Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-23Bitstream added on 2014-06-13T18:30:24Z : No. of bitstreams: 1 tansini_a_me_arafcf.pdf: 1446439 bytes, checksum: 2d298f3950fa8afa956b4ee972cd76f4 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A infecção por Y. pseudotuberculosis é a causa de doenças intestinais e extraintestinais. A resolução da infecção está relacionada com a ativação de células Th1. Macrófagos e células dendríticas são capazes de orientar a resposta imune adaptativa através da produção de citocinas e apresentação de antígenos às células T. Estas células metabolizam L-arginina por duas vias, utilizando as enzimas iNOS ou arginase. O metabolismo de L-arginina é um importante parâmetro para discriminar o estado de ativação destas células. O objetivo deste estudo foi verificar a influência da infecção por Y. pseudotuberculosis sobre o comportamento de macrófagos e células dendríticas de camundongos resistentes (C57BL/6) e suscetíveis (BALB/c). Macrófagos peritoneais e células dendríticas esplênicas foram obtidos em 12 horas, 1º, 3º e 5º dias pós-infecção, cultivados, e foi determinada a produção de NO, atividade da arginase, produção de citocinas e capacidade imunoestimulatória destas células. Durante a infecção, macrófagos e células dendríticas de camundongos C57BL/6 infectados produziram quantidade maiores de NO, IL-12 e TNF- , enquanto as células de camundongos BALB/c infectados apresentaram maior atividade da arginase e produção de IL-10. A infecção provocou uma diminuição na capacidade de estimulação de macrófagos e células dendríticas, com menor proliferação de células T nos camundongos BALB/c. Estes resultados sugerem que os mecanismos responsáveis pela resistência e suscetibilidade à infecção podem estar relacionados com diferenças no estado de ativação de macrófagos e células dendríticas. / Y. pseudotuberculosis infection is the cause of intestinal or extraintestinal diseases. The resolution of infection is connected with activation of Th1 cells. Macrophages and dendritic cells are able to orient the adaptive immune response through the production of cytokines and antigen presentation to T-cells. These cells metabolize L-arginine by two pathways, using the iNOS or arginase enzymes. L-arginine metabolism is an important parameter to discriminate the activate state of these cells. The objective of this study was to verify the influence of Y. pseudotuberculosis infection on the behavior of macrophages and dendritic cells from susceptible (BALB/c) and resistant (C57BL/6) mice. Peritoneal macrophages and splenic dendritic cells were obtained on the 12 h, 1st, 3rd, 5th day post-infection, cultured, and the NO production, arginase activity, cytokines production and immunostimulatory capacity of these cells was determined. During the infection, macrophages and dendritic cells from infected C57BL/6 mice produced higher amounts of NO, IL-12 and TNF- , while the cells from infected BALB/c mice presented higher arginase activity and IL-10 production. The infection leads to a decrease in the immunostimulatory capacity of macrophages and dendritic cells, with T-cell proliferation smaller in the BALB/c mice. These results suggest that mechanisms responsible for the resistance and susceptibility to infection may be connect with differences in the activation state of macrophages and dendritic cells.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-19Bitstream added on 2014-06-13T19:43:15Z : No. of bitstreams: 1 tansini_a_dr_arafcf.pdf: 666076 bytes, checksum: 4a336ba4a2f0d99a602646cc539929be (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A infecção por Y. pseudotuberculosis é uma causa de doenças intestinais e extraintestinais. A resolução da infecção está relacionada à ativação de células Th1, entretanto, pouco se conhece sobre a influência de outras subpopulações de linfócitos T, como Th17 e Treg, na regulação dessa infecção. Células dendríticas são capazes de orientar a resposta imune adaptativa através da produção de citocinas e apresentação de antígenos às células T, tornando essas células essenciais na ativação e diferenciação de linfócitos T. Desse modo, o presente trabalho avaliou o papel de distintas subpopulações de linfócitos T e a influência de células dendríticas no desenvolvimento da resposta imune contra a infecção por Y. pseudotuberculosis. Para