Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-04T14:42:08Z No. of bitstreams: 2 Tese Jose Antonio Pereira Jr.pdf: 3933563 bytes, checksum: 376666e17ed53d90fbfd8bacea4c41ce (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T14:42:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese Jose Antonio Pereira Jr.pdf: 3933563 bytes, checksum: 376666e17ed53d90fbfd8bacea4c41ce (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior) / O uso de cogumelos para fins medicinais é muito antigo, onde o basidiomiceto Ganoderma lucidum tem posição de destaque no Japão e na tradicional medicina chinesa, sendo relatadas atividades antitumorais, antivirais, antibacteriana, dentre outras. Várias espécies com superfície lacada são confundidas com G. lucidum, entre elas Ganoderma parvulum Murrill, uma espécie tropical que pode representar potencial econômico, respeitando-se a biodiversidade local. O presente trabalho objetivou avaliar a atividade antibacteriana, concentração inibitória mínima (CIM) e a atividade citotóxica dos extratos metanólico e em acetato de etila de G. parvulum, a atividade antibacteriana e a CIM do óleo essencial, bem como fornecer dados para caracterização da droga fúngica. Para os extratos estudados, tanto a atividade antibacteriana como citotóxica foram observadas apenas para o extrato em acetato de etila. A atividade antibacteriana foi considerada moderada frente a Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis e Micrococcus luteus. A atividade citotóxica em dose única de 50 μg/ml de extrato foi de 71,94 ± 2,04% contra a linhagem de células HT-29 e 90,02 ± 2,17% contra a linhagem de células HEp-2. O óleo essencial teve atividade antimicrobiana contra as bactérias gram-positivas (Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis e Micrococcus luteus) e gram-negativas (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa), contudo bactérias gram-positivas foram mais susceptíveis ao óleo essencial. Quanto à prospecção micoquímica, os compostos majoritários foram representados pelos esteróides e terpenóides, apresentando também flavonóides, derivados cinâmicos e fenilpropanoglicosídeos. A composição do óleo essencial foi analisada por cromatografia gasosa acoplada a espectroscopia de massas (CG-MS), onde os principais compostos foram o ácido benzóico, o sesquiterpeno aristolona mono-oxigenado, o 2,6-bis (1,1-dimetiletil)-4-metilfenol e o N-(2-hidroxi-4-oxo-4H-quinazolina-3-il)-benzamida. A morfoanatomia foi considerada fundamental para a identificação de G. parvulum, onde características como o tamanho do basidioma, tamanho do basidiósporo, o sistema hifálico, a coloração do contexto e linhas de deposição de material resinoso, foram características essenciais para distinção de G. parvulum. O tamanho das partículas do pó indicou se tratar de um pó moderadamente espesso por simples agregação das partículas, o teor de cinzas totais foi de 1,67 ± 0,14% e a perda por dessecação foi de 13% ± 0,07, dentro dos níveis encontrados para o gênero. Na análise microscópica do pó, a observação de hifas esqueléticas e de esporos de parede dupla e truncados, característicos do gênero, foram importantes para a identificação da droga. Os dados sobre teor de cinzas, perda por dessecação, análise granulométrica e microscópica do pó são inéditos para G. parvulum, bem como as atividades biológicas dos extratos estudados e do óleo essencial.

Desde os primórdios da medicina, substâncias químicas derivadas de animais, vegetais e microrganismos têm sido usadas no tratamento de diversas doenças. Dentre estas, os produtos derivados de vegetais têm dominado as farmacopeias por milhares de anos, fornecendo uma fonte inesgotável de recursos medicinais. O metabolismo secundário geralmente é definido como o responsável pela grande variedade de substâncias químicas apresentadas pelas plantas, porém específicos para alguns grupos. Aos flavonoides atribuem-se importantes funções fisiológicas e ecológicas para o vegetal, como proteção contra a radiação e atração de polinizadores. Para os seres humanos, substâncias dessa classe de metabólitos possuem ação medicinal atuando principalmente como agentes anti-inflamatórios, antioxidantes, antitumorais, hepatoprotetores, antimicrobianos e antivirais. O segundo maior gênero de Euphorbiaceae é Croton L., com aproximadamente 1300 espécies arbóreas, arbustivas ou herbáceas, distribuídas em zonas tropicais e subtropicais do Novo e Velho Mundo. Em praticamente todos os ecossistemas brasileiros encontram-se representantes de Croton. Croton cajucara é uma espécie em testes clínicos, tendo indicações terapêuticas para diabetes, distúrbios hepáticos e renais, anti-inflamatório, antimicrobiano, entre outras. Croton sphaerogynus Baill. por emergir no mesmo clado que C. cajucara, torna-se promissora na prospecção de substâncias bioativas. Este trabalho teve como objetivo investigar a composição fenólica e o potencial biológico de substâncias fenólicas presentes nos extratos foliares de C. sphaerogynus por meio de ensaios antioxidantes, antimicrobianos e anti-HIV-1. Como principais resultados, C. sphaerogynus se caracterizou como uma espécie produtora exclusivamente de flavonóis, além de ser grande produtora de diterpenos. Dois flavonoides foram isolados, quercetina 3,7-dimetil éter e campferol 3-metil éter. Quanto às atividades biológicas, a subfração composta majoritariamente por quercetina 3,7-dimetil éter apresentou alto potencial antioxidante e a maior atividade anti-HIV-1 entre os extratos e outras subfrações testadas. A fração hexânica, rica em diterpenos, foi a que apresentou atividade antimicrobiana promissora. Dessa forma, C. spherogynus