O Rhipicephalus microplus é um parasita obrigatório hematófago, monoxeno, que gera grande impacto econômico a partir da ação espoliativa sobre o seu hospedeiro preferencial. A glicogênio sintase quinase 3 (GSK-3), uma proteína altamente conservada e ubiquamente expressa entre diversas espécies, foi identificada no carrapato bovino sob a isoforma GSK-3β. Envolvida na modulação da atividade da proteína glicogênio sintase, como um agente regulador da síntese de glicogênio, essa proteína atua no metabolismo energético do R. microplus. A GSK-3 também está envolvida na via de sinalização Wnt, e por isso, já foi descrita como uma quinase essencial para a formação do embrião, estando diretamente envolvida no processo reprodutivo deste carrapato. Neste contexto, a GSK-3β é uma candidata para o desenvolvimento de novas alternativas de controle do carrapato bovino. Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi estudar a participação da proteína GSK-3β na fisiologia do R. microplus a partir da inibição de sua atividade. Ensaios in vitro e in vivo foram realizados para testar a inibição química e imunológica da atividade dessa proteína. Anticorpos contra peptídeos sintéticos baseados na sequência da GSK-3β (anti- SRm0218 e anti-SRm86100) usados neste trabalho não foram capazes de inibir a atividade dessa proteína, no entanto, a inibição da GSK-3β foi alcançada quando células embrionárias de R. microplus foram submetidas à inibição química, por meio de um inibidor específico. Este resultado sustenta o potencial dessa proteína como alvo para o desenvolvimento de uma alternativa de controle do carrapato bovino, pois a sua inibição possivelmente atuaria negativamente na capacidade reprodutiva do carrapato R. microplus. / Rhipicephalus microplus is a monogenetic, hematophagous ectoparasite that has a large economic impact due to associated losses in the cattle industry. Glycogen synthase kinase 3 (GSK-3) is a highly conserved and ubiquitously expressed protein in several species. It has been identified as GSK-3β isoform in the cattle tick, and is involved in the modulation of glycogen synthase activity, as a regulator of glycogen synthesis with a role in energy metabolism of R. microplus. GSK-3β is also involved in the Wnt signaling pathway. It is a fundamental kinase for embryo development, and is directly linked with R. microplus reproductive process. Thus, the aim of this study was to investigate the role of GSK-3β in R. microplus physiology by inhibiting its activity. In vitro and in vivo assays were carried out to test its immunological and chemical inhibition. Rabbit antibodies against synthetic peptides based on GSK-3β sequence (anti-SRm0218 and anti-SRm86100) used in this work were not capable to inhibit GSK- 3β activity, but GSK-3β inhibition was reached when R. microplus embryo cells were cultivated with a specific inhibitor. This result supports the potential of this protein as a target to develop a new cattle tick control method, because its inhibition probably acts detrimentally in the reproductive capacity of the tick.

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:21:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_FlavioEElAssal.pdf: 751366 bytes, checksum: def645463c8535058978272489bd0f62 (MD5) Previous issue date: 2008-02-25 / This paper evaluates the behavior of appetite expressed in different stages of the ticks Amblyomma cajennense testing the hypothesis that nymphs and adults of this species have strategy of game play while the larvae ambush. To this end, through observations, we sought to describe and propose a classification of appetite expressed by these different stages comparing strategies appetite displayed by different instars of the species with the express adult Rhipicephalus sanguineus on the same environmental conditions. Experimentally, the expressions of these behaviors face of different stimuli (CO2, equine odor, shading, radiant heat, and the 'air control') were evaluated. For this, we collected ticks of the species in horses and dogs naturally infested Center for Zoonosis Control in Goiânia-GO, which were created in rabbits and multiplied in the vivarium of the Center for Veterinary Parasitology, Federal University of Goiás (CPV / UFG ). The ratings of the behaviors that occurred in a room of the Centre -CPV/UFG were held in a glass box with removable cover, having a dozen plastic rods for the expression of search strategies. This glass chamber showed temperature conditions (25 º C + / -3 ° C), relative humidity (80% <RH <98%) and light (12 hours light / 12 hours of darkness) known and standard in all tests. In this environment were the observation sessions, each 40 minutes long, starting when after a period of 29 hours of environment of the ticks in the study. At each session, we evaluated a group of ten ticks (the same age and species) by the methodology - scan 'scan sampling' - every minute, recording the positions of the individuals on appropriate sheet. For each stimulus were evaluated ten groups of ten individuals. For registration were considered four possible attitudes: complete inactivity (first pair of legs retracted), and only motions of searching raising the first pair of legs; stopped or partial inactivity (first pair of legs exposed despite the immobility of the tick) and displacement by the glass box (walking). Possible locations were the twelve rods, base, walls and lid of the box. Was used factorial ANOVA to evaluation of results which, together with other elements derived from the observations, allowed the conclusion that under the conditions applied, larvae A.cajennense conduct ambush while nymphs and adults of this species are hunters of their potential hosts / O presente trabalho visou estudar o comportamento de apetência expresso pelos diferentes estágios de carrapatos da espécie Amblyomma