Não consta resumo na publicação. / An α-amylase inhibitor purified from black beans (Phaseolus vulgaris L.) prevents the utilization of starch either in normal or diabetic rats during short-time starch loading tests. It causes hypoglycaemia and alters accordingly the serum insulin and non esterified fatty acids levels. These effects are dose dependent and doses higher than 31 mg of the inhibitor can promote the complete smoothing on serum glucose level. The existence of starch in the presence of the inhibitor in the intestine doesn\'t alter the secretion or production of α-amylase by the pancreas.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-03-29T12:26:38Z No. of bitstreams: 1 marciojosedasilvacampos.pdf: 1176619 bytes, checksum: 2a8507a8f5f473e63daeeccfac1ec957 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-03-30T11:19:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marciojosedasilvacampos.pdf: 1176619 bytes, checksum: 2a8507a8f5f473e63daeeccfac1ec957 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-30T11:19:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marciojosedasilvacampos.pdf: 1176619 bytes, checksum: 2a8507a8f5f473e63daeeccfac1ec957 (MD5) Previous issue date: 2010-02-09 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Dor é comumente relatada durante o tratamento ortodôntico, sendo proveniente da força aplicada aos dentes e de lesões traumáticas na mucosa bucal, onde a Imunoglobulina A secretora (sIgA) é a principal proteção e pode participar na manutenção da sua integridade. A dor pode aumentar o estresse psicológico, que relaciona-se com a alfa-amilase salivar. A intensidade da dor pode variar segundo a idade do paciente e sua motivação ao tratamento. O objetivo foi avaliar a intensidade de dor e sua relação com a motivação dos pacientes e com as concentrações salivares de sIgA e alfa-amilase, em adultos e crianças durante duas fases do tratamento ortodôntico. Vinte indivíduos (10 crianças e 10 adultos) responderam à um questionário de avaliação da motivação ao tratamento. Amostras de saliva foram coletadas e a intensidade de dor foi registrada diariamente, antes e após a colagem dos bráquetes e após a inserção do arco inicial. Apenas uma questão, relacionada à percepção da severidade da má oclusão, apresentou correlação com a intensidade de dor. Não houve diferença significante na intensidade de dor e na concentração sIgA entre adultos e crianças. De modo geral as crianças exibiram menor prevalência de dor, porém com maior intensidade. Houve uma tendência de correlação negativa entre a dor na mucosa bucal e a concentração de sIgA nas crianças, o que pode indicar a importância da sIgA na proteção da mucosa bucal. A concentração de alfa-amilase não teve correlação significante com a intensidade de dor, porém apresentou um aumento progressivo durante o período de avaliação, provavelmente devido ao estresse psicológico causado pela presença e ativação do aparelho fixo. / Pain is usually reported during orthodontic treatment. It comes from the strength applied to the teeth and traumatic lesions in the buccal mucosa, where secretory immunoglobulin A (sIgA) is the main protection and plays a role in integrity maintenance. Pain can increase the psychological stress, which induces changes in salivary alpha amylase. Pain intensity can vary according to patient’s age and his/her motivation towards treatment. The aim of this study was to evaluate pain intensity and its relation with patient’s motivation and salivary levels of slgA and alpha amylase, in adults and children, during two stages of orthodontic treatment. Twenty individuals (10 children and 10 adults) answered a questionnaire regarding their motivation towards treatment. Saliva samples were collected and pain intensity was evaluated on a daily basis, after and before the bonding of brackets and after the insertion of the initial arch. Only one question regarding the perception of malocclusion severity correlated with pain intensity. There was no significant difference in pain intensity and in slgA concentrations between adults and children. In general, pain prevalence in children was lower, yet reported pain was more intense. Pain in the buccal mucosa was negatively correlated with slgA concentrations in children, a finding that suggests a protective effect of slgA in the buccal mucosa. Although there was no significant correlation between the concentrations of alpha amylase and pain intensity, the levels of this enzyme increased during the evaluation period, probably due to the psychological stress caused by the presence and activation of the fixed braces.

