Pregnancy loss remains a major source of economic cost to the equine industry. Frequently, the exact causes of pregnancy loss remain unknown. It has been shown, in other species, that increased dietary protein leading to elevated blood urea nitrogen concentrations (BUN) can be a factor in decreased survival of the early embryo. Our studies provided novel information regarding the effects of elevated BUN on endometrium and embryos from mares as well as insights on changes in their gene expression. Our first objective was to develop an experimental model to elevate BUN during diestrus using intravenous urea infusion. We analyzed the effects of an acute elevation in BUN on uterine and vaginal pH along with changes in the endometrial transcriptome of mares with RNA sequencing. There was a significant increase in BUN and a decrease in uterine pH in the urea group compared to the control group. A total of 193 genes were differentially expressed (DEG) between the urea and control groups. The DEG were predicted to be related to cell pH, ion homeostasis, changes in epithelial tissue, fatty acid metabolism, and solute carriers. Our second objective was to evaluate the effects of elevated BUN in the endometrium of mares using a chronic oral urea administration to elevate BUN in mares. Uterine and vaginal pH were evaluated and RNA sequencing of the endometrium was again performed. There was an increase in BUN in the urea-fed mares, but no significant change in uterine or vaginal pH between the groups. A total of 60 DEG were characterized, with prediction of transcriptomic changes in the endometrium of mares related to cell death (necrosis) and cellular movement (invasion of cells). Our third objective was to determine the effects of a high BUN on the transcriptome of day-14 embryos. There was a positive correlation between plasma BUN and blastocoele fluid urea nitrogen concentration. Changes in embryo transcriptome were related to survival of organism, angiogenesis, adhesion, and quantity of cells. Our final objective was to evaluate the correlation between BUN and follicular fluid urea nitrogen and evaluate the survival of embryos collected from donor mares with high BUN concentrations. Urea nitrogen concentration was positively correlated between the plasma and follicular fluid of mares. Additionally, there was a higher pregnancy rate when embryos were collected from mares with lower BUN. Overall, these results further elucidate the mechanisms through which urea affects endometrial and embryonic transcriptome of mares with high BUN, serving to identify effects of a high BUN in the reproductive tract of mares that might lead to decreased fertility.

The aryl hydrocarbon receptor (AhR) binds synthetic and chemoprotective phytochemicals, and research in this laboratory has developed selective AhR modulators (SAhRMs) for treatment of breast cancer. Activation of the AhR through agonists such as TCDD inhibits hormone activation of several E2-responsive genes in breast cancer cell lines. In this study, inhibition of E2-induced proliferation and gene expression by TCDD has been investigated in the uterus of wildtype, ERKO and AhRKO mice. Cyclin D1, DNA polymerase ?, and VEGF mRNA levels are induced by E2 through ER? in the uterus as determined by in situ hybridization studies. TCDD down-regulated E2-induced cyclin D1 and DNA polymerase ? expression, but not E2-induced VEGF expression, in wild-type mice, but not AhRKO mice, confirming the role of the AhR. Furthermore, protein synthesis was not necessary for induction of cyclin D1 or DNA polymerase ?gene expression by E2 or inhibition of these responses by TCDD. Therefore, AhR-ER? crosstalk directly regulates the expression of genes involved in cell proliferation in vivo. AhR agonists induce down-regulation of ErbB family receptors in multiple tissues/organs suggesting possible inhibitory interactions with chemotherapeutic potential. Recently, it has been reported that the SAhRM 1,1??,2,2??-tetramethyldiindolylmethane inhibited DMBA-induced mammary tumor growth in rats and also inhibited MAPK and PI3-K pathways in human breast cancer cells. BT-474 and MDA-MB-453 cell lines are ErbB2-overexpressing breast cancer cells that express functional AhR and exhibit constitutive activation of MAPK and PI3-K pathways. Therefore, 1,1??,2,2??-tetramethyldiindolylmethane-induced inhibition of ErbB2 signaling was investigated in these cells lines and in the MMTV-c-neu mouse mammary tumor model, which overexpresses ErbB2 in the mammary gland. The growth of ErbB2 overexpressing cell lines and mammary tumors was inhibited by 1,1??,2,2??-tetramethyldiindolylmethane; however, modulation of MAPK or PI3-K pathways and cell cycle proteins nor induction of apoptosis by 1,1',2,2'-tetramethyldiindolylmethane was observed in the ErbB2overexpressing cell lines. Current studies are investigating mitochondrial effects of 1,1??,2,2??-tetramethyldiindolylmethane in the ErbB2-overexpressing cell lines, as well as continuing studies on gene expression profiles in the mammary glands of MMTV-c-neu mice to better understand and identify critical genes that are responsible for ErbB2-mediated transformation and growth of cancer cells/tumors.

No description available.

