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Avaliação da proteção induzida pela imunização com leveduras radioatenuadas do Paracoccidioides brasiliensis em modelo animal / Evaluation of the protection induced by the immunization with radioattenuated yeast cell of Paracoccidioides brasiliensis in animal modelEstefânia Mara do Nascimento Martins 06 July 2007 (has links)
Paracoccidioides brasiliensis é o agente da paracoccidioidomicose (PCM), uma doença sistêmica crônica prevalente na América Latina. Até o momento, não existe uma vacina eficaz para esta enfermidade. O potencial da radiação gama para a atenuação de patógenos e desenvolvimento de uma vacina foi explorado neste trabalho. Em nosso laboratório
desenvolvemos leveduras de P. brasiliensis atenuadas por irradiação gama. Estas perderam a capacidade de reprodução, mas mantiveram a sua morfologia, a síntese e secreção de
proteínas, o metabolismo oxidativo e o seu perfil antigênico. O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade protetora induzida pela imunização com as leveduras radioatenuadas
em modelo animal. A atenuação da virulência das leveduras radioatenuadas foi avaliada em camundongos BALB/c e Nude-Nude. O efeito protetor foi avaliado em grupos de
camundongos BALB/c submetidos a uma ou duas imunizações. Cada grupo foi dividido em três subgrupos, que foram desafiados 30, 45 e 60 dias após a imunização. Os camundongos foram sacrificados 30 e 90 dias após o desafio. Os órgãos removidos foram usados para recuperação de unidades formadoras de colônias (UFCs), análise histológica e
determinação de citocinas. Os soros foram coletados semanalmente para avaliar os títulos de IgG e o padrão de IgG1 e IgG2a produzido no curso da infecção. Para avaliar o tipo de resposta imune desencadeada, as citocinas IFN-g, TNF-a, IL-10 e IL-5 foram determinadas por PCR em tempo real. As leveduras radioatenuadas perderam a sua virulência, pois não foram capazes de provocar infecção em camundongos BALB/c e Nu/Nu. Nenhuma UFC foi recuperada nem foram observadas alterações histopatológicas nos camundongos infectados com o fungo radioatenuado. Os camundongos infectados com P. brasiliensis não
irradiado mostraram altos níveis de produção do anticorpo IgG, enquanto a infecção com as leveduras radioatenuadas não estimulou alterações significativas destes níveis. Os
camundongos infectados com a levedura radioatenuada apresentaram um aumento na produção de IFN-g e TNF-a, indicando uma estimulação da imunidade celular. O ensaio de
proteção realizado com camundongos imunizados uma vez mostrou uma redução significativa na recuperação das UFCs avaliadas 30 dias após o desafio. Entretanto, foi
verificado um aumento na recuperação das UFCs dos tecidos 90 dias após o desafio.
Apesar de um grau significativo de proteção ter sido alcançado, estes resultados mostram que somente uma imunização não foi suficiente para conferir uma proteção a longo prazo, uma vez que alguns focos do fungo não foram eliminados. Uma proteção eficiente foi desenvolvida no grupo dos camundongos imunizados duas vezes. A imunização foi capaz de reduzir a infecção inicial e desencadear uma proteção a longo prazo. Uma proteção de 99,5% foi obtida nos camundongos analisados 90 dias após desafio. Neste mesmo período os níveis de IFN-g e TNF-a aumentaram significativamente, enquanto os de IL-10 e IL-5
diminuíram. Quando analisados 30 dias após o desafio os camundongos não desenvolveram um padrão totalmente polarizado de resposta Th1/Th2, mas uma tendência para um padrão Th1 foi evidente após 90 dias. Os níveis de IgG aumentaram em ambos os grupos após o desafio. Concluímos que a imunização com as leveduras radioatenuadas foi capaz de desencadear uma resposta imune protetora a longo prazo. Estas células são uma ferramenta valiosa em estudos da imunidade protetora e na pesquisa de vacina para a PCM. / Paracoccidioides brasiliensis is fungus agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a chronic systemic disease prevalent in Latin American. To date, there is no effective vaccine. The potential of gamma radiation for pathogens attenuation and vaccine development was explored in this work. In our laboratory were developed yeast cells of P. brasiliensis attenuated by gamma radiation, which lose the reproductive ability, while retaining the morphology, the synthesis and secretion of proteins, the oxidative metabolism and the expression of the antigens present in the native yeast. The aim of the present work was to evaluate the protection elicited by the immunization with this cells in animal model. The virulence attenuated was evaluated in BALB/c and Nude-Nude mice. The protector effect was evaluated in BALB/c mice groups immunized once or twice. Each group was divided in three sub groups that were challenge 30, 45 or 60 days after the immunization. The mice were sacrificed 30 and 90 days after challenge. The removed organs were used for colonyforming units (CFUs) recover, histopathological analysis and cytokine determination. The sera were collected weekly to evaluate the IgG antibody titers and the IgG1 and IgG2a
pattern in the course of infection. To evaluate the type of elicited immune response the cytokines IFN-g, TNF-a, IL-10 and IL-5 were determined by real time PCR. The radioattenuated yeast loses its virulence since fails in producing infection in BALB/c and Nude-Nude mice. No CFUs were recovered neither histological changes observed in the
mice infected with the radioattenuated cells. The mice infected with the not irradiated P. brasiliensis showed a high level of antibody production while the infection with the
radioattenuated yeast did not significantly change the antibody level. The mice infected with the radioattenuated yeast presented an increase in the IFN-g and TNF-a production and an inhibition of the IL-10 synthesis, indicating a stimulation of the cellular response. The protection assay performed with mice immunized once showed a significant reduction in the CFUs recovery evaluated 30 days after the challenge. However, when examined 90 days after the challenge the CFUs recovered from organs increased. Even so a significant degree of protection has been reached these results point that only one immunization was not enough to confer a long lasting protection, since some focus of the fungi were not eliminated. An efficient protection against highly infective forms of P. brasiliensis was developed in the mice group immunized twice. The immunization was able to reduce the initial infection and elicited a long lasting protection. A 99,5 % protection was obtained in the mice analyzed 90 days post challenge. At the same time the levels of IFN-gDQG71).
increased significantly while the IL-10 and IL-5 decreased. When analyzed after 30 days, the mice had not developed a totally polarized pattern of Th1/Th2 response but, a trend to a
Th1 response was evident after 90 days. The level of IgG increased in both immunized groups after the challenge. We concluded that the immunization with the radioattenuated
yeast cells was able to elicit a long lasting protective immune response and these cells are valuable tool for protective immunity studies and vaccine research for PCM.
