Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-07-13T13:43:12Z No. of bitstreams: 1 Janaina de Lima Silva.pdf: 1507308 bytes, checksum: e871346c5f56851a4a34b84c40665b35 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-13T13:43:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Janaina de Lima Silva.pdf: 1507308 bytes, checksum: e871346c5f56851a4a34b84c40665b35 (MD5) Previous issue date: 2014-08-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this study was to evaluate the in vitro ruminal fermentation kinetics of diets containing mango meal whole replacing corn. Besides this, was to evaluated the intake and digestibility of nutrients, feeding behavior, metabolic profile, yield and composition of milk of Saanen goats in lactation and from the factor analysis evaluate the effects of the behavioral pattern and metabolic profile of dairy performance. Four diets were evaluated: control, no added mango meal whole, and the other with 33.3, 66.6 and 100.0% of replacing corn by mango meal whole in the concentrate, with forage:concentrate of 60:40. Eight multiparous lactating Saanen goats (48.72 ± 1.99 kg BW) were distributed in two Latin Squares (4x4) during 76 days of confinement. The maximum gas production from total carbohydrates and the volume of gas produced from fibrous carbohydrates decreased with the replacing corn by mango meal whole. There were no effects of the diets tested on intake of DM, OM, CP, EE, NDF and water. However, there were reduction in the NFC and TDN intake and digestibility of DM, OM, EE, NDF and NFC. The times of eating, resting, total chewing and feeding efficiency were not changed, as well as blood concentrations of urea, creatinine, gamma glutamyl transferase, aspartate aminotransferase, albumin, total protein, glucose, triglycerides, total cholesterol and magnesium. Milk yield corrected to fat and milk constituent levels and the main fatty acids of milk were not changed, except for the fat content of milk, which increased. With the economic evaluation there was reduction in the total cost of feeding from the replacing corn by mango meal whole. Considering the results obtained can totally replace corn in diets of dairy goats. Therefore, the decision making regarding the use of mango meal whole depends on factors related to the availability of the product and the cost of acquisition in the region. / Objetivou-se com este estudo avaliar a cinética de fermentação ruminal in vitro de dietas contendo farelo de manga integral em substituição ao milho. Além deste, avaliou-se em cabras Saanen em lactação o consumo e digestibilidade dos nutrientes, comportamento ingestivo, perfil metabólico, produção e composição do leite e, a partir da análise de fatores, verificou-se os efeitos do padrão comportamental e perfil metabólico sobre o desempenho leiteiro. Foram avaliadas quatro dietas: controle, sem adição de farelo de manga integral, e as demais com 33,3; 66,6 e 100,0% de substituição do milho moído no concentrado pelo farelo de manga integral, mantendo-se relação volumoso:concentrado de 60:40. Utilizaram-se oito cabras Saanen em lactação, multíparas, com peso corporal médio de 48,72 ± 1,99 kg, distribuídas em dois quadrados latinos (4x4), durante 76 dias de confinamento. A produção máxima de gases a partir dos carboidratos totais e o volume de gás produzido a partir dos carboidratos fibrosos reduziram com a substituição do milho pelo farelo de manga integral. Não houve efeitos das dietas testadas sobre o consumo de MS, MO, PB, EE, FDN e consumo de água. Entretanto, houve redução do consumo de CNF e NDT e na digestibilidade aparente da MS, MO, EE, FDN e CNF. Os tempos de alimentação, ócio, mastigação total e eficiência de alimentação não foram alterados, assim como as concentrações sanguíneas de ureia, creatinina, gama glutamiltransferase, aspartato aminotransferase, albumina, proteínas totais, glicose, triglicerídeos, colesterol total e magnésio. A produção de leite corrigida para gordura e os teores dos constituintes do leite e dos principais ácidos graxos do leite não foram alteradas, com exceção dos teores de gordura do leite, que se elevaram. Com a avaliação econômica, verificou-se redução do custo total da alimentação a partir da substituição do milho pelo farelo de manga integral. Considerando os resultados obtidos, pode-se substituir totalmente o milho nas dietas de cabras leiteiras. Para tanto, a tomada de decisão quanto à utilização do farelo de manga depende de fatores relacionados à disponibilidade do produto e o custo de aquisição na região.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-07-26T14:17:01Z No. of bitstreams: 1 Viviany Lucia Fernandes dos Santos.pdf: 971987 bytes, checksum: 9807a12845ad417538762c4343704bd5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-26T14:17:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Viviany Lucia Fernandes dos Santos.pdf: 971987 bytes, checksum: 9807a12845ad417538762c4343704bd5 (MD5) Previous issue date: 2014-04-23 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Two assays, respectively with milking cows and fistulated sheep, evaluated the cassava peel in ruminant diet. Experiment with milking dairy cows evaluated the effect of corn replacement by cassava peel on intake, digestibility, production, composition and profile of fatty acids in the milk and a synthesis of microbial protein. Eight cows were distributed in a 4 x 4 latin square design. Experimental treatments consisted of four corn replacement levels by cassava peels (0, 33, 66 and 100%). Corn replacement by cassava peel linearly decreased intake and the digestibility of dry matter, organic matter and non-fibrous carbohydrates, although the intake of neutral detergent fiber and crude protein was not changed. Linear decrease for milk production was also registered. Milk contents (g/kg), fat, protein, lactose and total solids were not altered. The profile of milk´s fatty acids was altered when corn was replaced by cassava peel. The concentration of short chain fatty acids was not affected by the replacement but it changed the concentration of middle chain and