Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Las vacunas de ADN son una terapia alternativa altamente atractiva para combatir el cáncer. Esta estrategia consiste en la entrega in vivo de ADN plasmidial codificante de antígenos tumorales que son expresados y presentados por células dendríticas (DC) con el fin de activar linfocitos T capaces de eliminar específicamente células tumorales. Un importante paso hacia la aplicación clínica de las vacunas de ADN ha sido el uso de la electroporación in vivo, un método de entrega altamente eficiente y clínicamente aplicable, que aumenta considerablemente el ingreso de plásmidos al interior de las células. Sin embargo, la mayoría de los antígenos tumorales son antígenos propios expresados en células normales, por lo que el sistema inmune es incapaz de discriminar a los tumores como agentes potencialmente peligrosos. Es así como los esfuerzos para resolver estos inconvenientes se han enfocado, en parte, en la búsqueda y elaboración de nuevas estrategias que sean capaces de promover eficientemente la inducción de linfocitos T específicos contra estos antígenos tumorales poco inmunogénicos. El ADN usado en las vacunas puede ser reconocido por numerosos receptores de la inmunidad innata, los cuales al ser activados, señalizan a través del factor de transcripción NF-κB, induciendo la expresión de citoquinas proinflamatorias e interferones de tipo I. NF-κB es un regulador maestro de la función de las DC y de la inducción de linfocitos T mediada por vacunas de ADN, por lo tanto, el desarrollo de adyuvantes que modulen su actividad representa una estrategia interesante para promover la inducción eficiente de linfocitos T antitumorales. IκBα es uno de los principales inhibidores de NF-κB, el cual además es un gen blanco de NF-κB, por lo que actúa en un sistema de retroalimentación negativa para detener la activación de esta vía. Por otro lado, el uso de shARN que silencian la expresión de reguladores negativos de las DC ha demostrado su capacidad como adyuvantes génicos en vacunas de ADN, al inducir una respuesta inmune antitumoral más potente. Por tanto, nuestra hipótesis plantea que un shARN contra IκBα es capaz de potenciar la activación de la inmunidad innata mediada por NF-κB y, como consecuencia, la magnitud de la respuesta inmune adaptativa específica contra el antígeno tumoral codificado. En este proyecto se utilizaron plásmidos codificantes de un shARN contra IκBα como adyuvantes génicos para ser administrado junto a una vacuna de ADN que codifica para el antígeno tumoral TRP2. Se evaluó el efecto del silenciamiento de IκBα sobre la migración de las células dendríticas de la piel, particularmente sobre las células de Langerhans y sobre las células dendríticas dermales CD103+. La generación de linfocitos T específicos contra TRP2 se analizó en ratones vacunados mediante citometría de flujo y el efecto antitumoral in vivo se evaluó usando un modelo de profiláctico de melanoma metastásico y un modelo terapéutico de melanoma subcutáneo. Los resultados de este trabajo indican que la administración de ADN plásmidial en la piel incrementa la migración de células dendríticas hacia los nódulos linfáticos drenantes y que la inhibición de la expresión de IκBα con un shARN en el sitio de vacunación incrementa la migración de células dendríticas dermales CD103+ hacia el nódulo linfático drenante. Además se observó que la coadministración del shARN contra IκBα en conjunto con una vacuna de ADN dirigida contra el antígeno tumoral TRP2 potencia la generación de linfocitos T CD8 específicos e incrementa la respuesta inmune antitumoral en ensayos de metástasis pulmonar y crecimiento tumoral utilizando el modelo de melanoma murino B16F10. Dada la gran capacidad de las células dendríticas dermales CD103+ para activar linfocitos T CD8 es posible correlacionar su incremento en los nódulos linfáticos drenantes del sitio de vacunación con una mayor generación de linfocitos T CD8 específicos contra TRP2 y con un incremento en la respuesta inmune antitumoral contra melanoma cuando se coadministra el shARN contra IκBα junto con una vacuna de ADN dirigida contra el antígeno tumoral TRP2 / DNA vaccines are a highly attractive therapeutic alternative to treat cancer. This strategy consists of in vivo delivering plasmid vectors encoding tumor antigens, which are expressed and presented by dendritic cells (DC) in order to activate T cells capable of specifically eliminating tumor cells. An important step towards the clinical application of DNA vaccines has been the use of in vivo electroporation, a highly efficient delivery method that is clinically applicable and considerably increases plasmid uptake in cells. However, most of tumor antigens are self-antigens expressed by normal cells, so that the immune system is unable to recognize tumors as potentially dangerous agents. Thus, the efforts to solve these inconvenient have been focused on developing new strategies to promote the induction of T cells responses specific against such poorly immunogenic tumor antigens. DNA used for vaccines can be recognized by several innate immune receptors that, upon activation, signal through the transcription