Orientador: Licio Augusto Velloso / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T07:52:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_FernandoGanzarollide_D.pdf: 2241345 bytes, checksum: a0f9e9616ce36521fc221d40146a8e97 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Angiotensina II (AngII) desempenha um papel importante na gênese da hipertrofia miocárdica. Grande parte do estímulo hipertrófico determinado pela AngII depende da ativação de sinalização intracelular envolvendo membros das famílias de transdutores de sinais mitogen-activated-protein kinase (MAPK) e Janus Kinase (JAK)/ signal transducer and activator of transcription (STAT). Agentes farmacológicos doadores de óxido nítrico (NO) estão sendo objeto de intensa pesquisa, atualmente, pelo seu potencial terapêutico em condições clínicas envolvidas na hipertrofia miocárdica. No presente trabalho, avaliamos a propriedade do S-nitroso-acetilcisteína (SNAC) de modular a transdução de sinal da AngII mediada por membros da família das MAPK e JAK/STAT em coração e cardiomiócitos isolados de ratos. SNAC foi capaz de reverter significativamente a ativação promovida pela AngII na via de sinalização JAK2/STAT1 e 3 em coração e cardiomiócitos. Além disso, SNAC reverteu a ativação por AngII em cJun-N-terminal Kinase (JNK)1/2/3. Entretanto, SNAC acentuou o efeito da AngII em Extracellular Regulated Kinase (ERK) 1 e 2. Finalmente, nem AngII nem SNAC exerceram qualquer efeito sobre p38MAPK. Como resultado, houve menor expressão dos immediate early genes c-jun e c-fos, bem como menor ativação por fosforilação da proteína c-Jun. Em resumo, o pré-tratamento de ratos e cardiomiócitos isolados com um potente doador de NO afeta a transdução do sinal da AngII resultando na modulação via-específica da expressão de genes precocemente induzidos. Tais resultados oferecem evidências para o efeito direto de um doador de NO sobre a transdução de sinal da AngII e proporcionam bases moleculares para as propriedades anti-hipertróficas desta classe de drogas / Abstract: Angiotensin II (AngII) plays an important role in the genesis of cardiac hypertrophy. Much of the growth stimulus delivered by AngII depends on the activation of intracellular signaling through members of the mitogen-activated-protein kinase (MAPK) and Janus kinase (JAK)/ signal transducer and activator of transcription (STAT) family of signal transducers. Pharmacological agents that act as donors of nitric oxide (NO) are currently under intensive investigation for their beneficial role in clinical conditions that produce cardiac hypertrophy. Here, we evaluated the property of S-nitroso-N-acetyl cysteine (SNAC) to modulate AngII signal transduction through members of the MAPK family and through JAK2/STAT-1 and 3 in heart and isolated cardiomyocytes of rats. SNAC significantly reversed AngII activation of the JAK2/STAT-1 and -3 signaling in heart and cardiomyocytes. In addition SNAC revered AngII activation of JNK1/2/3. However, SNAC enhanced the effect of AngII on ERK. Finally neither SNAC nor AngII exerted an effect on p-38. As a consequence, there was an abrogation in the enhanced expression of the immediately early genes c-jun and c-fos, as well the phosphorilation of c-Jun. In summary, the treatment of living rats and isolated cardiomyocytes with a potent NO donor affects AngII signal transduction on a pathway specific manner resulting on the modulation of early inducible gene expression. These results provide evidence for a direct effect of a NO donor upon AngII signal transduction, and grant a molecular basis for the anti-hypertrophic properties of this class of drugs / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T15:02:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zecchin_HenriqueGottardello_D.pdf: 4518336 bytes, checksum: db2ce3333dfb7dda86b0298470e924ca (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A resistência seletiva à insulina através da via IRS/PI3-K/Akt/eNOS associada à ativação normal ou exacerbada da via de crescimento MAPK tem sido proposta como um possível elo entre situações de resistência à insulina e doença cardiovascular. Inicialmente demonstramos que animais com resistência à insulina e doença cardiovascular (o rato espontaneamente hipertenso, SHR) apresentam menor ativação da via IRS/PI3-K/Akt/eNOS e hiperativação/hiperexpressão da via da MAPK na aorta torácica, enquanto a ativação normal da via IRS/PI3-K/Akt/eNOS pode proteger o animal obeso, resistente à insulina e que não apresenta doença cardiovascular. Posteriormente, outras vias estimulatórias do crescimento celular, como a via JAK/STAT, foram estudadas no vaso de outro modelo animal de resistência à insulina e doença cardiovascular - o rato com obesidade induzida por dieta. Este modelo demonstrou que a redução da ativação da via PI3-K/Akt/eNOS ocorre em paralelo à hiperativação das vias da MAPK e JAK/STAT, e isso pode desempenhar função importante da patogênese da doença cardiovascular neste estado patológico. Em outro estudo foi demonstrado pela primeira vez que a acetilcolina pode ativar a eNOS de maneira cálcio-independente, através da via IRS/PI3-K/Akt utilizando para isso uma tirosina quinase intracelular, a JAK2. Em ratos com obesidade induzida por dieta, resistentes à insulina e com disfunção endotelial, foi demonstrado que há resistência na via da PI3-K/Akt/eNOS tanto em resposta à insulina quanto à acetilcolina, em decorrência de maior fosforilação inibitória do IRS-1 e da redução dos níveis teciduais da eNOS. Assim, o desequilíbrio entre a ativação reduzida da via IRS/PI3-K/Akt/eNOS e a maior ativação das vias de crescimento (MAPK e JAK/STAT) pode contribuir para o desenvolvimento de doença cardiovascular em estados de resistência à insulina / Abstract: The actions of acetylcholine on endothelium are mainly mediated through muscarinic receptors, which are members of the G protein-coupled receptor family. In the present study we show that acetylcholine induces rapid tyrosine phosphorylation and activation of Janus kinase 2 (JAK2) in rat aorta. Upon JAK2 activation, tyrosine phosphorylation of insulin receptor substrate-1 (IRS-1) is detected. In addition, acetylcholine induces JAK2/IRS-1 and IRS-1/phosphatidylinositol (PI) 3-kinase associations, downstream activation of Akt/protein kinase B, endothelial cell-nitric oxide synthase (eNOS), and extracellular signal-regulated kinase (ERK1/2). The pharmacological blockade of JAK2 or PI 3-kinase reduced acetylcholine-stimulated eNOS phosphorylation, NOS activity and aorta relaxation. These data indicate a new signal transduction pathway for IRS-1/PI 3- kinase/Akt/eNOS activation and ERK1/2 by means of JAK2 tyrosine phosphorylation stimulated by acetylcholine in vessels. Moreover, we demonstrate that, in aorta of obese rats (high-fat diet), there