long chain fatty acids. Unsaturated fatty acids were not altered but saturated fatty acids were modified by the replacement. They had a quadratic behavior, similar to desirable fatty acids. Results show that cassava peels did not replace corn in milking cows. Assay with sheep evaluated the effect of the replacement of corn by dehydrated and ground cassava peel on the intake and digestibility of nutrients, pH and ammoniac nitrogen concentration (N-NH3) and volatile fatty acids in the rumen liquid and the ruminal dynamics of fibrous compounds. Five castrated Santa Inês sheep with cannulae in the rumen were used. The animals were randomly distributed in a 5 x 5 design. Experimental treatments consisted of replacement of corn by cassava peel (0, 25, 50, 75 and 100%). Intake and digestibility of the nutrients were not changed when corn was replaced by cassava peel. Substitution did not alter pH and ruminal N-NH3 concentration. No interaction was extant between substitution levels and collection timetable. Replacement affected molar concentration of propionate and the acetate:propionate ratio. Replacement levels did not affect the ruminal mass of neutral detergent fiber and non-digestible neutral detergent fiber, ingestion rates, digestion and passage of neutral detergent fiber. Results show that corn may be replaced by cassava peel in sheep diet. / Foram conduzidos dois experimentos com o objetivo de avaliar a casca de mandioca na dieta de ruminantes, sendo o primeiro com vacas em lactação e o segundo com ovinos fistulados. No experimento realizado com as vacas em lactação avaliou-se o efeito da substituição do milho pela casca de mandioca sobre o consumo, digestibilidade, produção, composição e perfil de ácidos graxos do leite e síntese de proteína microbiana. Oito vacas da raça Holandesa foram distribuídas em dois quadrados latinos 4 x 4. Os tratamentos experimentais consistiram de quatro níveis de substituição do milho pela casca de mandioca (0, 33, 66 e 100%). A substituição do milho pela casca de mandioca diminuiu linearmente o consumo e a digestibilidade da matéria seca, matéria orgânica e carboidratos não fibrosos, mas não alterou o consumo de fibra em detergente neutro e proteína bruta. Também foi verificada diminuição linear para a produção de leite. Os componentes do leite (g/kg), gordura, proteína, lactose e sólidos totais não foram influenciados. A concentração dos ácidos graxos de cadeia curta não foi modificada, entretanto, alterou a concentração dos ácidos graxos de cadeia média e dos ácidos graxos de cadeia longa. Os ácidos graxos insaturados não diferiram, já os ácidos graxos saturados apresentaram comportamento quadrático, assim como os ácidos graxos desejáveis. Com base nos resultados encontrados, a casca de mandioca desidratada não substituiu o milho para vacas em lactação. No experimento com os ovinos objetivou-se avaliar o efeito da substituição do milho pela casca de mandioca desidratada e moída, sobre o consumo e digestibilidade dos nutrientes, o pH e a concentração de nitrogênio amoniacal (N-NH3) e ácidos graxos voláteis no líquido ruminal e a dinâmica ruminal da fibra em detergente neutro. Foram utilizados cinco ovinos da raça Santa Inês, com cânulas no rúmen. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em quadrado latino 5 x 5. Os tratamentos experimentais consistiram da substituição do milho pela casca de mandioca (0, 25, 50, 75 e 100%). O consumo e a digestibilidade dos nutrientes não foram alterados quando o milho foi substituído pela casca de mandioca. A substituição não alterou os valores de pH e as concentrações de N-NH3 ruminais. Não houve interação entre os níveis de substituição e os horários de coleta. Porém, tanto o pH quanto a concentração de N-NH3 foram influenciados pelos horários de coleta. Verificou-se influência da substituição na concentração molar de propionato e na relação acetato:propionato. Não houve efeito dos níveis de substituição sobre a massa ruminal de fibra em detergente neutro e de fibra em detergente neutro indigestível, bem como para as taxas de ingestão, digestão e passagem da fibra em detergente neutro. Diante dos resultados obtidos, conclui-se que o milho pode ser substituído pela casca de mandioca na dieta de ovinos.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-07-27T12:38:58Z No. of bitstreams: 1 Rafael Acioly de Lima.pdf: 841991 bytes, checksum: ea416237aa78c06c2ef39232597f3964 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-27T12:38:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rafael Acioly de Lima.pdf: 841991 bytes, checksum: ea416237aa78c06c2ef39232597f3964 (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The experiments were developed to evaluate the performance of laying hens fed diets containing different levels of inclusion of cottonseed meal with or without added multi enzyme complex at peak production. Two consecutive performance tests were conducted over a period of 56 days for the first experiment divided in two periods of 28 days and 28 days for the second experiment using 480 laying hens at 28 weeks of age, Dekalb Brown. We used a completely randomized design with eight treatments, six replicates of ten birds per experimental unit. The treatments of both experimental periods were divided into two groups: the diets without added enzyme complex and diets with the addition of enzyme complex, each group of four diets, which are: a control diet and three inclusion levels of cotton cake, 5, 0%, 15.3% and 26.2% for group without added enzyme complex 5.2%, 9.8% and 19.4% for the groups with addition of complex enzyme, which have risen 3.5% of the nutrients and energy diets for the first experiment, with the inclusion levels for the second experiment 11.1%, 20.1% and 25.2% for those without adding enzyme complex 10.7%, 18.2% and 20.8% for the groups with addition of enzyme complex, where in the second cycle and the first experiment second experiment was added 500g sulfate iron per tonne in diets with inclusion of cotton cake. The treatments were evaluated for quality and yield performance of the eggs. It can be concluded that