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Estudo químico, biológico e toxicológico de drimys angustifolia Miers e drymis brasiliensis miersGomes, Madson Ralide Fonseca January 2012 (has links)
O gênero Drimys é o de maior área de distribuição geográfica da família (Winteraceae), que compreende sete gêneros e cerca de 120 espécies. No Brasil, encontra-se desde a Bahia até o Rio Grande do Sul e ocorre em duas espécies, Drimys angustifolia Miers. e Drimys brasiliensis Miers, conhecidas popularmente como “casca-de-anta”. As folhas e cascas são usadas na medicina popular como antiescorbútico, estimulante, antiespasmódica, antidiarreica, antifebril, contra hemorragia uterina, antibacteriana, no tratamento de asma, bronquite, certas afecções do trato digestivo e, algumas vezes no tratamento do câncer e inseticidas. Ambas são caracterizadas pela presença de flavonóides e sesquiterpenoides. O objetivo deste trabalho foi o de avaliar a composição química, o potencial antioxidante, antiviral, inseticida, antitumoral, antifúngico, avaliação tóxica aguda e, também, formular e caracterizar duas nanoemulsões dos óleos voláteis das duas espécies do estudo. Por meio da hidrodestilação, foi possível realizar a extração dos óleos essenciais e determinar seus rendimentos que variaram entre 0,3 e 0,5% de folhas. A identificação dos componentes foi realizada utilizando a Cromatrografia Gasosa acoplada ao espectrofotômetro de massas (CG-EM), as quais apresentaram como componentes majoritários em todas as análises, o biciclogermacreno para a espécie Drimys angustifolia e a ciclocolorenona para a espécie Drimys brasiliensis. A formulação e caracterização da nanoemulsão foi realizada dentro dos parâmetros estabelecidos (tamanho de partícula, índice de polidispersão, pH) e através da microscopia eletrônica de transmissão foi confirmado o tamanho na escala nano. No que tange a atividade inseticida, ambas as espécies mostraram-se promissoras repelindo o cupim da espécie Cryptotermes brevis com índices de repelência negativos. Para avaliação inicial do potencial larvicida de Aedes aegypti, os óleos das duas espécies não foram eficientes. No entanto, a nanoemulsão de Drimys brasiliensis levou a 69% e 89% de mortalidade, correspondendo às concentrações de 0,5 μg/mL e 0,83 μg/mL, respectivamente. Com relação a atividade antioxidante, os óleos das duas espécies não foram capazes de reduzir o radical (2,2-difenil-1-picril-hidrazil) DPPH . Já na atividade antiviral frente ao VHS-1, as duas espécies mostraram-se promissoras inibindo a replicação viral. Na atividade antitumoral nas linhagens de glioma (U-138 MG) e de bexiga (T24), somente o óleo de Drimys brasiliensis reduziu a viabilidade celular das duas linhagens pelo ensaio do MTT, com resultados similares na contagem celular. Na análise da citometria pela incorporação da Anexina-V/Iodeto de propídio caracterizou-se indução de apoptose tardia. Na atividade antifúngica, as duas espécies foram eficazes contra o fungo oportunista Acremonium, presente em diversas infecções em transplantados e imunocomprometidos. Quanto à avaliação da toxicidade aguda, as duas espécies mostraram importantes sinais de toxicidade em ratos Wistar como ptose, tremor, redução da atividade motora, exolftamia, aumento da freqüência respiratória. Os animais tratados com espécie D. brasiliensis ainda apresentaram aumento na micção e diarréia. Desta maneira, é importante ressaltar que todos os ensaios biológicos, o estudo toxicológico, e a elaboração e caracterização das nanoemulsões dos óleos essenciais foram realizados pela primeira vez para as duas espécies vegetais, destacando a importância e ineditismo do presente trabalho. / The genus Drimys presents the largest geographical distribution of the family (Winteraceae), which comprises seven genera and about 120 species. In Brazil, is found from Bahia to Rio Grande do Sul and occurs in two species, Drimys angustifolia L. and Drimys brasiliensis Miers, popularly known as "Casca-de-anta". The leaves and barks are used in folk medicine as antiscorbutic, stimulant, antispasmodic, anti-diarrheal, antipyretic, against uterine bleeding, antibacterial, to treat asthma, bronchitis, certain disorders of the digestive tract and sometimes in the treatment of cancer and insecticides. Both are characterized by the presence of flavonoids and sesquiterpenoids. The objective of this study was to evaluate the chemical composition, the antioxidant, antiviral, insecticidal, antitumor, antifungal, acute toxicological evaluation and also to formulate and characterize two nanoemulsions of the volatile oils of two species of the study. By steam distillation was possible to perform the extraction of essential oils and to determine their yields ranging between 0.3 and 0.5% of leaves. The identification of components was performed using the Gas Cromatography coupled to mass spectrometer (GC-MS), which presented as major components in all analyzis bicyclogermacrene for the Drimys angustifolia species and ciclocolorenona for the Drimys brasiliensis. The formulation and characterization of nanoemulsion was performed within the established parameters (particle size, polydispersity, pH) and by transmission electron microscopy confirming the size at the nanoscale. Regarding the insecticidal activity, both species were promising repelling termites Cryptotermes brevis with negative index of repellency. To evaluate initial potential larvicidal Aedes aegypti, the oils of the two species were not efficient, however, of the Drimys brasiliensis nanoemulsion the larvae mortality of the 69% and 89%, corresponding to concentrations of 0.5 μg/mL and 0.83 μg/mL, respectively. With respect to antioxidant activity, the oils of the two species have not been able to reduce the (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) DPPH radical. In the antiviral activity against the HSV-1, the two species were promising inhibiting viral replication. In antitumor activity in glioma cell lines (U-138 MG) and bladder (T24), only the oil Drimys brasiliensis reduced cell viability of two strains by the MTT assay, with similar results in cell counts and flow cytometry analysis of the incorporation of Anexinn-V/Propidium Iodide characterized as late apoptosis. In the antifungal activity, the two species were effective against the opportunistic fungus Acremonium, present in various infections in transplant and immunocompromised. Regarding the evaluation of acute toxicity, the two species showed significant signs of toxicity in rats as ptosis, tremor, decreased motor activity, exolftamia, shortness of breath. Animals treated with species Drimys brasiliensis also showed an increase in urination and diarrhea. Thus, it is important that all biological assays, the toxicity study, and preparation and characterization of nanoemulsions of essential oils were first performed for the two species, highlighting the importance and originality of this work.