La femme enceinte, au même titre que n’importe qui, peut être amenée à utiliser une voiture pour se déplacer et est ainsi donc potentiellement victime d’un accident de la route. Si l’intégrité physique de cette personne est alors menacée, il en est de même pour celle de son enfant à naître. Les accidents de la route sont d’ailleurs la première cause de blessures du fœtus à la suite d’un traumatisme. La question de recherche inhérente à ce travail vise à clarifier les mécanismes de blessures du fœtus à la suite d’un accident de la route et à identifier une éventuelle relation entre ces mécanismes et les interactions qui peuvent exister entre la victime de l’accident et son environnement immédiat. Les résultats de ces travaux proposeront également des outils nécessaires au développement et à l’évaluation de dispositifs de protection spécifiques prenant en compte la morphologie particulière d’une femme enceinte afin de diminuer le risque de pertes fœtales à la suite d'un accident de la route. Dans un premier temps, un modèle de liquide amniotique a été développé, validé puis couplé avec un modèle éléments finis représentatif d’une femme enceinte. Cet outil numérique permet notamment la simulation de divers scénarios d’accidents afin d’en étudier les conséquences pour le fœtus. Dans un second temps, des mesures de la position de conduite des femmes enceintes au cours de la grossesse ont été effectuées afin d’être capable de simuler des accidents de la route dans des conditions réalistes. Enfin, des critères prédicteurs de blessures fœtales ont été développés afin de permettre l’évaluation de l’efficacité de nouveaux dispositifs de protection. / Road accidents are the leading cause of fetal injuries resulting from trauma. The aim of this work is to clarify the mechanisms of fetal injuries following a road accident and to identify a possible relationship between these mechanisms and interactions that may exist between the accident victims and its immediate environment. The results of this work will also propose tools for the development and the evaluation of specific protection devices taking into account the particular morphology of a pregnant woman in order to reduce the risk of fetal loss following a road accident. Firstly, an amniotic fluid model was developed, validated and then coupled with a finite element model representative of a pregnant woman. This computational tool allows to perform various car accident simulations to evaluate their consequences for the fetus. Secondly, measures of the driving position of pregnant women during pregnancy have been conducted to be able to simulate road accidents in realistic conditions. Finally, fetal injury predictors have been developed to allow assessment of the effectiveness of new protective devices. These predictors were associated to possible injuriy mechanisms.

O objetivo deste trabalho foi verificar a presença e a localização de receptores para hormônios esteróides e gonadotróficos, através da técnica de imunohistoquímica, pelo método de peroxidase-antiperoxidase (PAP), nos diferentes tecidos que compõe o trato genital da égua e a variação de reatividade destes receptores durante o ciclo estral e no anestro fisiológico. Também se objetivou verificar se há diferença de reatividade em éguas com e sem endometrose. Foram coletadas amostras de útero, cérvice e oviduto, de 41 éguas sem raça definida e com histórico reprodutivo desconhecido, em um abatedouro. Quinze éguas se encontravam em estro, dezoito em diestro e oito éguas em anestro. Concluiu-se que a intensidade e a distribuição da coloração para os receptores de estrógeno (RE), progesterona (RP) e hormônio luteinizante (RLH) variaram de acordo com o tipo de célula e o estágio do ciclo estral. Nas amostras de endométrio observou-se imunorreatividade alta no epitélio luminal para RE e RP tanto no estro quanto no diestro; o epitélio glandular, estroma e miométrio mostraram reatividade moderada para os dois receptores durante as duas fases. Durante o anestro os resultados foram semelhantes aos encontrados durante a fase cíclica. Na avaliação da reatividade para RLH, durante o estro e diestro, o epitélio luminal mostrou reatividade de fraca a moderada, mas no diestro houve maior reatividade média. O epitélio glandular apresentou menor reatividade do que o luminal. No miométrio a coloração foi fraca durante todo o ciclo. Durante o anestro a reatividade foi fraca no epitélio luminal, ausente em quase todas as amostras no epitélio glandular e de fraca a ausente no miométrio. Neste experimento, não foi observada diferença significativa de reatividade entre os endométrios com e sem endometrose, mas as áreas afetadas mostraram coloração assíncrona para RE, RP e RLH. Na cérvice, foi observada imunorreatividade moderada a alta para RE e RP no epitélio luminal, no estroma e no músculo. A intensidade de coloração das células epiteliais e musculares variou pouco entre o estro e o diestro, mas durante o anestro houve maior reatividade no tecido muscular e no