tanto, foram avaliadas as subpopulações de linfócitos T CD4+, CD8+ e Foxp3+, presentes durante a infecção por Y. pseudotuberculosis e amostras bacterianas mutantes para fatores de virulência Yops, bem como a expressão de citocinas intracelulares (IL-2, IL-4, IL-10, IL-17, IFN-γ, TNF-α e TGF-β) por estas células. O papel de linfócitos Treg e Th17 no controle da bactéria foi analisado por meio de ensaio de depleção de células CD25+ e neutralização de IL-17. Além disso, a influência de células dendríticas na modulação da resposta imune contra Y. pseudotuberculosis foi estudada através da determinação da produção de citocinas (IL-6, IL-12, IL-10, IL-23, TNF-α e TGF-β) e co-cultivo com linfócitos T obtidos de animais imunizados com antígenos de Y. pseudotuberculosis. Os resultados mostraram redução na produção de citocinas pró-inflamatórias por células dendríticas infectadas com a amostra bacteriana portadora do plasmídeo de virulência, em ambas as linhagens de camundongos estudadas... / Y. pseudotuberculosis infection is a cause of intestinal and extraintestinal diseases. Infection resolution is related to the activation of Th1 cells, however, little is known about the influence of other T cells subsets, like Th17 and Treg, in the control of this infection. Dendritic cells are capable of directing the adaptive immune response by producing cytokines and presenting antigens to T cells, making them essential to T lymphocytes activation and differentiation. Thus, this study evaluated the role of different T lymphocytes subsets and the influence of dendritic cells on the development of the immune response against Y. pseudotuberculosis infection. Here, we evaluated the T cells subsets CD4+, CD8+ and Foxp3+, present during Y. pseudotuberculosis infection and mutant samples bacterial virulence factors, and also the intracellular expression of cytokines (IL-2, IL-4, IL-10, IL-17, IFN-γ, TNF-α and TGF-β) by these cells. The role of Th17 and Treg cells in controlling the bacteria was analyzed by tests of depleted CD25+ cells and IL-17 neutralization. Furthermore, the influence of dendritic cells in modulating the immune response against Y. pseudotuberculosis was studied by determining the cytokine production (IL-6, IL-12, IL-10, IL-23, TNF-α and TGF-β) and co-culture with lymphocytes from animals immunized with Y. pseudotuberculosis antigens. The results showed a reduction in proinflammatory cytokines production by dendritic cells infected with bacteria carrying the bacterial virulence plasmid, in both mice strains studied... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-20Bitstream added on 2014-06-13T21:04:28Z : No. of bitstreams: 1 ramos_op_dr_arafcf.pdf: 948525 bytes, checksum: 0581866624e7c3f57ffffca838856184 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Yersinia pseudotuberculosis e Y. enterocolitica são patógenos que causam desordens gastrintestinais. Estudos utilizando infecção in vitro demonstraram que Y. enterocolitica pode ter como alvo as células dendríticas (DCs), afetando várias de suas funções, incluindo sua maturação e produção de citocinas, e, conseqüentemente, contribuindo para a diminuição da ativação de células T CD4+. O objetivo deste estudo foi investigar o papel das células dendríticas das placas de Peyer (PP) na determinação do padrão de resposta imune, Th1 e Th2, durante a infecção por via intragástrica de camundongos suscetíveis (BALB/c) e resistentes (C57BL/6) com a amostra virulenta de Y. pseudotuberculosis (YpIII pIB1 – Yp+) ou seu par isogênico, curado do plasmídeo de virulência (YpIII – Yp-). As DCs das PP foram obtidas no 1°, 3° e 5° dia pós-infecção, quantificadas e analisadas quanto às suas subpopulações, expressões de moléculas de superfície e capacidade imunoestimulatória por citometria de fluxo, e quanto à secreção de citocinas (IL-4, IL-10, IL-12 e TNF-α) por ELISA. Os linfócitos das PP também foram obtidos no mesmo período e tiveram suas sub-populações e o padrão de citocinas intracelulares Th1/Th2 (IL-2, IL-4, IL-10 e IFN-γ) analisado por citometria de fluxo. A infecção por Yp+ reduziu o número de DCs no 1° dia pós-infecção e aumentou, no período inicial, a expressão de B7.1 e B7.2 nos camundongos BALB/c. Nos camundongos C57BL/6 reduziu o número de DCs durante todo o período analisado, aumentou a expressão de B7.1 e B7.2 no