O P3HB é um tipo de poliéster sintetizado por bactérias como reserva de carbono e energia, e mobilizado na escassez destes. Um estudo com mutantes de Burkholderia sacchari, indicou o envolvimento de PhaZa1 e LonA na mobilização de P3HB. Este estudo avaliou o papel de PhaZa1 e LonA neste processo. A complementação heteróloga dos mutantes de B. sacchari, a partir dos genes phaZa1 e lonA de Ralstonia eutropha, restabeleceu a capacidade de mobilização dessas cepas, confirmando o envolvimento de seus produtos no processo. A partir de cepas recombinantes de Escherichia coli, abrigando tanto os genes de acúmulo de P3HB como de mobilização de R. eutropha, obteve-se cepas abrigando os genes phaZa1 e lonA isoladamente e outra abrigando os dois genes simultaneamente. Quando separados, tanto phaZa1 quanto lonA, não apresentaram papel significante na mobilização porém, quando os dois genes são expressos simultaneamente, as taxas de mobilização atingem mais de 50%, indicando que deva ter uma interação entre PhaZa1 e LonA para que o processo de mobilização seja efetivo. / The P3HB is a type of polyester synthesized by bacteria like carbon and energy source, and is mobilizated when there is a shortage of these. A study with mutants of Burkholderia sacchari, showed the involvement of PhaZa1 and LonA in mobilization of P3HB. The present study evaluated the role of PhaZa1 and LonA in this process. The heterologous complementation of mutants of B. sacchari, with phaZa1 and lonA genes from Ralstonia eutropha, reestablished the mobilization capacity in these strains, confirming the involvement of their products in this process. From the recombinant strain of Escherichia coli, harboring accumulation and mobilization genes from R. eutropha, we obtained strains harboring phaZa1 and lonA genes singly and another harboring both genes simultaneously. When expressed singly, both phaZa1 as lonA, had no significant role in mobilization but, when both genes were expressed simultaneously, the rates of mobilization reached more than 50%, appointing that an interaction must occur between PhaZa1 and LonA for the mobilization process to be effective.

Apesar da confiabilidade e da sobrevivência relacionadas aos tratamentos com implantes, falhas das reabilitações orais implanto-suportadas ainda são persistentes. Estas falhas podem causar tanto danos mecânicos -como o afrouxamento do parafuso de retenção devido à instabilidade das conexões- quanto danos biológicos -como as reações inflamatórias nos tecidos peri-implantares devido à ocorrência de infiltração bacteriana através da interface implante/pilar e a consequente colonização do interior dos implantes e seus componentes. Os mecanismos responsáveis por estas falhas mecânicas/biológicas dos sistemas de implantes não estão totalmente elucidados, e modificações nos modelos das conexões protéticas e dos parafusos de retenção vêm sendo desenvolvidas com o intuito de aumentar a estabilidade das conexões e minimizar estas intercorrências. Entretanto, a literatura relativa à configuração ideal destas modificações e seus fatores determinantes envolvidos ainda é inconclusiva. Assim, os objetivos do presente do estudo foram avaliar microbiologicamente por meio da técnica de hibridização DNA-Checkerboard, a ocorrência de infiltração bacteriana do meio externo para o interior dos implantes através das diferentes interfaces implante/pilar em dois diferentes sistemas de conexão de implantes, hexágono externo (HE) e triângulo interno (TI), com parafusos de retenção de pilares planos convencionais e parafusos experimentais cônicos. Quarenta e oito implantes dos dois tipos de conexão foram analisados, sendo estes HE ( n = 24) ou TI (n = 24). Os pilares foram fixados a implantes com parafusos convencionais ou parafusos cônicos experimentais. Após a incubação