Growing incidence of infections caused by the tick-transmitted protozoan parasite Babesia spp. defines babesiosis as an emerging disease from the aspect of human and veterinary medicine. The thesis provides an insight to biology of two main agents of human babesiosis, Babesia microti and Babesia divergens. We introduce here the fully optimized quantification model of Babesia parasite enabling the detailed investigation of the parasite developmental cycle and identification of molecules playing a role in its acquisition and transmission by the vector Ixodes ricinus. Novel and detailed information about Babesia dissemination within the tick tissues are given by newly implemented visualization and quantification techniques. Special emphasis is paid to parasite development in the tick salivary glands, the primary site responsible for parasite transmission from the vector into the host. Using gene-specific silencing we screene the tick immune pathways including effector molecules and evaluate their role in Babesia acquisition. We also provide a detailed view to Babesia parasite sexual commitment by monitoring its kinetics upon various stimuli. Moreover, a new direction of anti-babesial therapy is proposed by validation of the Babesia proteasome as a drug target. Overall, the research presented in the thesis extends the current knowledge of the Babesia parasite biology including molecular interactions at the tick-Babesia interface and thereby could significantly contribute to a potential control of babesiosis.

Borrelia afzelii differential gene expression in the course of tick blood-feeding, and during chronic infection in mice was studied. Temperature effect on B. afzelii gene expression and infectivity was investigated. Infection rates of mice immunized with B. afzelii tick gut antigen at various stages of tick blood-intake were analyzed. This work was funded by the Grant Agency of the Czech Republic, Project No. 17-27393S to Radek Šíma.

A resistência aos acaricidas é um dos maiores desafios para o controle adequado do carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Entender os mecanismos de resistência aos acaricidas pode ser fundamental para prolongar sua eficiência no controle desse parasita. Transportadores ABC são reconhecidos em um grande número de organismos, pela sua participação na destoxificação de drogas. Eles são proteínas transmembrana, responsáveis por remover da célula compostos tóxicos, endógenos ou exógenos. Desta forma, protegem os organismos e são associados à resistência a drogas em vários nematódeos, artrópodes parasitas e células cancerígenas. No presente trabalho, determinamos a participação de transportadores ABC na destoxificação de compostos tóxicos, com ênfase ao acaricida ivermectina, no carrapato R. microplus. O tratamento com inibidores de transportadores ABC aumentou a toxicidade da ivermectina em larvas e fêmeas adultas de populações de campo resistentes a este acaricida. Inibidores de transportadores ABC também aumentaram a toxicidade de abamectina, moxidectina e clorpirifós, em uma população multirresistente a acaricidas, indicando que estes transportadores são responsáveis pela destoxificação de um grande número de acaricidas estruturalmente não relacionados. Níveis de transcrição significativamente maiores do gene RmABCB10 foram identificados no intestino de fêmeas de populações resistentes à ivermectina e amitraz, comparado à população suscetível, importante indicativo da participação deste transportador ABC na resistência a acaricidas. A toxicidade da ivermectina foi também significativamente aumentada, em uma população de células embrionárias de carrapato resistentes a este acaricida, quando estas foram co-incubadas com um inibidor de transportadores ABC. Além disso, os níveis de transcrição do gene RmABCB10, foram também induzidos nesta mesma população, comparado às células parentais suscetíveis à ivermectina, indicando que mecanismos semelhantes são selecionados in vivo e in vitro, e confirmando a participação de transportadores ABC na resistência à ivermectina. Mostramos ainda, que transportadores ABC responsáveis pelo sequestro e, consequente, destoxificação da molécula heme para o interior dos hemossomos, presentes no intestino do carrapato, são importantes na destoxificação de acaricidas para o interior desta mesma organela. Sugerindo ser este um importante mecanismo de defesa contra os acaricidas no carrapato. O silenciamento gênico do RmABCB10 por RNAi reduziu a destoxificação do heme nos hemossomos e aumentou a toxicidade da ivermectina em uma população resistente, indicando que o mesmo transportador usado para destoxificar heme é responsável pela destoxificação de acaricidas no intestino. Em conjunto, estes resultados revelam a participação de transportadores ABC na destoxificação de compostos endógenos e exógenos no carrapato e sua implicação como um mecanismo de resistência à ivermectina e outros acaricidas. Os dados aqui apresentados representam uma via de destoxificação de acaricidas até então desconhecida. E podem servir como alvo para o desenvolvimento de métodos de diagnóstico e monitoramento da resistência e para o desenvolvimento de drogas e vacinas, contribuindo para o controle do carrapato. / Acaricide resistance is one of the biggest challenges in the control of the tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Understanding the mechanisms of drug resistance in the cattle tick is critical