A depressão é um transtorno psiquiátrico altamente prevalente e oneroso, sendo uma das principais causas mundiais de morbimortalidade. Contudo, seu status nosológico é tema de profundas controvérsias, uma vez que apresenta uma definição pouco precisa, gerando uma enorme heterogeneidade clínica. Esta tese é composta por quatro artigos, e visa estudar a heterogeneidade da depressão investigando suas interações com o construto de personalidade e com marcadores biológicos. Os dois primeiros artigos visam viabilizar o uso de um instrumento de avaliação de estilos de personalidade, o Temperament and Personality Questionnaire (T&P). O primeiro artigo descreve o processo de tradução e adaptação transcultural do T&P para o português brasileiro, utilizando uma metodologia estandardizada. O segundo artigo examina as propriedades psicométricas do T&P em uma amostra de pacientes deprimidos. Nesse artigo, análises fatoriais confirmatórias foram realizadas para testar os sete níveis do instrumento, sendo encontrados índices de ajuste adequados para modelos com dois até quatro fatores, com alta consistência interna para todos os níveis. Foram encontradas as associações esperadas entre os estilos de personalidade e dois validadores externos, com estilos de personalidade resilientes apresentando menor qualidade de vida e maiores níveis de depressão, enquanto estilos de personalidade desordenados apresentaram o inverso. Além disso, a performance dos itens foi explorada utilizando a Teoria de Resposta ao Item, com a maioria dos itens apresentando melhor padrão de respostas dicotômico. Por fim, correlações altas entre os estilos de personalidade de níveis de baixa ordem com seus correspondentes construtos molares, confirmaram a organização hierárquica do instrumento. O terceiro artigo estudou a heterogeneidade da depressão em relação a personalidade. Nele, foi avaliada a associação entre dimensões depressivas (definidas por análise fatorial exploratória) e quatro classes de personalidade (criadas a partir de uma análise de classes latentes) em uma amostra de pacientes deprimidos. As classes de personalidade foram denominadas resilientes e desordenadas de acordo com seu nível de funcionamento e qualidade de vida. A classes desordenadas apresentaram maiores escores de sintomatologia depressiva, principalmente na dimensão cognitiva, com maior comorbidade com transtornos ansiosos. As dimensões depressivas melancólicas foram pouco ou nada discriminativas em relação às classes de personalidade, reforçando sua maior relevância para as depressões não-melancólicas. O quarto artigo analisou subgrupos depressivos classificados por um instrumento de avaliação de alterações da psicomotricidade (o CORE). Os grupos melancólico e não-melancólico foram comparados em relação a três dimensões de marcadores biológicos (estresse oxidativo, neurotrofina e marcadores imunológicos). Os resultados replicaram e estenderam achados sobre diferenças biológicas de subtipos depressivos, mostrando a importância da avaliação dos sinais de melancolia. Assim, essa tese contribui no estudo da heterogeneidade da depressão viabilizando o uso de um instrumento de avaliação da personalidade e estendendo achados que podem possibilitar que subtipos depressivos possam ser avaliados em relação a estilos de personalidade e marcadores biológicos. / Depression is a highly prevalent and burdensome psychiatric disorder, and one of the main causes of morbidity and mortality. However, its nosological status remains the subject of deep controversies, since it presents an imprecise definition, generating an enormous clinical heterogeneity. This thesis comprises four papers, and aims to study the heterogeneity of depression investigating its interactions with the construct of personality and with biologic markers. The first two papers aim to enable the use of an instrument for assessing personality styles, the Temperament and Personality Questionnaire (T&P). The first paper describes the process of translation and cross-cultural adaptation of the T&P into Brazilian Portuguese using standardized methodology. The second paper examines the psychometric properties of the T&P in a sample of depressed patients. In this paper, confirmatory factor analyzes were conducted in order to test the seven tiers of the instrument, with proper goodness fit for models from two to four factors, and high internal consistency for all levels. The expected associations between personality styles and two external validators (quality of life and depression) were found, with resilient personality styles presenting lower quality of life and higher levels of depression, while disordered personality styles showed the reverse. Moreover, the performance of the items was explored using the Item Response Theory, and most items showed a better dichotomous response pattern. Finally, high correlations between lower-order personality styles and their corresponding molar personality constructs were found, confirming the hierarchical organization of the instrument. The third paper studied the heterogeneity of depression in relation to personality. In it, the association between depressive dimensions (defined by exploratory factor analysis) and four personality classes (created by latent class analysis) was evaluated in a sample of depressed patients. Classes were named resilient and disordered according to their level of functioning and quality of life. The disordered classes had higher scores of depressive symptoms, especially in the cognitive dimension, and higher comorbidity with anxiety disorders. The melancholic depressive dimensions were little or no discriminative with respect to the personality classes, reinforcing its greater relevance to non-melancholic depression. The fourth paper examined depressive subgroups classified by an assessment instrument of psychomotor changes (the CORE). The melancholic and non-melancholic groups were compared with respect to three dimensions of biomarkers (oxidative stress, neurotrophin and immunological markers). Results replicated and have extended findings on biological differences in depressive subtypes, showing the importance of evaluating signs of melancholia. Thus, this thesis contributes to the study of depression heterogeneity enabling the use of an instrument for assessing personality and extending findings that may allow that depressive subtypes can be assessed in relation to personality styles and biological markers.

