Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Bakgrund: Antalet ovaccinerade barn ökar och ca 134 200 människor dör varje år i en sjukdom som kan förhindras med hjälp av de välutvecklade vaccinationsprogrammen. Majoriteten av dödsfall är barn under fem år. UNICEF och WHO har som målsättning att alla barn i världen ska ha rätt till ett fullständigt skydd mot de sex vanligaste barnsjukdomarna. Syfte: Syftet med denna litteraturstudie var att beskriva varför vissa föräldrar väljer att inte vaccinera sina barn samt att granska vilka datainsamlingsmetoder de inkluderade artiklarna har använt sig av. Metod: Den föreliggande litteraturstudien var av deskriptiv design där 12 stycken vetenskapliga artiklar granskats. De inkluderade artiklarna hade kvantitativ, kvalitativ eller mixad ansats. Huvudresultat: Föräldrar hade olika anledningar till varför de valde att avstå från att vaccinera sitt barn. Faktorer som visade sig påverka föräldrar i deras val att vaccinera sitt barn eller inte var bristande information, att vaccin ansågs vara onaturligt och farligt för barnets immunförsvar, att föräldrarna ansåg att de kunde skydda barnet från att bli smittad av sjukdomar, att biverkningar skulle uppstå samt påverkan från internet, familj och vänner. Studierna hade olika tillvägagångssätt för datainsamling. De var antingen enkäter, intervjuer eller insamlad data från journalsystem. Slutsats: Det är viktigt att sjukvården är medveten om de olika faktorer som påverkar föräldrar i deras val rådande vaccinationer för att kunna bidra med en individanpassad information utefter föräldrarnas kunskap och ställningstagande om vaccinationer. / Background: The number of unvaccinated children is increasing and approximately 134 200 people die each year from a disease that can be prevented with the help of the developed vaccination programs. The majority of the deaths are children under five. UNICEF and WHO is committed to give every child in the world the right to full protection against the six most common childhood illnesses. Aim: The aim of this study was to describe why some parents choose not to vaccinate their children. The aim was also to review what data collection methods that was used in the included articles. Method: The present literary study was of a descriptive design where 12 pieces of scientific papers had been reviewed. The including articles had either a quantitative, a qualitative or mixed approach. Main result: Parents had different reasons why they chose not to vaccinate their children. Factors found to influence parents in their choice to vaccinate their children or not was a lack of information, the vaccine was considered unnatural and dangerous for the child's immune system, the parents felt that they could protect the baby from being infected by the disease, the side effects that could occur and the impact of the internet, family and friends. The studies had different approaches to data collection. They were either surveys, interviews or data collected from medical journals. Conclusion: It is important that health care personnel is aware of the various factors that influence parents vaccine choices to provide a personalized information by the parents knowledge and position on vaccinations.

La diarrhée post-sevrage causée par Escherichia coli entérotoxigénique présentant le fimbriae F4 (ETEC F4+) cause actuellement des pertes économiques importantes dans l’industrie porcine canadienne. Afin de mieux contrôler cette maladie, et afin d’offrir une alternative à l’utilisation excessive d’antibiotiques, le projet décrit dans ce mémoire évalue la capacité de la sous-unité majeure du fimbriae F4, FaeG, à protéger les porcelets contre ETEC F4+. Trois phases animales ont été réalisées afin de tester séparément et de façon combinée l’effet de FaeG sous forme d’émulsion orale et sous forme d’injection intramusculaire (IM). Les analyses de dosages d’anticorps spécifiques et de proliférations lymphocytaires effectuées sur les échantillons recueillis à chaque phase animale permirent d’évaluer la réponse immunitaire mucosale et systémique. Les résultats finaux obtenus ont démontré un effet des injections IM sur l’activation de la production d’anticorps sanguins ainsi que sur la prolifération de cellules mononucléées sanguines (CMS). L’évaluation de l’expression de différents gènes dans les ganglions mésentériques et dans la muqueuse iléale a permis d’observer une modulation de l’expression de certains gènes (TLR4, NFκBIA, IFNg, CCL20, CXCL2, IL4 et IL17), mais également l’absence de modulation sur plusieurs gènes attendus. Au final, certains effets secondaires observés lors des immunisations de la dernière phase animale, tels que la diarrhée, la difficulté à respirer et la faiblesse, ont nécessité des analyses supplémentaires. Il a ainsi été déterminé que plusieurs porcelets ont subi une réaction de type anaphylactique aux immunisations reçues à la dernière phase animale, bien que la composante exacte causant cette réaction soit inconnue. En conclusion, bien qu’une réponse immunitaire puisse être déclenchée par FaeG, d’autres études seront nécessaires afin de développer un vaccin oral contre ETEC F4+