to prolong the efficacy of acaricides to control this parasite. ABC transporters are recognized in a large number of organisms. They are membrane-integrated proteins responsible for pumping toxic compounds, either exogenous or endogenous, out of the cells, protecting these. In this sense, ABC transporters have been associated with drug resistance in several nematodes, parasitic arthropods and cancer cells. The present study reports on the participation of ABC transporters in the detoxification of toxic compounds, particularly ivermectin, in the tick R. microplus. ABC transporter inhibitors increased ivermectin toxicity in larvae and females of ivermectin-resistant populations. ABC transporter inhibitors also increased the toxicity of abamectin, moxidectin and chlorpyriphos in a multidrug resistant population, suggesting that ABC transporters are responsible for the detoxification of a large number of structurally unrelated acaricides. Increased transcription levels of RmABCB10 found in midgut of females from ivermectinand amitraz-resistant populations, compared to a susceptible tick population, indicated the participation of this ABC transporter in acaricide resistance. Increased ivermectin toxicity in a tick cell line resistant to this acaricide was observed when the cells were co-incubated with an ABC transporter inhibitor. Moreover, transcription levels of RmABCB10 were also increased in this cell line, compared to the parental susceptible cell line, suggesting that similar mechanisms are selected in vivo and in vitro and confirming the participation of ABC transporters in ivermectin resistance. We even showed that ABC transporters responsible for the sequestration and hence detoxification of the heme into the hemosomes present in the midgut of the tick, were also important for the detoxification of acaricides in the same organelle, suggesting this is an important defense mechanisms of the tick against acaricide. The down-regulation of RmABCB10 by RNAi reduced heme detoxification in the hemosomes and increased ivermectin toxicity in resistant females, showing that the same ABC transporter is used to detoxify heme and acaricides in the midgut. Together, these results provide evidence of the participation of ABC transporters in the detoxification of endogenous and exogenous compounds in the tick, and indicate the role of these transporters as a mechanism of resistance to ivermectin and other acaricides. The data reported herein shed light on a new acaricide detoxification mechanism that may be useful in the development of assays to monitor drug resistance and design new anti-tick drugs and vaccines, contributing to the development of novel cattle tick control strategies.

A eficácia do fungo filamentoso Metarhizium anisopliae para controle de carrapatos foi evidenciada em vários experimentos in vitro, entretanto, há poucos relatos de ensaios em condições de campo para demonstrar a real aplicação do controle biológico. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia de M. anisopliae no controle de Rhipicephalus microplus em condições de laboratório e de campo associado ou não a acaricidas químicos, utilizando bovinos. Inicialmente, foi avaliada a compatibilidade de M. anisopliae (cepa E6) em ensaio in vitro com cinco produtos comerciais contendo: amitraz, cipermetrina, clorpirifós e duas associações de piretróides sintéticos e organofosforados (PS+OF). Em geral os acaricidas apresentaram pouco efeito na viabilidade do fungo. Quando M. anisopliae foi associado ao amitraz e a clorpirifós, ocorreu diminuição na viabilidade em aproximadamente 63% e 67% a 48 e 96 horas após a mistura, respectivamente. A eficácia de M. anisopliae (cepa E6) também foi avaliada sobre uma cepa de R. microplus multiresistente a acaricidas. Foram realizados experimentos in vitro e em condições de campo, utilizando o fungo isoladamente ou em associação com um acaricida comercial de pulverização em bovinos infestados com a cepa Jaguar (de R. microplus resistente a carrapaticidas). Para os ensaios a campo, vinte bovinos foram divididos em quatro grupos (n = 5): (i) o grupo tratado com acaricida; (ii) o grupo tratado com o fungo, (iii) o grupo tratado com a associação de fungo + acaricida, e (iv) o grupo controle (não tratado). Os animais foram separados em piquetes com animais naturalmente infestados e também com infestação experimental com a cepa Jaguar. Em cada infestação foram utilizadas 20.000 larvas de R. microplus, aplicadas em três semanas a -21, -14 e -7 dias antes do primeiro tratamento e uma semana depois de cada tratamento. Os animais dos grupos tratados foram pulverizados com o fungo na concentração de 108 conídios/mL com intervalo de 21 a 28 dias sendo realizados sete tratamentos. Desde o primeiro tratamento até o final do experimento, os três grupos tratados, apresentaram nas contagens, número de carrapatos inferior ao grupo controle (P <0,05). Os grupos tratados com a suspensão de esporos de fungo ou com acaricida isoladamente apresentaram um controle semelhante, com um mínimo de 50% de eficácia e média de 75%. Mais significativo foi o tratamento com associação do fungo com o acaricida que resultou em eficácia de 91,7%, após o primeiro tratamento e acima de 98% após os outros seis tratamentos. Assim, fica aqui demonstrada a real aplicabilidade do uso do fungo M. anisopliae (Cepa E6) para controle de R. microplus resistentes a acaricida, em especial a sua associação com