factor NF-κB which induces the expression of proinflamatory cytokines and type I interferons. NF-κB is a master regulator of both DC function and DNA vaccine-mediated induction of T cell responses, therefore the development of adjuvants that modulate NF-κB activity represents an interesting strategy to promote the efficient induction of antitumor T cell responses. IκBα is one of the major inhibitors and downstream target genes of NF-κB, therefore acting in a negative feedback loop to stop NF- κB activation. The use of shRNA silencing negative regulators of DC function has demonstrated its potential as genetic adjuvants for DNA vaccines by inducing enhanced antitumor immune responses. Hence, our hypothesis states that a shRNA targeting IκBα is able to promote the NF-κB innate immune activation and, as a consequence, the magnitude of tumor antigen-specific adaptive immune responses. In this project, plasmid-encoded shRNA targeting IκBα were generated as genetic adjuvants to be coadministrated with a DNA vaccine encoding the tumor antigen TRP2.The effect of IκBα silencing was analyzed over the migration of skin dendritic cells, particularly Langerhans cells and CD103+ dermal dendritic cells. Generation of TRP2-specific T cells was studied in vaccinated mice by flow cytometry and the in vivo antitumor effect was evaluated using prophylactic model of metastatic melanoma and a subcutaneous model of melanoma. The results obtained in this work shows that the inhibition of IκBα using a shRNA increases the migration of CD103+ dermal dendritic cells to the skin draining lymph nodes. Also the coadministration of the shRNA against IκBα and a DNA vaccine against TRP2 enhance the generation of TRP2 specific CD8 T cells increasing the antitumor immune response against melanoma. Finally due to the high ability of CD103+ dermal dendritic cells to cross-present antigens and activate CD8 T cell is possible to correlate their increase in the migration with higher levels of TRP2 specific CD8 T cells and higher antitumor immune response when the shRNA against IκBα is coadministered with a DNA vaccine against TRP2

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El objetivo del presente estudio fue la evaluación en campo una formula vacunal producida para provocar inmunocastración en cerdos machos de criadero, el método de acción de esta vacuna es a través de la producción de anticuerpos contra la hormona liberadora de Gonadotrofinas (GnRH), impidiendo su efecto y consecuentemente las características negativas relacionadas a la producción de cerdos machos enteros, principalmente, un fenómeno denominado “boar taint” que produce un olor y sabor desagradables en la carne del animal. Actualmente el método utilizado para prevenir esta situación en criaderos, es la castración quirúrgica a edad temprana de los cerdos machos, pero esta práctica presenta desventajas relacionadas con el bienestar y eficiencia productiva de los animales El estudio comprende 60 machos raza Camborough (♀C22 X ♂PB380), en condiciones normales de criadero comercial y separados en 3 grupos; cerdos castrados quirúrgicamente a edad temprana, cerdos inmunizados con vacuna comercial Improvac® (Zoetis Ltda.) y grupo de cerdos inmunizados con formula vacunal experimental GnRXG/Q. Se monitorearon títulos de anticuerpos anti GnRXG/Q, niveles de testosterona y diámetro testicular en diferentes tiempos post inmunización. Se demuestra en el estudio que ambas fórmulas vacunales son efectivas para producir inmunocastración en cerdos machos, obteniendo las ventajas productivas de mantener más tiempo el macho entero, utilizando su potencial anabólico y siendo una mejor alternativa para el bienestar de los cerdos. / The objective of the present study is to carry out an on-site evaluation for a vaccine formulation, produced to induce immunocastration in boars. The action mechanism of this vaccine occurs through the production of antibodies against Gonadotropin-releasing hormone (GnRH), blocking its effect and thus, the negative features associated to the production of functional male swine, such as the ―boar taint‖, which causes an unpleasant smell and flavor in the animal meat. The current method, in order to prevent this situation in pig houses, is surgical castration at an early age in male piglets, but this practice has shown disadvantages related to the welfare and productive efficiency of the animals. For this study, 60 Camborough (♀C22 X ♂PB380) boars were used under normal conditions of a commercial pig house, and they were put into 3 separated groups: surgically castrated pigs, pigs immunized against GnRH with commercial formulation Improvac® (Zoetis Ltda) and a group of immunized pigs with the experimental vaccine formulation GnRXG/Q. Anti GnRXG/Q antibody titles, testosterone levels and testicular diameter were monitored at different times post immunization. The study showed that both vaccine formulations are effective when it comes to produce immunocastration on male swine, obtaining the productive advantages of maintaining the male entire for a longer period of time, using its anabolic potential, resulting as well in a better alternative for the animals’ welfare.