período inicial e a expressão de ICAM-1. A infecção por ambas as amostras provocou redução da sub-população CD8α+ e da expressão de MHC II nas duas linhagens de animais, aumentou a sub-população CD11b+ nos animais suscetíveis e diminuiu nos animais resistentes. Os animais estudados não apresentaram... / Yersinia pseudotuberculosis and Y. enterocolitica are pathogens that cause gastrointestinal disorders. Studies using in vitro infection demonstrated that Y. enterocolitica can have as a target dendritic cells (DCs), affecting several of its functions, including their maturation and production of cytokines, and, consequently, contributing to the diminished activation of the T CD4+ cells. The aim of this study was to investigate the role of dendritic cell from Peyer’s patches (PP) in determining of immune response pattern, Th1 and Th2, during infection by the intragastric route in susceptible (BALB/c) and resistant (C57BL/6) mice with a virulent sample of Yersinia pseudotuberculosis (YpIII pIB1 – Yp+) or its isogenic pair, cured of the virulence plasmid (YpIII – Yp-). The PP DCs were obtained on the 1st, 3rd and 5th days postinfection, quantified and analyzed as far as their subpopulations, expressions of surface molecules and immunostimulatory capacity by flow cytometry, and the cytokines secretion (IL-4, IL-10, IL-12 and TNF-α) by ELISA. The PP lymphocytes were also obtained in the same period, and had their subpopulations and the pattern of intracellular Th1/Th2 cytokines (IL-2, IL-4, IL-10 and IFN-γ) analysed by flow cytometry. The infection by Yp+ reduced the number of DCs on the 1st day post-infection and increased, in the initial period, the expression of B7.1 and B7.2 in BALB/c. In C57BL/6 mice reduced the number of DCs throughout the study period, increased the expression of B7.1 and B7.2 in the initial period and the expression of ICAM-1. The infection by both samples reduced CD8α+ subpopulation and expression of MHC II in both animals, increased CD11b+ sub-population in susceptible animals and reduced the same sub-population in resistant animals. The studied animals did not present important differences as far as secretion of cytokines by the DCs of PP and both... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Beatriz Maria Machado de Medeiros / Banca: Alexandrina Sartori / Banca: Cleni Mara Marchocchi Machado / Banca: Leonilda Maria Barbosa dos Santos / Banca: Phileno Pinge Filho / Resumo: As três espécies patogênicas do gênero Yersinia, Y. pestis, Y. enterocolitica e Y. pseudotuberculosis, compartilham um tropismo pelos tecidos linfóides e um plasmídeo de 70-kb que é essencial para a virulência. O plasmídeo codifica um sistema de secreção do tipo III e proteínas efetoras chamadas Yops (Yersinia outer proteins). Este sistema de secreção é responsável por translocar as Yops para dentro das células do hospedeiro, onde elas interagem com alvos específicos e alteram as funções destas células. As Yops são capazes de modular a resposta imune do hospedeiro, permitindo à bactéria se replicar extracelularmente nos tecidos e órgãos linfóides. Embora haja muita informação sobre os mecanismos usados pela Yersinia para evadir do sistema imune inato de defesa, pouco se sabe sobre como ela afeta a resposta imune adaptativa in vivo. O objetivo deste trabalho foi analisar a influência das Yops E, H e M, translocadas pela Y. pseudotuberculosis, na colonização e persistência da bactéria no baço e fígado dos animais infectados, nas quantidades de LT-CD4 e LT-CD8 durante a infecção e na produção das principais citocinas Th1 e Th2 por estas subpopulações de linfócitos. Além disso, foi verificado o papel destas Yops sobre a ativação do fator nuclear κB (NF-κB) e sobre a atividade citotóxica dos LT-CD8. Para isso, camundongos BALB/c fêmeas foram infectados intravenosamente com a amostra selvagem de Y. pseudotuberculosis (WT), ou com amostras mutantes incapazes de secretar as Yops E, H e M (YopE-, YopH- e YopM-), ou ainda com a amostra curada do plasmídeo de virulência (YpIII). No 5°, 7°, 14° e 21° dia pós-infecção (pi), os animais foram sacrificados e as células esplênicas foram obtidas de camundongos infectados e de camundongos não infectados (grupo controle). Os níveis de colonização no baço e no fígado foram determinados por... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The three pathogenic species of the genus Yersinia, Y. pestis, Y. enterocolitica and Y. pseudotuberculosis, share a tropism for lymphoid tissues and a 70-kb plasmid essential for virulence. The plasmid encodes a type III secretion system and effector proteins called Yops (Yersinia outer proteins). This secretion system is responsible for translocating the Yops into the host cells, where they interact with specific host targets and alter the functions of these cells. Yops are able to modulate the host immune defenses allowing the bacteria to replicate extracellularly in lymphoid tissues and organs. Although there is ample information on the mechanisms used by Yersinia to evade the innate immune system, very little is known about how it affects the adaptive immune response in vivo. The aim of this research was to analyze the influence of translocated Yops E, H and M of Y. pseudotuberculosis on the colonization and persistence of the bacterium in the spleen and liver of infected animals, on the quantities of CD4 and CD8 T cells during the infection and on the production of the main Th1 and Th2 cytokines by these lymphocyte subpopulations. In addition, it was verified the role of these same Yops on the activation of nuclear factor κB (NF- κB) and on the CD8 T cells cytotoxic activity. To this end, female BALB/c mice were infected intravenously with the wild type Y. pseudotuberculosis (WT), or with the mutant strains unable to secrete the Yops E, H and M (YopE-, YopH- and YopM-) or with the plasmid-cured strain (YpIII). On the 5th, 7th, 14th and 21st days post-infection (pi), the animals were sacrificed and the spleen cells were isolated from infected and uninfected mice (control group). The levels of colonization in the spleen and liver were determined by counting the number of colony-forming units. Both the phenotypic analysis of lymphocytes and the intracellular... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: Yersinia enterocolitica é um enteropatógeno que pode levar ao desenvolvimento de artrite reativa. Um dos mecanismos imunomoduladores usados pelos patógenos artritogênicos é a ativação policlonal de linfócitos. O objetivo deste estudo foi verificar se ocorre ativação policlonal de linfócitos B e comparar o padrão isotípico de imunoglobulinas produzidas durante a infecção com Y. enterocolitica O:8 em linhagens de camundongos suscetíveis (BALB/c) e resistentes (C57BL/6), bem como analisar o padrão de secreção de citocinas pró-inflamatórias e regulatórias pelas populações de células T CD4+ e CD8+. / Abstract: Yersinia enterocolitica is an enteropathogen that can lead to the development of reactive arthritis. One of the immunomodulating mechanisms used by arthritogenic pathogens is the polyclonal activation of lymphocytes. The objective of this study was to verify if the polyclonal activation of B-lymphocytes occur and to compare the different immunoglobulin (Ig) isotypes produced during the infection with Y. enterocolitica O:8 in susceptible (BALB/c) and resistant (C57BL/6) mice strains. We also analyzed the production of pro-inflammatory and regulatory cytokines in T CD4+ and T CD8+ lymphocytes populations. / Orientador: Beatriz Maria Machado de Medeiros / Coorientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Maria Regina D'Império Lima / Banca: Phileno Pinge / Banca: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Deise Pasetto Falcão / Doutor

Orientador: Beatriz Maria Machado de Medeiros / Banca: Angela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Resumo: A infecção por Y. pseudotuberculosis é a causa de doenças intestinais e extraintestinais. A resolução da infecção está relacionada com a ativação de células Th1. Macrófagos e células dendríticas são capazes de orientar a resposta imune adaptativa através da produção de citocinas e apresentação de antígenos às células T. Estas células metabolizam L-arginina por duas vias, utilizando as enzimas iNOS ou arginase. O metabolismo de L-arginina é um importante parâmetro para discriminar o estado de ativação destas células. O objetivo deste estudo foi verificar a influência da infecção por Y. pseudotuberculosis sobre o comportamento de macrófagos e células dendríticas de camundongos resistentes (C57BL/6) e suscetíveis (BALB/c). Macrófagos peritoneais e células dendríticas esplênicas foram obtidos em 12 horas, 1º, 3º e 5º dias pós-infecção, cultivados, e foi determinada a produção de NO, atividade da arginase, produção de citocinas e capacidade imunoestimulatória destas células. Durante a infecção, macrófagos e células dendríticas de camundongos C57BL/6 infectados produziram quantidade maiores de NO, IL-12 e TNF- , enquanto as células de camundongos BALB/c infectados apresentaram maior atividade da arginase e produção de IL-10. A infecção provocou uma diminuição na capacidade de estimulação de macrófagos e células dendríticas, com menor proliferação de células T nos camundongos BALB/c. Estes resultados sugerem que os mecanismos responsáveis pela resistência e suscetibilidade à infecção podem estar relacionados com diferenças no estado de ativação de macrófagos e células dendríticas. / Abstract: Y. pseudotuberculosis infection is the cause of intestinal or extraintestinal diseases. The resolution of infection is connected with activation of Th1 cells. Macrophages and dendritic cells are able to orient the adaptive immune response through the production of cytokines and antigen presentation to T-cells. These cells metabolize L-arginine by two pathways, using the iNOS or arginase enzymes. L-arginine metabolism is an important parameter to discriminate the activate state of these cells. The objective of this study was to verify the influence of Y. pseudotuberculosis infection on the behavior of macrophages and dendritic cells from susceptible (BALB/c) and resistant (C57BL/6) mice. Peritoneal macrophages and splenic dendritic cells were obtained on the 12 h, 1st, 3rd, 5th day post-infection, cultured, and the NO production, arginase activity, cytokines production and immunostimulatory capacity of these cells was determined. During the infection, macrophages and dendritic cells from infected C57BL/6 mice produced higher amounts of NO, IL-12 and TNF- , while the cells from infected BALB/c mice presented higher arginase activity and IL-10 production. The infection leads to a decrease in the immunostimulatory capacity of macrophages and dendritic cells, with T-cell proliferation smaller in the BALB/c mice. These results suggest that mechanisms responsible for the resistance and susceptibility to infection may be connect with differences in the activation state of macrophages and dendritic cells. / Mestre

Orientador: Beatriz Maria Machado de Medeiros / Banca: Dagmar Ruth Stach Machado / Banca: Alexandrina Sartori / Resumo: As proteínas Yops. formam uma família de proteínas secretadas por Yersinia spp que incluem efetores intracelulares (seis efetores foram identificados: YopE, YopH, YopM, YpkA/YopO, YopJ/YopP e YopT) e vários componentes do aparato de secreção-translocação que são liberado pela bactéria sob quelação de Ca2+. As .Yops. efetoras têm sido relacionadas a uma série de propriedades de virulência, incluindo resistência à fagocitose, citotoxicidade e desfosforilação de proteínas do hospedeiro. Porém, a interação das .Yops. de Yersinia com a resposta imune específica do hospedeiro não está bem esclarecida. O objetivo deste estudo foi investigar o papel imunomodulador das "Yops" secretadas por amostras de Yersinia pseudotuberculosis sobre a produção de anticorpos e autoanticorpos por linfócitos B. Para tanto camundongos foram infectados com uma amostra selvagem de Y. pseudotuberculosis (YpIII) e com amostras mutantes, defectivas na secreção de determinadas .Yops. efetoras (YopH, YopE, YopM, YpkA e YopJ). Foram obtidas células esplênicas destes animais, e as células secretoras de imunoglobulinas inespecíficas e específicas (anti-Yersinia e anti-.Yops.) foram quantificadas através do teste ELISPOT. A presença de anticorpos específicos anti-Yersinia e anti-.Yops. no soro dos animais infectados foi analisada através do teste ELISA. A presença de auto-anticorpos séricos foi analisada através do teste DOT-BLOT. Não se observou nenhuma diferença entre o número de células secretoras de imunoglobulinas (Igs) inespecíficas dos animais inoculados com a amostra selvagem, YpIIIpIB102 (wt), em relação aos controles. Já a amostra YpIII pIB522, embora defectiva na secreção de YopE, provocou uma redução dos linfócitos B secretores de IgG2a, IgM e IgA. A única ativação observada ocorreu para o isotipo IgG2a (aumento de 1,7 vezes)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The "Yops" proteins form a protein family secreted by Yersinia spp that includes intracellular effectors (six effectors had been identified: YopE , YopH, YopM, YpkA/YopO, YopJ/YopP and YopT) and some components of the secretion-translocation apparatus that are released by the bacteria under Ca2+ quelation. The "Yops" effectors have been related to a series of virulence properties, including resistance to phagocytosis, citotoxicity and desfosforilation of host proteins. However, the interaction of the Yersinia "Yops" with the host specific immune response is not well defined. The objective of this study was to investigate the immunomodulatory role of the "Yops" secreted by strains of Yersinia pseudotuberculosis on the production of antibodies and autoantibodies by splenic B lymphocytes. To this end, mice were infected with wild-type Y. pseudotuberculosis (YpIII) or with mutant strains, unable to secrete specific "Yops" (YopH, YopE, YopM, YpkA and YopJ). Spleen cells were obtained, and the cells secreting nonspecific and specific immunoglobulins (anti-Yersinia and anti-"Yops") was quantified by the ELISPOT technique. The presence of anti-Yersinia and anti- .Yops. specific antibodies in infected mice serum was investigated by ELISA and the presence of autoantibodies by DOT-BLOT assay. It was not observed neither difference between the number of nonspecific Igs-secreting cells of the animals infected with YpIIIpIB102 (wt) in relation to the controls. The strain YpIII pIB522, although defective in YopE secretion, provoked a reduction in the B lymphocytes secreting IgG2a, IgM and IgA. The unique activation observed was that of IgG2a isotype (an increase of 1.7-fold) on the 7th day post infection. The YopH- strain, YpIII pIB29, provoked an increase in the number of IgG1-, IgG2a- and IgG3- secreting cells (between 1.4 to 2.4-fold), on the 7th and 14th days post infection... (Complete abstract, click electronic address below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-19Bitstream added on 2014-06-13T19:18:55Z : No. of bitstreams: 1 maia_jml_me_arafcf.pdf: 491989 bytes, checksum: 76c75c0de1431ea6c8ce3ff67f4446d3 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / As proteínas Yops. formam uma família de proteínas secretadas por Yersinia spp que incluem efetores intracelulares (seis efetores foram identificados: YopE, YopH, YopM, YpkA/YopO, YopJ/YopP e YopT) e vários componentes do aparato de secreção-translocação que são liberado pela bactéria sob quelação de Ca2+. As .Yops. efetoras têm sido relacionadas a uma série de propriedades de virulência, incluindo resistência à fagocitose, citotoxicidade e desfosforilação de proteínas do hospedeiro. Porém, a interação das .Yops. de Yersinia com a resposta imune específica do hospedeiro não está bem esclarecida. O objetivo deste estudo foi investigar o papel imunomodulador das Yops secretadas por amostras de Yersinia pseudotuberculosis sobre a produção de anticorpos e autoanticorpos por linfócitos B. Para tanto camundongos foram infectados com uma amostra selvagem de Y. pseudotuberculosis (YpIII) e com amostras mutantes, defectivas na secreção de determinadas .Yops. efetoras (YopH, YopE, YopM, YpkA e YopJ). Foram obtidas células esplênicas destes animais, e as células secretoras de imunoglobulinas inespecíficas e específicas (anti-Yersinia e anti-.Yops.) foram quantificadas através do teste ELISPOT. A presença de anticorpos específicos anti-Yersinia e anti-.Yops. no soro dos animais infectados foi analisada através do teste ELISA. A presença de auto-anticorpos séricos foi analisada através do teste DOT-BLOT. Não se observou nenhuma diferença entre o número de células secretoras de imunoglobulinas (Igs) inespecíficas dos animais inoculados com a amostra selvagem, YpIIIpIB102 (wt), em relação aos controles. Já a amostra YpIII pIB522, embora defectiva na secreção de YopE, provocou uma redução dos linfócitos B secretores de IgG2a, IgM e IgA. A única ativação observada ocorreu para o isotipo IgG2a (aumento de 1,7 vezes)... / The Yops proteins form a protein family secreted by Yersinia spp that includes intracellular effectors (six effectors had been identified: YopE , YopH, YopM, YpkA/YopO, YopJ/YopP and YopT) and some components of the secretion-translocation apparatus that are released by the bacteria under Ca2+ quelation. The Yops effectors have been related to