inclusion of cotton cake level of 25.2% may be used, provided that the feed is supplemented with a source of iron. / Os experimentos foram desenvolvidos com o objetivo avaliar o desempenho de galinhas poedeiras alimentadas com rações contendo diferentes níveis de inclusão de torta de algodão com ou sem adição complexo enzimático na fase de pico de produção. Foram realizados dois ensaios de desempenho consecutivos num período de 56 dias para o primeiro experimento divido em dois ciclos de 28 dias e 28 dias para o segundo experimento, utilizando-se 480 galinhas de postura com 28 semanas de idade, da linhagem Dekalb Brown. Utilizou-se um delineamento inteiramente casualizado com 8 tratamentos, seis repetições de dez aves por unidade experimental. Os tratamentos de ambos os períodos experimentais foram divididos em dois grupos: as dietas sem adição de complexo enzimático e as dietas com adição do complexo enzimático, cada grupo com quatro dietas, sendo elas: uma dieta controle e três níveis de inclusão de torta de algodão, 5, 0%, 15,3% e 26,2% para os grupos sem adição de complexo enzimático e 5,2%, 9,8% e 19,4%, para os grupos com adição de complexo enzimático, que tiveram valorização de 3,5% dos nutrientes e da energia das dietas, para o primeiro experimento, sendo os níveis de inclusão para o segundo experimento 11,1%, 20,1% e 25,2% para os grupos sem adição de complexo enzimático e 10,7%, 18,2% e 20,8%, para os grupos com adição de complexo enzimático, onde para o segundo ciclo do primeiro experimento e para o segundo experimento foi adicionado 500g de sulfato de ferro por tonelada nas rações com inclusão de torta de algodão. Os tratamentos foram avaliados quanto ao desempenho produtivo e qualitativo dos ovos. Pode-se concluir que a inclusão de torta de algodão ao nível de 25,2% pode ser utilizada, desde que a ração seja suplementada com uma fonte de ferro.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-10-10T12:46:11Z No. of bitstreams: 1 Bruna Paula Torres Quinto.pdf: 1332950 bytes, checksum: 3c3850f7c2273a457c6895307ca6537b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-10T12:46:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruna Paula Torres Quinto.pdf: 1332950 bytes, checksum: 3c3850f7c2273a457c6895307ca6537b (MD5) Previous issue date: 2016-08-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The depletion of fisheries combined with growing demand from aquaculturists for fish meal to manufacture feed has led to increased costs for this product. In the search for ways to make aquaculture less dependent on fisheries, several alternative raw materials are being used to manufacture feed for fish and crustaceans. In this study we used tilapia carcasses from fish filleting operations to produce fish protein hydrolysates and subsequently incorporated them into feed for marine post-larval shrimp. Two fish protein hydrolysates were produced (FPH) with hydrolysis times of 1 (FPH1) and 2 hours (FPH2). The commercial protease alcalase was used in the reaction. The hydrolysates obtained were subjected to structural and nutritional analysis. The following data were determined: degree of hydrolysis, electrophoretic profile, zymography, composition (to the hundredth), and levels of amino acids and fatty acids. The degree of hydrolysis obtained ranged from 34.01 to 48%. Peptides from 10 to 250 kDa were detected, and 4 bands were observed in the zymography for each hydrolysate, with weights ranging from 75 to 250 kDa. The levels of crude protein hydrolysates were 68.04% (FPH1) and 70.69% (FPH2). Next, experimental feeds were prepared containinggradual substitutions of fish meal with the hydrolysates FPH1 and FPH2 in the proportions of 0% (control), 10%, 20%, and 30%, totaling seven formulated feeds (0%, H110%, H120%, H130%, H210%, H220%, and H230%). These feeds were fed to marine shrimp in the initial post-larvae phase 12 for 45 days. At the end of the crop, the performance of the shrimp fed the experimental feed was evaluated. We found that the shrimp fed the formulations containing FPH2 had better growth than the other treatments, proving that hydrolysate can be used in feed for post-larvae stage Litopenaeus vannamei, replacing 15% of fish meal. / A depleção dos estoques pesqueiros associada a crescente demanda da aquicultura por farinha de peixe para fabricação de rações tem ocasionado a elevação de seu custo. Na busca de meios para tornar a aquicultura menos dependente da pesca, diversas matérias primas alternativas estão sendo utilizadas na fabricação de rações para peixes e crustáceos. No presente estudo foram utilizadas carcaças de tilápia provenientes de indústrias de filetamento de pescado na fabricação de hidrolisados proteicos de peixe e sua posterior incorporação em rações para pós-larvas de camarões marinhos. Foram produzidos dois hidrolisados de peixe (HPP) com tempos de hidrólise de uma (HPP 1) e duas horas (HPP 2). Foi utilizada a protease comercial alcalase na reação. Os hidrolisados produzidos foram caracterizados estruturalmente e nutricionalmente. Foram determinados os graus de hidrólise, os perfis eletroforéticos, zimograma, composição centesimal e teores de aminoácidos e ácidos graxos. Os graus de hidrólise obtidos variaram de 34,01 a 48 %. Foram detectados peptídios de 10 a 250 kDa e foram observados 4 bandas no zimograma, para cada hidrolisado, cujos pesos variaram de 75 a 250 kDa. Os teores de proteína bruta dos hidrolisados foram de 68,04% (HPP 1) e 70,69 % (HPP 2). Em seguida foram elaboradas 7 rações experimentais que continham substituições graduais de farinha de peixe nas proporções de 0% (controle), 10, 20 e 30 % pelos hidrolisados HPP1 e HPP2 totalizando sete dietas formuladas (0%, H110%, H120%, H130%, H210%, H220% e H230%). Essas rações foram fornecidas para camarões marinhos na fase inicial de pós-larva 12 durante 45 dias. Ao término do cultivo foi avaliado o desempenho zootécnico dos camarões alimentados com as rações formuladas. Foi constatado que os camarões alimentados com as rações contendo o HPP 2 tiveram melhores crescimentos que os demais tratamentos, provando que o hidrolisado pode ser utilizado em rações para pós larvas de Litopenaeus vannamei substituindo em 15 % a farinha de peixe.