is an impairment in insulin- and acetylcholinestimulated IRS-1/PI 3-kinase pathway, leading to reduced activation with lower protein levels of eNOS associated with a hyperactivated ERK/MAP kinase pathway. These results suggest that in aorta of obese rats, there is not only insulin resistance, but also acetylcholine resistance, probably mediated by a common signaling pathway that controls the activity and the protein levels of eNOS / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientadores: Francesco Langone, Leonilda Maria Barbosa dos Santos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T19:17:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RodriguezdelaHoz_CristianeLucia_D.pdf: 3716352 bytes, checksum: 29e8652cc135a71b48d8a6442b69e187 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A isoforma induzível da sintase do óxido nítrico (iNOS) e o fator de necrose tumoral-alfa (TNF-a) estão envolvidos em processos inflamatórios desmielinizantes como a síndrome de Guillain Barré e seu modelo animal, a neurite experimental auto-imune (EAN). A presença dessas moléculas foi investigada no sistema nervoso periférico de ratos Lewis em diferentes fases da EAN. Raízes nervosas oriundas dos segmentos medulares torácico 12 (T12) a lombar 3 (L3) (raízes adjacentes à intumescência lombar), cauda eqüina e nervos ciáticos foram coletados e processados para dupla imunofluorescência. Paralelamente, esses espécimes foram analisados quanto à desmielinização e degeneração axonal, por meio de histoquímica de Sudan Black e imunofluorescência para neurofilamentos, respectivamente. Todos os animais com EAN apresentaram células inflamatórias com imunorreatividade para iNOS e TNF-a, correspondendo a macrófagos e polimorfonucleares (neutrófilos). Essas células contendo iNOS e TNF-a foram observadas nos ratos Lewis exibindo os primeiros sinais clínicos da EAN. Sua população tornou-se numerosa durante a fase de agravamento do quadro clínico, diminuiu no decorrer da fase de recuperação e não foi observada nos animais clinicamente recuperados. Conforme o estágio da EAN, essas células contendo iNOS e TNF-a foram encontradas nas diferentes regiões nervosas analisadas. No início dos sinais clínicos observou-se algumas células iNOS/TNF-a-imunorreativas em vasos da cauda eqüina e do nervo ciático. Na fase em que os animais apresentaram paraparesia, houve um aumento dessa população celular ao redor de vasos e infiltrados inflamatórios nos gânglios sensitivos, na cauda eqüina e nas raízes nervosas T12-L3. Alterações na bainha de mielina e nos neurofilamentos não foram detectadas. Com a evolução da EAN, os animais desenvolveram paraparesia severa. Nesta fase, numerosas células com imunorreatividade para iNOS e TNF-a distribuíram-se ao redor de infiltrados inflamatórios e no tecido endoneural das raízes espinhais e do nervo ciático. Próximo às regiões de infiltrado, algumas fibras nervosas apresentaram bainha de mielina fragmentada ou mais delgada. Alguns axônios no nervo ciático exibiram imunomarcação dos neurofilamentos menos intensa, fragmentada ou aglomerada. Na fase de recuperação, raras células iNOS/TNF-a-imunorreativas foram encontradas em vasos das raízes nervosas T12-L3 e do nervo ciático. Em algumas raízes da cauda eqüina, essas células foram observadas em maior número. O auge da desmielinização foi verificado no nervo ciático nesse estágio, com a presença de vários fragmentos e ovóides de mielina. Os neurofilamentos imunomarcados, por sua vez, apresentaram-se contínuos, porém mais delgados do que os normais. Na fase de resolução da EAN não foram evidenciadas células duplamente imunorreativas. A bainha de mielina recobrou seu aspecto normal nas raízes nervosas, enquanto que no nervo ciático, bainhas de mielina e neurofilamentos imunomarcados delgados foram observados em meio a bainhas e imunomarcação de neurofilamentos mais grossas. Nossos resultados sugerem uma correlação entre a presença da iNOS e TNF-a nas diferentes regiões nervosas e os sinais clínicos exibidos pelo animal com EAN. Além disso, o acentuado processo desmielinizante que ocorre no nervo ciático é capaz de promover alterações estruturais nos neurofilamentos, provavelmente afetando o funcionamento normal dos axônios / Abstract:Inducible nitric oxide synthase (iNOS) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-a) are involved in inflammatory processes such as Guillain Barré Syndrome and its animal model, Experimental Autoimmune Neuritis (EAN). In this study, the presence of these molecules was investigated in the peripheral nervous systems of Lewis rats at different stages of EAN. Thoracic 12 (T12) to lumbar 3 (L3) spinal roots adjacent to lumbar intumescence, cauda equina and sciatic nerves were obtained and processed for double immunofluorescence. These specimens were also analyzed for myelin and axonal degeneration using Sudan Black histochemistry and neurofilament immunolabelling, respectively. All the immunized animals showed double iNOS and TNF-a immunoreactivity in inflammatory cells such as macrophages and polymorphonuclears (neutrophils). These cells were observed in Lewis rats exhibiting the first clinical signs of EAN. Their population increased during the worsening of the disease, diminished during the recovery phase and had disappeared completely in clinically recovered rats. Depending on the EAN phase, iNOS and TNF-a bearing cells were found in the different regions of peripheral nervous system analyzed. At the onset of clinical signs, some iNOS and TNF-a immunoreactive cells were observed in vessels of the cauda equina and the sciatic nerve. In mildly paraparetic rats, an increase in the amount of these cells around vessels and inflammatory infiltrates in the dorsal root ganglia, cauda equina and T12-L3 spinal roots was observed. Changes in the myelin sheath and neurofilaments were not detected. As the EAN evolved, the rats developed severe paraparesis. At this stage, numerous iNOS and TNF-a bearing cells were observed around inflammatory infiltrates and in the endoneurium of the spinal roots and the sciatic nerve. Some nerve fibers near to infiltrated regions showed a thinner or even fragmented myelin sheath. Some sciatic nerve axons exhibited a less intense, fragmented or clustered neurofilament immunolabelling. During recovery stage, rare iNOS/TNF-a immunoreactive cells were detected in vessels of T12-L3 spinal roots and the sciatic nerve. An increased number of these cells was observed in some nerve fibers of cauda equina. The peak stage of demyelination was verified in the sciatic nerve by the presence of several myelin ovoids. Neurofilaments showed continuous immunolabelling, but were more slender than the neurofilaments in naïve rats. Double-immunoreactive cells were not evidenced during the recovery stage. In nerve