a series of virulence properties, including resistance to phagocytosis, citotoxicity and desfosforilation of host proteins. However, the interaction of the Yersinia Yops with the host specific immune response is not well defined. The objective of this study was to investigate the immunomodulatory role of the Yops secreted by strains of Yersinia pseudotuberculosis on the production of antibodies and autoantibodies by splenic B lymphocytes. To this end, mice were infected with wild-type Y. pseudotuberculosis (YpIII) or with mutant strains, unable to secrete specific Yops (YopH, YopE, YopM, YpkA and YopJ). Spleen cells were obtained, and the cells secreting nonspecific and specific immunoglobulins (anti-Yersinia and anti-Yops) was quantified by the ELISPOT technique. The presence of anti-Yersinia and anti- .Yops. specific antibodies in infected mice serum was investigated by ELISA and the presence of autoantibodies by DOT-BLOT assay. It was not observed neither difference between the number of nonspecific Igs-secreting cells of the animals infected with YpIIIpIB102 (wt) in relation to the controls. The strain YpIII pIB522, although defective in YopE secretion, provoked a reduction in the B lymphocytes secreting IgG2a, IgM and IgA. The unique activation observed was that of IgG2a isotype (an increase of 1.7-fold) on the 7th day post infection. The YopH- strain, YpIII pIB29, provoked an increase in the number of IgG1-, IgG2a- and IgG3- secreting cells (between 1.4 to 2.4-fold), on the 7th and 14th days post infection... (Complete abstract, click electronic address below)

Campylobacter (C.) spp. und Yersinia (Y.) enterocolitica sind in Deutschland nach den Salmonellen die häufigsten Erreger der Enteritis infectiosa. Das Schwein wird als Reservoirtier für C. coli und Y. enterocolitica Bioserovar 4/O:3 angesehen. Da diese Infektionen beim Schwein zumeist klinisch inapparent verlaufen, sind sie bei der Schlachttier- und Fleischuntersuchung nicht feststellbar. Die Erreger können somit unerkannt in die Lebensmittelkette gelangen. In dieser Arbeit sollte ein Beitrag zur Epidemiologie dieser Erreger geleistet werden. Dazu wurden Prävalenzdaten in Betrieben und zum Schlachtzeitpunkt erhoben, Eintragungsquellen gesucht und genotypische Vergleiche durchgeführt. Im Zeitraum von Mai 2002 bis März 2004 wurden in vier verschiedenen Betrieben Verlaufsuntersuchungen zum Vorkommen dieser beiden Erreger durchgeführt. Dafür wurden Schweine von ihrer Geburt bis zur ihrer Schlachtung verfolgt. In drei dieser vier Betriebe wurden die Schweine konventionell, in einem ökologisch gehalten. Für die Untersuchungen wurden jeweils 100 Ferkel drei Tage nach ihrer Geburt mit einer Ohrmarke gekennzeichnet. Zu diesem Zeitpunkt erfolgte eine erste Kotprobenentnahme mittels eines sterilen Tupfers. Die Tiere mit den Marken 1-40 wurden auf Campylobacter spp. und Y. enterocolitica, die mit den Nummern 41-100 nur auf Y. enterocolitica untersucht. Eine zweite Untersuchung der Ferkel erfolgte kurz vor dem Absetzen. An diesen beiden Terminen wurden auch die Muttersauen beprobt. Nur in dem Ökobetrieb war eine Sauenuntersuchung aufgrund der Haltungsform nicht möglich. Weitere Untersuchungen wurden kurz vor dem Ausstallen aus dem Läuferstall, im Maststall und auf dem Schlachthof durchgeführt. Für den Nachweis von Y. enterocolitica wurden die Proben in ITC angereichert und auf CIN-Agar ausgestrichen. Bolton-Bouillon und mCCD-Agar wurden für die Anzucht der Campylobacter-Keime genutzt. Wie zu erwarten war, konnten hohe Prävalenzen (bis zu 100%) von C. coli nachgewiesen werden. Vor allem kurz vor dem Absetzen wurde der Erreger häufig isoliert. Aber es gab auch einen Betrieb, wo der Nachweis nur im Maststall und nur bei sehr wenigen Tieren gelang. Nicht nur in den Betrieben, sondern auch auf dem Schlachthof waren hohe Prävalenzen festzustellen. Vor allem aus dem Kot und aus den Tonsillen konnte der Erreger häufig isoliert werden. Auch die Schlachttierkörperoberfläche war häufig stark kontaminiert. Nach der Kühlung jedoch konnte der Erreger nur bei 3 von 443 (0,7%) untersuchten Tieren nachgewiesen werden. Zu bemerken ist, dass es sich hierbei nicht um C.coli, sondern um C. jejuni handelte. Auch aus einigen Umgebungsproben der Betriebe konnte C. coli isoliert werden. Die Genotypen dieser Isolate wurden mit den Genotypen zeitgleich