Orientadores: Eliana Cotta de Faria, Helena Coutinho Franco de Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:22:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kaplan_DeniseBeheregaray_D.pdf: 10733880 bytes, checksum: 7bc4dedce9618f10fead35e537386b71 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Em inúmeros estudos prospectivos observa-se uma associação inversa entre a concentração da lipoproteína de alta densidade (HDL) e risco de doença arterial coronariana (DAC). Uma das propriedades antiaterogênicas da HDL é sua participação no transporte reverso de colesterol (TRC). A proteína de transferência dos ésteres de colesterol (CETP) promove a troca de ésteres de colesterol (EC) e triacilglicerol (TAG) entre HDL e outras lipoproteínas, aumentando o colesterol das lipoproteínas apoB. Mutações/polimorfismos no gene da CETP foram detectados em várias populações, especialmente asiáticas. Apesar da menor atividade de CETP e hiperalfaliporpteinemia (HALP), interroga-se quanto a prevalência de doença cardiovascular (DCV) nestes indivíduos. o objetivo deste trabalho foi avaliar, em população de brasileiros HALP, a prevalência de mutações/polimorfismos do gene da CETP e manifestações bioquímicas e ateroscleróticas deste fenótipo. Foram determinados lípides, lipoproteínas e parâmetros metabólicos plasmáticos marcadores de DCV, numa população de 291 a 294 indivíduos HALP (HDL-C ~ 68mg/dl) e 139 controles (HDL-C < 68mg/dl). A prevalência das mutações Int14A e D442G e dos polimorfismos Taqill e 1405V,no gene da CETP, foi investigada por análise genôrnica. Aterosclerose nos pacientes com mutações/polimorfismos foi avaliada clinicamente e por medida da espessura íntima-média arterial (IMT) pela ultra-sonografia das carótidas. Na população HALP, HDL-C apresentou valor 1.5 maior do que controles. A prevalência da mutação Int14A no grupo HALP foi de 4%, baixa, porém maior do que a descrita em caucasianos, e de 0,7% na D442G, muito baixa e menor do que emjaponeses/asiáticos. No grupo HALP, verificou-se aumento das atividades de lipoproteína lipase (LPL) e da proteína de transferência de fosfolípides (pLTP) e redução de CETP e lipase hepática (HL). O grupo de mutantes (7 indivíduos) comparado ao controle, evidenciou tendência semelhante. A paciente homozigótica Int14A, apresentou atividade indetectável de CETP e reduzida de HL, além de HALP severa. Um dos pacientes, heterozigótico D442G, mostrou aumento do IMT em relação aos controles, e um dos heterozigóticos Int14A, DCV estabelecida. genótipo BIB2, do polimorfismo TaqIB, apresentou prevalência de 45% e o IV de I405V, 49%. Comparando os genótipos entre S4em B2B2 de TaqIB, encontrou-se aumento do IMT, diminuição de auto-anticorpos anti lipoproteína de baixa densidade oxidada (LDL-oxidada) e menor atividade de CETP. A atividade de CETP mostrou-se aumentada no genótipo II de I405V, com redução da HDL-C. As lipoproteínas, apolipoproteínas e lípides, foram semelhantes entre os diversos genótipos, bem como LPL, HL e PLTP. o fenótipo HALP caracterizado neste estudo por dimuição das atividades de CETP e HL e aumento de LPL e PLTP não demonstrou associação com a presença das mutaões e/ou polimorfismos estudados. É possível que a baixa fteqüência das mutações de CETP não nao tenha permitido caracterizar estatisticamente esta associação. Mutações de outras proteínas, como por exemplo de HL, poderiam explicar este fenótipo. Os indivíduos HALP, portadores de mutações, não mostraram diferença quanto a aterosclerose clínica e IMT em relação aos controles, apesar de alguns pacientes isoladamente apresentarem sinais clínicos de DCV. Estes resultados não permitiram caracterizar a condição de HALP como cardioprotetora ou não. Estudos complementares necessitam ser realizados para uma melhor compreensão do fenótipo de hiperalfalipoproteinernia no contexto do risco cardiovascular aterosclerótico / Abstract: There is an inverse association between the concentration of high density lipoprotein (HDL) and the risk of a coronary arterial disease (CAD). One ofthe HDL anti-atherogenic properties is its participation in the reverse cholesterol transport (RCT). The cholesteryl ester transfer protein (CETP) facilitates the cholesteryl esters (CE) and triglycerides (TAG) exchange between HDL and others lipoproteins, increasing the cholesterol content of apoB lipoproteins. Mutations and polymorphisms of the CETP gene were detected in several populations, especially among Asiatic. In spite of a lower activity of the CETP and an increase of the HDL-C leveI in hyperalphalipoproteinemia (HALP), there are some doubts in regard to the prevalence ofthe cardiovascular disease (CVD) in these population groups. The aim of this work was to evaluate the prevalence of HALP and its relationship to the presence ofmutations and polymorphisms ofthe CETP gene, in a Brazilian population, and its relation with the arteriosclerosis.We determined lipid, lipoproteins, metabolic plasmatic parameters and markers of CVD, in a population of 291 to 294 HALP individuaIs (HDL-C 2: 68mg/dl) and 139 controls (HDL-C < 68mg/dl). The prevalence of the mutations Int14A and D442G, and the polymorphisms TaqIB and 1405V, was investigated by molecular methods. The presence of atherosclerosis in those patients with mutations and polymorphisms and in controls, was evaluated by clínical analyzes and measurements of the arterial intima-media thickness (IMT) by ultrasound method was performed. HDL-C was 1.5 higher in the HALP when compared to controls. A very low prevalence equal to 0.7% was found for D442G mutations, lower than in the Asiatic and Japanese population, and 4% for Int14A mutations, higher than the one described in the Caucasians. On HALP, the activities of lipoprotein lipase (LPL) and phospholipid transfer protein (PLTP) were higher and activities of CETP and hepatic lipase (HL) were lower than in controls. The seven mutants presented similar tendencies. The homozygous Int14A, showed indetectable activity of CETP and a reduction of HL, besides very high values of HDL-C. The BIB2 TaqIB genotype presented a :&equencyequal to 45%, and the IV I405V to 49%. Comparing all genotypes, B2B2 TaqIB presented higher IMT, lower