A Periodontite é uma doença de etiologia multifatorial que acomete os tecidos de suporte dentário resultando em perda progressiva de inserção e perda óssea. Este estudo clínico controlado, aleatorizado e duplo-cego avaliou a eficácia da Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (TFDa), em aplicações múltiplas, como terapia adjuvante ao tratamento periodontal cirúrgico em pacientes com Periodontite Crônica Avançada (PCA). Dezesseis voluntários foram submetidos ao modelo de estudo do tipo boca dividida, recebendo tratamento de acesso cirúrgico associado a raspagem e alisamento radicular (RAR) adjunto à TFDa em protocolo de aplicação nos períodos de 0, 2, 7 e 14 dias pós-operatórios (Grupo Teste - GT), ou apenas tratamento de acesso cirúrgico associado a RAR (Grupo Controle - GC). Todos os pacientes receberam orientação de higiene oral e acompanhamento por 90 dias pós-cirúrgicos. Os seguintes parâmetros clínicos e microbiológicos foram avaliados: Nível clínico de inserção (NCI), Profundidade de sondagem (PS), Recessão gengival (RG), Sangramento à sondagem (SS), Índice de placa (IP) e contagem de 40 espécies microbianas subgengivais (checkerboard DNA-DNA hybridization). Os dados foram coletados nos períodos baseline (pré-terapia básica), 60 dias (30 dias após terapia não cirúrgica) e 150 dias (90 dias pós-cirurgia). Uma redução significativa na PS foi observada aos 150 dias para o GT, quando comparado ao GC no mesmo período (p < 0,05). O ganho do NCI foi significativamente maior no GT entre os tempos de 60 e 150 dias (p < 0,05). As mudanças da microbiota subgengival foram similares entre os grupos (p > 0,05), mas o Grupo Teste apresentou quantidades mais elevadas de bactérias compatíveis com saúde periodontal no período final do experimento em relação ao GC (p < 0,05). Concluiu-se que a utilização da TFDa em aplicações múltiplas, como terapia adjuvante ao tratamento cirúrgico periodontal, produziu melhoras significativas nos parâmetros clínicos no período de 90 dias de avaliação / Chronic Periodontitis is a multifactorial disease which results in tooth supporting tissues loss. This double-blind randomized controlled clinical trial assessed the efficacy of multiple sessions of antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) as an adjunct to surgical periodontal treatment in patients with severe chronic periodontitis (SCP). Sixteen volunteers were selected into this Split-mouth study. They were subjected to scaling and root planning in open flaps (SRP) combined with aPDT at 0, 2, 7, and 14 postoperative days (Test Group - TG), or only SRP (Control Group CG). All patients were instructed about oral hygiene and were followed up for 90 days after surgery. The following clinical and microbiological parameters were assessed: clinical assessment level (CAL), probing depth (PD), gingival recession (GR), bleeding on probing (BOP), plaque index (PI). Levels of 40 subgingival species were measured by checkerboard DNA-DNA hybridization at baseline, 60 (30 days after non-surgical therapy) and 150 days (90 days post-surgery). Data were collected at baseline (pre-intervention), at 60 days (30 days after the end of nonsurgical therapy), and at 150 days (90 days after surgery). A significant reduction in PD was observed at 150 days for the TG, when compared to the CG (p < 0.05). CAL gain was significantly higher in the TG at 60 and 150 days (p < 0.05). Changes in the subgingival microbiota were similar between the groups (p > 0.05), but the TG revealed a larger number of bacteria associated with periodontal disease at the end of the experiment compared to the CG (p < 0.05). In conclusion, multiple sessions of aPDT as an adjunct to surgical periodontal treatment significantly improved clinical parameters at 90 postoperative days

As espécies da família Brassicaceae são amplamente utilizadas na medicina popular para diversos fins terapêuticos. Pesquisas têm demonstrado que o rabanete (Raphanus sativus L.) contém muitas classes de fitoquímicos biologicamente ativos com propriedades anti-inflamatória, antimicrobiana, antioxidante e antimutagênica. Neste contexto, este estudo teve por objetivos: fornecer parâmetros de qualidade para a droga vegetal; realizar as análises químicas e avaliar as atividades antimicrobiana, leishmanicida e citotóxica do extrato seco e das frações das folhas de Raphanus sativus var. oleiferus Metzg. Inicialmente, realizou-se a triagem fitoquímica preliminar, por meio de testes qualitativos e Cromatografia em Camada Delgada no extrato seco, que permitiram a detecção de compostos como: flavonoides, taninos e terpenos. Posteriormente, o extrato seco e as frações foram analisados em espectrômetro de massas, o que possibilitou a identificação de alguns constituintes químicos, baseando-se na massa molecular e nos mecanismos de fragmentação das moléculas. As análises químicas quantitativas demonstraram que os teores de fenóis nas frações foram superiores à concentração obtida no extrato seco, sendo que os fenóis ficaram mais concentrados na fração butanólica (121,27 mg EAG/g). Os teores de flavonoides nas frações, exceto na fração aquosa, também foram superiores ao obtido no extrato seco, sendo que os flavonoides ficaram mais concentrados na fração acetato de etila (98,02 mg EQ/g). Nas avaliações da atividade antioxidante in vitro, observou-se que a atividade antirradicalar e o poder redutor das frações demonstraram resultados mais significativos em relação ao extrato seco, sendo que a fração acetato de etila apresentou os melhores resultados em ambos os experimentos, com porcentagem de sequestro de radicais DPPH de 83,45% e com porcentagem de redução de íons férrico de 11,34%. A análise da atividade antimicrobiana revelou que o extrato seco teve maior média de halos de inibição frente ao Bacillus subtilis (18,67 mm), sendo considerada uma média estatísticamente superior as produzidas pelas frações (p<0,05). Entretanto, os menores valores da concentração inibitória mínima (CIM) foram obtidos para Micrococcus luteus, sendo que a fração acetato de etila demonstrou menor concentração inibitória mínima (0,1 mg/mL) para esse micro-organismo, sendo considerada