roots, the myelin sheath recovered its normal appearance, while in sciatic nerves, slenderer myelin sheaths and immunolabelled neurofilaments were observed among thicker ones. Our results suggest that there is a close association between the presence of iNOS and TNF-a bearing cells in the various regions of the peripheral nervous system and the clinical signs exhibited by the animals. Furthermore, the acute demyelinating process in sciatic nerves also promotes structural changes, probably affecting the normal functioning of axons / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Marcia Regina Braga / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T08:23:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kretzschmar_FernandadosSantos_M.pdf: 1298329 bytes, checksum: ea1fc8a628a790dbf39de684ebe6192d (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Plântulas de soja (Glycine max L. Merr), crescidas sob alta concentração de CO2 em sistema de câmaras de topo aberto apresentam incremento na fotossíntese e ganhos de produtividade, podendo alterar a produção de metabólitos secundários de importância farmacológica. Este trabalho teve como objetivo analisar a síntese de flavonas, isoflavonas e pterocarpanos em plântulas de soja (IAC-18, resistente ao fungo causador do cancro da haste Diaporthe phaseolorum f. sp. meridionalis), cultivadas em atmosfera de 380 e 760 mmol mol-1 de CO2 e estimulada por diferentes eliciadores bióticos e abióticos. Fragmentos do b-glucano de Phytophthora megasperma, autoclavados de esporos de D. phaseolorum (Dpm) e moléculas doadoras de óxido nítrico (GSNO e SNP) foram utilizados como eliciadores. Os ensaios foram feitos aplicando-se os eliciadores sobre cotilédones destacados de plântulas de soja com 9 dias de idade (estádio VC). A exposição à 760 mmol mol-1 de CO2 estimulou a fotossíntese, aumentou a área e a massa fresca de cotilédones e folhas e resultou em incremento na produção de coumestrol, daidzeína, genisteína, luteolina e apigenina induzidas principalmente por SNP. Para gliceolinas e daidzina, o efeito estimulador do CO2 foi observado por indução apenas com o b- glucano. Parâmetros bioquímicos relativos aos carboidratos solúveis e estruturais das plântulas de soja também mostraram diferenças significativas entre os dois tratamentos com CO2. Os resultados obtidos reforçam a sugestão de que o incremento na disponibilidade de carbono pode modificar as defesas induzidas em soja contra patógenos, porém, essas alterações ocorrem em metabólitos específicos e dependem do eliciador utilizado / Abstract: Soybean seedlings (Glycine max L. Merr) grown in open top chambers under high CO2 concentrations have shown photosynthetic increment and increase in productivity, which in turn may modify the productio n of secondary metabolites with farmacological importance. The aim of this work was to analyze the synthesis of flavones, isoflavones and pterocarpans in soybean seedlings (IAC-18, a cultivar resistant to the causal agent of the stem canker disease Diaphorthe phaseolorum f. sp. Meridionalis), kept under 380 and 760 mmol mol-1 CO2 atmospheres stimulated by biotic and abiotic elicitors. The b-glucan from mycelial walls of Phythophytora megasperma, autoclaved espores of D. phaseolorum (Dpm) and the NO donors, GSNO and SNP, were used as elicitors. The assays were performed by applying the elicitors on detached cotyledons from 9 days old soybean seedlings (VC stage). The exposition to 760 mmol mol-1 of CO2 stimulated photosynthesis, increased the area and fresh mass of leaves and cotyledons, and raised the production of coumestrol, daidzein, genistein, luteolin and apigenin, mainly induced by SNP. For glyceollins and daidzin the CO2 stimulatory effect was observed only by the induction with the b-glucan. Biochemical parameters related to soluble and structural carbohydrates from soybean seedlings also showed significant differences between the two CO2 treatments. These results strengthen the suggestion that the increment in the carbon availability may modify the inducible defenses in soybean against pathogens. However, these alterations occur in specific metabolites and depend on the elicitor / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Marcelo Ganzarolli de Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-09T16:40:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simplicio_FernandaIbanez_D.pdf: 1516606 bytes, checksum: 8ee850e83207e6e98a9aec046efdba5d (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Óxido nítrico (¿NO) produzido endogenamente em humanos é considerado um antioxidante efetivo na inibição da peroxidação lipídica. Todavia, no plasma e em células mamíferas, ¿NO circula principalmente como S-nitrosotióis primários (RSNOs). Neste trabalho, a peroxidação in vitro de comicelas do ácido linoleico-SDS (AL-SDS) e da lipoproteína de baixa densidade (LDL) catalisada por lipoxigenase de soja (SLO), íons Fe (II) e Cu (II), foram monitoradas na presença e na ausência de três RSNOs primários: S-nitrosocisteína (CISNO), S-nitroso-N-acetilcisteína (SNAC) e S-nitrosoglutationa (GSNO) a 37ºC. Medidas cinéticas e espectrofotométricas baseadas na formação de duplas conjugadas, adutos fluorescentes oxidados AL-lisina e na detecção eletroquímica de ¿NO livre, foram utilizadas para mostrar que RSNOs são antioxidantes mais potentes que seus tióis livres correspondentes (RSHs) em codições equimolar. Esses resultados são consistentes com o bloqueio da peroxidação do AL-SDS e LDL por RSNOs através da inativação dos radicais peroxil/alcoxil (LOO¿/LO¿) e pela transnitrosação com hidroperóxidos de AL pré-formado, levando a produtos nitrogenados de AL oxidado, que foram mostrados pela liberação de ¿NO livre por redução com ácido ascórbico. A ação antioxidante de SNAC e GSNO contra a peroxidação da LDL é refletida na quantidade reduzida de ¿NO livre detectado pela decomposição de RSNOs catalisados por Cu (II) na presença da LDL. Esses resultados indicam que RSNOs primários endógenos podem participar no bloqueio da peroxidação lipídica in vivo, não somente através da inativação primária dos radicais alcoxil/peroxil mas também através da inativação dos hidroperóxidos lipídicos pré-formados. A administração oral de SNAC previniu o princípio e progressão da doença não alcoólica do fígado gorduroso (NAFLD) em ratos Wistar alimentados com dieta deficiente em colina e reverteu a NAFLD em diferentes dietas com camundongos ob/ob. Esses efeitos foram correlacionados positivamente com um decréscimo na concentração de hidroperóxidos lipídicos no homogenatos de fígado e com habilidade dos RSNOs em previnir a peroxidação lipídica do ácido linoleico e da LDL in vitro / Abstract: Nitric oxide (¿NO) produced endogenously in humans is considered an effective chain-breaking antioxidant in the