O abate Shechita de aves, diferentemente do abate convencional, realiza o processo religioso conhecido como melichah, que consiste de três etapas: imersão em água, salga e dessalga das carcaças. Alguns estudos indicam que a salga pode ser benéfica para a qualidade microbiológica do produto, mas não se encontrou referência às bactérias halotolerantes como o Staphylococcus aureus e nem aos micro-organismos aeróbios mesófilos em frangos. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a influência da etapa de salga na população de S. aureus e de microorganismos aeróbios mesófilos, identificar as espécies de Staphylococcus não produtoras de coagulase presentes e caracterizar fenotípica e genotipicamente os isolados de S. aureus e demais espécies. Para tanto foram coletadas 304 amostras de carcaças de aves, sendo metade obtida antes da etapa de salga e a outra metade após a dessalga. S. aureus esteve presente em 13/304 (4,3%) amostras, sendo que nove foram coletadas antes da salga. A população média de S. aureus nessas amostras foi de 2,5x10 UFC/g antes da salga e 8,9 UFC/g após a des salga, e de micro-organismos aeróbios mesófilos foi de 5,4x103 UFC/g antes da salga e 4,5x103 após a dessalga, variação esta que pode ser considerada normal e não decorrente da etapa de salga. Face à baixa frequência de S. aureus nas amostras, simulou-se o melichah em laboratório, sendo que o processo levou à redução significativa (p<0,05) da população de S. aureus. Todos os isolados identificados como S. aureus pelos diferentes métodos empregados foram capazes de produzir coagulase, portavam o gene nuc que é específico para essa espécie, mas não apresentavam o gene mecA que codifica para a resistência à meticilina. Em 88% (36/41) dos isolados identificados como S. aureus detectaram-se os genes codificadores para enterotoxina estafilocócica (SE) G e I, mas não os genes para as enterotoxinas clássicas. A maioria (37/41, 90,2%) desses isolados foi sensível aos antibióticos testados. Dentre as 890 colônias de Staphylococcus não produtoras de coagulase foram selecionadas 250 para serem submetidas à especiação, representando as diferentes amostras de aves. Foram identificadas as espécies S. hyicus (35%), S. cohnii subsp. urealyticus (29%), S. simulans (18%), S. epidermidis (6%), S. capitis (6%), S. hominis (2%), S. xylosus (2%), S. sciuri (1%), S. saprophyticus (1%) e S. warneri (0,4%). Destes isolados, foram selecionados 182 que foram avaliados quanto à sua capacidade de produzir enterotoxinas clássicas (kit VIDAS®), sendo que apenas três deles foram positivas, tendo sido detectada a presença somente de gene sec. Esses isolados eram da espécie S. epidermidis. Com relação à sensibilidade aos agentes antimicrobianos, verificou-se que 80% (148/185) foram resistentes a pelo menos um dos agentes testados, sendo a maior percentagem deles resistente à tetracicilina. Os resultados indicam que o abatedouro trabalha seguindo Boas Práticas de Fabricação (BPF) e que as aves produzidas apresentam baixo risco de disseminação de Staphylococcus produtores de toxina ou resistentes a agentes antimicrobianos. A etapa do melichah pode contribuir para a redução desse patógeno na superfície das carcaças. . / In the Schechita slaughter, different from the conventional slaughter, there is a religious process called melichah that is be divided in three steps: immersion in water, salting and washing the carcasses. Some studies indicate that the salting step may benefit the microbial quality of the product, but no information concerning its influence on halotolerant bacteria such as Staphylococcus aureus or on mesophilic aerobes bacteria in poultry. The objectives of this study were to evaluate the influence of the salting step in the population of S. aureus and mesophilic microorganisms; to identify the species of coagulase negative Staphylococcus and to characterize, pheno and genotypically, the isolates. A total of 304 poultry carcasses were sampled, being half collected before salting and half after desalting steps. S. aureus was found in 13/304 (4.5%) samples being nine collected before salting. Average population of S. aureus in pre-salting carcasses was 2.5 x 10 CFU/g and 8.9 CFU/g after salt removal. Mean mesophlic aerobes population was5.4 x 103 CFU/g and 4.5 x 103 CFU/g for carcasses collected before salting and after washing steps, respectively. This variation can be considered normal and not derived from the salting step. As the frequency of S. aureus in the samples was low, the melichah was simulated in the lab showing that the process can reduce (p<0.05) the population of S. aureus. All isolates of S. aureus were able to produce coagulase, harbored the gene nuc (specific for the species) but not mecA that encondes for methicilin resistance. Amongst the S. aureus isolates 88% (36/41) harbored genes coding for staphylococcal enterotoxin (SE) G and I, but no genes for classical SE. The majority of these isolates (37/41, 90.2%) were sensitive to all antibiotics tested. 250 colonies, representing the different poultry samples were selected amongst the 890 coagulase negative Staphylococcus colonies for further identification. The species S. hyicus (35%), S. cohnii subsp. urealyticus (29%), S. simulans (18%), S. epidermidis (6%), S. capitis (6%) S. hominis (2%), S. xylosus (2%), S. sciuri (1%), S. saprophyticus (1%) and S. warneri (0,4%) were identified. Amongst the 250 isolates identified 182 were selected for classical SE production evaluation (kit Vidas®) being only three positive. The gene sec was detected in these isolates, and had been identified as S. epidermidis. Antibiotic resistance was observed in 80% (148/185) of the coagulase negative isolates, and tetraciclin resistance was the most frequent phenotype. The results indicate that this slaughterhouse applies good manufacturing practices (GMP) and that the poultry produced present low risk in disseminating enterotoxin producing or antibiotic resistant Staphylococcus. The melichah may contribute to the reduction of the pathogen in the surface of the carcasses.