a fração mais ativa (80%). A bactéria Micrococcus luteus foi inibida por 50% das frações testadas com concentração inibitória mínima inferior ou igual a 1 mg/mL. O extrato seco e as frações não demonstraram atividade contra as bactérias Gram-negativas, as micobactérias e os fungos, e também não foram ativos contra os parasitos de Leishmania amazonensis. Os estudos demonstraram uma moderada correlação entre os mais baixos valores da CIM e as maiores quantidades de fenóis e de flavonoides, sugerindo que a atividade antimicrobiana não está relacionada somente com esses compostos, porém houve uma forte correlação entre os melhores valores da atividade antioxidante in vitro (pelo método do radical DPPH e pelo método do poder redutor) e as maiores quantidades de fenóis e de flavonoides no extrato e frações avaliados, sugerindo que os compostos fenólicos, especialmente os flavonoides, sejam os principais responsáveis pela atividade antioxidante in vitro da espécie vegetal em estudo. / The species of the Brassicaceae family are widely used in folk medicine for various therapeutic purposes. Research has shown that the radish (Raphanus sativus L.) contains many classes of biologically active phytochemicals with anti-inflammatory, antimicrobial, antioxidant and antimutagenic properties. In this context, this study aimed: to provide the quality parameters for plant drug; perform chemical analyzes and evaluate antimicrobial, antileishmanial and cytotoxic dry extract and fractions from the leaves of Raphanus sativus var. oleiferus Metzg. Initially, there was the preliminary phytochemical screening using qualitative tests and Thin Layer Chromatography in dry extract, which allowed the detection of compounds such as flavonoids, tannins and terpenes. Subsequently, the dry extract and fractions were analyzed in a mass spectrometer, which allowed the identification of some chemical constituents, based on the molecular mass and fragmentation mechanisms of molecules. Quantitative chemical analysis showed that the levels of phenolics in the fractions obtained were higher than the concentration in dry extract, and phenols were more concentrated in the butanol fraction (121,27 mg GAE/g). The content of flavonoids in the fractions, except the aqueous fraction, were also higher than those reported in dry extract, and flavonoids were more concentrated in the ethyl acetate fraction (98,02 mg EQ/g). The evaluation of the antioxidant activity in vitro, it was observed that the antiradical activity and reducing power of the fractions showed most significant results on the dry extract, and the ethyl acetate fraction showed the best results in both experiments, with percentage of sequestration DPPH radical of 83,45% and a percentage reduction of ferric ions 11,34%. The analysis of antimicrobial activity revealed that the dry extract had higher mean inhibition zones against Bacillus subtilis (18,67 mm) and is considered a statistically higher mean those produced by the fractions (p<0,05). The lowest values of minimum inhibitory concentration (MIC) were obtained for Micrococcus luteus, and the ethyl acetate fraction showed lowest minimum inhibitory concentration (0,1 mg/mL) for this micro-organism, is considered the most active fraction (80%). The bacterium Micrococcus luteus was inhibited by 50% of the tested fractions with lower or equal minimum 1 mg/mL inhibitory concentration. The dry extract and fractions do not show activity against Gram-negative bacteria, mycobacteria and fungi, and also were not active against the parasite Leishmania amazonensis. The studies showed a moderate correlation between the lowest MIC values and the highest amounts of phenolics and flavonoids, suggesting that the antimicrobial activity is not related only to these compounds, however there was a strong correlation between the best values antioxidant activity in vitro (by the method DPPH radical and by the method of reducing power) and higher amounts of phenolics and flavonoids in the extract and fractions evaluated, suggesting that phenolic compounds, especially flavonoids, are mainly responsible for the antioxidant activity in vitro plant species under study.

Pacientes com queimaduras e outras lesões cutâneas de grande extensão apresentam alta propensão a infecções multirresistentes. Neste contexto, o objetivo deste trabalho é a obtenção de nanopartículas de quitosana carregadas com composto derivado de 5-nitro-heterocíclico com estrutura análoga à nifuroxazida, N\'-((5-nitrofurano-2-il)metileno)-2-benzidrazida (C-H), que apresentou importante atividade frente a diversas cepas de bactérias multirresistentes. Por sua vez, a quitosana é um biopolímero com atividade antimicrobiana, analgésica, regeneradora tecidual e que, mediante contato com exsudato de lesões cutâneas forma filmes hidrogéis protetores no local de aplicação, sendo estas atividades importantes para a prevenção e tratamento de infecções e da exsudação excessiva de lesões de grande extensão. As nanopartículas de quitosana carregadas com o composto (Nps-H) foram obtidas pelo método de gelificação iônica com tripolifosfato de sódio como agente reticulante, variando a concentração de NaCl e polissorbato 80 do sistema, orientada por análise fatorial. As Nps-H obtidas foram caracterizadas por Dynamic Light Scattering (DLS) para determinação do tamanho, índice de polidispersão (IPD) e potencial zeta (&#950;). A eficiência de encapsulação (EE%) foi determinada por espectrofotometria UV/VIS a 370 nm por método indireto. Entre os experimentos desenvolvidos, aquele que apresentou os melhores resultados resultou em partículas de tamanho médio de 321 d.nm, IPD 0,18, P&#950; +37 mV e EE% de 48%. A morfologia e superfície das Nps-H foram analisadas por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e mostraram que as Nps-H são esféricas e de superfície irregular. A partir da obtenção e caracterização das Nps-H determinou-se a concentração inibitória mínima (CIM) das Nps-H, do composto livre (C-H) e das nanopartículas de quitosana vazias (Nps-Cs) por método colorimétrico e microdiluição frente às cepas de Staphylococcus aureus ATCC 29213, hVISA e ORSA. As