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / A prÃtica da AtenÃÃo FarmacÃutica (AF) individualizada no Diabetes, com a monitorizaÃÃo dos parÃmetros bioquÃmicos, faz-se necessÃria, uma vez que proporciona os melhores resultados clÃnicos e resulta em maior qualidade de vida para os pacientes. Objetivo: Analisar, atravÃs de um plano em AtenÃÃo FarmacÃutica para pacientes com Diabetes mellitus tipo II, os problemas relacionados com os medicamentos, bem como a viabilizaÃÃo do uso de marcadores bioquÃmicos de disfunÃÃo endotelial como parÃmetros de monitorizaÃÃo no acompanhamento farmacoterapÃutico. MÃtodos: O estudo foi realizado com um grupo de pacientes diabÃticos atendidos no Centro de Pesquisas em Diabetes e DoenÃas EndocrinometabÃlicas no perÃodo de junho de 2006 a junho de 2007. A pesquisa contou com a participaÃÃo efetiva de 58 pacientes. O Acompanhamento FarmacoterapÃutico (AFT) realizou-se atravÃs de visitas dos pacientes ao centro, ao todo sete, quando eram entrevistados, orientados dentro do plano desenvolvido para o serviÃo de AtenÃÃo FarmacÃutica e tinham exames laboratoriais colhidos, entre esses os marcadores da disfunÃÃo endotelial, como colesterol total (CT), triglicÃrides (TG), hemoglobina glicada (HbA1c), glicose de jejum (GJ) e colesterÃis LDL e HDL. Resultados: Observou-se o predomÃnio do sexo feminino (58,4%) sobre o masculino (41,58 %). A hipertensÃo esteve associada em 54,4% dos pacientes diabÃticos. Uma porcentagem significativa dos pacientes era sedentÃria (64%) e possuÃa diagnÃstico de diabetes hà menos de 10 anos (84,2%). Os parÃmetros laboratoriais dos pacientes GJ, CT, LDL-C e HbA1c melhoraram apÃs seis meses da AF. Aproximadamente 96,70% dos pacientes apresentaram dislipidemia no inÃcio da AF, sendo que esse valor diminuiu para 64,29% apÃs trÃs meses e aumentou para 81,04% apÃs seis meses. A porcentagem dos pacientes com dislipidemia classificada por HDL baixo caiu de 96,70%, no inÃcio da AF, para 92,60% apÃs 3 meses de AF. ConclusÃo: A prÃtica da AtenÃÃo FarmacÃutica firmou-se eficiente na melhoria da qualidade de vida dos pacientes diabÃticos, atravÃs da identificaÃÃo e resoluÃÃo de problemas relacionados a medicamentos (PRM), bem como de orientaÃÃes sobre qualidade de vida e uso racional dos fÃrmacos, agindo, assim, na prevenÃÃo de complicaÃÃes tardias da doenÃa. / Individualized Pharmaceutical Care (PC) practice in Diabetes, monitoring biochemical parameters, is a very important activity once that it provides better clinical and it helps to improve the diabetic patientsâ health quality. Objective: The aim of this work was to present and to analyze, through a Pharmaceutical Care (PC) plan for patients with Diabetes Mellitus type 2, the drug related problems (DRP) and the implantation of endhotelial dysfunction biochemical markers as parameters of monitor the pharmacotherapeutic follow-up. Methods: The study was carried out with a group of diabetic patients attended at Centro de Pesquisas em Diabetes e DoenÃas EndocrinometabÃlicas during the period from June-2006 to June-2007. The research was developed with 101 patients and counted on the effective participation of 58 patients until its conclusion. The patients had participated of 7 visits to the center, where they had been interviewed, they had carried out laboratorial determinations and they had received the orientation from the developed plan for the pharmaceutical attention service. Results: It was observed the feminine gender predominance (58.4%) when compared to the masculine (41.58%). Arterial hypertension was associated in 54.4% of diabetic patients. A significant percentage of the patients (64%) was sedentary and presented diagnostic of diabetes since less than 10 years (84.2%). The general state of the patientsâ condition while analyzing parameters GJ, CT, LDL-C and HbA1c had improved after 6 months of PC. 96.70% of the patients had presented dyslipidemia in the beginning of PC and this value had decreased to 64.29% 3 months after, increasing again to 81,04% after 6 months. The percentage of the patients with dyslipidemia classified for low HDL in the beginning of PC was 96,70%, and this number had decreased to 92.6% after 3 months of PC plan. Conclusion: PC practice was firmed as an efficient instrument in patientâs adhesion to the therapeutic plan, as well as in the improvement of the diabetic individuals life quality, also helping the prevention of some complications like those ones related to cardiovascular conditions.

Orientador: Wagner José Fávaro, Ubirajara Ferreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T23:53:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SilvaJunior_MauricioMoreira_M.pdf: 2314249 bytes, checksum: be24263c754c5e69f527d328e09d006b (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Caracterização do Estroma Reativo na Progressão do Câncer de Próstata: Envolvimento dos Fatores de Crescimento, Metaloproteinases da Matriz, Receptores de Hormônios Sexuais e Células-Tronco Prostáticas RESUMO A contribuição do estroma para a progressão do câncer de próstata (CaP) ainda é pouco conhecida. As células neoplásicas podem alterar seu componente estromal adjacente para formar um ambiente que possibilita e suporta a progressão tumoral. A modificação desse estroma é denominado de estroma reativo (EstR), o qual ocorre em muitos tipos de cânceres humanos relacionando-se à progressão e recidiva tumorais. Os fatores de crescimento e as metaloproteinases da matriz (MMP) são altamente expressos no CaP e podem atuar como fatores de crescimento parácrinos e/ ou autócrinos. As relações entre os hormônios sexuais esteróides e seus receptores com os fatores de crescimento e MMPs são cruciais reguladores da homeostase prostática, sendo fundamental o entendimento dessas relações com o desenvolvimento do EstR e progressão do CaP. Além disso, a ocorrência das células-tronco prostáticas cancerosas representam um passo importante na patogênese glandular. Assim, os objetivos principais do presente estudo foram caracterizar morfológica e molecularmente o microambiente do EstR em amostras com CaP, bem como encontrar alguma associação dos fatores de crescimento, MMPs, receptores de hormônios sexuais esteróides e células-tronco cancerosas na sua patogênese. Além disso, verificou-se a relevância da reatividade estromal e de seus marcadores moleculares na progressão do CaP.O presente trabalho baseou-se em estudo