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Estudo do Paracoccidioides brasiliensis no município de Buriticupu, Amazônia maranhenseCALVET, Clélea de Oliveira 01 October 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010 / O objetivo deste trabalho foi o de verificar a presença do Paracoccidioides brasiliensis no município de Buriticupu, localizado na Amazônia Maranhense. Foram realizados testes intradérmicos com paracoccidioidina em 491 indivíduos, havendo 60 intradermorreações positivas ao antígeno. Observou-se não haver diferença estatística significante na amostra em relação à positividade ao teste e as variáveis sexo, hábitos sócio-culturais e nível de escolaridade, embora, descritivamente, o sexo feminino tenha sido o mais freqüente, totalizando 33 pacientes, e que positivo-reagentes possuíam hábitos que propiciavam o contato com o patógeno e, ainda, constatou-se serem os níveis de escolaridade predominantes o analfabetismo (18 testados) e o 1º grau incompleto (26 testados). Cinqüenta e um pacientes positivos aos testes intradérmicos à paracoccidoidina (85%) eram naturais do Estado do Maranhão. Ao analisarem-se os dados clínicos e laboratoriais gerais nos prontuários dos seis pacientes diagnosticados com a doença paracoccidioidomicose, constatou-se que todos eram lavradores com mais de 10 anos de residência em Buriticupu, possuindo a presença do fungo em raspado de mucosa bucal à coloração do PAS e Gomori-Groccot, com exceção de dois pacientes: um com 36 meses de tratamento e outro com 12 meses de terapêutica, e sem lesão bucal inicial ou posterior, ambos sem relatos de abandono de tratamento. Verificou-se, portanto, que a citologia esfoliativa é um método fácil e de baixo custo no auxílio do controle terapêutico dos pacientes. / The objective of this study was to verify the presence of Paracoccidioides brasiliensis in
the municipality of Buriticupu, located in the Amazon Maranhense. Intradermics tests were conducted with paracoccidioidine in 491 individuals, with 60 intradermics positive to the antigen. There was no statistically significant difference in the sample in relation to the positive test and the variables gender, socio culturals habits and level of education, although describe, the female has been the most frequent, totaling 33 patients, and that positive - reagents have habits that provide contact with the pathogen, and it was found to be the prevailing levels of schooling illiteracy (18 tested) and 1 st degree incomplete (26
tested). Fifty-one patients testing positive for intradermics to paracoccidoidine (85%) were the natural state of Maranhão. In reviewing the clinical data and laboratory records in general of the six patients diagnosed with the disease paracoccidioidomycosis, found that all were farmers with more than 10 years of residence in Buriticupu, with the presence of the fungus in the oral mucosa scraped the colouring of PAS and Gomori - Groccot, except for two patients: one with 36 months of treatment and another with 12 months of therapy, and without injury initial oral or later, both without reports of abandonment of treatment. We, therefore, that the exfoliative cytology is an easy way and low cost in aid of therapeutic control of patients.
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Inquérito com paracoccidiodina em cinco cidades do Estado do AcreFIGUEIREDO, Mediã Barbosa 30 September 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011 / A paracoccidioidomicose constitui um importante problema de saúde pública na América Latina. No Brasil, essa doença é menos freqüente nas regiões Norte e Nordeste, predominando as áreas endêmicas na região Sudeste. Apesar das condições fisiográficas da região Norte favorecerem o desenvolvimento do Paracoccidioides brasiliensis, mesmo assim, os relatos de casos são escassos. Talvez, isto deva-se ao fato da pouca consideração sobre as micoses profundas entre os diagnósticos diferenciais das condições clínicas crônicas, justificadas no fato de que a região não é considerada endêmica. Com o objetivo de descrever a prevalência da paracoccidioidomicose em cinco cidades do Estado do Acre, foi realizado estudo transversal em base populacional, por meio de inquérito com a intradermorreação à paracoccidioidina. A leitura do teste intradérmico foi realizada com 24 e 48 horas, sendo considerados reatores as pessoas com endurações de 5 ou mais milímetros de diâmetro. Foram estudadas 439 pessoas e os índices de paracoccidioidomicose-infecção na leitura de 48 horas foi de 41,2%. Os achados deste estudo indicam que o P. brasiliensis causa infecção em considerável número de pessoas na área estudada e, portanto, futuros estudos clínico-epidemiológicos e micológicos devem melhor esclarecer a história natural da micose nessa região. / Paracoccidioidomycosis constitutes an important public health problem in Latin America. In Brazil, this disease is less frequent in North and Northeast regions, predominating the endemic areas in the Southeast. Despite the physiographic conditions of the North region favoring the development of Paracoccidioides brasiliensis, even so, the case reports are scarce. Perhaps this is due to the little consideration of deep mycoses about the differential diagnosis of chronic medical conditions, justified by the fact that the region is not considered endemic. With the objective of describing the prevalence of paracoccidioidomycosis in five cities of Acre, a cross-sectional population-based study was conducted, through a survey with the paracoccidioidin intradermal. The reading of the intradermal test was performed within 24 and 48 hours, being considered reactors the people with hardened areas of 5mm or more in diameter. Four hundred thirty-nine (439) people were studied and paracoccidiodomycosis-infection in the 48-hour reading was 41.2%. The findings of this study indicate that P. brasiliensis infection causes a considerable number of people in the study area to get infected, and therefore future clinical-epidemiological and mycological studies should better clarify the natural history of mycosis in this region.