cajennense testando a hipótese de que as ninfas e os adultos desta espécie apresentam estratégia de caça enquanto as larvas desempenham emboscada. Para tal, através de observações, procurou-se descrever e propor uma classificação da apetência expressa por estes diferentes estágios comparando as estratégias de apetência apresentadas pelos diferentes instares da referida espécie com a expressa por adultos da espécie Rhipicephalus sanguineus nas mesmas condições ambientais. Experimentalmente, as expressões destes comportamentos diante de diferentes estímulos (CO2, odor de eqüino, sombreamento, calor irradiado, e no ar-controle ) foram avaliadas. Para isto, foram coletados carrapatos das referidas espécies em eqüinos e cães naturalmente infestados no Centro de Controle de Zoonoses de Goiânia-GO, os quais foram criados e multiplicados em coelhos no biotério do Centro de Parasitologia Veterinária da Universidade Federal de Goiás (CPV/UFG). As avaliações dos comportamentos, que ocorreram numa sala climatizada do referido Centro CPV/UFG, foram realizadas numa caixa de vidro com tampa removível, dotada de doze hastes plásticas para a expressão de estratégias de busca. Esta câmara de vidro apresentava condições de temperatura (25ºC +/-3ºC), umidade relativa do ar (80%<UR<98%) e luminosidade (12 horas de luz / 12 horas de escuro) conhecidas e padronizadas em todos os ensaios. Neste ambiente ocorreram as sessões de observação, cada uma com 40 minutos de duração, iniciadas sempre após um período de 29 horas de ambientação dos carrapatos em estudo. Em cada sessão avaliou-se um grupo de dez carrapatos (de mesma idade e espécie) pela metodologia de varredura - scan sampling - a cada minuto, registrando-se as atitudes e posições dos indivíduos numa planilha apropriada. Para cada estímulo foram avaliados dez grupos de dez indivíduos. Para efeito de registro foram consideradas quatro atitudes possíveis: inatividade completa (primeiro par de patas recolhido); apenas movimentos de busca levantando o primeiro par de patas; parado ou inatividade parcial (primeiro par de patas exposto apesar da imobilidade do carrapato); e deslocamento pela caixa de vidro (andando). As possíveis posições foram as doze hastes, a base, as paredes e a tampa da caixa. Foi utilizada a Análise de Variância fatorial para a avaliação dos resultados os quais, conjuntamente com outros elementos oriundos das observações, permitiram a conclusão de que, sob as condições aplicadas, larvas de A.cajennense realizam emboscada enquanto ninfas e adultos desta espécie são caçadores de seus potenciais hospedeiros

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-08-19T20:28:16Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Prado Barreto - 2014.pdf: 3040237 bytes, checksum: 9b5b111ad7079b39159b4f2f8968b129 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-22T12:55:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Prado Barreto - 2014.pdf: 3040237 bytes, checksum: 9b5b111ad7079b39159b4f2f8968b129 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-22T12:55:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Prado Barreto - 2014.pdf: 3040237 bytes, checksum: 9b5b111ad7079b39159b4f2f8968b129 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-10-08 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Resistence of the tick Rhipicephalus sanguineus to chemicals is commonly reported. Entomopathogenic fungi emerge as an alternative to the exclusive use of chemical acaricides for tick control; however, heat and other environmental factors may limit the efficacy of fungi. Thus, the current study evaluated the effect of heat on conidial germination of Metarhizium anisopliae IP 119 when suspended in pure mineral oil (Impex®) or in water (Tween 80, 0.01%) and applied to the cuticle of R. sanguineus (in vivo) or in artificial medium PDAY (in vitro). Then, the results obtained with tests in vivo were compared to the results obtained with tests conducted in vitro, and finally, experiments were conducted to verify the virulence of M. anisopliae IP 119 for R. sanguineus engorged females. Conidial suspensions of M. anisopliae in water or oil, adjusted to 108 conidia ml-1, were exposed to 0 (control) or 4 h to 45 ± 0.5 °C in a water bath, and then, individually inoculated onto the dorsal surface of R. sanguineus engorged females. The samples were incubated at 27 ± 1 °C and RH > 80% for 0, 12, 18, 24, 36, 48 or 72 h. In parallel, aliquots of the aqueous conidial suspensions (control or 45 °C) were inoculated onto PDAY medium in Petri plates. The samples were incubated at the same temperature and for the same time periods described above. After each incubation time, ticks were fixed and dissected, i.e., a fragment of the dorsal cuticle was removed. Cuticles that received conidia suspended in water, exposed or not to heat, were processed for fluorescence microscopy for evaluation of conidial germination. Cuticles that received conidia suspended in water or oil, exposed or not to heat, were processed for scanning electron microscopy for evaluation of conidial germination. Conidial germination on PDAY plates was assessed using a phasecontrast microscope. A minimum of 300 conidia per cuticle or plate was evaluated for calculation of percent germination. When conidia were exposed to heat, a high percentage of germination was observed in PDAY medium (61.5%) in comparison to the tick cuticle (13%), 72 h after inoculation. Appressoria were observed 36 h after inoculation, only in conidia that were not exposed to heat. On tick cuticle, the percentage of germination of conidia suspended in mineral oil and exposed to heat was high in comparison to the percentage of germination of conidia suspended in water, at all incubation times investigated. At 36 h of incubation, the mean percentage of germination of conidia