Tesis para optar al grado de Magíster en Bioquímica área de Especialización en Bioquímica Clínica / Streptococcus agalactiae (SGB) es una bacteria Gram positiva anaeróbica facultativa capaz de colonizar el tracto genitourinario de un 15 a un 40% de mujeres sexualmente activas. En la mayoría de los casos la infección con este patógeno es asintomática pero en neonatos puede originar sepsis, meningitis y neumonía. A partir del año 1990 el CDC (Center for Disease Control and Prevention) ha implementado una serie de protocolos de prevención dirigidos a mujeres embarazadas los cuales constan de pruebas microbiológicas realizadas entre las 35 y 37 semanas de gestación y la aplicación de antibióticos intraparto en mujeres colonizadas. A pesar de que medidas han tenido un alto impacto en la disminución de la incidencia de la infección por SGB este patógeno persiste como el único y más frecuente aislado desde la sangre o del fluido cerebroespinal de infantes menores de 3 meses de edad y de mujeres con infecciones intraparto en Estados Unidos y en otros países industrializados. Numerosos estudios realizados a neonatos sanos nacidos de madres colonizadas con SGB indican que estos tienen niveles superiores de anticuerpos IgG transferidos transplacentalmente que aquellos que desarrollaron la infección. Basado en este hecho actualmente se trabaja arduamente en el desarrollo de una vacuna capaz proteger a mujeres embarazadas y sus infantes. En la actualidad, vacunas en base a polisacáridos conjugados están en Fase clínica III, con el inconveniente de que la vacuna ensayada será serotipo dependiente y solamente inducirá una respuesta inmune protectora contra los serotipos incluidos en su formulación (3 de 10 serotipos). Vacunas en base a proteínas conservadas de SGB se encuentran en estudio, una de ellas es la proteína SIP (Surface Immunogenic Protein), con la cual se trabaja en la Sección de Biotecnología del ISPCH. En este estudio se evaluará la respuesta inmune protectora de un prototipo de vacuna en base a la proteína recombinante SIP de SGB, evaluando parámetros inmunológicos que permitan demostrar la inducción de inmunidad protectora en modelo ratón

El objetivo de este estudio fue comparar la eficacia de una vacuna subunitaria contra mastitis causada por Escherichia coli con la de una vacuna comercial (Enviracor®; Zoetis Inc), en vacas lecheras confinadas de la zona central, a través del estado de salud mamaria, producción de leche e índices de calidad de la misma. Se incluyeron vacas de forma aleatoria a dos grupos experimentales. Un grupo (n = 230) recibió la vacuna subunitaria, mientras que el otro (n=213) fue vacunado con la vacuna J5. El protocolo de inmunización fue similar para ambos grupos, e incluyó tres dosis de vacuna vía subcutánea; la primera al momento del secado, la segunda al preparto y la tercera alrededor de los 7 días después del parto.

“Vacunas Sars - Cov”. El webinar estará a cargo del Dr. Manuel Gutierrez, Director de la carrera de Medicina UPC.