Submitted by Marcelo Andrade Silva (marcelo.andradesilva@ufpe.br) on 2015-03-09T14:36:34Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Jussyêgles Niedja da Paz Pereira.pdf: 1257217 bytes, checksum: 95f84e63076d280fb3399a5761fde854 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-09T14:36:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Jussyêgles Niedja da Paz Pereira.pdf: 1257217 bytes, checksum: 95f84e63076d280fb3399a5761fde854 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / Os Staphylococcus spp. demonstraram, ao longo do tempo, a notável capacidade de desenvolver resistência a maioria dos antimicrobianos. Há um mecanismo de resistência aos macrolídeos, em Staphylococcus spp. que atinge também as lincosamidas e as estreptograminas B caracterizando a denominada resistência MLSB, cuja expressão pode ser constitutiva (MLSBc) ou induzível (MLSBi) e é codificada principalmente pelos genes ermA e ermC. A resistência MLSBc é facilmente detectada pelos testes de susceptibilidade utilizados na rotina laboratorial, mas a resistência MLSBi não é. A terapia com clindamicina nos casos de infecção por isolados com resistência MLSBi pode falhar. O objetivo deste estudo foi caracterizar o perfil fenotípico (ocorrência dos fenótipos MLSBc e MLSBi) e molecular (ocorrência dos genes ermA e ermC) da resistência MLSB dos isolados clínicos de Staphylococcus aureus e SCN (Staphylococcus coagulase negativos) sensíveis e resistentes à meticilina provenientes de pacientes do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Pernambuco (HC-UFPE), durante o ano de 2012. A susceptibilidade antimicrobiana de 103 isolados foi determinada pela técnica de disco difusão em ágar Mueller-Hinton. Posteriormente, foi realizado o screening de oxacilina. O fenótipo MLSBi foi detectado através do teste D. Foram submetidos a reação em cadeia da polimerase (PCR), 13 isolados com fenótipos MLSBc e MLSBi para a detecção dos genes ermA e ermC. Os fenótipos MLSBc e MLSBi foram identificados respectivamente em 39 (37,9%) e cinco (4,9%) isolados. O fenótipo MLSBi foi encontrado apenas em quatro (10,8%) dos S. aureus sensíveis à meticilina e em um (4,5%) dos S. aureus resistentes a meticilina. Dos 13 isolados submetidos a PCR, seis (46,2%) apresentaram um gene erm. Foi verificada a mesma frequência três (23,1%) dos genes ermA e ermC entre os isolados. Os genes ermA e ermC se fizeram presentes entre alguns dos isolados de Staphylococcus spp. do hospital estudado e apesar do fenótipo MLSBi ter sido menos frequente que o MLSBc, é importante a realização do teste D para detectá-lo e assim, orientar condutas terapêuticas.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-10-31T14:13:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Gustavo Santiago Dimech (3).pdf: 4392271 bytes, checksum: 986260c48a83b4d6257d0f66146aaa69 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-31T14:13:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Gustavo Santiago Dimech (3).pdf: 4392271 bytes, checksum: 986260c48a83b4d6257d0f66146aaa69 (MD5) Previous issue date: 2014-03-19 / A rápida disseminação dos micro-organismos multidroga resistentes induz a pesquisa por novos agentes antimicrobianos mais ativos e menos tóxicos. Hymenaea stigonocarpa Mart. ex Hayne (Fabaceae) é uma planta medicinal de principal ocorrência no cerrado brasileiro e conhecida popularmente como "Jatobá-do-cerrado". As cascas do seu caule são amplamente utilizadas em infusão ou decocção para tratar dor de estômago, asma, bronquite, úlceras, diarréia, gripe e tosse. Entretanto estudos fitoquímicos e antimicrobianos ainda não são escassos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana de diferentes extratos da casca do caule de Hymenaea stigonocarpa através da determinação da concentração inibitória mínima e bactericida mínima, realizar a caracterização botânica e fitoquímica por cromatografia de camada delgada e cromatografia líquida de alta eficiência e determinar as concentrações dos metabólitos secundários responsáveis pela sua atividade e sua atividade frente a diferentes espécies de Candida. Além disso, foi parte deste estudo a avaliação da interação entre o extrato hidroalcoólico de Hymenaea stigonocarpa e agentes antimicrobianos de diferentes classes químicas, a determinação das alterações ultraestruturais decorrentes da ação deste extrato em associação, bem como a caracterização físico-química das cascas do caule após coleta, secagem e trituração. Este trabalho também avaliou a influência do método de extração sobre as seguintes variáveis: resíduo seco, atividade antbacteriana e concentração de taninos. Staphylococcus aureus mostrou ser o micro-organismo mais sensível a ação dos extratos. Também foi observada uma forte atividade frentes as espécies Candida krusei e Candida glabrata e uma atividade moderada frente as bactérias Gram negativas. A análise ultraestrutural deste micro-organismo, demonstrou alterações na parede celular, bem como no citoplasma decorrentes da ação do extrato hidroalcoólico. A associação com agentes antimicrobianos resultou na maior parte das vezes em um efeito sinérgico, revertendo a multirresistência de algumas cepas de Staphylococcus aureus meticilina resistentes. O métodos de extração não influênciaram a concentração final de taninos, assim como a atividade antibacteriana. Entretanto houve diferenças quanto ao resíduo seco, sendo esta a variavel utilizada para classificar a maceração dinâmica como o método mais eficaz. Quanto a presença