suspended in oil reached 16.3%, whereas conidia suspended in water reached only 2.2%. Conversely, in the control groups (ticks treated with conidia not exposed to heat), the percentage of germination of conidia suspended in water or oil differed at 48 and 72 h of incubation, where germination was also high for conidia suspended in oil and inoculated on the tick cuticle. M. anisopliae conidia suspended in oil exposed or not to heat showed control percentage greater than the observed with aqueous suspensions. Thus, the results showed a significant delay in germination for conidia suspended in water and exposed to 45 °C in comparison to conidia suspended in mineral oil; in this sense, the oil formulation of conidia when exposed or not to heat proved to be more effective for controlling R. sanguineus engorged females. Moreover, conidia suspended in water germinated faster when inoculated in PDAY than when they were applied to the tick cuticle. Therefore, the results indicated that the negative effect of heat on conidial germination was more expressive when conidia were suspended in water and applied to the arthropod cuticle than it would be predicted by the in vitro thermotolerance tests. Also, conidia suffered less interference from heat exposures when suspended in oil. In conclusion, mineral oil protects conidia against the heat effects and enhances the fungal germination on the cuticle of R. sanguineus. / Relatos da resistência do carrapato Rhipicephalus sanguineus a bases químicas utilizadas para controle tem sido comuns. Neste contexto, os fungos entomopatogênicos surgem como uma alternativa ao uso exclusivo do controle químico; entretanto, calor e outros fatores ambientais podem limitar a eficácia dos fungos. Sendo assim, o presente estudo avaliou o efeito do calor sobre a germinação de conídios de Metarhizium anisopliae IP 119 quando suspensos em puro óleo mineral (Impex®) ou em água (Tween 80, 0,01%) e aplicados sobre a cutícula de R. sanguineus (in vivo) ou em meio de cultivo BDAY (in vitro). Em seguida, a resposta dos testes in vivo foi comparada a dos testes in vitro, e bioensaios foram realizados para verificar a virulência do isolado IP 119 para fêmeas ingurgitadas de R. sanguineus. Suspensões conidiais de M. anisopliae em água ou óleo, ajustadas a 108 conídios ml-1, foram expostas a 0 h (controle) ou 4 h a 45 ± 0,5 ºC em banho-maria e, em seguida, inoculadas individualmente na superfície dorsal de fêmeas ingurgitadas de R. sanguineus. Os indivíduos foram incubados a 27 ± 1°C e UR > 80% por 0, 12, 18, 24, 36, 48 ou 72 h. Em paralelo, alíquotas das suspensões conidiais aquosas (controle ou 45ºC) foram inoculadas em placas de Petri contendo meio BDAY. As amostras foram incubadas na mesma temperatura e pelos mesmos períodos de tempo descritos acima. Após cada período de incubação, os carrapatos correspondentes foram fixados e dissecados, retirando-se um fragmento da cutícula dorsal. Cutículas que receberam conídios suspensos em água, e expostos ou não ao calor, foram processadas para microscopia de fluorescência para avaliação da germinação. Cutículas que receberam conídios suspensos em água ou óleo, e expostos ou não ao calor, foram processadas para microscopia eletrônica de varredura para avaliação da germinação. A germinação de conídios em BDAY foi avaliada por microscopia de contraste de fase. Um mínimo de 300 conídios por cutícula ou por placa foi avaliado para calcular o percentual de germinação. Verificou-se que quando conídios foram expostos ao calor, um maior percentual de germinação foi observado em BDAY (61,5%) em comparação com a cutícula do carrapato (13%), 72 h após a inoculação. Apressórios foram observados 36 h após a inoculação, apenas em conídios que não foram expostos ao calor. Na cutícula de R. sanguineus, o percentual de germinação de conídios suspensos em óleo mineral e expostos ao calor foi maior em comparação ao percentual de germinação de conídios suspensos em água, em todos os tempos de incubação investigados. Com 36 h de incubação, a germinação média de conídios suspensos em óleo chegou a 16,3%, enquanto conídios suspensos em água apresentavam 2,2% de germinação. Em contrapartida, nos controles, o percentual de germinação de conídios suspensos em água ou óleo diferiu nos tempos de 48 e 72 h de incubação, onde a germinação sobre a cutícula também foi maior em conídios suspensos em óleo. M. anisopliae quando suspenso em óleo e exposto ou não ao calor apresentou percentual de controle de fêmeas maior que o observado nas suspensões aquosas. Sendo assim, os resultados demonstraram: marcante atraso na germinação dos conídios suspensos em água e expostos a 45 ºC em comparação aos conídios suspensos em óleo mineral; a formulação oleosa de conídios quando exposta ou não ao calor mostrou-se mais efetiva para controle de R. sanguineus. Ainda, conídios suspensos em água germinaram mais rapidamente quando inoculados em BDAY do que quando foram aplicados sobre a cutícula do carrapato. Neste sentido, permite-se inferir que o efeito negativo do calor sobre a germinação de conídios suspensos em água foi maior quando os conídios foram aplicados sobre a cutícula do artrópode do que seria previsto nos testes in vitro, e os conídios sofreram menor interferência do calor quando suspensos em óleo. Portanto, conclui-se que o óleo mineral protege os conídios contra a ação do calor e potencializa a germinação do fungo na cutícula de R. sanguineus.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-09-09T13:55:37Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Flávia Regina Santos da Paixão - 2016.pdf: 2930650 bytes, checksum: 6e200c8af02d2dc239dc8ba36d5d8806 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-09T15:25:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Flávia Regina Santos da Paixão - 2016.pdf: 2930650 bytes, checksum: 6e200c8af02d2dc239dc8ba36d5d8806 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-09T15:25:47Z (GMT). 