Determina con qué porcentaje de la meta de las vacunas pentavalente (3era dosis) y triple viral, sarampión, paperas y rubéola (SPR), contribuyen los hospitales de la Dirección Regional de Salud Callao a los distritos de su jurisdicción en el 2012 al considerar el lugar de residencia de los vacunados. Realiza un estudio observacional, descriptivo, transversal. Se revisó los libros de vacunación de 05 hospitales de la DIRESA Callao de menores de un año con 3era pentavalente y niños de un año con SPR vacunados desde enero a diciembre del 2012. Durante el 2012, se identificaron en los libros de vacunación 4,329 niños menores de un año con 3era dosis de Pentavalente que residían en 22 distritos del departamento de Lima y de la provincia del Callao, al agruparlos por DISA/DIRESA se obtuvo que el 66.6% (2,883) pertenecían a la DIRESA Callao, el 33.3% (1,443) a la DISA V Lima Ciudad y el 0.1% (3) de la DISA IV Lima Este. También se identificó 2,830 niños de un año con vacuna SPR que residían en 22 distritos del departamento de Lima y de la provincia del Callao. Al agruparlos por DISA/DIRESA se observó que el 73.96%% (2,093) eran de la DIRESA Callao, el 25.72% (728) de la DISA V Lima Ciudad, el 0.28% (8) de la DISA IV Lima Este y el 0.04% (1) de la DISA II Lima Sur. Concluye que entre la tercera y cuarta parte de los niños vacunados en los 05 hospitales de la DIRESA Callao proceden de otras jurisdicciones, especialmente de la DISA Lima Ciudad. La cobertura administrativa de vacunación de los hospitales de la DIRESA Callao es evaluada por lugar de vacunación y no por lugar de residencia. Esto no permite calcular de manera precisa la cobertura de vacunación para el Callao, como tampoco el tamaño de la población susceptible para cada tipo de vacuna. Las elevadas coberturas de vacunación de algunos distritos para la 3era dosis de vacuna pentavalente y de vacuna SPR se podrían explicar en buena medida porque todos los vacunados en los hospitales son sumados a la cobertura del distrito donde se ubica el establecimiento en vez de considerar el lugar de residencia. / Trabajo académico

Determina los conocimientos y actitudes de los padres de familia de los adolescentes hacia la vacuna contra el virus del Papiloma Humano. El enfoque es cuantitativo, de nivel aplicativo, de método descriptivo y de corte transversal. La población está conformada por 50 padres de familia de las adolescentes del 5° y 6° de primaria que respondieron a criterios de inclusión y exclusión. Los instrumentos son una escala tipo Likert modificada para la variable actitudes y un cuestionario para la variable conocimientos. Encuentra que del total de padres de familia de las adolescentes del 5° y 6° de primaria 50 (100%) encuestados, 28 (56%) no conocen acerca de la vacuna contra el virus del Papiloma Humano y 24 (48%) del total tienen una actitud indiferente. Concluye que la mayoría de los padres de familia de los adolescentes encuestados no conocen acerca de la vacuna contra el virus del Papiloma Humano, su efectividad, su importancia, los efectos adversos y las dosis de la vacuna. Esto podría determinar la actitud indiferente que presenta la mayoría de padres de familia de encuestados. / Tesis

La brucelosis bovina es una enfermedad zoonótica producida por Brucella abortus, una bacteria intracelular facultativa. La enfermedad se caracteriza por producir abortos, retención de placenta, epididimitis, infertilidad y graves daños económicos a los ganaderos debido a las pérdidas de terneros y disminución en la producción de leche. Los signos de esta enfermedad no son patognomónicos y el diagnóstico depende de la demostración de Brucella abortus en el animal afectado ya sea por aislamiento de la bacteria o por la detección de anticuerpos o material genético. El primer paso para reducir el número de animales infectados y disminuir la incidencia suele ser la vacunación. El objetivo principal de un programa de vacunación sistemático y obligatorio es reducir la tasa de infección y obtener hatos resistentes a la brucelosis para luego emprender la erradicación. Sin embargo, esta enfermedad no ha podido ser erradicada en la mayoría de países a pesar de la aplicación de los programas de vacunación debido principalmente a que tales programas de control tienen una duración indefinida y necesitan ser mantenidos aun después de que haya sido alcanzado un bajo nivel de infección, a fin de que la enfermedad no resurja. Asimismo, en muchos países los métodos para el control y erradicación de la brucelosis bovina tienen un respaldo