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-04-24T14:41:58Z No. of bitstreams: 1 Nadine Louise Nicolau da Cruz.pdf: 1106463 bytes, checksum: 135073492c833a4ead6aea7dba9b68cb (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-24T14:41:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nadine Louise Nicolau da Cruz.pdf: 1106463 bytes, checksum: 135073492c833a4ead6aea7dba9b68cb (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Dirofilaria immitis is a nematode responsible for cardiopulmonary infection in canine and feline. In Brazil, a growing number of infected dogs have been reported, however, most of them do not show any apparent clinical signs, but laboratory changes can be found. The complementary exams are essential, together with the historic and physical examination, for the evaluation of the clinical state of the animal before adulticide treatment. The only recognized treatment is melarsomine dihydrochlorid, but in addition to causing thromboembolism in treated animals is not available in the brazilian market, leading some authors to study alternative treatments using tetracyclines and macrocyclic lactones. Thus objective of this work was to evaluate the hematological and biochemical alterations, besides the efficacy of the macrocyclic lactones in association with tetracyclines in dogs naturally infected with D. immitis. We analyzed 51 serologically positive animals, domiciled, of both sexes, without racial criteria, more than six months of age, negative for hematozoas in parasitological examination, as well animals that have not used doxycycline and macrocyclic lactones in the last six months. All were submitted to parasitological examination, where they were divided into microfilaremic and amicrofilaremic groups. Hematological and biochemical parameters were interpreted based on reference values. Of the 51 animals, 35.3% were microfilaremic and 64.7% were amicrofilaremic. In both groups, was observed microcytosis, eosinophilia and hypoproteinemia without statistical differences. The monocytes were within the reference values, but showed a statistical difference between the groups, with a greater amount in the microfilaremic group, and the thrombocytopenia was found only in the amicrofilaremic group with statistical difference. However the average of the biochemical values were within normal values and without statistical differences between the groups. For the treatment, six dogs were used, from the ambulatory care of the Veterinary Hospital in UFRPE, of these 50% females, all of them of varied races and adults. They were evaluated from the clinical point of view, submitted to the serological examination SNAP ® 4DX, DPP® rapid test for Visceral Canine Leishmaniasis, and parasitological research for hematozoas and circulating microfilariae. The animals were submitted to treatment protocol with Doxycycline at a dose of 5mg / kg every 12 hours for 30 days, and thereafter ivermectin at a dose of 0.006mg / kg once a month for an indeterminate time. Clinical and laboratory evaluations were performed to evaluate the efficacy of the treatment in moments zero, six months and twelve months post treatment. In addition, hematological and biochemical tests were performed at all times and every six months serological and parasitological tests for the detection of circulating antigens and microfilaria, respectively. Accordingly, it can be concluded that the hematological and biochemical values are fundamental because they provide the clinical veterinarian important subsidies to evaluate the clinical conditions, stage of the disease and prognosis, helping to define the best therapeutic behavior. In addition, the results of the treatment protocol showed that the association used led to the death of adult and microfilaria parasites, but only 50% of the animals were negative for circulating antigens at the end of the 12 months of treatment. / Dirofilaria immitis é um nematódeo responsável por infecção cardiopulmonar em caninos e felinos. No Brasil tem sido relatado um número crescente de cães infectados, entretanto a maioria deles não apresentam sinais clínicos aparentes, porém alterações laboratoriais podem ser encontradas. Sendo os exames complementares essenciais, junto com o histórico e exame físico, para a avaliação do estado clínico do animal antes do tratamento adulticida. O único tratamento reconhecido é o dicloridrato de melarsomina, porém além de causar tromboembolismo nos animais tratados não se encontra disponível no mercado brasileiro, levando alguns autores a estudar tratamentos alternativos, utilizando tetraciclinas e lactonas macrocíclicas. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar as alterações hematológicas e bioquímicas, além da eficácia das lactonas macrocíclicas em associação com tetraciclinas em cães naturalmente infectados com D. immitis. Para avaliação hematológica foram analisados 51 animais sorologicamente positivos, domiciliados, de ambos os sexos, sem critério racial, idade superior a seis meses, negativos para hematozoários no exame parasitológico, bem como animais que não fizeram uso de doxiciclina e lactonas macrocíclicas nos últimos seis meses. Todos foram submetidos ao exame parasitológico, onde foram divididos em grupos microfilarêmicos e amicrofilarêmicos. Os parâmetros hematológicos e bioquímicos foram interpretados baseados nos valores de referência. Dos 51 animais, 35,3% (18) eram microfilarêmicos e 64,7% (33) amicrofilarêmicos. Em ambos os grupos foi observado microcitose, eosinofilia e hiperproteinemia sem diferenças estatísticas. Os monócitos estavam dentro dos valores de referência, porém apresentaram diferença estatística entre os grupos, com maior quantidade no grupo microfilarêmico, além disso, foi encontrado trombocitopenia apenas no grupo amicrofilarêmico com diferença estatística. Entretanto a média dos valores bioquímicos estavam dentro dos valores de normalidade e sem diferenças estatísticas entre os grupos. Para a realização do