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Conidial production and viability of conidia from each formulated Metarhizium spp. was evaluated by distributing 0,003 g pellets 2% water-agar medium, and incubating them at 27 °C or 32 °C for 15 days. The results showed that the conidial production among isolates was similar at 27 °C or 32 °C, and the viability of the conidia was superior than 90% for conidia produced. Two bioassays were conducted for screening the virulence of isolates against R. microplus: the first one tested 0,007 g of pellets of each Metarhizium spp. isolate; the second one tested different concentrations of IP 119 pellets (0,002, to 0,006 g). Pellets were sprinkled on the surface of 5 g sterile oxisol in Petri dishes, moistened with 2 ml sterile-distilled water. Ten replicates were prepared for each fungal isolate. The plates with pellets were incubated for 15 days at 27 °C and RH > 90% to induce conidial production; plates from control groups did not receive pellets. A female was placed in each plate and monitored daily for 15 days for fungal conidiogenesis on ticks. At day 15, the egg mass was removed from each plate and transferred to a glass vial and incubated at 27 ± 1ºC to quantify the number of hatching larvae hatched. In both bioassays the fungal treatment reduced the oviposition period of females, as well as the number of hatching larvae. A bioassay was conducted with IP 47 and IP 119 at two different temperatures: 27 °C or 32 °C. CG 47 pellets incubated at 27 °C incited conidiogenesis on R. microplus females by day 5, whereas IP 119 iniciated conidiogenesis by day 9. Trials conducted at 32 C revealed conidiogenesis on R. microplus females between day 5 and 6 for both fungi. The number of larvae from females exposed to pellets of CG 47 and IP 119 was reduced.. Tests with pellets of ME produced with the different inert materials showed that pellets with vermiculite presented higher conidial production compared with the pellets prepared with cellulose. Therefore, these results together indicate that the pelletized formulation of ME of Metarhizium spp. was effective in controlling R. microplus under laboratory conditions by reducing the number of offspring. This formulation is a potential mycoacaricide, since the temperature and humidity conditions required for production of infective conidia are conducive to those required by this tick to lay eggsand hatching larva in the environment. / Fêmeas ingurgitadas de Rhipicephalus microplus procuram áreas sombreadas e úmidas no solo para realizar oviposição. Estes locais apresentam um microclima favorável para viabilizar o controle deste artrópode com fungos entomopatogênicos. O objetivo deste estudo foi produzir péletes à base de microescleródios (ME) de Metarhizium spp. (CG 47, CG 632, IP 46, IP 119, ARSEF 1883 e ARSEF 2575) e avaliar sua virulência sobre fêmeas ingurgitadas de R. microplus em condições de laboratório. Os péletes foram obtidos a partir de microescleródios produzidos em meio líquido específico e processados para peletização. A produção de conídios e a viabilidade de cada formulado de Metarhizium spp. foram observadas distribuindo-se 0, 03g de péletes em meio ágar-água 2%, e incubando-os a 27 ºC ou 32 ºC por 15 dias, resultados mostram que a produção de conídios pelo péletes dos isolados foi similar para a temperatura de 27 ºC, sendo a viabilidade dos conídios esporulados superior a 90% em e 32 ºC. Dois bioensaios para triagem da virulência dos isolados contra R. microplus foram conduzidos: o primeiro com 0,007 g de péletes de cada um dos isolados de Metarhizium spp. estudados; e o segundo com quantidades diferentes de péletes (0.002 a0,006 g) do isolado IP 119. Péletes foram distribuídos sobre a superfície de 5 g de latossolo vermelho estéril, em Placas de Petri, umedecido com 2 mL de água destilada estéril. Foram preparadas dez réplicas para cada isolado fúngico. As placas foram incubadas por 15 dias a 27°C e UR&gt; 90% para induzir a produção de conídios a partir dos grânulos. Placas do grupo controle não foram acrescidas de péletes. Após este período, foi adicionada uma fêmea em cada placa e avaliou- se diretamente o início da conidiogênese sobre os carrapatos por 15 dias, e após este período a massa de ovos foi retirada das placas e acondicionada individualmente em tubos de vidro para posterior quantificação das larvas eclodidas. Em ambos os bioensaios, os tratamentos fungicos reduziram o período de oviposição das fêmeas, assim comoo número de larvas eclodidas. Resultado semelhante observado paradiferentes concentrações de péletes do isolado IP 119. Bioensaio similar à metodologia descrita foi conduzido somente com IP 119 e CG 47 em duas temperatura:s 27 ºC ou 32 ºC. Os resultados mostraram que a 27 ºC péletes formulados com ME de CG 47 iniciaram a conidiogênese em fêmeas de R. microplus em tempo médio de 5 dias, e IP 119 em 9 dias. Já os ensaios conduzidos a 32 ºC mostraram que a conidiogênese sobre as fêmeas de R. microplus iniciaram entre o 5° e 6° dia. Para ambos isolados o número médio de larvas eclodidas reduziram.(X 2 = 43.53; df = 2; P &lt;0.001). Péletes de ME com inerte vermiculita apresentaram maior produção de conídios do que o formulado contendo celulose (P = 0,01). Os resultados do presente estudo indicam que a formulação peletizada de ME de Metarhizium spp. foi eficaz no controle de R. microplus em condições de laboratório por reduzir o número de progênies. Esta formulação merece atenção para desenvolver potencial carrapaticida biológico, visto que as condições de temperatura e umidade requeridas para produção de conídios infectivos são similares às requeridas por este carrapato para produção de ovos e eclosão das larvas no ambiente.