torna-se uma espécie promissora para o uso de substâncias antioxidantes / Since the early days of medicine, chemical substances derived from animals, plants and micro-organisms have been used in treating various diseases. Among these, the products derived from plants have dominated the pharmacopoeia for thousands of years, providing an inexhaustible source of medicinal resources. Secondary metabolism is generally defined as responsible for the wide variety of chemical substances produced by plants, but specific for some groups. Important physiological and ecological plant functions are attributed to flavonoids, such as photoprotection and pollinators attraction. For humans, this class of substances has medicinal properties, acting mainly as anti-inflammatory, antiviral, antitumor, antioxidant, hepatoprotective and antimicrobial. Croton L. is the second largest genus of Euphorbiaceae, with about 1300 species of trees, bushes or herbs. Croton is distributed in tropical and subtropical regions of the New and Old World, occurring in almost all Brazilian ecosystems. Croton cajucara is an example of species in clinical trials, having therapeutic indications for diabetes, hepatic and renal disorders, anti-inflammatory, antimicrobial, among others. Croton sphaerogynus Baill. emerges in the same clade of C. cajucara, and becomes a promising species for prospection of bioactive substances. This study aimed to investigate the phenolic composition and biological potential of phenolic substances present in leaf extracts of C. sphaerogynus and test their antioxidant, antimicrobial and anti - HIV potential. C. sphaerogynus was characterized as exclusive producer of flavonol, besides it is a major producer of diterpenes. Two flavonoids were isolated quercetin 3,7-dimethyl ether, and kaempferol 3-methyl ether. Regarding biological activities, the subfraction composed mainly of quercetin 3,7-dimethyl ether showed high antioxidant potential and the higher anti-HIV-1 activity when compared to extracts and other subfractions tested. The hexane fraction, rich in diterpenes, showed promising antimicrobial activity. Thus, C. spherogynus becomes a promising species for the uses of antioxidants substances

El uso de plantas para el alivio de afecciones de manera exitosa nos lleva a investigar su actividad y hacer formulaciones aprovechando los principios activos de estas. Es así; que en el presente trabajo se determinó el efecto antimicrobiano del gel elaborado con extracto etanólico de hojas de Senecio rhizomatus Rusby; planta seleccionada en base a la etnobotánica y etnofarmacia, se recolectó en la zona de Chavín de Huantar, distrito de Huari, Departamento de Ancash, su nombre común es “Llancahuasha”; con la cual se hizo un extracto etanólico de hojas para la determinación de metabolitos secundarios utilizando reacciones en tubo y Cromatografía en Capa Fina para la determinación de Alcaloides. Con el extracto etanólico se elaboró un gel antimicrobiano a concentraciones de 12,5 y 25 mg/mL; se evaluó su efecto antimicrobiano mediante el método de difusión en agar, utilizando para ello cepas de Staphylococcus aureus aisladas de muestra clínica hospitalaria y de la comunidad. Se encontró alcaloides, flavonoides y saponinas esteroidales y mediante la lectura e interpretación de zonas claras de inhibición del crecimiento bacteriano se comprobó el efecto antibacterial significativo del gel a concentración de 25 mg/mL frente a cepa de la comunidad de S. aureus, el halo de inhibición formado fue de 20 mm y con la cepa hospitalaria el halo de inhibición formado fue de 18 mm. Se concluye entonces que el gel elaborado con extracto etanólico de hojas de Senecio rhizomatus Rusby tiene efecto antibacteriano in vitro. Palabras clave: Senecio rhizomatus, gel antimicrobiano, difusión en agar, Staphylococcus aureus, inhibición. / --- The use of plants to relieve infections successfully leads us to investigate their activities and make formulations taking advantage of the active ingredients present. Is thus; in this study the antimicrobial effect of the gel made from ethanol extract of leaves of Senecio rhizomatus Rusby, selected based on ethnopharmacy and ethnobotany. It was collected in the area of Chavin de Huantar, Huari district, Department of Ancash, the common name of this species is "Llancahuasha", which it was made an ethanolic extract of leaves for determination of secondary metabolites using tube reactions and Thin Layer Chromatography for determination of alkaloids. With ethanolic extract, it is elaborated an antimicrobial gel at concentrations of 12,5 and 25 mg/mL ; Its antimicrobial effect was evaluated by the agar well diffusion method, using strains of Staphylococcus aureus isolated from hospital clinic and community samples. It was found alkaloids, flavonoids and steroidal saponins by reading and interpretating of clear zones of inhibition of bacterial growth, it was found significant antibacterial effect of the gel to a concentration of 25 mg/mL versus community strain of S. aureus, halo inhibition formed was 20 mm and hospital strain, with the inhibition halo formed was 18 mm. It is concluded that the gel made from ethanol extract of leaves of Senecio rhizomatus Rusby has antibacteril effect in vitro. Keywords: Senecio rhizomatus, antimicrobial gel, agar well diffusion, Staphylococcus aureus, inhibition / Tesis