acaricidas. / The of the fungus Metarhizium anisopliae to control ticks has been shown in several in vitro experiments. However, there have been few reports of assays in field conditions in order to demonstrate the real applicability of the biological control. Thus aim of the present study was to evaluate the efficacy of M. anisopliae to control Rhipicephalus microplus under laboratory and field conditions. Firstly the compatibility of M. anisopliae (strain E6) to acaricides was tested in vitro using five commercial acaricides: amitraz, cypermethrin, chlorpyriphos and two associations of synthetic pyrethroid and organophosphate (SP+OP). In general, the acaricides only displayed mild effects on fungus viability. The lower fungal viability was with amitraz and chlorpyriphos, approximately 63% of fungus viability at 48 hours post-mixture and 67% at 96 hours, respectively. Secondly, the efficacy of M. anisopliae (strain E6) to control a multiacaricide-resistant strain of R. microplus (Jaguar) was evaluated, in vitro and under field conditions in tick infested bovines, using the fungus alone or in association with a commercial acaricide by manual spraying. The field experiment was conducted with twenty bovines divided into four groups (n = 5); (i) acaricide-treated group, (ii) fungus-treated group, (iii) fungus+acaricide group, and (iv) control non-treated group. Animals were allocated into highly infested paddocks and were also experimentally infested with 20.000 larvae of R. microplus in three weeks -21, -14, and -7 days before the first treatment and one week after each treatment. Animals in the treated groups were sprayed with M. anisopliae at a concentration of 108 conidia/mL at 21 or 28 days intervals (seven treatments). From the first treatment to the end of the experiment, the treated groups had lower tick infestation (P < 0.05). Groups treated with fungus suspension and acaricide alone, presented a similar efficacy, with minimal of 50% and 75% average. Importantly, the association of fungus and acaricide promoted a minimal percent of 91.7% tick-control after the first treatment and over 98% tick-control in the other six treatments. Thus in this work we demonstrate the real applicability of the use of M. anisopliae (strain E6) to control acaricide resistant ticks R. microplus in particular using the association of fungal spores and acaricides.

O Rhipicephalus microplus é um parasita obrigatório hematófago, monoxeno, que gera grande impacto econômico a partir da ação espoliativa sobre o seu hospedeiro preferencial. A glicogênio sintase quinase 3 (GSK-3), uma proteína altamente conservada e ubiquamente expressa entre diversas espécies, foi identificada no carrapato bovino sob a isoforma GSK-3β. Envolvida na modulação da atividade da proteína glicogênio sintase, como um agente regulador da síntese de glicogênio, essa proteína atua no metabolismo energético do R. microplus. A GSK-3 também está envolvida na via de sinalização Wnt, e por isso, já foi descrita como uma quinase essencial para a formação do embrião, estando diretamente envolvida no processo reprodutivo deste carrapato. Neste contexto, a GSK-3β é uma candidata para o desenvolvimento de novas alternativas de controle do carrapato bovino. Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi estudar a participação da proteína GSK-3β na fisiologia do R. microplus a partir da inibição de sua atividade. Ensaios in vitro e in vivo foram realizados para testar a inibição química e imunológica da atividade dessa proteína. Anticorpos contra peptídeos sintéticos baseados na sequência da GSK-3β (anti- SRm0218 e anti-SRm86100) usados neste trabalho não foram capazes de inibir a atividade dessa proteína, no entanto, a inibição da GSK-3β foi alcançada quando células embrionárias de R. microplus foram submetidas à inibição química, por meio de um inibidor específico. Este resultado sustenta o potencial dessa proteína como alvo para o desenvolvimento de uma alternativa de controle do carrapato bovino, pois a sua inibição possivelmente atuaria negativamente na capacidade reprodutiva do carrapato R. microplus. / Rhipicephalus microplus is a monogenetic, hematophagous ectoparasite that has a large economic impact due to associated losses in the cattle industry. Glycogen synthase kinase 3 (GSK-3) is a highly conserved and ubiquitously expressed protein in several species. It has been identified as GSK-3β isoform in the cattle tick, and is involved in the modulation of glycogen synthase activity, as a regulator of glycogen synthesis with a role in energy metabolism of R. microplus. GSK-3β is also involved in the Wnt signaling pathway. It is a fundamental kinase for embryo development, and is directly linked with R. microplus reproductive process. Thus, the aim of this study was to investigate the role of GSK-3β in R. microplus physiology by inhibiting its activity. In vitro and in vivo assays were carried out to test its immunological and chemical inhibition. Rabbit antibodies against synthetic peptides based on GSK-3β sequence (anti-SRm0218 and anti-SRm86100) used in this work were not capable to inhibit GSK- 3β activity, but GSK-3β inhibition was reached when R. microplus embryo cells were cultivated with a specific inhibitor. This result supports the potential of this protein as a target to develop a new cattle tick control method, because its inhibition probably acts detrimentally in the reproductive capacity of the tick.