O carrapato Amblyomma cajennense é o principal vetor da bactéria Rickettsia rickettsii, agente etiológico da febre maculosa brasileira (FMB). Os estágios imaturos destes artrópodes apresentam uma baixa especificidade para os hospedeiros, o que aumentam as chances de parasitismo em humanos. Nos anos de 2011 e 2012, a vigilância epidemiológica da FMB registrou 140 casos confirmados e letalidade de 50 por cento , a maior incidência desde a regulamentação da notificação compulsória no Estado de São Paulo, em 2001. Além disso, estudos indicam uma tendência de aumento de expansão geográfica e de número de casos da doença. A fim de aplicar medidas de controle para a FMB, a determinação de quais são os animais hospedeiros para as fases imaturas do carrapato é importante para identificar as fontes de infecção de bactérias. Entre a literatura científica não havia estudos sobre esse escopo para carrapatos da América do Sul. Neste estudo, uma abordagem para a detecção de hábito alimentar de A. cajennense foi padronizada. Resumidamente, as amostras de sangue foram coletadas a partir das seguintes espécies animais: frango, capivara, codorna, cavalo, cobaia, coelho, cachorro e um camundongo silvestre. Em seguida, o DNA foi extraído a partir destas amostras e, depois, testado para a amplificação por PCR utilizando-se três pares de diferentes oligonucleotídeos iniciadores para mamíferos, três para aves e cinco para os dois grupos de animais, além de oligonucleotídeos iniciadores específicos desenhados para roedores cricetídeos. Os genes alvos 12S rDNA, cyt b e COI resultou em positivo para a detecção de fragmentos de DNA. Por PCR foi testado posteriormente em laboratório repastos de carrapatos. Carrapatos adultos de A. cajennense que foram alimentados em coelhos quando larvas e ninfas tiveram o intestino extraído e processado para o isolamento de DNA que foi submetido à amplificação por PCR. Foi possível identificar a espécie hospedeira em 66,7 por cento dos carrapatos testados. O sequenciamento de DNA e a comparação das sequências consenso com todas as sequências do banco de dados (GenBank) permitiu a identificação em nível de espécie (coelho), com base em 98 por cento de similaridade. / The tick Amblyomma cajennense is the main vector of the bacterium Rickettsia rickettsii, the etiological agent of brazilian spotted fever (BSF). The subadult stages of this arthropod present a low specificity for hosts, which increases the chances of parasitism in humans. In the years of 2011 and 2012, the BSF epidemiological surveillance recorded 140 confirmed cases and 50 per cent case-letality rate, the highest incidence since the regulation of the compulsory notification in the State of São Paulo, in 2001. Furthermore, studies indicate an increase trend for geographical expansion and number of cases of the disease. In order to apply control measures for BSF, the determination of which is the vertebrate hosts for the immature stages of the tick is important to identify the sources of infection of bacteria. Among the scientific literature there was no studies on this scope for ticks of South America. In this study, it was standardized a approach for detection of feeding habits of A. cajennense. Briefly, blood samples were collected from the following animal species: chicken, capybara, quail, horse, guinea pig, rabbit, dog and a wild mouse. Then, DNA was extracted from these samples and afterwards tested for PCR amplification using three different pairs of primers for mammals, three for birds, and five for both groups of animals in addition to a specific designed primers for cricetidae rodents. The target gene 12S rDNA, cyt b and COI resulted in positive for detection of DNA fragments. PCR was tested thereafter on laboratory fed ticks. Adult A. cajennense ticks that were fed on rabbits as larvae and nymphs had the midguts extracted and processed for DNA isolation and underwent PCR amplification. It was possible to identify the host species on 66,7 per cent of tested ticks. The DNA sequencing and comparison of the consensus sequences of all the database sequences (GenBank) allowed the identification at the species level (rabbit), based on 98 per cent similarity.

Made available in DSpace on 2016-08-19T12:56:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Ildenice.pdf: 920741 bytes, checksum: cb605055b3e79b9a2a27421635da66c0 (MD5) Previous issue date: 2013-07-29 / The oil constituent of Cinnamomum zeylanicum were identified by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). The essential oil activity were also evaluated against larvae and engorged females Rhipicephalus microplus(cattle tick). The leaves oil showed a yeld of 1.03% and its main constituints were benzyl benzoate (65.39%), linalool (5.37%), E-cinnamaldeyde (3.97%), α-Pinene (3.95%), β-phellandrene (3.42%), Eugenol (3.36%) e Benzaldeyde (2.68%), corresponding approximately to 88% of the oil. Test package larvae and immersion test of engorged were performed. Similar tests were also performed for the standard benzyl benzoate, the main component of the essential oil. Lethal concentrations of the larvae test were 1.005 mg.mLˉ¹ and 3.368 mg.mLˉ¹ for the essential oil and the standard benzyl benzoate respectively, thus demonstrating that the oil had a better larvicidal activity against the R. microplus. As for the adult immersion test, it was observed that both the essential oil and the standard benzyl benzoate did not cause mortality in direct engorged female R. microplus, but interfered with the process of reproduction