Em anos recentes, surgiram numerosos casos de intoxicação alimentar envolvendo patógenos emergentes. Estes casos levaram a um aumento da preocupação com a preservação dos alimentos minimamente processados e com a segurança alimentar. Este fato está induzindo a pesquisa por inibidores para estes patógenos e fatores para prolongar a vida de prateleira de produtos alimentícios. Entre as novas alternativas na preservação está a utilização de peptídeos antimicrobianos produzidos por bactérias. No presente trabalho uma bactéria identificada como Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006 isolada de solos de mata Atlântica de Santa Catarina foi selecionada dentre outros microrganismos e sua capacidade de produzir antimicrobianos foi avaliada. O extrato bruto da cultura do isolado LBM 5006 foi caracterizado, sendo ativo contra importantes bactérias patogênicas e deteriorantes como Listeria monocytogenes, Bacillus cereus, Erwinia carotovora, Escherichia coli, dentre outras. Houve maior produção do antimicrobiano quando a bactéria foi propagada em caldo infusão de cérebro e coração (BHI) a 37o C durante 48 h. Após concentração, a atividade antimicrobiana resistiu ao tratamento com enzimas proteolíticas. A atividade antimicrobiana foi verificada em pHs ácidos, sendo inibida em pH 9 e 10. O extrato foi purificado por meio de cromatografia de gel filtração e extração com butanol. O teste qualitativo de ninidrina, juntamente com a espectroscopia de infravermelho e ultravioleta, feitos com a substância purificada revelou que o antimicrobiano possui natureza protéica. O antimicrobiano apresentou um efeito bacteriostático contra 106 UFC/mL de Listeria monocytogenes na concentração de 25 AU/ml. / In recent years, an increase in food poisoning cases involving emerging pathogens have been described. These cases have increased the preoccupation with the preservation of minimally processed food products and food safety. This fact is leading the research for inhibitory substances and for factors to extend the shelflife of food products. Among the new preservation alternatives is the utilization of antimicrobial peptides produced by bacteria. In present work a bacterium identified as Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006 isolated from Atlantic Forest soils of Santa Catarina was selected among other microorganisms and its capacity to produce antimicrobials was evaluated. The crude culture supernatant of the strain LBM 5006 was characterized, being active against important pathogenic and spoilage bacteria like Listeria monocytogenes, B. cereus, E. carotovora, E. coli, among other. Maximum production of antimicrobial activity was observed when the bacteria was propagated in Brain Heart Infusion (BHI) at 37o C for 48 h. After concentration, the antimicrobial activity was resistant to proteolytic enzymes. Antimicrobial activity was verified in acid pHs, but it was lost at pH 9 and 10. The supernatant was purfied by gel filtration chromatography and butanol extraction. The qualitative ninhydrin test, together with infrared and ultraviolet spectroscopy of purified substance revealed that the antimicrobial has a peptide moiety. A dose of 25 UA/mL caused a bacteriostatic effect against 106 UFC/mL Listeria monocytogenes.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-22T12:57:35Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 319159 bytes, checksum: 8d72d6ab6696a56a96a793b0fd4e402a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-22T12:57:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 319159 bytes, checksum: 8d72d6ab6696a56a96a793b0fd4e402a (MD5) Previous issue date: 2001-06-07 / Foi avaliado o efeito do cravo-da-índia (Syzygium aromaticum) sobre Salmonella e Staphylococcus aureus inoculados em salame tipo italiano na concentração de, aproximadamente, 10 3 a 10 4 UFC/g do produto. O pH final do salame tipo italiano foi em torno de 4,4 e a concentração de ácido lático variou de 65,9 mmolL -1 no início do processamento para 249,4 mmolL -1 ao final de 20 dias. Os salames processados neste estudo resultaram num produto final com a w de, aproximadamente, 0,91 e um percentual de umidade estimada de 49,1%. A adição de 0,2% de cravo no salame não resultou em diferenças significativas nas características físico-químicas do produto, com exceção do pH que foi mais baixo nos embutidos adicionados de cravo. Foi constatado que, nos salames tipo italiano fabricados com a adição de 0,2% de cravo, compreendendo 65 μ g de eugenol por grama de produto, e naqueles salames do tratamento controle, sem cravo, houve uma redução de até quatro ciclos logarítmicos no número de células viáveis de Salmonella. O número de ciclos logarítmicos reduzidos na população de Salmonella foi significativamente maior(p<0,05) nos embutidos produzidos com 0,2% de cravo, quando se utilizou o meio BPLS para a contagem de colônias típicas de Salmonella. Ao final de 20 dias de processamento do salame tipo italiano não foi possível detectar a presença de Salmonella no produto adicionado de 0,2% de cravo, pela técnica do Número Mais Provável (NMP) nem por método imunoanalítico. Pela técnica de imunoanálise em apenas uma, das quatro repetições do tratamento controle, sem a adição de cravo, pode ser constatada a presença de Salmonella nos embutidos prontos. O número de células viáveis de S. aureus reduziu aproximadamente, meio ciclo logarítmico no período de fermentação. Os resultados mostraram que a adição de 0,2% de cravo no salame tipo italiano, nas condições experimentais usadas, não resultou em efeito inibidor adicional sobre S. aureus durante o período de processamento do produto. / The effect of clove (Syzygium aromaticum) on Salmonella and Staphylococcus aureus inoculated into Italian salami at, approximately, 10 3 to 10 4 CFU/g of finished salami was studied. Lactic acid concentrations varied from 65.9 mmolL -1 , at the beginning of processing, to 249.4 mmolL -1 at the end, after 20 