CARACTERISATION DE VACCINS A BASE DE GLUCIDESVariables influençant l'immunogénicité et propriétés physico-chimiques des vaccins glycoconjuguésDe nombreux aspects peuvent influer sur l'immunogénicité des vaccins conjugués et les principales variables étudiées jusqu'ici sont la taille du fragment saccharide et la nature des glycosides: taux de protéine dans le conjugué purifié, la stratégie de conjugaison, nature de l’espaceur et la protéine porteuse.La taille de la partie saccharidique et le ratio de cette partie / protéine a été étudiée dans différents travaux de Seppälä et Mäkelä,.Dans l'une des premières études sur l'effet de la taille sur l'immunogénicité de la protéine conjuguées à des dextrans, il a été montré que des dextrans de faible poids moléculaire conjugué à l’albumine sérique de poluet induit des réponses anti-dextran fortes chez la souris. L’augmentation de la taille du dextran, a abouti à une réduction de l’immunogénicité. Peeters et al. a montré qu’un tétramère synthétique de Hib unité capsulaire polysaccharide, conjuguée à un support protéique, induit chez des souris adultes, des niveaux d'anticorps primates non humains comparables à un conjugué Hib commercial. Ces niveaux sont plus élevées que ceux induits par un trimère répété, ce qui indique que pour le Hib un minimum de huit sucres est nécessaire pour une bonne réponse immunologique. Laferrière et al. a trouvé peu d'influence de la longueur de la chaîne glucidique sur l'immunogénicité des vaccins antipneumococciques conjugués chez la souris. Pozsgay et al. a étudié chez la souris, l'immunogénicité de l’oligosaccharides du LPS de Shigella dysenteriae de type 1 conjugué à l'albumine sérique humaine (HSA). Les auteurs ont constaté que les octa-, dodéca-, et des fragments de hexadécasaccharides induit des niveaux élevés d'anticorps IgG après trois injections. Ces niveaux sont supérieurs à ceux obtenus avec un conjugué tétrasaccharidique. L'influence du ratio glucides / protéine est différente pour les trois conjugués. Le conjugué octasaccharide-HSA avec la plus forte densité provoque une bonne réponse immunitaire, tandis que dans le cas des conjugués dodéca- et hexadécasaccharides, la densité médiane est optimal. Ces études suggèrent que la longueur de la chaîne d'oligosaccharides et le chargement de l’haptène peuvent être liés entre eux pour déterminer l'immunogénicité des vaccins glycoconjugués.L'espaceur est une molécule linéaire courte qui est généralement liée à la chaîne polysaccharidique et la protéine ou de fragments. Il ya des évidences dans la littérature qui suggèrent que les espaceurs rigides, contraints comme le maléimide cyclohexyle, provoquent une importante quantité d'anticorps indésirables, avec le risque de conduire à une réponse immunitaire éloignée de l'épitope ciblé sur la haptène. L'utilisation d'un alkyle souple type maleimido a été rapporté comme un moyen de surmonter l'immunogénicité observée précédemment. Un certain nombre de transporteurs protéiques ont été utilisés jusqu'ici dans l'évaluation préclinique et clinique de vaccins conjugués. Des protéines telles que les anatoxines diphtériques et tétaniques, qui dérivent des toxines respectives, après la décontamination chimique avec le formaldéhyde, ont été initialement choisies comme transporteur en raison de inocuité (tétanos et la vaccination contre la diphtérie). CRM 197, un mutant non toxique de la toxine 61 de la diphtérie a été largement utilisé comme support pour Hib. Un complexe protéique de la membrane externe de méningocoque du sérogroupe B a été utilisé par Merck comme support pour leur vaccin conjugué Hib. GSK dans leur vaccin antipneumococcique, conjugué multivalent, introduit la protéine D Hib liée à la plupart des polysaccharides inclus dans le vaccin. L'équipe de John Robbins fait un large usage de la forme recombinante non toxique de l’exo-toxine de Pseudomonas aeruginosa comme support contre Staphylococcus aureus de type 5 et 8 ainsi que pour Salmonella. / CHARACTERIZATION OF CARBOHYDRATE BASED VACCINES Variables influencing the immunogenicity and physicochemical properties of glycoconjugate vaccinesMany aspects can influence the immunogenicity of conjugate vaccines and the main