autoantibodies against oxidized low density lipoprotein (LDLox) and lower CETP activity. The II I405V showed a highest CETP activity and a lowest HDL-C value. The lipoproteins, lipids and apolipoproteins were equal among all genotypes, as well as activities of LPL, HL and PLTP. The HALP phenotype was characterized by lower CETP and HL activities and higher LPL and PLTP activities when compared with controls but with no association with mutations or polymorphisms studied. It is possible that the low :&equencyof CETP mutations made impossible this statistic association. Perhaps other mutations, like in HL gene, could explain this phenotype. The HALP mutants did not show a difference in c1inical atherosc1erosis and IMT as compared with controls, although some individuaIs presented clinical signs ofCVD. These results did not discard the possibility ofthe HALP phenotype as a cardioprotector or not. Complementary studies will have to done to amplify the investigation of other mutations and polymorphisms of CETP and or HL and to try to establish a relationship between HALP and atherosclerosis / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Helena Coutinho Franco de Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:08:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Berti_JairoAugusto_D.pdf: 3695529 bytes, checksum: 1f1e5f04eab6fa0e663e6d40108caa7e (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: A proteína de transferência de colesteril éster (CETP) é uma glicoproteína que estimula a troca de colesteril éster das HDL por triglicérides das lipoproteínas que contém apolipoproteína B (apoB). Tanto a variação da expressão da CETP quanto o diabetes experimental podem alterar a aterogênese. Em trabalhos anteriores, resultados contrastantes foram obtidos em diferentes modelos animais e contextos metabólicos. Em um primeiro estudo investigamos a variação da expressão da CETP em camundongos transgênicos diabéticos por tratamento com estreptozotocina, hiperinsulinêmicos com suplementação de glicose, apenas suplementados com glicose e controles. Os resultados mostraram que: 1- na hiperglicemia e deficiência de insulina (diabetes) ocorre aumento dos níveis plasmáticos e de mRNA hepático de CETP, 2- a suplementação da dieta com glicose aumenta a expressão da CETP por mecanismos pós-transcricionais, e 3- a hiperinsulinemia reprime a expressão da CETP estimulada pela glicose por reduzir a concentração de seu rnRNA. Em um segundo estudo, avaliamos os efeitos da expressão da CETP e do diabetes experimental sobre a aterosclerose da raiz da aorta de camundongos deficientes de receptores de LDL (LDLR) alimentados com dieta aterogênica. Os resultados mostraram que: 1- a expressão da CETP não altera a formação da lesão aterosclerótica dos animais diabéticos, embora ela possa ser protetora para animais euglicêmicos, 2- a concentração de triglicérides plasmáticos é um fator de risco independente em animais deficientes de LDLR mas não para os animais que expressam a CETP, 3- a concentração de colesterol plasmático aumenta significativamente as chances de desenvolvimento de lesões com tamanho acima da mediana, independentemente do genótipo e da presença de diabetes, e 4- a hiperglicemia contribui para o aumento do risco de aterosclerose. Em um terceiro estudo investigamos o efeito da super-expressão, isolada ou combinada, da CETP, da apolipoproteína (apo) AI e da lecitina-colesterol-acil-transferase (LCA T), sobre o desenvolvimento de aterosclerose induzida por dieta em camundongos transgênicos envelhecidos. Os resultados mostraram que: 1- as expressões de LCA T e LCA T /apoAI resultam em aumento de risco de desenvolvimento de lesão aterosclerótica, 2- a co-expressão da CETP com LCA T e LCA T/apoAI neutraliza o efeito aterogênico e 3- a expressão isolada de apo AI reduz as chances de desenvolvimento de lesões com tamanho acima do percentil 75 / Abstract: Cholesteryl ester transfer protein (CETP) mediates cholesteryl ester and triglyceride redistribution among plasma lipoproteins. Contrasting effects of variations in CETP expression and presence of diabetes on the extension of atherosclerosis have been reported in distinct animal models and metabolic contexts. The CETP expression was studied in streptozotocin induced diabetic, in glucose fed, in glucose fed plus hyperinsulinemic and in control transgenic mice. The results showed that: 1- insulin deficiency and hyperglycemia increase CETP plasma levels and liver mRNA expression; 2- glucose supplementation increases CETP expression by post-transcriptional mechanisms; and 3- hyperinsulinemia downregulates the glucose-stimulated CETP expression by reducing its mRNA levels. In a second study, the effects of diabetes and CETP expression on the diet induced atherosclerosis in LDL receptor deficent mice were evaluated. The results showed that: 1CETP expression does not alter the responsiveness of lesion formation to diabetes, although it may be protective in euglycemic state, 2- triglyceride concentration is an independent risk factor in LDL receptor deficient mice but not in CETP expressing mice, 3- plasma cholesterollevels significantly increase the chances of developing large size atherosclerotic lesions, independently of genotype and presence of diabetes, and 4hyperglycemia contributes to the risk of atherosclerosis. In a third study, we investigated the effects of over-expressing three genes involved in the reverse cholesterol transport: apolipoprotein AI, lecithin-cholesterol acyl transferase (LCA T) and CETP on the development of diet induced atherosclerosis in aged mice. The results showed that: 1- LCA T and LCA T / AI expression impose a higher risk of developing atherosclerosis, 2- CETP expression on these backgrounds neutralizes this atherogenic scenario, and 3- isolated, apoAI overexpression reduces the chances of developing large size atherosclerotic lesions / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Maria Heloisa Souza Lima Blotta, Juliano Lara Fernandes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências / Made available in DSpace on 2018-08-16T20:44:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teo_FabioHaach_M.pdf: 2875757 