estroma. Foi observada reatividade para RLH no epitélio e camada muscular, sem variação significativa nas fases do ciclo. A intensidade de coloração foi de fraca a moderada no epitélio e fraca na camada muscular. No oviduto, observou-se imunorreatividade para RE e RP nos três tecidos, durante a fase cíclica e o anestro. No epitélio, os valores encontrados foram de moderados a altos, sem variação significativa nas três fases. A coloração das células epiteliais do oviduto foi nitidamente irregular, com o núcleo muito corado no que parecem ser células secretoras e pouco corado ou sem coloração nas células ciliadas, refletindo provavelmente as diferentes funções das células epiteliais neste órgão. No estroma a reatividade foi moderada durante a fase luteal, mostrando reatividade mais alta no estro e no anestro. A camada muscular apresentou reatividade máxima para RE no estro e no diestro. A reatividade para RLH no epitélio luminal foi de fraca a moderada durante todo o ciclo. No músculo também foi observada reatividade, porém bem mais fraca do que no epitélio. Durante o anestro somente três das oito amostras apresentaram reatividade no tecido muscular. No diestro foi observada maior reatividade do que no estro. Os resultados do presente estudo evidenciam, pela primeira vez, a presença de receptores para LH nos diferentes tecidos do trato reprodutor extragonadal da égua. Embora existam relatos da expressão e localização de RE e RP no endométrio equino, esta é a primeira vez que se utiliza a técnica de imunohistoquímica para localizar estes receptores na cérvice e no oviduto desta espécie. Foi observada variação individual bastante acentuada entre as amostras, em uma mesma fase cíclica. Provavelmente estes resultados sejam o reflexo da variação entre o dia do ciclo em que os animais se encontravam, bem como da complexidade dos mecanismos envolvidos na presença desses receptores. Os achados deste estudo indicam que tanto os hormônios gonadais quanto o LH atuam por meio de seus receptores nos diferentes tecidos do trato reprodutivo da égua, podendo servir para a elaboração de novas estratégias para melhorar a eficiência reprodutiva nesta espécie. / The aim of this study was to demonstrate the presence and localization of gonadotropic and steroid hormone receptors, in different tissues of the mare genital tract and the different reactivity to these receptors during the endometrial cycle and physiologic anestrus. Another objective was to compare the reactivity to theses receptors in mares with and without endometrosis. Immunohistochemistry was performed using the peroxidase anti-peroxidase technique (PAP). Uterus, cervix and oviduct of 41 criollo mares were collected in an abattoir. There was variation in the intensity of the staining and distribution for estrogen receptors (PR), progesterone receptors (PR) and luteinizing hormone receptors (LHR) with the endometrial cycle and different tissues. The endometrial surface epithelial cells were stained strongly for ER and PR in the estrous and dioestrus; glandular epithelial cells, stromal cells and smooth muscle cells of the myometrium had moderate staining for ER and PR during these two phases and in anestrus too. The immunoreactive score for LHR in the surface epithelial cells during endometrial cycle was weak to moderate but, in general, strong staining was observed in dioestrus. More weak staining intensity was observed in the glandular epithelial cells than luminal epithelial cells. Smooth muscle cells of the myometrium showed weak staining for LHR throughout the endometrial cycle. During the anestrus, the immunoreactivity score was weak in the surface epithelial cells. In general, the glandular epithelium was not stained. Myometrium cells were weak to not staining for LHR, in this phase. In this study there was no significant difference in immunoreactive score for ER, PR and LHR in endometrium with or without endometrosis but fibrotic glands showed different expression patterns of ER, PR and LHR, could evidence for functionally glandular maldifferentiation in endometrosis. The cervical epithelial surface, stromal cells and smooth muscle cells were moderate to strongly staining for ER and PR, with little variation throughout the endometrial cycle but the immunorectivity was strongest during the anestrus in muscular and stromal cells. Surface epithelial cells of cervix were weak to moderate stained for LHR; smooth muscle cells showed weak staining for these receptors. There was no variation during cycle. In the oviduct, epithelial, stromal and muscle cells showed reactivity for RE and RP, during cycle and anestrus. Epithelial cells were moderate to strongly staining for these receptors, with evident irregularity in different types of cells. Apparently ciliated epithelial cells were stained but the intensity was much less than that observed in nonciliated epithelial cells, probably reflecting different functions of these cells. Stromal cells showed moderate staining during dioestrus and strongest reactivity in