por la regulación y legislación gubernamental. En otros, sin embargo, no existen autoridades que realicen un control sanitario y legal. Por este motivo, en el presente trabajo se realizó una revisión completa de la enfermedad, las herramientas que tenemos para el diagnóstico, las estrategias de vacunación y los tipos de vacunas necesarios para la prevención y finalmente, se caracterizaron los programas de control y erradicación de la brucelosis bovina en los establos lecheros del país. El conocimiento recopilado nos permitirá la implementación de medidas coherentes para lograr más progreso en la prevención y futura erradicación de la brucelosis en el país y por consiguiente, beneficios económicos y mejor protección de la salud pública. / The bovine brucellosis is a zoonotic disease produced by Brucella abortus, a facultative intracellular bacterium. The disease is characterized to cause abortions, retention of placenta, epididymitis, infertility and severe cost-reducing damages to the cattle farmers due to losses in calves and decrease in the production of milk. The signs of this disease are not patognomonics and the diagnosis depends on demonstration of Brucella abortus in the affected animal either for isolation of the bacterium or for the detection of antibodies or genetic material. The first step to reduce infected animals and to decrease the incidence often is vaccination. The principal systematic and obligatory objective of a program of vaccination is to reduce the rate of infection and to obtain resistant herds to the brucellosis for then to initiate the eradication. However, this disease could not be eradicated at the majority of countries in spite of the application of the programs of vaccination owed principally to which such programs of control have an indefinite duration to and that they need to be maintained even after it had been achieved a low level of infection, in order that the disease not reappear. In like manner, at many countries the methods for control and eradication of the bovine brucellosis have a back for the regulation and governmental legislation. In other countries, however, the authorities that accomplish a sanitary and legal control do not exist. For this motive, in the present work was performed a revision completes of the disease, the tools that we have for the diagnosis, the strategies of vaccination and the necessary types of vaccines for prevention and finally, we characterized the programs of control and eradication of the bovine brucellosis at the milky herds of the country. The compiled knowledge will allow us to the implementation of coherent measures to achieve more progress in prevention and future eradication of the brucellosis at the country and consequently, cost-reducing benefits and better protection of the public health.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Las enfermedades asociadas a circovirus porcino tipo 2 (PCV2) son consideradas el problema económico más grande de la industria porcina mundial. Además de mejorar la gestión y las prácticas de manejo (mejor higiene, menor hacinamiento y mejor ventilación), la disponibilidad de vacunas anti-PCV2 representa la opción inmunológica más eficaz para paliar el impacto de estas enfermedades. La proteína de la cápside de PCV2 (Cap) es un importante antígeno para el desarrollo de vacunas. Actualmente, la mayoría de las vacunas comerciales anti-PCV2 se producen como formulaciones inyectables de este antígeno. Aunque eficaces, estas vacunas tienen ciertas desventajas, incluyendo estrés animal e inmunosupresión concomitante, además de la implicancia de procedimientos laboriosos asociados y consumidores de tiempo. En este estudio, una cepa recombinante de la levadura Saccharomyces cerevisiae fue utilizada como vector y vehículo para entregar el antígeno de la cápside viral proveniente de un aislado nacional de PCV2. Este procedimiento se realizó con el fin de obtener datos dirigidos a estudiar el desarrollo de una vacuna oral contra el virus. De esta forma, el potencial inmunogénico de este sistema fue probado en ratones BALB/c, después de la administración de la levadura recombinante vía oral, bajo dos formulaciones distintas, como cepa viva y como extracto sonicado. Para esto, el gen cap químicamente sintetizado con la preferencia codogénica optimizada de la levadura (opt-cap) fue replicado en Escherichia coli y Saccharomyces cerevisiae a través del vector, pYES2. La expresión de la proteína Cap en la levadura fue confirmada a través de Western Blot con suero anti