flavonóides, após fracionamento e análise por cromatografia líquida ultra rápida acoplada ao espectrômetro de massas, fortes evidências indicam a presença de engeletina, taxifolina, astilbina e um diasteroisômero da astilbina. Assim concluimos que o extrato hidroalcoólico da casca do caule de Hymenaea stigonocarpa tem atividade antimicrobiana sendo mais ativo frente a Staphylococcus aureus, como também a cepas de Candida krusei e Candida glabrata. O modo de extração mais eficiente é a maceração dinâmica e a associação do extrato com antibióticos de referência leva a potencialização do efeito destes. / The rapid spread of multidrug resistant microorganisms induces the search for new, more active and less toxic antimicrobial agents. Hymenaea stigonocarpa Mart. ex Hayne (Fabaceae) is a medicinal plant of main occurrence in the Brazilian cerrado and known popularly as "Jatoba-do-cerrado". Its stem peels are widely used in infusion or decoction to treat stomach pain, asthma, bronchitis, ulcers, diarrhea, flu and cough. However phytochemicals and antimicrobial studies are still scarce. The objective of this study was to evaluate the antimicrobial activity of different extracts of the stem bark of Hymenaea stigonocarpa by determining the minimum inhibitory concentration and minimum bactericidal, perform the phytochemical and botanical characterization by thin layer chromatography and high performance liquid chromatography to determine the efficiency and concentrations of secondary metabolites responsible for its activity and its activity against various Candida species. In addition, part of this study was to evaluate the interaction between the alcoholic extract of Hymenaea stigonocarpa and antimicrobials of different chemical classes, the determination of ultrastructural changes resulting from the action of this extract in combination, as well as the physico- chemical characterization of the stem bark after collection, drying and grinding. This study also evaluated the influence of the extraction method on the following variables: dry, antibacteriana activity and concentration of tannins. Staphylococcus aureus was found to be the most sensitive microorganism action of the extracts. Strong activity fronts the species Candida krusei and Candida glabrata and moderate activity against gram-negative bacteria was also observed. The ultrastructural analysis of this microorganism, showed changes in the cell wall and the cytoplasm resulting from the action of the alcoholic extract. Combination with antimicrobial agents resulted in most cases a synergistic effect in reversing the multidrug resistance of some strains of methicillin resistant Staphylococcus aureus. The extraction methods did not influence the final concentration of tannins, as well as antibacterial activity. However there were differences in dry matter, which is the variable used to classify the dynamic maceration as the most effective method. As the flavonoids present after fractionation and analysis coupled with mass spectrometry, ultra strong evidence fast performance liquid chromatography indicated the presence of engeletina, taxifolina, astilbin, and a diastereomer of astilbin. Thus we conclude that the hydroalcoholic extract of the stem bark of Hymenaea stigonocarpa has antimicrobial activity being more active against Staphylococcus aureus, as well as strains of Candida krusei and Candida glabrata. The most efficient way of extracting the dynamic is mashing and extracts association with antibiotics reference leads to potentiation of the effect of these.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-12T19:39:14Z No. of bitstreams: 1 TESE Rosilma de Oliveira Araujo Melo.pdf: 9735947 bytes, checksum: 870f605bce15d8ff10d70fe0bc62ddbc (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-12T19:39:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Rosilma de Oliveira Araujo Melo.pdf: 9735947 bytes, checksum: 870f605bce15d8ff10d70fe0bc62ddbc (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / FACEPE / Não existem estudos no que se refere à identificação de micro-organimos endofíticos de Bauhinia monandra, embora sejam relatados diversos estudos farmacológicos realizados com essa espécie. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi à prospecção de micro-organismos endofíticos de folhas de B. monandra, no intuito de identificar estes endofíticos, bem como explorar o potencial biotecnológico das actinobactérias endofíticas para produção enzimática e antimicrobiana. Folhas de B. monandra coletadas no Campus da Cidade Universitária (Recife, PE) foram desinfectadas, maceradas e semeadas em meios de cultura específicos. Após a purificação, as colônias bacterianas e fúngicas foram submetidas à identificação morfológica macroscópica e microscópica. As actinobactérias endofíticas foram avaliadas quanto à produção de enzimas; bem como foi realizada a avaliação antimicrobiana para seleção da estirpe com elevado potencial antimicrobiano e posterior produção de metabólitos ativos em cultivo submerso, seguido de processos de extração e separação cromatográfica dos compostos antimicrobianos obtidos do melhor meio de cultura. No presente estudo, as estirpes de fungos filamentosos endofíticos (59,7%) pertenciam aos gêneros Penicillium, Curvullaria e Aspergillus. As bactérias não-filamentosas endofíticas (26,9%) foram agrupadas nos gêneros Bacillus, Burkholderia, Enterobacter. E cepas de actinobactérias endofíticas (13,4%) foram classificadas como