variables investigated so far are the size of the saccharide moiety, the saccharide:protein ratio in the purified conjugate, the conjugation strategy, the nature of the spacer and the protein carrier. The size of the saccharide moiety and saccharide/protein ratio were investigated in different works such as Seppälä and Mäkelä in one of the first studies on the effect of size and chemistry on the immunogenicity of dextrans-protein conjugates found that dextrans of low molecular weight conjugated to chicken serum albumin, induced strong anti-dextran responses in mice, while increasing the dextrans' size resulted in reduced immunogenicity.47 Peeters et al. showed that a synthetic tetramer of Hib capsular polysaccharide repeating unit, conjugated to a protein carrier, induced in adult mice and non-human primates antibody levels comparable to a commercial Hib conjugate and higher than those induced by a trimer, indicating that for Hib a minimum of eight sugars is needed for a proper immunological response.48 Laferriere et al. found little influence of the carbohydrate chain length on the immunogenicity of pneumococcal conjugate vaccines in mice.49 Pozsgay et al. studied the immunogenicity in mice of synthetic Shigella dysenteriae type 1 LPS oligosaccharides conjugated to human serum albumin (HSA). The authors found that octa-, dodeca-, and hexadecasaccharide fragments induced high levels of lipopolysaccharide binding IgG antibodies in mice after three injections and were superior to a tetrasaccharide conjugate. The influence of the carbohydrate/protein ratio was different for the three conjugates. The octasaccharide-HSA conjugate with the highest density evoked a good immune response, while in the case of dodeca- and hexadecasaccharide conjugates, the median density was optimal.50 These studies suggest that oligosaccharide chain length and hapten loading might be interconnected in determining the immunogenicity of glycoconjugate vaccines. The spacer is a short linear molecule that is generally linked to the polysaccharide chain or to the protein or to both moieties, depending on the chemistry, used to facilitate the coupling between the protein and sugar. There are evidences in the literature which suggest that rigid, constrained spacers like cyclohexyl maleimide, elicit a significant amount of undesirable antibodies, with the risk of driving the immune response away from the targeted epitope on the hapten.51 52 The use of a flexible alkyl type maleimido spacer has been reported as a way to overcome the previous observed immunogenicity of cyclic maleimide linkers.53 A number of protein carriers have been used so far in preclinical and clinical evaluation of conjugate vaccines. 54 55 56 57 58 59 60Proteins such as diphtheria and tetanus toxoids, which derive from the respective toxins after chemical detoxification with formaldehyde, were initially selected as carrier because of the safety track record accumulated with tetanus and diphtheria vaccination. CRM197, a non-toxic mutant of diphtheria toxin61 which instead does not need chemical detoxification, has been extensively used as carrier for licensed Hib, pneumococcal, meningococcal conjugate vaccines and for other vaccines being developed. An outer membrane protein complex of serogroup B meningococcus has been used by Merck as carrier for their Hib conjugate vaccine.62 GSK in their multivalent pneumococcal conjugate vaccine introduced the use of the Hib-related protein D as carrier for most of the polysaccharides included into the vaccine.63 64 The team of John Robbins made extensive use of the recombinant non toxic form of Pseudomonas aeruginosa exo-toxin as carrier for Staphylococcus aureus type 5 and 8 as well as for Salmonella

Les bilharzioses hépatospléniques sont des maladies parasitaires provoquées essentiellement par Schistosoma japonicum et Schistosoma mansoni. Ces infections provoquent une fibrose hépatique sévère chez 5 à 20% des sujets infectées vivant en zone endémique. Plusieurs études ont démontré que le développement de cette fibrose était régulé par des cytokines et chemokines et que la susceptibilité génétique à cette maladie dépendait chez l'homme d'un locus majeur sur le chromosome humain 6 en position q23. L'IL-22 est une cytokine produite essentiellement par les lymphocytes T auxiliaires et les cellules NK et qui a été impliqué dans la protection du foie et de l'intestin chez la souris. Le gène IL22RA2 codant pour le récepteur inhibiteur soluble de l'IL-22 (IL-22BP) est localisé dans la région de susceptibilité à la FH (6q23). Nous avons donc étudié l'implication de l'IL-22 dans la pathologie bilharzienne par une approche immunogénétique. Notre