Factor C is a multi-domain serine protease which recognizes Gram-negative bacteria via binding to lipopolysaccharides and triggers hemolymph clotting cascade in the horseshoe crab. A closely related molecule was also found to be present in the genome of the tick Ixodes scapularis. In this work, the full sequence of Factor C ortholog from Ixodes ricinus (IrFC) was determined. IrFC is mainly expressed in tick hemocytes and the heavy chain of the activated molecules is present in tick hemolymph as confirmed by Western blotting with antibodies raised against recombinant fragments of IrFC. The function of the IrFC in tick innate immunity was assessed using its silencing by RNA interference.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-28Bitstream added on 2014-06-13T20:24:58Z : No. of bitstreams: 1 pereira_aa_dr_jabo.pdf: 701518 bytes, checksum: 30275264c0f92b3526a95f9d1f38d1a2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Boophilus microplus, o carrapato do boi, é uma espécie originária do sudeste da Ásia e introduzida no Brasil com a colonização. Atualmente, este ectoparasita possui uma distribuição ampla no país e causa prejuízos econômicos consideráveis. Até o presente, o controle do B. microplus baseiase na aplicação de acaricidas quando o número de carrapatos no hospedeiro é elevado. O conhecimento prévio da ecologia do carrapato em cada região, porém, permitiria um controle estratégico otimizando o uso de acaricidas. Nestas condições, o custo da utilização dos acaricidas diminuiria pelo uso em momento mais eficaz, a contaminação ambiental decresceria pelo uso menos freqüente e a vida útil dos produtos acaricidas seria prolongada. Por este motivo, neste projeto foi realizada uma análise bioecológica do B. microplus na região de Franca, nordeste do Estado São Paulo. Estudando a fase de vida livre do carrapato, determinou-se o período de pré-eclosão (P.E.), tempo entre o desprendimento das teleóginas e o surgimento das primeiras larvas, e a longevidade como tempo total entre a eclosão e o desaparecimento (morte) das últimas. O valor máximo de P.E. (n = 112 dias) foi observado no final da estação seca, em setembro/2006, enquanto o valor mínimo foi de 63 dias em fevereiro de 2007, sendo obtido um valor médio de 83,6 dias. A longevidade (LONG.) máxima das larvas foi de 63 dias, atingida em maio/2006, observada no final da estação chuvosa, e a mínima foi de 7 dias constatada em dezembro de 2005, sendo obtido um valor médio de 21,9 dias. Constatou-se uma grande influência da temperatura (especialmente na pré-eclosão) e pluviosidade (que afetou principalmente a longevidade das larvas). Na fase parasitária, observouse um maior número de parasitos, por animal, no final da estação chuvosa, sendo a média de 61,9 + 48,7, sendo observado o maior pico... / Boophilus microplus, the cattle tick, is a species from the southeast of Asia and it came to Brazil along with colonization. Nowadays, this ectoparasite is found in many places all over the country, causing considerable economic losses. Up to now, the B. microplus control is done by the acaricide usage when host is heavily infested. However, the previous knowledge of tick ecology in every area would allow a strategic control, increasing effectiveness in the acaricide application. Under these conditions, there would be a decrease in the expenses concerning acaricide use due to its effective utilization, the environmental pollution would be smaller because of its lesser use and the acaricide useful life would be longer. Therefore, this project aimed the B. microplus bio-ecological analysis in Franca, in the northeast of São Paulo state. By studying free-living ticks, it has been determined the pre-eclosion period (P.E.), which is the time between the engorged females release and the first larvae eclosion, and the longevity as total time from hatching to death. The maximum P.E. time (112 days) was observed at the end of dry season, in September 2006, while the minimal period was of 63 days in February 2007, being determined a medium period of 83,6 days. The larvae maximum longevity (LONG.) was of 63 days, in May 2006, noticed at the end of rainy season, and the minimal was of 7 days in December 2005, being calculated a medium period of 21,9 days. It was noted a large temperature influence (especially in the pre-eclosion phase) and rainfall influence (which affected mainly the larvae longevity). In the parasitic phase, it was observed a bigger number of parasites per animal at the end of rainy season, getting an average of 61,9 ± 48,7, reaching the highest point in April 2007. It was also realized, in the study area, a number of 4 generations of B. microplus per year, within October 2004 and November 2007.