Nps-H apresentaram atividade bastante superior comparando-se ao C-H e as Nps-Cs frente às cepas de S. aureus estudadas. Com vista à preparação de uma formulação farmacêutica estável, partiu-se para a liofilização das Nps-H e com esse objetivo realizou-se análises térmicas das Nps-H por Differential Scanning Calorimetric (DSC) para determinação das temperaturas de transição vítrea e eutética (Tg\' e Teut) e análise por criomicroscopia para determinação da temperatura de colapso (Tcol). Amostras de Nps-H com lio/crioprotetores glicina, lactose e sacarose a diferentes concentrações foram liofilizadas a -40 ºC a 100 mTorr. As amostras de Nps-H com lactose e sacarose ambas a 2,5% e 5% demonstraram preservar as características originais das Nps-H após o processo de liofilização. Observou-se, com os resultados obtidos neste trabalho que as Nps-H representam uma promissora alternativa na prevenção e tratamento de pacientes com lesões cutâneas infeccionadas por bactérias multirresistentes e no controle da exsudação excessiva, principalmente por suas atividades terapêuticas em conjunto, diminuindo a mortalidade e morbidade desses quadros. / Patients with burns and others extensive skin lesions show high propension to multiresistant infections. In this context, the aim of this project is to obtain chitosan nanoparticles carried with 5-nitro-heterocyclic derivate with structure analogue to nifuroxazide N\'-((5-nitrofuran-2-yl) methylene)-2-benzhydrazide, that showed important activity against multiresistant bacteria strains. In its turn, the chitosan is a biopolymer with antimicrobial, analgesic, tecidual regenerator activities and by contact with excessive burns and extensive skin lesions exsudate process, form protective hydrogel films on place of application, being these activities important to infection and excessive exsudate treatment and prevention of extensive burns and lesions. The chitosan nanoparticles carried with compound (Nps-H) were obtained by ionic gelation method with sodium tripolyphosphate as crosslinker agent, varing the NaCl and polysorbate 80 concentrations in the system, oriented by factorial analyze. The Nps-H obtained were characterized by Dynamic Light Scattering (DLS) to size determination, polydispersion index (PDI) and zeta potential (&#950;-P). The encapsulation efficiency (EE%) were determined by spectrophotometry UV/VIS at 370 nm by indirect method. Bepolissorbato the experiments developed, the one who showed the best results, resulted in particles with size of 321 d.nm, PDI of 0,18, &#950;-P of +37 mV and EE% of 48%. The Nps-H morphology and surface were analyzed by Scanning Electronic Microscopy (SEM) and showed that Nps-H are spherical and with irregular surface. Starting of Nps-H obtain and characterization were determined the Nps-H, free compound (C-H) and empty chitosan nanoparticles (Nps-Cs) Minimal Inhibitory Concentrations (MIC) by colorimetric method and microdilution against Staphylococcus aureus ATCC 29213, ORSA and hVISA strains. The Nps-H showed the superior activity comparing to C-H and Nps-H against all strains tested. With a view to preparation of stable pharmaceutic formulation, started to Nps-H freeze-drying and with this aim, were realized Nps-H thermal analyzes by Differential Scanning Calorimetric (DSC) to determine glass transition and euthetic temperatures (Tg\' and Teut) and the cryomicroscopy analyze to determine collapse temperature (Tcol). The Nps-H samples with lyo/cryoprotectants as glycine, lactose and sucrose at different concentrations were lyophilized at -40 ºC at 100 mTorr. The Nps-H samples with lactose and sucrose both at 2,5% and 5% demonstrated to preserve the original Nps-H characteristics after freeze-drying process. Were observed, with the results obtained in this project that Nps-H represent the promising alternative to prevention and treatment of patients with infected skin lesions by multiresitant bacteria and to control of excessive exudate process, mainly by their therapeutic activities combined, decreasing the mortality and morbidity of these cases.

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:58:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3075_1.pdf: 1945647 bytes, checksum: 99ed6719bdfcff0e1240d8e5ce5d5958 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A indústria alimentícia visa a produção de alimentos que apresentem vida-de-prateleira longa e inocuidade com relação à presença de microrganismos patógenos e suas toxinas. A nova tendência do consumidor e da legislação de alimentos têm tornado essa busca cada vez mais premente e necessária. A maioria das Doenças Transmitidas por Alimentos (DTAs) de origem microbiana possui sua etiologia bem estabelecida, de modo que a bactéria S. aureus é reconhecida como um dos agentes patogênicos mais comuns, sendo responsável por surtos associados à ingestão de alimentos in natura e processados em todo o mundo, justifica-se a execução de um estudo com ênfase na avaliação dos compostos fenólicos timol e carvacrol, os quais são reconhecidos como componentes majoritários do óleo essencial de O. vulgare. Desta forma, este estudo avaliou a inibição dos possíveis mecanismos de ação e a interferência de timol e carvacrol sobre o crescimento, potencial enterotoxigênico e alguns parâmetros metabólicos de cepas de S. aureus isoladas de alimentos. Aplicou-se de forma combinada o timol e carvacrol com ácido láctico e acético contra Staphylococcus aureus com a determinação da Concentração Inibitória fracionária (FIC) e índice de tempo de morte em ensaio com caldo de carne e um modelo alimentar (carne). A Concentração Inibitória Mínima (CIM) do carvacrol e timol foram 1,25 e 0,6 μL/mL, respectivamente. Índices de FIC da aplicação combinada dos constituintes fenólicos e ácidos orgânicos foram 0,5, sugerindo uma interação sinérgica. Não houve diferença significativa (p> 0,05) encontrada entre as contagens bacterianas para o caldo de carne acrescentado dos fenóis isoladamente ou em combinação com o ácido láctico em concentrações sub-inibitórias. Contrariamente, a contagem bacteriana encontrada para o caldo de carne acrescentado dos fenóis somente foram