étude démontre que la production d'IL-22 est augmentée en réponse aux œufs de S. japonicum et aux antigènes d'œufs de S. mansoni dans des cultures de cellules mononuclées du sang périphérique d'individus chinois et brésiliens vivant dans des zones endémiques. Le traitement par le Praziquantel, qui favorise l'élimination des parasites et la réversion de la fibrose, est associé à une augmentation des taux d'IL-22 en culture. Nous avons observé que dans le sang des patients chinois, l'IL-22 est produit majoritairement par les lymphocytes T CD4+ et des cellules CD3-CD4- ne produisant pas d'IL-17A. Les taux d'IL-22 en culture et la proportion des cellules CD3-CD4-IL22+ sont inversement corrélés à la FH. / Hepatosplenic schistosomiasis is a parasitic disease caused primarily by Schistosoma japonicum and Schistosoma mansoni. These infections cause severe hepatic fibrosis (HF) in 5-20% of infected subjects living in endemic areas. Several studies have shown that the development of this fibrosis was regulated by cytokines and chemokines. Our laboratory has shown that genetic susceptibility to HF map to a major locus on human chromosome 6 at position q23. IL-22 is a cytokine produced primarily by T cells and NK cells and has been involved in protecting the liver and intestine in mice. The gene IL22RA2, encoding the soluble inhibitor receptor of IL-22 (IL-22BP), is located in the region of susceptibility to HF (6q23). We therefore examined the involvement of IL-22 in schistosomiasis pathology by an immunogenetic approach. Our study shows that the production of IL-22 is increased in response to eggs of S. japonicum and egg antigens of S. mansoni in cultures of peripheral blood mononuclear cells from Chinese and Brazilian subjects living in endemic areas. Treatment with praziquantel, which helps eliminate parasites and reversion of HF, is associated with increased levels of IL-22 in culture. We observed that in the blood of Chinese patients, IL-22 is produced mainly by CD4+ T cells and CD3-CD4-cells that do not produce IL-17A. The levels of IL-22 in culture and the proportion of CD3+CD4-IL22+ are inversely correlated with HF. These observations suggest that IL-22 may play a protective role in HF. To confirm this implication, we performed association studies between SNPs located in IL22 and IL22RA2 genes and HF.

L'infection chronique par le virus de l'hépatite B (VHB) touche 400 millions de personnes dans le monde et conduit à 1 million de décès par an des suites de complications hépatiques. Les traitements actuels permettent de freiner la progression de la maladie mais ne guérissent les patients que dans de très rares cas (3-5%). Le besoin médical pour de nouvelles thérapies est fort et les approches de type immunothérapie semblent aujourd'hui prometteuses dans cette pathologie où des corrélats immunitaires de résolution sont établis. Le but de cette thèse a été l'étude approfondie de candidats d'immunothérapie basés sur un vecteur adénovirus de sérotype 5 humain non réplicatif codant pour plusieurs antigènes du VHB. Des études in vitro et dans un modèle murin, ont montré la capacité : 1/ des antigènes du VHB codés par certains candidats a formé des VLP (microscopie électronique) 2/ des candidats à induire un recrutement de cellules immunitaires sur le site d'injection après administration par voie sous-cutanée. Des études in vivo utilisant un candidat prototype ont visé à caractériser les réponses immunitaires induites et à étudier l'impact de schémas d'immunisation atypiques, tels que ceux qui pourraient être utilisés en clinique. Elles ont montré la capacité du prototype, qu'il soit injecté une ou de multiples fois, à induire des réponses T CD8+ spécifiques du VHB, fortes, multispécifiques et maintenues dans le temps dans des modèles murins naïfs ou tolérants pour le VHB. Les administrations multiples n'ont pas conduit à une augmentation de la proportion de cellules T spécifiques du VHB exprimant des molécules d'inhibition, de type PD1 / Chronic infection with hepatitis B virus (HBV) affects 400 million people worldwide and leads to 1 million of deaths per year as a result of liver complications. Current treatments can slow the progression of the disease but cure patients in very rare cases (3-5%). The medical need for new therapies is obvious, strong and immunotherapy approaches appear promising in this disease, where immune correlates of resolution are established. The aim of this thesis was a comprehensive study of immunotherapeutic candidates, based on a non-replicating human adenovirus serotype 5 vector, encoding several antigens of HBV. Studies in vitro and in a mouse model, showed the ability of: 1 / HBV antigens encoded by some candidates to form VLPs (electron microscopy) 2 / candidates to induce recruitment of immune cells at the injection site after subcutaneous administration. In vivo studies using a prototype candidate aimed at characterizing the induced immune responses and to study the impact of atypical immunization schedules, which could be clinically used. They demonstrated the ability of the prototype, injected once or multiple times, to induce strong, multispecific and sustained over time HBV specific CD8 + T cells, in naive or tolerant to HBV mouse models. Multiple administrations do not increase the proportion of HBV specific T cells expressing inhibitory molecules, such as PD1