v anglickém jazyce The possible assessments of unprofessional exposures of low frequency noise Introduction: Along with technical development, the number of sources of low frequency noise increases in the human environment and the number of complaints from people exposed to noise from these sources increases as well. The statutory limit for non-professional exposure to low frequency noise has not yet been established (due to the limited amount of data on low frequency noise exposure risks) in the EU countries (USA) and no WHO recommendations have been issued in this area. For these reasons, the hygienic limit for municipal/non-professional exposure to low frequency noise was not specified in the Czech Republic. Objecticve: The present dissertation thesis was to investigate whether the short-term experimental exposure to low frequency noise with the tonic component induces significant changes in the circadian rhythm of cortisol and alpha-amylase in saliva in the experimental set of volunteers. Saliva is a biological material that allows low-invasiveness collection. The work was supposed to assess whether possible changes could be used as objective indicators of the presence of the stress response to the noise exposure. Material and metods: An experimental study was conducted on a set of 100...

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Made available in DSpace on 2017-07-24T19:38:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cibeli May Villalba.pdf: 4939252 bytes, checksum: 5a6b5eaea0352844ad9868a7a9b79f0b (MD5) Previous issue date: 2012-03-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Proteins are the most abundant biomolecules in living organisms; they are present in all parts of a cell. They have different functions; their structural study is important because it brings greater insight into its functions and allows us to understand how they interact to each other and with the other molecules. Protein structures can be studied experimentally especially by the X-ray diffraction technique and computationally by homology modeling. Thus, in this work, structural studies were made with the alpha-amylase inhibitor from rye (Secale cereale), which inhibits the activity of amylase and then can be used in the treatment of Diabetes mellitus, obesity, pest control, amongst other applications. Through chromatographies, two different inhibitors could be separated, namely A2 and B2, which were crystallized, but did not show a minimum X-ray diffraction quality. Thus, a structural study was performed with data from a twinned crystal previously obtained, yet current refinement programs can now deal with such data. The structure was refined and compared with the alpha-amylase inhibitor 0.19 from wheat. Then, structural studies were also performed for the YchF GTPase and enolase from Trypanosoma cruzi; both have been studied with the possibility of being used as a target in the treatment of Chagas' disease. Initially, trials to express heterologously and to purify them for crystallization trials were performed; yet those were unsuccessful, a computational work was pursued, in which alignments and homology modelling for both proteins were made. The computational work was continued for Trypanosoma cruzi enolase,in which comparisons with the Homo sapiens enolase to seek and plan inhibitors for the former, through literature and data bank searches, were made; thus, docking of these was performed, which pointed more favorable binding energies for the substrates, phosphoenolpyruvate (PEP) and 2-phosphoglycerate (PG2), for the inhibitor phosphonacetohydroxamate (PAH) and for the compound coded ZINC25695689 from the ZINC (ZINC Is Not Commercial) data bank. Also, from the experimental position of the PAH inhibitor (deposited in the PDB, code 2PTZ), the interaction energies for these searched and planned molecules were estimated,through the AMBER molecular dynamics program, and, apparently, the presence of a chlorine atom conveniently bound to the inhibitor could promote an improvement of the interaction energy. / As proteínas são as biomoléculas mais abundantes nos seres vivos, estando presentes em todas as partes de uma célula. Elas possuem diferentes funções no organismo; seu estudo estrutural é importante, pois traz maior conhecimento sobre suas funções e possibilita entender como interagem entre elas e com outras moléculas. A estrutura de proteínas pode ser estudada experimentalmente principalmente por meio da técnica de difração de raios X e computacionalmente por meio da modelagem por homologia. Sendo assim, realizaram-se neste trabalho estudos estruturais