significativamente menores (p> 0,05) às contagens obtidas para o caldo acrescentado da combinação de compostos fenólicos e ácido acético. Não houve diferença significativa (p> 0,05) entre as contagens bacterianas para o modelo de carne adicionado de fitoquímicos isolados e em combinação com os ácidos orgânicos. Os antimicrobianos testados isoladamente ou em mistura proporcionaram menores efeitos a influência dos compostos fenólicos carvacrol e timol sobre algumas características fisiológicas e modulação da secreção de fatores de virulência estafilocócicas, coagulase e enterotoxina. Foram também estudados possíveis mecanismos para o estabelecimento de atividade anti-estafilocócica por estes compostos. Concentrações subnibitórias (0,3 e 0,15 μL/mL) do carvacrol e timol inibiram fortemente a atividade das enzimas coagulase e lipase, além de causar uma perda significativa de tolerância à salinidade. A supressão da produção de enterotoxinas ocorreu totalmente com ambos compostos fenólicos em concentrações subnibitórias. A perda de material absorvente 260-nm e íons potássio ocorreu imediatamente após a adição de carvacrol e timol nas concentrações de 0,6 e 1,2 μL/mL. A microscopia eletrônica de células tratadas com o carvacrol e timol revelou a formação de defeitos na superfície das células e perda de material citoplasmático. Esses resultados sugerem uma abordagem interessante para a melhoria da preservação de alimentos que utilizam procedimentos mais naturais, considerando a demanda atual de consumo e qualidade sensorial de alimentos

Os peptídeos antimicrobianos (AMPs) são uma alternativa promissora aos antibiróticos. Os AMPs, compostos de menos de 80 aminoácidos, apresentam caráter anfipático o que lhes dá a capacidade de agir em membranas lipídicas. Podem formar poros na membrana causando morte da célula. Seu espectro de ação é variado, sendo seus alvos bactérias até células de mamíferos. Os AMPs são encontrados em todos os seres vivos, desde bactérias, plantas, insetos e mamíferos, apresentam diferentes estruturas, composição de aminoácidos e agem por diversos mecanismos. Dois peptídeos antimicrobianos têm sido estudados por sua grande eficiência: a Cecropina A, peptídeo não hemolítico e que sofre degradação por proteases, e a Melitina, de grande potencial antimicrobiano, mas que apresenta atividade hemolítica hemólise. Para se obter uma melhor ação terapêutica, foram sintetizados híbridos de Cecropina e Melitina, dentre eles, o BP100, cuja sequência é KKLFKKILKYL-NH2. O BP100, além de atuar sobre a membrana de bactérias causando a sua morte, é pouco hemolítico e possui alta seletividade por membranas carregadas negativamente, o que é característica das membranas bacterianas. Estudamos a interação do BP100 com vesículas unilamelares grandes, LUVs obtidas por extrusão, preparadas com misturas de fosfatidilcolina de ovo (PC) e fosfatidilglicerol (PG) utilizando técnicas de fluorescência, dicroísmo circular, mobilidade eletroforética, espalhamento de luz dinâmico e microscopia óptica (neste caso utilizando-se vesículas gigantes, GUVs), a fim de obter informações sobre o mecanismo de ação do BP100. Nossos resultados mostraram que o BP100 permeabiliza LUVs preparadas com diferentes misturas de PC:PG, mesmo em alta força iônica. A presença de carga negativa nas LUVs aumenta significativamente a atividade do peptídeo enquanto o colesterol diminui a sua atividade. Quanto a sua estrutura secundária, em meio aquoso o BP100 apresentou uma estrutura ao acaso. Na presença de vesículas de PC sua estrutura não apresentou alteração e em vesículas de PC:PG, observou-se estrutura típica de alfa-hélice. Mostrou-se também que as LUVs de PC não se agregam na presença de BP100, mas o peptidio altera a sua mobilidade eletroforética. Nas LUVs contendo PG, entretanto, observou-se agregação e alteração da mobilidade eletroforética, confirmando a forte ligação do BP100 a essas vesículas. A observação direta da ação do BP100 sobre as GUVs preparadas com PC e PC:PG, mostrou que o peptídeo forma agregados na superfície da membrana e diminui o diâmetro das GUVs. Observou-se agregação de vesículas, formação de brotos na superfície das vesículas e, posteriormente, rompimento das mesmas com o vazamento de todo conteúdo interno. O conjunto dos dados obtidos é sugestivo de que o BP100 atua formando estruturas similares a poros na membrana das vesículas, através dos quais o conteúdo interno extravasa. A formação de estrutura em -hélice do BP100 em LUVs contendo PG que deve favorecer estruturação do poro / Antimicrobial peptides (AMPs) have been a promising alternative therapy to antibiotics. These molecules, consisting of less than 80 amino acids, with different structures and amino acids composition, have amphipathic character which gives them the ability to act on lipid bilayers. They act, by different mechanisms, over bacteria to mammal cells. The AMPs are found in all kinds of living creatures, bacteria, plants, insects and mammals. Two important antimicrobial peptides have been studied because of their high efficiency: the Cecropin A, a non-hemolytic peptide which undergoes degradation by proteases, and Melittin, which has high antimicrobial potential but with hemolytic activity. In order to obtain peptides with better therapeutic action, hybrids peptides of Cecropin and Mellitin were synthesized. One of them, BP100, which has the sequence KKLFKKILKYL-NH2, is a target of several studies because it acts on bacteria´s membrane causing it´s death, but do not cause hemolysis and has a high selectivity for negatively charged membranes, characteristic of bacterial membranes. Here we study the properties of BP100 and its interaction with large unilamellar vesicles, LUVs, prepared with egg phosphatidylcholine (PC) and phosphatidylglycerol (PG) by extrusion. Fluorescence techniques, circular dichroism, CD, electrophoretic mobility, dynamic light scattering and optical microscopy with giant vesicles (GUVs) were used in order to obtain informations about its action mechanisms. Our results showed that BP100 is able to cause leakage of vesicles prepared with different mixtures of PC:PG, even at high ionic