inhibition of lipid peroxidation. However, in the plasma and cells of mammals, ¿NO circulates mainly as primary S-nitrosothiols (RSNOs). In this work, the in vitro peroxidation of linoleic acid-SDS comicelles (LA-SDS) and of low density lipoprotein (LDL) catalyzed by soybean lipoxygenase (SLO), Fe (II) and Cu (II) ions, were monitored in the presence and absence of three primary RSNOs: S-nitrosocysteine (CySNO), S-nitroso-N-acetylcysteyne (SNAC) and S-nitrosoglutathione (GSNO) at 37 ºC. Kinetic and spectrophotometric measurements based on the formation of conjugated double bonds, fluorescent oxidized LA-lysine adducts and the electrochemical detection of free NO, were used to show that RSNOs are more potent antioxidants than their corresponding free thiols (RSHs) in equimolar conditions. These results are consistent with the blockage of LA-SDS and LDL peroxidation by RSNOs through the inactivation of peroxyl/alkoxyl (LOO¿/LO¿) radicals and through the transnitrosation with preformed LA hydroperoxides, leading to nitrogen-containing products of oxidized LA, which were shown to release free ¿NO upon reduction with ascorbic acid. The antioxidant actions of SNAC and GSNO against LDL peroxidation are reflected in a reduced amount of free NO detected upon Cu (II)-catalyzed decomposition of RSNOs in the presence of LDL. These results indicate that endogenous primary RSNOs may play a major role in blocking lipid peroxidation in vivo, not only through the primary inactivation of alkoxyl/peroxyl radicals but also through the inactivation of preformed lipid hydroperoxides. Oral administration of SNAC prevented the onset and progression of nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) in Wistar rats fed a choline-deficient diet and reversed NAFDL induced by different diets in ob/ob mice. These effects were positively correlated with a decrease in the concentration of lipid hydroperoxydes in liver homogenate and with the ability of RSNOs to prevent lipid peroxidation of linoleic acid and LDL in vitro / Doutorado / Físico-Química / Doutor em Ciências

Orientadores: Cassio Luis Zanettini Riccetto, Amedea Barozzi Seabra / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T02:17:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Palma_ThaisFigueiredo_M.pdf: 1617036 bytes, checksum: f7941fb5e12e641985c9bf7f687b9499 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Introdução: A síndrome da bexiga dolorosa é uma condição crônica caracterizada por dor suprapúbica relacionada ao enchimento vesical, acompanhada por outros sintomas como urgência urinária, aumento de frequência urinária diurna e noctúria, na ausência de infecção urinária ou de outra doença comprovada. Em parte dos pacientes, a síndrome é atribuída ao processo inflamatório crônico inespecífico do interstício da camada muscular própria da bexiga, também denominada de cistite crônica intersticial (CI). Há relatos acerca da participação do óxido nítrico (NO) na fisiopatologia da CI. Dessa forma, o desenvolvimento de modelos de CI baseados na atividade pró-oxidante do NO poderá contribuir para a evolução do conhecimento acerca de novos métodos terapêuticos para essa condição. Objetivo: O objetivo desse estudo foi desenvolver um novo modelo experimental de indução de cistite intersticial através da instilação intravesical de solução doadora de óxido nítrico, a S-nitrosoglutationa - (GSNO) e compará-lo com um modelo já descrito na literatura, no qual a CI é induzida através da instilação de sulfato de protamina e cloreto de potássio (KCl). Material e Métodos: Foram utilizadas 40 ratas fêmeas (Wistar), divididas em quatro grupos: 1- Solução Salina + GSNO, 2 - Solução Salina + Solução Polimérica (veículo), 3 - Sulfato de Protamina + KCl, 4 - Sulfato de Protamina + GSNO. As ratas receberam uma aplicação (cinco animais) ou três aplicações (cinco animais) da substância correspondente a cada grupo por meio de instilação intravesical e, após seis dias (cinco animais) e nove dias (cinco animais), foram eutanasiados e suas bexigas foram extraídas para avaliação macroscópica e sob microscopia óptica. Resultados: Na avaliação macroscópica observou-se edema e hiperemia da mucosa em dois (22%) dos animais do grupo 1, em zero (0%) dos animais do grupo 2, em dez (100%) dos animais do grupo 3, e em cinco (50%) dos animais do grupo 4. No grupo 3 (Protamina + KCl) e no grupo 1 (Solução Salina + GSNO) observaram-se efeitos semelhantes no urotélio das ratas. Na análise microscópica, observou-se que os animais do Grupo 2 (solução salina + solução polimérica) apresentaram congestão vascular moderada nos dois momentos estudados, a qual foi significativamente menor que nos grupos 1, 3 e 4, após três instilações (p=0,0035). No grupo 3 (protamina +KCl) observou-se a congestão vascular de maior intensidade, sendo acentuada em 33,3% dos animais, nos dois momentos estudados. Em ambos os momentos estudados, a fibrose observada foi ausente ou de leve intensidade, em todos os grupos, sem diferenças significativas entre os grupos protamina e solução salina + GSNO. Observou-se fibrose significativamente maior nos Grupos 3 e 4 após nove dias (p = 0,0459), em relação aos animais controle (grupo 2). Todos os grupos apresentaram infiltrado neutrofílico, de intensidade variável, na avaliação realizada após seis dias, sem diferenças significantes (p=0,7277). Após nove dias, houve tendência de regressão do infiltrado neutrofílico, sem evidência de infiltrado acentuado em todos os grupos (p=0,2301). Após o estímulo inicial, observou-se tendência de regressão do edema ao longo do período de observação. Não foram identificadas diferenças significativas na evolução do edema entre os grupos em ambos os tempos estudados. Conclusão: O modelo proposto reproduziu de forma adequada os aspectos anatomopatológicos da cistite intersticial experimental. Considerando-se que parte das pacientes portadoras de cistite intersticial não apresenta sensibilidade a infusão intravesical de cloreto de potássio, o presente modelo poderá ser empregado para o estudo de novos alvos terapêuticos da cistite intersticial / Abstract: Introduction: Painful Bladder Syndrome is a chronic condition characterized by supra-pubic pain related to vesical filling, also presenting other symptoms as urgency, increased frequency and nocturia, in the absence of urinary tract infection or other proven diseases. In some patients, the syndrome is related to an inflammatory process of the detrusor, also denominated interstitial cystitis. There are findings that lead to a role of NO (Nitric Oxide) in patients with IC. The development of experimental models of IC based on the pro-oxidant activity of the NO may contribute to evolution of the knowledge regarding new therapies for this condition. Objective: The aim of this project is to develop a new