A investigação do potencial terapêutico de compostos naturais não tóxicos capazes de prevenir ou reduzir o impacto do estresse oxidativo em doenças inflamatórias diretamente relacionadas a dor tem exercido um papel fundamental no desenvolvimento de novas medicamentos. O ácido chiquímico (ACH) é um composto natural originalmente extraído da Illicium verum Hook. f., uma planta medicinal usada no tratamento de doenças inflamatórias. Apesar do ACH ter sido usado como um precursor químico na síntese do antiviral Tamiflu®, o seu potencial como um composto anti-inflamatório e antioxidante, já enraizado pelo uso popular, ainda permanece desconhecido. Baseado nisso, o objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade antioxidante, anti-inflamatória e antinociceptiva do ACH em modelos in vitro e in vivo. Inicialmente as propriedades físico-químicas do ACH foram avaliadas e a atividade antioxidante comprovada, bem como seu potencial de proteger a morte celular induzida por peróxido de hidrogênio em células de neuroblastoma SH-SY5Y. O ACH atenuou a inflamação induzida pelo LPS em macrófagos RAW 264.7, foi capaz de inibir a produção de citocinas (TNF-α e IL-β) e de NO, assim como a ativação das MAPKs (ERK1/2 e P38) induzida pelo LPS, sugerindo que o ACH pode exercer uma atividade anti-inflamatória. In vivo, o ACH bloqueou a hiperalgesia mediada pela carragenina (CG), TNF-α, prostaglandinas (PEG2) e dopamina (DA) em camundongos. Esses resultados sugerem que o efeito antinociceptivo do ACH pode ser atribuído, em parte, a sua ação antioxidante e anti-inflamatória, dois mecanismos que sustentam a transdução do sinal doloroso. / The investigation of the therapeutic potential of natural non-toxic compounds capable of counteracting oxidative stress associated with inflammatory disease and painful conditions, has been of key interest in drug development. Shiquimic acid (SA) is a nature-derived compound originally extracted from Illicium verum Hook. f., a chinese medicinal herb used to treat inflammatory diseases. Even though SA has currently been used as a chemical precursor for synthesis of the antiviral Tamiflu, its potential as an anti-inflammatory and antioxidant compound – already rooted by its popular use - remains unknown until now. Based on that, the aim of this study was to evaluate the antioxidant, anti-inflammatory and anti-nociceptive activity of SA in vitro and in vivo models. Initially the physic-chemical properties of SA were evaluated and proven antioxidant activity, as well as its potential to protect hydrogen peroxide-induced cell death in neuroblastoma SH-SY5Y cells. SA attenuates LPS-induced inflammation in RAW 264.7 macrophages, SA was capable of inhibiting TNF-α and IL-1β cytokines production, NO production as well as LPS-induced activation of MAPKs (p38 and ERK1/2), thus suggesting that SA may exert anti-inflammatory activity. In vivo, SA blocked carrageenan, TNF-alpha-, prostaglandin (PE2)-, and dopamine-induced hyperalgesia in mice. These results suggest that anti-nociceptive effect of SA could be attributed, at least in part, to their antioxidant and anti-inflammatory actions, two mechanisms underpinning painful signal transduction.

Anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) de uso tópico ocular são amplamente utilizados por um número crescente de médicos e veterinários, clínicos gerais e oftalmologistas. A crescente utilização de AINEs tópicos é motivada pela busca de fármacos que não apresentem os conhecidos efeitos adversos tópicos e sistêmicos dos corticosteróides. Desta forma, os profissionais envolvidos no cuidado destes pacientes devem estar cientes de que fármacos AINEs tópicos não são livres de efeitos adversos. Este trabalho objetivou investigar os potenciais efeitos adversos locais e sistêmicos da utilização de colírios contendo diclofenaco sódico 0,1% e cetorolaco de trometamina 0,5% em coelhos tratados por 90 dias. Desta forma buscou-se elucidar questões relacionadas à segurança do seu uso como agente terapêutico, que poderiam restringir a sua aplicação clínica em pequenos animais. Para isso, 18 coelhos foram divididos em três grupos. Os animais foram tratados três vezes ao dia por 90 dias com colírio de cetorolaco de trometamina 0,5%, diclofenaco sódico 0,1% e solução fisiológica (NaCl 0,9%). Foi realizada a mensuração diária do consumo de água e ração, assim como exames clínicos semanais e coleta de sangue a cada 30 dias. Ao final do tratamento os animais foram eutanasiados e necropsiados. A superfície da córnea foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Não houve alterações clínicas e diferenças entre os grupos quanto aos valores de hemograma, leucograma, contagem de plaquetas, tempo de protrombina e tromboplastina, proteínas totais, albumina, creatinina, sódio e potássio. Dados de necropsia não apontaram alterações macro ou microscópicas no sistema gástrico, hepático e renal. Após noventa dias de tratamento com ambos os colírios contendo AINEs, pôde ser identificado os princípios ativos no plasma por extração em fase sólida e detecção por espectrometria de massas. Valendo-se da MEV foi comprovado que ambos os AINEs causaram alterações no padrão celular do epitélio corneano. Os resultados desta tese foram apresentados no formato de artigos, sendo que no primeiro artigo foram descritas as implicações da absorção sistêmica dos colírios contendo cetorolaco de trometamina 0,5% e de diclofenaco sódico 0,1%; e o segundo artigo referiu-se à avaliação ultraestrutural do epitélio corneano de coelhos tratados por 90 dias com os colírios de sem cons cetorolaco de trometamina 0,5% e de diclofenaco sódico 0,1% sem conservantes. / The use of topical ophthalmic nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) is widely adopted by an increasing number