em saliva, a hibridização DNA Checkerboard foi utilizada para identificar e quantificar até 38 espécies bacterianas na área interna dos implantes. Para análise estatística utilizou-se o teste de Kruskal-Wallis seguido de pós-testes de Bonferroni para comparações múltiplas. Vinte e quatro das trinta e oito espécies estudadas, incluindo patógenos putativos periodontais, foram encontradas colonizando as superfícies internas dos implantes HE e TI. Peptostreptococcus anaerobios (P = 0,003), Prevotella melaninogenica (P <0,0001) e Candida dubliniensis (P <0,0001) apresentaram diferenças significativas entre os diferentes grupos. As médias de contagem microbiana total (× 104, ± DP) para cada grupo foram registradas como: G1 (0,27 ± 2,04), G2 (0 ± 0), G3 (1,81 ± 7,50) e G4 (0,35 ± 1,81). As diferentes geometrias das conexões de implantes e parafusos apresentaram distintos níveis de penetração microbiana através da interface implante-pilar. Os implantes ligados com parafusos de pilar de cabeça cônica experimental apresentaram contagens menores de micro-organismos quando comparados com os parafusos convencionais. / Despite the reliability and high success rates related to treatment with implants, failures of implant-supported oral rehabilitation are still persistent. These failures can cause both mechanical damage, such as loosening the retaining screw connections due to instability, as biological damage, such as inflammatory reactions in periimplants tissues due to the occurrence of bacterial leakage along the implant/abutment interface and the subsequent colonization of the subsequent colonization of the internal/inner parts of the implants and components. The mechanisms responsible for these mechanical/biological failures of implant systems are not fully elucidated, and changes to the models of prosthetic connections and retaining screws have been developed in order to increase the stability of connections and minimize these problems. However, the literature related to these changes and its impact on the implant-components stability is still inconclusive. The objective of this study was to evaluate microbiologically by the DNA-Checkerboard hybridization, the occurrence of bacterial leakage from the external environment to the interior of the implant through these different implant/abutment interface. For the study will be evaluated two different implant connections, one external hexagonal (EH) and other internal triangle (IT), with either conventional and experimental tapered screws abutment. Forty-eight two-part implants with external hexagon (EH; n = 24) or tri-channel internal (TI; n = 24) connections were investigated. Abutments were attached to implants with conventional flat-head or experimental conical-head screws. After saliva incubation, Checkerboard DNA-DNA hybridization was used to identify and quantify up to 38 bacterial colonizing the internal parts of the implants. Kruskal-Wallis test followed by Bonferroni\'s post-tests for multiple comparisons was used for statistical analysis. Twenty-four of thirty-eight species, including putative periodontal pathogens, were found colonizing the inner surfaces of both EH and TI implants. Peptostreptococcus anaerobios (P = 0.003), Prevotella melaninogenica (P < 0.0001), and Candida dubliniensis (P < 0.0001) presented significant differences between different groups. Means of total microbial count (×104 , ±SD) for each group were recorded as follows: G1 (0.27 ± 2.04), G2 (0 ± 0), G3 (1.81 ± 7.50), and G4 (0.35 ± 1.81). Differences in the geometry of implant connections and abutment screws have impacted the microbial leakage through the implant-abutment interface. Implants attached with experimental conical-head abutment screws showed lower counts of microorganisms when compared with conventional flat-head screws.