Orientador: Gervásio Henrique Bechara / Banca: Gustavo Seron Sanches / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Maria Izabel Camargo Mathias / Banca: Beatriz Rossetti Ferreira / Resumo: O controle de carrapatos à base de acaricidas químicos tem levado a seleção de ectoparasitos resistentes além de contaminação ambiental e de produtos de origem animal. Frente a isso, há crescente incentivo na busca por alternativas de controle do ectoparasito, como o desenvolvimento de vacinas. O presente estudo teve como objetivo avaliar a utilização de uma proteína recombinante da aquaporina do Rhipicephalus (Boophilus) microplus como antígeno em uma vacina contra R. sanguineus, em cães domésticos. A investigação foi realizada em cooperação científica com o United States Department of Agriculture/Agricultural Research Service (USDA/ARS). Os efeitos da vacina foram avaliados nos diferentes estádios do ectoparasito em cães previamente vacinados com o antígeno + adjuvante (Montanide) (G1) e em animais de um grupo controle inoculados apenas como adjuvante (G2). Foram avaliados: i. potencial biótico (parâmetros biológicos) dos carrapatos; ii. Título de anticorpos séricos (IgG) de cães por meio do ensaio imunoenzimático indireto (Teste ELISA) pós imunização; iii. Avaliação histopatológica do sitio de fixação dos carrapatos em diversos momentos pós-fixação na pele dos hospedeiros, incluindo a contagem de células inflamatórias migradas para o foco inflamatório; iv. Histologia do ovário dos carrapatos para observação de possíveis danos causados pela ação do imunógeno; v. locais de ação do antígeno no corpo do carrapato por meio de ensaio imunohistoquímico. Os principais resultados o... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Tick control based on chemical acaricides has led to rapid selection of resistant ectoparasites as well as environmental and animal products contamination. Therefore, there is an increasing incentive in the search for alternatives to the parasite's control, such as the development of vaccines. This study aimed to evaluate the use of a recombinant aquaporin R.(Boophilus) microplus protein as antigen in a vaccine against R. sanguineus in domestic dogs. The research was conducted on scientific cooperation with the United States Department of Agriculture / Agricultural Research Service (USDA / ARS). The vaccine's effects were evaluated at different stages of the ectoparasite in dogs previously vaccinated with antigen + adjuvant (Montanide) (G1) and in animals of a control group inoculated only with adjuvant (G2). It was evaluated: i. biotic potential (biological parameters) of ticks; ii. serum antibodies (IgG) titers of the dogs after immunization, by indirect enzymelinked immunosorbent assay (ELISA); iii. Histopathological evaluation of the tick's attachment site at various times post-fixation on the host's skin, including the inflammatory cell counts migrated into the inflammatory site; iv. Tick's ovarian histology for observation of possible damage caused by the action of the immunogen; v. possible antigen action sites in the tick's body by immunohistochemical assay. The main results were: 1) The engorgement period of adult females from the immunized group was 12% lower than the control group; 2) Larvae from the immunized group had 8.7% higher engorgement period than the control group and weighed 7.2% less; 3) Nymphs from the immunized group had 4.5% lower engorgement period and weighed 3.6% less than the control group; 4) Although the animals showed increased antibodies titer post-second immunization, these titers decreased rapidly; 5) The (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by AMANDA FIGUEIREDO null (ffigueiredo.amanda@gmail.com) on 2017-04-10T14:46:21Z No. of bitstreams: 1 AMANDA FIGUEIREDO_DissertaçãoMestrado1004.pdf: 2196239 bytes, checksum: 95b634a045041887f91f2979d0896cb5 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-17T17:30:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 figueiredo_a_me_jabo.pdf: 2196239 bytes, checksum: 95b634a045041887f91f2979d0896cb5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-17T17:30:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 figueiredo_a_me_jabo.pdf: 2196239 bytes, checksum: 95b634a045041887f91f2979d0896cb5 (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O parasitismo por Rhipicephalus (Boophilus) microplus ocasiona grandes perdas econômicas nos rebanhos