retrospectivo, o qual utilizou 40 amostras prostáticas de pacientes, na faixa etária de 60 a 80 anos, com diagnóstico de CaP. Tais amostras foram divididas em 2 grupos (20 amostras por grupo): Grupo 1: amostras de CaP sem estroma reativo; Grupo 2: amostras de CaP com intensa reatividade estromal; e posteriormente submetidas à análises histopatológicas e imunohistoquímicas. Os resultados demonstraram que o EstR foi caracterizado morfologicamente pela significativa diminuição das fibras musculares lisas e pela abundante quantidade de fibras colágenas no estroma adjacente aos ácinos neoplásicos. Intensa reatividade estromal foi verificada nos tumores de graus intermediário (Gleason 7, 3+4) e alto (Gleason 7, 4+3). Com relação à caracterização molecular do EstR, os presentes resultados demonstraram imunorreatividades aumentadas para vimentina, IGF-1, MMP-2, FGF-2 e C-Myc nas amostras com intensa reatividade estromal quando comparadas às amostras sem reatividade estromal. As imunorreatividades para AR e ER'alfa' foram aumentadas nas amostras prostáticas com intensa reatividade estromal Em contraste, a imunorreatividade para o ER'beta' foi aumentada nas amostras sem reatividade estromal. Com relação à ocorrência das células-tronco prostáticas cancerosas, estas ocorreram com maior frequência no estroma com intensa reatividade estromal. Considerando os dados em conjunto, pode-se concluir que o EstR pode ser considerado um marcador preditivo o da progressão do CaP, uma vez que este foi mais frequente nos tumores de intermediário e alto graus. As imunorreatividades aumentadas para vimentina, IGF-1, MMP-2, FGF-2 e C-Myc foram fundamentais para a ativação do EstR e tornaram o microambiente prostático favorável à progressão do câncer, devido a potencialização do desequilíbrio da interação epitélio-estroma. As imunorreatividades aumentadas para AR e ER? demonstraram o envolvimento desses receptores tanto na sinalização para o aumento dos fatores de crescimento e metaloproteinases da matriz quanto nos mecanismos de ativação do EstR. Em contraste, a sinalização do ER? indicou papel inibitório desse receptor nos mecanismos de ativação do EstR e na progressão tumoral. Finalmente, a ocorrência de células-tronco prostáticas cancerosas indicou um possível envolvimento dessas células na sinalização para o desenvolvimento do EstR e progressão do CaP / Abstract: haracterization of Reactive Stroma in the Progression of Prostate Cancer: Involvement of Growth Factors, Matrix Metalloproteinases, Receptors, Sex Hormones and Prostatic Stem Cells ABSTRACT The contribution of the stroma to the progression of prostate cancer (CaP) cancer is still unknown. The cancer cells can alter their adjacent stromal component to form an environment that enables and supports tumor progression. A modification of this is called the stroma reactive stroma (EstR), which occurs in many types of human cancers relating to the progression and tumor recurrence. Growth factors and matrix metalloproteinasys (MMP) are highly expressed in CaP and can act as a paracrine and / or autocrine growth factors. The relationship between sex steroid hormones and their receptors with growth factors and MMPs are crucial regulators of prostatic homeostasis, a fundamental understanding of these relationships with the development and progression of Estr of CaP. Moreover, addition, the occurrence of prostate stem cells cancer represent an important step in the pathogenesis glandular. Thus, the main objectives of this study were to characterize the morphological and molecular microenvironment EstR in samples with CaP as well as find some association of growth factors, MMPs, sex steroid hormone receptors and cancer stem cells in its pathogenesis. Furthermore, we verified the relevance of stromal reactivity and its molecular markers in the progression of CaP. The present work was based on a retrospective study, which used 40 prostate samples from patients, aged 60-80 years, diagnosis of CaP. These samples were divided into 2 groups (20 samples per group): Group 1: CaP samples without reactive stroma; Group 2: CaP samples with intense stromal reactivity; and subsequently subjected to histopathological and immunohistochemical analyzes. The resulted showed that EstR was morphologically characterized by the significant reduction of smooth muscle fibers and the abundant amount of collagen fibers in the stroma adjacent to the neoplastic acini. Intense reactivity was observed in stromal tumors of intermediate grades (Gleason 7, 3 +4) and high (Gleason 7, 4 +3). With respect to the molecular characterization of EstR, our results showed increased vimentin immunoreactivity, IGF-1, MMP-2, FGF-2 and C-Myc in samples with intense stromal reactivity when compared to samples without stromal reactivity. The immunoreactivity for AR and ER'alfa' were elevated in prostatic stromal samples with intense reactivity In contrast, immunostaining for ER"beta' was increased in samples with no stromal reactivity. With regard to the occurrence of prostate cancer stem cells, they occurred more frequently in the stroma with intense stromal reactivity. Considering the data together, we can conclude that the EstR can be considered a predictive marker of the progression of CaP, since this was more common in tumors intermediate, and high grades. The immunoreactivity increased vimentin, IGF-1, MMP-2, FGF-2 and C-Myc were essential for the activation of rd and made a favorable microenvironment for prostate cancer progression due to the potentiating imbalance of epithelial-stromal interaction. The immunoreactivity increased to AR and ER? demonstrated the involvement of these receptors in signaling both to the increase of growth factors and matrix metalloproteinasys as the engine that activation EstR. In contrast, ER? showed inhibitory signaling role of this receptor in the mechanism of activation of the rd and in tumor progression. Finally, the occurrence of prostate cancer stem cells indicated a possible involvement of these cells in signaling for EstR development and progression of CaP / Mestrado / Fisiopatologia Cirúrgica / Mestre em Ciências