estrous and anestrus; muscle cells showed strong reactivity for ER throughout the cycle. The reactivity for LHR was weak to moderate throughout the cycle in the epithelial cells and weak in the muscle cells. During anestrus only three strains of muscle cells showed reactivity for LHR. In dioestrus the intensity was strongest. These findings evidence for the firs time the presence for LHR in extra-gonadal reproductive organs of mare. Though there were reports of ER and PR expression in equine endometrium, this is the first report of localization of these receptors in cervix and oviduct of mare using immunohistochemistry. It was found marked individual variation among the strains. These results probably were caused by the variation among the day of cycle and the complexity of mechanisms involved in the presence of these receptors. The findings of the present study allow us to infer that the ovarian steroid hormones nad LH function through their receptors in different tissues of mare reproductive tract, can help us to elaborate new strategies to improve the reproductive efficiency in this specie.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:53:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jose Leonardo Gualberto Ramos.pdf: 7271878 bytes, checksum: cf1f84cb539959e4d151199553588ac8 (MD5) Previous issue date: 2012-08-21 / The development of research aimed at better understanding the formation and functioning of the female reproductive system as a basis for development of contraceptive methods has become increasingly relevant. Furthermore, characterization of uterine development, mainly endometrial glands in dogs has not yet the description as observed in other species. The objective of this study was to evaluate the chronology of the uterine development in prepubertal bitches (endometrium, myometrium and perimetrium) with emphasis on the development of endometrial glands. We evaluated uteri of 32 bitches with a prepubertal and 180 days postnatal (DPN). These animals were divided into eight groups of four animals each: G1 = 1DPN, G2 = 15DPN, G3 = 30DPN, 45DPN = G4, G5 = 60DPN, 90DPN = G6, G7 and G8 = 120DPN = 180DPN. We evaluated the type of epithelium, the presence of endometrial glands and quantity, the measurement of the total thickness of the uterine wall (mM), thickness of the myometrium (mM), endometrial thickness (mM), diameter (mm) and number (n°/mm2) of endometrial glands. The histoarchitecture uterus with 1 DPN revealed rudimentary feature supported with simple cubic cells in the stroma in organization, with lamina propria devoid of glands, with 15 DPN observed presence of rudimentary structures, starting from invaginations (endometrial folding) from 30 to 45 days was observed discrete branching glands that became more evident; DPN at 60 and from this period, there was an increase of glandular development in an ongoing process until the last period evaluated (180 DPN). All structures evaluated had low coefficient of variation (<10%) demonstrating homogeneity of data evaluated, as well as significant correlations (P <0.0001) between all variables with age animal [total uterine wall (R2 = 97, 4%), endometrial total (R2 = 99.4%), total myometrium (R2 = 95.8%), number of endometrial glands (R2 = 92.3%); diameters of endometrial glands (R2 = 94.1% ) and epithelial height (R2 = 72.2%). We conclude that the uterus of bitches is devoid of endometrial glands at birth and they begin continuous development from birth to 15 days and 60 days after birth are already fully formed / O desenvolvimento de pesquisas que visam o melhor entendimento da formação e funcionamento do sistema reprodutor da fêmea como embasamento para desenvolvimento de métodos contraceptivos tem se tornado cada vez mais relevante. Além disso, a caracterização do desenvolvimento uterino, principalmente das glândulas endometriais na cadela ainda não se tem à descrição como observado em outras espécies. Objetivou-se com este estudo avaliar a cronologia do desenvolvimento uterino em cadelas pré-púberes (endométrio, miométrio e perimétrio) com ênfase no desenvolvimento das glândulas endometriais. Foram avaliados úteros de 32 cadelas pré-púberes com um a 180 dias pós-nascimento (DPN). Estes animais foram distribuídos em oito grupos com quatro animais cada, sendo: G1=1DPN, G2=15DPN, G3=30DPN, G4=45DPN, G5=60DPN, G6=90DPN, G7=120DPN e G8=180DPN. Foram avaliados o tipo de epitélio, presença e quantidade de glândulas endometriais, a mensuração da espessura total da parede uterina (μm), espessura do miométrio (μm), espessura do endométrio (μm), diâmetro (μm) e número (n°/mm2) de glândulas endometriais. A histoarquitetura do útero com 1 DPN revelou característica rudimentar com células cúbicas simples apoiadas em estroma em organização, com lâmina própria desprovida de glândulas; com 15 DPN observou-se presença de estruturas rudimentares, com início das invaginações (pregueamento endometrial); dos 30 aos 45 dias observou-se discreta ramificação das glândulas que se tornaram mais