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Avaliação do teste de aglutinação com partículas de látex sensibilizadas com exoantígeno bruto de Paracoccidioides brasiliensis no sorodiagnóstico da ParacoccidioidomicoseGOMES, Fabíola Silveira 24 April 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009 / Paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica granulomatosa causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, é endêmica na América do Sul. Conídios provavelmente agem como propágulos infectantes e são inalados para os pulmões, onde ocorre a transformação à forma leveduriforme patogênica. Duas principais formas clínicas são consideradas: a forma aguda ou subaguda (tipo juvenil) e a forma crônica (tipo adulto). O diagnóstico definitivo da PCM inclui a observação direta da levedura multibrotante característica em fluidos biológicos e secções teciduais ou isolamento do fungo de materiais clínicos. Na PCM, testes sorológicos, além de auxílio diagnóstico, têm a função de acompanhamento durante e pós-tratamento. Portanto, a técnica utilizada precisa aliar sensibilidade e especificidade, para que o valor preditivo seja máximo e reprodutível. O propósito deste estudo foi avaliar um teste de aglutinação com látex (LA) para detectar anticorpos anti-P.brasiliensis contra antígeno bruto do fungo. Cinqüenta e uma (51) amostras de soro de pacientes com PCM foram testadas. Positividade foi observada em 84,31% (43/51), cujos padrões de aglutinação variaram de 1+ a 4+. Reatividade dessas amostras foi verificada em títulos variando entre 1:2 e 1:64. Reatividade cruzada foi observada com outras doenças fúngicas (aspergilose e histoplasmose), e com doenças não fúngicas. Amostras de soro humano normal não foram reativas. A sensibilidade, especificidade e valores preditivos, positivo e negativo, produzidos pelo teste LA foram 84,31%, 81,05%, 70,49% e 90,59%, respectivamente. Em conclusão, estes resultados mostram que o teste LA é instrumento útil no sorodiagnóstico da PCM, além de vantagens como baixo custo e rápida execução, a despeito de outros testes, tais como ID e Western blotting. / Paracoccidioidomycosis (PCM), a granulomatous sistemic mycosis caused by dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis, is endemic in South America. Conidia probably act as the infectious propagules and are inhaled into the lungs where transformation to the pathogenic yeast form occurs. Two main clinical forms are considered: the acute or subacute form (juvenile type) and the chronic form (adult type). A definitive diagnosis of PCM includes direct observation of the characteristic multiple budding yeast in biological fluids and tissue sections or isolation of the fungus from clinical materials. In PCM, serologic tests beside aiding the diagnosis has a monitoring function during and after treatment. Therefore, the technique used needs to ally sensitivity and specificity, in order that the predictive value is maximized and reproducible. The purpose of this study was the evaluation of a latex agglutination (LA) test for detecting anti-P. brasiliensis antibodies by the using of crude antigen from fungus. Fifty-one (51) samples of serum of patients with PCM were tested. Positivity was observed in 84,31% (43/51), whose standards of agglutination varied from 1+ to 4+. Reactivity of these samples was checked in titles varying between 1:2 and 1:64. Crossed reactivity was observed by other fungal diseases (aspergillosis and histoplasmosis), and by diseases not caused by fungi. Samples of human normal serum were not reactive. Use of the LA test permitted the detection of more than 80% of 51 proven PCM cases. The sensitivity, specificity, and positive and negative predictives values were 84,31%, 81,05%, 70,49% and 90,59%, respectively. In conclusion, this results showed that the LA test is a useful tool in serodiagnosis for PCM, beyond of advantages as lower cost and performance when compared to other tests such as ID and Western blotting.
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Utilização de náuplios de branchoneta Dendrocephalus brasiliensis (Pesta, 1921), na alimentação de larvas do camarão cinza Litopenaeus vannamei (Boone, 1931)YFLAAR, Berwiek Zafnath 08 January 2003 (has links)
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Previous issue date: 2003-01-08 / The experimental study with nauplii of Dendrocephalus brasiliensis in Litopenaeus vannamei larval feeding was carried out, at the laboratory of pos-larval production of the Empresa Pernambucana de Pesquisa Agropecuária (IPA-PE), near Porto de Galinha in Ipojuca. The aim of this study was to evaluate the performance of Dendrocephalus brasiliensis as food for Litopenaeus vannamei larvae and post-larvae.The Litopenaeus vannamei larvae (Protozoea PZ3) were stocked in 15 containers fill up with 10 liter of water, at a density of 100 larvae/L and grown during 18 days until post-larvae (PL10). The experiment consisted of 5 feeding treatments: T1), live Artemia sp. nauplii; T2), live D. brasiliensis nauplii; T3), frozen D. brasiliensis; T4), a combination of live Artemia sp. nauplii and live D. brasiliensis nauplii; T5), a combination of live Artemia sp. nauplii and frozen D. brasiliensis nauplii. The Larvae were fed 8 times a day; during the first 2 days were putted 800 D. brasiliensis nauplii/L/day, form day 3 to day 6 were given 2000 D. brasiliensis nauplii/L/day and from the 7th day till the 4000 D. brasiliensis nauplii/L/day.The larvae were completed the metamorphosis to post-larvae (PL1) in, 169, 168, 170, 171 and 169 hours for treatments 1, 2, 3, 4 and 5. The mean weight and length at (PL1) stage were, 444.444 μg and 6 mm for T1, 592.59 μg and 5.866 mm for T2, 224.082 μg and 5.733 mm for T3, 448.838 μg and 5.6 mm for T4 and 290.474 μg and 5.866 mm for T5. The experiment was finished at the PL10 stage when the post-larvae were counted to determine the survival rate. The survival results shown: 58.8%; 35.5%; 36.6%; 76.3% and 79.3% for T1, T2, T3, T4, and T5. At the end of this experiment the PL reach a mean weight and length of 1552.538μg and 8.833mm for T1, 1253.617μg and 9.2mm for T2, 690.413μg and 