Ebolavirus (EBOV) est un filovirus responsable de fièvres hémorragiques virales sévères chez l’humain, qui peuvent être létales dans 90% des cas. L’actuelle épidémie en République Démocratique du Congo et l’ampleur démesurée de l'épidémie de 2014-2016 en Afrique de l’Ouest, qui a causé la mort de plus de 11 000 personnes, ont poussé les agences sanitaires internationales à tester plusieurs approches thérapeutiques afin d’essayer d’endiguer rapidement la propagation virale et de limiter la mortalité liée au virus lors de futures épidémies. Parmi toutes les stratégies testées, le virus recombinant réplicatif rVSV-ZEBOV qui exprime la glycoprotéine de surface d’EBOV, semble offrir la meilleur protection, aussi bien en modèle animaliers que sur le terrain. Avant d’être testé chez l’humain, de nombreuses études ont permis de mettre en évidence l’efficacité et l’innocuité de ce vaccin prototype. Pourtant et malgré le fait que de nombreuses études ont démontré l’importance et le rôle de la glycoprotéine GP dans l’efficacité des vaccins contre ce virus, aucune étude n’a encore été réalisé sur la nature des glycoprotéines virales synthétisées par le gène GP d’EBOV inséré dans le génome du virus VSV. Ainsi, les caractérisations moléculaires des protéines virales produites lors de l’infection par le virus rVSV-GP décrites dans ces travaux de thèse offrent de nouvelles perspectives pour comprendre le succès de ce vaccin mais aussi l’origine virales dans les effets secondaires sévères observés lors de la vaccination, et pourront aider à développer un vaccin plus sûr, qui n’est actuellement pas utilisable chez les personnes immunodéprimées / The filovirus Ebolavirus (EBOV) is the causative agent of severe viral hemorrhagic fevers in humans that can be lethal in 90% of cases. The current outbreak in the Democratic Republic of Congo and the extraordinary scale of the 2014-2016 outbreak in West Africa, that caused the death of more than 11 000 disease victims, lead the international public health agencies to test several therapeutic approach to limit viral spreading and mortality. Amongst those, the recombinant replication-competent rVSV-ZEBOV virus, that expressed EBOV GP glycoprotein, appears to offer the best protection in animal models and outbreak settings. While its effectiveness and safety have been widely investigated before human trials and despite numerous studies that showed the importance the nature of the glycoproteins which are produced during the infection from the EBOV GP gene that has been inserted in VSV genome are unknown. In this respect, the molecular characterisations of the viral glycoproteins synthesised during rVSV-GP presented in this thesis, offer new insights with which to understand the success of the rVSV-GP vaccine but also the potential viral origins of the severe adverse side effects observed during vaccination and could help in developing a safer vaccine, which currently cannot be used in an immunocompromised population

De nombreuses études en oncoimmunologie portent sur l’échec immunitaire dans le contexte de progression tumorale, mais elles sont plus rares à porter sur un contexte de régression, lorsque le système immunitaire est efficace. De ce fait, bien souvent la littérature met en avant le rôle cytotoxique des lymphocytes T CD8+, ou bien leur anergie dans le contexte de progression tumorale, causée par des cellules myéloïdes telles que les MDSC ou les macrophages de phénotypes M2, considérés comme pro-tumoraux. J’ai pour ma part étudié la réponse immunitaire dans le cadre d’une régression tumorale. Des cellules TC1 transplantées en s.c. dans des souris C57BL6/J, donnent des tumeurs solides d’environ 6mm de diamètre 11 jours plus tard. A ce moment là (J0), les souris sont vaccinées à proximité de la tumeur (priming), par un vaccin contenant la sous-unité B non toxique de la Shiga toxine couplée au peptide E7 de l’HPV16 (exprimé par les TC1), combiné à de l’IFNα. Une semaine plus tard (J7), un « boost » est