of physicians and veterinarians, general practitioners and ophthalmologists. The increasing use of topical NSAIDs is motivated by the need of administer drugs that do not present the well-known adverse effects of topical and systemic corticosteroids. Thus, the professionals involved in the care of these patients should be aware that topical NSAIDs drugs are not free of adverse effects. This study aimed to investigate the potential local and systemic adverse effects of eye drops administration containing diclofenac sodium 0.1% and ketorolac tromethamine 0.5% in rabbits treated during a period of 90 days. In this manner we sought to clarify issues related to the safety of their use as a therapeutic agent, which could restrict its clinical application in small animals. The 18 rabbits were separated into three groups. The animals were treated three times daily during a period of 90 days with ketorolac tromethamine 0.5% eye drop, sodium diclofenac and 0.1% saline (0.9% NaCl). It was carried out a daily measurement of water and food consumption as well as a weekly clinical examination and blood sampling every 30 days. At the end of the treatment the animals were euthanized and necropsied. The corneal surface was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). There were no clinical alterations and differences between the three groups in terms of blood count values, white blood cell count, platelet count, prothrombin time and thromboplastin, total protein, albumin, creatinine, sodium and potassium. Necropsy data showed no macroscopic or microscopic changes in gastric, hepatic and renal system. Ninety days after treatment with both eye drops containing NSAIDs, it could be identified the active ingredients in the plasma by solid phase extraction and detection by mass spectrometry. Taking advantage of SEM has been proven that both NSAIDs caused changes in cellular pattern of the corneal epithelium. The results from the thesis were presented in these two articles, in the first, we described the implications of the systemic absorption of eyedrops diclofenac sodium 0,1% and ketorolac tromethamine 0,5%; and in the second article which refers to the ultrastructural evaluation of the corneal epithelium of rabbits treated for 90 days with eyedrops diclofenac sodium 0,1% and ketorolac tromethamine 0,5% preservative-free.

Os compostos de coordenação de rutênio têm recebido grande atenção para tratamento do câncer. Em particular, estudos do grupo mostraram que um metalofármaco de dirutênio(II,III) com o fármaco anti-inflamatório não-esteróide ibuprofeno apresenta boa atividade para tumor cerebral maligno. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo ampliar os estudos com a obtenção de novos complexos, investigar as interações dos metalofármacos com moléculas de interesse biológico e preparar materiais híbridos destes com ciclodextrina. Desenvolveu-se metodologia sintética para a preparação de dois novos metalofármacos de dirutênio(II,III) de fórmula geral [Ru2(O2CR)4Cl], em que O2CR = cetoprofenato (cet) ou fenbufenato, a partir do precursor [Ru2(O2CH3)4Cl]. Os novos complexos foram caracterizados principalmente por meio de técnicas espectroscópicas, difratometria de raios x e análise térmica. Estudos de reatividade foram realizados para a espécie [Ru2(O2CH3)4(H2O)2]+, obtida a partir do precursor [Ru2(O2CH3)4Cl] em solução aquosa. Constantes de equilíbrio e parâmetros termodinâmicos para as reações de substituição axial água-cloreto, e também parâmetros cinéticos das reações deste complexo com os aminoácidos glicina, triptofano, cisteína e histidina, e com os agentes redutores glutationa e ácido ascórbico, foram determinados. Estudos sobre as interações com a proteína albumina do soro humano (HSA) foram efetuados para os complexos [Ru2(O2CH3)4Cl] e [Ru2(cet)4Cl], e também para o derivado análogo de ibuprofenato (ibp), [Ru2(ibp)4Cl]. Novos materiais híbridos contendo os complexos [Ru2(O2CR)4Cl] (O2CR = ibuprofenato ou cetoprofenato) e hidroxipropil-β-ciclodextrina foram obtidos, usando-se a técnica de spray-drying, e caracterizados. / Ruthenium compounds have received great attention for cancer therapy. In particular, studies from our research group have found that a metallodrug of diruthenium(II,III) with the non-steroidal anti-inflammatory drug ibuprofen, has good activity for malignant brain tumor. In this context, the main purposes of this work were to improve these studies, to investigate some interactions of these metallodrugs with biologically relevant molecules, and also to prepare hybrid materials of these complexes with cyclodextrin. Synthetic methodologies were developed to prepare two novel diruthenium(II,III) metallodrugs, with the general formula [Ru2(O2CR)4Cl], where O2CR = ketoprofen (ket) or fenbufen starting from the precursor [Ru2(O2CH3)4Cl]. The novel complexes were characterized mainly by spectroscopical techniques, X-rays difractometry and termal analysis. Reactivity studies were performed for the species [Ru2(O2CH3)4(H2O)2]+ obtained from the precursor [Ru2(O2CH3)4Cl] in aqueous solution. Equilibrium constants and thermodynamic parameters for water-chloride axial substitutions, and also kinetic parameters for the reactions of this complex with the amino acids glycine, tryptophan, cysteine and histidine, and the reducing agents glutathione and ascorbic acid, were determined. Studies on the interactions with the human serum albumin (HSA) protein were performed for the complexes [Ru2(O2CH3)4Cl] and [Ru2(ket)4Cl], and also for the analogue derivative of the ibuprofen drug (ibp), [Ru2(ibp)4Cl]. Novel hybrid materials containing complexes [Ru2(O2CR)4Cl] (O2CR = ibuprofenato or ketoprofenato) and β-hydroxypropyl-cyclodextrin were prepared by using spray-drying technique and characterized.

Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-09-20T18:48:02Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NeurogeneseEndogenaInduzida.pdf: 2761742 bytes, checksum: 4810f02f3d3c3d4aee4b8df72ba646b1 (MD5) / Rejected by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br), reason: on 2017-10-10T17:00:23Z (GMT) / Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-10-17T18:20:30Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NeurogeneseEndogenaInduzida.pdf: 2761742 bytes, checksum: 4810f02f3d3c3d4aee4b8df72ba646b1 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-11-23T17:48:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NeurogeneseEndogenaInduzida.pdf: 2761742 bytes, checksum: 4810f02f3d3c3d4aee4b8df72ba646b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-23T17:48:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NeurogeneseEndogenaInduzida.pdf: 2761742 bytes, checksum: 4810f02f3d3c3d4aee4b8df72ba646b1 (MD5) Previous issue date: 2011-05-16 / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / O acidente vascular encefálico (AVE) resulta de redução permanente ou transitória do fluxo sanguíneo para áreas encefálicas. Pode ser classificado como hemorrágico ou isquêmico. Sendo que o último é responsável por cerca de 87% dos casos. Esta desordem neuronal é a segunda maior causa de mortalidade e incapacidade no mundo e a principal causa de mortes no Brasil. Demonstrou-se que após a oclusão da artéria cerebral média (MCAO), os neuroblastos migram para o estriado isquêmico e substituem parcialmente os neurônios perdidos durante a isquemia. Além disso, a maioria dos neuroblastos migratórios morre na primeira semana após MCAO e eventos inflamatórios, principalmente a ativação microglial, pode desencadear na morte desses neuroblastos. Neste estudo, investigaram-se os efeitos do anti-inflamatório não esteróide, indometacina, nas ativação microglial, preservação neuronal e neurogênese adulta MCAO experimental de ratos adultos. Os animais sofreram MCAO por microinjeções de endotelina-1 e foram tratados (i.p) com indometacina ( N=8) ou solução salina estéril (N=8). Analisou-se através da imunoistoquímica, neurônios maduros (NeuN), ativação microglial/macrofágica (Iba1 e ED1) e migração de neuroblastos (DCX) 8 e 14 dias. O número de células NeuN, ED1 e DCX positivas por campo foram contadas no estriado isquêmico ou zona subventricular. O tratamento com indometacina reduziu a ativação microglial em geral e o número de células ED1+ em 8 e 14 dias após a lesão (médias de ±6,9 e ±3,0 células respectivamente), comparado ao controle (±7,9 ou ±6,5 células, p<0.001, ANOVA-Tukey). Aumentou o número de células DCX+ em ambas SVZ e estriado, em todos os tempos avaliados. Não houve diferença entre o número de células NeuN+ entre grupos. Os resultados mostram que o tratamento com indometacina inibe a ativação microglial concomitante com o aumento da proliferação e migração de neuroblastos após MCAO. Isto é resultado promissor, considerando que a indometacina é também usada em tratamentos de doenças humanas não neurais e que a neurogênese adulta pode levar à recuperação funcional após o AVE. / Stroke results from the transitory or permanent reduction of cerebral blood flow. It can be classified as hemorrhagic or ischemic. Ischemic stroke is responsible for around 87% of all cases. This acute neural disorder is the second cause of mortality and disability around the world and the main cause of death in Brazil. It has been shown that neuroblasts migrate to the ischemic striatum following middle cerebral artery occlusion (MCAO) and partially replace neurons lost during ischemia. Nevertheless, most of the migrating neuroblasts die in the first weeks following MCAO and inflammatory events, mainly microglia activation, may underlie neuroblast death. In this study, we investigated the effects of the nonsteroidal anti-inflammatory indomethacin on microglial activation, neuronal preservation and adult neurogenesis following experimental MCAO in adult rats. Animals were submitted to endothelin-1 induced- MCAO and treated (i.p) with indomethacin (N=8) or sterile saline (N=8) for 7 days and perfused at 8 or 14 days. Immunohistochemistry was performed to assess neuronal loss (anti-NeuN), microglial activation (anti-Iba1 and ED1) and migrating neuroblasts (anti-DCX). The numbers of NeuN, ED1 and DCX positive cells per field were counted in the ischemic striatum or subventricular zone. Indomethacin treatment reduced microglial activation in general and the number of ED1+ cells at both 8 and 14 days (±6,9 and ±3,0 cells respectively) postinjury, compared to control (±7,9 or ±6,5 cells, p<0.001, ANOVA-Tukey). There was an increase in the number of DCX+ cells in both subventricular zone (SVZ) and striatum at the same survival times. There was no difference in the number of NeuN positive cells between groups in all investigated survival times. The results show that indomethacin treatment induces inhibition of microglial activation concomitant with increased neuroblast proliferation and migration following MCAO. This is a promising outcome, considering that indomethacin is already used in non-neural human diseases and that adult neurogenesis may underlie functional recovery following stroke.