O processo fermentativo da Saccharomyces cerevisiae para a produção de etanol tem grande relevância para o Brasil por ser responsável por uma fonte de energia renovável que é amplamente usada na indústria automotiva. No entanto, em escalas industriais, a fermentação da levedura não ocorre em ambiente asséptico, sendo que diferentes micro-organismos contaminantes são capazes de crescer, competir por nutrientes e até mesmo interferir na fermentação da S. cerevisiae. A fim de melhor compreender quem são os micro-organismos contaminantes e o que fazem na dorna de fermentação, foi utilizado uma abordagem polifásica. O levantamento da microbiota bacteriana presente nas usinas do estado de São Paulo foi realizado através de técnicas independentes de cultivo. Posteriormente, foram realizados ensaios fermentativos com S. cerevisiae CAT-1 na presença do contaminante Lactobacillus fermentum (I-2) para a análise da interação destes na dorna de fermentação. A análise foi realizada por metabolômica acessada através da cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (GC-MS) e, para isso, inicialmente foi estabelecida uma metodologia eficiente para análise através de GC-MS. Nas usinas, foi reportada uma porcentagem de Lactobacillus maior do que a descrita e a população bacteriana pareceu ser característica de cada usina e persistente ao longo do tempo. Já o estabelecimento da metodologia de análise de metabólitos da fermentação por GC-MS possibilitou a identificação de 261 metabólitos, e as três classes mais abundantes foram Carbohydrates and carbohydrate conjugates (16%), Carboxylic acids and derivatives (12%) e Fatty Acyls (5%). E no ensaio de S. cerevisiae CAT-1 na presença do contaminante L. fermentum (I-2), possibilitou a identificação de 208 metabólitos, onde 50 foram diferencialmente abundantes. Além disso, a via glicolítica foi reforçada na fermentação de S. cerevisiae CAT-1, sendo que nas fermentações de S. cerevisiae (CAT-1) na presença de L. fermentum (I-2), a produção de aminoácidos a partir do glutamate pareceu ser importante. Desta forma, uma análise polifásica pode auxiliar no esclarecimento da relação dos micro-organismos contaminantes com a levedura dentro da dorna de fermentação. / The fermentation of Saccharomyces cerevisiae for ethanol production has great importance to Brazil since it is responsible for the production of a renewable energy source that is widely used in the automotive industry. However, in industrial scale, the yeast fermentation does not occur in an aseptic environment, where different contaminant microorganisms are capable of growing, competing for nutrients and even interfering with the S. cerevisiae fermentation. In order to better understand who the contaminating microorganisms are and what they do in the fermenter, it was used one polyphasic approach. The survey of the bacterial microflora present in two different São Paulo state distilleries was carried out by cultivation independent techniques. Subsequently, fermentation assays were performed with S. cerevisiae CAT-1 in the presence of the contaminant Lactobacillus fermentum (I-2) to analyze the interaction of these microorganisms in the fermenter. The analysis was performed through metabolomics accessed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and, for that, initially was established an efficient methodology for fermentation metabolite analysis by GC-MS. In the distilleries, it was reported a higher percentage of Lactobacillus than ever described and bacterial population appeared to be characteristic of each distillery and persistent over time. After the establishment of fermentation metabolite analysis methodology by GC-MS, it was possible to identify 261 metabolites, and the three most abundant classes were Carbohydrates and carbohydrate conjugates (16%), Carboxylic acids and derivatives (12%) and Fatty acyls ( 5%). In the fermentation assay of S. cerevisiae CAT-1 in the presence of the contaminant L. fermentum (I-2), it was possible to identify 208 metabolites, where 50 were differentially abundant. In addition, the glycolytic pathway was enhanced in the fermentation of S. cerevisiae CAT-1, and in fermentation of S. cerevisiae (CAT-1) in the presence of L. fermentum (I-2), the production of amino acids from glutamate appeared to be important. Thus, a polyphasic analysis can help in the understanding of the relationship between contaminating microorganisms with the yeast in the fermenter.

O objetivo geral deste trabalho foi avaliar a influência dos leucócitos do colostro bovino na imunidade inata, desenvolvimento da microbiota intestinal e ocorrência de diarreias em bezerras Holandesas recém-nascidas. Para isso, 20 bezerras Holandesas foram acompanhadas nos seguintes momentos: antes da mamada do colostro (D0); 1-2 (D2); 7 (D7); 14 (D14); 21 (D21) e 28 (D28) dias após nascimento e foram distribuídas em dois grupos experimentais: grupo COL+ recebeu colostro fresco (4L) proveniente de suas respectivas mães; e grupo COL- recebeu colostro congelado e acelular (4L) de vacas doadoras. Capítulo 1 O objetivo deste capítulo foi avaliar a presença e influência dos leucócitos do colostro na colonização do trato gastrintestinal. Para isso, amostras de colostro foram semeadas em TSA e MacConkey para CBT e CCT; e amostras de fezes em agar sangue, MacConkey e Salmonella-Shiguella. Bezerras apresentaram maior frequência de diarreia no D14 (COL+=78%; COL-=60%). O grupo COL- apresentou maior CBT e CCT/mL (3,93x106 ufc/mL e 3,01x105 ufc/mL) em relação ao COL+ (0,94x106 ufc/mL e 0,78x105ufc/mL). Sobre as espécies bacterianas isoladas, as que foram mais frequentes no COL+ foram Proteus mirabilis (29,91%), Escherichia coli (28,04%), Citrobacter freundii (5,61%) e Staphylococcus spp (5,61%), no COL- foram Escherichia coli (28,70%), Proteus mirabilis (27,78%), Klebsiella pneumoniae (11,32%) e Morganella morganii (5,66%). O momento com maior isolamento em ambos os grupos foi o D2 (COL+ = 26 cepas; COL- = 27 cepas), período em que iniciou a diarreia nas bezerras. Não foi possível detectar diferenças entre as frequências de microrganismos entre os grupos COL+ e COL-. A administração de colostro COL+ e COL- não influenciou na proporção de bactérias aeróbias presentes nas fezes e na ocorrência de diarreia das bezerras durante o período neonatal. Capítulo 2 O objetivo deste capítulo foi avaliar a influência dos leucócitos do colostro na resposta imune inata em bezerras Holandesas. Os animais foram submetidos ao exame clínico, seguido da colheita das amostras sanguíneas para realização das provas laboratoriais. As concentrações de cortisol sérico e haptoglobina não apresentaram diferenças estatísticas, enquanto a concentração de ferro foi diferente entre os grupos no D7. No leucograma não foi detectada diferença para os leucócitos totais e neutrófilos absolutos, mas houve tendência entre os grupos no D7 para os valores de neutrófilos relativos. O marcador CH138+CD62L+ não apresentou diferença entre os grupos, apesar da maior expressão ter sido detectada no COL-. A expressão de CH138+CD62L- foi maior no COL+ no D14. A fagocitose e produção de H2O2 pelos neutrófilos sanguíneos apresentou perfil semelhante em relação ao S. aureus e E. coli entre os grupos, apesar do COL- apresentar maior intensidade de fagocitose do D7 ao D14. Houve tendência para o aumento da proporção de granulócitos liberando H2O2 basal no D14 para o COL-, entretanto o COL + apresentou tendência para maior intensidade da fagocitose no D21. A proporção de granulócitos (%), estimulados com S. aureus, liberando H2O2 foi maior no COL+ em D7, enquanto o estímulo com a E. coli não resultou em diferenças entre os grupos. A intensidade de fluorescência foi maior e gradual no COL+ quando as células foram estimuladas, porém não foram encontradas diferenças estatísticas. As células do colostro influenciaram no perfil sanitário apresentado pelas bezerras, observando-se maior intensidade de diarreias, menores teores de ferro sérico e anemias no grupo que recebeu colostro congelado. A migração dos granulócitos sanguíneos foi mais rápida e intensa no COL+ em relação ao COL-, após exposição natural aos patógenos causadores de diarreia. O índice de fagocitose (%) dos granulócitos apresentou semelhança entre os grupos, entretanto a intensidade da fluorescência foi mais intensa no COL-. Em contrapartida, o COL+ demonstrou maior habilidade em produzir H2O2 / The aim of this study was to evaluate the influence of bovine colostrum leukocytes in innate immunity, in the development of the intestinal microbiota and the occurrence of diarrhea in newborn Holstein calves. For this, 20 Holstein calves were followed in the following moments: before colostrum intake (D0); 1-2 (D2); 7 (D7); 14 (D14); 21 (D21) and 28 (D28) days after birth. They were divided into two experimental groups: COL+ group, which received fresh colostrum (4L) from their mothers; and COL-group which received frozen and acellular colostrum (4L) of donor cows. Chapter 1 -The aim of this chapter was to evaluate the presence and influence of colostrum leukocytes in the colonization of the gastrointestinal tract. For this, colostrum samples were seeded in TSA and MacConkey for TPC and TCC; and stool samples on blood agar, MacConkey and Salmonella-Shiguella. Calves presented higher frequency of diarrhea in D14 (COL+ = 78%; COL- = 60%). The COL- group showed higher TPC and TCC/mL (3,93x106 cfu/mL and 3,01x105 cfu/mL) compared to COL+ (0,94x106 cfu/mL and 0,78x105 cfu/mL). Regarding the isolated bacterial species, those that were more frequent in the COL+ were Proteus mirabilis (29.91%), Escherichia coli (28.04%), Citrobacter freundii (5.61%) and Staphylococcus spp (5.61%); in the COL-were Escherichia coli (28.70%), Proteus mirabilis (27.78%), Klebsiella pneumoniae (11.32%) and Morganella morganii (5.66%). The moment with more insolation in both groups was the D2 (COL+ = 26 strains; COL- = 27 strains), period in which started the diarrhea in calves. It was not possible to detect differences between the frequencies of microorganisms between the COL+ and COL- groups. The COL+ and COL- colostrum management did not influence the proportion of aerobic bacteria present in feces and the occurrence of diarrhea in calves during the neonatal period. Chapter 2 The aim of this chapter was to evaluate the influence of colostrum leukocytes in the innate immune response in Holstein calves. The animals were submitted to clinical examination, followed by blood samples collection to perform laboratory tests. The serum cortisol and haptoglobin concentrations did not show statistical differences while the iron concentration was different between groups at D7. The leukogram did not show difference to total leukocytes and absolute neutrophils, but there was a trend between groups at D7 for relative values of neutrophils. The CH138+CD62L+ marker showed no difference between groups, despite an increased expression was detected in COL-. The expression of CH138+CD62L- was greater in COL+ at D14. The phagocytosis and production of H2O2 by blood neutrophils showed similar profile in relation to S. aureus and E. coli between groups, although COL- presented greater phagocytosis intensity from D7 to D14. There was a trend for the increase of granulocyte proportion, releasing basal H2O2 at D14 for COL-, however COL+ presented trend to a higher intensity of phagocytosis at D21. The proportion of granulocytes (%) stimulated with S. aureus releasing H2O2 was greater in COL+ at D7, while stimulation with E. coli resulted in no differences between the groups. The fluorescence intensity was higher and gradual in COL+ when cells were stimulated; however, it was not detected statistical differences. The colostrum cells influenced in the health profile presented by the calves, with a higher intensity of diarrhea, lower levels of serum iron and anemia in the group that received frozen colostrum. The migration of blood granulocytes was faster and more intense in COL+ in relation to COL- after natural exposure to pathogens that cause diarrhea. The phagocytosis rate (%) of granulocytes showed similarity between groups, although the fluorescence intensity of COL- was more intense. In contrast, the COL+ demonstrated greater ability in producing H2O2

A passagem bacteriana através da interface entre implante e conector protético com a conseqüente colonização dos implantes tem sido relatada em diversos estudos na literatura. O objetivo deste estudo in vitro foi avaliar a passagem de espécies bacterianas da saliva humana para o interior dos implantes através da interface implante-conector protético após simulação de carga cíclica controlada. Foram avaliados 60 implantes de um sistema de 2 componentes e seus respectivos conectores protéticos, divididos em 3 grupos de acordo com o tipo de conexão utilizado: hexágono externo, hexágono interno e cone morse. Cada grupo foi dividido em 2 subgrupos (n=10), submetidos à aplicação de carga e controle. Previamente ao teste, amostras do interior dos implantes foram coletadas para servirem como controle negativo da contaminação. Os conectores foram adaptados aos implantes com um torque final de 20 Ncm, de acordo com a recomendação do fabricante. Os conjuntos foram imersos em saliva humana e submetidos a 500.000 ciclos de carga com uma força de 120 N ou incubados em 35°C durante 7 dias sem aplicação de carga (controle). A eventual contaminação do interior dos implantes foi avaliada após o período experimental usando o método DNA Checkerboard. Microrganismos foram encontrados no interior dos implantes