com o inibidor de alfa-amilase do centeio (Secale cereale), que inibem a atividade amilásica e que podem ser utilizados em tratamento de Diabetes mellitus, obesidade, controle de pragas, entre outros usos. Por meio de cromatografias, puderam-se separar dois diferentes inibidores, denominados A2 e B2, que foram cristalizados, mas não apresentaram mínima qualidade de difração de raios X. Assim, realizou-se um estudo estrutural com dados de difração obtidos anteriormente para um cristal geminado, dada a possibilidade atual dos programas de refinamento de tratarem este problema. A estrutura foi refinada e comparada com o inibidor de alfa-amilase 0,19 do trigo. Em sequência, estudos estruturais também foram realizados para a proteína YchF da família das GTPases e para a enolase de Trypanosoma cruzi; ambas vêm sendo estudadas com a possibilidade de serem usadas como alvo no tratamento da doença de Chagas. Inicialmente tentou-se expressá-las de maneira heteróloga e purificá-las para a realização de ensaios de cristalização; com o insucesso disto, partiu-se para um trabalho computacional em que se fizeram alinhamentos e modelos por homologia para as duas proteínas. O trabalho computacional foi continuado para a enolase de Trypanosoma cruzi, comparando-a com a enolase de Homo sapiens para se buscar e planejar inibidores para a primeira, por meio de pesquisa na literatura e em bancos de dados; assim, fez-se a alocação ("docking") destes, obtendo-se energias de ligação mais favoráveis para os substratos, fosfoenolpiruvato (PEP) e 2-fosfoglicerato (PG2), para o inibidor fosfonacetohidroxamato (PAH) e para o composto codificado ZINC25695689 do banco de dados ZINC (ZINC Is Not Commercial). Também, a partir da posição experimental do inibidor PAH (depositada no PDB, código 2PTZ) estimaram-se as energias de interação para as moléculas pesquisadas e planejadas, através do programa de dinâmica molecular AMBER e, aparentemente, a presença de um átomo de cloro convenientemente ligado ao inibidor poderia promover melhoria da energia de interação.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:56:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3187.pdf: 3659896 bytes, checksum: 975ac91a3eb67a4347c326de8f22bf8e (MD5) Previous issue date: 2010-03-31 / Universidade Federal de Minas Gerais / This master's thesis project aims at studying the dynamic optimization of the operation of a bench scale (up to 5L) automated, agitated and aerated bioreactor, where the semi-continuous cultivation of recombinant Pichia pastoris is run. This yeast was cloned using the PGK1 promoter, which precludes the use of methanol as inducer, expressing constitutively the enzyme penicillin G Acylase (PGA) from Bacillus megaterium. While the group of molecular biology of DEQUFSCar is working on cloning the PGA, d P. pastoris expressing the enzyme - amylase from Bacillus subtilis was cultivated. This clone, provided by prof. Fernando Torres, UnB, uses the same construction and, therefore, its kinetics of growth and production should be very similar to the PGA s. Cultivation of recombinant Pichia pastoris was performed in flasks (skaker) using standard culture medium, aiming at obtaining kinetic data, which are the starting point for the escalation to a benchtop bioreactor. Following that, tests were performed in a 5L bioreactor in batch and fed batch operation modes. With the bioreactor data , kinetic parameters of growth, to be further used in the simulations, were estimated, using a hybrid algorithm (which combines the global method Simulated Annealing, with the local one Levenberg- Marquardt). This algorithm, is implemented in Matlab and available in the software library of Ladabio (Laboratory of Development and Automation of Bioprocesses ). From these data, models of microbial growth and of production were developed, following a classic approach (unstructured, non-segregated). Computer simulations using different feeding strategies and employing these models allowed mapping the dynamics of the system. From this information, optimal control strategies were proposed to define optimal feeding profiles. Cellular concentrations of 5.4 g/L (dry weight) were reached in shaker (20h of cultivation, when glucose is exhausted), expressing 218 U/mL of -amylase, compared to 11.4 g/L (dry weight) that were achieved in cultures in a bioreactor in batch simple (10h of cultivation, when glucose is exhausted), expressing 156 U/mL of -amylase In fed-batch cultures, cell concentrations of up to 45 g/L were achieved, expressing up to 260 U/mL of - amylase, with a productivity of 5.2 U/mL/ h. In fed-batch cultures