of ticks, causing a decrease in egg production and decreased hatchability and mortality of larvae, so thus presenting partial control over the cattle tick. / Os constituintes do óleo de Cinnamomum zeylanicum foram identificados por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM). Também foi avaliada a atividade deste óleo essencial contra larvas e fêmeas de Rhipicephalus microplus (carrapato bovino). O óleo das folhas mostrou um rendimento de 1,03% e seus principais constituintes foram Benzoato de Benzila (65,39%), Linalol (5,37%), E-Cinamaldeido (3,97%), α-Pineno (3,95%), β-Felandreno (3,42%), Eugenol (3,36%) e Benzaldeido (2,68%), correspondendo aproximadamente a 88% do óleo. Teste de pacote de larvas e teste de imersão de fêmeas ingurgitadas foram realizados. Testes semelhantes também foram feitos para o padrão Benzoato de Benzila, componente principal do óleo essencial. As concentrações letais do teste de larvas foram de 1,005 mg.mLˉ¹ e 3,368 mg.mLˉ¹ para o óleo essencial e para o padrão Benzoato de Benzila, respectivamente, demonstrando assim que o óleo teve uma melhor atividade larvicida contra o R. microplus. Já para o teste de imersão de adultos, foi observado que, tanto o óleo essencial como o padrão Benzoato de Benzila não ocasionaram mortalidade direta nas fêmeas ingurgitadas de R. microplus, mas interferiram no processo de reprodução dos carrapatos, ocasionando diminuição na produção de ovos e diminuição na eclodibilidade e mortalidade das larvas, portanto, apresentando assim, um controle parcial sobre o carrapato bovino.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-06-23T17:23:05Z No. of bitstreams: 1 2004 - Jos? Roberto Pererira.pdf: 1063290 bytes, checksum: ac86f4bd5958ba416f5739fd8e9c3de5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-23T17:23:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004 - Jos? Roberto Pererira.pdf: 1063290 bytes, checksum: ac86f4bd5958ba416f5739fd8e9c3de5 (MD5) Previous issue date: 2004-05-25 / Laboratory and field trials were performed to evaluate the efficiency of Timb? root extract (Dahlstedtia pentaphylla) (Taub). Burk. (Leguminosae, Papilionoidae, Millettiedae) on samples of Boophilus microplus (Canestrini, 1887) in bovines of the Para?ba Valley region ? S?o Paulo, Brasil. The ?in vitro? trials were carried out using immersion of engorged females, and ?in vivo? on bovines in the field by means of artificial infestation. The standard dilution was made from one part of root powder and three parts of ethanol this was considered the 100% solution. To determine the more efficient solvent to extract rotenone from the root, laboratory trials were conducted on B. microplus engorged females with in three solvents: water, ethanol a.p. and acetone a.p. The laboratory trials permitted the calculation of lethal doses at 90% (LD90) and 50% (LD50) for larvae between seventh and fourtheenth days of application and efficient concentrations at 90% (EC90) and 50% (EC50) on strain local and Mozo with B. microplus engorged females. For the larvae of the local strain (Para?ba Valley Regional Hub) LD50 calculated was 1:31,37 mL and LD90 was 1:85,24 mL. The EC90 for engorged females, of the same strain was of 1:10,19 mL and the EC50 1:34,94 mL. For the engorged females on the hypersersitive strain Mozo the EC90 was 1:23,91 mL and the EC50 1:60,46 mL. The mortality of engorged females in relation to the different kinds of solvents, was analyzed. In the field, the best results (76,10% of control) were obtained three days after application of the product extracted in ethanol, in 1:10, on animals. Then gradually between the seventh and fourteenth days the products lost efficiency, there was no significant difference between treatments and the control group after 21 days. / Foram realizados testes laboratoriais e de campo para avaliar a efici?ncia do extrato de ra?zes da planta Dahlstedtia pentaphylla (Taub.) Burk., (Leguminosae, Papilionoideae, Millettiae) sobre amostras de Boophilus microplus ( Canestrini, 1887 ) de bovinos da regi?o do Vale do Para?ba e da cepa sens?vel Mozo. Os testes foram efetuados ?in vitro?, pela t?cnica de imers?o de tel?ginas e ?in vivo?, sobre bovinos no campo, ap?s infesta??o artificial. As dilui??es foram obtidas a partir da extra??o de roten?ides utilizando?se uma parte de p? das ra?zes da planta para tr?s de etanol, sendo considerada padr?o 100%. Visando determinar o solvente mais eficiente para a extra??o de roten?ides das ra?zes, conduziram-se testes laboratoriais sobre tele?ginas de B. microplus em tr?s solventes: ?gua, etanol p.a e acetona p.a. Os testes laboratoriais permitiram calcular a Dose Letal 90% (DL90) e DL50 para larvas com idade entre sete e 21 dias e a Concentra??o Eficaz 90% (CE90) e CE50 sobre tele?ginas de B. microplus das cepas local e Mozo. Para as larvas da cepa local (Polo Regional do Vale do Para?ba) a DL50 calculada foi de 1: 231,37 mL e DL90 1: 85,24 mL. A CE90 para as tele?ginas, da mesma cepa, foi de 1:10,19 mL e a CE50 1: 34,94 mL. Para tele?ginas da cepa sens?vel Mozo a CE90 foi de 1: 23,91 mL e a CE50, 1: 60,46 mL. Analisou-se tamb?m a mortalidade das tele?ginas frente aos diferentes solventes. No campo os melhores resultados obtidos (76,10% de controle) foram obtidos tr?s dias ap?s a aplica??o do produto extra?do em etanol, na dilui??o 1: 10, sobre os animais. A partir da? gradualmente nos dias sete e quatorze os produtos foram perdendo efici?ncia, n?o apresentando mais diferen?a significativa entre os tratamentos e o grupo controle no dia +21.