bytes, checksum: 05e700b681fa1d2f1ab33728ed6b7f2e (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A aterosclerose é uma doença inflamatória caracterizada por uma intensa atividade imunológica que culmina na formação de lesões nos vasos sanguíneos. As síndromes coronarianas agudas (SCA) representam graves complicações da aterosclerose. Pacientes com SCA podem ser diferenciados de indivíduos saudáveis pela frequência aumentada de células T CD4+ CD28null no sangue periférico. Tais células têm sido relacionadas a processos inflamatórios crônicos, como os que ocorrem em indivíduos portadores de fatores de risco clássicos para a doença aterosclerótica. O objetivo do presente estudo foi avaliar as possíveis diferenças quanto ao número e as características das células T CD4+ CD28null presentes no sangue periférico de pacientes com doença coronariana e indivíduos saudáveis com ou sem fatores de risco para o desenvolvimento de aterosclerose. Para tanto, células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de controles (C), indivíduos portadores de fatores de risco (FR), pacientes com angina estável (AE) e pacientes com síndromes coronarianas agudas (SCA) foram diretamente submetidas à citometria de fluxo (ex vivo) para quantificação de células CD4+ CD28null e detecção de perforina, granzimas A e B, granulisina, CD161, CCR5, CCR7, CXCR3, IFN-? e TNF-?. As células foram cultivadas na presença de anti-CD3 e ionóforo de cálcio por 6hs com posterior análise da expressão de citocinas inflamatórias e também com LPS por 48hs, seguida da avaliação da expressão de moléculas citotóxicas e receptores de homing frente a estímulo inflamatório. A concentração plasmática da proteína C reativa (PCR) também foi determinada. Nossos resultados mostraram que a porcentagem de células CD4+ CD28null em relação aos linfócitos totais do sangue periférico foi similar em todos os grupos. A análise ex vivo mostrou que a população de células CD4+ CD28null apresenta maior expressão de grânulos citotóxicos (granzimas A e B, perforina e granulisina) e dos receptores de homing CCR5 e CD161 quando comparadas à população de células CD4+CD28+, enquanto que a expressão do CCR7 e do CXCR3 é menor. A frequência de células IFN-g+ foi maior na população CD4+ CD28null. Tal padrão se repetiu em todos os grupos, com praticamente todos os parâmetros se comportando dessa maneira. Entretanto, quando comparamos as células CD4+ CD28null dos diferentes grupos, verificamos que a perforina e as granzimas A e B foram mais frequentes nas células de indivíduos com fatores de risco e pacientes com SCA. Com relação às moléculas de homing e ao IFN-?, houve maior positividade para CCR7 nas CD4+ CD28null de controles e pacientes AE, enquanto o IFN-? foi mais frequente nas células dos pacientes AE. A estimulação das CMSP com anti-CD3 e ionóforo de cálcio mostrou que as células CD4+ CD28null dos grupos FR e SCA têm maior capacidade inflamatória quando comparadas às células de controles e de pacientes AE, o que foi evidenciado por um maior aumento na positividade para o TNF-?. Após estimulação das CMSP com LPS, a população CD4+ CD28null apresentou diminuição da expressão dos grânulos citotóxicos analisados, o que ocorreu em todos os grupos. Com relação às moléculas de homing, a estimulação com LPS causou uma diminuição da frequência de CD4+ CD28null positivas para CCR5 em todos os grupos, enquanto houve aumento da positividade para o CXCR3 nas células do grupo AE. Os pacientes SCA apresentaram as maiores concentrações plasmáticas de PCR, seguido pelos indivíduos do grupo FR e finalmente pelos controles e pacientes AE. Coletivamente, nossos resultados mostraram que os fatores de risco para aterosclerose causam alterações fenotípicas na população CD4+ CD28null, tornando-a mais citotóxica e inflamatória, o que poderia estar associado com a inflamação subclínica observada nessas condições. Além disso, os dados sugerem que as células CD4+ CD28null degranulam e alteram a expressão de receptores de homing quando estão em ambiente inflamatório, como ocorre na placa aterosclerótica e/ou na vigência de infecções microbianas / Abstract: Atherosclerosis is an inflammatory disease characterized by an intense immunological activity, resulting in vascular lesions. The acute coronary syndromes (ACS) are one of the complications of atherosclerotic disease. Patents with SCA can be differentiated from healthy individuals by an increased frequency of CD4+ CD28null T cells in peripheral blood. These cells have been associated with chronic inflammatory processes, which occur in individuals with risk factors for coronary artery disease. This study aimed to evaluate the possible differences regarding the number and characteristics of peripheral blood CD4+ CD28null cells from patients with coronary artery disease and healthy individuals with and without risk factors for atherosclerosis. In order to achieve this goal, peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from healthy controls (C), individuals with risk factors (RF), patients with stable angina (SA) and patients with acute coronary syndromes (ACS) were analyzed by flow cytometry (ex vivo) to quantify CD4+CD28null cells and to detect the expression of perforin, granzymes A and B, granulysin, CD161, CCR5, CCR7, CXCR3, IFN-? and TNF-?. Cells were cultured with anti-CD3 and calcium ionophore for 6 h and analyzed regarding inflammatory cytokine expression. The cells were also cultured with LPS for 48h to evaluate expression of cytotoxic molecules and homing receptors in response to inflammatory stimulus. The plasmatic concentrations of C reactive protein (CRP) were also measured. Our results showed that the percentage of CD4+ CD28null cells in relation to total lymphocytes in peripheral blood was similar in all groups. Regarding the CD4+ CD28null population phenotype, it was observed an increased expression of cytotoxic molecules (granzymes A and B, perforin and granulysin) and homing receptors CCR5 and CD161 compared to CD4+CD28+ population. In contrast, expression of CCR7 and CXCR3 was decreased in CD4+ CD28null population. IFN-? frequency was also increased in CD4+ CD28null cells. This pattern was found in all groups, in relation