bovinos, e seu controle por meio de carrapaticidas sintéticos enfrenta problemas de resistência, além do risco de resíduos nos alimentos e ambiente. Com o objetivo de contribuir com informações relevantes para o controle desse parasita, o presente estudo teve três objetivos: 1) avaliar in vitro o efeito do óleo essencial de Ocotea elegans “canela-sassafrás” sobre larvas e fêmeas ingurgitadas de R. (B.) microplus; 2) avaliar medicamento homeopático no controle de infestações naturais; 3) comparar as técnicas de estimativa visual e de quantificação por amostragem de larvas eclodidas no teste de imersão de fêmeas adultas, visto a importância dessas no levantamento de substâncias com ação carrapaticida. No primeiro experimento “Efeito acaricida e repelente in vitro do óleo essencial de Ocotea elegans (canela-sassafrás) sobre Rhipicephalus (Boophilus) microplus”, foram adotados os testes: contato de larvas em papel impregnado (LPI), teste de repelência larvar (TR) e imersão de fêmeas adultas (AIT). A fim de verificar a eficácia, O. elegans foi avaliada nas concentrações de 0,78 mg/mL a 100 mg/mL. No AIT, a partir da concentração de 25 mg/mL, a eficácia foi superior a 90%. Os LPI (48h) a 100 mg/mL resultaram em taxas de mortalidade acima de 70%. Já o TR obteve repelência superior a 80% a partir da menor concentração avaliada. Em relação às concentrações letais (CL), a menor CL50 obtida no LPI foi de 25,59 mg/mL 48h pós tratamento. As CL50 e CL90 no AIT foram de 4,96 e 17,37 mg/mL e no TR de 0,04 e 1,24 mg/mL, respectivamente. Foi possível concluir que O. elegans demonstrou efeito significativo sobre fêmeas ingurgitadas e de repelência das larvas, e possivelmente pode ser um adjuvante no controle do carrapato bovino, devendo-se priorizar testes in vivo. No segundo experimento, “Estudo da homeopatia no controle de infestações naturais por R. (B.) microplus em bovinos de leite”, 24 fêmeas da raça Holandesa e Jersey x Holandesa foram divididas nos grupos controle (placebo) (n=12) e tratado (bioterápico 30 CH + Sulphur 30 CH) (n=12), administrado no concentrado (2kg/animal/dia) por 12 meses. De cada grupo coletou-se fêmeas ingurgitadas, a fim de comparar os parâmetros reprodutivos, e semi-ingurgitadas para avaliações morfo-histológicas dos ovários. Mensurou-se o peso vivo (PV), volume globular (VG) e realizou-se contagens de fêmeas ingurgitadas no corpo dos animais. Os resultados médios de PV, VG e n° de carrapatos não foram diferentes estatisticamente para os grupos controle e homeopatia: 616,5 kg e 618,6 kg, 27,9% e 27,3%, 12,19 e 13,58 carrapatos, respectivamente. Nas análises in vitro, as médias do peso das fêmeas (0,18 e 0,17 g), peso dos ovos (0,07 e 0,06 g), % de eclosão de larvas (70,1 e 76,6%) e índice de eficiência reprodutiva (54,3 e 60,6%), para os grupos controle e homeopatia, respectivamente, também não tiveram diferença estatística. Além disso, nenhuma alteração nos ovários foi observada nos estudos em foto-microscopia. Portanto, o medicamento homeopático avaliado não foi eficaz no controle de R. (B.) microplus e não interferiu nos parâmetros reprodutivos das fêmeas ingurgitadas. Finalmente, no estudo “Alternative methods for egg hatch evaluation of Rhipicephalus (Boophilus) microplus” em que comparou-se duas técnicas de estimativa de eclosão de ovos, fêmeas ingurgitadas coletadas de bovinos foram submetidas ao AIT com extratos vegetais e mantidas em incubadora para realizar a oviposição. Os ovos foram transferidos para seringas e incubados por 15 dias. A eclosão dos ovos foi avaliada em 210 seringas por estimativa visual (%) e também contadas até 100, em três repetições. Foram encontradas diferenças significativas entre os dois testes. Na estimativa visual (56,8%) a porcentagem de eclosão média foi maior do que na quantificação por amostragem (48,0%). Na quantificação por amostragem, não foram observadas diferenças estatísticas nas contagens das três amostras (48,1, 47,8 e 48,1%) e a correlação entre as repetições foi de 0,96, sugerindo que a contagem de uma amostra é suficiente e o resultado independente do avaliador. O presente estudo contribuiu com informações inéditas sobre o potencial acaricida e repelente de O. elegans. Discutiu-se que apesar do medicamento homeopático não ter tido efeito, tal conclusão não pode ser estendida a outras formulações homeopáticas, vias de aplicação e condições de manejo adversas às do presente estudo. Por fim, os resultados