 89,72% vs. C180 - 97,50%; e Visível: L30 - 82,96% vs. C30 - 85,61%; L60 - 82,10% vs. C60 - 82,53%; L120 - 80,48% vs. C120 - 82,44%; ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The diodo lasers irradiation effects, operating in 780nm (infrared light) and 660 nm (visible light), were evaluated on in vitro maturation, fertilization and culture rates of bovine embryos. Both infrared and visible laser irradiation on oocytes, during 30, 60, 120 and 180 seconds (30, 60, 120, 180) did not change (p>0,05) the rates of nuclear maturation (Infrared: L30 - 88.92% vs. C30 - 81.84%; L60 - 83.56% vs. C60 - 87.40%; L120 - 76.06% vs. C120 - 85.30%; L180 - 77.42% vs. C180 - 80.16%; and Visible: L30 - 65.81% vs. C30 - 71.59%; L60 - 62.75% vs. C60 - 69.62%; L120 - 70.38% vs. C120 - 64.04%; L180 - 56.72% vs. C180 - 67.41%), and the cytoplasmic cortical granule distribution (Infrared: L30 - 86.18% vs. C30 - 61.04%; L60 - 66.03% vs. C60 - 56.16%; L120 - 53.75% vs. C120 - 79.81%; L180 - 57.70% vs. C180 - 82.04% and Visible: L30 - 81.08% vs. C30 - 74.42%; L60 - 68.11% vs. C60 - 61.63%; L120 - 75.95% vs. C120 - 48.33%; L180 - 77.77% vs. C180 - 59.52%). The in vitro embryo production rates measured on seventh day of culture were not changed (p.0,05) after the infrared laser irradiation (L30 - 29.20% vs. C30 - 42.60%; L60 - 32.0% vs. C60 - 31.0%; L120 - 38.0% vs. C120 - 35.0%; L180 - 37.0% vs. C180 - 32.0%), but they were reduced (p<0,05) after the visible laser irradiation during 180 seconds (L180 - 36.0% vs. C180 - 56.0 %). When spermatozoa were irradiated, both lasers did not change the rates of cleavage (p>0,05) on third day of in vitro culture (Infrared: L30 - 90.0% vs. C30 - 95.83%; L60 - 85.56% vs. C60 - 98.33%; L120 - 90.83% vs. C120 - 90.83%; L180 - 89.72% vs. C180 - 97.50%; and Visible: L30 - 82.96% vs. C30 - 85.61%; L60 - 82.10% vs. C60 - 82.53%; L120 - 80.48% vs. C120 - 82.44%; L180 - 83.53% vs. C180 - 87.15%), the embryo production percentages on seventh day ...(Complete abstract, click electronic access below) / Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: César Roberto Esper / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Nivaldo Antonio Parizotto / Mestre