to almost all analyzed parameters. Nevertheless, when CD4+ CD28null cells from the different groups were compared, it was observed that the positivity for perforin and granzymes A and B were increased in cells from individuals with risk factors and ACS patients. On the other hand, granulysin was more frequent in CD4+ CD28null cells from AS patients and controls. Moreover, the positivity for CCR7 was increased in CD4+ CD28null cells from control and SA patients while IFN-? was more frequent in cells from SA patients. PBMC stimulation with a anti-CD3 and calcium ionophore for 6h showed that CD4+ CD28null cells from RF and ACS groups have an increased inflammatory capacity when compared to cells from control subjects and AE patients, which is evidenced by a bigger increase in positivity for TNF-?. After PBMC stimulation with LPS for 48hs, CD4+ CD28null population had a decrease in cytotoxic molecules expression, fact that occurred in all groups. Regarding the homing molecules, LPS stimulation caused a huge decrease of CCR5 frequency in CD4+ CD28null cells from all groups while there was a significant increase of positivity for CXCR3 in the cells from SA patients. The highest CRP plasmatic concentrations were found in ACS patients, followed by subjects from RF group. The lowest levels were found in controls and SA patients. Taking together, our results show that risk factors for atherosclerosis lead to phenotypic alterations in CD4+ CD28null population, which became more cytotoxic and inflammatory. Such alterations may be associated with the low-grade inflammation found in patients with hypertension, diabetes, dyslipidemia and smocking. Beyond that, our data suggests that CD4+ CD28null cells degranulate and modify homing receptor patterns when they are in an inflammatory environment, which takes place in atherosclerotic lesions and/or infections / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador : Prof. Dr. Roberto Pontarolo / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 21/08/2015 / Inclui referências : f. 98-103 / Área de concentração: Isumos, medicamentos e correlatos / Resumo: A sinvastatina comprimidos é um medicamento amplamente utilizado no mundo para o tratamento de dislipidemias. Até o presente momento, não foi possível estabelecer uma correlação in vitro - in vivo com sucesso para este medicamento. O objetivo do presente trabalho foi avaliar esta correlação e comparar os resultados com um estudo de caraterização do estado sólido deste insumo farmacêutico ativo oriundo de cinco fornecedores diferentes, e investigar possíveis interações fármaco - excipientes que possam resultar na redução da solubilidade da sinvastatina. Cinco lotes de sinvastatina, oriundos de fornecedores distintos, foram caracterizados por meio de avaliação da solubilidade em equilíbrio, pureza cromatográfica, perfil granulométrico, microscopia óptica de luz polarizada, microscopia eletrônica, perfil calorimétrico, espectroscopia no infravermelho médio e difração de raios X. Apesar de todos os lotes pertencerem a mesma forma polimórfica, diferenças significativas no grau de cristalinidade, na solubilidade em equilíbrio e no perfil granulométrico foram verificadas entre os lotes. Aparentemente, os lotes que sofreram micronização apresentam menor grau de cristalinidade, e consequentemente, maior solubilidade. O estudo de compatibilidade química demonstrou interação entre a sinvastatina e o butilhidroxianisol, com formação de mistura eutética. Sabe-se também que os excipientes impactam na solubilidade do ativo, porém neste estudo somente o estearato de magnésio causou impacto nas quantidades normalmente empregadas na formulação. A quantidade ideal deste excipiente, para que se obtenha a melhor relação entre a solubilidade da sinvastatina e o tempo de desintegração do comprimido, foi de 1,0%. O perfil de dissolução não se demonstrou uma ferramenta válida na previsão da performance in vivo, porém verificou-se relação entre solubilidade em equilíbrio da sinvastatina na formulação e extensão da absorção in vitro. Palavras-chave: sinvastatina, solubilidade em equilíbrio, caracterização do estado sólido. / Abstract: Simvastatin tablets are employed to treat dyslipidemia widely around the world. Currently, a valid in vitro - in vivo correlation has not been established successfully. The aim of the present work was to assess this correlation, and compare the results with a solid-state characterization study, as well as to investigate possible drug - excipients interactions that may lead to a decrease in simvastatin solubility. Five batches of simvastatin, arising from different suppliers, were characterized by means of intrinsic solubility evaluation, chromatographic purity, particle size profile, polarized light optical microscopy, electronic microscopy, calorimetric profile, infrared measurement and X-ray powder diffraction. Although all lots referred to the same polymorph, significant differences in crystallinity degree, intrinsic solubility and particle size profile of each batch could be seen. Apparently, batches that have undergone micronization have a lower degree of crystallinity and, consequently, increased solubility. Chemical compatibility study demonstrated interaction between simvastatin and butylhydroxyanisole with eutectic mixture formation. Also, excipients influence simvastatin' solubility, but only magnesium stearate causes impact in amounts normally used in formulation. The ideal amount of this excipient to obtain the better relationship between simvastatin solubility and tablet disintegration was 1.0%. The dissolution profile was not a valid tool in forecasting in vivo performance, however, a relationship between simvastatin solubility in water when in formulation and in vitro absorption extension were observed. Keywords: simvastatin, intrinsic solubility, solid-state characterization.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-10-03Bitstream added on 2014-06-13T19:43:49Z : No. of bitstreams: 1 silva_vs_dr_botfm.pdf: 440272 bytes, checksum: 6b0fe0b995cca2a7a237d3581d1b4ac5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Clicar acesso eletrônico abaixo. / Click electronic access below.