do estudo comparativo contribuem para o aperfeiçoamento do AIT e podem estimular os pesquisadores a optar por técnicas mais confiáveis na avaliação da eclosão de ovos. / The parasitism by Rhipicephalus (Boophilus) microplus causes large economic loss in cattle herds and its control through chemical acaricides faces problems of resistance and residues in food and in the environment. Aiming to contribute with relevant information for the control of this parasite, the present study had three objectives: 1) evaluate the effect in vitro of Ocotea elegans essential oil on larvae and engorged females of R. (B.) microplus, 2) evaluate homeopathic medicine to control R. (B.) microplus natural infestations, and 3) compare visual estimation and quantification by sampling techniques of larvae hatching in the engorged females immersion test, due to the importance of this technique in the screening of substances with antiparasitic action. In the first experiment, "In vitro acaricidal and repellent effect of Ocotea elegans essential oil on R. (B.) microplus", were adopted the tests: larval packet test (LPT), the larval repellency test (RT) and the adult immersion test (AIT). In order to verify efficacy, O. elegans was evaluated at concentrations of 0.78 mg/mL to 100 mg/mL. In the AIT, from the concentration of 25 mg/ml, the efficacies were higher than 90%. LPT (48h) at 100 mg/mL resulted in mortality rates higher than 70%. The RT obtained repellency higher than 80% sice the lowest concentration evaluated. In relation to the lethal concentrations, the lowest LC50 obtained in the LPT was 25.59 mg/mL, 48 hours post treatment. The LC50 and LC90 in the AIT were 4.96 and 17.37 mg/mL and in TR were 0.04 and 1.24 mg/mL, respectively. It was possible to conclude that O. elegans had significant effect in engorged females and larvae repellency and may be in the future an adjuvant for tick control, prioritizing in vivo tests. In the second experiment, “Study of homeopathy in the control of natural infestation of R. (B.) microplus in dairy cattle”, 24 females of the Dutch and Jersey x Dutch breed were divided in the control group (placebo) and treated (biotherapic 30 CH + Sulphur 30 CH) (n=12), administered in the concentrate at 2 kg/animal/day for 12 months. It was collected in each group engorged females to compare the reproductive parameters, and semi-engorged females for the ovaries histologic evaluation. The live weight (LW), packed cell volume (PCV) and counts of engorged females in the animals’ body were held. The average results of LW, PCV and ticks were not statistically different in the control and homeopathic groups: 616.5 kg and 618.6 kg, 27.9% and 27.3%, 12.19 and 13.58 ticks, respectively. In the in vitro analyzes, the average weight of females (0.18 and 0.17 g), egg weight (0.07 and 0.06 g), larvae hatching % (70.1 and 76.6%) and reproductive efficiency index (54.3 and 60.6%), to control and homeopatic groups, respectively, had no statistical difference as well. In addition, no changes in the ovaries were observed in microscopy. Therefore, the homeopathic medicine assessed didn’t present efficacy in the R. (B.) microplus control, and didn’t interfere in the reproductive parameters of engorged females. Finally, in the study "Alternative methods for egg hatch evaluation of Rhipicephalus (Boophilus) microplus" in which two techniques of egg hatching estimation were compared, engorged females collected from cattle were subject to the AIT with plant extracts and kept in an incubator to perform oviposition. Eggs were transferred to syringes and incubated for 15 days. Egg hatching was evaluated in 210 syringes by visual estimation (%) and also counted until 100 in three repetitions. Significant differences were found between the two tests. In the visual estimation (56.8%) the hatching percentage average was higher than in the quantification by sampling (48.0%). In quantification by sampling, no statistical differences were observed in the pairwise counts between the three samples (48.1, 47.8 and 48.1%) and, the correlation of repetitions was 0.96, suggesting that the count of one sample is sufficient and the result should not differ much, regardless of the evaluator. The present study contributed with unreleased information about the acaricide and repellent effect of O. elegans. It was discussed that despite the homeopathic medicine had not effect, such conclusion cannot be extended to other homeopathic formulations, process of application and management conditions adverse to the present study. Finally, the results of the comparative study contribute for the improvement of the AIT and may encourage researchers to choose more reliable techniques in the assessment of the egg hatching. / CNPq: 134124/2015-4