effectué. Après le boost, la croissance tumorale cesse puis la tumeur régresse. L’analyse cinétique par cytométrie révèle un infiltrat immunitaire important pendant, et précédant la régression tumorale. La nature de cette infiltrat varie avec le temps. A J5, un infiltrat myéloïde est observé, suivi d’un infiltrat lymphocytaire à partir de J8. Une déplétion des cellules T CD8+ inhibe la régression tumorale, alors que dans les souris CXCR3-/-, dans lesquelles les CD8+ ne sont pas déplétés mais leur recrutement est fortement affecté, une régréssion tumorale est possible malgré un infiltrat T CD8+ très faible. Cela laisse penser que d’autres acteurs que les LT cytotoxiques sont nécessaires à la régression tumorale, comme probablement les cellules myéloïdes qui infiltrent le tumeur avant les cellules T. L’analyse de cette population montre une activation des monocytes et macrophages (MHC II+), avec un pic d’activation autour de J9, au début de la régression. La capacité cytotoxique de ces cellules, mesurée in vitro par immunofluorescence est augmentée comparée à des myéloïdes isolées de tumeurs de souris en progression. De plus, l’ajout d’un anticorps anti-TNFα inhibe partiellement cette cytotoxicité. Cela montre qu’après vaccination, les monocytes/macrophages sont capables de tuer les cellules tumorales. Une déplétion partielle des macrophages au moment de la vaccination, à l’aide du PLX3397 (inhibiteur du CSF1R), réduit l'efficacité de la vaccination. Les cellules myéloïdes, lorsqu'elles sont présentes, contribuent fortement à la régression tumorale induit par le vaccin composite, et leur action implique probablement des interactions avec les LT CD8+. C'est ce que suggère l'observation de tumeurs vaccinées dans des souris IFNϒ-/-, dans lesquelles l'efficacité vaccinale est aussi inhibée. Cette thèse montre qu’après une stimulation appropriée, qui peut, comme ici, mimer une infection virale, les cellules myéloïdes peuvent participer activement à la régression tumorale. / Most oncoimmunology studies are performed in an immune failure context of progressing tumor. They rarely describe tumor regressions, when the immune response is efficient. As a result, the literature tends to highlight the cytotoxic role of CD8+ T cell or their anergy in the context of tumor progression, caused by myeloid cells such as the MDSC or M2 polarized macrophages, considered as protumoral. My PhD work has been focused on the immune response in a context of tumor regression. TC1 cells transplanted s.c. in C57 BL6 J mice, give rise to solid tumors of approximately 6 mm diameter 11 days later. At that time (day 0), mice are vaccinated peritumorally for a priming with a composite vaccine containing the subunit B of the Shiga toxin coupled to E7 peptide from HPV16 (present on TC1), combined with the IFNα. A week later (day 7), a boost is made. After the boost, tumor growth stops and the tumor regress. Kinetic cytometric analysis revealed a significant immune infiltrate during and prior to tumor regression. The nature of this infiltrate varies with time. On day 5, a myeloid infiltrate is observed, followed by a lymphocytic infiltrate which is conspicuous after day 8. Depletion of CD8+ T cells inhibits tumor regression, while in CXCR3- /- mice, in which the CD8+ are not depleted but their recruitment is severely affected, tumor regression is possible despite a very low CD8+ T cell infiltrate. This suggests that some effectors, other than cytotoxic T cells, are required for tumor regression, including probably myeloid cells that infiltrate the tumor before T cells. The analysis of this population shows an activation of monocytes and macrophages (MHC II+) with a peak of activation around day 9, early in the regression. The cytotoxic capacity of these cells was tested in vitro, by depositing F4/80+ cells from vaccinated tumors or not, on a TC1 cell monolayers in culture. Only myeloid cells from vaccinated tumors appear to kill tumor cells, and adding an anti-TNFα inhibits this cytotoxicity. This shows that after immunization, monocytes/macrophages are capable of killing tumor cells. A partial depletion of macrophages at the time of vaccination, after treatment with PLX3397 (CSF1R inhibitor), reduces the vaccine efficacy. Myeloid cells contribute significantly to the observed tumor regression, and their action involves interactions with CD8+ T cells. This hypothesis is consistent with the observation of tumors in vaccinated IFNϒ- /- mice, in which the vaccine efficacy is also inhibited. This thesis shows that after an appropriate stimulation, for instance, here, by mimicking a viral infection, myeloid cells can actively participate in tumor regression.