A aterosclerose é uma doença pró-inflamatória, caracterizada por disfunção endotelial e pela presença de placa de ateroma, formada pela fagocitose de oxLDL por macrófagos da região subíntima. As espécies reativas apresentam um papel importante na doença, sendo responsáveis diretos pela oxidação da LDL. Os macrófagos podem apresentar dois fenótipos, o classicamente ativado, M1 (pró-inflamatório), e o alternativamente ativado, M2 (anti-inflamatório). Entretanto, o papel desses fenótipos na aterosclerose ainda carece de um maior entendimento. Portanto, nosso objetivo foi, em um primeiro momento, revisar os dados presentes na literatura sobre oxidação de LDL e fenótipos de macrófagos em aterosclerose. Em um segundo momento, objetivamos comparar (através de estudo de bioinformática) as expressões de grupos de genes antioxidantes (HAG), de genes relacionados ao fenótipo M1 e de genes relacionados ao fenótipo M2 entre macrófagos de pessoas com aterosclerose e de pessoas saudáveis e entre placas de aterosclerose humanas em estágio avançado e em estágio inicial. Os dados de expressão foram obtidos do repositório GEO (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/), enquanto as interações funcionais foram obtidas com os programas STRING (http://string-db.org/) e Medusa (http://coot.embl.de/medusa/). As análises estatísticas foram conduzidas com o programa ViaComplex (http://lief.if.ufrgs.br/pub/biosoftwares/viacomplex/) ze com a plataforma GSEA (http://www.broadinstitute.org/gsea/index.jsp). A expressão dos grupos de genes HAG e M1 aumentou nas placas em estágio avançado em comparação às placas em estágio inicial. A expressão dos grupos de genes HAG, M1 e M2 aumentou nos macrófagos de pessoas com aterosclerose em comparação com os macrófagos de pessoas saudáveis, mas somente o grupo de genes M1 teve sua expressão aumentada em células espumosas (foam cells) de pessoas com aterosclerose em comparação com pessoas saudáveis. Por outro lado, houve uma diminuição na expressão do grupo de genes M1 em foam cells de pessoas saudáveis em comparação com macrófagos do mesmo grupo de indivíduos. Portanto, nossos resultados sugerem que, diferente do que acontece em câncer, na aterosclerose não há uma polarização dos fenótipos de macrófagos. Na verdade, ambos estão aumentados e mais estudos são necessários para melhor elucidar os mecanismos envolvidos. Palavraschave: antioxidantes, aterosclerose, macrófagos, polarização, M1/M2. / Atherosclerosis is a pro-inflammatory disease, which is characterized by endothelial dysfunction and atheroma plaque formation, as a result of oxLDL phagocytosis by macrophages in subintima region. Reactive species play an important role, being involved with the LDL oxidation process. Macrophages can present two phenotypes, classically activated, M1 (pro-inflammatory), and the alternatively activated, M2 (antiinflammatory). However, the role of these phenotypes needs to be better explained. Therefore, our objective is to review the literature data about LDL oxidation and macrophage phenotypes in atherosclerosis. Thereafter, we aimed to compare, through bioinformatics study, the expression of human antioxidant genes (HAG), M1 phenotype-related genes and M2 phenotype-related genes groups between healthy people macrophages and atherosclerotic people macrophages, and between human advanced atherosclerotic plaques and human initial atherosclerotic plaques. Expression data were obtained from GEO (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/), while functional interactions were from STRING (http://string-db.org/) and Medusa (http://coot.embl.de/medusa/). The statistical analysis was conducted with ViaComplex (http://lief.if.ufrgs.br/pub/biosoftwares/viacomplex/) and GSEA (http://www.broadinstitute.org/gsea/index.jsp). The expression of HAG e M1 groups increased in advanced plaques compared to initial plaques, while the expression of HAG, M1 e M2 groups increased in atherosclerotic people macrophages compared to healthy people macrophages. Nevertheless, only M1 group had its expression elevated in atherosclerotic people foam cells compared to healthy people foam cells. On the other hand, there was a decreased expression of M1 group in healthy people foam cells compared to the macrophages from the same individuals set. Thus, our results suggest that in atherosclerosis there is not a macrophage phenotype polarization, differently of what happens for cancer. Actually, both phenotypes are increased and more studies are needed to better elucidate the involved mechanisms. Key-words: antioxidants, atherosclerosis, macrophages, polarization, M1/M2.