days, when a final pH of about 4.4 was recorded. Finished salami had an approximate a w of 0.91 and an estimated moisture content of 49.1%. Except for the lower pH values recorded, the addition of clove at 0.2% to the salami did not result in significant changes in the physical and chemical characteristics of the product. In the Italian salami prepared with clove at 0.2%, a concentration equivalent to 65 μg eugenol per gram of salami, and in the control treatment without clove, a reduction of up to four logarithmic cycles in the numbers of viable cells of Salmonella was observed. This reduction was significantly higher (p<0.05) in the product prepared with clove at 0.2% when the BPLS medium was used for counting typical Samonella colonies. At the end of 20 days of processing, Salmonella could not be detected in the salami containing clove at 0.2% either by the most probable number technique (MPN) or by immunoanalytical methods. The use of immunoanalyses allowed the detection of Salmonella in the finished product in only one of the four replications of the control treatment. The numbers of viable S. aureus decreased half a logarithmic cycle during fermentation. These results showed that, under the experimental conditions tested, the addition of clove at 0.2% to Italian Salami did not cause any additional inhibition of S. aureus during salami processing. / Dissertação importada do Alexandria

CARVALHO, Roberta Lopes de. Efeitos do revestimento a base de quitosana com adição de trans-cinamaldeído sobre o metabolismo do melão minimamente processado. 2014. 74 f. Tese (Doutorado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-09-06T17:56:40Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_rlcarvalho.pdf: 2055463 bytes, checksum: b707627e48f006be2f8e46825b0ab971 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-09-27T17:26:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_rlcarvalho.pdf: 2055463 bytes, checksum: b707627e48f006be2f8e46825b0ab971 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-27T17:26:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_rlcarvalho.pdf: 2055463 bytes, checksum: b707627e48f006be2f8e46825b0ab971 (MD5) Previous issue date: 2014 / The application of edible coatings on minimally processed products aims to maintain the quality and freshness of the fruit. This study aimed to clarify the influence of a coating based on chitosan incorporated with trans-cinnamaldehyde on the antioxidant metabolism and the structural integrity of melons minimally. Cantaloupensis ripe melons were processed into cubes and immersed in the coating solution and then stored at 4 °C, and were evaluated every five days for a total of 20 days. The evaluations were related to: activity of antioxidant enzymes, cell wall hydrolytic enzymes and browning, composition of the cell wall material, electrolyte leakage and hydrogen peroxide content, degree of peroxidation of membrane lipids and histology of pulp the fruit. The firmness of fresh-cut melons was statistically higher in fruits coated with chitosan, decreasing from 16.0 to 14.8 N. The degree of lipid peroxidation, electrolyte leakage and H2O2 levels were significantly reduced by coating with chitosan added transcinamaldeído. The activity of pectin methylesterase enzyme and poligalacturoanse were significantly inhibited by treatment with chitosan, therefore, the coating was efficient in maintaining the firmness of the processed 20 days storage melons probably due to its action as a physical barrier to gas exchange and decreasing breathing subsequent events dependent on O2. The action of the coating as a barrier to the breathing gases can be evidenced in the results of oxidative metabolsimo when a lower content of hydrogen peroxide resulted in lower activity of enzymes that use it as a substrate, catalase and peroxidase. / A aplicação de coberturas comestíveis em produtos minimamente processados visa manter a qualidade e o frescor dos frutos. Este trabalho teve como objetivo esclarecer a influência de um revestimento à base de quitosana incorporada com trans-cinamaldeído sobre o metabolismo antioxidante e a integridade estrutural de melões minimamente. Melões Cantaloupensis maduros foram processados em cubos e imergidos na solução de revestimento e depois, armazenados a 4 ºC, sendo avaliados a cada cinco dias por um total de 20 dias. As avaliações realizadas foram quanto à: atividade de enzimas antioxidantes, de enzimas hidrolíticas de parede celular e de escurecimento, composição do material de parede celular, extravasamento de eletrólitos e conteúdo de peróxido de hidrogênio, grau de peroxidação de lipídios de membrana e histologia da polpa do fruto. A firmeza dos melões minimamente processados foi estatisticamente mais alta nos frutos revestidos com quitosana, decaindo de 16,0 para 14,8 N. O grau de peroxidação lipídica, o extravasamento de eletrólitos e os níveis de H2O2 foram significativamente reduzidos pelo revestimento com quitosana adicionado de transcinamaldeído. A atividade da enzima pectinametilesterase e da poligalacturoanse foram inibidas significativamente pelo tratamento com quitosana, Portanto, o revestimento foi eficiente em manter a firmeza dos melões processados pelos 20 dias de armazenamento devido provavelmente a sua ação como barreira física à trocas gasosas diminuíndo a respiração e os consequentes eventos dependentes de O2. A ação do revestimento como barreira aos gases da respiração pode ser evidenciada nos resultados do metabolsimo oxidativo, quando um menor conteúdo de peróxido de hidrogênio resultou em menor atividade das enzimas que o utilizam como substrato, catalase e peroxidases.