L'administration nasale a un grand avantage pour stimuler l'immunité protectrice locale et systémique. Cependant, des systèmes d'administration et des adjuvants sont souvent nécessaires pour améliorer l'efficacité du vaccin intranasal. Nous avons appliqué la technologie des nanoparticules en tant que système universel de délivrance de vaccins contre la grippe dans le projet européen FP7 appelé UniVacFlu.Nous avons évalué différentes nanoparticules (NP) pour rechercher le meilleur nanovecteur. Pour cela, nous avons comparé 5 types de nanoparticules avec différentes charges de surface (anioniques ou cationiques) et diverses compositions internes comme vecteurs potentiels: des liposomes cationiques ou anioniques, des NP de PLGA cationique ou anionique (poly acide lactique co-glycolique) et une NP cationique composée de maltodextrine fonctionnalisée par un agent cationisant avec un coeur de lipides anioniques (NPL). Nous avons d'abord quantifié leur temps de résidence nasale après l'administration nasale chez la souris en utilisant l'imagerie in vivo et les NPL ont montré le plus long temps de résidence. L'endocytose in vitro sur des cellules muqueuses (cellules épithéliales des voies respiratoires, macrophages et cellules dendritiques) en utilisant des nanoparticules marquées a été réalisée par cytométrie de flux et microscopie confocale. Parmi les 5 nanoparticules, les NPL ont été majoritairement captées par 3 lignées cellulaires différentes représentatives d’un épithélium respiratoire et les mécanismes d'endocytose ont été caractérisés. Afin d’évaluer le meilleur vecteur en tant que véhicules, le chargement d'antigènes et la délivrance intracellulaire ont été évalués dans des cellules de la muqueuse des voies respiratoires (cellules épithéliales des voies aériennes, macrophages et cellules dendritiques) par cytométrie de flux. Nous montrons que les NPL sont les meilleurs candidats capables de délivrer la plus grande quantité de protéines dans les cellules. Pris ensemble, notre étude a révélé que parmi 5 nanoparticules, la NPL était le meilleur nanovecteur en termes de temps de résidence nasale, d'endocytose par les cellules et de délivrance de protéines dans l'épithélium des voies respiratoires. Les NPL ont donc été sélectionnées comme nanovecteurs pour le projet UniVac Flu.Les antigènes de la grippe CTA1-3M2e-DD et HA ont été formulés avec les NPL. Le CTA1-3M2e-DD est un antigène chimérique adjuvanté et ciblé. Il est composé de la sous-unité A1 de la toxine du choléra et un épitope conservé du virus grippal A (M2e), ainsi que le dimère de l'analogue synthétique de la protéine A de Staphylococcus aureus (DD) utilisé comme agent de ciblage des lyphocytes B. Pour améliorer l'effet antigénique, l’HA recombinant de H1N1 a été combinée avec CTA1-3M2e-DD. Ces formulations ont été évaluées chez la souris par le consortium UniVacFlu. Les résultats ont montré que CTA1-3M2e-DD et HA chargé dans les NPL formeraient un vaccin intranasal prometteur contre la grippe. Ce travail de thèse montre que les NPL sont des nanovecteurs d’intérêt pour le vaccin nasal. / Nasal administration has great advantage for stimulating the immune system, such as stimulating local and systemic protective immunity. However, delivery systems and adjuvants are often necessary to improve the efficacy of the intranasal vaccine. We applied nanoparticle technology to deliver a universal influenza vaccine via the nasal route in a European FP7 project called UniVacFlu.We evaluated different nanoparticles to search the best nanocarrier for an intranasal vaccine. Here we compared 5 types of nanoparticles with different surface charges (anionic or cationic) and various inner compositions as potential vectors: cationic and anionic liposomes, cationic and anionic