of P. pastoris expressing PGA, cell concentrations of up to 35 g/L were achieved. Enzyme activity was not detected in the culture broth due to the effect of glycosylation. Immunodetection reaction confirmed the expression of the recombinant enzyme. Four specific growth rate equations were adjusted, with different types of inhibition by one product, detected at significant levels by liquid chromatography highperformance, but not yet identified. This metabolite was added as an inhibitor in kinetic models, using the peak areas, normalized as a pseudoconcentration. The best fit to the experimental data were the Monod kinetic model with non-competitive inhibition. Typical values obtained for the maximum specific growth and glucose/ cell conversion factor in bioreactor were max=0,24 h-1 and YX/S = 0,48. Algorithm for optimal control in open loop was developed and successfully implemented, providing a robust profiles of great power, whose validation is proposed as a continuation of this work. / Este mestrado se propoe a estudar a otimizacao dinamica de biorreator automatizado, tipo tanque agitado e aerado, em escala de bancada (ate 5L), onde se processa o cultivo semi-continuo de Pichia pastoris recombinante. Essa levedura foi clonada pelo grupo do prof. Fernando Torres, da UnB, utilizando o promotor PGK1, que dispensa a utilizacao de metanol como indutor, expressando constitutivamente a enzima -amilase de Bacillus subtilis. Durante a execucao deste mestrado, a enzima penicilina G acilase (PGA) de Bacillus megaterium esta sendo clonada pelo grupo de biologia molecular do DEQ-UFSCar usando a mesma construcao e, portanto, a cinetica de crescimento e producao da PGA heterologa devera ser muito semelhante as da -amilase, utilizada como estudo de caso para otimizacao do bioprocesso. Cultivos de Pichia pastoris recombinante foram realizados em frascos agitados, utilizando meio de cultivo padrao, objetivando o levantamento de dados cineticos, ponto de partida para o escalonamento em biorreator de bancada. Posteriormente, foram realizados ensaios em biorreator de 5L, em batelada e batelada alimentada. Com os dados obtidos nos cultivos em biorreator, e utilizando algoritmo hibrido para estimativa de parametros (que combina o metodo global Simulated Annealing, com o local de Levenberg-Marquardt), implementado em MatLab e disponivel no LaDABio (Laboratorio de Desenvolvimento e Automacao de Bioprocessos), foram ajustados parametros cineticos de crescimento, para serem utilizados nas simulacoes dos cultivos em biorreator. A partir dai, foi desenvolvido modelo de crescimento microbiano e de producao, utilizando um enfoque classico (modelo nao-estruturado, nao-segregado) para descrever o sistema. Com isso, torna-se possivel realizar simulacoes em computador usando diferentes estrategias de alimentacao, para mapear a dinamica do sistema. A seguir, foram desenvolvidos algoritmos de controle otimo em malha aberta para definicao de estrategias de alimentacao. Concentracoes celulares de 5,4 g/L (massa seca) foram alcancadas em cultivos em camara rotatoria (20h de cultivo, quando se esgota a glicose), expressando 218 U/mL de -amilase, comparado com 11,4 g/L(massa seca) que foram atingidos em cultivos em biorreator em bateladas simples (10h de cultivo, quando se esgota a glicose), expressando 156 U/mL de -amilase. Em cultivos em batelada alimentada concentracoes celulares de ate 45 g/L foram atingidas, expressando ate 260 U/mL de -amilase, com uma produtividade de 5,2 U/mL/h. Em cultivo em batelada alimentada de P. pastoris expressando PGA, concentracoes celulares de ate 35 g/L foram atingidas. Nao foi detectada atividade enzimatica no caldo de cultivo devido ao efeito da glicosilacao. Reacao de imunodeteccao confirmou a expressao da enzima recombinante. Foram ajustadas quatro equacoes de velocidade especifica de crescimento, com diferentes tipos de inibicao por um produto, detectado em niveis importantes por cromatografia liquida de alto desempenho, mas ainda nao identificado. Esse metabolito foi inserido como inibidor nos modelos cineticos, utilizando as areas dos picos, normalizadas, como uma pseudoconcentracao. Os melhores ajustes aos dados experimentais foram com modelo cinetico de Monod com inibicao nao-competitiva. Valores tipicos obtidos para a velocidade especifica maxima de crescimento e de fator de conversao glicose/celula em biorreator foram max = 0,24 h-1 e YX/S = 0,48. Algoritmo de controle otimo em malha aberta foi desenvolvido e implementado com sucesso, prevendo de forma robusta perfis otimos de alimentacao, cuja validacao fica proposta como continuidade deste trabalho.