OLIVEIRA, S.T. Uso do peptídeo sintético Lys-a1 no favorecimento da atividade antimicrobiana de ciprofloxacina contra Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. 2014. 89 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2014. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-01T13:21:48Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_stdoliveira.pdf: 2487485 bytes, checksum: d0cf8dea8b60a03dcd5bf061b1c033af (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-10-03T14:48:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_stdoliveira.pdf: 2487485 bytes, checksum: d0cf8dea8b60a03dcd5bf061b1c033af (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-03T14:48:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_stdoliveira.pdf: 2487485 bytes, checksum: d0cf8dea8b60a03dcd5bf061b1c033af (MD5) Previous issue date: 2014 / Most microorganism lies embedded in communities called "biofilms". Among these stand out Pseudomonas aeruginosa, an opportunistic pathogen of plants, animals and humans, frequently associated with nosocomial infections difficult to be eradicated due to the presence of biofilm. The fluoroquinolone antibiotics such as ciprofloxacin (CIP) against this bacterium are used, however, the mechanism of resistance has been developed for this microorganism. Thus, new forms of microbial control have been the subject of numerous studies in order to replace or enhance conventional methods. For this purpose, antimicrobial peptides (AMPs) obtained from various living beings represent an alternative to the development of new drugs. Synthetic forms analogous to Hylin a1 AMP (Hy-a1), isolated from species Hypsiboas albopunctatus, has shown excellent antimicrobial efficacy, among which stand out the peptide Lys-[Trp6]hy-a1 (Lys-a1). Thus, the aim of this work was to verify the influence of the peptide Lys-a1 in antimicrobial activity of CIP against pathogenic microorganism Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. Minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC) and the curve death were determined to CIP and Lys-a1 separately. The influence of Lys-a1 in the antimicrobial activity of the CIP has been verified by the checkerboard method to quantify the biomass and the number of viable cells in biofilms by crystal violet staining and counting of colony forming units (CFU), respectively. The MIC and MBC values of Lys-a1 was 125 μg.mL-1 and the CIP was 0.24 and 0.48 μg.mL-1, respectively. The data showed that both the CIP as Lys-a1 are potent antibiotics against P. aeruginosa is able to inhibit both the planktonic growth and biofilm development. The interaction of substances interpreted by the fractional inhibitory concentration index (FICI) and showed an additive effect, establishing a decrease of 16 times the MIC and MBC of the CIP, when combined with the Lys-a1. This effect was also observed in the kinetics of death and antibiofilm activity. In conclusion, the additive effect of the Lys-a1 and CIP in antimicrobial activity suggests that the peptide has potential as a therapeutic agent and an adjuvant for the treatment of infectious diseases caused by P. aeruginosa can enable the use of lower concentrations of the antibiotic. / A maioria dos micro-organismos encontra-se integrados em comunidades denominadas “biofilme”. Dentre estes se destaca a Pseudomonas aeruginosa, um patógeno oportunista de vegetais, animais e humanos, frequentemente associado à infecções nosocomiais difíceis de serem erradicadas devido à presença de biofilme. Os antibióticos fluoroquinolonas, tais como a ciprofloxacina (CIP), são utilizados contra esta bactéria, entretanto, mecanismos de resistência vem sendo desenvolvidos por este micro-organismo. Assim, novas formas de controle microbiano têm sido alvo de inúmeras pesquisas a fim de substituir ou potencializar os métodos convencionais. Para esse fim, peptídeos antimicrobianos (AMPs) obtidos de diversos seres vivos representam uma alternativa para o desenvolvimento de novas drogas. Formas sintéticas análogas ao AMP Hilina a1 (Hy-a1), isolado da espécie Hypsiboas albopunctatus, tem demonstrado excelente eficácia antimicrobiana, dentre os quais se destacam o peptídeo Lys-[Trp6]hy-a1 (Lys-a1). Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi verificar a influência do peptídeo Lys-a1 na atividade antimicrobiana de CIP contra o micro-organismo patogênico Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. A concentração inibitória mínima (CIM), a concentração bactericida mínima (CBM) e a curva de morte foram determinadas para a CIP e a Lys-a1, separadamente. A influência da Lys-a1 na atividade antimicrobiana da CIP foi verificada pela metodologia checkerboard com quantificação da biomassa e do número de células viáveis do biofilme através da coloração pelo cristal violeta e contagem de unidades formadoras de colônia (UFC), respectivamente. Os valores de CIM e CBM da Lys-a1 foi de 125 μg.mL-1, e para a CIP foi de 0,24 e 0,48 μg.mL-1, respectivamente. Os dados mostraram que tanto a CIP quanto a Lys-a1 são potentes antimicrobianos contra P. aeruginosa, sendo capazes de inibir tanto o crescimento planctônico como o desenvolvimento do biofilme. A interação das substâncias foi interpretada pelo índice de concentração inibitória fracional (ICIF) e mostrou um efeito aditivo, estabelecendo uma diminuição de 16 vezes da CIM e da CBM da CIP, quando combinada com a Lys-a1. Esta influência foi observada também na cinética de morte e na atividade antibiofilme. Em conclusão, o efeito aditivo entre a Lys-a1 e a CIP na atividade antimicrobiana sugere que o peptídeo tem potencial como um agente terapêutico e adjuvante para o tratamento de doenças infecciosas causadas por P. aeruginosa, podendo habilitar o uso de concentrações menores do antibiótico.

Em anos recentes, surgiram numerosos casos de intoxicação alimentar envolvendo patógenos emergentes. Estes casos levaram a um aumento da preocupação com a preservação dos alimentos minimamente processados e com a segurança alimentar. Este fato está induzindo a pesquisa por inibidores para estes patógenos e fatores para prolongar a vida de prateleira de produtos alimentícios. Entre as novas alternativas na preservação está a utilização de peptídeos antimicrobianos produzidos por bactérias. No presente trabalho uma bactéria identificada como Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006 isolada de solos de mata Atlântica de Santa Catarina foi selecionada dentre outros microrganismos e sua capacidade de produzir antimicrobianos foi avaliada. O extrato bruto da cultura do isolado LBM 5006 foi caracterizado, sendo ativo contra importantes bactérias patogênicas e deteriorantes como Listeria monocytogenes, Bacillus cereus, Erwinia carotovora, Escherichia coli, dentre outras. Houve maior produção do antimicrobiano quando a bactéria foi propagada em caldo infusão de cérebro e coração (BHI) a 37o C durante 48 h. Após concentração, a atividade antimicrobiana resistiu ao tratamento com enzimas proteolíticas. A atividade antimicrobiana foi verificada em pHs ácidos, sendo inibida em pH 9 e 10. O extrato foi purificado por meio de cromatografia de gel filtração e extração com butanol. O teste qualitativo de ninidrina, juntamente com a espectroscopia de infravermelho e ultravioleta, feitos com a substância purificada revelou que o antimicrobiano possui natureza protéica. O antimicrobiano apresentou um efeito bacteriostático contra 106 UFC/mL de Listeria monocytogenes na concentração de 25 AU/ml. / In recent years, an increase in food poisoning cases involving emerging pathogens have been described. These cases have increased the preoccupation with the preservation of minimally processed food products and food safety. This fact is leading the research for inhibitory substances and for factors to extend the shelflife of food products. Among the new preservation alternatives is the utilization of antimicrobial peptides produced by bacteria. In present work a bacterium identified as Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006 isolated from Atlantic Forest soils of Santa Catarina was selected among other microorganisms and its capacity to produce antimicrobials was evaluated. The crude culture supernatant of the strain LBM 5006 was characterized, being active against important pathogenic and spoilage bacteria like Listeria monocytogenes, B. cereus, E. carotovora, E. coli, among other. Maximum production of antimicrobial activity was observed when the bacteria was propagated in Brain Heart Infusion (BHI) at 37o C for 48 h. After concentration, the antimicrobial activity was resistant to proteolytic enzymes. Antimicrobial activity was verified in acid pHs, but it was lost at pH 9 and 10. The supernatant was purfied by gel filtration chromatography and butanol extraction. The qualitative ninhydrin test, together with infrared and ultraviolet spectroscopy of purified substance revealed that the antimicrobial has a peptide moiety. A dose of 25 UA/mL caused a bacteriostatic effect against 106 UFC/mL Listeria monocytogenes.