tratamento foram utilizados seis cães, provenientes do atendimento ambulatorial do Hospital Veterinário da UFRPE, destes 50% fêmeas, todos de raças variadas e adultos. Foram avaliados do ponto de vista clínico, submetidos ao exame sorológico SNAP ® 4DX, teste rápido DPP® para Leishmaniose Visceral Canina, e pesquisa parasitológica de hematozoários e microfilárias circulantes. Os animais foram submetidos ao protocolo de tratamento com doxiciclina na dose de 5mg/kg a cada 12 horas durante 30 dias, e posteriormente ivermectina na dose de 0,006mg/kg uma vez por mês, por tempo indeterminado. Para avaliação da eficácia do tratamento foram realizadas avaliações clínicas e laboratoriais nos momentos zero, seis meses e doze meses pós tratamento. Além disso, em todos os momentos foram realizados exames hematológicos e bioquímicos e a cada seis meses testes sorológico e parasitológico para detecção de antígenos e microfilárias circulantes, respectivamente. De acordo com o exposto, pode-se concluir que os valores hematológicos e bioquímicos são fundamentais pois fornecem ao clínico veterinário subsídios importantes para avaliar as condições clínicas, estágio da doença e prognóstico, auxiliando a definir a melhor conduta terapêutica. Além disso, os resultados do protocolo de tratamento mostraram que a associação utilizada levou a morte de parasitos adultos e microfilárias, contudo apenas 50% dos animais foram negativos para antígenos circulantes ao final dos 12 meses de tratamento.

Orientadores: Lucia Elvira Alvares, Jose Xavier Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T10:17:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sobreira_DeboraRodrigues_M.pdf: 2481929 bytes, checksum: 2cb1105ccc78322b5f11f4528108d2fc (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Splicing Alternativo é um mecanismo importante para expandir a diversidade protéica em eucariotos. Este processo permite a produção de diferentes mRNAs a partir de uma mesma molécula de pré-RNA e é freqüentemente utilizado pelos genes envolvidos no desenvolvimento embrionário. O gene Oapper1 (Opr1) é um importante modulador da via de sinalização Wnt, atuando em diversos processos como especificação do tecido neural, morfogênese cefálica e desenvolvimento do coração e olho. Entre seus parceiros estão as '1lOléculas Dishevelled, o fator de transcrição TCF-3 (ambas as moléculas envolvidas na sinalização Wnt) e Dbf-4 (regulador do ciclo celular). Considerando que Dpr1 possui uma estrutura modular e interage com diferentes parceiros moleculares através de diferentes domínios estruturais, esta molécula poderia utilizar a maquinaria de Splicing Alternativo para combinar diferentes domínios e conseqüentemente ampliar suas funções biológicas. Neste estudo, descrevemos uma nova Variante do gene Opr1, identificada inicialmente no transcriptoma de camundongo utilizando ferramentas de Bioinformática. Esta nova Variante é maior em 111 pb em relação à codificada pela seqüência referência de RNAm para Dpr1 RefSeq, as quais são denominadas, respectivamente, como Variante A e Variante B. Estes transcritos variantes são gerados por dois sítios aceptores de Splicing distintos presentes no início do exon 4. O segmento exclusivo da Variante A codifica 37 aminoácidos localizados na região onde Opr1 se associa ao fator transcricional TCF-3. Uma análise comparativa do lócus de Opr1 entre diversos vertebrados (peixe, anfíbio, galinha, camundongo e humano) revelou que ambos os sítios aceptores de Splicing são conservados nos tetrápodas, enquanto que em peixe apenas um sítio é encontrado. Ensaios de RT-PCR confirmaram nossos resultados obtidos em Bioinformática. Além disso, demonstramos que ambas as Variantes são co-expressas ao longo do desenvolvimento de galinha, sugerindo que a concentração relativa dessas moléculas pode ser importante para a sua função. Finalmente, análises de pressão seletiva foram realizadas para a molécula de Dpr1. Apesar de não se confirmar a presença de seleção positiva ao longo da proteína Dpr1, o exon 4 parece estar sob pressão seletiva mais relaxada quando comparado aos outros exons. Nossos resultados são consistentes com a hipótese de que o mecanismo de Splicing Alternativo atua acelerando a evolução, reduzindo a seleção negativa. / Abstract: Alternative splicing is an important mechanism to expand protein diversity in eukaryotes. This process allows the production of different mRNAs from a single coding sequence and is frequentfy used by genes involved in development. Oapper 1 (Opr1) is an important rnodulator of Wnt signalling, working in several developmental processes, such as neural tissue specification, head morphogenesis, heart and eye development. While its interaction with Oishevelled is known to modulate Wnt signalling both in vivo and in vitre, the interaction wrth other molecules is required to mediate its multiple biological functions. Considering that Dpr1 has a modular structure that mediates its interaction with different partners through different structural domains, this molecule could greatly benefit from alternative splicing in order to combine different domains and consequently amplify its biological functions. In the present study we describe a new Opr1 isoform that was initially identified in the mouse transcriptome using bioinformatic tools. This isoform is 111 pb longer than the one encoded by the RefSeq mRNA for Opr1, here named O and E isoforms, respectively. The variant transcripts are generated through two distinct acceptor splice sites in exon 4. The segment exclusive of the O isoform is in frame and encodes 37 residues located in a variable region of Oprl exon 4, known to be necessary for the interaction with the transcriptional factor Tcf3. comparative analysis of the Opr1 locus among fish, frog, chicken, mouse and human revealed that in tetrapods two acceptor splice sites are conserved in the beginning of the exon 4, while in fish a single acceptor splice site is found. RT-PCR using species-specific primers confirmed the expression of the O and E isoforms in tetrapods while in fish only the O isoform was detected. In