evidentes; aos 60 DPN e a partir deste período, observou-se aumento do desenvolvimento glandular num processo contínuo até o último período avaliado (180 DPN). Todas as estruturas avaliadas apresentaram baixo coeficiente de variação (<10%) demonstrando uma homogeneidade nos dados avaliados, bem como correlações significativa (P<0,0001) entre todas as variáveis analisadas com a idade animal [parede uterina total (R2=97,4%), endométrio total (R2=99,4%), miométrio total (R2=95,8%), número de glândulas endometriais (R2=92,3%); diâmetro das glândulas endometriais (R2=94,1%) e altura do epitélio (R2=72,2%). Conclui-se que o útero de cadelas é desprovido de glândulas endometriais ao nascimento e que estas iniciam desenvolvimento contínuo a partir dos 15 dias de nascimento e aos 60 dias pósnascimento já estão completamente formadas

Submitted by Claudinei Pracidelli (cpracide@ipen.br) on 2015-05-20T18:19:22Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2015-05-20T18:19:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 135743 bytes, checksum: c5a9da6ce78866fb211d8ecb89fb98d7 (MD5) Previous issue date: 2005-05-23 / The aim of the present study was determine the soluble uterine fluid protein concentration of Mangalarga Marchador pregnant and non pregnant mares, at the embryo collection day, and correlate those with ultrasonic and palpable characteristics of the female genital tract (Chapter I). Was still studied the relation between serum progesterone concentration and soluble protein in uterine fluid concentration, analyzing the embryo recovery rate and quality and the pregnancy rate in recipient mares of embryos collected 48 h after luteolitic application. The interovulatory period and the luteolitic-ovulation interval were also observed (Chapter II). Twenty four estrous cycles of 12 embryo donors mares had a small amount of uterine fluid harvested at the embryo collection day (day 8 and 9 of the estrous cycle) which was submitted to the Bicinchoninic Acid Test. Ultra-sonographic and palpable characteristics of the uterus, cervix and corpus luteum were studied to establish correlations with pregnant and non pregnant mares. The presence of an embryo in the uterine flushing differentiated pregnant of non pregnant mares. The embryo recovery rate was 58.3 %. The mean protein concentration of uterine fluid of pregnant mares was 36.0±22.04 mg/mL and of non pregnant mares 42.27±19.71 mg/mL, with no difference between groups (p>0.05). Additionally, no difference was observed between groups for uterine and corpus luteum ecogenicity, corpus luteum diameter and cervix and uterine tonus. In Chapter II, twenty estrous cycles of ten mares were monitored. Standard protocol of equine embryo transfer was applied to the first estrous cycle (luteolitic application at the day of embryo transfer, control group). In the second estrous cycle, luteolitic application was performed 48 h before embryo transfer (treated group). No difference (p>0.05) was observed in recovery rate, pregnancy in the recipient mare, embryo quality, protein concentration in uterine fluid and luteolitic-ovulation interval. In the control mares 80% of positive uterine flushes were observed, with seven pregnancies in recipient mares (87.5 %). In the treated animals the recovery rate was 70 %, with six pregnant recipient mares (85.7 %). The serum progesterone concentration was only determined for the treated group, being 13.86±5.42 ng/mL in the day of luteolitic application (48 h before embryo collection), decreasing to 0.46±0.25 ng/mL on the day of embryo collection (p<0.05). The uterine protein fluid concentration in the treated animals was 37.77±9.87 mg/mL and in the control ones 33.5±15.48 mg/mL (p>0.05). The interovulatory period was 18.5 days in the control mares and 25.9 in the treated ones, showing difference between themselves (p<0.05). Fetal-maternal interaction at days 8 and 9 after ovulation is not strong enough to change the parameters studied between pregnant and non pregnant mares. Many factors influence the soluble uterine protein concentration besides the embryo presence, which turns it into a very variable and inefficient parameter to determine viable conditions to embryo development. The smaller interovulatory period was due to the anticipation of luteolitic application, allowing two more estrous cycles per donor mare per reproduction season. A viable embryo 48 h after luteolitic application shows the uterine capacity to keep favorable conditions for embryo development. / O objetivo deste estudo foi determinar a concentração de proteínas do fluido uterino de éguas prenhas e não prenhas, bem como registrar as características da palpação retal e ultra-sonografia do útero, cérvix e corpo lúteo (Capítulo I). Também se objetivou verificar a viabilidade embrionária e o período interovulatório de éguas doadoras de embriões eqüinos, 48 h após a aplicação de luteolítico (Lutalyse Upjohn®, Capítulo II)). Doze éguas doadoras de embriões, totalizando 24 ciclos estrais, tiveram amostragem de fluido