Streptomyces e Nocardiopsis. A metodologia utilizada para verificar quantitativamente a capacidade de produção enzimática foi eficiente, demonstrando que todas as actinobactérias endofíticas (n=9) das folhas de B. monandra foram capazes de hidrolisar amido, pectina, Tween 20 e 80; e celulose, confirmando a presença de amilase, pectinase, lípase, esterase e celulase, respectivamente. Na avaliação da produção de caseinase todas as actinobactérias endofíticas foram positivas, no entanto, para a degradação da gelatina apenas Nocardiopsis spp. 2F foi negativo, bem como no ensaio de tirosina todas as estirpes foram positivas exceto Streptomyces spp. 1F. A avaliação da atividade antimicrobiana primária das actinobactérias endofíticas de folhas de B. monadra, realizada pelo teste de bloco de gelose mostrou que as cepas endofíticas Nocardiopsis spp. 2F, Streptomyces spp. 3F, Streptomyces spp. 5F, Streptomyces spp. 6F e Streptomyces spp. 8F, possuíam atividade antimicrobiana apenas diante de bactérias Gram-positivas, principalmente cepas de Staphylococcus aureus (n=16) isolados clínicos multiressistentes e oxacilina resitente (ORSA). A estirpe endofítica Streptomyces spp. 5F destacou-se como melhor produtor de substâncias antimicrobianas em 11 dos 12 meios de cultura submersa perante cinco cepas de S. aureus isolados clinicos, selecionando o meio ISP-3 com melhor desempenho produtivo. O processo extrativo dos produtos ativos com solventes foi bem sucedido com a massa micelial, destacando-se o metanol. Segundo separação cromatográfica de alta eficiência dos extratos brutos: aquoso do líquido metabólico (EAL) e metánolico da massa (EMM), o fracionamento demonstrou que os dois extratos apresentavam compostos com natureza polar. Estes resultados demonstram que a prospecção de micro-organismos endofíticos constitui uma fonte valiosa na obtenção de novas espécies e novos metabólitos bioativos, bem como a descoberta de moléculas com atividade enzimática e antimicrobiana promissora diante de bactérias multirresitentes do gênero Staphylococcus. / There are no studies regarding the identification of endophytic microorganisms of Bauhinia monandra, although several pharmacological studies with this species are reported. In this way, the objective of this work was to prospect endophytic microorganisms from B. monandra leaves, in order to identify these endophytes, as well as to explore the biotechnological potential of endophytic actinobacteria for enzymatic and antimicrobial production. B. monandra leaves collected at Campus Cidade Universitária (Recife, PE) were disinfected, macerated and seeded in specific culture media. After purification, bacterial and fungal colonies were submitted to macroscopic and microscopic morphological identification. Endophytic actinobacteria were evaluated for enzyme production; As well as the antimicrobial evaluation for selection of the strain with high antimicrobial potential and subsequent production of the active metabolites in submerged culture, followed by extraction and chromatographic separation of the antimicrobial compounds obtained from the best culture medium. In the present study, strains of endophytic filamentous fungi (59.7%) belonged to the genera Penicillium,Curvullaria and Aspergillus. Endophytic non-filamentous bacteria (26.9%) were grouped in the genera Bacillus, Burkholderia, Enterobacter. And strains of endophytic actinobacteria (13.4%) were classified as Streptomycesand Nocardiopsis. The methodology used to verify quantitatively the enzymatic production capacity was efficient, demonstrating that all the endophytic actinobacteria (n = 9) of B. monandra leaves were able to hydrolyze starch, pectin, Tween 20 and 80, and cellulose, confirming the presence of amylase, pectinase, lípase, esterase and cellulase, respectively. In the evaluation of the caseinase production, all the endophytic actinobacteria were positive, however, for the degradation of the gelatin only Nocardiopsis spp. 2F was negative, as well as in the tyrosine assay all strains were positive except Streptomyces spp. 1F. The evaluation of the primary antimicrobial activity of the endophytic actinobacteria of B. monadra leaves, performed by the gel block assay showed that the endophytic strains Nocardiopsis spp. 2F, Streptomyces spp. 3F, Streptomyces spp. 5F, Streptomyces spp. 6F and Streptomyces spp. 8F, had antimicrobial activity only against Gram-positive bacteria, mainly strains of Staphylococcus aureus (n = 16), multiresistant clinical isolates and resistant oxacillin (ORSA). The endophytic strain Streptomyces spp. 5F was the best producer of antimicrobial substances in 11 of the 12 submerged culture media against five strains of S. aureus isolates clinically, selecting ISP-3 medium with better productive performance. The extractive process of the active products with solvents was successful with the mycelial mass, standing out the methanol. According to the high efficiency chromatographic separation of the crude extracts: aqueous of the metabolic liquid (AEL) and mass methanol (MME), the fractionation showed that the two extracts presented compounds with polar nature. These results demonstrate that the prospection of endophytic microorganisms is a valuable source in the acquisition of new species and new bioactive metabolites, as well as the discovery of molecules with promising enzymatic and antimicrobial activity against multiresistant bacteria of the genus Staphylococcus.