experimental model for inducing IC through vesical instillation of a gel with NO donor, the S-nitrosoglutathione - (GSNO) in rats comparing to the gold standard cystitis induction method with protamine and potassium chloride. Material and Method: For that purpose we used 40 female Wistar rats, divided in four groups: 1- saline solution + GSNO, 2- Saline Solution + Polymeric Solution, 3- Protamine Sulphate + KCl, 4- Protamine Sulphate + GSNO. The rats received one dose (five animals) or three doses (five animals) of the corresponding substance through intravesical instillation, and after six days (five animals) or nine days (five animals) they were submitted to euthanasia and their bladders were removed for macroscopic evaluation and anatomic-pathologic study using optic microscopy. Results: In the macroscopic evaluation we observed edema and hiperemia of the mucosa in two (22%) of the animals in group 1, in none (0%) of the animals in group 2, in ten (100%) of the animals in group 3, and in five (50%) of the animals in group 4. In group 3 (Protamine + KCl) and in group 1 (Saline Solution + GSNO) were observed similar effects on the urothelium. In the microscopic analysis, the animals in group 2 (saline = excipient) showed moderate vascular congestion in both times of the stufy. And it was significantly smaller in groups 1, 3 and 4 after three instillations (p=0,0035). In group 3 (protamine + KCl) we observed vascular congestion with higher intensity, acute in 33.3% of the animals, in both times. We observed mild fibrosis in all groups, without significant differences between protamine and saline solution+ GSNO. Fibrosis was significantly higher in groups 3 and 4 (p=0.0459) after nine days when compared to control (group 2). All groups presented neutrophilic infiltrate of variable intensities after six days, with no statistical differences (p=0.7277). After nine days, there was a tendency of regression of the neutrophilic infiltrate, without evidence of acute infiltrate in all groups (p=0.2301). After initial stimuli, there was a tendency of regression of edema along the observation period. There were no significant differences in edema evolution in both times, among the groups. Conclusion: The proposed model reproduced properly the anatomic-pathologic aspects of the experimental interstitial cystitis. Considering that part of the patients with cystitis is not sensitive to intravesical potassium chloride, this model can be used for the study of new therapies for interstitial cystitis / Mestrado / Pesquisa Experimental / Mestre em Cirurgia

Orientador: Marta Helena Krieger / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T17:17:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wanschel_AmarylisClaudineBonitoAzeredo_D.pdf: 3059995 bytes, checksum: afbb018ffe3bb06b61c7420a0fa4664f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a biodisponibilidade do óxido nítrico (NOo) nas disfunções cardiovasculares, especificamente na hipertrofia ventricular esquerda e na aterosclerose. Para tanto, realizamos dois estudos em camundongos deficientes do receptor de LDL (LDLr-/-): o primeiro realizado em continuidade aos estudos desenvolvidos anteriormente em nosso grupo de pesquisa, os quais demonstraram a ação do doador de NOo na prevenção da hipertrofia ventricular esquerda e na proteção contra arritmia via indução do acoplamento adrenoceptor-beta2 (ß2AR) à proteína G inibitória (Gi); e no segundo estudo, foi avaliada a biodisponibilidade de NOo na fase inicial da aterogênese, com objetivo de caracterizar as alterações sistêmicas e locais. No primeiro estudo mostramos que o doador de NOo, S-Nitroso-N-acetilcisteína (SNAC) administrado, promoveu ação cardioprotetora contra o remodelamento cardíaco via redução do estresse oxidativo e apoptose celular, os quais foram determinados pelas medidas ventriculares da produção de superóxido (O-o2) e peróxido de hidrogênio (H2O2) e pelo índice de morte celular por apoptose. Esta ação cardioprotetora foi vista no aumento da expressão e no conteúdo de S-nitrosação do ß2AR. Estes efeitos foram associados à cardioproteção contra a arritmia via indução do acoplamento ß2AR à Gi. O objetivo do segundo estudo foi avaliar a biodisponibilidade de NOo na fase inicial da aterogênese em camundongos LDLr-/- no curso temporal de 15 a 60 dias de dieta, com a quantificação de parâmetros sistêmicos representados pela pressão arterial, perfil lipidêmico e ateroma, bem como de parâmetros locais representados pela atividade e expressão da via NO/NOS e suas modificações póstraducionais no processo inflamatório via CD40-CD40L. Camundongos LDLr-/-submetidos à dieta rica em gordura apresentaram progressão do tamanho do ateroma no curso temporal analisado, contudo não foi associado a similares incrementos nos níveis de dislipidemia. Não foram detectadas alterações na pressão arterial do fenótipo hipertenso deste animal. Contudo, localmente foi verificado incremento na atividade da eNOS via fosforilação de resíduos de serina 1179 (S1179) em 30 dias de dieta rica em gordura, que pode ser considerado um mecanismo emergencial à aterosclerose . Posteriormente, com a evolução do ateroma (60 dias) houve redução desta ativação, bem como do conteúdo de proteínas S-nitrosadas. O desenvolvimento de ateroma em 30 e 60 dias induzido pela dieta mostrou aumento da atividade inflamatória por meio da denitrosação de tióis críticos da via CD40. Portanto, a análise das alterações no curso temporal apresentou somente mudanças locais como alteração na biodisponibilidade de NOo, ativação inflamatória via denitrosação do receptor CD40 e redução do conteúdo de S-nitrosação total, enquanto as alterações sistêmicas neste período de tempo ainda não são evidentes / Abstract: The objective of this study was to evaluate the bioavailability of nitric oxide (NOo) in cardiovascular disorders, specifically on the left ventricular hypertrophy and atherosclerosis. Therefore, we performed two studies with LDL receptor-deficient mice (LDLr-/-): the first one was performed in sequence to the studies previously developed in our research group, which showed the NOo donor action on the prevention of left ventricular hypertrophy and protection against arrhythmia via induction of the coupling from beta adrenoceptor-2 (ß2AR) to the inhibitory G protein (Gi); and the second study,it was evaluated the bioavailability of NOo to characterize the systemic and local alterations in the early stages of atherogenesis. The first study showed that the administration of NOo donor S-Nitroso-N-Acetylcysteine (SNAC) promoted cardioprotective action by blocked the cardiac remodeling through reduction of oxidative stress and of apoptosis, which were determined by measures of ventricular superoxide (O-o2) and hydrogen peroxide (H2O2) production and the cell