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-10-16T15:09:11Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 989533 bytes, checksum: 691738d9623dc109309055a3300f56c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-16T15:09:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 989533 bytes, checksum: 691738d9623dc109309055a3300f56c3 (MD5) Previous issue date: 2015-03-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O vírus da Dengue é um arbovírus da família Flaviviridae que acomete grande parte da população mundial, possuindo quatro sorotipos (1-4), os quais ocasionam respostas imunes duradouras, mas diferentes. São vírus de RNA fita simples com polaridade positiva de aproximadamente 11Kb, codificando 10 proteínas, sendo 3 delas estruturais e 7 não estruturais. Estudos revelam que peptídeos de secreção de anfíbios possuem várias funções, dentre elas estão atividades antiviral e antimicrobiana, com isso, sequências destes peptídeos vêm sendo sintetizadas e testadas in vitro, a fim de obter compostos ativos para a fabricação de drogas de amplo espectro e de múltipla aplicabilidade. Os peptídeos de atividade antimicrobiana (PAM) são os mais estudados e eles devem apresentar uma toxicidade seletiva e rápida ação frente aos microorganismos. Por não existir nenhuma droga antiviral eficaz conta o vírus em questão, temos por objetivo avaliar a atividade antiviral de um peptídeo sintético, denominado HS-1, onde sua sequência foi obtida previamente da secreção do anfíbio anuro Hypsiboas semilineatus. Após realizar um teste de citotoxicidade, foram realizados ensaios de neutralização a fim de se investigar seu mecanismo de ação contra o vírus da dengue. Com o intuito de verificar uma possível proteção dos receptores celulares, o peptídeo foi incubado previamente com as células, em um ensaio posterior o peptídeo foi incubado previamente com o vírus, para verificar se o PAM agia sobre a partícula viral e em seguida foram realizados ensaios para verificar se o peptídeo tinha ação sobre a adsorção, internalização e replicação viral. Os resultados foram promissores, pois mostraram que o peptídeo em questão age sobre a partícula viral dos 4 sorotipos da dengue de uma forma muito eficaz, sendo que nas maiores concentrações a inibição chega a 100%, além de ter efeito sobre a inibição da adsorção, o que foi observado para os sorotipos 2 e 3. / Dengue virus is an arbovirus of Flaviviridae family, which has been the most within the world population. There are four serologic types of dengue virus (DENV 1-4), which cause long lasting, though different, immune responses. They are single positive-strand RNA viruses with of approximately 11Kb in length. This RNA is responsible for encoding 10 proteins, 3 structural and 7 non-structural. Several studies reveal that some peptides from skin of amphibians have antimicrobial and antiviral activities. Therefore, sequences of these peptides were synthesized and tested in vitro in order to obtain biologically active compounds to develop drugs with wide spectrum and multiple applicability. The antimicrobial peptides are the most studied and they must present a selective toxicity and quick action against microorganism. Effective drugs against dengue virus haven’t been developed yet. Thereat, the present study aimed to evaluate the antiviral activity against dengue virus of the synthetic peptide HS-1, which sequence was previously obtained from the skin of the anuran Hypsiboas semilineatus. In the cytotoxicity assay, and afterwards neutralization assays were performed to investigate the mechanism of action of the HS-1 peptide against Dengue virus. The first neutralization assay was carried out to determine whether the HS-1 peptide could confer protection to cell receptors against viral infection. For this, the peptide was pre-incubated with VERO cells. In the second neutralization assay the peptide was pre-incubated with Dengue virus to evaluate the ability of this peptide to act directly on viral particle. The subsequent assays were performed in order to determine whether the peptide would act over adsorption, internalization and virus replication. The results were promising; they showed that the peptide in question acts on the viral particle of the four dengue serotypes in a very effective manner. With higher concentrations of peptide, the inhibition reached 100%. In addition, it was found very promising results against inhibition adsorption to serotypes 2 and 3.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Quitinases sÃo enzimas capazes de hidrolisar quitina, um polissacarÃdeo formado por unidades de N-acetil-&#946;-D-glucosamina, que à extremamente abundante na natureza. ApÃs o sequenciamento do genoma de C. violaceum ATCC 12472, alguns genes referentes a proteÃnas com potencial biotecnolÃgico foram encontrados, dentre eles os que codificam para quitinases. Este trabalho teve como objetivos expressar a proteÃna CV2736 de C. violaceum ATCC 12472 de forma recombinante em cÃlulas de Pichia pastoris KM71H e avaliar seu potencial antimicrobiano frente a microrganismos de importÃncia mÃdica. Para isto, a sequencia completa da ORF (CV2736PS+), bem como uma sequencia parcial, codificando uma proteÃna truncada, sem um possÃvel peptÃdeo sinal