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-17T21:03:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Marcelle Aquino Rabelo.pdf: 1811490 bytes, checksum: a8883899ff40c5c405ea02f911de3b40 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-19T22:19:11Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Marcelle Aquino Rabelo.pdf: 1811490 bytes, checksum: a8883899ff40c5c405ea02f911de3b40 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-19T22:19:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Marcelle Aquino Rabelo.pdf: 1811490 bytes, checksum: a8883899ff40c5c405ea02f911de3b40 (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / CAPES / Staphylococcus spp. é considerado um dos agentes de maior impacto para as infecções associadas aos cuidados em saúde e também uma das principais causas de complicações infecciosas em pacientes com câncer. A gravidade das infecções estafilocócicas está relacionada à presença de fatores de resistência e de virulência, os quais favorecem a evasão bacteriana do sistema de defesa do hospedeiro. Com objetivo de comparar isolados de Staphylococcus spp. de pacientes oncológicos e não oncológicos de dois hospitais da cidade do Recife, durante o ano de 2013, foram realizados testes de susceptibilidade antimicrobiana e reações em cadeia da polimerase (PCR) para identificar a ocorrência de genes de resistência (mecA, blaZ, ermA e ermC) e virulência (icaAD e hlg). Também, identificou-se a resistência à vancomicina em Staphylococcus spp., através de métodos fenotípicos e os fatores de risco mais prevalentes para infecção em pacientes oncológicos. Observou-se um maior percentual de isolados sensíveis aos antimicrobianos testados. Em relação ao fármaco vancomicina, foram identificados 27,3% de isolados resistentes pela técnica do screening. No hospital oncológico foram positivos, 50% e 77,7% respectivamente para o gene blaZ e mecA. Observou-se percentuais de isolados positivos de 25%, 42,8%, 32,1% e 70%, respectivamente para icaAD e hlg no hospital universitário e hospital oncológico. No hospital oncológico, observou-se um isolado de fenótipo constitutivo positivo para o gene ermC. Após a realização dos testes de associação estatísticos, não foi observada diferença estatisticamente significante na presença dos genes de resistência quando comparou-se os dois hospitais. No grupo de pacientes oncológicos, observou-se diferença significativa quando comparados os indivíduos infectados com Staphylococcus spp. que albergavam o gene mecA e os indivíduos infectados com Staphylococcus spp. sem o gene mecA em relação a contagem de neutrófilos no período da infecção. Em relação aos genes de virulência, foi possível observar diferença estatisticamente significante entre os dois hospitais. Assim, não existe diferença significativa na presença de genes de resistência quando se compara grupos de pacientes, entretanto observa-se diferenças significativas em relação à presença dos genes relacionados à virulência entre diferentes grupos, o que pode estar associado às características dos pacientes e suas internações. Desta forma, concluiu-se que o monitoramento antimicrobiano é essencial para o tratamento das infecções em cada hospital e a condição do paciente parece estar ligada ao potencial patogênico do microrganismo. / Staphylococcus spp. is one of the major infection-associated agent within health care and one of principal cause of complication in cancer patients. The severity of staphylococcal infections is related to the presence of resistance and virulence factors, which favor bacterial evasion of the host defense system. In order to compare isolates of Staphylococcus spp. of oncological and non-oncological patients from two hospitals in the city of Recife, during the period of 2013, antimicrobial susceptibility and polymerase chain reaction (PCR) tests were performed to identify the occurrence of resistance genes (mecA, blaZ, ermA and ermC) and virulence genes (icaAD and hlg). Resistance to vancomycin was identified by phenotypic methods in Staphylococcus spp. and the most prevalent risk factors for infection in cancer patients. A higher percentage of antimicrobial susceptible isolates was observed. Regarding the vancomycin drug, 27.3% of resistant isolates were identified by the screening technique. At the oncology hospital they were positive, 50% and 77.7% respectively for the blaZ and mecA gene. Percentage of positive isolates of 25%, 42.8%, 32.1% and 70%, respectively, found for icaAD and hlg in the university hospital and oncology hospital, respectively. A positive constitutive phenotype isolate for the ermC gene was observed at the oncology hospital. After performing the statistical association tests, no statistically significant difference was observed in the presence of resistance genes when comparing the two hospitals. In the group of cancer patients, a significant difference was observed when compared to individuals infected with Staphylococcus spp. that harbored the mecA gene and individuals infected with Staphylococcus spp. without the mecA gene in relation to the neutrophil count at the time of infection. Regarding the virulence genes, it was possible to observe a statistically significant difference between the two hospitals. Thus, there is no significant difference in the presence of resistance genes when comparing groups of patients, however, there are significant differences regarding the presence of virulence-related genes between different groups, which may be associated to the characteristics of the patients and their hospitalizations. In conclusion, antimicrobial monitoring is essential for the treatment of infections in each hospital and the patient's condition appears to be linked to the pathogenic potential of the microorganism.