addition, we showed that the Opr1 isoforms are coexpressed throughout chicken development, suggesting that the relative concentration of these molecules may be important for their functionality. Finally, even though no evidence of positive selection was detected for the entire Dpr1 protein, exon 4 seems to be under more relaxed selective pressure than the other exons. These results are consistent with the notion that alternative splicing can act as a mechanism for opening accelerated paths of evolution by reducing negative selection pressure. / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T01:23:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hollanda_LucianaMariade_D.pdf: 4424025 bytes, checksum: 8c238f31a49b17fab4715981e3919ca2 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Várias mutações hereditárias no gene GATA1 localizadas no éxon 4 e conseqüentemente que afetam o domínio dedo de zinco N-terminal foram descritas em algumas famílias que apresentavam graus variáveis de plaquetopenia com ou sem anemia. Por outro lado, mutações adquiridas no éxon 2 deste gene foram observadas em quase todos os casos estudados de pacientes com Síndrome de Down e que apresentavam TMD ou AMKL. Essas mutações impedem a síntese da proteína total, mas permite a síntese da isoforma menor da proteína, denominada GATA-1s. Experimentos em camundongo sugeriram que a síntese única da isoforma GATA-1s seria suficiente para induzir hemopoese normal nesses animais. Neste trabalho descrevemos em pacientes e portadores de uma família a mutação 332G--C localizada no éxon 2 do gene GATA 1 que conduz a produção apenas da proteína GATA-1s nos homens afetados. Os perfis hematológicos desses pacientes demonstraram anemia macrocítica, neutropenia em vários casos e número normal de plaquetas. Em seu conjunto, esses dados sugerem que a proteína GATA -1s, produzida em níveis normais ou baixos não é suficiente para conduzir à eritropoese normal. Além disso, este é o primeiro estudo onde uma mutação hereditária no éxon 2 do gene GATA1 origina apenas a proteína GATA-1s e não provoca AMKL ou TMD em indivíduos não portadores de síndrome de Down. Desta forma este estudo indica que outros eventos cooperativos, como outras mutações ou a trissomia do cromossomo 21 provavelmente podem ser os responsáveis por essas anomalias em crianças com síndrome de Down / Abstract: Inherited mutations in exon 4 of the GATA1 gene, which codes for the N-terminal zinc finger domain of GATA-1, have been found in some families, leading to a familial dyserythropoietic anemia with thrombocytopenia, X-linked thrombocytopenia and X-linked thalassemia with thrombocytopenia. Acquired somatic mutations in exon 2 of the hematopoietic transcription factor GATA-1 have been found in individuals with Down syndrome with both transient myeloproliferative disorder and acute megakaryoblastic leukemia . These mutations prevent the synthesis of the full-length protein but allow the synthesis of its short isoform, GATA-1s. Experiments in mice suggest that GATA-1s supports normal adult megakaryopoiesis, platelet formation and erythropoiesis. Here we report a mutation, 332G-C, in exon 2 of GATA1, leading to the synthesis of only the short isoform in seven affected males from two generations of a family. Hematological profiles of affected males demonstrate macrocytic anemia, normal platelet counts and neutropenia in most cases. Altogether, data suggest that GATA-1s alone, produced in low or normal levels, is not sufficient to support normal erythropoiesis. Moreover, this is the first study to indicate that a germline splicing mutation does not lead to leukemia in the absence of other cooperating events, such as Down syndrome / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientadores: Maricilda Palandi de Mello, Anna Wedell / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T13:24:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soardi_FernandaCaroline_D.pdf: 4267789 bytes, checksum: 80c77e1664dcc041014d42a92bdd435e (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A causa mais freqüente de hiperplasia congênita da adrenal (HCA) é a deficiência da enzima CYP21A2 responsável por cerca de 90% dos casos, seguida da deficiência de CYP11B1, a qual é responsável por 5-8%. A deficiência de CYP21A2 apresenta diferentes sintomas clínicos, que podem variar de uma forma leve não clássica (NC) a uma forma grave clássica, dividida em virilizante simples (VS) e perdedora de sal (PS). Enquanto a deficiência de CYP11B1 é classificada nas formas clássica e não-clássica, dependendo da gravidade do fenótipo. As diferentes formas destas deficiências estão associadas a mutações distintas ou a combinação de mutações nos genes, sendo estas mutações provenientes dos genes homólogos ou não. O primeiro objetivo desta tese foi identificar novas mutações em alelos de 31 pacientes. As variantes protéicas novas p.G56R, p.L107R e p.L142P e, as raras p.H62L, p.H62L+p.P453S e p.R408C do gene CYP21A2 foram expressas para comparar as atividades da enzima CYP21A2 nas suas formas normal e mutantes. Foi objetivo, também, estudar através da técnica de mini-genes as possíveis alterações no processo de splicing para as variantes IVS2+5G>A, IVS2-2A>G, IVS4- 15A>C+IVS4-8C>T+p.D183E do gene CYP21A2 e para a variante g.1753G>A do gene CYP11B1. O estudo da atividade enzimática do gene CYP21A2, realizado pela técnica de mutagênese sítio-dirigida, demonstrou que as mutações p.L107R, p.L142P e p.R408C reduziram a atividade enzimática para valores praticamente nulos, classificando-as como responsáveis pela forma PS. A alteração p.G56R apresentou uma quantidade mínima de conversão de progesterona em desoxicorticosterona, quantidade suficiente para evitar a perda de sal, sendo considerada clássica associada à forma VS. A mutação p.H62L foi encontrada no mesmo alelo que a mutação p.P34L, em uma das pacientes da casuística desse trabalho, ambas inseridas num gene quimérico portador da deleção de 30 Kb. A mutação p.H62L também foi encontrada em associação com a mutação p.P453S, em dois pacientes de origem Escandinava. No estudo funcional