uterino no dia da colheita do embrião (dia 8 e 9 do ciclo estral) e, posteriormente, estas foram submetidas ao teste do Ácido Bicinconínico para determinação da concentração de proteínas solúveis. A presença de embrião no lavado uterino diferenciou éguas prenhas de não prenhas. Características ultra-sonográficas e da palpação do útero, da cérvix e do corpo lúteo foram registradas no dia da colheita do embrião para determinar suas correlações com a presença ou ausência do embrião. A taxa de recuperação embrionária foi de 58,3 %. A concentração de proteínas do fluido uterino de éguas prenhas foi de 36,0±22,04 mg/mL e de éguas não prenhas de 42,27±19,71 mg/mL, não sendo observada diferença entre os animais dos grupos experimentais (P>0,05). Não houve diferença (P>0,05) entre éguas prenhas e não prenhas quanto a ecogenicidade uterina e do corpo lúteo, o diâmetro do corpo lúteo, o tônus uterino e o tônus cervical no dia da colheita do embrião. No Capítulo II, vinte ciclos estrais de dez éguas diferentes foram utilizados. No primeiro ciclo as éguas foram submetidas ao protocolo normal de transferência de embriões (grupo controle), com aplicação de luteolítico no dia da colheita do embrião. No segundo ciclo estral, o luteolítico foi aplicado 48 h antes da colheita do embrião (grupo tratado). Quando comparadas éguas tratadas com luteolítico 48 h antes da colheita do embrião com as éguas do grupo controle, não foi registrada diferença (P>0,05) na taxa de recuperação embrionária, prenhez das éguas receptoras, qualidade embrionária, concentração de proteínas no fluido uterino e intervalo luteolítico-ovulação. No grupo controle observou-se 80% de lavados positivos, sendo obtidas sete prenhezes nas éguas receptoras (87,5%). No grupo tratado com luteolítico 48 h antes da colheita do embrião foram colheitados sete embriões (70% de recuperação), com seis prenhezes nas éguas receptoras (85,7%). A concentração média de progesterona sérica só foi determinada para o grupo tratado com luteolítico 48 h antes da colheita do embrião, sendo de 13,86±5,42 ng/mL no dia da aplicação do luteolítico, decrescendo para 0,46±0,25 ng/mL no dia da colheita do embrião, existindo diferenças entre os animais dos grupos experimentais (P<0,05). A concentração de proteínas solúveis do fluido uterino dos animais do grupo tratado foi de 37,77±9,87 mg/mL e nos do grupo controle 33,5±15,48 mg/mL. O período interovulatório diferiu entre os grupos experimentais (P<0,05), com a ovulação no grupo controle ocorrendo, em média, 18,5 dias e, no grupo tratado, 15,9 dias após a aplicação do luteolítico. A interação materno-fetal nos dias 8 e 9 pósovulação não foi suficientemente forte para gerar modificações significativas entre as características de palpação retal e ultra-sonográficas estudas de éguas prenhas e não prenhas. A análise da concentração de proteínas solúveis do fluido uterino é influenciada por diversos fatores que não somente a presença do embrião, sendo esta bastante variável e não eficaz para determinação indireta de condições viáveis para a manutenção da gestação. A aplicação de luteolítico 48 h antes da colheita e transferência de embriões mostrou-se uma técnica viável, propiciando período interovulatório menor e, conseqüentemente, maior número de estros da égua doadora por estação reprodutiva. Os embriões eqüinos mantêm sua viabilidade 48 h após a aplicação de luteolítico, sendo resistentes à queda na concentração de progesterona por este período.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The purpose of this study is to evaluate the amount of transcripts from the Major Histocompatibility Complex (MHC) class I classical (BoLA-N *) and non-classical (BoLA-NC*), as well as of TNF-&#945; (Tumor Necrosis Factor alpha) and TGF-&#946;1 (Transforming Growth Factor beta 1) cytokines in bovine non-pregnant uterus, caruncles, cotyledons and blastocysts throughout the pregnancy period, in order to understand the immune and physiological mechanisms that occur in pregnancy in cows. The samples were analyzed by qPCR, the qualification (presence or absence) by conventional RT-PCR and the immune fluorescence with sheep monoclonal antibody against MHC class I. As positive control we used a sample of tissue from the bovine lymph node and/or spleen in all experimental tests. The amount of transcript BoLA-N* and BoLA-NC* was small (fold change 0 to 3) in blastocysts and cotyledons. Cotyledons transcription BoLA-NC* is greater than the transcription of BoLA-N*. Blastocysts transcription of BoLA-N* was higher than BoLA-NC*. Blastocysts transcribed more BoLA-NC2 than in cotyledons. Blastocysts not transcribed BoLA-NC4. Cotyledons transcribed BoLA-NC4 more than BoLA-NC2. The caruncles showed large amounts of transcripts (fold change 5 to 400), which were higher for pregnancy period of \"8-9\" month to BoLA-N* and one month for BoLA-NC*. Caruncles BoLA-NC2 transcription was higher than the BoLA-NC4. The uterus non pregnant had fewer transcripts BoLA-N* and BoLA-NC* than in caruncles. The uterus