A aterosclerose é uma doença extremamente grave que leva à morte milhares de pessoas em todo o mundo. A ruptura do balanço intracelular que leva ao acúmulo de colesterol é uma das principais características observadas nas células que participam do desenvolvimento da lesão aterosclerótica. Estudos de nosso grupo mostraram que as prostaglandinas ciclopentenônicas (CP-PGs), em particular a PGA2, desviam o metabolismo lipídico de macrófagos e macrófagos-foam cells reduzindo a síntese de novo de colesterol e ésteres de colesterol e induzindo a síntese de fosfolípides, no lugar dos derivados do colesterol. Além disso, as CP-PGs são potentes agentes antiinflamatórios por promoverem diretamente a inibição da ativação do fator nuclear NF-κB e, indiretamente, pela ativação das proteínas de choque térmico (HSP), o que também leva à citoproteção. O resultado combinado dessas alterações é que a PGA2 induz uma potente redução na quantidade de colesterol total em macrófagos-foam cells revertendo seu fenótipo ao de uma célula normal. Assim, e tendo em vista que a aterogênese e o acúmulo de lipídios por macrófagos está relacionado a disfunções na capacidade de regulação de síntese e exportação de lipídios, o objetivo deste estudo foi investigar o mecanismo de ação da PGA2 sobre a atividade e expressão de enzimas que participam do metabolismo do colesterol, a saber, acil-coenzima A: colesterol acil-transferase (ACAT) e 3- hidróxi-3-metilglutaril-coenzima A redutase (HMG-CoA redutase). Foi estudada, também, a possibilidade de que o efeito desta prostaglandina pudesse dar-se pela indução de alterações no estado redox celular e expressão de proteínas relacionadas à iniciação e desenvolvimento da lesão ateromatosa em macrófagos. Verificamos que, apesar de a PGA2 inibir a atividade da ACAT em macrófagos/foam cells, o mesmo não ocorre com macrófagos normais. Contudo, a PGA2 apresenta um potente efeito inibitório sobre a atividade da HMG-CoA redutase, mas não sobre a expressão da proteína ou de seu mRNA. Os dados obtidos com a PGA2, que é um agente eletrofílico, são mimetizados e potencializados por manobras que alteram as concentrações intracelulares de glutationa (GSH) e dissulfeto de glutationa (GSSG) e confirmados pela expressão de proteínas cujos fatores de transcrição específicos são sensíveis ao estado redox, como a HSP70 (via HSF), MRP1 (via Nrf2/Keap1) e iNOS (via NF-κB). Os resultados implicam as CP-PGs como uma nova classe de agentes hipocolesterolemiantes através da modulação do estado redox celular. / Atherosclerosis is a leading cause of death in the world. Disruption of the intracellular lipid balance, which leads to cholesterol accumulation is one of the features of cells that participate of the development of atherosclerotic lesions. Evidence form our laboratory indicates that cyclopentenone prostaglandins (CP-PGs), particularly PGA2, deviate lipid metabolism from the synthesis of cholesterol and cholesteryl esters to the synthesis of phospholipids in foam cell macrophages. Moreover, CP-PGs are powerful anti-inflammatory agents by directly inhibiting nuclear factor NF-κB, and indirectly through the activation of heat shock protein (HSP) pathway, which, in turn, confers cytoprotection. The combined effect of such alterations is that PGA2 dramatically reduces cholesterol contents in foam cell macrophages, thus reversing its phenotype to that of a normal cell. Hence, and since atherogenesis and lipid accumulation by macrophages are related with dysfunctions in the ability of regulating lipid synthesis and export, the aim of this study was to investigate the mechanism of action of PGA2 on the activity and expression of enzymes related to cholesterol metabolism, namely, acyl-coenzyme A: cholesterol acyltransferase (ACAT) and 3-hidroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase (HMG-CoA reductase). The possibility that the effects of this CP-PG were modulated by alterations in the intracellular redox status and expression of proteins related to the initiation and development of atheromatous lesions in macrophages was also investigated. We found that, although PGA2 did inhibit ACAT activity in foam cell macrophages, the same was not true for normal macrophages. However, PGA2 showed a powerful inhibitory effect of HMG-CoA reductase activity but not in the expression of both protein or mRNA. The data obtained with PGA2, which is an electrophilic agent, were mimicked and potentialized by certain maneuvers that alter intracellular glutathione (GSH) and glutathione disulphide (GSSG) contents and were confirmed by the expression of proteins whose specific transcription factors areredox-sensitive, such as HSP70 (via HSFs), MRP1 (via Nrf2/Keap1) and iNOS (via NF-κB). The results indicate CP-PGs as a new class of hypocholesterolemic drugs by virtue of their capacity to modulate intracellular redox status.

Mieloperoxidase (MPO) é uma enzima derivada de leucócitos que catalisa a formação de numerosas espécies reativas oxidantes. Além de integrantes da resposta imune inata, evidências têm comprovado a contribuição destes oxidantes para o dano tecidual durante inflamação. A MPO participa de atividades biológicas pró-aterogênicas relacionadas à evolução da doença cardiovascular, incluindo iniciação, propagação e as fases de complicação aguda do processo aterosclerótico. Desta forma, a MPO e sua cascata inflamatória representam um alvo atrativo para investigação prognóstica e terapêutica na doença aterosclerótica cardiovascular. Vários estudos apontam para o efeito independente dos níveis de MPO na evolução da doença e ocorrência de eventos em pacientes com síndrome coronariana aguda. Entretanto, ainda não é consistente o valor preditivo adicional da dosagem de MPO na estratificação de risco cardiovascular para incorporá-la à prática clínica como sinalizadora de vulnerabilidade de placa. Estudos adicionais são necessários para avaliar os níveis de MPO como preditor de risco cardiovascular em curto e longo prazo, bem como o potencial benefício em utilizá-la para definir estratégias terapêuticas, além da padronização do ensaio, ponto fundamental para a transição desse marcador do ambiente de pesquisa para uso na rotina clínica.