Orientador: Jean Leandro dos Santos / Banca: Chung, Man Chin / Banca: Simone Kashima Haddad / Resumo: A reativação da expressão gênica de gama-globina e consequente produção de hemoglobina fetal (HbF) por mecanismos epigenéticos é uma valiosa intervenção terapêutica na anemia falciforme. Estudos recentes mostram que a inibição da enzima Histona Deacetilase (HDAC), principalmente HDAC-1 e HDAC-2, mostrou ser uma estratégia promissora em promover o aumento da expressão gênica de gama-globina e a produção de HbF sem causar alteração no ciclo e proliferação celular. Neste trabalho foram planejadas por modelagem molecular novos compostos inibidores de HDAC 1 e 2. Os estudos de ancoragem molecular revelaram a forma como estes compostos interagem com a HDAC-2, sendo a subunidade N-(2-aminofenil)benzamida responsável por interagir com o átomo de zinco presente no sítio ativo. Durante o processo de otimização das estruturas, os valores de docking score passaram de -9,8 para - 12,3, indicando melhores interações com o receptor. Onze compostos inéditos foram sintetizados e caracterizados por métodos analíticos. Os estudos enzimáticos mostraram atividade inibitória dos novos compostos variaram de 83 à 96% para HDAC-1, 83 à 94% para HDAC-2 e 82 à-89% para HDAC-3. O composto (22) (4-(4-aminofenetil)-N-(2-aminofenil)benzamida) foi um dos mais ativos apresentando, na concentração de 10 μM, atividade inibitória contra as HDACs 1 e 2 com valores superiores a 90%. Estes resultados mostram que os compostos planejados neste trabalho são potenciais inibidores de HDAC, sendo a molécula (22) a mais ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Reactivation of gamma-globin gene expression and fetal hemoglobin (HbF) production through epigenetic mechanisms are valuable strategy to sickle cell anemia treatment. Early studies have demonstrated that histone deacetylase inhibition, especially HDAC-1 and HDAC-2, is a promising strategy to increase gamma-globin gene expression and HbF production without alteration in cell cycle or cell proliferation. At this work it was designed, by molecular modeling, new compounds HDAc 1 and 2 inhibitors. The molecular modeling studies has demonstrated how these compounds interacts with HDAC-2, being the subunit N-(2-aminophenyl)benzamide responsible for interact with the zinc atom of active site. During the optimization process, the docking score values hava changed from -9,8 to -12,3, which indicates better interactions with the receptor. It was synthesized and characterized eleven new compounds. Enzimatic assays have demonstrated that the enzymatic inhibition of the compounds varied from 83 to 96% against HDAC 1, 83-94% against HDAC 2 and 82-89% of HDAC 3. Compound (22) (4-(4-aminophenetyl)-N-(2-aminophenyl) benzamide was one of the most promisor among all compounds. At 10uM it was able to inhibit HDAC 1 and 2 more than 90%. These data has demonstrated that the design compounds in this work are potencial inhibitors of HDAC, being...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A investigação do potencial terapêutico de compostos naturais não tóxicos capazes de prevenir ou reduzir o impacto do estresse oxidativo em doenças inflamatórias diretamente relacionadas a dor tem exercido um papel fundamental no desenvolvimento de novas medicamentos. O ácido chiquímico (ACH) é um composto natural originalmente extraído da Illicium verum Hook. f., uma planta medicinal usada no tratamento de doenças inflamatórias. Apesar do ACH ter sido usado como um precursor químico na síntese do antiviral Tamiflu®, o seu potencial como um composto anti-inflamatório e antioxidante, já enraizado pelo uso popular, ainda permanece desconhecido. Baseado nisso, o objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade antioxidante, anti-inflamatória e antinociceptiva do ACH em modelos in vitro e in vivo. Inicialmente as propriedades físico-químicas do ACH foram avaliadas e a atividade antioxidante comprovada, bem como seu potencial de proteger a morte celular induzida por peróxido de hidrogênio em células de neuroblastoma SH-SY5Y. O ACH atenuou a inflamação induzida pelo LPS em macrófagos RAW 264.7, foi capaz de inibir a produção de citocinas (TNF-α e IL-β) e de NO, assim como a ativação das MAPKs (ERK1/2 e P38) induzida pelo LPS, sugerindo que o ACH pode exercer uma atividade anti-inflamatória. In vivo, o ACH bloqueou a hiperalgesia mediada pela carragenina (CG), TNF-α, prostaglandinas (PEG2) e dopamina (DA) em camundongos. Esses resultados sugerem que o efeito antinociceptivo do ACH pode ser atribuído, em parte, a sua ação antioxidante e anti-inflamatória, dois mecanismos que sustentam a transdução do sinal doloroso. / The investigation of the therapeutic potential of natural non-toxic compounds capable of counteracting oxidative stress associated with inflammatory disease and painful conditions, has been of key interest in drug development. Shiquimic acid (SA) is a nature-derived compound originally extracted from Illicium verum Hook. f., a chinese medicinal herb used to treat inflammatory diseases. Even though SA has currently been used as a chemical precursor for synthesis of the antiviral Tamiflu, its potential as an anti-inflammatory and antioxidant compound – already rooted by its popular use - remains unknown until now. Based on that, the aim of this study was to evaluate the antioxidant, anti-inflammatory and anti-nociceptive activity of SA in vitro and in vivo models. Initially the physic-chemical properties of SA were evaluated and proven antioxidant activity, as well as its potential to protect hydrogen peroxide-induced cell death in neuroblastoma SH-SY5Y cells. SA attenuates LPS-induced inflammation in RAW 264.7 macrophages, SA was capable of inhibiting TNF-α and IL-1β cytokines production, NO production as well as LPS-induced activation of MAPKs (p38 and ERK1/2), thus suggesting that SA may exert anti-inflammatory activity. In vivo, SA blocked carrageenan, TNF-alpha-, prostaglandin (PE2)-, and dopamine-induced hyperalgesia in mice. These results suggest that anti-nociceptive effect of SA could be attributed, at least in part, to their antioxidant and anti-inflammatory actions, two mechanisms underpinning painful signal transduction.

Anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) de uso tópico ocular são amplamente utilizados por um número crescente de médicos e veterinários, clínicos gerais e oftalmologistas. A crescente utilização de AINEs tópicos é motivada pela busca de fármacos que não apresentem os conhecidos efeitos adversos tópicos e sistêmicos dos corticosteróides. Desta forma, os profissionais envolvidos no cuidado destes pacientes devem estar cientes de que fármacos AINEs tópicos não são livres de efeitos adversos. Este trabalho objetivou investigar os potenciais efeitos adversos locais e sistêmicos da utilização de colírios contendo diclofenaco sódico 0,1% e cetorolaco de trometamina 0,5% em coelhos tratados por 90 dias. Desta forma buscou-se elucidar questões relacionadas à segurança do seu uso como agente terapêutico, que poderiam restringir a sua aplicação clínica em pequenos animais. Para isso, 18 coelhos foram divididos em três grupos. Os animais foram tratados três vezes ao dia por 90 dias com colírio de cetorolaco de trometamina 0,5%, diclofenaco sódico 0,1% e solução fisiológica (NaCl 0,9%). Foi realizada a mensuração diária do consumo de água e ração, assim como exames clínicos semanais e coleta de sangue a cada 30 dias. Ao final do tratamento os animais foram eutanasiados e necropsiados. A superfície da córnea foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Não houve alterações clínicas e diferenças entre os grupos quanto aos valores de hemograma, leucograma, contagem de plaquetas, tempo de protrombina e tromboplastina, proteínas totais, albumina, creatinina, sódio e potássio. Dados de necropsia não apontaram alterações macro ou microscópicas no sistema gástrico, hepático e renal. Após noventa dias de tratamento com ambos os colírios contendo AINEs, pôde ser identificado os princípios ativos no plasma por extração em fase sólida e detecção por espectrometria de massas. Valendo-se da MEV foi comprovado que ambos os AINEs causaram alterações no padrão celular do epitélio corneano. Os resultados desta tese foram apresentados no formato de artigos, sendo que no primeiro artigo foram descritas as implicações da absorção sistêmica dos colírios contendo cetorolaco de trometamina 0,5% e de diclofenaco sódico 0,1%; e o segundo artigo referiu-se à avaliação ultraestrutural do epitélio corneano de coelhos tratados por 90 dias com os colírios de sem cons cetorolaco de trometamina 0,5% e de diclofenaco sódico 0,1% sem conservantes. / The use of topical ophthalmic nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) is widely adopted by an increasing number of physicians and veterinarians, general practitioners and ophthalmologists. The increasing use of topical NSAIDs is motivated by the need of administer drugs that do not present the well-known adverse effects of topical and systemic corticosteroids. Thus, the professionals involved in the care of these patients should be aware that topical NSAIDs drugs are not free of adverse effects. This study aimed to investigate the potential local and systemic adverse effects of eye drops administration containing diclofenac sodium 0.1% and ketorolac tromethamine 0.5% in rabbits treated during a period of 90 days. In this manner we sought to clarify issues related to the safety of their use as a therapeutic agent, which could restrict its clinical application in small animals. The 18 rabbits were separated into three groups. The animals were treated three times daily during a period of 90 days with ketorolac tromethamine 0.5% eye drop, sodium diclofenac and 0.1% saline (0.9% NaCl). It was carried out a daily measurement of water and food consumption as well as a weekly clinical examination and blood sampling every 30 days. At the end of the treatment the animals were euthanized and necropsied. The corneal surface was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). There were no clinical alterations and differences between the three groups in terms of blood count values, white blood cell count, platelet count, prothrombin time and thromboplastin, total protein, albumin, creatinine, sodium and potassium. Necropsy data showed no macroscopic or microscopic changes in gastric, hepatic and renal system. Ninety days after treatment with both eye drops containing NSAIDs, it could be identified the active ingredients in the plasma by solid phase extraction and detection by mass spectrometry. Taking advantage of SEM has been proven that both NSAIDs caused changes in cellular pattern of the corneal epithelium. The results from the thesis were presented in these two articles, in the first, we described the implications of the systemic absorption of eyedrops diclofenac sodium 0,1% and ketorolac tromethamine 0,5%; and in the second article which refers to the ultrastructural evaluation of the corneal epithelium of rabbits treated for 90 days with eyedrops diclofenac sodium 0,1% and ketorolac tromethamine 0,5% preservative-free.