科学研究費補助金 研究種目:総合研究(A) 課題番号:03303014 研究代表者:山根 隆 研究期間:1991-1992年度

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CHAPTER 2: This study examined the variation in the cortisol awakening response (CAR) in relation to mood states and performance during professional swimming competition. Eleven athletes were examined during two consecutive days of competition. On each day salivary cortisol was determined upon awakening, 30 and 60 min post awakening, immediately before warming up for competition and 5, 20 and 60 min after competition. Psychometric instruments included the Profile of Mood States and self-reports of performance. CARs did not differ between competition and non-competition days and were not related to performance on any day. However, difference was observed in the concentration of cortisol prior to and after the contest between competition and non-competition days. Perceived demands of the day ahead might not reflect the same magnitude of variation in the CAR in well-trained men. Explanations for this include better coping mechanisms and response towards the phase and time of competition. CHAPTER 3: Objective: We investigated the response of salivary total protein (TP), alpha-amylase (sAA) and chromogranin A (CgA) to sporting competition and their relation with positive and negative affect. Methods: Eleven professional swimmers were examined during the first day of a national contest and on a recreated event that matched time-of-the-day and day-of-theweek assessments two weeks later. Total protein was determined by the Bradford method and sAA and CgA by western blotting upon awakening, 30 and 60 min post awakening, immediately before warming up for competition and 5, 20 and 60 min after competition. Psychometric instruments included the Positive Affect and Negative Affect Schedule - X (PANAS-X). Results: The concentrations of TP, sAA and CgA differed from controls only prior to and 5 min after the event. We observed associations between higher negative affect scores with higher levels of TP, sAA and CgA prior to the event on the competition day. Areas under the curve did not differ from controls for TP, sAA or CgA. Conclusion: TP and CgA showed a similar reactivity to sporting competition than sAA, which may be attributed to the mechanisms responsible for protein secretion into saliva when collection is performed with no exogenous stimulation. Strong adverse psychological stimuli only seem to override the regular rhythm of salivary proteins moments before and after stressful situations. / CAPÍTULO 2: O presente estudo investigou a variação da resposta do cortisol ao acordar (CAR) em relação com estados de humor e desempenho durante uma competição de natação profissional. Onze atletas foram examinados durantes dois dias consecutivos de competição. Em cada dia, a concentração de cortisol salivar foi determinada ao acordar, 30 e 60 minutos após acordar, imediatamente antes de aquecer para a competição e 5, 20 e 40 minutos depois da competição. O Perfil de Estados de Humor e reportes próprios de desempenho foram incluídos como instrumentos psicométricos. A CAR não foi diferente entre os dias de competição e controle e não houve relação com o desempenho em nenhum dos dois dias. No entanto, houve diferença antes de e após o evento entre os dias de competição e controle. A percepção de um desafio que irá acontecer durante o dia não necessariamente reflete a mesma magnitude de variação na CAR em sujeitos bem treinados. Isto pode ser devido a melhores mecanismos para lidar com o estresse e a fase e hora da competição em que os sujeitos foram avaliados. CAPÍTULO 3: O presente estudo investigou a resposta de proteína total na saliva (TP) alfaamilase (sAA) e cromogranina A (CgA) à competição esportiva e sua relação com estados de humor. Onze atletas profissionais foram examinados durante o primeiro dia de um evento nacional em natação e durante um evento simulado num dia de treinamento no mesmo dia da semana e no mesmo horário que a competição real. A concentração de TP foi determinada pelo método de Bradford e a de sAA e CgA por western blotting ao acordar, 30 e 60 minutos depois, imediatamente antes de aquecer para o evento e 5, 20 e 40 minutos depois do mesmo. A escala de estado de humor PANAS-X (Positive Affect and Negative Affect Schedule) foi incluída como instrumento psicométrico. A concentração de TP, sAA e CgA foi diferente dos dias de controle unicamente antes e 5 minutos após a competição. Não houve diferença na área sob a curva do perfil diurno de cada marcador entre os dias de competição e controle. TP e CgA tiveram uma resposta similar à competição do que sAA. Isto pode ser atribuído aos mecanismos de secreção de proteína na saliva quando a coleta da mesma é feita sem estimulação exógena. Estímulos psicológicos adversos parecem alterar o ritmo regular de secreção destes marcadores só momentos prévios e posteriores a situações estressantes. / Mestre em Genética e Bioquímica