a mutação p.H62L reduziu parcialmente a atividade enzimática. Os resultados cinéticos classificaram essa mutação como relacionada à forma NC da deficiência de CYP21A2. Em combinação com a mutação p.P453S, observou-se um sinergismo, uma vez que reduziu a atividade da enzima para a faixa limítrofe entre NC e VS. A investigação no processo de splicing utilizando a técnica de minigenes para as alterações no gene CYP21A2 indicou que a variação IVS2+5G>A causa a perda do exon 2 na formação do mRNA, sendo relacionada à forma PS. Da mesma forma, a variação IVS2- 2A>G foi classificada como associada à forma PS, pois inseriu no mRNA 19 bases provenientes do intron 2 na junção exon2-exon3, o que modificou o frame de leitura do mRNA criando um códon de parada prematura. Por outro lado, ficou demonstrado que as variações IVS4- 15A>C+IVS4-8C>T+p.D183E não interferem no processamento normal do mRNA do gene CYP21A2. No caso da alteração g.1753G>A no gene CYP11B1, que foi classificada como responsável pela forma clássica da deficiência de CYP11B1, o estudo de mini-gene indicou a perda dos últimos 45 nucleotídeos do exon 4, criando um códon de parada prematura. A elucidação do papel funcional e estrutural das mutações nos genes estudados permitiu o correto estabelecimento da correlação genótipo-fenótipo na maioria dos pacientes com HCA estudados / Abstract: Deficiency of CYP21A2 enzyme is responsible for more than 90% of congenital adrenal hyperplasia (CAH) followed by the deficiency of CYP11B1, which is responsible for 5-8% of the cases. The deficiency of CYP21A2 is normally classified in clinical forms that vary from a mild non-classical (NC) to a severe classical form, which can manifest as salt wasting (SW) or as simple virilizing (SV). Depending on the severity of phenotype, deficiency of CYP11B1 can be classified in classical or non-classical forms. In both deficiencies the clinical forms are associated with different mutations or combination of mutations, which may or may not be originated from the homologous genes. The aim of this study was to identify novel or rare mutations in alleles of 31 patients with CYP21A2 deficiency. Using site-direct mutagenesis strategies, nucleotide variants were introduced into the cDNA and the novel p.G56R, p.L107R and p.L142P and rare p.H62L, p.H62L+p.P453S and p.R408C protein variants of CYP21A2 were expressed to compare the enzymatic activity between the wild-type and mutant proteins. Furthermore, splicing activities were investigated for IVS2+5G>A, IVS2-2A>G, IVS4-15A>C+IVS4-8C>T+p.D183E sequence CTP21A2 variations and for g.1753G>A on CYP11B1 gene by minigene constructions. The analysis of enzymatic conversion of both CYP21A2 substrates, 17-hydroxyprogesterone and progesterone, into 11-desoxycortisol and corticosterone, respectively, showed low levels of residual activities for p.L107R, p.L142P and p.R408C, which were classified as SW mutations. Whereas, the result of enzyme activity for p.G56R indicated that it might be a SV-related mutation due a residual activity of 1.4% toward progesterone as substrate. The p.H62L was associated to p.P34L mutation in a chimeric gene present in a 30-kb deletion allele in Brazilian patients. In Scandinavian patients, the p.H62L mutation was found associated to the p.P453S which is known as a NC mutation. The p.H62L itself showed an activity within the range of NC mutations. The apparent kinetic constant confirmed this classification. A synergistic effect was observed for the allele bearing the p.H62L+p.P453S combination as it had caused a significant reduction in the enzymatic activity bringing it to the borderline level between SV and NC mutations. On the minigene analyses for CYP21A2, the IVS2+5G>A variation showed skipping of exon 2, therefore this alteration was classified as SW mutation. Likely, IVS2-2A>G was considered as a SW mutation due to the insertion of 19 nucleotides from intron 2 into the resulting mRNA, which changed the reading frame and created a premature stop codon. Conversely, the group of variations IVS4-15A>C+IVS4-8C>T+p.D183E did not affect the normal splicing of CYP21A2 mRNA. In the CYP11B1 minigene analysis, the g.1753G>A nucleotide variation was classified as responsible for the classical form of deficiency. An alternative splicing due to disruption of the normal donor site was used and the skipping of the last 45 nucleotides of exon 4 was observed. This alteration modified the mRNA reading frame and created a premature stop codon. The elucidation of functional and structural characters of the steroidogenic gene mutations led to the establishment of a correct genotype-phenotype in most patients studied. / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-20T19:30:29Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Luciana Guimarães Vasconcelos - 2014.pdf: 634279 bytes, checksum: ad8426b905bd7bf27f850aae72c348bd (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-20T19:30:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Luciana Guimarães Vasconcelos - 2014.pdf: 634279 bytes, checksum: ad8426b905bd7bf27f850aae72c348bd (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-20T19:30:42Z (GMT). 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In the second experiment, 144 broilers, males, of Cobb, from one to 21 days of age, distributed in CRD with four treatments, six replicates, and six birds per experimental unit. These birds were fed with experimental diets from 14 to 21 days of age and total excreta, to review the metabolization of rations, collected from 18 to 21 days old. The treatments were the same as in the first experiment. The results were submitted to ANOVA and Scott-Knott test; the polynomial regression; the nonparametric analysis (Kruskal-Wallis) and Bonferroni test; adopted was α = 0.05. The use of 30 and 90 g/kg SPC did not affect the weight gain, feed intake, feed conversion or the viability of the poultry. The use of 30 and 60 g/kg of SPC in the diet increased the activity of trypsin and the use of 90 g/kg increased amylase activity. The villus length and crypt depth in the small intestine increased with the use of 60 and 90 g/kg of SPC in the diet and the villous:crypt of the jejunum increased in the absence of SPC. The total leukocytes, eosinophils and lymphocytes and the dosage of immunoglobulin A (IgA) serum levels were not influenced by the SPC proposed in this study. The metabolization coefficient of dry matter (CMMS) increased linearly with the addition of SPC, although the metabolization coefficient of ash (CMCz) has reduced linearly. / Foram realizados dois experimentos com o objetivo de avaliar o efeito da utilização do concentrado proteico de soja (CPS) na dieta de frangos de corte de um a 21 dias de idade. No primeiro experimento 600 frangos de corte, machos, da linhagem Cobb, de um a 40 dias de idade, foram distribuídos em delineamento inteiramente casualizado (DIC), com quatro tratamentos, seis repetições e 25 aves por unidade experimental. Os tratamentos consistiram de quatro níveis de inclusão de concentrado proteico de soja (0, 30, 60 e 90 g/kg) na ração das dietas pré-inicial e inicial. Os parâmetros avaliados foram: o desempenho, a produção enzimática do pâncreas, a integridade intestinal e os parâmetros imunológicos. No segundo experimento foram utilizados 144 frangos de corte, machos, da linhagem Cobb, de um a 21 dias de idade, distribuídos em DIC, com quatro tratamentos, seis repetições e seis aves por unidade experimental. Estas aves foram arraçoadas com as dietas experimentais dos 14 aos 21 dias de idade e as excretas totais, para avaliação da metabolizabilidade das rações, coletadas do 18º ao 21º dia de idade. Os tratamentos estudados foram os mesmos do primeiro experimento. Os resultados foram submetidos à ANOVA e teste de Scott-Knott; à regressão polinomial; à análise não-paramétrica (Kruskal-Wallis) e teste de Bonferroni; adotou-se α = 0,05. A utilização de 30 a 90 g/kg de CPS não influenciou o ganho de peso, o consumo de ração, a conversão alimentar nem a viabilidade das aves. A utilização de 30 e 60 g/kg de CPS nas dietas aumentou a atividade de tripsina e a utilização de 90 g/kg aumentou a atividade de amilase. O comprimento de vilo e a profundidade de cripta do intestino delgado aumentaram com a utilização de 60 e 90 g/kg de CPS na ração e a relação vilo:cripta do jejuno aumentou na ausência de CPS. A contagem de leucócitos totais, eosinófilos e linfócitos e a dosagem de imunoglobulina A (IgA) séricas não foram influenciadas pelos níveis de CPS propostos neste estudo. O coeficiente de metabolizabilidade da matéria seca (CMMS) aumentou de forma linear com a inclusão do CPS, embora o coeficiente de metabolizabilidade das cinzas (CMCz) tenha reduzido linearmente.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:11:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Noe de Oliveira Doutorado em Quimica1.pdf: 1015687 bytes, checksum: d86f0afdbd8a5d8eabb769dc2a8f0b27 (MD5) Previous issue date: 2009-12-11 / This Thesis presents a brief historic of experimentation, its application in secondary schools and the justification for the alternative material utilised during the activities of experimentation. Some playful conceptual aspects, its presentation and its application at school are also described with the aim of observing the existence of the relations between the playful and the activities of experimentation. Referring to the method, we have opted for the method study of multiple cases, aiming to conduct a comparison amongst several students and schools that utilise different experiments in an attempt to relate the similarities to the context of the research focus. The development in the application of the activities of experimentation is described in different groups from three secondary schools, two being in the city of Dourados-MS and one in the city of Goiânia- GO. This paper also presents an analysis of several articles related to experiments published by magazines such as Química Nova (New Chemistry) and Química Nova na Escola (New Chemistry at School), taking into consideration the following criteria: the availability of activities of experimentation for the teaching of chemistry, types of experimentation, laboratory material and reagents utilised, adequacy to the classroom, type of questionnaire, relationship with daily life, and the possibility of the presence of the playful if performed by the student. The Atividade de Experimentação Investigativa Lúdica AEIL (Activity of Investigative Playful Experimentation) is being proposed as another subsidy for the practice of experimental activities, with the possibility of being performed in the classroom / Esta Tese apresenta uma breve discussão da experimentação, sua aplicação na escola de Ensino Médio e a justificativa do material alternativo utilizado durante as atividades de experimentação. Alguns aspectos conceituais do Lúdico, sua apresentação e aplicação na escola, também são descritos com a finalidade de observar a existência de relações entre o Lúdico e Atividades de Experimentação. No que se refere ao método, optamos pelo Método Estudo de Casos Múltiplos visando possibilitar a comparação entre diversos alunos e escolas que utilizam diferentes experimentos, procurando relacionar as semelhanças ao contexto em que está inserido o foco da pesquisa. Está descrito o desenvolvimento na aplicação de atividades de experimentação em diferentes turmas de três escolas de ensino médio, sendo duas na cidade de Dourados-MS e uma na cidade de Goiânia-GO. Apresenta também uma análise de diversos artigos relacionados aos experimentos publicados pelas revistas Química Nova e Química Nova na Escola, levando-se em consideração os seguintes critérios: a oferta de atividades de experimentação para o ensino de Química, tipo de experimentação, material de laboratório empregados e reagentes utilizados, adequação para a sala de aula, tipo de questionário, relação com o cotidiano e a possibilidade de haver a presença do lúdico quando realizada pelo aluno. As Atividades de Experimentação Investigativas Lúdicas AEIL são propostas como mais um subsídio para a prática de atividades experimentais, com a possibilidade de vir a ser realizada em sala de aula