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2017-07-21T12:10:16Z No. of bitstreams: 1 2010 - Rafaella Camara Teixeira.pdf: 2127524 bytes, checksum: 2f2281ce314ac38db40bc03d628e7447 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-21T12:10:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010 - Rafaella Camara Teixeira.pdf: 2127524 bytes, checksum: 2f2281ce314ac38db40bc03d628e7447 (MD5) Previous issue date: 2010-02-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico, CNPq, Brasil. / Cell cultures provide a simplified system of observation that can be particularly useful for studies of intracellular and epicellular microorganisms. The aim of this study was to establish in vitro embryonic cells primary culture of the tick Rhipicephalus sanguineus to cultivate the spirochete Borrelia burgdorferi american strain G39/40. The culture was established from embryonated eggs of engorged females of R. sanguineus to 12 days after the beginning of the oviposition, using the culture medium Leibovitz's L-15B supplemented with 20% of inactivated fetal calf serum, 10% of tryptose phosphate broth, 0.1% fraction V bovine albumin, 1% of glutamine and 0.1% of gentamicin antibiotic, pH 6.8. After the formation of a monolayer, the initial culture medium L-15B was removed from the tubes and replaced by Barbour-Stoenner-Kelly medium (BSK) or BSK with L-15B without antibiotics. Spirochetes previously grown in BSK were counted and inoculated into tubes, with final concentration of approximately 6.2 x 105 spirochetes/mL. B. burgdorferi from the inoculated tubes were countered when the means showed yellow color, indicative of high acidity due to the multiplication of spirochetes. On the third day after the start of primary culture of R. sanguineus embryonic cells, we observed the fixation of cell aggregates on the surface of the bottles. From these clusters, there were several cell types, such as large fibroblast-type cells and structures like vesicles and tubes. In the second week, we observed the appearance of round or flattened epithelial-type cells, and after 21 days of culture, we realized the formation of a monolayer due to the appearance of confluent cells. The L-15B medium proved to be efficient for the development of primary culture of R. sanguineus embryonic cells. There was a great multiplication of spirochetes cultivated with cultured embryonic cells when compared to the initial concentration, as well as the spirochetes grown in the absence of the tick cells, observing an increase of 100 times the number of B. burgdorferi. Seven days after inoculation, the tubes in which we used only the BSK medium, higher concentrations of B. burgdorferi were recovered when compared to the tubes where the medium BSK and Leibovitz's L-15B were used. Regardless of the culture media tested, the final concentration of B. burgdorferi of the tubes with embryonic tick cells was lower than that of seamless embryonic cells. In observation of the culture tubes on microscopy phase contrast, spirochetes were presented adhered to epithelial-type and fibroblast-type tick cells in an epicelular way and with great motility. R. sanguineus embryonic cells grown in BSK medium, with or without B. burgdorferi inoculation, stopped its propagation, showed membrane degeneration and many of them broke away from the surface of the bottle. The cells grown in BSK and L- 15B continued to multiply, many were still intact and attached to the bottle, with the presence of tissues in development, with fewer degenerated and floating cells than those cultivated in BSK. The spirochete B. burgdorferi strain G39/40, adhered, grew, multiplied and showed great motility in cultures of embryonic cells of R. sanguineus tick, using BSK and Leibovitz?s L-15B media. / As culturas celulares oferecem um simplificado sistema de observa??o que pode ser particularmente ?til para estudos de microrganismos intracelulares e epicelulares. O objetivo deste estudo foi estabelecer cultura prim?ria in vitro de c?lulas embrion?rias do carrapato Rhipicephalus sanguineus para cultivo da espiroqueta Borrelia burgdorferi, cepa americana G39/40. A cultura foi estabelecida a partir de ovos embrionados de f?meas ingurgitadas de R. sanguineus com 12 dias ap?s o ?nicio da postura, utilizando o meio de cultivo Leibovitz?s L- 15B, suplementado com 20% de soro fetal bovino inativado, 10% de caldo triptose fosfato, 0,1% fra??o V de albumina bovina, 1% de glutamina e 0,1% de antibi?tico gentamicina, pH 6,8. Com a forma??o de uma monocamada celular, o meio de cultura inicial L-15B foi retirado dos tubos e trocado por meio Barbour-Stoenner-Kelly (BSK) ou BSK com L-15B sem antibi?tico. As espiroquetas previamente cultivadas em BSK foram contadas e inoculadas nos tubos, apresentando concentra??o final de aproximadamente 6,2 x 105 espiroquetas/mL. A contagem de B. burgdorferi dos tubos inoculados foi realizada quando o meio apresentou colora??o amarela, indicativa de elevada acidez devido ? multiplica??o das espiroquetas. No terceiro dia ap?s o in?cio da cultura prim?ria de c?lulas embrion?rias de R. sanguineus, foi poss?vel observar a fixa??o de agregados celulares na superf?cie dos frascos. A partir destes agregados, surgiram diversos tipos celulares, como grandes c?lulas fibroblast?ides e estruturas semelhantes a ves?culas e tubos. Na segunda semana, foi observado o aparecimento das c?lulas epiteli?ides ou redondas e, com 21 dias de cultivo, visualizou-se a forma??o de uma monocamada celular devido ao aspecto confluente das c?lulas. O meio de cultivo L-15B demonstrou ser eficiente para o desenvolvimento da cultura prim?ria de c?lulas embrion?rias de R. sanguineus. Houve grande multiplica??o das espiroquetas cultivadas com c?lulas embrion?rias quando comparada ? concentra??o inicial, assim como das espiroquetas cultivadas na aus?ncia das c?lulas de carrapato, observando-se um aumento em 100 vezes do n?mero de B. burgdorferi. Sete dias ap?s a inocula??o, foram recuperadas maiores concentra??es de B. burgdorferi nos tubos onde se utilizou somente o meio BSK, do que nos tubos onde foi utilizado BSK juntamente com Leibovitz?s L-15B. Independente dos meios de cultivo testados, a concentra??o final de B. burgdorferi dos tubos com c?lulas embrion?rias de carrapato foi menor do que a dos tubos sem c?lulas embrion?rias. Na observa??o dos tubos de cultivo ? microscopia de contraste de fase, as espiroquetas apresentaram-se aderidas ?s c?lulas de carrapato epiteli?ides e fibroblast?ides de maneira epicelular e com grande motilidade. As c?lulas embrion?rias de R. sanguineus cultivadas em meio BSK, com ou sem in?culo de B. burgdorferi, pararam sua multiplica??o, apresentaram degenera??o na membrana e muitas desprenderam-se da superf?cie do frasco. As c?lulas cultivadas em meio BSK e L-15B continuaram a se multiplicar, muitas ainda estavam ?ntegras e aderidas ao frasco, com presen?a de tecidos em desenvolvimento, com menos c?lulas degeneradas e flutuantes que as cultivadas somente em BSK. A espiroqueta B. burgdorferi, cepa G39/40, aderiu, cresceu, multiplicou e apresentou grande motilidade nos cultivos com c?lulas embrion?rias do carrapato R. sanguineus, utilizando meios BSK e Leibovitz?s L-15B.