8.433mm for T3, 1522.717μg and 9.3mm for T4 and 1391.33μg and 9.466mm for T5. The results as survival rate data, metamorphosis time, final weight and lenght of larvae of each experiment obtained were statistically analyzed using ANOVA (P<0,05), Tukey and SNK tests. There are significant differences between the 5 feeding treatments. According to the results are concluded that D. brasiliensis nauplii (congealed or live) may be useful in combination with live Artemia sp. nauplii, as food for Litopenaeus vannamei larvae. / O experimento com utilização de náuplios de Dendrocephalus brasiliensis na alimentação de larvas de Litopenaeus vannamei, foi realizado no laboratório de produção de pós-larvas da Empresa Pernambucana de Pesquisa Agropecuária (IPA-PE), localizada em Porto de Galinha no município de Ipojuca - PE. O objetivo desse estudo foi avaliar o desempenho do náuplio do D. brasiliensis como alimento para as larvas e Pós-larvas de L. vannamei. As larvas foram estocadas no estágio de PZ3 em 15 containeres (com 10 litros de água cada), numa densidade de 100 larvas/ L e criadas durante 18 dias até PL10. O experimento constituiu-se em 5 tratamentos alimentares de 3 repetições de cada: T1) náuplios de Artemia vivos mais microalgas; T2) náuplios de D. brasiliensis vivos mais microalgas; T3) náuplios de D. brasiliensis congelados mais microalgas; T4) uma combinação de náuplios de Artemia vivos (50%) e náuplios de D. brasiliensis vivos (50%) mais microalgas; T5) uma combinação de náuplios de Artemia vivos (50%) e náuplios de D. brasiliensis congelados (50%) mais microalgas. As larvas foram alimentadas 8 vezes ao dia, durante os primeiros 2 dias colocados 800 náuplios de D. brasiliensis /L/dia, do 3o ao 6o dia foram oferecidos 2000 náuplios de D. brasiliensis/L/dia e do 7o ao 10o dia foram oferecidos 4000 náuplios de D. brasiliensis/L/dia. As larvas completaram o metamorfose para PL1 em 169, 168, 170, 171 e 169 horas, para T1, T2, T3, T4 e T5, respectivamente. O peso e comprimento médios no estágio de PL1 foram 444,444 μg e 6mm para T1; 592,29 μg e 5,866mm para T2; 222,082 μg e 5,733mm para T3; 448,838 μg e 5,6mm para T4 e 290,474 μg e 5,866mm para T5. Experimento foi finalizado no estágio de PL10 quando foi feita uma contagem para estimar a taxa média de sobrevivência. Os resultados da sobrevivência foram, 58,8%; 35,5%; 36,6%; 76,3% e 79,3%, para T1, T2, T3, T4 e T5, respectivamente. As médias do peso e comprimento no estágio de PL10 ficaram em 1552,538 μg e 8,833mm; 1253,617 μg e 9,2mm; 690,413 μg e 8,433mm; 1522,717 μg e 9,3mm e 1391,33 μg e 9,466mm para T1, T2, T3, T4 e T5 respectivamente. Foram utilizados métodos estatísticos ANOVA, teste de separação de Tukey e SNK para analisar os resultados da taxa de sobrevivência, metamorfose, peso e comprimento média final, e encontradas diferenças significativas entre os 5 tratamentos alimentares desse experimento. De acordo com esses resultados pode-se concluir, que os náuplios de D. brasiliensis (vivos ou congelados) associado aos náuplios de Artemia sp. vivos, podem ser útil na alimentação do Litopenaeus vannamei.
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Abundância, distribuição e caraterização morfológica de larvas de Atherinella brasiliensis (Atherinopsidae,Atheriniformes) no estuário do rio Jaguaribe,Pernambuco, BrasilFRANÇA, Elton José de 28 February 2005 (has links)
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Previous issue date: 2005-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study presents information about Atherinella brasiliensis larvae from the Jaguaribe river estuary, located in the northern coast of the state of Pernambuco, northeastern Brazil. Its objective was to characterize the abundance and distribution of larvae, along with a description of their external morphology and morphometric data. Ichthyoplankton samples were taken monthly, from April 2001 to April 2002, through surface towing of a 500μm conical-cylindrical plankton net, at six different sampling stations. Temperature and salinity average values ranged, respectively, from a minimum of 17.44 and 27.26ºC in January and June, to a maximum of 37.73 and 29.90oC in December and April. A total density of 258.04 larvae.10m-3 was recorded throughout the study period, 94.23% of which were in the preflexion stage. Higher larvae densities were recorded in October, January and March, and lower in September. Among stations, higher densities were recorded in the upper reaches of the estuary, which presented low and quiet waters. A. brasiliensis larvae hatch with an average standard length (SL) of 1.4mm. In the preflexion stage, the body is envolved by a finfold, beginning just behind the head, and four dendritic chromatophores are present on top of the head. The flexion stage begins with a SL of 3.8mm, dorsal and anal fins present pterigyophores and the mouth is terminal, but somewhat upward orientated. With 4.7mm SL, the larva is at the end of the flexion stage and beginning of postflexion. In the postflexion stage, an ossification of dorsal and anal fin rays is evident, as well as the pelvic buds and darkening of lateral pigmentation. With approximately 12.0mm SL, all fins are formed, and the second dorsal one is the last to be formed, being located posterior to the anal. The juvenile stage begins at approximately 15mmSL. In this stage, A. brasiliensis present the anal fin located at the body midpoint, and the posterior end of pectorals surpasses the pelvic fin origin, which is located at an equal distance from the pectoral and anal fins’ origins. Scales are clearly visible at the dorso-lateral region, behind the head. The results indicate most of the species life cycle takes place in the estuary, it presents multiple spawning, and initial recruitment occurs in January and March. The morphological features herein described allow the identification of its larvae, together with an adequate differentiation from hemiramphids and other atheriniform species. / O presente trabalho apresenta informações sobre larvas de Atherinella brasiliensis, no estuário do rio Jaguaribe, localizado no litoral norte do estado de Pernambuco. O mesmo teve como