strength. The increase in negative charge of the vesicles significantly raises the activity of the peptide whereas the presence of cholesterol decreases its activity. The secondary structure of BP100 was studied by CD technique in water and a random coil structure was observed. In the presence of PC vesicles, BP100 did not change its structure. However, it aquires a typical alpha-helix structure in the presence of negative vesicles of PC:PG. Analysis of hydrodynamic diameter of LUVs in the presence of BP100 showed that BP100 didn\'t cause significant change in PC vesicles diameter but,with anionic vesicles at low ionic strength, large aggregates are formed. BP100 also changed the electrophoretic mobility of both LUVs containing only PC and mixtures of PC:PG, confirming the binding of BP100 at all membranes. The data set obtained is suggestive that BP100 acts binding to the vesicle membrane forming pores through which the internal contents overflows. The negative surface of the vesicle induces BP100 to acquire an &#945; -helix conformation which favors the formation of a pore structure. BP100 also forms aggregates at the membrane surface of giant lipid vesicles (GUVs) and reduce its diameter. Aggregation of vesicles, formation of buds on the vesicle´s surface and finally the rupture and leakage of internal contents was also observed in GUVs of PC and PC:PG

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-05T13:02:02Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3228996 bytes, checksum: 780644153c363d1add4ea91f8694ce39 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T13:02:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3228996 bytes, checksum: 780644153c363d1add4ea91f8694ce39 (MD5) Previous issue date: 2003-03-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As doenças infecciosas estão entre as principais causas de morte da população humana. Esse fato é causado, em grande parte, pelo surgimento de microrganismos multi-resistentes aos antibióticos. Portanto, apesar da disponibilidade de um grande número de antibióticos de última geração, torna-se ainda fundamental buscar compostos que possam atuar como novas drogas a serem utilizadas no combate as doenças infecciosas. Em plantas, a atividade antimicrobiana pode ser demonstrada por vários tipos de moléculas, como as proteínas relacionadas com a patogenicidade, os componentes orgânicos das plantas, as famílias de peptídeos antimicrobianos e as espécies ativas de oxigênio e nitrogênio. Atualmente, peptídeos antimicrobianos de origem vegetal estão sendo utilizados como modelos para o desenho de novas drogas com aplicação nas áreas agrícolas e de saúde. Deste modo, nosso trabalho objetivou a determinação da metodologia mais eficaz para a purificação dos peptídeos catiônicos, presentes em sementes maduras de soja, com atividade antimicrobiana ou outras, e a caracterização bioquímica destes peptídeos visando à obtenção de informações de importância para a elucidação de suas funções biológicas. Os peptídeos de semente madura de soja foram extraídos, na proporção de 1:5 (gramas semente : mL tampão), em tampão fosfato de sódio 25 mM, pH 7,4, contendo KCl 100 mM, EDTA 2 mM, PVP 1,5% (p/v), tiouréia 2 mM, PMSF 1 mM e benzamidina 1 mM por homogeneização do extrato durante 2 h a 4 °C, em banho de gelo. O extrato obtido foi centrifugado a 20.300 x g a 4 °C e o sobrenadante obtido após o final da extração foi fracionado com sulfato de amônio sólido 35% sat. e centrifugado sob as mesmas condições. O sobrenadante foi aquecido a 80°C por 15 min e novamente centrifugado sob as mesmas condições. Após a diálise do extrato em membrana de exclusão de 1.000 Da, foram realizadas as cromatografias de troca aniônica, em coluna DEAE- Sepharose equilibrada com tampão Tris-HCl 50 mM, pH 8,0; a de exclusão molecular, em coluna Superdex Peptide equilibrada com tampão Tris-HCl 50 mM, pH 8,0, contendo 150 mM de NaCl; e a de fase reversa, em coluna C 18 equilibrada com acetonitrila 80% e TFA 0,1%, para obtenção dos peptídeos catiônicos purificados. A análise em espectrômetro de massa das frações eluídas do HPLC indicou a presença de compostos de massas moleculares menores do que 500 Da, 678,61 Da e 700,60 Da, a presença de peptídeos com massas moleculares de 5.809,11 Da, 8.526,97 Da e 14.113,18 Da. A seqüência de aminoácidos do peptídeo de 5.809,11 Da foi determinada e mostrou alta homologia com as cadeias B da pró-insulina humana e de vários outros organismos, da insulina bovina e da insulina de feijão-de-porco (Canavalia ensiformes). Os compostos presentes em dois pools eluídos da cromatografia de exclusão molecular, pool 2 e pool 3, inibiram o crescimento da bactéria Gram-negativa Ralstonia solanacearum, enquanto que, para a bactéria Gram-positiva Clavibacter michiganensis, somente o pool 3 exerceu alguma ação, mas com a inibição do crescimento muito menor do que a obtida para a Ralstonia solanacearum. Assim, estes compostos apresentam potencial antimicrobiano a ser explorado na indústria agrícola. / The infectious diseases are among the main causes of death of the human population. That fact occurs, mainly, for the appearance of multi-resistant microrganisms to the antibiotics. Therefore, in spite of the readiness of a great number of antibiotics of last generation, it becomes still important to look to substances new that can act as new drugs it be used in the combat the infectious diseases. In plants, the antimicrobial activity can be demonstrated by several types of molecules, as the proteins related with the patogenicity, the organic components from the plants, the families of antimicrobial peptides and the active species of oxygen and nitrogen. Now, antimicrobial peptides of vegetable origin are being used as models for the drawing of new drugs with application in the agricultural areas and health. In this way, our work objectified the determination of the most effective methodology for the purification of the cationic peptides, presents in mature seeds of soybean, with antimicrobial activity or other, and the biochemical characterization of these peptides seeking to the obtaining importance information for the elucidation