death index, respectively. This cardiprotective action was charactherized by the increase of expression and content of S-nitrosation of ß2AR. These effects were associated with cardioprotection against arrhythimia via induction of ß2AR coupling Gi. The objective of the second study was to evaluate the bioavailability of NOo in the LDLr-/- mice early atherogenesis in LDLr-/ - mice from 15 to 60 days, with the quantification of systemic parameters represented by the blood pressure, lipidemic profile and atheroma as well as local ones represented by the activity and expression of NO/NOS pathway and its post-translational modifications on the inflammatory process via CD40- CD40L. Mice LDLr-/ - maintained on high-fat diet showed progression of atheroma size, although it was not associated with similar increase in dyslipidemic profile. No changes in blood pressure were detected in the hypertensive phenotype of this animal. However, increased activity of eNOS via phosphorylation of Ser1179 (S1179) at 30 days of high-fat diet was detected and it can be considered an emergential mechanism to early atherosclerosis. The development of atheroma (60 days) blocked that activation as well as the protein content of S-nitrosated. The atheroma induced at 30 and 60 days by high-fat diet revealed increase inflammatory activity through denitrosation of critical thiols via CD40. Therefore, the analysis of changes in this time course showed only local changes as changes on NOo bioavailability alteration inflammatory activation via denitrosation of CD40 receptor and the content of total S-nitrosation reduction. However, systemic changes in this period of time have not been evident yet / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Cássio Luís Zanettini Riccetto, Marcelo Ganzarolli de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T02:05:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_AlessandroCorreaPrudentedos_M.pdf: 2396933 bytes, checksum: 15e0ba5362fd0f6648c8ca4f6aea3f8c (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Introdução: A introdução de telas de polipropileno no reparo de incontinência urinária e distopias genitais diminuiu a recorrência do problema, mas também trouxe o inconveniente de complicações como extrusões vaginais. O óxido nítrico (NO) tem propriedades vasodilatadoras e moduladoras dos processos inflamatórios. Assim, o recobrimento das telas com matriz polimérica eluidora de um carreador de NO pode modificar a resposta tecidual ao implante em organismos biológicos. Objetivo: Estudar o efeito do recobrimento com matriz polimérica eluidora do carreador de NO, S-nitrosoglutationa (GSNO), na resposta biológica tecidual de telas de polipropileno (PP) monofilamentar implantadas no subcutâneo de ratas adultas. Materiais e Métodos: Utilizaram-se 20 ratas fêmeas da raça Wistar (peso médio= 250 g). Cada animal recebeu o implante de 4 fragmentos de tela medindo 10 x 10 mm no subcutâneo. As amostras obtidas dos animais foram divididas em 7 grupos, designados como: grupo PP - tela de PP sem recobrimento (grupo controle) (n=20); grupo PVA -tela de PP com recobrimento de poli(alcool vinílico) (n=10); grupo PVA/PVP - tela de PP com recobrimento de blenda de poli(alcool vinílico)/poli(vinil pirrolidona) (n=10); grupo PVA/GSNO 1 - tela de PP com recobrimento de poli(alcool vinílico), contendo GSNO 1 mM (n=10); grupo PVA/GSNO 10 - tela de PP com recobrimento de poli(alcool vinílico) contendo GSNO 10mM (n= 10), grupo PVA/PVP/GSNO 1 - tela de PP com recobrimento de poli(álcool vinílico)/poli(vinil pirrolodona), contendo GSNO 1mM (n=10); grupo PVA/PVP/GSNO 10 - tela de PP com recobrimento de poli(alcool vinílico)/poli(vinil pirrolodona) contendo GSNO 10mM (n= 10). Dez ratas foram eutanasiadas após 2 dias e outras dez após 21 dias do procedimento cirúrgico. Após a eutanásia, uma excisão em bloco da parede abdominal foi feita para análises microscópicas. Infiltrado inflamatório, edema e angiogênese foram avaliados em lâminas coradas com Hematoxilina-Eosina (HE). A deposição colágena foi avaliada em lâminas coradas com Picrosirius Red. As variáveis estudadas nas lâminas HE foram categorizadas em ausente, leve, moderado ou intenso. A formação colágena foi quantificada com método estereológico. Todas as avaliações foram feitas pelo mesmo pesquisador, que não sabia de que animal ou fragmento se tratava a lâmina que estava analisando. Resultados: Nas ratas eutanasiadas após dois dias do procedimento, não se identificou diferença estatística entre os diversos tratamentos. No entanto, naquelas estudadas após 21 dias do implante, observou-se menor edema (p=0.0039) tecidual e maior angiogênese (p=0.0031) no grupo PVA/GSNO 1. O grupo PVA também demonstrou maior formação vascular que o controle (p=0.0027). Além disso, ratas eutanasiadas aos 21 dias apresentaram maior infiltrado inflamatório (p= 0,0474) e menor edema (p=0,0064) quando comparadas àquelas aos 2 dias. Na quantificação de fibras colágenas, não houve diferença significativa entre os fragmentos. Conclusões: O recobrimento com PVA e PVA contendo GSNO modificou a resposta biológica tecidual de telas de PP monofilamentar implantadas no subcutâneo de ratas adultas. O recobrimento com PVA, isoladamente ou contendo GSNO 1mM demonstrou efeito angiogênico. O grupo PVA/GSNO 1 apresentou, ainda, redução do edema. Não houve diferenças significativas da deposição colágena / Abstract: Introduction: The use of polypropylene (PP) mesh to repair urinary incontinence and vaginal prolapse has decreased recurrence. However, it has also been related to specific complications such as vaginal erosions. Nitric oxide (NO) can produce vasodilatation and modulate inflammatory reaction. The NO containing (S-nitrosoglutathione - GSNO) eluted from a polymeric coating could modify tissue response of meshes. Objective: To study the effect of a NO containing (S-nitrosoglutathione - GSNO) eluted from a polymeric coating in the tissue response of monofilament polypropylene mesh implanted in subcutaneous of rats. Materials and Methods: Twenty adult female Wistar rats were used (mean weight: 250g). Four mesh fragments measuring 10 x 10 mm were implanted in subcutaneous tissue of each rat. The samples were divided in 7 groups: PP group - PP mesh without coating (control) (n=20); PVA group - PP mesh coated with poly(vinyl alcohol) (PVA) (n=10); PVA/PVP group - PP mesh coated with a solution of poly(vinyl alcohol) and poly(vinyl pyrrolidone) (PVA/PVP) (n=10); PVA/GSNO 1 group - PP mesh coated with PVA containing GSNO 1mM (n=10); PVA/GSNO 10 group - PP mesh coated with PVA containing GSNO 10mM (n=10); PVA/PVP/GSNO 1 group - PP mesh coated with PVA/PVP containing GSNO 1mM (n=10); PVA/PVP/GSNO 10 group - PP mesh coated with PVA/PVP containing GSNO 10mM (n=10);. Ten rats were euthanized at 2 days and the