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T08:03:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FontesJardim_DenisLeonardo_D.pdf: 4065886 bytes, checksum: 09542135435393259e6847f6bad0b542 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Tradicionalmente, o modelo de desenvolvimento de drogas em onco-hematologia utiliza-se de estudos de fase I como a primeira etapa no desenvolvimento clínico de uma droga. Nesses estudos, procura-se estabelecer a dose recomendada de novos agentes e seu perfil de segurança inicial, sendo as toxicidades o principal desfecho a ser monitorado. Posteriormente, estudos de registro são conduzidos para a aprovação de novas medicações por agências regulatórias. A maioria das medicações foi historicamente desenvolvida para uma população não-selecionada de um subtipo tumoral. No entanto, recentemente, o conhecimento em onco-hematologia vem sofrendo profundas mudanças, principalmente com o advento de novas técnicas de biologia molecular que permitem um melhor conhecimento da biologia das neoplasias. Com isso, é crescente a percepção de que existem subpopulações de pacientes com alterações moleculares específicas que demandam estratégias direcionadas; também é crescente o número de novas drogas de alvo molecular em desenvolvimento. Nesse contexto, é pouco sabido se o modelo tradicional de desenvolvimento de drogas, historicamente utilizado para medicações citotóxicas e para populações não selecionadas, estaria adequado frente essas novas demandas. Neste projeto de doutorado, avaliamos a correlação dos resultados de dose e toxicidade dos estudos de fase I com desfechos semelhantes nos estudos futuros de registro de novas medicações aprovadas pelo Food and Drug Administration (FDA) em onco-hematologia, com ênfase na comparação entre drogas citotóxicas tradicionais e drogas de alvo molecular. Determinamos que em 73% das comparações os estudos de registro adotaram uma dose entre 80% e 100% daquela recomendada pelos estudos de fase I, sendo que para drogas de alvo molecular os estudos clínicos iniciais foram menos preditores da dose futuramente aprovada dos agentes. Setenta por cento das toxicidades clinicamente relevantes em estudos de registro foram ao menos citadas em estudos de fase I, havendo uma correlação positiva com um maior número de pacientes incluídos em estudos iniciais, até cerca de 60 pacientes. Apesar das diferenças entre as populações de um estudo de fase I e de registro, a análise mostrou que um dos objetivos dos estudos de fase I foi cumprido, que seria de garantir a segurança de pacientes através da determinação de dose. Também buscamos comparar a eficácia em termos de controle de neoplasias entre drogas desenvolvidas com o conceito de terapia personalizada em relação àquelas para uma população não selecionada. Através da metodologia de meta-análise, demonstramos que em estudos de registro randomizados utilizados pelo FDA, terapias consideradas personalizadas proporcionaram maiores chances de respostas antitumorais e prolongamento do tempo até progressão de doença. A análise de todos os estudos de registro (randomizados e não randomizados) também mostrou que a terapia personalizada foi um fator independente relacionado ao aumento de sobrevida global dos pacientes. Os resultados obtidos sugerem que, frente as recentes modificações no entendimento de neoplasias e desenvolvimento de drogas, o modelo tradicional de determinação de doses em estudos de fase I necessita de adaptações, principalmente para drogas de alvo molecular, e que a incorporação do conceito de terapia personalizada é benéfica e segura para pacientes / Abstract: Traditionally, phase I trials are the first step in the clinical development model of new drugs in hematology-oncology. Phase I trials aim to establish the recommended dose of new agents for further development and their initial safety profile. Toxicities are the main outcome in these studies. Subsequently, registration trials are conduct to be the basis for drug approval by regulatory agencies, including the Food and Drug Administration (FDA). The majority of new drugs were developed for an unselect histologic type of cancer. Nevertheless, new technologies led to advances in the comprehension of the molecular basis of cancers. There is a growing evidence suggesting that specific molecular subtypes of cancers need specific strategies to target their genetic drivers. Additionally, the availability of new targeted therapies is increasing. In this context, it is not known how the traditional drug development model originally developed for cytotoxic drugs and for an unselect cancer population would perform. In this PhD thesis, we compared dosing and toxicity information from phase I trials with registration trials that led to approval of new drugs for cancer treatment by the FDA, with special attention to the sub-analysis comparing targeted versus cytotoxic agents. In 73% of matched trials (phase I trial and the respective registration trial), the dose from the registration trial was within 20% of the dose recommended by the phase I. In a multivariable analysis, phase I trials of targeted agents were less predictive of the final approved dose when compared to cytotoxic agents. Of the 530 clinically relevant toxicities in later trials, 70% were described in the respective phase I. A significant relationship between increasing the number of patients in phase I (up to 60) and the ability to describe future clinically relevant toxicities was observed. Despite several differences in design and cancer population when compared to registration trials, phase I trials were able to assure safety of patients based on its dose recommendation, which is one of the major objectives of these trials. We also compared efficacy outcomes between anticancer drugs developed under a personalized strategy (biomarker-driven treatment) with drugs developed for an unselected population. In randomized registration trials (using a random-effects meta-analysis model), personalized therapy arms were associated with a higher relative response rate ratio (compared to their corresponding control arms), prolongation of progression-free survival (PFS) and trend towards longer overall survival (OS) in comparison to non-personalized trials. Analysis of experimental arms in all registration trials (randomized and non-randomized) demonstrated that personalized therapy was an independent predictor of better response rates, PFS and OS. Treatment-related mortality rate was similar for personalized and non-personalized trials. Our results suggests that the traditional dose determination model from phase I trials needs further adaptations, especially for new molecularly targeted therapies. In addition, a personalized therapy approach for development of new agents was safe and associated with improved efficacy outcomes. We believe that our results will help to implement strategies for the development of new agents for the treatment of hematologic and solid cancers / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Adriana Franco Paes Leme / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-21T23:53:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flores_IsadoraLuana_M.pdf: 6195465 bytes, checksum: 1730d0ae0783d2ec60f422de2cb20fa1 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O carcinoma espinocelular oral (CEC oral) é a neoplasia maligna de cabeça e pescoço mais frequente e com grande morbidade. As melhorias nos protocolos terapêuticos não têm sido associadas com a melhora no prognóstico dos pacientes nas últimas décadas. Além disso, a taxa de descoberta de biomarcadores com utilização clínica de rotina ainda é um desafio para a grande maioria dos cânceres, inclusive para o CEC oral. Neste cenário, a associação da microdissecção a laser (ML) a espectrometria de massas (MS) tem sido considerada uma abordagem com alta robustez na descoberta de biomarcadores para o câncer. Diante disso, o objetivo deste estudo foi identificar potenciais biomarcadores para o CEC oral através da associação da ML a MS além de buscar possíveis mecanismos biológicos associados aos principais biomarcadores identificados com auxílio de ferramentas de bioinformática. Para isso, 10 pares de amostras teciduais frescas de CEC oral e mucosa oral normal foram obtidos para isolamento por ML para análise por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas em tandem (LC-MS/MS) seguida por análises de bioinformática. Foram identificadas 2529 proteínas e entre essas, 107 proteínas apresentaram maior expressão nas amostras de CEC oral comparadas com a mucosa oral normal (teste t Student não-pareado, p<0,05 e razão >1,5). Os dados também foram submetidos às análises multivariadas pelos modelos Partial Least Squares Discriminant Analysis (PLS-DA) e Support Vector Machine (SVM) que indicaram, respectivamente, um painel de 40 e 70 potenciais biomarcadores. No geral, as análises pelo Ingenuity, KEGG (banco de dados Enciclopédia Kyoto para genes e genomas) e Gene Ontology mostraram que os processos mais significantes foram relacionados à sinalização célula-célula, a replicação do DNA, a recombinação e ao reparo, a adesão focal, a regulação do citoesqueleto de actina e a interação do receptor da matriz extracelular, entre outras. O fator eucariótico de elongação delta 1 (EEF1D) foi à proteína indicada para validação por ter apresentado reprodutibilidade de expressão entre as amostras de CEC oral, alta significância estatística segundo o teste t Student, expressão aumentada em CEC oral, por ter sido indicada como um marcador de classe na análise por PLS-DA e porque a sua função biológica ainda não foi investigada para esta neoplasia. Os resultados dos ensaios de validação confirmaram uma maior expressão de EEF1D por western blot utilizando-se células SCC-9 e tecido tumoral originado de modelo ortotópico. Além disso, uma intensidade de marcação maior para EEF1D foi observada em CEC oral pela validação por imuno-histoquímica (IHQ). Portanto, esse estudo combinou técnicas de ML, MS e bioinformática para a identificação de potenciais biomarcadores sendo que a proteína EEF1D foi considerada um potencial biomarcador para o CEC oral e validada por WB e IHQ podendo futuramente ser indicada também para validação em estudos translacionais / Abstract: The oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a malignant head and neck with more frequency of occurrence and with greater morbidity. Improvements in treatment protocols have not been associated with improved prognosis of patients in recent decades. Furthermore, the rate of discovery of biomarkers with clinical routine use is still a challenge for the large majority of cancers, including OSCC. In this scenario, the combination of laser microdissection (LM) and mass spectrometry (MS) has been considered an approach with high robustness to biomarker discovery for cancer. Thus, the aim of this study was to identify potential biomarkers for OSCC through the association of the LM, MS and bioinformatics aiming at exploring biological mechanisms associated with major candidate biomarkers identified. For this, 10 pairs of fresh tissue samples of OSCC and normal oral mucosa were obtained for isolation by LM for analysis by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and bioinformatics analysis. 2529 proteins were identified and among these, 107 proteins have higher expression in oral SCC samples compared with normal oral mucosa (unpaired Student's t test, p <0.05 and ratio >1.5). The data were also submitted to multivariate models by Partial Least Squares Discriminant Analysis (PLS-DA) and Support Vector Machine (SVM) that, respectively, indicated a panel of 40 and 70 potential biomarkers. Overall, the Ingenuity analysis, KEGG (Kyoto Encyclopedia database for genes and genomes) and Gene Ontology showed that the most significant processes were related to cell-cell signaling, DNA replication, recombination and repair, adhesion focal, regulation of acting cytoskeleton and the interaction of the receptor extracellular matrix. The eukaryotic elongation factor 1 delta (EEF1D) was the protein indicated to validation because presented reproducibility of expression between OSCC samples, high statistical significance according to the Student t test, increased expression in OSCC, having been appointed as a class marker analysis for PLS-DA and because its biological function has not yet been investigated for this cancer. The higher expression of EEF1D was confirmed by western blot using proteins extracted from SCC-9 cells and tumor tissue originated from orthotropic model. Moreover, a higher marking intensity was observed in EEF1D for OSCC for validation by immunohistochemistry (IHC). Therefore, this study combined techniques ML, MS, and bioinformatics to identify potential biomarkers and EEF1D was the protein identified as a potential biomarker for OSCC and validated by WB and IHC and may also be indicated for validation in future translational studies / Mestrado / Estomatologia / Mestra em Estomatopatologia

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2005. / Härtill 5 uppsatser.

A asfixia perinatal e sua mais grave complicação, a encefalopatia hipóxicoisquêmica (EHI) são causas de elevada mortalidade e de sequelas neurológicas no recém-nascido (RN). Evidencias de comprometimento cerebral podem ser detectadas logo na primeira semana de vida e o diagnóstico precoce é de grande importância para o tratamento e seguimento. OBJETIVOS: Verificar a prevalência de asfixia perinatal e de EHI; analisar a utilidade de quatro marcadores sanguíneos: transaminase glutâmica oxalacética (TGO), transaminase glutâmica pirúvica (TGP), desidrogenasse láctica (DHL) e Creatina Quinase MB (CK-MB) coletados ao nascimento, com 24 e 72 horas de vida, como sinalizadores de lesões cerebrais nos RN asfixiados; identificar a presença de alterações neurológicas clínicas pelo Escore de Sarnat e Sarnat (1976) com 24 e 72 horas e com 28 dias de vida e identificar e descrever a presença de lesões cerebrais detectadas pela ultrassonografia de crânio com 24 e 72 horas e com 28 dias de vida. MÉTODO: Estudo de coorte prospectivo no qual foram incluídos RN de termo que apresentaram asfixia perinatal pelo critério de Buonocore (presença ao nascimento de pelo menos dois das seguintes condições clínico-laboratoriais: acidose metabólica com níveis de pH 7,20, Boletim de Apgar no quinto minuto de vida < 6, necessidade de fração inspirada de oxigênio 0,40 para manter uma saturação de oxigênio de 86%). Para realização do pH e dos marcadores bioquímicos foi coletado sangue logo ao nascimento, com 24 e 72 horas de vida. O exame clínico segundo critérios de Sarnat e Sarnat foi realizado com 24 e 72 horas e com 28 dias de vida e a ultrassonografia de crânio nos mesmos momentos. RESULTADOS: De 2.989 nascidos vivos durante o período do estudo, 28 recém-nascidos apresentaram asfixia perinatal (1% do total de nascimentos) e a EHI foi evidenciada em 21,42%. A enzima CK-MB se mostrou um bom marcador de asfixia, pois todos os valores foram superiores a 5,10 ng/ml, e se correlacionaram positivamente com as alterações apresentadas no exame clínico de Sarnat e com a ultrassonografia transfontanela. Os valores das outras enzimas como TGO (24h), TGO e TGP (72h) também se correlacionaram positivamente com as alterações ultrassonográficas as quais mostraram alteração em 3,5% dos pacientes com 24 horas de vida, 25% com 72 horas e 28,6% com 28 dias. A ultrassonografia de crânio com 28 dias mostrou aumento estatisticamente significante, no percentual de resultados anormais quando comparado com o observado com 24h (p=0,039), apesar dos estágios de Sarnat terem melhorado, com maior número de pacientes com estágio I no decorrer dos 28 dias. CONCLUSOES: A prevalência de asfixia perinatal e da EHI estão dentro da faixa citada na literatura. O melhor marcador bioquímico nesta casuística foi a isoenzima CK-MB e se correlacionou com as alterações apresentadas no exame clínico de Sarnat e na USG de crânio. A curva ROC mostrou: os valores de CK-MB de 24 horas em relação à USG de crânio de 72 horas Sensibilidade de 85,7%, Especificidade de 85,7% e Acurácia de 85,7%. O escore clínico de Sarnat não se alterou depois de 72 horas e apresentou correlação com as alterações na USG de crânio e este método de imagem foi adequado para detecção de lesões crebrais precoces e com 28 dias de vida / Perinatal asphyxia and its most serious complication, hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE) are causes of high mortality and neurological sequelae in the newborn (NB). Evidence of cerebral impairment can be detected in the first week of life and early diagnosis is very important for the treatment and follow-up. OBJECTIVES: To assess the prevalence of perinatal asphyxia and HIE; consider the usefulness of four blood markers: glutamic oxaloacetic transaminase (GOT), glutamic pyruvic transaminase (GPT), lactate dehydrogenase (LDH) and creatine kinase MB (CK-MB) collected the birth, with 24 and 72 hours of life, as markers of brain damage in asphyxiated infants, to identify the presence of neurological clinical score by Sarnat and Sarnat (1976) with 24 and 72 hours and 28 days of life and describe the presence of brain lesions detected by cranial ultrasound with 24 and 72 hours and 28 days. METHOD: A prospective cohort study which included fullterm infants who had perinatal asphyxia by Buonocore criteria (presence at birth of at least two of the following clinical and laboratory conditions: metabolic acidosis with pH levels of the umbilical vein 7.20, Apgar score in the fifth minute of life <6, need for inspired oxygen fraction (FiO2) 0.40 to maintain an oxygen saturation of 86%). To perform the pH and biochemical markers of blood was collected at birth, 24 and 72 hours of life. Clinical examination according to criteria of Sarnat and Sarnat was performed with 24 and 72 hours and 28 days of life and cranial ultrasound was performed in the same time. RESULTS: Of 2989 live births during the study period, 28 had asphyxia (1% of total births) and HIE was found in 21.42%. The CK-MB showed that all above normal values (<5.10ng/ml) and correlated with the changes presented in the clinical examination of Sarnat and the USG transfontanelle. The values of other enzymes such as GOT (24h), GOT and GPT (72h) also correlated positively with the brain lesins detected by cranial ultrasound in 3.5% of patients with 24 hours of life, 25% at 72 hours and 28 6% after 28 days. Ultrasonography of brain at 28 days showed a statistically significant increase in the percentage of abnormal results when compared with that observed at 24h (p = 0.039), despite the Sarnat stages have improved, with larger numbers of patients with stage I during the 28 days. CONCLUSION: The prevalence of perinatal asphyxia and HIE is within the range cited in literature. The best biochemical marker in this series was the CK-MB and correlated with the changes presented in the clinical examination of Sarnat and ultrasound transfontanelle. The ROC curve showed: values of CK-MB of 24 hours and USG 72 hours sensitivity of 85.7%, specificity of 85.7% and accuracy of 85.7%. The clinical Sarnat score did not change after 72 hours and correlated with changes in ultrasound transfontanelle and this imaging method proved to be an appropiate study to detect brain lesions early and with 28 days of life

Este estudo comparou a ingestão de flúor (F) através da dieta e do dentifrício bem como a excreção urinária de F de 24 horas de crianças recebendo diferentes fontes de F sistêmico: água artificialmente fluoretada (A-Bauru, SP-Brasil, 0,6-0,8 mgF/L, água naturalmente fluoretada (B-Brejo dos Santos, PB-Brasil, 0,6-0,9 mgF/L), sal fluoretado (C-Lima, Peru, 180-200 mgF/Kg) e leite fluoretado (D-Trujillo, Peru, 250 mL de leite contendo 1,0 mgF/L). Crianças de 4-6 anos (n=21-26) participaram em cada comunidade. Uma comunidade com água não fluoretada (<0,1 mgF/L) (E-Pirajuí, SP-Brasil) foi incluída como controle (n=24). A quantidade de F ingerida através da dieta foi determinada pela \"dieta duplicada\", considerando seus diferentes constituintes (água, outros líquidos e sólidos). A ingestão de F através do dentifrício foi determinada pela escovação simulada. A excreção urinária de F de 24 h e a concentração de F das unhas das mãos e dos pés também foram avaliadas. O F foi analisado por eletrodo, depois de difusão facilitada por hexametildiloxano ou após tamponameno com TISAB. A análise estatística foi feita pelos teste de Kruskall-Wallis, Dunn e regressão linear (p<0,05). A média (±DP) da ingestão total de F (mg/Kg peso corporal/ dia) foi 0,065±0,030a,, 0,084±0,029a, 0,088±0044a,, 0,088±0,052a e 0,027±0,022b para A, B, C, D e E, respectivamente. Considerando somente a dieta, a média foi de 0,042±0,012b, 0,058±0,016a,b, 0,048±0,023a,b, 0,059±0,012a e 0,007±0,004c, respectivamente. A maior contribuição através da dieta para A/B e C/D/E foram a água e os sólidos, respectivamente. A média da quantidade F ingerida através do dentifrício variou entre 0,020 (E) e 0,040 (C) mg/Kg peso corporal/ dia e não foi significativamente diferente entre as comunidades. A média (±DP) da excreção urinária de F (mg) de 24 horas foi 0,693±0,198a, 0,625±0,297a,b, 0,808±0,305a, 0,666±0,194a e 0,478±0,321b para A, B, C, D e E, respectivamente. Houve uma correlação significativa entre a excreção urinária de F e a ingestão de F através da dieta (r=0,355, p<0,0001) e ingestão total (dieta mais dentifrício) e excreção urinária (r=0,278, p=0,002). Houve uma correlação significativa entre a excreção urinária de F e concentração de F nas unhas das mãos (r=0,237, p=0,010) e dos pés (r=0,221, p=0,016) e uma forte correlação entre as concentrações de F nas unhas das mãos e dos pés (r=0,730, p<0,0001). Os resultados indicam que a ingestão total de F de crianças deve ser determinada antes que um método de fluoretação sistêmica seja implementado. / This study compared the fluoride (F) intake from diet and dentifrice, as well as 24-hour urinary F excretion of children receiving systemic F from different sources: artificially fluoridated water (A-Brazil, 0.6-0.8 mgF/L), naturally fluoridated water (B-Brazil, 0.6-0.9 mgF/L), fluoridated salt (C-Peru, 180-200 mgF/Kg) and fluoridated milk (D-Peru, 250 mL of milk containing 1.0 mgF/L). Children (n=21-26) aged 4-6 years old participated in each community. A non-fluoridated (<0.1 mgF/L) Brazilian community (E) was evaluated as control (n=24). Children had their F intake from diet monitored by the \"duplicate plate\" method, considering its different constituents (water, other liquids and solids). F ingested from dentifrice was determined by simulated toothbrushings. Twenty-four hour urinary F excretion was also evaluated. F was analyzed with the electrode, after hexamethyldisiloxane-facilitated diffusion or after buffering with TISAB. Data were tested by Kruskall-Wallis and Dunn´s post hoc tests and linear regression (p<0.05). Mean (±SD) total F intake (mg/Kg b.w./day) was 0.065±0.030a, 0.084±0.029a, 0.088±0.044a, 0.088±0.052a and 0.027±0.022b for A, B, C, D and E, respectively. Considering diet only, it was 0.042±0.012b, 0.058±0.016a,b, 0.048±0.023a,b, 0.059±0.012a and 0.007±0.004c, respectively. The main dietary contributors for A/B and C/D/E were water and solids, respectively. Mean F intake from dentifrice ranged between 0.020 (E) and 0.040 (C) mg/Kg b.w./day and was not significantly different among the communities. Mean (±SD) 24-h urinary F excretion (mg) was 0.693±0.198a, 0.625±0.297a,b, 0.808±0.305a, 0.666±0.194a and 0.478±0.321b for A, B, C, D and E, respectively. There was a significant correlation between daily F intake from diet and urinary F excretion (r=0.355, p<0.0001) and total intake (diet and dentifrice) and urinary F excretion (r=0.278, p=0.002). There was a significant correlation between urinary F excretion and fluoride concentration in fingernails (r=0.237, p=0.010) and toenails (r=0.221, p=0.016) and a strong correlation between F concentration from fingernails and toenails (r=0.730, p<0.0001). The results indicate that the total F intake of children must be taken into account before a systemic method of fluoridation is implemented.

INTRODUÇÃO: A angiogênese tem sido proposta como um marcador de prognóstico em uma variedade de tumores incluindo o renal. No avanço da compreensão da biologia molecular do carcinoma de células renais (CCR) os genes CD105 (endoglina), VEGF, VEGFR1 e VEGFR2 são seletivamente expressos em células endoteliais vasculares sendo estudados como potenciais alvos terapêuticos. OBJETIVOS: Este estudo analisou a expressão destes quatro genes no tecido renal normal e CCR e suas correlações com os fatores prognósticos para a neoplasia. MÉTODOS: Os níveis de expressão de CD105, VEGF, VEGFR1 e VEGFR2 foram analisados por Reação da Transcriptase Reversa em tempo real (qRT-PCR) em amostras de tumor fresco congelado coletados de 56 pacientes submetidos à nefrectomia parcial ou radical por CCR. Neste estudo foram avaliados os níveis de expressão dos genes em tecidos normais e tumorais e comparados com fatores prognósticos como tamanho tumoral (> ou <= 7 cm), Grau de Fuhrman (1-2 e 3-4) e invasão microvascular (presente ou ausente). RESULTADOS: A análise dos quatro genes demonstrou que CD105 esta subexpresso em 94.7% dos casos e a superexpressão de VEGF, VEGFR1 e VEGFR2 ocorreu em 53,6%, 85,7% e 64,3% dos casos respectivamente. A expressão de endoglina foi significativamente maior em pacientes com doença metastática (p=0,05) em relação ao grupo sem metástases. Além disso, o gene do VEGFR2 foi associado com estadiamento T, apresentando uma média de expressão maior nos pacientes portadores de doença pT1-2 (p=0,04). CONCLUSÕES: Nossos experimentos demonstraram que a endoglina está subexpressa em carcinoma de células renais em relação com o tecido renal normal e a presença de níveis mais elevados está relacionada à doença metastática. Os genes VEGF, VEGFR1 e VEGFR2 encontram-se superexpressos no CCR e uma maior expressão do gene VEGFR2 está relacionada com estadiamento T1 e T2 / INTRODUCTION: Angiogenesis has been proposed as a prognostic marker in a variety of human malignancies, including renal cancer. Due to a better understanding of the underlying biology of Renal Cell Carcinoma (RCC) the genes expression of CD105 (endoglina), VEGF, VEGFR1 and VEGFR2 that are selectively expressed in vascular endothelial cells are being studied as potential therapeutic targets. OBJECTIVES: This study analyzed the expression of these four genes in normal kidney tissue and RCC and relationship with prognostic factors. METHODS: CD105, VEGF, VEGFR1 and VEGFR2 expression levels were analyzed by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) in fresh-frozen malignant tissue specimens collected from 56 patients submitted to radical or partial nephrectomy. This study assessed the expression of genes in normal and tumor tissues, and compared with classic prognostic parameters in CCRCC , such as tumor size (larger or smaller than 7 cm) Fuhrman grade (1-2 and 3-4) and microvascular invasion (this or absent). RESULTS: The analysis of these four genes showed that CD105 is subexpressed in 94.7% of cases and the overexpression of VEGF, VEGFR1 and VEGFR2 occurred in 53.6%, 85.7% and 64.3% of cases respectively in tumor tissues compared to controls. The expression of endoglin was significantly higher in patients with metastatic disease (p = 0.05). In addition, VEGFR2 gene was associated with stage T, with an average of expression higher in patients with stage T1-T2 (p = 0.040). Conclusions: These experiments demonstrated that endoglin was underexpressed in RCC compared to normal kidney and the presence of enhanced expression is associated with metastatic disease. VEGF, VEGFR1 and VEGFR2 were overexpressed in the CCRCC and a higher VEGFR2 expression was related with stage T1-2

A identificação e seleção de animais com maior potencial genético de crescimento vem proporcionando um aumento substancial nos índices produtivos. Para tanto, ferramentas do melhoramento genético vem sendo utilizadas, além disso, mudanças nos padrões de crescimento animal, podem alterar o metabolismo animal e consequentemente os metabólitos. Dessa forma, o objetivo desse trabalho, foi analisar o efeito do potencial genético para crescimento avaliado pós-desmama no desempenho e metaboloma do plasma de machos Nelore durante o período de terminação. Foram coletadas amostras de plasma de 74 bovinos Nelore com diferente potencial de crescimento e provindos de dois rebanhos distintos. Ambos os rebanhos foram divididos em animais de alta potencial genético para crescimento e baixo potencial genético para crescimento. Os animais permaneceram alojados em confinamento, recebendo a mesma dieta durante todo o período experimental. Os animais foram pesados periodicamente para avaliar a ganho médio diário e no dia anterior ao abate foi realizada coleta de sangue para analise metabolômica do plasma. O perfil metabolômico das amostras de plasma foi determinado utilizando a Ressonância Magnética Nuclear. Durante a seleção dos animais do rebanho 1 durante a fase de recria, o ganho de peso dos animais do rebanho 1 de alto crescimento, foi 323 g/dia superior (P &lt;0,0001) e o peso vivo ao sobreano foi de 54 kg maior (P = 0,05) comparado aos animais de baixo crescimento, evidenciando diferenças fisiológicas e fenotípicas entre os grupos nesse momento. Também foi observado no rebanho 1 maior peso vivo ao final do período de 35 kg (P = 0,004) para os animais de alto crescimento. Além disso, os resultados obtidos nesse estudo, não mostraram diferenças estatística entre os diferentes potenciais genéticos para crescimento ao final da terminação. Dessa forma, o presente estudo conclui que a diferença fenotípica em função do potencial genético para crescimento ocorreu no período de seleção da mesma, porém essa diferença não foi observada durante a terminação dos animais, da mesma forma, não houve diferença metabolômica no plasma dos animais de acordo com o potencial genético para crescimento, avaliada no período final da terminação. / The identification and animals selection with greater genetic potential of growth has provided a substantial increase in the productive indexes. For many tools of genetic breeding, changes in animal growth patterns have been used, they can modify animal metabolism and consequently, metabolites. Therefore, the objective of the present work was to analyze the effect of the genetic potential for post-weaned growth on the performance and metabolome of Nellore male bull plasma during the finishing period. Plasma samples were collected from 74 Nelore bulls with different growth potential and from two different herds. Both herds were divided into animals of high and low genetic potential for growth. The animals were kept in feedlot, receiving the same diet throughout the experimental period. The animals were periodically weighed to evaluate the mean daily gain and the day before slaughter, blood collection was performed for metabolic analysis of the plasma. The metabolomic profile of the plasma samples was determined using Nuclear Magnetic Resonance. During the selection of animals from herd 1 during the growing phase, the weight gain of the high growth herd 1 animals was 323 g / day higher (P &lt;0.0001) and the live weight to the overane was 54 kg higher (P = 0.05) compared to low growth animals, evidencing physiological and phenotypic differences between the groups at that time. It was also observed in the herd 1 greater live weight at the end of the period of 35 kg (P = 0.004) for the high growth animals. In addition, the results obtained in this study did not show statistical differences between the different genetic potentials for growth at the end of the study. Therefore, the present study concludes that the phenotypic difference as a function of the genetic potential for growth occurred during the selection period, althoug this difference was not observed during the finishing of the animals, in the same way, there was no metabolomic difference in the animals plasma according to the genetic potential for growth, evaluated in the final termination period.