Resumo: Boophilus microplus, o carrapato do boi, é uma espécie originária do sudeste da Ásia e introduzida no Brasil com a colonização. Atualmente, este ectoparasita possui uma distribuição ampla no país e causa prejuízos econômicos consideráveis. Até o presente, o controle do B. microplus baseiase na aplicação de acaricidas quando o número de carrapatos no hospedeiro é elevado. O conhecimento prévio da ecologia do carrapato em cada região, porém, permitiria um controle estratégico otimizando o uso de acaricidas. Nestas condições, o custo da utilização dos acaricidas diminuiria pelo uso em momento mais eficaz, a contaminação ambiental decresceria pelo uso menos freqüente e a vida útil dos produtos acaricidas seria prolongada. Por este motivo, neste projeto foi realizada uma análise bioecológica do B. microplus na região de Franca, nordeste do Estado São Paulo. Estudando a fase de vida livre do carrapato, determinou-se o período de pré-eclosão (P.E.), tempo entre o desprendimento das teleóginas e o surgimento das primeiras larvas, e a longevidade como tempo total entre a eclosão e o desaparecimento (morte) das últimas. O valor máximo de P.E. (n = 112 dias) foi observado no final da estação seca, em setembro/2006, enquanto o valor mínimo foi de 63 dias em fevereiro de 2007, sendo obtido um valor médio de 83,6 dias. A longevidade (LONG.) máxima das larvas foi de 63 dias, atingida em maio/2006, observada no final da estação chuvosa, e a mínima foi de 7 dias constatada em dezembro de 2005, sendo obtido um valor médio de 21,9 dias. Constatou-se uma grande influência da temperatura (especialmente na pré-eclosão) e pluviosidade (que afetou principalmente a longevidade das larvas). Na fase parasitária, observouse um maior número de parasitos, por animal, no final da estação chuvosa, sendo a média de 61,9 + 48,7, sendo observado o maior pico... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Boophilus microplus, the cattle tick, is a species from the southeast of Asia and it came to Brazil along with colonization. Nowadays, this ectoparasite is found in many places all over the country, causing considerable economic losses. Up to now, the B. microplus control is done by the acaricide usage when host is heavily infested. However, the previous knowledge of tick ecology in every area would allow a strategic control, increasing effectiveness in the acaricide application. Under these conditions, there would be a decrease in the expenses concerning acaricide use due to its effective utilization, the environmental pollution would be smaller because of its lesser use and the acaricide useful life would be longer. Therefore, this project aimed the B. microplus bio-ecological analysis in Franca, in the northeast of São Paulo state. By studying free-living ticks, it has been determined the pre-eclosion period (P.E.), which is the time between the engorged females release and the first larvae eclosion, and the longevity as total time from hatching to death. The maximum P.E. time (112 days) was observed at the end of dry season, in September 2006, while the minimal period was of 63 days in February 2007, being determined a medium period of 83,6 days. The larvae maximum longevity (LONG.) was of 63 days, in May 2006, noticed at the end of rainy season, and the minimal was of 7 days in December 2005, being calculated a medium period of 21,9 days. It was noted a large temperature influence (especially in the pre-eclosion phase) and rainfall influence (which affected mainly the larvae longevity). In the parasitic phase, it was observed a bigger number of parasites per animal at the end of rainy season, getting an average of 61,9 ± 48,7, reaching the highest point in April 2007. It was also realized, in the study area, a number of 4 generations of B. microplus per year, within October 2004 and November 2007. / Orientador: Matias Pablo Juan Szabó / Coorientador: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Fernando Antonio Ferreira / Banca: Francisco Sales Resende de Carvalho / Banca: Adjair Antonio do Nascimento / Banca: José Jurandir Fagliari / Doutor