isolierter Schweinestämme verglichen. Als Methode hierfür wurde die AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) genutzt. Dabei konnte eine enge Verwandtschaft von Schweine- und Umgebungsproben beobachtet werden. In zwei der vier Betriebe konnte Y. enterocolitica aus Kotproben isoliert werden. Der Nachweis gelang aber nur im Maststall. Hier konnten im Kot sehr hohe Prävalenzen (bis zu 65,4%) nachgewiesen werden. Sauen, Ferkel und Läufer wurden immer als negativ getestet. Zum Schlachtzeitpunkt gelang die Isolierung sehr häufig aus den Tonsillen, im Kot war der Erreger zu diesem Zeitpunkt kaum noch nachzuweisen. Alle Isolate gehörten dem humanpathogenen Bioserovar 4/O:3 an, nur eines wurde als 3/O:9 identifiziert. Aus den 458 untersuchten Umgebungsproben konnte Y. enterocolitica nicht isoliert werden. Des Weiteren wurde mittels einer PCR untersucht, ob die isolierten Yersinien ein Virulenzplasmid beherbergen. Dieses ist notwendig, um eine volle Pathogenität auszubilden. Von insgesamt 263 isolierten Stämmen konnten 236 Stämme (89,7%) als plasmidtragend identifiziert werden. Auffallend war hierbei, dass 110 von 111 Stämmen (99,1%), die im Maststall isoliert wurden, das Plasmid besaßen. Im Gegensatz dazu konnte bei den Schlachthofisolaten das Plasmid nur bei 126 von 152 Stämmen (82,9%) nachgewiesen werden. Einige Isolate eines Betriebes wurden mit Hilfe der PFGE (Pulsed Field Gel Electrophoresis) unter Nutzung des Restriktionsenzyms NotI genotypisiert. Wie in der Literatur beschrieben, war innerhalb eines Bestandes auch nur ein Genotyp zu finden. Auch die Isolate aus Kot und Tonsillen waren klonal. Ebenso waren plasmidtragende nicht von plasmidlosen Stämmen zu unterscheiden. Auch wenn fast alle Herden stark mit Campylobacter spp. belastet sind, scheint aus Sicht des Verbraucherschutzes eine Bekämpfung auf Bestandsebene nicht notwendig zu sein, da die Kühlung des Schlachtkörpers den sauerstoff- und austrocknungsempfindlichen Erreger offensichtlich sehr effektiv zurückdrängt. Anders verhält es sich bei den Yersinien. Obwohl im Schweinefleisch nur relativ selten der Erreger nachweisbar ist, so sind Schlachtnebenprodukte oft stark belastet. Vor allem durch Kreuzkontaminationen im Küchenbereich der privaten Haushalte geht vom Fleisch und von den Nebenprodukten eine nicht zu unterschätzende Gefahr aus. Da über die Epidemoiologie des Erregers auf Bestandsebene noch relativ wenig bekannt ist, kann er momentan nur auf Schlachthofebene durch Einhaltung einer strikten Hygiene in seiner Ausbreitung begrenzt werden. Auf Bestandsebene scheint die Einführung von Monitoringprogrammen sinnvoll, um stark belastete Herden zu erkennen, diese möglichst am Schluss zu schlachten und somit das Lebensmittel Schweinefleisch sicherer zu machen.

Yersinia pestis, a gram-negative bacterium, is the causative agent of plague. Y. pestis is a zoonotic pathogen that occasionally infects humans, and is endemic in the western United States. History gives evidence of three main plague pandemics. The first, originating in Egypt in 541AD, is known as the Justinian plague. The second, perhaps most well-known, is thought to have emerged in 1347AD in China, and is called the Black Death. The third, and current plague pandemic, also emerged in China in 1855. In 1899, Y. pestis was established in California, and the plague in other parts of America evolved from this initial introduction. In order to understand evolutionary patterns, we sequenced and analyzed 22 novel Y. pestis genomes from New Mexico. Performing a multiple genome alignment was the first step of our computational pipeline, after which evolutionary patterns were elucidated. Results from this study include predictions of four genes under negative selection pressure. Three of these genes were located on the Y. pestis chromosome, the fourth on the pCD1 virulence plasmid. This study also revealed 42 sites displaying statistically significant skew in the observed residue distribution when comparing sequences based on the year of isolation, and nine significant sites when comparing sequences based on the host species. Phylogenetic tree reconstruction showed a monophyletic pattern for sequences collected in the United States. Taken together, these analyses shed light on the evolutionary history of this pathogen in the southwestern US over a focused time range.