RIBEIRO, Demóstenes Goncalves Lima. Análise do fragmento amino-terminal do pro-peptídeo natriurético tipo B e de fatores de risco para oclusão coronariana aterosclerótica angiográfica em pacientes com a hipótese diagnóstica de cardiopatia isquêmica. 2009. 129 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-06-08T11:56:15Z No. of bitstreams: 1 2009_tese_dglribeiro.pdf: 1810178 bytes, checksum: 8d799babe26fd20b5d349f9de460f99c (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-06-11T15:29:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_tese_dglribeiro.pdf: 1810178 bytes, checksum: 8d799babe26fd20b5d349f9de460f99c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-11T15:29:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_tese_dglribeiro.pdf: 1810178 bytes, checksum: 8d799babe26fd20b5d349f9de460f99c (MD5) Previous issue date: 2009 / Cardiovascular diseases, including ischemic heart disease, are the main causes of death in Brazil. Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease that starts in the childhood, progresses slowly and shows up many decades later. It begins as an endothelial dysfunction and has as its main risk factors the male sex, age, smoking, hypercholesterolemia, arterial hypertension, diabetes mellitus and a background of early family atherosclerotic disease. The rise of many biochemical markers in the plasma signals the presence of inflammation in the atherosclerosis. The brain natriuretic peptide and the amino-terminal pro-B-type natriuretic peptide (NT-proBNP) also increase in coronary atherosclerosis. This is a cross-sectional and observational study of 153 in-patients at the Cardiology Ward of HUWC-UFC from 08.01.2007 to 03.31.2008 with the diagnostic hypothesis of Ischemic Heart Disease, i.e., stable angina, unstable angina or acute myocardial infarction. All of them underwent heart catheterization and coronary angiography. They were classified respectively as group A or B in accordance with the presence or not of angiographic atherosclerotic coronary occlusion. Patients were not included in the analysis if they had been submitted to surgical or percutaneous revascularization; had an acute or chronic dialytic kidney disease; cancer or infection; a lung, hepatic or hematopoietic disease; an acute or chronic inflammatory illness or associated myocardial, valvular or congenital heart disease. The two groups were analyzed in a similar way with regard to gender, age, level of education, body mass index, abdominal circumference, smoking, diabetes mellitus, arterial hypertension, an early atherosclerosis family history, the use of statin, presence of metabolic syndrome and clinical presentation of stable angina, unstable angina or acute myocardial infarction. The HDL-cholesterol, non HDL-cholesterol, a total cholesterol/HDL-cholesterol ratio < 5, a LDL-cholesterol/HDL-cholesterol ratio < 3.5, the creatinine and fibrinogen plasma concentration, the total leukocyte and monocyte count, the high-sensitivity C reactive protein, the NT-proBNP, the electrocardiogram, the chest radiography and the echocardiogram, with regard to the presence or not of systolic dysfunction, were also analyzed. The univariety analysis comparing both groups revealed that group A’ patients more frequently were diabetics and had systolic dysfunction, NT-proBNP ≥ 250 pg/ml, fibrinogen higher than 500 mg/dl, more frequent use of statin and 501 or more monocytes/mm3 than patients´ group B. Curiously, the body mass index ≥ 30 and abnormal abdominal circumference were more frequently found among patients with angiographic normal coronary arteries. Nevertheless, by multivariety regression logistic analysis the independent factors for angiographic atherosclerotic coronary occlusion were the NT-proBNP ≥ 250 pg/ml, diabetes mellitus, an increase of monocyte number and of fibrinogen plasma concentration, in spite of creatinine level and presence of systolic dysfunction. The model takes into account these factors has 80.4% sensitivity, 76.9% specificity and 79.7% of accuracy for the diagnostic of angiographic atherosclerotic coronary occlusion. / As doenças cardiovasculares, incluindo a cardiopatia isquêmica aterosclerótica, são a princi-pal causa de morte no Brasil. A aterosclerose é doença inflamatória crônica que se inicia na infância, progride lentamente e se expressa décadas depois. Ela principia por disfunção do endotélio, tem patogênese multifatorial e tem, como principais fatores de risco, o sexo mascu-lino, a idade, o tabagismo, a hipercolesterolemia, a hipertensão arterial sistêmica (HAS), o diabetes mellitus (DM) e o antecedente familiar de doença aterosclerótica precoce. A elevação de vários marcadores bioquímicos sinaliza a participação da inflamação na aterosclerose. O peptídeo natriurético tipo B e o fragmento amino-terminal do pro-peptídeo natriurético tipo B (NT-proBNP) também aumentam na aterosclerose coronária. Esse trabalho é um estudo ob-servacional, transversal, de uma série consecutiva de 153 pacientes internados na Enfermaria de Cardiologia do HUWC-UFC, no período de 01.08.2007 a 31.03.2008, com hipótese diag-nóstica de cardiopatia isquêmica – angina estável (AE), angina instável (AI) ou infarto agudo do miocárdio (IAM) – submetidos à cineangiocoronariografia, comparando-se o grupo porta-dor de obstrução aterosclerótica coronária angiográfica (grupo A) com aquele de artérias co-ronárias angiograficamente normais (grupo B). Os critérios de exclusão foram revasculariza-ção miocárdica prévia – cirúrgica ou percutânea – insuficiência renal dialítica aguda ou crôni-ca, neoplasia maligna, infecção, doença inflamatória aguda ou crônica, doença pulmonar, he-pática ou hematológica e cardiopatia valvar, congênita ou cardiomiopatia associada. Ambos os grupos foram analisados, de modo semelhante, quanto ao sexo, à idade, à escolaridade, ao índice de massa corporal (IMC), à circunferência abdominal (CA), ao tabagismo, ao DM, à HAS, à história familiar positiva para aterosclerose precoce, ao uso de estatina, à presença de síndrome metabólica (SM) e à apresentação clínica como AE, AI ou IAM. Eles também fo-ram analisados em relação ao eletrocardiograma, à radiografia do tórax e ao ecocardiograma, quanto à presença ou não de disfunção sistólica; ao colesterol não-HDL, à HDL-colesterol, à relação do colesterol total / HDL-colesterol < 5 e do LDL-colesterol / HDL-colesterol < 3,5; à creatinina e o ao fibrinogênio, ao número de leucócitos totais e ao de monócitos, à proteína C reativa ultra-sensível e ao NT-proBNP. A comparação dos dois grupos revelou, com signifi-cância estatística, à análise univariada, que os pacientes do grupo A tinham prevalência maior de DM e de disfunção sistólica, NT-proBNP ≥ 250 pg/ml, fibrinogênio acima de 500 mg/dl; mais frequentemente usavam estatina e tinham monócitos 501 ou mais por mm3 do que aque-les do grupo B. Curiosamente, o IMC ≥ 30 e a CA aumentada foram mais prevalentes no gru-po com artérias coronárias normais. No entanto, pela regressão logística multivariada, os fato-res independentes para oclusão aterosclerótica coronariana angiográfica foram o NT-proBNP ≥ 250 pg/ml, o DM e o aumento do fibrinogênio e dos monócitos, mesmo consideradas a creatinina e a disfunção sistólica. Na amostra estudada, o modelo com ajuste de prevalência desses fatores teve sensibilidade de 80,4%, especificidade de 76,9 e 79,7% de acurácia para o diagnóstico de oclusão coronariana aterosclerótica angiográfica.