de todos os tipos de conexões avaliadas após o teste de carga cíclica. Os grupos cone morse apresentaram os menores valores de contagem bacteriana nos grupos submetidos a ciclagem de carga e controle. Os implantes submetidos à carga cíclica apresentaram maiores valores de contagem bacteriana do que seus respectivos controles no hexágono externo e interno. Nenhuma espécie bacteriana foi encontrada abrigando o interior dos implantes antes do teste de contaminação (controle negativo). Os implantes do grupo cone morse apresentaram menores quantidades de microrganismos nas duas condições testadas. Pode-se concluir que espécies bacterianas provenientes da saliva humana podem penetrar através da interface implante-conector protético com ou sem a simulação de carga cíclica, e que a aplicação de carga contribuiu para o aumento da contaminação nos implantes com conexão hexagonal externa e interna. / Bacterial leakage along the implant-abutment interface with consequent species harboring the inner parts of two-part dental implant systems has been reported. The aim of this in vitro study was to evaluate the bacterial leakage from human saliva to the internal part of the implants along the implant-abutment interface under loading conditions. Sixty dental implants, 20 for each external or internal hexagon and morse cone connection, and their conical abutments were used in this study. Each connection was sub-divided in 2 groups (n=10), loaded implants and control (unloaded). Previously to the bacterial leakage test, samples from the inner parts of the implants were collected with sterile microbrushes as negative control of contamination. The abutments were tightened to 20 Ncm on the implants. The assemblies were immersed in human saliva and loaded with 500,000 cycles of 120 N in experimental or incubated for 7 days at 35°C in control group. After this period, possible contamination of the internal parts of the implants was evaluated using the DNA Checkerboard method. Microorganisms were found in the internal surfaces of all connections evaluated. Morse cone connection presented the lowest count of microorganisms in control and loading group. Loaded implants present higher counts of microorganisms than control group in external and internal hexagon. No microorganisms were found in the samples recovered from the implants before contamination test (negative control). It can be concluded that bacterial species from human saliva may penetrate along the implant-abutment interface under unloaded and loaded conditions, and morse cone connection presented the lowest count of microorganisms.

Na natureza, os microorganismos podem apresentar forma de vida planctônica ou podem estar aderidos a superfícies formando comunidades conhecidas como biofilmes. A formação de biofilmes na indústria alimentícia é uma constante preocupação visto que os microorganismos aderidos podem causar contaminações persistentes, levando a deterioração do alimento e a transmissão de doenças. Uma alternativa para evitar a adesão bacteriana e a formação de biofilmes é o pré-condicionamento de superfícies com biosurfatantes, que são compostos tensoativos de origem microbiana capazes de alterar as propriedades físico-químicas e conseqüentemente modificar as interações entre a bactéria e a superfície. Os biosurfatantes, surfactina obtida de Bacillus subtilis e ramnolipídeo de Pseudomonas aeruginosa, foram testados quanto a capacidade de evitar a adesão e remover biofilmes de bactérias patogênicas de interesse alimentar. Foram avaliadas culturas individuais e mistas de Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, e Salmonella Enteritidis utilizando-se como modelo superfícies de poliestireno. O pré-condicionamento da superfície com surfactina na concentração de 0,25% reduziu a adesão de Salmonella Enteritidis e Listeria monocytogenes em 42%, enquanto que o tratamento com ramnolipídeo a 1% reduziu a adesão de Listeria monocytogenes e Staphylococcus aureus ao poliestireno em 57,8% e 67,8% respectivamente. O condicionamento com os biosurfatantes não se mostrou eficiente na redução da adesão das culturas mistas das bactérias se comparado aos resultados obtidos para as culturas individuais. O poliestireno condicionado com os biosurfatantes apresentou redução na hidrofobicidade devido ao caráter aniônico destas moléculas. A repulsão eletrostática e a redução das interações hidrofóbicas promovidas pelo condicionamento do poliestireno com ramnolipídeo foram fatores determinantes na atividade antiadesiva observada para L. monocytogenes e S. aureus, entretanto