PLGA (Poly Lactic co-Glycolic Acid) nanoparticles and zwitterionic maltodextrin nanoparticles (cationic surface with an anionic lipid core: NPL). We first quantified their nasal residence time after nasal administration in mice using in vivo live imaging and NPL showed the longest residence time. In vitro endocytosis on mucosal cells (airway epithelial cells, macrophages and dendritic cells) using labeled nanoparticles were performed by flow cytometry and confocal microscopy. Among the 5 nanoparticles, NPL were taken up to the greatest extent by the 3 different cell lines and the endocytosis mechanisms of NPL were characterized. In order to compare different nanoparticles as vaccine carriers, antigen loading and cell delivery were evaluated. In this study, we compared the loading and delivery of labeling ovalbumin with airway mucosa cells (airway epithelial cells, macrophages and dendritic cells) by flow cytometry. Our data showed that NPL were the best candidate that can payload with highest amount of protein and eventually the most efficient cellular protein delivery capacity. Taken together, our study revealed that among 5 nanoparticles, NPL were the best nanocarrier that own longer nasal residence time, efficiently uptake and deliver protein into airway epithelium. NPL were then selected as nanocarrier for the UniVac Flu project.The flu antigens CTA1-3M2e-DD and HA were formulated with NPL. The CTA1-3M2e-DD is an adjuvanted antigen composed of the A1 subunit of cholera toxin and a conserved epitope of influenza A virus (M2e), as well as the dimer of the synthetic analogue of Staphylococcus aureus protein A (DD) used to target B cells. To improve antigenic effect, recombinant HA from H1N1 was combined with CTA1-3M2e-DD. These formulations were evaluated in mice by the UniVacFlu consortium. We observed that CTA1-3M2e-DD and HA loaded into NPL could be a promising universal intranasal influenza vaccine.

Bakgrund: Föräldrar som står inför valet att vaccinera sina barn är inte alla gånger eniga om vaccinets för- och nackdelar. Information om vaccinen cirkulerar på internet och via sociala medier. För läsaren blir det en utmaning att veta vilken given information som är trovärdig. Mötet med vården blir därmed en central punkt där föräldrar kan söka vägledning och få sina farhågor bemötta. Syfte: Syftet med studien är att belysa vilka diskussioner som förs på offentliga forum och Facebookgrupper som kan ligga till grund för tveksamhet eller avståndstagande till det svenska barnvaccinationsprogrammet samt hur mötet med vården beskrivs av föräldrar som avböjer att vaccinera sina barn. Metod: Kvalitativ metod med beskrivande design har använts. Inlägg från en offentlig Facebookgrupp samt sex diskussionstrådar från forumet Familjeliv.se sammanställdes och analyserades med systematisk textkondensering. Resultat: Resultatet påvisar olika komplexa motargument och farhågor om vaccin som ingår i det svenska barnvaccinationsprogrammet. Farhågorna rör biverkningar, vaccinets innehåll och tidpunkten för vaccinering. Vissa upplevde vaccinationen som onödig då det idag finns tillgång till modern sjukvård, hygien och sanitet samt att vaccinet ändå inte ger ett hundraprocentigt skydd. Bristen på tillit för myndigheter och läkemedelsföretag var ytterligare en faktor som visade sig ligga till grund för skepticismen kring vaccin. I mötet med vården beskriver människor känslor av uppgivenhet och undergivenhet. Vikten av att diskutera inför ett beslut kring vaccination utan dispyter poängteras, vilket enligt resultatet är något som inte alltid sker. Slutsats: Ett ökat förtroende för vården måste skapas genom tydligare riktlinjer för kommunikation kring vaccination samt tillgänglighet till information som besvarar människors farhågor.