objetivo, caracterizar a abundância e distribuição de larvas desta espécie, bem como, caracterizar o seu desenvolvimento inicial, através da descrição de sua morfologia externa e aspectos morfométricos. Foram realizadas coletas mensais de ictioplâncton, no período de abril de 2001 a abril de 2002, através de arrastos horizontais na superfície, com rede de plâncton cônico-cilíndrica, de malha de 500 μm, em seis diferentes estações de amostragem. Os valores médios de salinidade e temperatura registrados foram menores nos meses de janeiro e junho, com 17,44 e 27,26 ºC, e os maiores nos meses de dezembro e abril, com 37,73 e 29,90ºC, respectivamente. Uma densidade total de 258,04 larvas.10m-3 foi registrada para todo o período, sendo 94,23% delas representadas pelo estágio de pré-flexão. As maiores ocorrências de larvas foram registradas nos meses de outubro, janeiro e março, e a menor em setembro. Dentre as estações, as maiores densidades foram registradas na porção superior do estuário, a qual apresentou águas calmas e rasas. Larvas de A. brasiliensis eclodem com comprimento padrão (CP) médio de 1,4mm. No estágio de pré-flexão, a larva apresenta o corpo revestido por membrana embrionária, que se inicia logo atrás da cabeça e a larva apresenta quatro cromatóforos dendríticos sobre a cabeça. O estágio de flexão inicia-se com CP de aproximadamente 3,8mm, as nadadeiras dorsal e anal já evidenciam a presença de pterigióforos e a bocaassume uma posição terminal, sendo esta ligeiramente inclinada para cima. Com CP médio de 4,7mm, a larva encontra-se no estágio final da flexão e início da pós-flexão. No estágio de pós-flexão, apresenta uma maior ossificação dos raios das nadadeiras dorsal e anal, já apresentando também o botão da nadadeira pélvica e um adensamento da pigmentação lateral. Com aproximadamente 12,0mm de CP, a larva apresenta todas as nadadeiras formadas, sendo a primeira nadadeira dorsal a última a passar pelo processo de ossificação, estando localizada em posição posterior à anal. O estágio juvenil tem inicio com CP de aproximadamente 15mm. Nesta fase, A. brasiliensis apresenta a nadadeira anal localizada na porção mediana do corpo e a margem posterior das peitorais ultrapassa a origem das pélvicas, sendo estas últimas localizadas no ponto médio entre as origens das nadadeiras peitoral e anal. Na região dorso-lateral, próximo à cabeça, é possível visualizar escamas. Os resultados indicam que a espécie tem boa parte do seu ciclo de vida ocorrendo no estuário e que a mesma apresenta desova do tipo parcelada. O seu principal período de recrutamento ocorre nos meses de janeiro a março e as características morfológicas aqui descritas permitem uma adequada identificação de suas larvas, bem como sua diferenciação daquelas da família Hemiramphidae e de outras espécies de Atheriniformes.
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Efeito protetor de antioxidantes na metemoglobina e no dano em dna induzidos pela dapsona-hidroxilamina in vitroGOMES, Antonio Rafael Quadros 21 June 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-06-21 / A dapsona (DDS) é um dos fármacos utilizados na poliquimioterapia da hanseníase, associado com a rifampicina e clofazimina. Destes fármacos, a DDS é a principal responsável por reações adversas, como a metemoglobinemia e anemia hemolítica. Estas reações estão relacionadas ao metabólito da DDS, a dapsona-hidroxilamina (DDS-NOH). Na tentativa de promover a redução de efeitos hematotóxicos, são estudadas alternativas terapêuticas com os antioxidantes. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito protetor da N-acetilcisteína (NAC), A. brasiliensis e Glutationa-etil-éster (GSH-EE) na metemoglobina (MetHb) e no dano em DNA induzidos pela DDS-NOH in vitro, correlacionando aos parâmetros do estresse oxidativo. Para isto, as suspenções de eritrócitos humanos a 50% foram pré e pós-tratadas com NAC, A. brasiliensis e GSH-EE em diferentes concentrações, sendo os grupos expostos a DDS-NOH para induzir a formação de MetHb. Além disso, avaliou-se também a atividade das enzimas SOD e CAT, bem como os níveis de GSH, TEAC e MDA. Em leucócitos avaliou-se a indução de EROs no meio intracelular utilizando o DCFH-DA e o dano em DNA através do ensaio cometa. Os resultados mostraram que o metabólito DDS-NOH foi capaz de induzir MetHb in vitro, sendo este efeito dose-dependente. Em relação ao pré-tratamento, todos os antioxidantes preveniram a formação de MetHb induzida pela DDS-NOH, assim como no pós-tratamento. Em relação a SOD, apenas o pré-tratamento com NAC e A. brasiliensis reduziram a atividade de SOD. Já no pós-tratamento, houve aumento quando tratados com os antioxidantes. O pré-tratamento com NAC e GSH-EE aumentou a atividade de CAT, por outro lado o A. brasiliensis reduziu, assim como no pós-tratamento com os antioxidantes. Quanto aos níveis de GSH, o pré-tratamento com NAC e A. brasiliensis aumentaram GSH, por outro lado, não alteraram no pós-tratamento. Em relação ao TEAC, não houve alteração. Com relação aos danos oxidativos no pré-tratamento, o A. brasiliensis e a GSH-EE reduziram o MDA. Já no pós-tratamento, houve aumento no grupo A. brasiliensis e redução no grupo GSH-EE. Apenas a NAC mostrou ser eficiente na remoção de EROs do meio intracelular induzido por DDS-NOH em leucócitos. Enquanto que em eritrócitos, a NAC e o A. brasiliensis foram capazes de reduzir tal efeito. No estudo do ensaio cometa, a DDS-NOH foi capaz de induzir danos no DNA em leucócitos do sangue periférico, entretanto este danos foram reduzidos quando tratadas com NAC e A. brasiliensis. Pode-se concluir com estes dados que os compostos antioxidantes avaliados apresentam potenciais terapêuticos na prevenção da MetHb e no dano em DNA induzido por DDS-NOH in vitro, sendo a NAC mais eficaz contra estes efeitos. / Dapsone (DDS) is one of the drugs used in polychemotherapy of leprosy associated with rifampicin and clofazimine. Of these drugs, DDS is primarily responsible for adverse reactions, such as methemoglobinemia and hemolytic anemia. These reactions are related to the DDS metabolite, dapsone hydroxylamine (DDS-NOH). In an attempt to promote the reduction of