PCV2. Posteriormente, resultados de experimentación in vivo confirmaron que la administración oral en ratones de extractos sonicados de la levadura recombinante, estimulan la inducción de anticuerpos séricos y fecales específicos contra el antígeno Cap más eficientemente que la cepa viva. Estos resultados demostraron que es factible utilizar la levadura S. cerevisiae como un sistema seguro y simple de producir antígenos virales de PCV2, y de esta manera, su entrega vía oral podría ser una estratégica alternativa para inducir eficientemente anticuerpos anti-PCV2. Los resultados obtenidos en esta memoria en un modelo murino, están dirigidos a realizar investigación adicional en cerdos, el hospedero natural de PCV2 / Financiamiento: Proyecto Fondecyt de Iniciación en Investigación No. 1111013 y el Proyecto de Iniciación en Investigación de la Vicerrectoría de Investigación y Desarrollo de la Universidad de Chile, VID I 07/15-2

Streptococcus suis es un importante patógeno que causa grandes pérdidas económicas en la industria porcina a nivel mundial, siendo también un importante agente zoonótico. Aunque son varias las aproximaciones que se han desarrollado mediante vacunas vivas o recombinantes para prevenir las enfermedades provocadas por S. suis, los esfuerzos para controlar su infección se ven dificultados por la falta de herramientas efectivas contra este patógeno.Diferentes tipos de transportadores implicados en la captación de cationes divalentes y asociados a la pared celular, entre ellos los transportadores ABC, se relacionan con la virulencia bacteriana y presentan propiedades inmunogénicas contra las especies bacterianas de las que derivan. Atendiendo a todas estas características, se han desarrollado estrategias para producir vacunas contra las bacterias patógenas basadas en la sobreexpresión en la superficie celular bacteriana de transportadores de cationes divalentes inducidos mediante agentes quelantes o a través de la construcción de cepas deficientes en los represores de la transcripción de estos transportadores. En este contexto, el objetivo del presente trabajo ha sido estudiar los mecanismos de captación de cationes divalentes de S. suis, así como su papel en la virulencia y su posible uso para el desarrollo de herramientas eficaces contra este patógeno. Para abordar el objetivo propuesto, se identificaron in silico diversos transportadores de S. suis implicados en la captación de zinc y hierro y también sus posibles reguladores (AdcR y Fur, respectivamente). Además, se clonó el gen adcR de S. suis, que codifica un posible regulador de los transportadores implicados en la captación de Zn2+ y/o Mn2+ en Streptococcus spp., se purificó la proteína AdcR y mediante ensayos con DNasaI (footprinting) y de movilidad electroforética se demostró, por primera vez, que dicha proteína reconoce y se une específicamente a la secuencia TTAACNRGTTAA. Asimismo, también se ha demostrado que in vitro se requiere Zn2+ o Mn2+ para establecer dicha unión y que la proteína AdcR controla la expresión de los genes que codifican las proteínas SsuiDRAFT 0103 y SsuiDRAFT 1237, componentes de transportadores ABC implicados en la captación de zinc y/o manganeso. Por otra parte, se clonó el gen fur de S. suis, que codifica el posible regulador de los transportadores implicados en la captación de Fe2+, y se sobreexpresó su producto en Escherichia coli. Ensayos de movilidad electroforética con extracto crudo de esta cepa de E. coli mostraron que la proteína Fur de S. suis controla la expresión de los genes feoAB, implicados en la captación de hierro.Seguidamente, se obtuvieron mutantes mediante la deleción de los genes adcR y fur en una cepa virulenta de S. suis con el objetivo de caracterizar ambos regulones. Varios transportadores implicados en la captación de cationes aparecieron desreprimidos en las cepas mutantes cuando la expresión génica fue comparada con la de la cepa salvaje a través de ensayos de RT-PCR a tiempo real. En concordancia con ello, los ensayos de movilidad electroforética mostraron que estos reguladores se unen específicamente al promotor de dichos genes. Asimismo, la ausencia de los genes adcR y/o fur en un estreptococo patógeno mostró, por primera vez, una importante atenuación de su virulencia en el modelo animal de ratón.Finalmente, se abordaron estudios de inmunogenicidad y protección. Para ello, se purificaron tres proteínas periplásmicas de S. suis implicadas en la captación de cationes divalentes (SsuiDRAFT 0103, SsuiDRAFT 0174 y SsuiDRAFT 1237), resultando ser