N-terminal (CV2736PS&#8210;), foram clonadas no vetor de expressÃo pPICZ&#945;A, para expressÃo em P. pastoris KM71H. A proteÃna completa (rCV2736PS+) foi detectada em uma fraÃÃo proteica, contendo as proteÃnas secretadas para o meio de cultura, por cÃlulas de P. pastoris transformadas com o respectivo cassete de expressÃo recombinante. A rCV2736PS+ apresentou-se de forma heterogÃnea, quando analisada por SDS-PAGE, exibindo trÃs bandas com massas moleculares aparentes de 41,3, 38,1 e 36,2 kDa, respectivamente, sendo uma delas (41,3 kDa) maior do que se poderia deduzir a partir da sequencia de aminoÃcidos. ApÃs coloraÃÃo com reagente de Schiff para revelaÃÃo de glicoproteÃnas, constatou-se que essa banda (41,3 kDa) correspondia a rCV2736PS+ na sua forma N-glicosilada. AlÃm disso, rCV2736PS+ teve seus peptÃdeos identificados por espectrometria de massas, na fraÃÃo F0/95 do meio de cultura livre de cÃlulas. A proteÃna recombinante produzida sem os 22 aminoÃcidos iniciais (rCV2736PS&#8210;) apresentou atividade quitinÃsica maior que a encontrada para a fraÃÃo contendo rCV2736PS+, apesar de nÃo ter sido detectada por SDS-PAGE. A fraÃÃo F0/95 do meio de cultura contendo rCV2736PS+ mostrou-se termoestÃvel atà 50ÂC e com pico de atividade quitinolÃtica em pH 3,0. A mesma fraÃÃo apresentou maior atividade endoquitinÃsica e ativa contra os substratos sintÃticos 4-nitrofenil N,Nââdiacetil-&#946;-D-quitobiosÃdeo e 4-nitrofenil N,Nâ,Nâââtriacetilquitotriose. A modelagem molecular evidenciou o dobramento na forma de barril (&#946;/&#945;)8 (barril TIM), tÃpico das proteÃnas da famÃlia GH18. Do mesmo modo, a fraÃÃo F0/95 foi testada contra seis espÃcies de bactÃrias, apresentando atividade microbicida contra Pseudomona aeruginosa, Escherichia coli e Staphylococcus aureus, e foi capaz de inibir o crescimento de Salmonella choleraesuis. A mesma fraÃÃo foi testada contra a levedura Candida albicans, mas nÃo foi detectada inibiÃÃo do crescimento contra este microrganismo no ensaio. Portanto, a proteÃna recombinante rCV2736 pode, assim, ser considerada uma molÃcula com potencial antibacteriano. Palavras-chave: Quitinase; Pichia pastoris; antimicrobiano; ExpressÃo heterÃloga. / Chitinases are enzymes capable of hydrolyzing chitin, a polysaccharide composed of units of N-acetyl-D- glucosamine, which is abundant in nature. The genome sequence of C. violaceum ATCC 12472 has revealed some genes encoding proteins with potential applications in agriculture and medicine, such as those encoding chitinases. This study aimed to express the protein CV2736 in Pichia pastoris KM71H and to evaluate its antimicrobial potential against microorganism of medical importance. To this purpose, the full ORF (encoding rCV2736 PS+) and a partial sequence of it, encoding a truncated protein without its putative signal peptide (rCV2736PS&#8210;), were cloned into the vector pPICZ &#945; A for expression in P. pastoris. The protein rCV2736 PS+ was detected in the cell-free culture medium of P. pastoris cells harboring the corre sponding expression cassete. The recombinant CV2736PS+ was produced in a heterogeneous manner, and when analyzed by SDS-PAGE, three protein bands with apparent molecular masses of 41. 3, 38.1 and 36. 2 kDa were detected. The protein band with the highest molecular mass (41.3 kDa) was stained with the Periodic acid - Schiffâs reagent, thus showing that this band corresponds to N-glycosylated rCV2736PS+. Furthermore, tryptic peptides identified by mass spectrometry (ESI-MS) confirmed the identity of the expressed protein. The recombinant protein produced without the first 22 amino acids(rCV2736PS&#8210;) showed higher chitinase activity than that found for th e fraction containing rCV2736PS+, despite not being detected by SDS-PAGE. The recombinant protein CV2736PS+, present in the fraction F0/95 from the culture medium of induced cells, was active after heat treatment at 50 ÂC and its maximum chitinolytic activity was recorded at pH 3.0. This fraction was also able to degrade the synthetic substrates 4-nitrophenyl N,N'-diacetyl -&#946;-D-chitobioside and 4-nitrophenyl N,N',N''-triacet yl chitotrioside, which characterizes an endochitinase activity. Abinitio molecular modeling demonstrated that the polypeptide of CV2736 likely folds as a(&#946;/&#945;)8 barrel (also known as TIM barrel), which is typical of the GH18 family proteins. The fraction F0/95 showed antimicrobial activity against Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus and growth inhibition against Salmonella cholera-suis. The same fraction were evaluated against the yeast Candida albicans, but was not detectable inhibition of this microorganism in the assay. These results suggest that rCV2736 should be further studied as a new anti-bacterial agent.