toxic effects are studied alternative therapies with antioxidants. This work aimed to evaluate the protective effect of N-acetylcysteine (NAC), A. brasiliensis and Glutathione ethyl ester (GSH-EE) in methemoglobin (MetHb) and DNA damage induced by DDS-NOH in vitro , correlating to oxidative stress parameters. For this, suspensions of human erythrocytes to 50% were pre- and post-treated with NAC, A. brasiliensis and GSH-EE in different concentrations, being exposed groups DDS-NOH to induce the formation MetHb. It also assessed whether the activity of enzymes-SOD and CAT and GSH levels, TEAC and MDA. In leukocytes evaluated the induction of ROS intracellularly using DCFH-DA and the damage to DNA by comet assay. The results showed that the DDS-NOH metabolite was capable of inducing MetHb in vitro, this dose-dependent effect. Regarding the pre-treatment, all the antioxidants prevented MetHb formation induced by DDS-NOH, as well as post-treatment. For SOD, only the pre-treatment with NAC and A. brasiliensis reduced SOD activity. In the post-treatment, there was increased when treated with antioxidants. Pre-treatment with NAC and GSH-EE increased CAT activity, moreover A. brasiliensis reduced, as after treatment with antioxidants. As for GSH levels, pre-treatment with NAC and GSH increased A. brasiliensis, on the other hand, did not alter after treatment. Regarding TEAC did not change. With respect to oxidative damage in the pre-treatment A. brasiliensis and GSH-EE reduced MDA. In the post-treatment, there was an increase in group A. brasiliensis and reduced GSH-EE group. Only the NAC was shown to be effective in removing the intracellular ROS induced by DDS-NOH in leukocytes. While in erythrocytes, a NAC and A. brasiliensis were able to reduce this effect. In the study of the comet assay, the DDS-NOH was able to induce DNA damage in peripheral blood leukocytes, however this damage was reduced when treated with NAC and A. brasiliensis. It can be concluded from our data that the evaluated antioxidants have therapeutic potential in the prevention of MetHb and DNA damage induced by DDS-NOH in vitro, more effective NAC against these effects.
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Importance de la cassiicoline en tant qu'effecteur de la Corynespora Leaf Fall (CLF) chez l'hévéa : Développement d'outils pour le contrôle de la maladieDeon, Marine 24 April 2012 (has links) (PDF)
L'hévéa (Hevea brasiliensis) est actuellement la seule source commerciale de caoutchouc naturel. Parmi les maladies affectant l'hévéa, la CLF (" Corynespora Leaf Fall ") causée par le champignon Corynespora cassiicola, est devenue en une cinquantaine d'années un fléau pour l'ensemble des pays hévéicoles d'Asie et d'Afrique. Actuellement, la gestion du problème consiste à arracher les clones les plus sensibles et à traiter les arbres avec des fongicides en cas d'épidémie. Cependant, le nombre de clones touchés par la maladie ne cessant d'augmenter, il devient urgent de sélectionner de nouveaux clones à la fois tolérants et aptes à la production. Nos travaux ont permis de caractériser le gène codant la cassiicoline, toxine protéique glycosylée secrétée par C. cassiicola, et d'analyser sa diversité. Une étude comparative portant sur trois isolats de C. cassiicola d'agressivité contrastée a montré la présence du gène Cas1 chez les isolats de forte et moyenne agressivité, alors qu'il n'est pas détecté chez l'isolat de faible agressivité. Les niveaux d'agressivité des isolats sont corrélés aux niveaux de transcrits du gène de cassiicoline. Le rôle de la cassiicoline serait prépondérant dans les phases précoces de l'infection. L'analyse de diversité du gène de cassiicoline à partir d'une collection d'isolats provenant de différents hôtes et d'origines géographiques variées, a révélé l'existence d'au moins six isoformes protéiques (Cas1 à Cas6). La structuration génétique globale des isolats basée sur des marqueurs neutres est similaire à la structuration basée sur le gène de cassiicoline. Les isolats prélevés sur hévéa se regroupent en clades spécialisés, dont un correspondant aux isolats porteurs du gène Cas1, identifiés comme étant les plus agressifs sur hévéa. Cependant, 58 % des isolats testés semblent dépourvus de gène de cassiicoline, bien que certains génèrent des symptômes modérés sur hévéa, ce qui suggère l'existence d'autres effecteurs. Des formes endophytiques de C. cassiicola ont été isolées à partir de feuilles asymptomatiques provenant du Brésil, zone encore indemne de CLF. Les gènes de cassiicoline portés par ces souches (isoformes Cas3 et 4) ne semblent pas exprimés lors de l'interaction avec l'hévéa. Nous avons montré par ailleurs que les champignons endophytes de l'hévéa appartenant aux genres Trichoderma et Xylaria présentent une forte activité mycoparasitaire sur C. cassiicola, in vitro. Ces travaux ouvrent de nouvelles perspectives pour le contrôle de la maladie (diagnostic précoce, sélection de clones tolérants, lutte biologique).
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Impacts of land use and biophysical properties on soil carbon stocks in southern Yunnan, Chinade Blécourt, Marleen 10 February 2014 (has links)
Für die montanen Regionen kontinental Südostasiens (Südwest China, Laos, Kambodscha, Myanmar, Nordost Thailand, Nordwest Vietnam) gibt es nur wenig Informationen über die organische Bodensubstanz (OBS) und ihre Beeinflussung durch Landnutzung, Bewirtschaftung und biophysikalische Eigenschaften. Zum Beispiel ist trotz großflächiger Entwaldung zu Gunsten von Kautschukplantagen der Einfluss dieser Landnutzungsänderung auf OBS Vorräte kaum bekannt. Auch wurde der Einfluss der Terrassierung, wie sie für den Kautschukanbau in montanen Regionen üblich ist, auf die Dynamik der OBS bislang nicht untersucht. Des Weiteren liegen nur begrenzt Informationen über die räumliche Verteilung von OBS Vorräten und die Rolle potentieller Regulationsfaktoren wie Landnutzung, Vegetation, Bodentextur und Topographie vor. Die vorliegende Arbeit zielte auf die genannten Wissenslücken und präsentiert in diesem Kontext drei Studien aus der montanen Region Xishuangannas, Süd Yunnan, China.