todas ellas inmunogénicas, aunque sólo SsuiDRAFT 0103 confiere una protección significativa contra S. suis en el modelo animal de ratón. Además, las proteínas Ssu0309 y Ssu1103 asociadas a la pared celular, que están sobreexpresadas en el mutante adcR, fueron identificadas mediante espectrometría de masas como factores de virulencia pertenecientes a la familia de proteínas Pht (Pneumococcal histidine triad). Asimismo, se estudiaron las propiedades protectoras de las cepas mutantes demostrándose que aunque enteras no confieren protección contra S. suis en el modelo animal de ratón, las proteínas asociadas a la pared celular del doble mutante adcR fur sí que inducen una protección significativa ante una infección con la cepa virulenta de S. suis 89/1591 en dicho modelo. / Streptococcus suis is an important pathogen that causes significant economical losses in the swine industry worldwide and it is also an important zoonotic agent. Although several approaches to develop either live or recombinant vaccines to prevent S. suis-mediated disease have been tested, efforts to control the infection are hampered by the lack of effective weapons against this pathogen.Different cell-wall-associated transporters involved in divalent-cation uptake, including ABC transporters, have been shown to be involved in bacterial virulence and have immunogenic properties against the bacterial species from which they are derived. Accordingly, several strategies have been developed to produce vaccines against this pathogenic bacterium. One of them involves overexpression on the bacterial cell surface of divalent-cation-uptake transporters induced by chelator agents or by the construction of deficient strains in the cation-uptake repressors. In this context, the aim of this work has been to study the S. suis-cation-uptake mechanisms and their role in virulence as well as their putative use as a tool to achieve broad protection against this pathogen. To achieve this purpose, several transporters involved in zinc and iron uptake and their putative regulators (AdcR and Fur, respectively) have been identified in silico. Furthermore, the S. suis adcR gene, which encodes a predicted regulator of Zn2+ and/or Mn2+ uptake in streptococci, was cloned and its protein product was purified. Footprinting and electrophoretic mobility shift assays with purified S. suis AdcR protein showed, for the first time, that the AdcR-DNA binding sequence corresponds to the TTAACNRGTTAA motif. In addition, the requirement for either Zn2+ or Mn2+ to establish in vitro binding of AdcR to its target sequence and the ability of AdcR to control the genes codifying the ABC-transporter components SsuiDRAFT 0103 and SsuiDRAFT 1237, involved in zinc and/or manganese uptake, were demonstrated.Besides, the S. suis fur gene, which encodes a predicted regulator of Fe2+ uptake, was cloned and its protein product was overexpressed in Escherichia coli. Electrophoretic mobility shift assays with crude extract of this E. coli strain showed that S. suis Fur protein controls the feoAB genes, involved in ferric uptake. In addition, both adcR and fur genes were deleted in a virulent S. suis strain in order to charecterize these regulons. Several cation-uptake transporters appeared desrepressed in the knockout strains when gene expression was compared with wild-type strain through real-time RT-PCR analyses. Accordingly, EMSA results showed that these regulators specifically bind to the promoter of these genes. Moreover, the absence of adcR and/or fur genes in pathogenic streptococci showed, for the first time, an important attenuation of its virulence in mice.Finally, immunogenic and protective analysis were carried out with the products of three genes encoding putative divalent-cation-binding lipoproteins of S. suis (SsuiDRAFT 0103, SsuiDRAFT 0174, and SsuiDRAFT 1237), being all of them immunogenic although only one (SsuiDRAFT 0103) induces a significant protective response against a virulent S. suis strain in mice. Moreover, the overexpressed cell wall-associated proteins Ssu0309 and Ssu1103 of the adcR mutant, were identified by mass spectrometry as putative virulence factors belonging to the Pht (Pneumococcal histidine triad) family. Likewise, protective abilities of mutant strains were analyzed showing that although mutant cells are not effective to confer protection in mice, the combination of adcR- and fur-regulated cell wall-associated proteins confers a significant protection against S. suis 89/1591 challenge to mice vaccinated with them.