other at 21 days postoperatively. Abdominal wall was excised en bloc for microscopic analyses. Inflammatory infiltrate, edema and angiogenesis were analyzed in hematoxilin-eosin (HE) slices and categorized as absent, mild, moderate or severe. The collagen deposition was stained with Picrosirius red and quantified using stereological method. The same researcher did all evaluations without knowing what fragment he was analyzing. Results: No statistical difference was identified among treatments in euthanized rats at two days after the implants. However, in rats studied at 21 days, less edema (p=0.0039) and greater angiogenesis (p=0.0031) were observed for PVA/GSNO 1 group. PVA group also was related to induced a higher angiogenesis (p=0.0027). Furthermore, euthanized rats at 21 days demonstrated a greater inflammatory infiltrate (p= 0,0474) and less edema (p= 0,0064) than those at two days. In collagen deposition analyses no statistical difference was identified among treatments. Conclusion: Coating monofilament PP meshes with GSNO-containing PVA modified the tissue response when implanted in subcutaneous of rats. The PVA alone or with GSNO 1 showed angiogenic effect. The PVA/GSNO1 group presented less edema too. There were not effects in collagen deposition / Mestrado / Cirurgia / Mestre em Cirurgia

Orientador: Luis Carlos Spolidorio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T20:01:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Neves_KarinaAntunes_D.pdf: 1751187 bytes, checksum: adac4b09e6d649c2ec3a0006d3b1ae83 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Vários relatos na literatura sugerem que a Ciclosporina A (CsA) aumenta a remodelação óssea com a reabsorção excedendo a formação, resultando em perda óssea. Os mecanismos da perda óssea associada à CsA são complexos e envolvem marcadores ósseos celulares e produtos dos osteoblastos e osteoclastos. Dentre os mediadores imunológicos, a CsA parece ter efeitos na produção de óxido nítrico (NO), o qual exerce efeitos bifásicos sobre o osso. O objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos da CsA sobre o osso através da mensuração da densidade mineral óssea (BMD), análise bioquímica (fosfatase alcalina total, cálcio sérico e fósforo) e relacionar com a expressão de NO e TNFa pelos macrófagos peritoniais de camundongos. Sessenta camundongos foram divididos em 4 grupos e receberam injeções subcutâneas diárias de CsA 50mg/kg peso corporal, durante os períodos de 7, 14, 28 e 60 dias (n=lO) e o controle recebeu solução salina (n=5). Amostras sanguíneas foram obtidas através de punção cardíaca e foram analisados: cálcio sérico, fósforo e fosfatase alcalina. Os macrófagos peritoniais foram obtidos de cada camundongo, 3 dias após a injeção intraperitonial de tioglicolato de sódio. As células foram incubadas com lipopolossacarídeo . (LPS) e os sobrenadantes foram usados para o ensaio de produção de NO e TNFa. As radiografias digitais dos fêmures foram obtidas através de um sistema de imagem digital, CDRR. A densidade mineral óssea -(BMD) foi avaliada com o auxílio do software Photoshop 7,0 (Microsoft, 2003). A concentração dos marcadores séricos ósseos variou com o tempo de administração da CsA. Houve diminuição de cálcio após 28 dias e fósforo e ALP após 7 dias. A BMD diminuiu significativamente na epífise distal dos fêmures, a partir de 14 dias e na epífise proximal, somente após 60 dias, nos camundongos submetidos ao tratamento com CsA. A produção de NO e TNF-a aumentou significativamente nos camundongos tratados com CsA (período de 7 e 14 dias). A partir dos resultados do presente trabalho confirmamos que a CsA induziu perda óssea. Houve um sinergismo entre a perda óssea e a diminuição de ALP' cálcio e fósforo sérico, assim como o aumento dos níveis de NO e TNF-a / Abstract: Several reports suggest that Cyclosporin A (CsA) causes increased bone turnover and remodeling with resorption exceeding formation, resulting in bone loss. The mechanism of CsA-induced bone loss is complex and can involve cellular bone markers and osteoblasts and osteoclasts products. CsA seems to have effects on nitric oxide (NO) production, which has a biphasic effect on osteoclastic bone resorption. The aim of the present study was to evaluate the effects of the CsA on bone by Bone Mineral Density (BMD), biochemical analysis (Total Alkaline Phosphatase - ALP and serum calcium) and to relate them with the expression of NO and Tumor necrosis factor alpha (TNFa.) by peritoneal macrophage of mice. Sixty male mice were distributed into 4 groups and CsA (Sandimmun Novartis) was injected subcutaneously in a daily dose of 50mg/kg body weight during the periods of 7, 14, 28 and 60 days (n=10), whereas control mice received saline solution (n=5). Blood samples were obtained by direct cardiac puncture. Serum calcium and total alkaline phosphatase levels were obtained. Macrophages were obtained trom the peritoneal cavities of treated and control mice 3 days after intraperitoneal administration of sodium thyoglycollate. Cells were incubated with lipopolysaccharide (LPS). After incubation, the culture supernatants were used for NO-and TNFa production assays. Digital radiographs of femurs were obtained with the use of a computerized imaging system, CDR R. Bone mineral density (BMD) measurements were made with the help of the software Photoshop 7,0 (Microsoft, 2003). The concentration of serum bone markers varied with the period of CsA administration. There was a significant decrease in the calcium levels after 28 days and ALP after 7 days. The BMD decreased significantly on distal epiphysis of femurs after 14 days and on proximal epiphysis after 60 days, in the mice submitted to CsA therapy. NO and TNF-a production had a significant increase in mice treated with CsA (7 and 14 days). Based on the results ofthe present study we confirmed that CsA induces bone loss in vivo. There was a synergism between the bone loss and the decrease of alkaline phosphatase, and calcium, and the increase ofNO and TNF-a / Doutorado / Patologia / Doutor em Estomatopatologia