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_luciano_rocha_fagundes_alves_branco.pdf: 1104758 bytes, checksum: b30cb2cfcf60ed3e4183d926b91986c9 (MD5) Previous issue date: 2012-12-23 / The countryside of Rio Grande do Sul, is in a traditional farm barn, cutting and milk, and in this context, the tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus, is responsible for numerous losses, by their direct and indirect damages. Nowadays, resistance to acaricides, affects almost all active ingredients on the market, and there is a lack of data on this process in the region under study. The aim of this study was to understand the evolution of the susceptibility of populations Riphicephalus (Boophilus) microplus to active ingredients for use in immersion and sprinkling on the market during the last decade in the region. To do so, 439 samples of properties were analyzed in the region by tick immersion "in vitro" testing at the Veterinary Doctor s Office (CONSULVET) - Bage / RS. We evaluated the following active ingredients: amitraz, cypermethrin + ethion association, deltamethrin, and from the year 2003, a combination cypermethrin + chlorpyrifos + citronellal, yielding the following averages of efficiency: 64.3%, 83.2%, 43.3 and 82.4% respectively. Upon examining the percentages of samples with ≥ 95% efficiency, we obtained the following results: 1st five-year period (2001-2005) = 50.7%, 38.2%, 16.0% and 38.8%, as in 2 ° five-year period (2006-2010) = 24.2%, 41.7%, 4.5% and 48.9% respectively. The study showed that in the countryside of Rio Grande do Sul, there are populations of R. (B.) microplus resistant to all the principles available for application by dipping or spraying is more serious the situation of deltamethrin. It also found that associations of pyrethroid with phosphorated and citronellal are the most indicated formulations in the present, since there was a significant reduction in the efficiency levels of amitraz, over the five-year periods, especially in the last year, which may be due to the use intensity of this principle in the region and the slow selection of resistant populations. It is, therefore, evident the critical situation of tick resistance to acaricides, even in a region where the climate allows only three annual generations of the ectoparasite, and the need for measures that allow the rational and oriented use of acaricides, and management measures and knowledge about the epidemiology of the tick in the region to exert less selection pressure on populations, favoring the life of the active ingredients on the market. / A região da Campanha Gaúcha, constitui-se em um celeiro tradicional da exploração pecuária, de corte e leite, e nesse contexto, o carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus , é responsável por inúmeras perdas, por seus danos diretos e indiretos. Nos dias atuais, a resistência aos acaricidas, atinge quase todos os princípios ativos disponíveis no mercado, e existe uma carência de dados relativos a este processo, na região em estudo. O objetivo deste estudo, foi conhecer a evolução da susceptibilidade de populações de Riphicephalus (Boophilus) microplus aos princípios ativos para uso em imersão e aspersão, existentes no mercado, durante a ultima década, na região. Para isto, foram analisadas 439 amostras, de propriedades da região através do teste in vitro de imersão de teleóginas, no Consultório Médico Veterinário (CONSULVET) Bagé/RS. Foram avaliados, os seguintes princípios ativos: amitraz, associação cipermetrina+ethion, deltametrina e apartir do ano de 2003, uma associação ipermetrina+clorpirifós+citronelal, obtendo-se as seguintes médias de eficácia: 64,3%, 83,2%, 43,3 e 82,4% respectivamente. Quando avaliadas as amostras com percentuais de eficácia ≥ 95%, obteve-se os seguintes resultados: 1° qüinqüênio ( 2001-2005 ) = 50,7%, 38,2%, 16,0% e 38,8%, já no 2° qüinqüênio( 2006-2010 ) = 24,2%, 41,7%, 4,5% e 48,9% respectivamente. O estudo demonstrou que na região da Campanha do RS, existem populações de R. (B.) microplus resistentes a todos os princípios disponíveis para aplicação por imersão ou aspersão, sendo mais grave a situação da deltametrina. Também constatou-se que as associações de piretróides com fosforados e citronelal são as formulações mais indicadas na atualidade, uma vez que ocorreu significativa redução dos níveis de eficácia do amitraz, ao longo dos qüinqüênios, sobretudo no último ano, o que pode ser devido ao uso intensivo desse princípio na região e à lenta seleção de populações resistentes. Evidencia-se, assim, a situação crítica de resistência do carrapato a acaricidas, mesmo em uma região onde o clima permite apenas três gerações anuais do ectoparasito , e a necessidade de medidas que permitam o uso racional e orientado dos carrapaticidas, além de medidas de manejo e conhecimento sobre a epidemiologia do carrapato na região, a fim de exercer menor pressão de seleção nas populações, favorecendo a vida útil dos princípios ativos disponíveis no mercado.

This study attempted to characterise 5 field stocks of B. canis, collected from various geographic areas of southern Africa in terms of pathogenicity, immune response, cross resistance and antigenic composition. This was done by means of artificial infection of two to four year old Beagle dogs. Serological tests included indirect fluorescent antibody tests, polyacrylamide gel electrophoresis , Western blotting of B. canis antigen and immune serum transfers. The ZIM1, GHT1 , QTN1 and DBN1 stocks were found to be virulent and the JHB1 stock, which might be a cardiac form of babesiosis, was found to be highly virulent. Immune responses of dogs to primary challenges were poor. A second challenge or relapse was important in the development of a resistant immunity. Heterologous challenges showed that dogs which were immune to the ZIM1, QTN1 and DBN1 stocks were partially immune to the JHB1 stock. The dog that was immune to the GHT1 stock was the only one that was totally resistant to the JHB1 stock. Western blots revealed interstock antigenic variation between the JHB1 and the other four stocks. These differences were, however, not great enough to separate the stocks taxonomically.