A aterosclerose é uma doença pró-inflamatória, caracterizada por disfunção endotelial e pela presença de placa de ateroma, formada pela fagocitose de oxLDL por macrófagos da região subíntima. As espécies reativas apresentam um papel importante na doença, sendo responsáveis diretos pela oxidação da LDL. Os macrófagos podem apresentar dois fenótipos, o classicamente ativado, M1 (pró-inflamatório), e o alternativamente ativado, M2 (anti-inflamatório). Entretanto, o papel desses fenótipos na aterosclerose ainda carece de um maior entendimento. Portanto, nosso objetivo foi, em um primeiro momento, revisar os dados presentes na literatura sobre oxidação de LDL e fenótipos de macrófagos em aterosclerose. Em um segundo momento, objetivamos comparar (através de estudo de bioinformática) as expressões de grupos de genes antioxidantes (HAG), de genes relacionados ao fenótipo M1 e de genes relacionados ao fenótipo M2 entre macrófagos de pessoas com aterosclerose e de pessoas saudáveis e entre placas de aterosclerose humanas em estágio avançado e em estágio inicial. Os dados de expressão foram obtidos do repositório GEO (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/), enquanto as interações funcionais foram obtidas com os programas STRING (http://string-db.org/) e Medusa (http://coot.embl.de/medusa/). As análises estatísticas foram conduzidas com o programa ViaComplex (http://lief.if.ufrgs.br/pub/biosoftwares/viacomplex/) ze com a plataforma GSEA (http://www.broadinstitute.org/gsea/index.jsp). A expressão dos grupos de genes HAG e M1 aumentou nas placas em estágio avançado em comparação às placas em estágio inicial. A expressão dos grupos de genes HAG, M1 e M2 aumentou nos macrófagos de pessoas com aterosclerose em comparação com os macrófagos de pessoas saudáveis, mas somente o grupo de genes M1 teve sua expressão aumentada em células espumosas (foam cells) de pessoas com aterosclerose em comparação com pessoas saudáveis. Por outro lado, houve uma diminuição na expressão do grupo de genes M1 em foam cells de pessoas saudáveis em comparação com macrófagos do mesmo grupo de indivíduos. Portanto, nossos resultados sugerem que, diferente do que acontece em câncer, na aterosclerose não há uma polarização dos fenótipos de macrófagos. Na verdade, ambos estão aumentados e mais estudos são necessários para melhor elucidar os mecanismos envolvidos. Palavraschave: antioxidantes, aterosclerose, macrófagos, polarização, M1/M2. / Atherosclerosis is a pro-inflammatory disease, which is characterized by endothelial dysfunction and atheroma plaque formation, as a result of oxLDL phagocytosis by macrophages in subintima region. Reactive species play an important role, being involved with the LDL oxidation process. Macrophages can present two phenotypes, classically activated, M1 (pro-inflammatory), and the alternatively activated, M2 (antiinflammatory). However, the role of these phenotypes needs to be better explained. Therefore, our objective is to review the literature data about LDL oxidation and macrophage phenotypes in atherosclerosis. Thereafter, we aimed to compare, through bioinformatics study, the expression of human antioxidant genes (HAG), M1 phenotype-related genes and M2 phenotype-related genes groups between healthy people macrophages and atherosclerotic people macrophages, and between human advanced atherosclerotic plaques and human initial atherosclerotic plaques. Expression data were obtained from GEO (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/), while functional interactions were from STRING (http://string-db.org/) and Medusa (http://coot.embl.de/medusa/). The statistical analysis was conducted with ViaComplex (http://lief.if.ufrgs.br/pub/biosoftwares/viacomplex/) and GSEA (http://www.broadinstitute.org/gsea/index.jsp). The expression of HAG e M1 groups increased in advanced plaques compared to initial plaques, while the expression of HAG, M1 e M2 groups increased in atherosclerotic people macrophages compared to healthy people macrophages. Nevertheless, only M1 group had its expression elevated in atherosclerotic people foam cells compared to healthy people foam cells. On the other hand, there was a decreased expression of M1 group in healthy people foam cells compared to the macrophages from the same individuals set. Thus, our results suggest that in atherosclerosis there is not a macrophage phenotype polarization, differently of what happens for cancer. Actually, both phenotypes are increased and more studies are needed to better elucidate the involved mechanisms. Key-words: antioxidants, atherosclerosis, macrophages, polarization, M1/M2.