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-16T21:03:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Alyson Mykael Albuquerque Florenço.pdf: 1828798 bytes, checksum: 772741777a2659fadbf13dafce760c07 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-21T20:45:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Alyson Mykael Albuquerque Florenço.pdf: 1828798 bytes, checksum: 772741777a2659fadbf13dafce760c07 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-21T20:45:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Alyson Mykael Albuquerque Florenço.pdf: 1828798 bytes, checksum: 772741777a2659fadbf13dafce760c07 (MD5) Previous issue date: 2016-07-28 / CAPES / Introdução: Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) tem sido um dos principais patógenos envolvidos em graves infecções hospitalares, apresentando altas taxas de morbidade e mortalidade, devido a sua resistência aos antimicrobianos atuais e produção de fatores de virulência. Assim, a comunidade científica busca novas opções terapêuticas que possam inibir esses fatores e consequentemente suas manifestações clínicas. A β-lapachona (β-lap), composto obtido principalmente através da semi-síntese do lapachol, molécula extraída da árvore “Ipê-roxo” (Tabebuia avellanedae), torna-se uma possível alternativa devido as suas propriedades farmacológicas, incluindo a atividade antibacteriana. Porém, essa molécula apresenta limitações, tais como, baixa solubilidade em água e toxicidade. Assim, os nanocarreadores, como, por exemplo, os lipossomas surgem como opções para ultrapassar essas limitações. Objetivo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da β-lapachona livre e encapsulada em lipossomas convencionais (β-lap_SACL) e furtivos (β-lap_NSL) na inibição de fatores de virulência e da parede celular de MRSA. Metodologia: A avaliação da capacidade da β-lap, β-lap_SACL e β-lap_NSL na inibição da produção da catalase foi avaliada através da medição de coluna de efervescência e a inibição da hemolisina através da atividade hemolítica. A inibição do biofilme de MRSA foi avaliada através da determinação da Concentração Inibitória Mínima do Biofilme (CIMB) e Concentração de Erradicação Mínima do Biofilme (CEMB). A inibição da parede celular de MRSA foi determinada através de análise morfométrica por microscopia eletrônica de transmissão. Resultado: β-lap_SACL e β-lap_NSL, em concentrações subinibitórias, apresentaram inibição da produção de catalase (em torno de 70%, 65% e 70%, respectivamente) e de hemolisina (em torno de 60%, 60% e 65%, respectivamente). Quanto à inibição do biofilme, CIMB variou de 4 a 16 μg/mL e CEMB variou de 4 a 64 μg/mL. β-lap, β-lap_SACL e β-lap_NSL também foram capazes de inibir a parede celular em percentuais que variaram de 40 a 60%. Conclusão: Esses resultados sugerem que β-lap encapsulada em lipossomas é uma opção terapêutica promissora na inibição dos fatores de virulência catalase e hemolisina, além de inibir a formação do biofilme e parede celular de MRSA. / Introduction: Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) has been one of the main pathogens involved in serious hospital infections, with high rates of morbidity and mortality, due to its resistance to current antibiotics and production of virulence factors. Thus, the scientific community looks for new therapeutic options that inhibit these factors and therefore its clinical manifestations. The β-lapachone (β-lap), composed mainly obtained by semi-synthesis of lapachol, extracted molecule by "Ipê-roxo" tree (Tabebuia avellanedae) becomes a viable alternative due to its pharmacological properties, including the activity antibacterial. However, this molecule has limitations such as low water solubility and toxicity. Thus, nanocarriers, such as, liposomes appear as options to overcome these limitations. Objective: This study aimed to evaluate the effect of pure β-lapachone and encapsulated into conventional (β-lap_SACL) and stealthy liposomes (β-lap_NSL) to inhibit virulence factors and cell wall of MRSA. Methodology: The evaluation of the ability of β-lap, β-lap_SACL and β-lap_NSL to inhibit the production of catalase was evaluated by bubbling column and the inhibition of hemolysin was measured by hemolytic activity. The inhibition of MRSA biofilm was evaluated by determining the minimum biofilm inhibitory concentration (CIMB) and minimum biofilm eradication concentration (CEMB). The inhibition of MRSA cell wall synthesis was determined by morphometric analysis by transmission electron microscopy. The biocompatibility of liposomes containing β-lap was assessed by hemolytic assay. Results: β-lap_SACL and β-lap_NSL at subinibitory concentrations showed inhibition of catalase production (about 70%, 65% and 70%, respectively) and hemolysin (around 60%, 60% and 65%, respectively). For inhibition of biofilm CIMB ranged from 4 to 16 ug/mL and CEMB ranged from 4 to 64 mg/mL. β-lap, β-lap_SACL and β-lap_NSL were also capable to inhibit cell wall in a percentage that varied between 43 and 63%. Conclusion: These results suggest that β-lap encapsulated into liposomes is a therapeutic option promising to inhibit virulence factors catalase and hemolysin, and to inhibit biofilm formation and cell wall synthesis of MRSA.

Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12054_Dissertação_Carina Knidel.pdf: 1789575 bytes, checksum: b6160bdd2d62dd644152668b80effd0b (MD5) Previous issue date: 2018-03-06 / As infecções bacterianas estão entre os principais problemas para a saúde pública e o surgimento de bactérias resistentes aos antimicrobianos se torna cada vez mais comum. Staphylococcus aureus é um patógeno oportunista, que pode causar uma variedade de infecções, tanto hospitalares como comunitárias. A epigalocatequina galato (EGCG), flavonoide presente nas folhas da planta Camelia sinensis, vem sendo estudada por apresentar diferentes atividades biológicas, incluindo potencial atividade antimicrobiana. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial antimicrobiano, in vitro e in vivo, e antibiofilme da EGCG em isolados clínicos de S. aureus com diferente background genético. Foram utilizadas nove amostras isoladas de diferentes infecções, com distinta susceptibilidade aos antimicrobianos. A atividade antimicrobiana foi realizada por teste de microdiluição em caldo para a determinação da concentração mínima inibitória (CMI) e pelo ensaio de curva tempo-morte. Os resultados das CMIs variaram de 7,81 a 62,5 &#956;g/mL e uma atividade bactericida foi observada com o tratamento de 4x a CMI. A atividade antibiofilme foi avaliada após a incubação dos isolados na presença e ausência da EGCG. Concentrações sub-inibitórias foram capazes de inibir de forma significativa a produção de biofilme de S. aureus. Com o tratamento, a maior redução na produção de biofilme foi de 100% e as menores entre 50 a 60%. Ensaios de citotoxicidade mostraram que concentrações &#8804; 62,5 &#956;g/mL da EGCG não foram citotóxicas para macrófagos murinos. Em relação ao teste in vivo utilizando larvas de G. mellonella, a EGCG reduziu a mortalidade das larvas infectadas por este patógeno de forma significativa (P=0,0005) frente a apenas um isolado. De forma geral, a EGCG mostrou eficácia em inibir o crescimento de diferentes isolados clínicos de S. aureus e apresentou relevante propriedade antibiofilme. O tratamento in vivo com larvas de G. mellonella mostrou efeito variável. Portanto, a EGCG é uma substância promissora para o tratamento de infecções causadas por S. aureus.

Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12104_12-04-18- Dissertação completa - PÓS BANCA FINAL.pdf: 2165031 bytes, checksum: 166de54425438f1aa2ee476e04f24b8c (MD5) Previous issue date: 2018-03-12 / Staphylococcus aureus é um dos principais patógenos causador de uma gama de infecções tanto nosocomiais quanto comunitárias. Bacteremias são constantes e apresentam altos índices de mortalidade e morbidade e todo o globo. A vancomicina (van) é a terapia empírica para tratamento de infecções por cocos Gram-positivos em pacientes hemodialíticos. Em 1997 surgiram estirpes de S. aureus com suscetibilidade reduzida para van (VISA e hVISA). Estes isolados são associados a falhas terapêuticas por van e recidivas. O objetivo deste trabalho foi caracterizar amostras de S. aureus cultivadas em altas concentrações de van quanto à suscetibilidade e atributos de virulência. Quarenta e uma amostras de S. aureus isoladas de pacientes hemodialíticos com bacteremias (parentais) foram crescidas em 4 a 16 &#956;g/mL de van e reisoladas após este teste, sendo denominadas derivadas. Foram isoladas derivadas de todas as 41 amostras S. aureus. Todas as amostras parentais e derivadas foram suscetíveis à van. A concentração mínima inibitória (CMI) de van nas amostras derivadas apresentou um aumento em relação as parentais, porém, dentro dos parâmetros de suscetibilidade pelo Clinical & Laboratory Standards Institute (CLSI). Vinte e quatro pulsotipos foram identificados através da técnica de PFGE e nove amostras (22%) apresentaram resistência à meticilina através do disco de cefoxitina e amplificação do gene mecA. Nove amostras derivadas isoladas em 16 µg/mL de van conseguiram crescer na presença de 8 µg/mL de van. A produção de biofilme e de cinco enzimas hidrolíticas foi menor nas amostras derivadas. A virulência das estirpes derivadas foi avaliada em modelo in vivo com Galleria mellonella, sendo que duas amostras derivadas apresentaram diminuição e uma aumento da virulência. Não houve diferença entre parentais e derivadas quanto a autólise, produção de &#948;-hemolisina, ligação ao fibrinogênio e viabilidade metabólica. Apesar de crescerem em concentrações altas de van as estirpes derivadas apresentaram crescimento lento e CMI na faixa de suscetibilidade, indicando tolerância. De todos os fatores de virulência testados a pressão seletiva com van afetou apenas a produção de biofilme e cinco enzimas hidrolíticas. No modelo in vivo a virulência das derivadas foi variada, indicando que ser estirpe-dependente.