of its biological functions. The peptides of mature seed of soybean was extracted, in the proportion of 1:5 (grams seed: mL), in 25 mM buffer phosphate, pH 7.4, with 100 mM KCl, 2 mM EDTA, 1.5% (p/v) PVP, 2 mM thioureia, 1 mM PMSF and 1 mM benzamidine for stirring of the extract during 2 h at 4 °C and centrifuged (20,300 x g, 4 °C). As the first steps of purification, proteins were recovered from a 35% sat. ammonium sulfate precipitation (2h, 4 o C) after centrifugation, incubated at 80 o C for 15min and centrifuged again. After the dialysis of the extract in membrane of 1,000 Da, they were accomplished the chromatography of anion exchangers, in DEAE-Sepharose column equilibrated in 50 mM Tris-HCl, pH 8.0; the one of gel filtration, in Superdex Peptide column equilibrated in 50 mM Tris-HCl, pH 8.0, with 150 mM of NaCl; and the one RP- HPLC, in C18 column equilibrated with acetonitrile 80% and TFA 0,1%, for obtaining of the cationic peptides purified. The analysis in mass spectrometer of the fractions eluted from HPLC indicated the presence of composed of smaller molecular mass than 500 Da, 678.61 Da and 700.60 Da, the peptides presence with molecular mass of 5,809.11 Da, 8,526.97 Da and 14,113.18 Da. The sequence of amino acids of the peptide of 5,809.11 Da was determined and it showed high homology with the chain B of the human pro-insulin and of several other organisms, of the bovine insulin and of jack bean insulin (Canavalia ensiformes). The present compositions in two pools eluted of the chromatography of molecular exclusion, pool 2 and pool 3, inhibited the growth of the bacteria Gram-negative Ralstonia solanacearum, while, for the bacteria Gram-positive Clavibacter michiganensis, only the pool 3 exercised some action, but with the inhibition smaller growth than obtained it for the Ralstonia solanacearum. Thus, these matters own antimicrobial potential to be explored in the agricultural industry. / Dissertação importada do Alexandria

MONTENEGRO, M.A. Efeito do extrato do bagaço do pendúculo de caju (Anacardium occidentale L.) contra Streptococcus mutans. 2012. 71 f. Dissertação. (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2012. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-08-23T13:48:10Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_mamontenegro.pdf: 1919974 bytes, checksum: 87da3b64eae69ed89fb55fe9ea456063 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-27T14:58:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_mamontenegro.pdf: 1919974 bytes, checksum: 87da3b64eae69ed89fb55fe9ea456063 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-27T14:58:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_mamontenegro.pdf: 1919974 bytes, checksum: 87da3b64eae69ed89fb55fe9ea456063 (MD5) Previous issue date: 2012 / The Anacardium occidentale L, popularly known as cashew tree, occupies an important place among the fruit trees due to the increasing commercialization of its main products. In northeastern Brazil, its cultivation is one of the main agricultural activities in the region. Concentrating in the states of Ceará, Piauí and Rio Grande do Norte, it is used in folk medicine for various therapeutic purposes, including as an antimicrobial. The cashew apple bagasse is obtained after extracting the juice, being a major source of waste of agribusiness. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial and antibiofilm potential of the hydroalcoholic extract of the cashew apple pomace (ECAP) against the Streptococcus mutans. It was determined the minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC) and the preventive assay for biofilm formation through biomass quantification. The Streptococcus mutans strain UA159 was used for this intention. The antimicrobial assay results showed that the ECAP was considered bactericidal (250μg.mL) and was considered bactericidal at the concentration of 1000μg.mL. Inhibition in the biomass was observed at the minimum concentration of 250μg.mL. Thus, it was concluded that the EPAC shows antimicrobial and antibiofilm activity against Streptococcus mutans. These results demonstrate the potential of the ECAP as a possible biotechnological product in the field of dentistry. / O Anacardium occidentale L., conhecido popularmente como cajueiro, ocupa um lugar importante entre as plantas frutíferas devido à crescente comercialização dos seus principais produtos. No nordeste brasileiro, seu cultivo é uma das principais atividades agropecuárias da região. Concentrando-se nos estados do Ceará, Piauí e Rio Grande do Norte, é utilizado na medicina tradicional para diversos fins terapêuticos, inclusive, como antimicrobiano. O bagaço do caju é obtido após a extração do suco, sendo uma importante fonte de resíduos da agroindústria. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial antimicrobiano e antibiofilme do extrato hidroalcoólico do bagaço do pedúnculo do caju (EBPC) frente a bactéria Streptococcus mutans. No presente estudo, determinou-se a Concentração Inibitória Mínima (CIM), Concentração Bactericida Mínima (CBM) e avaliou-se a inibição da formação de biofilme através da quantificação da biomassa. Para isso, utilizou-se a cepa de S. mutans. Os resultados dos ensaios antimicrobianos mostraram que o EBPC teve ação bacteriostática (CIM = 250 μg.mL-1) e bactericida (CBM = 1000 μg.mL-1). Observou-se inibição da biomassa na concentração mínima de 250 μg.mL-1. Deste modo, concluiu-se que o EBPC apresentou atividade antimicrobiana e antibiofilme frente ao S. mutans. Estes resultados demonstraram o potencial do EBPC como um possível produto biotecnológico na área da odontologia.