non pregnant no have transcripts of BoLA-NC2, but they had a small amount of transcripts of BoLA-NC4. Caruncles had large amounts of transcripts (fold change 50 to 500) of BoLA-NC2 with pregnancy age greater than one month; those are seemed to protect the fetus from rejection. TNF-&#945; appears in greater amount in late gestation (8 and 9 months), showing the beginning of an inflammatory reaction, necessary to the adequate removal of the fetus and the placenta during delivery. Since TGF-&#946;1 has a peak of expression in the sixth and seventh months of gestation, just when the fetus has its greatest growth, demonstrating a probable involvement of this cytokine in this phenomenon. / Com o intuito de entender os mecanismos imunofisiológicos da gestação em vacas esta tese teve como objetivo avaliar a quantidade de transcritos do Complexo de Histocompatibilidade Principal (MHC) de classe I clássico (BoLA-N*) e não clássico (BoLA-NC*), bem como das citocinas TNF-&#945; (Fator de Necrose Tumoral alfa) e TGF-&#946;1 (Fator de Crescimento Transformador beta 1) em úteros não gestantes, carúnculas, blastocistos e cotilédones bovino durante todo o período gestacional. Utilizou-se a quantificação por qPCR, a qualificação (presença ou ausência) via RT-PCR convencional e a imunofluorescência com anticorpo primário monoclonal MHC de classe I ovino. Como controle positivo foi utilizado uma amostra de tecido de linfonodo e/ou baço bovino em todos os ensaios experimentais. A quantidade de transcrito de BoLA de classe I clássico e não clássico foi pequena (fold change variando de 0 a 3) nos blastocistos e cotilédones. Nos cotilédones a transcrição de BoLA-NC* foi maior do que a transcrição de BoLA-N*. Nos blastocistos houve maior transcrição de BoLA-N* do que de BoLA-NC*. BoLA-NC2 transcreveu mais nos blastocisto do que nos cotilédones. BoLA-NC4 não transcreveu nos blastocistos. Os cotilédones transcreveram mais BoLA-NC4 do que BoLA-NC2. As carúnculas apresentaram grandes quantidades de transcritos (fold change variando de 5 a 400), que foram maiores nos períodos gestacionais de 8 a 9 para BoLA_N* e até 1 mês para BoLA-NC*. A transcrição de BoLA-NC2 foi maior do que a de BoLA-NC4 nas carúncula. O útero não gestante teve menor quantidade de transcritos de BoLA-N* e BoLA-NC* do que nas carúnculas. Não há transcrição de BoLA-NC2 no útero não gestante, mas há uma pequena quantidade de transcritos de BoLA-NC4 neste tecido. A presença de grandes quantidades de transcritos (fold change variando de 50 a 500) de BoLA-NC2 nas carúnculas, com idade gestacional maior do que um mês, parece proteger o feto da rejeição. Nas carúnculas parece existir um pico de transcrição de TGF-&#946;1 no sexto e sétimo meses de gestação, justamente quando o feto tem seu maior crescimento, sinalizando um provável envolvimento desta citocina neste fenômeno. O TNF-&#945; surge em maior quantidade no final da gestação, tanto nas carúnculas quanto nos cotilédones, demonstrando o início de uma reação inflamatória, necessária para a adequada expulsão do concepto e da placenta durante o parto. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2116236 bytes, checksum: d980c77ceebcbdbba85d747746d497be (MD5) Previous issue date: 2012-02-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The flavonoid 3,6-dimethyl ether galetin (FGAL) was isolated from aerial parts of Piptadenia stipulacea (Benth.) Ducke. In previous studies, Macêdo et al. (2011a) demonstrated that FGAL inhibited in a significant and concentration-dependent manner the phasic contractions induced by carbachol and oxytocin on rat uterus, in a higher potency to oxytocin. The aim of this study was to investigate the mechanism of tocolytic action of FGAL on rat uterus. Segments of rat uterus were suspended in organ bath and the isometric contractions were monitored. FGAL inhibited (pD 2 = 5.68 ± 0.06) oxytocin cumulative curves and these were shifted to the right, in a non parallel manner (slope = 3.59 ± 0.04), with Emax the reduction, suggesting a non-competitive antagonism. In relation to the tonic contractions, FGAL relaxed in a concentration-dependent and significant manner but not equipotent rat uterus pre-contracted both oxytocin (pD2 = 6.9 ± 0.1) and KCl (pD2 = 5.6 ± 0.06). How the opening channels for calcium-dependent voltage (CaV) is one of the common step to the signaling pathways of oxytocin and KCl to maintain the tonic phase of contraction, raised the hypothesis that FGAL could be acting by blocking the influx of Ca2+ through the CaV. Therefore, cumulative contractions were induced with CaCl2 in depolarizing medium nominally without Ca2+ in the presence and absence of several concentrations of FGAL. The flavonoid antagonized the contractions induced by CaCl2 evidenced by shift to the right of the control curve in a non parallel manner with reduction of Emax, suggesting that FGAL is blocking indirectly the CaV to promote tocolytic effect on rat uterus. The K+ channels play a key role in membrane potential regulation and CaV