In den ersten beiden, in einer tropischen Landschaft durchgeführten Studien, habe ich die Änderung des OBS Vorrats durch 1) die Umwandlung von Sekundärwald in Kautschukplantagen und 2) durch den Bau von Terrassen, quantifiziert. Um in der ersten Studie Landnutzungseffekte auf die OBS-Vorräte zu quantifizieren, habe ich den Ansatz der unechten Zeitreihe (space-for-time substitution) genutzt. Ich habe 11 terrassierte Kautschukplantagen im Alter von 5 bis 46 Jahren sowie sieben Sekundärwaldparzellen untersucht. Die Ergebnisse zeigten, dass die Umwandlung von Sekundärwald in Kautschukplantagen eine Abnahme der OBS Vorräte von 37.4 Mg C ha-1 im Bereich bis zu einer Tiefe von 1.2 m hervorrief; diese Abnahme entsprach 19% des ursprünglichen OBS Vorrats im Sekundärwald. Im Oberboden nahm der OBS Vorrat exponentiell ab; in den ersten 5 Jahren nach der Landnutzungsänderung war die Abnahme am stärksten, nach ca. 20 Jahren hat sich ein Gleichgewicht eingestellt. Der mittlere OBS-Verlust von 37.4 Mg C ha-1 war viel höher als literaturbasierte Schätzwerte für Änderungen der oberirdischen Kohlenstoffvorräte, welche zwischen einem Verlust von 18 Mg C ha-1 und einer Steigerung von 8 Mg C ha-1 liegen. Im Gegensatz zur IPCC tier 1-Methode, die davon ausgeht, dass OBS Vorratsänderungen bei einer Umwandlung von Wald zu Kautschuk gleich 0 sind, zeigen meine Ergebnisse, dass OBS-Verluste in Betracht gezogen werden müssen, um potentiell große Fehler bei der Schätzung von Kohlenstoffflüssen von Ökosystemen zu vermeiden.
Terrassierte Kautschukplantage bestehen aus schmalen Terrassen mit einer Baumreihe, die sich mit ursprünglichen geneigten Flächen abwechseln. Bei der Konstruktion der Terrassen wird Boden vom Hang abgetragen, und so eine innere Kante der Terrasse entsteht (Entnahmebereich); der entfernte Boden wird dann auf den Hang unterhalb der Grabungsfläche aufgehäuft und bildet die äußere Kante der Terrasse (Ablagebereich). Die zweite Studie untersucht den Einfluss der Terrassierung auf OBS Vorräte in 5, 29 und 44 Jahre alten Plantagen. In jeder Plantage habe ich die Terrassen systematisch in den verschiedenen Bodenverteilungszonen beprobt, die ursprünglichen Hangflächen zwischen den Terrassen diente als Referenz. Die Ergebnisse dieser Studie zeigten, dass die Terrassierung die OBS Vorräte der 5 Jahre alten Plantage nicht beeinflusst hat. In den 29 und 44 Jahre alten Plantagen wurden jedoch in 0-1.2 m Tiefe höhere OBS Vorräte auf den Terrassen als auf den Referenzflächen beobachtet. Der positive Effekt der Terrassierung auf die OBS Vorräte in den beiden älteren Plantagen wurde auf die Erholung des OBS Vorrats im freiliegenden Oberboden des Entnahmebereichs, und die teilweise Erhaltung von OBS im begrabenen Boden des Ablagebereichs erklärt. Die Erholung der OBS Vorräte im Entnahmebereichen konnte durch die Aufnahme neuer OBS des freiliegenden Unterbodens in Form von Wurzeln und Laubfall sowie durch die Sedimentation von erodiertem Oberbodenmaterial des Oberhangs erklärt werden. Zusammenfassend zeigen die Ergebnisse, dass Terrassierung die Verluste von OBS verringern kann; ohne die Anlage von Terrassen könnte der Verlust von OBS durch die Umwandlung von Wald zu Kautschukplantagen größer sein.
In der dritten Studie, durchgeführt in einer subtropischen Landschaft, habe ich die aktuellen OBS Vorräte pro dominanter Landnutzung quantifiziert und die Beziehungen zwischen OBS und Landnutzung, sowie Vegetation, Bodentextur und Topographie untersucht. In einem 10.000 Hektar großen Gebiet habe ich 28 ein Hektar große Probeflächen in Wäldern mit geschlossenem und offenem Kronendach, Teeplantagen und Buschland ausgewählt. Die OBS-Vorräte in einer Tiefe von 0-0.9 m waren unter den höchsten der Region: 228.6 ± 19.7 (SE) Mg C ha-1 in Wäldern mit geschlossenem Kronendach, 200.4 ± 15.5 Mg C ha-1 in Wäldern mit offenem Kronendach, 197.5 ± 25.9 Mg C ha-1 in Teeplantagen und 236.2 ± 13.7 Mg C ha-1 im Buschland. OBS Konzentrationen und Vorräte unterschieden sich nicht signifikant zwischen den Landnutzungstypen. Mehr als 50% der gesamten Varianz der OBS wurde innerhalb der ein Hektar großen Flächen beobachtet und war abhängig von der Variabilität der Grundfläche der Bäume, Kohlenstoffvorrat der Streuauflage und der Geländeneigung. Diese Ergebnisse illustrieren die Bedeutung lokaler Prozesse auf die Variabilität von OBS Vorräten in einer montanen Landschaft. Die Ergebnisse aller drei hier vorgestellten Studien tragen zu einem besseren Verständnis von OBS Vorräten und deren Dynamik in einer schnellen Änderungsprozessen ausgesetzten Region bei. Darüber hinaus bilden sie eine potentielle Grundlage für weitere Studien über Änderungen von Ökosystemdienstleistungen in montanen Regionen des kontinentalen Südostasiens.
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