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2014-10-22T18:58:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Carine Souza Aguiar.pdf: 1618744 bytes, checksum: a297cae4dbf16da3ebefd6282adb27c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-22T18:58:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Carine Souza Aguiar.pdf: 1618744 bytes, checksum: a297cae4dbf16da3ebefd6282adb27c1 (MD5) / Os venenos de serpentes são constituídos por uma mistura complexa de substâncias e como consequência podem apresentar distintas funções biológicas, bioquímicas e farmacológicas. Devido ao seu elevado grau de especificidade do alvo, toxinas têm sido cada vez mais utilizadas como instrumentos farmacológicos e como protótipos para o desenvolvimento de drogas. As infecções estão entre as dez principais causas de morte no mundo, por isso é necessária a descoberta de novas alternativas para o tratamento das infecções que envolvem os diversos microrganismos patogênicos. Apesar dos efeitos tóxicos, os venenos possuem grande potencial para produção de novos medicamentos. Através de metodologias como disco difusão e microdiluição é possível identificar se um composto possui ou não atividade antimicrobiana e avaliar a intensidade dessa atividade. Existem vários relatos de atividade antimicrobiana em venenos de diferentes serpentes. A descoberta de novas moléculas que possuam alguma atividade biológica decorre de testes com substâncias que ainda não foram utilizadas para este fim e/ou que não tenham sido estudadas em sua totalidade, por isso, dentre as várias espécies de serpentes peçonhentas, foram escolhidos como alvo deste trabalho as serpentes Bothrops leucurus e Crotalus durissus cascavella, pois o uso dos venenos produzidos por elas constituem-se como fontes potenciais para o estudo de atividades bactericida e antifúngico. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana dos venenos totais dessas serpentes contra 20 cepas bacterianas e 8 espécies fúngicas através do teste de disco difusão, determinar a concentração inibitória mínima (CIM) e comparar a atividade antimicrobiana desses venenos. Os testes mostraram que o veneno VBL apresentou atividade através da formação de halos de inibição frente a 19 cepas de bactérias e o VCC em 18 cepas. A ação dos dois venenos foi dose-dependente no teste de disco difusão para a maioria dos microrganismos. O veneno VBL em solução aquosa manteve sua atividade após o congelamento nos teste de microdiluição em caldo frente a 10 cepas de bactérias e o VCC em apenas 6 cepas. Em relação aos fungos filamentosos o VBL apresentou atividade em 4 e o VCC em 2 das espécies testadas. Os valores das CIM's determinadas para os dois venenos demonstram que o VBL possui maior atividade na inibição de todos os microrganismos do que o VCC. Diante dos resultados encontrados, acredita-se que é possível termos mais de uma substância agindo na inibição do crescimento dos microrganismos. É importante ressaltar que como se trata de venenos totais, muitas substâncias podem estar atuando sobre esses microrganismos. Bactérias e fungos variam amplamente na composição das suas membranas e paredes, portanto, era esperado que exibissem diferentes sensibilidades aos venenos, não sendo ainda possível avaliar se uma ou mais substâncias são responsáveis pelos resultados encontrados.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-08-09T18:36:10Z No. of bitstreams: 1 2016_DéboraEuclydesMarianodaCosta.pdf: 1854082 bytes, checksum: 8ff7b9aa2b305df396034112901786e1 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-09-09T11:43:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_DéboraEuclydesMarianodaCosta.pdf: 1854082 bytes, checksum: 8ff7b9aa2b305df396034112901786e1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-09T11:43:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_DéboraEuclydesMarianodaCosta.pdf: 1854082 bytes, checksum: 8ff7b9aa2b305df396034112901786e1 (MD5) / Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito antioxidante e antimicrobiano da adição de extrato liofilizado de erva-mate em carnes de peito de frango, para aumentar o tempo de prateleira. Os peitos de frango frescos foram divididos em cinco tratamentos: controle negativosem extrato (CN), 0,05% (0,05EM), 0,10% (0,1EM), 0,15% (0,15EM) e 0,20% (0,2EM) de extrato de erva-mate. Para avaliação da atividade antioxidante foi analisado periodicamente o acúmulo dos compostos secundários da oxidação lipídica através do método de TBARS (Thiobarbituric Acid Reactive Substances) nos dias 0, 2, 4, 6, 8 e 10 em almôndegas cozidas e armazenadas a 4ºC. No estudo da atividade antimicrobiana foram realizadas contagens de bactérias mesofílicas totais, psicotróficas e bolores e leveduras a cada dois dias (dia 1, 3, 5 e 7) na carne de peito de frango crua armazenada a 7ºC. Ainda foi realizado o teste de difusão em disco frente a E. coli e ao P. mirabilis previamente isolados da carne de frango, utilizando diferentes concentrações do extrato (125mg/ml, 250mg/ml, 550mg/ml, controle negativo (solução salina 0,85%) e erva-mate pura). A adição de 0.10%; 0.15% e 0.20% do extrato de erva-mate foi eficiente na proteção dos lipídios durante o cozimento, uma vez que não houve diferença significativa (P>0.05) nos valores de TBARS entre as almôndegas cruas e cozidas. A adição do extrato de erva-mate reduziu (P <0.0001) a produção de compostos secundários da oxidação lipídica, agindo como um antioxidante natural em almôndegas pré-cozidas durante 10 dias de armazenamento refrigerado, independente da concentração utilizada, quando comparado com o CN. Foi observada uma regressão quadrática (P<0,0001) entre os tratamentos, indicando que os valores de TBARS diminuíram à medida que a concentração de extrato aumentou, sendo possível estimar a concentração de 0,18% como a mais eficiente no controle da oxidação nas condições do estudo. A contagem de bactérias mesofílicas e psicotróficas foi reduzida (P< 0,05) com o aumento da inclusão do extrato somente no primeiro dia de armazenamento. Para bolores e leveduras, a contagem foi reduzida linearmente (P<0,05) quando armazenado por um dia e de forma quadrática (P<0,05) no terceiro dia a medida que a inclusão do extrato aumentou. A aplicação dos tratamentos no teste de difusão em disco apresentou regressão de segundo grau (P<0,0001) tanto para a E. coli quanto para o P. mirabilis, sendo que quanto maior a concentração de mate, maior o halo de inibição formado, sendo que o tratamento com o mate puro foi o mais eficiente contra ambas as bactérias. Em conclusão, a adição do extrato de erva mate mostrou efeito antimicrobiano in vitro frente às bactérias avaliadas, porém quando adicionado diretamente nas amostras de carne de peito de frango não exerceu controle do crescimento microbiano durante os 7 dias de armazenamento resfriado, não contribuindo para a extensão do tempo de prateleira. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The objective of this study was to investigate the antioxidant and antimicrobial effects of the addition of yerba mate extract on chicken breast meat to increase the shelf life. Fresh chicken breast meat was divided into five treatment: negative control with no extract (NC), 0.05% (0,05EM), 0.10% (0,1EM), 0,15% (0,15EM) and 0.20% (0,2EM) of yerba mate extract. In order to evaluate the antioxidant effect, TBARS method (Thiobarbituric Acid Reactive Substances) was applied in pre-cooked meatballs to measure the accumulation of secondary lipid oxidation compounds during cooking on days 0, 2, 4, 6, 8 and 10 of chilled storage (4 °C). The antimicrobial activity was evaluated in raw chicken meat stored at 7 °C by counting the amount of total mesophilic bacteria, psychrotrophic bacteria,molds and yeasts every two days (days 1, 3, 5 and 7). E. coli and P. mirabilis isolated from the chicken meat was used to perform a disc diffusion test using different extract concentrations (125mg/ml, 250mg/ml, 550mg/ml, negative control (solution saline 0.85%) and pure yerba mate). The addition of 0.10%; 0.15% and 0.20% yerba mate extract effectively protected lipids during cooking, since no differences (P>0.05) were found in TBARS values between raw and cooked samples. The addition of yerba mate extract to chicken meatballs reduced (P <0.0001) the production of secondary lipid oxidation compounds acting as a natural antioxidant in pre-cooked meatballs during 10 days of chilled storage regardless the concentration used, when compared to NC. It was observed a quadratic regression (P <0.0001) in which TBARS values reduced as the addition of yerba mate increased and it was possible to estimate that 0,18% of yerba mate was the most effective concentration to control lipid oxidation in this study. The total mesophilic and psychrotrophic bacteria count was statistically reduced (P <0.05) as the addition of yerba mate increased only on day 1. For molds and yeasts, increasing yerba mate addition reduced linearly (P<0,05) the count on day 1 and quadratically (P<0,05) on day 3. Increasing addition of yerba mate extract also increased (P<0,0001) inhibition for E. coli and P. mirabilis and the treatment with pure yerba mate showed the most effective treatment against both bacteria. The yerba mate extract showed in vitro antimicrobial activity against the studied bacteria, however, did not exhibited microbial growth control when added to raw chicken breast meat during 7 days of chilled storage, not contributing to the extent of shelf life.

Submitted by Liliane Ferreira (ljuvencia30@gmail.com) on 2018-10-03T11:55:30Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gracielle Teles Pádua - 2018.pdf: 3474471 bytes, checksum: 88584015e304fe0302aa7b1d209b5a74 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-10-04T10:24:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gracielle Teles Pádua - 2018.pdf: 3474471 bytes, checksum: 88584015e304fe0302aa7b1d209b5a74 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-04T10:24:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gracielle Teles Pádua - 2018.pdf: 3474471 bytes, checksum: 88584015e304fe0302aa7b1d209b5a74 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-08-31 / Escherichia coli (E. coli) occupies the 2nd place among microorganisms involved in outbreaks of DVA’s in Brazil and is among the 4 most important worldwide, due to its importance the purpose of the work was to verify the microbiological quality the presence of E. coli in products of animal origin. A total of 365 strains were isolated by means of trailing swabs of 154 carcasses of cattle, slaughtered in the municipality of Mineiros - GO. The incidence of E. coli in the samples collected was 81,65%.Of the isolates, 16 had the gene (eae), and none had genes (stx1, stx2). Therefore, their frequency in the carcasses was 9,74% (15/154). All 16 strains were tested for adhesion genes (ToxB, efa1), but none has these genes. They were also tested for motility where 100% (16/16) were positive and for hemolysis where a frequency of 37,5% (6/16) was obtained. Fifty strains were tested for antimicrobial resistance, and the antibiotics with the highest percentages of resistance among bacteria were Cephalotin with 82% (41/50), followed by Gentamicin and Amicacin with 26% (13/50) each. None of the samples showed production of the extended spectrum beta-lactamase enzyme. These results demonstrate the presence of EPEC multiresistant in bovine carcasses slaughtered in the municipality of Mineiros-GO. / A Escherichia coli (E. coli) ocupa o 2° lugar entre os microrganismos envolvidos em surtos de DVA’s no Brasil e está entre os 4 mais importantes a nível mundial, devido a sua importância o intuito do trabalho foi de verificar a qualidade microbiológica frente a presença de E. coli nos produtos de origem animal. Um total de 365 cepas foram isoladas por meio de suabes de arrasto de 154 carcaças de bovinos, abatidos no município de Mineiros – GO. A incidência de E. coli nas amostras coletadas foi de 81,65%. Das cepas isoladas, 16 possuíam o gene (eae), e nenhuma apresentou os genes (stx1, stx2). Portanto, a frequência destas nas carcaças foi de 9,74% (15/154). As 16 cepas foram testadas para os genes de adesão (ToxB, efa1), porém nenhuma apresentou os referidos genes. Também foram testadas para motilidade onde 100% (16/16) foram positivas, e para hemólise onde se obteve incidência de 37,5% (6/16). Quanto ao perfil de resistência a antimicrobianos foram testadas 50 cepas, e os antibióticos com maiores porcentagens de resistência entre as bactérias foram a Cefalotina com 82% (41/50), seguido pela Gentamicina e Amicacina com 26% (13/50) cada. Nenhuma das amostras apresentou a produção da enzima beta-lactamase de espectro estendido. Os resultados demonstram a presença de EPEC multirresistentes em carcaças de bovinos abatidos no município de Mineiros –GO.