COURA, Chistiane Oliveira. Mecanismos envolvidos no efeito anti-inflamatório de uma fração polissacarídica da alga marinha vermelha Gracilaria cornea (J. Agardh). 2014. 140 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-20T12:38:56Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_cocoura.pdf: 3226811 bytes, checksum: 0625ca41429aeffc3b0dee658a74d25e (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T20:34:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_cocoura.pdf: 3226811 bytes, checksum: 0625ca41429aeffc3b0dee658a74d25e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:34:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_cocoura.pdf: 3226811 bytes, checksum: 0625ca41429aeffc3b0dee658a74d25e (MD5) Previous issue date: 2014 / Marine algae are natural sources of sulfated polysaccharides possessing several biological activities, including anticoagulant, antithrombotic, antinociceptivo and anti-inflammatory. Anti-inflammatory effects of total sulfated polysaccharides (PSTs) from the red seaweed Gracilaria cornea have been recently reported. However, their mechanisms of action are not clarified. Therefore, this study aimed to clarify some action mechanism involved in anti-inflammatory effect of G. Cornea. Initially, the PSTs were extracted by enzimatic digestion and following fractioned on DEAE-cellulose column, obtaining two fractions (FI - 0.5 M and FII - 0.75 M). Male Wistar rats (150-250g) were used in the in vivo models of inflammation. The anti-inflammatory activity was evaluated using the model of paw edema (s.c.) induced by dextran (500 μg/paw), carrageenan (700 μg/paw), histamine (100 μg/paw), serotonine (20 μg/paw), compound 48/80 (10 μg/paw), bradykinin (30 μg/paw) or L-arginina (15 μg/paw) and measured by plethysmometry. Moreover, the activity of myeloperoxidase (MPO), analysis of the vascular permeability and histological examination of the subplantar tissue were performed. In addition, was performed analysis of expression levels of genic and protein of inflammatory mediators TNF-α, IL-1β e COX-2 by qRT-PCR and immunohistochemistry, respectively. The involvement of heme-oxygenase-1 (HO-1) pathway in anti-inflammatory effect of FI was also investigated. Lastly, FI was locally injected to evaluate its pro-inflammatory activity, at doses of 3, 9 or 27 mg kg-1 per intraplantar subcutaneous (s.c.) route (i.pl.). The results showed that FI (3, 9 or 27 mg kg-1, sc) inhibited the paw edema induced by carrageenan (Cg) and dextran, as confirmed by reduced MPO activity and of the raise of vascular permeability in the paw tissue, respectively. In addition, histological examination of the subplantar tissue, FI (3, 9 or 27 mg kg-1, sc) was able to reduce cell migration and edema. In addition, FI inhibited in 62,8 and 64%, respectively, the paw edema induced by histamine and compound 48/80, but did not inhibit paw edema induced by serotonin and bradykinin, suggesting the participation of histamine in this effect. FI (9 mg kg-1) also inhibited in 76,2% the pawedema induced by L-arginine, a substrate to nitric oxide formation. Additionally, FI (9 mg kg-1, sc) inhibited the Cg-induced edema in animals with intact mast cells, but did not inhibit of those with degranulated mast cells by compound 48/80, revealing a protective role on mast cell membranes. FI down-regulated the IL-1β, TNF-α and COX-2 mRNA and protein levels, compared with Cg group. After inhibition with ZnPP IX, a specific of HO-1 inhibitor, the anti-inflammatory effect of Gc-FI was not observed in Cg-induced paw edema, suggesting thus that the anti-inflammatory effect of Gc-FI is in part dependent on the integrity of the HO-1 pathway. In relation the effect pro-inflammatory, FI (3, 9 ou 27 mg kg-1, sc) was able to induce intense inflammatory process with neutrophil accumulation, as confirmed by increase MPO activity. However, the induced edema at a dose of 27 mg kg-1 of FI was inhibited by indomethacin, dexamethasone, pentoxifylline and meclizine, suggesting the involvement of prostaglandins, histamine and primary cytokines in pro-inflammatory effect of FI. Thus, it is concluded that FI from G. cornea presents pro- and anti-inflammatory activities depending on the administration route, considered a therapeutic agent potential for future studies in inflammatory processes. / As algas marinhas são fontes naturais de polissacarídeos sulfatados (PSs) detentores de diversas atividades biológicas, incluindo anticoagulante, antitrombótica, antinociceptiva e anti-inflamatória. O efeito anti-inflamatório dos polissacarídeos sulfatados totais (PSTs) da alga marinha vermelha Gracilaria cornea foram relatados anteriormente. Entretanto, seus mecanismos de ação ainda não são conhecidos. O presente trabalho teve como finalidade esclarecer o mecanismo de ação envolvido no efeito anti-inflamatório de G. Cornea. Inicialmente, os PSTs foram extraídos por digestão enzimática e em seguida, fracionados por cromatografia de troca iônica em coluna de DEAE-celulose, originando duas frações (FI e FII). Foram utilizados ratos Wistar machos (180-250g) para os modelos experimentais in vivo da inflamação. O efeito anti-inflamatório da fração FI, nas doses 3, 9 e 27 mg kg-1, foi avaliado utilizando o modelo de edema de pata induzido (s.c.) por dextrana, carragenana, histamina, serotonina, composto 48/80, bradicinina ou L-arginina e mensurado por plestismometria. Além disso, foram feitos os ensaios da atividade da mieloperoxidase (MPO), análise da permeabilidade vascular e análise histopatológica dos tecidos subplantares. Em adição, foram realizadas análises dos níveis da expressão gênica e proteica dos mediadores inflamatórios TNF-α, IL-1β e COX-2 por PCR em tempo real e imunohistoquímica, respectivamente. Além disso, investigamos o envolvimento da via heme-oxigenase 1 (HO-1) no efeito anti-inflamatório da FI. Por fim, FI foi testada localmente quanto à atividade pró-inflamatória, nas doses 3, 9 ou 27 mg kg-1; s.c. intraplantar. Os resultados mostraram que FI (3, 9 ou 27 mg kg-1, s.c.) inibiu o edema de pata induzido pela carragenana (Cg) e dextrana, como confirmados pela redução da atividade da MPO e da permeabilidade vascular no tecido da pata, respectivamente. Na análise histopatológica do tecido subplantar, FI (3, 9 ou 27 mg kg-1, s.c) reduziu a migração celular e o edema. Em adição, FI (9 mg kg-1) inibiu em 62,8% e 64%, respectivamente, os edemas de pata induzidos por histamina e composto 48/80, mas não inibiu os edemas induzidos por serotonina e bradicinina, sugerindo a participação da histamina neste efeito. FI (9 mg kg-1) também inibiu o edema induzido por Cg em animais com mastócitos não degranulados, mas não inibiu o edema no grupo de animais com mastócitos degranulados pelo composto 48/80, sugerindo que a mesma estabilize membrana de mastócitos. Além disso, FI (9 mg kg-1) inibiu em 76,2% o edema induzido por L-arginina e também diminuiu a expressão gênica e proteica dos mediadores IL-1β, TNF-α e COX-2 em relação ao grupo Cg. Na presença de Zinco Protoporfirina IX (3 mg kg-1; s.c.), FI-Gc (9 mg kg-1) perdeu sua capacidade em inibir o edema induzido por Cg, exercendo assim seu mecanismo de ação anti-inflamatório através do envolvimento da via da HO-1. Com relação ao efeito pró-inflamatório, FI-Gc (3, 9 ou 27 mg kg-1, s.c.) foi capaz de induzir intenso edema com infiltrado de neutrófilos, que foi confirmada pelo aumento da atividade da MPO. No entanto, o edema induzido com a dose de 27 mg kg-1 da FI foi inibido por indometacina, dexametasona, pentoxifilina e meclizina, sugerindo assim o envolvimento de prostaglandinas, histamina e citocinas primárias no efeito pró-inflamatório da FI-Gc. Logo, conclui-se que apesar da FI de G. cornea apresentar efeito pró-inflamatório local, possui efeito anti-inflamatório sistemicamente com mecanismo de ação relacionado com inibição da histamina, estabilização de membrana de mastócitos, modulação gênica e proteica dos mediadores IL-1β, TNF-α e COX-2, além da ativação da via da HO-1.

A investigação do potencial terapêutico de compostos naturais não tóxicos capazes de prevenir ou reduzir o impacto do estresse oxidativo em doenças inflamatórias diretamente relacionadas a dor tem exercido um papel fundamental no desenvolvimento de novas medicamentos. O ácido chiquímico (ACH) é um composto natural originalmente extraído da Illicium verum Hook. f., uma planta medicinal usada no tratamento de doenças inflamatórias. Apesar do ACH ter sido usado como um precursor químico na síntese do antiviral Tamiflu®, o seu potencial como um composto anti-inflamatório e antioxidante, já enraizado pelo uso popular, ainda permanece desconhecido. Baseado nisso, o objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade antioxidante, anti-inflamatória e antinociceptiva do ACH em modelos in vitro e in vivo. Inicialmente as propriedades físico-químicas do ACH foram avaliadas e a atividade antioxidante comprovada, bem como seu potencial de proteger a morte celular induzida por peróxido de hidrogênio em células de neuroblastoma SH-SY5Y. O ACH atenuou a inflamação induzida pelo LPS em macrófagos RAW 264.7, foi capaz de inibir a produção de citocinas (TNF-α e IL-β) e de NO, assim como a ativação das MAPKs (ERK1/2 e P38) induzida pelo LPS, sugerindo que o ACH pode exercer uma atividade anti-inflamatória. In vivo, o ACH bloqueou a hiperalgesia mediada pela carragenina (CG), TNF-α, prostaglandinas (PEG2) e dopamina (DA) em camundongos. Esses resultados sugerem que o efeito antinociceptivo do ACH pode ser atribuído, em parte, a sua ação antioxidante e anti-inflamatória, dois mecanismos que sustentam a transdução do sinal doloroso. / The investigation of the therapeutic potential of natural non-toxic compounds capable of counteracting oxidative stress associated with inflammatory disease and painful conditions, has been of key interest in drug development. Shiquimic acid (SA) is a nature-derived compound originally extracted from Illicium verum Hook. f., a chinese medicinal herb used to treat inflammatory diseases. Even though SA has currently been used as a chemical precursor for synthesis of the antiviral Tamiflu, its potential as an anti-inflammatory and antioxidant compound – already rooted by its popular use - remains unknown until now. Based on that, the aim of this study was to evaluate the antioxidant, anti-inflammatory and anti-nociceptive activity of SA in vitro and in vivo models. Initially the physic-chemical properties of SA were evaluated and proven antioxidant activity, as well as its potential to protect hydrogen peroxide-induced cell death in neuroblastoma SH-SY5Y cells. SA attenuates LPS-induced inflammation in RAW 264.7 macrophages, SA was capable of inhibiting TNF-α and IL-1β cytokines production, NO production as well as LPS-induced activation of MAPKs (p38 and ERK1/2), thus suggesting that SA may exert anti-inflammatory activity. In vivo, SA blocked carrageenan, TNF-alpha-, prostaglandin (PE2)-, and dopamine-induced hyperalgesia in mice. These results suggest that anti-nociceptive effect of SA could be attributed, at least in part, to their antioxidant and anti-inflammatory actions, two mechanisms underpinning painful signal transduction.

Anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) de uso tópico ocular são amplamente utilizados por um número crescente de médicos e veterinários, clínicos gerais e oftalmologistas. A crescente utilização de AINEs tópicos é motivada pela busca de fármacos que não apresentem os conhecidos efeitos adversos tópicos e sistêmicos dos corticosteróides. Desta forma, os profissionais envolvidos no cuidado destes pacientes devem estar cientes de que fármacos AINEs tópicos não são livres de efeitos adversos. Este trabalho objetivou investigar os potenciais efeitos adversos locais e sistêmicos da utilização de colírios contendo diclofenaco sódico 0,1% e cetorolaco de trometamina 0,5% em coelhos tratados por 90 dias. Desta forma buscou-se elucidar questões relacionadas à segurança do seu uso como agente terapêutico, que poderiam restringir a sua aplicação clínica em pequenos animais. Para isso, 18 coelhos foram divididos em três grupos. Os animais foram tratados três vezes ao dia por 90 dias com colírio de cetorolaco de trometamina 0,5%, diclofenaco sódico 0,1% e solução fisiológica (NaCl 0,9%). Foi realizada a mensuração diária do consumo de água e ração, assim como exames clínicos semanais e coleta de sangue a cada 30 dias. Ao final do tratamento os animais foram eutanasiados e necropsiados. A superfície da córnea foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Não houve alterações clínicas e diferenças entre os grupos quanto aos valores de hemograma, leucograma, contagem de plaquetas, tempo de protrombina e tromboplastina, proteínas totais, albumina, creatinina, sódio e potássio. Dados de necropsia não apontaram alterações macro ou microscópicas no sistema gástrico, hepático e renal. Após noventa dias de tratamento com ambos os colírios contendo AINEs, pôde ser identificado os princípios ativos no plasma por extração em fase sólida e detecção por espectrometria de massas. Valendo-se da MEV foi comprovado que ambos os AINEs causaram alterações no padrão celular do epitélio corneano. Os resultados desta tese foram apresentados no formato de artigos, sendo que no primeiro artigo foram descritas as implicações da absorção sistêmica dos colírios contendo cetorolaco de trometamina 0,5% e de diclofenaco sódico 0,1%; e o segundo artigo referiu-se à avaliação ultraestrutural do epitélio corneano de coelhos tratados por 90 dias com os colírios de sem cons cetorolaco de trometamina 0,5% e de diclofenaco sódico 0,1% sem conservantes. / The use of topical ophthalmic nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) is widely adopted by an increasing number of physicians and veterinarians, general practitioners and ophthalmologists. The increasing use of topical NSAIDs is motivated by the need of administer drugs that do not present the well-known adverse effects of topical and systemic corticosteroids. Thus, the professionals involved in the care of these patients should be aware that topical NSAIDs drugs are not free of adverse effects. This study aimed to investigate the potential local and systemic adverse effects of eye drops administration containing diclofenac sodium 0.1% and ketorolac tromethamine 0.5% in rabbits treated during a period of 90 days. In this manner we sought to clarify issues related to the safety of their use as a therapeutic agent, which could restrict its clinical application in small animals. The 18 rabbits were separated into three groups. The animals were treated three times daily during a period of 90 days with ketorolac tromethamine 0.5% eye drop, sodium diclofenac and 0.1% saline (0.9% NaCl). It was carried out a daily measurement of water and food consumption as well as a weekly clinical examination and blood sampling every 30 days. At the end of the treatment the animals were euthanized and necropsied. The corneal surface was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). There were no clinical alterations and differences between the three groups in terms of blood count values, white blood cell count, platelet count, prothrombin time and thromboplastin, total protein, albumin, creatinine, sodium and potassium. Necropsy data showed no macroscopic or microscopic changes in gastric, hepatic and renal system. Ninety days after treatment with both eye drops containing NSAIDs, it could be identified the active ingredients in the plasma by solid phase extraction and detection by mass spectrometry. Taking advantage of SEM has been proven that both NSAIDs caused changes in cellular pattern of the corneal epithelium. The results from the thesis were presented in these two articles, in the first, we described the implications of the systemic absorption of eyedrops diclofenac sodium 0,1% and ketorolac tromethamine 0,5%; and in the second article which refers to the ultrastructural evaluation of the corneal epithelium of rabbits treated for 90 days with eyedrops diclofenac sodium 0,1% and ketorolac tromethamine 0,5% preservative-free.