Staphylococcus spp. é uma das principais causas da mastite bovina, onde o uso de antimicrobianos tem sido comprometido por mecanismos de resistência bacteriana e geração de resíduos que alteram a qualidade e segurança alimentar do leite e derivados. Foi avaliada a atividade in vitro da nisina (NS), do brometo de dioctadecildimetilamônio (DDA) e do complexo NS/DDA contra Staphylococcus spp. resistentes isolados de mastite bovina. A CBM50 da nisina e DDA foi 50 e 4&#956;g/mL, respectivamente, enquanto que a CBM50 do complexo NS/DDA foi 3/2&#956;g/mL, com efeito parcialmente sinérgico. O estudo de time-kill revelou redução de 3 log10 UFC/mL após uma hora de interação entre NS/DDA e a bactéria. A microscopia de fluorescência confirmou uma perda da viabilidade após 6 horas de interação. A interação NS/DDA resultou na formação de nanopartículas (148,5 nm) catiônicas (+8,84 mV) cuja interação com a superfície bacteriana negativa (-27,32 mV) resultou em ação bactericida. NS/DDA pode ser uma alternativa promissora contra Staphylococcus spp. resistentes isolados de mastite bovina. / Staphylococcus spp. is a major cause of bovine mastitis, where the use of antimicrobials has been compromised by bacterial resistance mechanisms and waste generation that change the food quality and safety of milk and dairy products. The in vitro activity antibacterial was evaluated of the nisin (NS), of the dioctadecyldimethylammonium bromide (DDA) and of the NS/DDA complex against drug-resistant Staphylococcus spp. isolated from bovine mastitis. The CBM50 of nisin and DDA were 50 and 4&#956;g/ml, respectively, while the CBM50 NS/DDA complex was 3/2mg/mL, with partially synergistic effect. The time-kill study showed reduction of 3log10 CFU/mL after an hour of interaction between NS/DDA and bacteria. Fluorescence microscopy confirmed a loss of viability after 6h of interaction. NS/DDA interaction resulted in formation of nanoparticles (148.5 nm) cationic (+8.84 mV) which interact with negative bacterial surface (-27.32 mV) resulted in bactericidal activity. NS/DDA may be a promising alternative against drug-resistant Staphylococcus spp. isolated from bovine mastitis.

La colonisation nasale à Staphylococcus aureus est un important facteur de risque d’infection par cette bactérie chez l’homme. Le rôle de la colonisation extra-nasale dans la physiopathologie des infections liées à la souche de colonisation est incertain. Contrairement aux porteurs intermittents et aux non porteurs, les porteurs persistants ont un risque accru d’infection à S. aureus notamment chez les patients dialysés. Nous avons développé et proposé une nouvelle stratégie applicable aux soins courants pour prédire rapidement le statut de portage nasal persistant de S. aureus dans l’optique de faire bénéficier les porteurs les plus à risque d’infection à S. aureus de mesures de prévention ciblées. Nous avons montré, à travers l’étude des réservoirs pharyngé et digestif, qu’il existe une grande diversité génétique des souches de S. aureus isolées des muqueuses. Enfin, différentes hypothèses ont été investiguées pour déterminer les facteurs microbiologiques associés à la persistance du portage nasal de S. aureus. Ces résultats préliminaires suggèrent que les souches isolées de colonisation nasale persistante et intermittente ont des caractéristiques très similaires / Staphylococcus aureus nasal carriage is a major risk factor of infection with this bacterium in humans. The role of S. aureus extra-nasal carriage in endogenous infections remain elusive. By contrast to intermittent carriers and noncarriers, persistent carriers have a higher risk of S. aureus infection, especially in dialysis patients. We have developed and validated an algorithm to predict the nasal carriage state in clinical practice for proposing decolonization to carriers having the highest risk of S. aureus infection. We found a high diversity between S. aureus strains colonizing the nose, the throat and the rectum, suggesting that extra-nasal carriage could be an additional risk factor of S. aureus infection. Finally, we studied several bacterial determinants of persistent nasal carriage. Our preliminary results suggest that S. aureus isolated in persistent and intermittent carriers harboured similar features