modulation. According to this premise, we decided to investigate the involvement of these channels in the tocolytic action of FGAL. The relaxing potency of FGAL (pD2 = 6.9 ± 0.1) were reduced approximately 20 folds in the presence of CsCl (pD2 = 5.6 ± 0.01), a non-selective K+ channels blocker, confirming K+ channels the participation to the relaxant effect of the flavonoid. To determinated which K+ channel(s) subtype(s) were involved, selective blockers of these channels were used. The relaxation curve induced by FGAL was shifted to right in the presence of 4-aminopyridine (pD2 = 5.4 ± 0.01), a selective blocker of voltage gated K+ channels (KV); of glibenclamide (pD2 = 5.3 ± 0.01), a selective blocker of ATP sensitive K+ channels (KATP); of apamin (6.3 ± 0.02), a selective blocker of small conductance calcium-activated K+ channels (SKCa) and tetraethylamonium (TEA+) 1 mM (pD2 = 5.0 ± 0.08), a big conductance calcium-activated K+ channels (BKCa), suggesting the involvement of these channels on tocolytic action mechanism of FGAL on rat uterus. The aminophylline, a non selective inhibitor of phosphodiesterases (PDE), did not potentialized (pD2 = 6.7 ± 0.03) the relaxation produced by FGAL on rat uterus, suggesting that the cyclic nucleotides pathway is not involved on relaxing effect induced by FGAL. Thus, we concluded that the relaxing action mechanism of FGAL in rat uterus involves positive regulation of K+ channels, that indirectly modulated the CaV, leading to a consequent reduction of [Ca2+]c and uterine smooth muscle relaxation. / O flavonoide 3,6-dimetil éter galetina (FGAL) foi isolado das partes aéreas de Piptadenia stipulacea (Benth.) Ducke. Em estudos anteriores, Macêdo et al. (2011a) demonstraram que FGAL inibiu de maneira dependente de concentração as contrações fásicas induzidas por carbacol e ocitocina em útero isolado de rata, sendo mais potente para ocitocina. Desta forma, o objetivo desse estudo foi investigar o mecanismo de ação tocolítica de FGAL em útero de rata. Para tanto segmentos de útero de rata foram suspensos em cuba para órgãos isolados e as contrações isométricas foram monitoradas. FGAL inibiu (pD´2 = 5, 68 ± 0,06) as curvas cumulativas à ocitocina e estas foram desviadas para direita, de forma não paralela ( slope = 3,59 ± 0,04), com redução do Emax, sugerindo um antagonismo não competitivo. Em relação às contrações tônicas, FGAL relaxou de maneira significante, dependente de concentração e não equipotente o útero pré-contraído tanto por ocitocina (pD2 = 6,9 ± 0,1) como por KCl (pD2 = 5,6 ± 0,06). Como a abertura dos canais para cálcio dependentes de voltagem (CaV) é um dos passos comum às vias de sinalização da ocitocina e do KCl para manutenção da fase tônica da contração, levantou-se a hipótese de que FGAL poderia estar agindo por bloqueio do influxo de Ca2+ através dos CaV. Assim, foram induzidas contrações cumulativas com CaCl2 em meio despolarizante e nominalmente sem Ca2+ na presença e na ausência de várias concentrações de FGAL. O flavonoide antagonizou as contrações induzidas pelo CaCl2 evidenciado pelo desvio da curva controle para a direita de maneira não paralela e com diminuição do efeito máximo. Sugerindo assim que FGAL bloqueia de maneira indireta os CaV para promover efeito tocolítico em útero de rata. Os canais para K+ desempenham um papel chave na regulação do potencial de membrana e modulação dos CaV. Diante dessa premissa, decidiu-se investigar a participação desses canais na ação tocolítica de FGAL. A potência relaxante de FGAL (pD2 = 6,9 ± 0,1) foi reduzida em aproximadamente 20 vezes na presença de CsCl (pD2 = 5,6 ± 0,01), bloqueador não seletivo dos canais para K+, confirmando a participação de canais para K+ no efeito relaxante do flavonoide. Para determinar qual(is) canal(is) para K+ estariam envolvidos usou-se bloqueadores seletivos desses canais. A curva de relaxamento induzida por FGAL foi desviada para direita na presença de 4 -aminopiridina (pD2 = 5,4 ± 0,01), um bloqueador seletivo dos canais para K+ ativados por voltagem (KV); de glibenclamida (pD2 = 5,3 ± 0,01), um bloqueador seletivo dos canais para K+ ativados por ATP (KATP); de apamina (6,3 ± 0,02), um bloqueador seletivo dos canais para K+ de pequena condutância ativados por cálcio (SKCa) e tetraetilamônio 1 mM (pD2 = 5,0 ± 0,08), que nesta concentração é um bloqueador seletivo dos canais para K+ de grande condutância ativados por cálcio (BKCa), sugerindo o envolvimento destes canais no mecanismo de ação tocolítica de FGAL em útero isolado de rata. A aminofilina um inibidor não seletivo de fosfodiesterases (PDE) não potencializou (pD2 = 6,7 ± 0,03) o relaxamento produzido por FGAL em útero de rata, sugerindo que não há participação da via dos nucleotídios cíclicos no efeito relaxante induzido por FGAL. Conclui-se que o mecanismo de ação tocolítica de FGAL em útero de rata envolve a modulação positiva de canais para K+, majoritariamente dos BKCa, que modulam indiretamente os CaV, levando ao relaxamento da musculatura lisa uterina.