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T04:20:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tomiosso_TatianaCarla_D.pdf: 1449667 bytes, checksum: 16212cbce1bbf2fc92408a250881b4b4 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Os tendões são estruturas que transmitem a força muscular ao osso. São formados por células imersas em uma matriz extracelular rica em fibras de colágeno paralelas. Tendões, como o calcanear, são resistentes, contudo podem ser acometidos por lesões. Esse tecido lesado não se regenera totalmente e a organização, estrutura e propriedades mecânicas do tendão reparado são inferiores ao tendão saudável. Além disso, há formação de adesão entre o tendão e o tecido conjuntivo adjacente, o que constitui um problema clínico. Tem sido reportado que o oxido nítrico (NO) tem influência na regeneração do tecido e que a inibição da síntese de NO poderia estar diretamente relacionada a uma não recuperação do tecido lesado. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo analisar o dano estrutural e o acúmulo de células inflamatórias após a injúria em tendão calcanear de ratos adultos não tratados e tratados com o inibidor da oxido nítrico sintetase (NOS), L-NAME (N?-nitro-L-arginina metil éster). Para tanto, os animais tiveram seus tendões parcialmente seccionados. Os animais tratados com L-NAME receberam a droga na água de beber quatro dias antes da secção e isto se manteve durante todo o período experimental. Os tendões de animais não tratados e tratados com L-NAME foram removidos aos 7, 14 e 21 dias pós-injúria, e processados para rotina em parafina (Histosec). Foram realizados cortes longitudinais de 7 µm de espessura, corados com Hematoxilina-Eosina (HE), Azul de Toluidina (AT) e Xilidine Ponceau (XP) e analisados em microscopia de luz comum e de polarização. Analisando o material não tratado com L-NAME, foi observada grande quantidade de fibroblastos, hemácias e células inflamatórias, principalmente macrófagos e mastócitos nos tendões de 7 dias pós-injúria, com diminuição progressiva para 14 e 21 dias. Com relação às fibras de colágeno, observou-se o início da reorganização das fibras em 14 dias após a lesão. Em 21 dias o grau de reorganização das fibras é maior, embora se mostre inferior se comparado a um tendão normal. Em contraste, os tendões dos animais tratados com L-NAME, em todos os três tempos, mostraram-se mais acentuadamente infiltrados por células inflamatórias. Em 21 dias pós-injúria essas células inflamatórias persistem, a matriz ainda mostra-se desorganizada e há formação de adesão entre o tendão e o tecido conjuntivo adjacente. Para as análises bioquímicas, os tendões foram divididos em regiões de compressão, de secção e de tensão. A análise em SDS-PAGE dos tendões seccionados normal mostrou uma maior quantidade de colágeno neste, e uma presença marcante de proteínas com Mr entre 14 e 67 kDa nos tendões seccionados de 7 e 14 dias pós-injúria de animais não tratados com L-NAME. O tendão de 21 dias pós-injúria apresenta um padrão de bandas eletroforéticas muito similar ao normal. Nos animais tratados, todos os três tempos apresentaram presença marcante daquelas proteínas. A dosagem de proteínas e quantificação de hidroxiprolina mostrou uma maior quantidade desses componentes nos animais tratados com L-NAME. Entretanto, foi observada uma maior concentração de glicosaminoglicanos (GAGs) nos animais não tratados. Com relação ao tipo de GAG presente nos tendões seccionados foi possível identificar a presença de dermatan sulfato. Os tendões também foram submetidos ao ensaio mecânico sobre tração a fim de avaliar suas propriedades biomecânicas. Durante este ensaio foi constatado que os tendões dos animais tratados com L-NAME são menos resistentes à ruptura. Nossos resultados mostram que o reparo do tendão é complexo e que a presença de NO é fundamental para a recuperação do tecido, visto que nos tendões de animais tratados com L-NAME, o tecido mostrou uma inflamação persistente / Abstract: The tendons are sctructures capable of transmiting force from the muscle to bone. They are formed by cells immersed into a extracellular matrix (ECM) rich in collagen fibres. Tendons, as the calcanear tendons, are capable of supporting high tension force, may also undergoes damages. The damaged tissue does not regenerate completely, and the organization, structure and mechanical properties of a repaired tendon are usually inferior to the healthy tendon. Adhesion between the tendon and the adjacent connective tissue occurs, resulting in a clinical problem. Nitric oxide (NO) influences tissue regeneration, and this inhibition may be correlated a non recuperation of the injured tissue. The aim of this work was to analyze the structural damage and the presence of inflammatory cells after the injury of rats calcaneal tendons non-treated and treated with L-NAME (N?-nitro-L-arginine methyl ester), a nitric oxide sinthase (NOS) inhibitor. The animals had its tendons partially transected. In the NO synthase inhibition experiments animals received L-NAME in their drinking water, ad libitum, for four days prior to surgical lesion of the calcaneal tendon and throughout the post-operative experimental period. The tendons non-treated and treated L-NAME animals were removed at 7, 14 and 21 days post-injury, and processed for paraffin inclusion (Histosec). Longitudinal sections with 7 µm were stained with Hematoxilin-Eosin (HE), Toluidine Blue (TB) and Xylidine Ponceau (XP). The non-treated tendons exhibited large amount of fibroblasts, blood cells and inflammatory cells as macrophages and mast cells, mainly in 7 days post-injury, with progressive decrease at 14 and 21 days. The reorganization of collagen fibers was observed since the 14 days after injury. At day 21 the organization of the collagen fibers, was higher compared to 14 days, but lesser than in the normal tendon. The tendons of L-NAME treated rats, in all periods, exhibited great infiltration of inflammatory cells. In 21 days post-injury of L-NAME treated rats, these inflammatory cells were still present, the ECM disorganization was observed and also adhesion between the tendon and adjacent adhesions tissue. For biochemical analysis, the tendons were divided in compression, section and tension regious. SDS-PAGE analysis of transected and normal tendons, showed a more expressive presence of collagen in normal rats and a remarkable presence of proteins with Mr between 14 and 67 kDa in transected tendons of non treated animals at 7 and 14 days post-injury. The rats, at 21 days post-injury, exhibited protein profile similar to the normal tendon. In L-NAME treated animals, in all tree-points, it was found a significative amount of these proteins. The analysis of protein and hydroxyproline content showed a larger amount of both components larger than in treated animals. On the other hand, a larger concentration of glycosaminoglycans (GAGs) was observed in non-treated animals. The analysis of GAGs in agarose gel showed a proeminent presence of dermatan-sulfate in the section region of both non-treated and treated animals. The biomechanical tests indicated that the L-NAME treated tendons were lesser resistents to rupture than the non-treated tendons. Our results revealed that the repair in tendons is a complex process and that NO is essential for the healing and complete recovering of the tissue, as in tendon of L-NAME treated animals, the tissue exhibited a persistent inflammatory process / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural