Orientador: Avelino Rodrigues de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-16T15:20:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hofling_JoseFrancisco_M.pdf: 1747217 bytes, checksum: edfaf5492d4948a14f36d5f7afd4f30c (MD5) Previous issue date: 1975 / Resumo: Na tentativa do estabelecimento de correlação entre a taxonomia e a constituição proteica das plantas. substâncias extraídas de sementes do cultivar Arabica de Coffea arabica . especificamente a farinha delipidificada e a fração solúvel em cloreto de sódio 2.5% (FO e S-NaCI). foram como antígenos no preparo de antissoros. utilizadas Os testes serológicos (dupla difusão e imunoeletroforese) permitiram a observação de linhas de precipitação típicas. indicando serem as substâncias empregadas como antígenos (FO e S-NaCI) capazes de reação imunológica específica com o homólogo cultivar Arabica de Coffea ahabiea e apresentram reção cruzada com os heterólogos (cultivar Amarelo Botucatu Caturra Vermelho e mistura de plantas do cultivar Arabica) . Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Antigens soluble in 2.5% NaC1 (S-NaCl) and the delipified seed meal (FO) obtained from mature seeds of Coffea arabica were used for specific antisera preparations. The results of cross serological reactions observed in agar double diffusion and immunoelectropho'resis tests between Coffea arabica cultivars allowed the observations of typical precipitation lines. These results showed that the substances employed as antigen (FO andS-NaCl)were able to give immunological cross reaction. The presence of least two components were observed in veronal buffer 0.025M pH 8.6 agar eletrophoresis and there was less mobility when a PBS 0,01lM pH 7.0 buffer was utilized. Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Aldo Focesi Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-16T20:00:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Matsuura_MariaSumikoArita_D.pdf: 6744847 bytes, checksum: 3c2d9fa0d7b205566ea7f4e1622773db (MD5) Previous issue date: 1982 / Resumo: Certas propriedades antigênicas e estruturais de hemoglobinas de H.modestus e L.miliaris ,serpentes de "habitat" semi-aquático, foram estudadas a fim de correlacioná-las com suas propriedades funcionais. Antisoros contra hemoglobinas das duas espécies de serpentes foram obtidos em ratos. O soro anti-Hb de H.modestus mostrou similaridade antigênica entre as hemoglobinas das duas serpentes, quando testado por imunodifusão dupla. Entretanto no soro anti-Hb de L.miliaris somente reação cruzada foi possível de se constatar, sugerindo a existência de diferenças antigênicas entre as duas hemoglobinas. Os componentes das hemoglobinas de ambas as serpentes foram separados por coluna de isoeletrofocalização em gradiente de sacarose, utilizando-se anfólito com intervalo de pH entre 7,0 e 9,0. No hemolisado total da espécie H.modestus foram encontrados 3 componentes principais e no de L.miliaris , 5 componentes principais. Os componentes obtidos foram testados por imunodifusão dupla, utilizando antisoro homólogo. Os componentes da hemoglobina de H.modestus, mostraram ser antigenicamente indistintas entre si. Por outro lado, na hemoglobina da espécie L.miliaris, foi observada reação cruzada entre o componente III (o de maior concentração no hemolisado) e outros componentes. Os componentes I, II, IV e V, mostraram reação de identidade total. Para os estudos estruturais foram utilizados os componentes de hemoglobinas encontrados em maior concentração em ambas as serpentes...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Antigenic and structural properties of haemoglobins of H.modestus and L.miliaris, snakes of semi-aquatics habitat, were studied to stablish relationships to their functional properties. Antisera against haemoglobins of both snakes species were obtained in rats. The anti-Hb serum of H.modestus showed antigenic similarity between the haemoglobins of the two snakes, when tested by double immunodiffusion test. However, using antiserum to L. miliaris haemoglobin, only irnmunological reaction could be detected, suggesting the existence of antigenic difference between them. The haemoglobins components of both snakes were separated by isoelctrofucusing in sucrose gradient, using ampholine in a pH range of 7,0 to 9,0. In the H.modestus the total hemolysate was found 3 major components and in the L. miliaris 5. The components obtained were assayed by double immunodiffusion using hologous antisera. The components of the H.modestus haemoglobin seem to be antigenically indistinguisable among them. However, in the components of the L.miliaris haemoglobin, was observed antigenic cross-reaction among the component III (major component) and other components. The Components I, II, IV and V, presented identity reaction among them. For the structural studies were used the haemoglobins components found in major concentration in both two snakes. The amino acid composition of the globins of both snakes showed to be very closed, differing only in the lysine amount...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Tese (livre-docencia) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T22:00:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Yano_Tomomasa_LD.pdf: 2699113 bytes, checksum: 8356f2338c5b27cb5ab8aadb11675ed7 (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: Entre 70 amostras de Escherichia coli verocitoto-xigênicas (VTEC) isoladas de bezerros com diarréia foram selecionadas 4 (55/3, 492, 494/4, 495/2), sorologicamente identificadas como pertencentes ao sorogrupo 0125, que, quando examinadas pela prova de microhemaglutinacão manose-resistente (MHMR) foram capazes de aglutinar apenas hemácias humanas. Este dado sugeria a possibilidade de que tais amostras fossem produtoras de um antígeno de aderência, por nós designado provisoriamente de EAF44. Suspensões bacterianas destas amostras cultivadas em meio mínimo solido {MMS), incubado a 379C, e/ou o antígeno EAF44 semi-purifiçado obtido a partir destes cultivos, foram estudados através de diferentes procedimentos que incluíram: a) Atividade MHMR comparada com a descrita para outros fatores de colonização tais como: F4,F5,"F41" e "F42"; b) inibição da MHMR, usando-se antissoros homólogos e heterólogos para os antígenos acima mencionados; c) fatores que poderiam influenciar na expressão do antlgeno EAF44 "in vitro", utilizando-se para tal, a prova de MHMR frente a hemácias humanas e/ou microscopia eletrônica. Entre esses fatores selecionamos: temperatura de incubação das culturas, variação de pH do meio de cultura (MMS) e, adição a este de, compostos tais como glicose, acetato de sódio e DL-alanina; d) teste de aderência às células HeLa em presença de D-manose da amostra de VTEC 55/3 cultivada a 379C e a 169C. Inibição desta aderência com antissoro anti-EAF44; e) estudo através da microscopia eletrônica da amostra de VTEC 55/3 produtora de antígeno EAF44, com a finalidade de identificar na mesma a presença de estruturas do tipo fímbria; f) semi-purificação do antígeno EAF44, usando-se técnicas semelhantes âs descritas, com este objetivo, para outros antlgenos de aderência; g) estudos das relações antigênicas entre o antígeno EAF44 e outros fatores de colonização (F4,F5,"F41" e "F42"), descritos em amostras E. coli enterotoxigênicas (ETEC) de origem animal; h) pesquisa, através de teste de alça ligada de coelho, de possíveis alterações histológicas causadas pelas amostras de E. coli 55/3, produtora do antígeno EAF44 e de verocitotoxina (VT). Os principais resultados e conclusões decorrentes destes estudos podem ser assim resumidos: 1) As amostras de VTEC, isoladas de bezerros com diarréia e por nós estudadas, foram capazes de aglutinar, especificamente, na presença de D-manose, apenas hemácias humanas. Resultados semelhantes foram obtidos com o antígeno EAF44 semi-purificado. Este perfil de MHMR mostrou ser totalmente distinto dos descritos para outros fatores de colonização, mas especificamente F4,F5,"F41" e "F42". 2) Os testes de inibição de MHMR mostraram que apenas antissoro anti-EAF44 foi capaz de inibir efetivamente a hemaglutinação das amostras de VTEC (55/3,494/2,494/4, 495/2), sugerindo, portanto, que o antlgeno em questão era antigenicamente diferente dos demais fatores de colonização por nós estudados. 3) Entre os fatores que poderiam influenciar na expressão do antlgeno EAF44 "in vitro" foi verificado que: 3.1. A produção do antlgeno EAF44, quando medida por teste MHMR e verificada através da microscopia eletrônica/ foi inibida quando cultura da amostra VTEC 55/3 era incubada a 169C. Ao contrário, em cultivos incubados a 379C houve produção do antlgeno EAF44. Estes resultados são bastante semelhantes aos observados com outros fatores de colonização, codificados por plasmídios presentes em amostras de ETEC de origem animal. 3.2. A adição de glicose, ao MMS, a semelhança do que ocorre como antlgeno "F42" é necessário para ex pressão deste antlgeno, detectável pela prova de MHMR. 3.3. A adição de DL-alanina ao MMS não interferiu na produção do antlgeno EAF4 4 em culturas da amostra de VTEC 55/3, quando " examinada pela prova de MHMR. Estes resultados são contrários aos observados com os antígenos F5,"F41" e "F42" cuja produção foi inibida por este aminoácido. 3.4. A produção do antígeno EAF44, mediada pela prova de MHMR, foi inibida por acetato de sódio adicionado ao MMS na concentração de lOOmM. Estes resultados foram parcialmente semelhantes aos obtidos, com relação ao antígeno "F42" que, cuja produção, embora inibida por este sal, ocorreu em con contrações menores. 3.5. Culturas da amostra de VTEC 55/3 cultivadas em MMS com pHs que variaram entre 5,4 a 8,2 mostraram, a semelhança do que já foi relatado para os antígenos F5 e "F42", que a produção do antígeno EAF44, também examinada pela prova de MHMR, não ocorreu em pH ácido. Os resultados obtidos nos testes de aderência às células HeLa ,da amostra de E. coli 55/3 cultivada a 379C, mostrou uma aderência do tipo difuso, mesmo na presença de D-manose. 0 teste de inibição de aderência frente a antissoro anti-EAF44 demonstrou que este fenômeno era efetivamente causado pelo antígeno EAF44. Os estudos de microscopia eletrônica, aliados a outros dados referentes a MHMR e aderência ã células HeLa e respectiva inibição destas propriedades por antissoro anti-EAF44, mostraram que este antígeno era constituído por uma estrutura do tipo fímbria, cuja expressão ocorria em cultivos incubados a 379C, sendo porém, inibida quando a temperatura de inci.bação era 169C. Estes dados são semelhantes aos relatados para outros fatores de co Ionização, presentes em amostras de E. coli do grupo ETEC de origem humana e animal. 6. Os testes de imunodifusão dupla e imunoeletroforese pro varam, que o antígeno EAF44 é antigenicamente diferente dos demais fatores de colonização incluídos na presente pesquisa, ou seja, F4,F5,"F41" e "F42". 7. A inclusão do teste de alça ligada em coelhos, no estudo da amostra de E. coli 55/3 produtora de VT e do antígeno EAF44, partiu do pressuposto de que este antígeno de aderência q na realidade, um provável fator de colonização para os bezerros suceptíveis. Este ensaio te ve, portanto, como objetivo, pelas características do teste, averiguar uma ação direta da VT sobre o epitélio intestinal destes animais. Entre várias alterações observadas foi relevante o achado histológico de uma severa desorganização da estrutura da mucosa do intestino delgado e do intestino grosso, em especial no epitélio do revestimento. Foram observadas ainda alterações na lâmina própria da mucosa, caracterizados por restos nucleares! Estes achados foram semelhantes a outros relatos da literatura sobre experimentos "in vivo" realizados com amostras de VTEC de origem humana e animal. 8. Finalmente, diante de todos os resultados por nós obtidos, podemos afirmar que as amostras de VTEC, isoladas de bezerros com diarréia, pertencentes ao sorogrupo 0125 produzem um antígeno de aderência do tipo fímbria, semelhante em várias propriedades aos antígenos F5,"F41" e "F42", porém, distinto destes, sob o ponto de vista antigênico. Ao que nos consta, é este o primeiro relato na literatura sobre a existência de um antígeno de aderência com estas características em amostras de E. coli do grupo VTEC isoladas de bezerros com diarréia / Abstract: Not informed / Tese (livre-docencia) - Univer / Microbiologia / Livre-Docente em Ciencias Biologicas

Orientador : Paulo Maria Ferreira de Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T01:19:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Azevedo_MariaTeresadeCarvalho_M.pdf: 7005827 bytes, checksum: 7dd48f7a234106492370e6c118e3845a (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: Neste trabalho foi investigada a influência de anticorpos "naturais" obtidos de camundongos BALB/c neonatos na resposta de camundongos BALB/c adultos para eritrócitos de carneiro (E.C.), com ênfase no estudo da ativação policlonal resultante e da produção de auto-anticorpos para os antígenos miosina, colágeno, laminina e TNP-BSA. Camundongos BALB/c adultos foram previamente inoculados por via endovenosa com duas doses do anticorpo monoclonal "natural" IgM 1.3.80 (HOLMBERG et alli, 1986) de 25 µg num intervalo de 2 dias. Após 2 dias, estes animais foram estimulados com E.C. Passados 5 dias, os baços foram retirados para determinação do número de células secretoras de imunoglobulinas por PFC-reverso, e o soro obtido para determinação do título de anticorpos específicos para E.C. e para os auto-antígenos. Os resultados demonstraram que o tratamento prévio dos camundongos com os anticorpos "naturais" e posterior imunização com E.C., reduziu o número de células produtoras de imunoglobulinas totais e aumentou o número de células produtoras de IgM. Entretanto, estas alterações no número de células secretoras de imunoglobulinas não alterou o título de anticorpos específicos para E.C. Quanto ao título de auto-anticorpos, houve um aumento para o antígeno colágeno em animais tratados com anticorpos "naturais" e estimulados com E.C. Estes resultados sugerem uma modulação na atividade imunológica por anticorpos "naturais" de neonatos. A ativação policlonal induzida por E.C. ocasionou alterações no título de auto-anticorpos, com aumento para os antígenos miosina e TNP-BSA / Abstract: Not informed. / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-19T18:11:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PinhoJunior_AntonioJosede_D.pdf: 2679932 bytes, checksum: a6db65ea46ead000d70878d79ccb42de (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: A importância dos ácaros da poeira doméstica, pricipalmente do família Pyroglyphidae, como um dos fatores responsáveis pela sensibilização e desencadeamento de crises em pacientes atópicos, está estabelecida na literatura médica international. O objetivo de nosso estudo foi identificar e caracterizar antígenos solúveis dos ácaros Blomia tropicalis (Bt) , família Glyciphagidae, e Aleuroglyphus ovatus (Ao), família Acarinae, cuja importância epidemiológica em nosso meio tem sido demonstrada. Através de filtração em gel de SEPHADEX G-I00 com extratos totais de Ao e Bt obtivemos três "pools" de frações: AI ( Peso Molecular > 100 kD), A2 (faixa de P.M. de 9 a 80 kD) e A3 (pic<? de P.M. de 3,6 kD) para o Aleuroglyphus; Bl (P.M. com pico intermediário em 63 kD), B2 (faixa de P.M. de 8 a 30 kD) e B3 (P.M. com pico em 3,4 kD) para a Blomia. Na avaliação de pacientes atópicos, através de teste epicutâneos com as frações obtidas, de Aleuroglyphus : AI e A2 foram reativos em 74% dos pacientes testados. Para o Blomia, a fração mais reativa foi a B2 (70 % dos pacientes). As frações A3 e B3, de P.M. baixo, foram responsáveis por reações positivas em 22% dos pacientes. A presença de IgE específica, para cada um dos ácaros estudados, foi verificada através de eletroforese de transferência seguida de "Immunoblot" . Este procedimento demonstrou a ligacão de anticorpos a antígenos principalmente com os seguintes Pesos Moleculares: 150, 130, 100,80 e 60 kD , para ambos os ácaros. Estes resultados reafirmam a importância dos ácaros Blomia tropicalis e Aleuroglyphus ovatus em nosso meio, e demonstram a existência de anticorpos reativos a alérgenos de diferentes pesos moleculares, os quais poderão ter significados fisiopatológicos diversos, tanto em relação às propriedades quanto à importância biológica / Abstract: The importance of the house dust mites in the sensitization of atopic patients, and as a trigger factor for the development of allergic diseases, has been well documented by several investigators. Most of these reports indicated the involvement of mites belonging to the genus Pyroglyphidae (Dermatophagoides pteronyssinus and farinae). In Brazil, several studies have shown that mites known as "storage mites" and that belong to other genera (e.g., Acarinae and Glyciphagidae) also play an important hole in the pathophysiology of such processes. The objective of the present study was to identify and characterize the major allergens of two species of storage mites: Aleuroglyphus ovatus and Blomia tropicalis. Using gel filtration in SEPHADEX G 100, we have demonstrated that Aleuroglyphus and Blomia contain distinguishable fractions, showing different Molecular Weights: AI (.100 kD), A2 (9 to 79 kD) , A3 (3.6 kD) for Aleuroglyphus; Bl (63 kD), B2 (8 to 30 kD), B3 (3.4 kD) for Blomia. The Skin Prick-Test has established that AI and A2 are the most important fractions for allergenic sensitization induced by Aleuroglyphus (both were positive in 74 % of patients tested). For Blomia, the most important fraction was B2 (positive in 70% of patients). Our results have also demonstrated that other fractions were less important for allergenic sensitization, namely: two fractions of low M.W, A3 and B3 (both positive in 22% of the patients). Using SDS-PAGE and Immunoblot for IgE, we have confirmed that these mites are important for sensitization of atopic patients and the most important allergens presented M.W. of 150, 130, 100, 80 and 60 kD. Our study has pointed out the importance of Aleuroglyphus ovatus and Blomia tropicalis for sensitization of atopic patients that have not undergone occupational exposure to storage mites. We conc1ude that these mites should not be c1assified as storage mites only, due to their role in the development of allergic disease at the house environment. Therefore, Aleuroglyphus ovatus and Blomia tropicalis should also be c1assified as house dust mites / Doutorado / Medicina Interna / Doutor em Medicina

Magíster en Bioquímica Área de Especialización en Bioquímica de Proteínas y Biotecnología y optar al título de Bioquímico / Las hemocianinas de moluscos son enormes glicoproteínas que al ser inoculadas en mamíferos, generan una potente respuesta inmune del tipo Th1, caracterizada por la secreción de IFN-y. Es así que se han usado como carrier en el desarrollo de anticuerpos contra haptenos, como carrier/adyuvante en vacunas terapéuticas contra patógenos y cáncer y además, como inmunoestimulante no específico en la inmunoterapia del carcinoma superficial de vejiga. Sin embargo, los mecanismos inmunológicos involucrados en las etapas tempranas de la respuesta inmune anti-hemocianina, conducentes a sus notables propiedades inmunoestimulantes, son muy poco conocidos. Es así que ha sido escasamente abordado su efecto sobre las redes de comunicación coordinadas por citoquinas, las proteínas que median las interacciones entre las células del sistema inmune. Esta información, ampliará no solo el conocimiento básico para comprender los efectos inmunoestimulantes de las hemocianinas en mamíferos, sino que también contribuirá a nuevas aplicaciones. En esta tesis se propuso estudiar el efecto de tres hemocianinas sobre macrófagos peritoneales murinos, como modelo para entender la respuesta inmune innata que inducen en dichas células presentadoras de antígeno. Específicamente, se estudiaron la hemocianina clásica, originaria de California y conocida como KLH, obtenida de Megathura crenulata y dos descubiertas más recientemente que corresponde a CCH de Concholepas concholepas y FLH de Fissurella latimarginata, especies que habitan las costas de nuestro país. Se propuso que las hemocianinas al ser incorporadas por las células presentadoras de antígenos, inducen la expresión de citoquinas proinflamatorias, un evento fundamental para dar el inicio a una respuesta inmune. Para demostrarlo, cultivos in vitro de macrófagos peritoneales murinos, previamente caracterizados morfológicamente, fenotípicamente (F4/80+) y funcionalmente, fueron incubados con las distintas hemocianinas en concentraciones de hasta 1 mg/ml; LPS y medio de cultivo fueron usados como control positivo y negativo, respectivamente. Posteriormente, se estudió la correlación entre los niveles de mRNA y los niveles de proteína de un panel de citoquinas y quimioquinas proinflamatorias mediante dos tipos de PCR y ELISA, respectivamente. Los principales resultados demuestran que: 1. Las hemocianinas fueron fagocitadas por los macrófagos peritoneales cultivados in vitro. Sin embargo, FLH y KLH estimularon más tempranamente que CCH el aumento en la expresión de quimioquinas claves en la extravasación de leucocitos, tales como MIP-1α (CCL-3), KC (CXCL-1) y LIX (CXCL-5), las cuales son indicativas de un proceso inflamatorio agudo. 2. Las hemocianinas estimularon la expresión de IL-6, IL-12p40 y TNF-α en distintos tiempos e intensidades, como indican los resultados de RT-qPCR y ELISA, sugiriendo la inducción de mecanismos de señalización diferentes, cuya explicación es atribuible a las diferencias estructurales que presentan las hemocianinas entre ellas y especialmente, en aquellas que dicen relación con su composición de oligosacáridos. 3. Las hemocianinas muestran la inducción de un perfil inmunológico Th1 marcado, al mantener reguladas a la baja citoquinas claves de la respuesta Th2, como son IL-4, IL-5, IL-13, TGF-ß2. Finalmente, los resultados presentados en esta tesis permiten concluir que los macrófagos también participan en los mecanismos inmunológicos tempranos que acompañan el reconocimiento de las hemocianinas, induciendo un ambiente proinflamatorio que puede explicar sus notables propiedades inmunomoduladoras en los mamíferos / Molluskan hemocyanins are huge glycoproteinscapable of induce a potent Th1-dominant immune response, characterized by the secretion of IFN-y, when are inoculated in mammals. By this reason, they have been used as a carrier protein in the development of antibodies against pathogens and cancers and also, as non-specific immunostimulant in the immunotherapy of superficial bladder cancer. However, the immunological mechanisms involved in the early phases of the anti-hemocyanin immune response, that leads to its remarkable immunostimulatoryt effects, are scarcely known. Thus, it has been poorly addressed their effects on the communication network coordinated by cytokines, the proteins which mediate interactions between cells from the immune system. This information will allow expand the basic comprehension to understand its immunostimulatory effects, but also will contribute to new applications. In this thesis, we proposed to examine the effects of three hemocyanins on murine peritoneal macrophages, as a model for understanding the earliest immune responses induced by these antigen presenting cells (APC). Specifically, we studied the classical hemocyanin, native from California and obtained from Megathura crenulata, known as KLH and two recently discovered hemocyanins, CCH collected from Concholepas concholepas and FLH from Fissurella latimarginata, both species natives of our coasts. It was proposed that once hemocyanins are incorporated by APC, would induce the expression of proinflammatory cytokines, a key event in the initiation of an immune response. To demostrate this, in vitro cultures of murine peritoneal macrophages, previously characterized morphologically, phenotypically (F4/80+) and functionally, were incubated with hemocyanins in concentrations up to 1 mg/ml for different times; as positive and negative control, LPS and culture médium were used, respectively. Subsequently, we studied the correlation between mRNA and protein levels from a panel of proinflammatory cytokines and chemokines using two types of PCR and ELISA, respectively. The main results show that: 1. Hemocyanins were endocyted by peritoneal macrophages cultured in vitro, but only FLH and KLH and not CCH can induced an increased in the expression of key chemokines related to leukocyte extravasation, such as MIP-1α (CCL-3), KC (CXCL-1) and LIX (CXCL-5), wich are indicative of an acute inflammatory process. 2. Hemocyanins simulated the expression of IL-6, IL-12p40and TNF-α at different times and intensities, as indicated by the results of RT-qPCR and ELISA, suggesting different signaling pathways of induction, which can be explained by strutural differences between them, and specially those concerns to their oligosaccharides composition. 3. Hemocyanins showed induction of a Th1-dominant immune profile, maintaining downregulated key Th2 cytokines such as IL-4, IL-5, IL-13 and TGF-ß2. Finally, the results presented in this thesis, allow to conclude that macrophages are involved in the early phases of immunes recognition of hemocyanins, inducing a proinflammatory milieu that may explain its enhanced immunomodulatory properties in mammals / Fondecyt, Biosonda, Fucited

El cáncer colorrectal (CCR) es la tercera causa de muerte por cáncer en la Argentina. Las mucinas y sus antígenos carbohidratos asociados han sido relacionados con la proliferación, invasión, metástasis y mal pronóstico. Objetivo: Estudiar la utilidad de MUC1, MUC2, MUC5AC y los antígenos carbohidratos asociados como marcadores tumorales pronósticos y predictivos de respuesta al tratamiento en pacientes con CCR. Materiales: Se incluyeron 248 muestras histológicas: 90 CCR, 64 ganglios linfáticos, 68 muestras de mucosa colorrectal normal, 26 adenomas y 120 muestras sanguíneas. Métodos: Se empleó la técnica de inmunohistoquímica en los tejidos tumorales y radioinmunoanálisis en las sanguíneas. Se utilizó un índice de expresión antigénica (intensidad por el porcentaje de la reacción). Los pacientes fueron estadificados según el TNM (AJCC, edición 2002). Resultados: Independientemente del estadío y del tratamiento instaurado, los pacientes tuvieron una menor sobrevida global (SG) y tiempo libre de progresión (TLP) cuando sus tumores primarios (TP) o ganglios linfáticos metastáticos (GLM) expresaron MUC1, Tn, Lewis x/y, sialil Lewis x y cuando en el núcleo de las células tumorales se halló presente β-catenina. Los pT avanzados se asociaron con mayor expresión de MUC1 y MUC5AC. Estos tumores presentaron mayor expresión de sialil Lewis a/x y Lewis y en sus GLM. El estadío pN2 se asoció con mayor expresión de sialil Lewis a/x. Se observó una mayor expresión de MUC1 y sialil Lewis a/x en los TP de los pacientes con M1. Los TP indiferenciados presentaron una elevada expresión de MUC1 y MUC5AC y una disminución de MUC2, los antígenos del grupo Lewis sialil y CEA. Los TP grado nuclear 3 tuvieron mayor expresión de MUC5AC, Tn, Lewis x y CEA. Un elevado índice mitótico en los TP se correlacionó con una alta expresión de MUC1 y CEA y una baja expresión de MUC2 y MUC5AC. Los GLM con alto índice mitótico expresaron en su mayoría Lewis x/y y sialil Lewis x. MUC1 se halló asociada a la invasión linfática y perineural tumoral. En esta última también se encontró elevada MUC5AC, sialil Lewis a y CEA. Los tumores mayores de 5 cm presentaron una elevada expresión de sialil Lewis x y CEA. El aumento de la expresión de MUC1 se relacionó con cáncer familiar, diabetes mellitus, hábito alcohólico y tabáquico, hipertensión arterial, colecistectomía previa y una pérdida de peso mayor a 10 kg en los dos meses previos al diagnóstico. Se demostró una variación en la expresión de las mucinas y antígenos carbohidratos estudiados siguiendo la secuencia: mucosa normal, mucosa normal adyacente al TP y TP, pudiendo comprobarse que la mucosa normal adyacente al tumor es una zona de transición entre mucosa normal y TP. Conclusión: Las mucinas y los antígenos carbohidratos asociados constituyen parte de los cambios ocurridos tanto durante la carcinogénesis como en los procesos de invasión del CCR. Asimismo, constituirían un elemento a considerar para comprender las recaídas locales.

ROQUE, C. R. Avaliação da detecção de antígenos NS1 e anticorpos IgM em amostras biológicas de vísceras in natura de pacientes que evoluíram para óbito por suspeita de dengue. 2017. 69 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by PPG Patologia (pgpatol@ufc.br) on 2017-08-07T12:11:59Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_crroque.pdf: 1123935 bytes, checksum: ea84be3a53ebfef0abfedabd1942a936 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-08-07T12:54:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_crroque.pdf: 1123935 bytes, checksum: ea84be3a53ebfef0abfedabd1942a936 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-07T12:54:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_crroque.pdf: 1123935 bytes, checksum: ea84be3a53ebfef0abfedabd1942a936 (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Dengue is caused by an arbovirus of the Flaviviridae family, genus Flavivirus. Cases of infection with fatal evolution began to be reported from the introduction of DENV-2 in the state of Ceará in 1994. The study of these cases is necessary to know the causes that contribute to the death and the post-mortem diagnosis of dengue can contribute. The objective of the work was to evaluate the detection of NS1 antigen and IgM antibodies for the diagnosis of dengue in biological samples of fresh viscera collected from patients who died. A total of 109 patients were included from 2013 and 2014 whose samples were sent to LACEN/CE to perform laboratory tests to confirm death due to suspected dengue and they had at least one positive result or reagent in samples of viscera in formaldehyde, blood (serum) and/or CSF in the exams IgM ELISA, NS1 ELISA, RT-PCR, and Immunohistochemistry. The mean age of the patients was 33.46 ± 21.18 (5 days to 95 years old). The IgM ELISA in the blood showed a positivity of 21.1%; in the CSF showed a positivity of 22.0%; in the viscera showed a positivity of 16.5%. Of the positive IgM samples in viscera, 75.0% were also CSF positive IgM, and 78.3% of positive IgM samples in viscera were also positive IgM in the blood. There were more NS1 positive samples in the blood than in the CSF and in viscera. CSF and blood were the samples with the highest positivity of IgM antibodies. However, IgM antibody detection was also possible in samples of fresh viscera. The immunohistochemistry technique in preserved formalin material showed a higher positivity for the detection of dengue antigens, but it was also possible to detect NS1 antigen in fresh viscera samples. The detection of IgM antibody and NS1 antigen in the fresh viscera samples helped to improve the post-mortem diagnosis of dengue and it should be considered as another approach in the diagnosis of fatal dengue. / A dengue é causada por um arbovírus da família Flaviviridae, gênero Flavivirus. A partir da introdução do DENV-2 no Ceará, em 1994, casos de infecção com evolução fatal começaram a ser reportados. O estudo desses casos é necessário para que se conheçam as causas que contribuem para o óbito e o diagnóstico da dengue pos-mortem pode contribuir. O objetivo do trabalho foi avaliar a detecção de antígeno NS1 e de anticorpos IgM para diagnóstico de dengue em amostras biológicas de vísceras in natura, coletadas de pacientes que evoluíram para óbito. Foram incluídos 109 pacientes, dos anos de 2013 e 2014, cujas amostras foram encaminhadas ao LACEN/CE para realização de exames laboratoriais para confirmação de óbito por suspeita de dengue e que apresentaram pelo menos um resultado positivo ou reagente em amostras de vísceras em formol, sangue (soro) e/ou líquor nos exames: ELISA IgM, ELISA NS1, RT-PCR, e Imunohistoquímica. A média de idade dos pacientes foi de 33,46 ± 21,18 (5 dias a 95 anos). O ELISA IgM no sangue apresentou uma positividade de 21,1%; no líquor apresentou uma positividade de 22,0%; nas vísceras apresentou uma positividade de 16,5%. Das amostras de IgM positivo em vísceras, 75,0% foram também IgM positivo no líquor e 78,3% das amostras de IgM positivo em vísceras foram também IgM positivo no sangue. Houve mais amostras de NS1 positivo no sangue do que no líquor e vísceras. As amostras onde houve maior positividade de anticorpos IgM foram líquor e sangue, entretanto a detecção de anticorpo IgM também foi possível em amostras de vísceras in natura. A técnica de imunohistoquímica, em material de vísceras conservadas em formol, apresentou uma maior positividade para a detecção de antígenos de dengue, mas também foi possível detectar antígeno NS1 em amostras de vísceras in natura. A detecção de anticorpo IgM e de antígeno NS1 nas amostras de vísceras in natura contribuiu para melhorar o diagnóstico de dengue post-mortem, devendo ser considerada como mais uma abordagem no diagnóstico de casos fatais de dengue.

Ingeniera Civil en Biotecnología / El melanoma es un cáncer de alta incidencia y mortalidad, que posee una inmunogenicidad suprimida por mecanismos de evasión propios, como la expresión aberrante del gangliósido GD2 en la superficie de las células tumorales. Entre las terapias experimentales, la hemocianina de Megathura crenulata, conocida como KLH, generó una respuesta inmune protectiva contra el tumor de melanoma al estar acoplada a un péptido que mimetiza a GD2 (péptido P10), induciendo anticuerpos anti-GD2 que dirigen la respuesta hacia el tumor. Así, se propuso que las hemocianinas de los moluscos del litoral chileno, Concholepas concholepas (CCH) y Fissurella latimarginata (FLH), acopladas a P10 generarían una respuesta inmune protectiva frente al desafío de ratones C57BL/6, con melanoma murino de la línea B16F10. Primero, los péptidos P10 y control (S266) fueron acoplados a las tres hemocianinas mediante el entrecruzador sulfo-SMCC. Luego, utilizando el adyuvante AddaVax, como potenciador inmunológico de los conjugados hemocianina-péptido, se inmunizó a los ratones encontrándose un elevado y similar título de anticuerpos contra las hemocianinas (de 1:2.500), y un menor título de anticuerpos específicos y predominantemente de clase IgG contra cada péptido (de 1:300). Posteriormente, se evaluó la terapia anti-tumoral inducida por tres inmunizaciones con los conjugados y con hemocianinas no acopladas, en ratones desafiados con células B16F10 y previamente sensibilizados con cada antígeno. Se encontró que FLH indujo una mayor respuesta inmune protectiva contra el tumor que CCH, dado que inhibió la incidencia y la velocidad de crecimiento tumoral, similar al control positivo con KLH, estando o no conjugada, y sin efectos tóxicos colaterales. Con ello, y según se verificó por inmunofluorescencia y indirecta citometría de flujo, los anticuerpos anti-hemocianinas presentaron reacción cruzada con epítopos presentes en las células B16F10 y en líneas de melanoma humano. En conclusión, no se encontraron diferencias entre las hemocianinas al actuar como carrier de péptidos miméticos, pero sí hubo diferencias significativas en la respuesta inmune antitumoral inducida por FLH y KLH, respecto a los controles y a CCH, resultados que son promisorios para continuar los estudios preclínicos con FLH, que potencien su uso como adyuvante o inmunomodulador en la terapia del melanoma.

Made available in DSpace on 2014-12-22T16:33:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 claudia_pizzini_ipec_dout_2013.pdf: 1825173 bytes, checksum: 02ac3def251a87a7d621295df91231c8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014-10-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A histoplasmose é uma infecção que apresenta amplo espectro clínico, variando desde forma leves, a graves e disseminadas. O diagnóstico da histoplasmose baseia-se nos aspectos clínicos, radiológicos e epidemiológicos. A confirmação se dá pelo isolamento e identificação do Histoplasma capsulatum através de procedimentos microbiológicos. Diferentes metodologias já foram descritas no diagnóstico sorológico da histoplasmose, porém limitações relacionadas a reações cruzadas e limiar de detecção das técnicas empregadas podem dificultar o diagnóstico. O antígeno M obtido do extrato antigênico histoplasmina é considerado um antígeno imunodominante para produção de anticorpos, sendo reconhecido em cerca de 90% dos soros dos pacientes com histoplasmose, sendo assim nosso grupo vem trabalhando a vários anos em estudos para um melhor conhecimento desta molécula e aplicação no diagnóstico.Um Modelo molecular do antigeno M foi desenvolvido através de sua sequência, tendo então confirmada sua natureza biológica como catalase, sendo observado também que esta molécula apresentava regiões comuns bem como especificas quando comparadas a catalases de organismos eucariotas. No presente estudo procuramos determinar a presença de possíveis epitopos antigênicos na proteína M empregando ferramentas proteômicas, para posterior emprego em ensaios imunoenzimáticos. Para tal foi utilizada a combinação da técnica de coimunoprecipitação com espectometria de massas e posteriormente a técnica de Spot synthesis Com o emprego do anticorpo monoclonal (mAb 1A7) produzido contra a proteína M recombinante foi possível detectar uma sequência que foi comum as duas metodologias empregadas (PTKIIPEELVPFTP). Esta sequência encontra-se localizada na região onde em estudos anteriores por análise in silico foi apontada como a região mais antigênica desta molécula. Foi realizada a síntese desta sequência, e diferentes desenhos foram utilizados, extensão de resíduos de lisina e adição da molécula de biotina em ambas as extremidades, carboxi e amino terminal, bem como a síntese da sequência sem adição de outras moléculas. Diferentes desenhos de ensaios imunoenzimáticos foram realizados, um ELISA empregando microesferas carboxiladas, ELISA indireto empregando placas de microtitulação revestidas com estreptoavidina e um ELISA sandwich. A sequência não apresentou resultados satisfatórios nos diferentes ensaios. Observamos que apenas no ensaio onde utilizamos o peptídeo ligado a molécula de biotina 1-a e 1-b, foi possível obter um poder discriminatório entre o grupos de pacientes com histoplasmose e o grupos de indivíduos hígidos, o ponto de corte foi obtido pela media das DOs das amostras de indivíduos hígidos mais duas vezes o desvio padrão, onde este teste apresentou uma boa sensibilidade(100 - 95%), porém a especificidade encontrada não foi satisfatória (27 - 20%). Estes resultados não foram concordantes com a análise feita in silico da sequência sintetizada. O antígeno M recombinante foi testado em um ELISA de captura de antígeno, onde os resultados preliminares apresentaram-se promissores necessitando de novos testes para avaliarmos parâmetros como sensibilidade e especificidade / Histoplasmosis is a worldwide distribution infection with several clinical spectrum, from as ymptomatic to severe and disseminated disease . The diagnosis of histoplasmosis is based on clinical, radiological and epidemiological findings. The laboratory diagnosis of histoplasmosis is based on fungus isolation by culture, direct examination in tissue or other clinical specimens. However, such procedures have limitations and are time - consuming . For these reasons serological tests play an important role on presumptive diagnosis . Although different methodologies have been described for serological diagno sis of histoplasmosis , cross - reactions and low sensitivity could difficult the final result. The M antigen is obtain by the antigenic extract histoplasmin and is considered as an immunodominant antigen recognized by 90% of sera from patients with histoplas mosis, For a better understanding of the molecule biological nature and its application in diagnosis methodologies our group has been working for several years. The molecular analysis of the M antigen was based on the sequence protein and confirmed as a ca talase. It was also observed that this molecule showed specific and common polypeptide regions when compared to catalases from others eukaryotic organisms. In this study we evaluated the possible presence of antigenic epitopes in the M protein sequence tha t could represent potential candidate as diagnostic markers for histoplasmosis. For this reason we used the combining co - immunoprecipitations and mass spectrometry and spot synthesis technique. The application of a monoclonal antibody against to the M anti gen (mAb 1A7) produced by our group allowed the detection of a same sequence in both employed methodologies ( PTKIIPEELVPFTP) . This was synthesized with different conformations, addition lysine residues and biotin molecules in both amino and carboxy term inal regions. Different immunoassays were performed, carboxylated microspheres, ELISA indireta with microplate coated with streptoavidin and ELISA sandwich . The sequence did not show good specificity and sensibility in different tests. A good discriminator y power was possible when the peptide biotin molecule bind (P1 - a and P1 - b) was used in serum samples from groups of histoplasmosis patients and healthy controls. This test showed a high sensitivity (100 - 95%), however the specificity was not satisfactory ( 27 - 20%) respectevily. The ELISA ́s cut - off points were established as the mean of absorbances plus two standard deviation of the healthy controls. The immunoassay ́s results were discordant when compared on in silico analysis using as antigen the synthesize d sequence. In another approach, the M antigen was tested in an antigen - capture enzyme - linked immunosorbent assay (ELISAs) and promising results were observed, but further studies must be done in order to evaluate parameters such as sensitivity and specifi city