os resultados obtidos para a superfície tratada com surfactina sugerem que outros parâmetros influenciaram nos resultados observados. Após 2 h de contato a surfactina na concentração de 0,1% promoveu a remoção de 63,7% do biofilme de S. aureus, 95,9% do biofilme de L. monocytogenes, 35,5% do biofilme de S. Enteritidis e 58,5% do biofilme da cultura mista das três bactérias. Já o ramnolipídeo na concentração de 0,25% removeu 58,5% do biofilme de S. aureus, 26,5% do biofilme de L. monocytogenes, 23,0 % do biofilme de S. Enteritidis e 24% do biofilme da cultura mista após 2 h contato. De modo geral, o aumento do tempo de contato e da concentração dos biosurfatantes reduziu a remoção dos biofilmes. A surfactina e o ramnolipídeo demonstraram potencial para uso como agentes anti-adesivos assim como para a remoção de biofilmes de bactérias patogênicas de importância alimentar. / In nature, microrganisms can live as planktonic cells or can be found living in communities attached in surfaces forming biofilms. Biofilm represents a great concern for food industry, since it can be a source of persistent contamination that can lead to food spoilage and the transmission of diseases. To avoid the adhesion of bacteria and the formation of biofilms, an alternative is the pre-conditioning of surfaces using biosurfactants that are microbial compounds that can modify the physico-chemical properties of the surfaces changing bacterial interactions and consequently adhesion. The biosurfactants, surfactin obtained from Bacillus subtilis and rhamnolipids from Pseudomonas aeruginosa, were evaluated as agents to avoid the adhesion and to disrupt biofilms of food-borne pathogenic bacteria. Individual cultures and mixed cultures of Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes e Salmonella Enteritidis were studied using polystyrene as the model surface. The pre-conditioning with surfactin 0,25% reduces in 42,0% the adhesion of L. monocytogenes and S. Enteritidis, whereas the treatment using rhamnolipids 1,0% reduced in 57,8% the adhesion of L. monocytogenes and in 67,8% the adhesion of S. aureus to polystyrene. The conditioning of surface with biosurfactants was less effective to avoid adhesion of mixed cultures of the bacteria when compared with the results obtained for individual cultures. The polystyrene surface conditioned with the biosurfactants showed a reduction in the hydrophobicity due to the anionic character of the molecules. The electrostatic repulsion and the reduction on hydrophobic interactions promoted by the conditioning of surface with rhamnolipids were determinant factors to explain the anti-adhesive activity observed for L. monocytogenes and S. aureus, however, the data obtained with surfactin suggest that other parameters have influenced the results observed. After 2 h contact with surfactin at 0,1% concentration, the pre-formed biofilms of S. aureus were reduced by 63,7%, L. monocytogenes biofilms were reduce by 95,9% , S. Enteritidis biofilms by 35,5% and the mixed culture biofilm by 58,5%. The rhamnolipids at 0,25% concentration removed 58,5% of biofilm of S. aureus, 26,5% of the biofilm of L. monocytogenes, 23,0% the biofilm of S. Enteritidis and 24,0% the biofilm of the mixed culture after 2 h of contact. In general, the increase in concentration of biosurfactants and in the time of contact decreases the biofilm remove percentage. These results demonstrate that surfactin and rhamnolipids present potential to be used as agents to control the attachment and to disrupt biofilms of food-borne pathogens.

Caulobacter crescentus sobrevive em baixas temperaturas e mostrou ser um organismo psicrotolerante e de alta resistência ao congelamento, característica resultante de múltiplos fatores. C. crescentus possui quatro genes codificantes para CSPs, sendo cspA e cspB induzidos em baixas temperaturas e cspB, cspC e cspD em fase estacionária. A ausência de cspA e cspB ou cspA e cspC confere grande deficiência de crescimento em baixas temperaturas. cspA e cspB não são autorregulados e são regulados pós-transcricionalmente via estabilização de seu mRNA e traducionalmente após o choque-frio. A expressão de cspB é influênciada por CspC a 30 graus e durante o choque-frio, e por CspC, SpdR e SpoT durante a fase estacionária. A ausência de CspC ou CspC e CspD compromete a adaptação à fase estacionária promovendo alterações morfológicas. Nenhuma das CSPs de C. crescentus é capaz de reverter o fenótipo de E. coli BX04 por expressão heteróloga, embora todas possuam atividade antiterminadora que, nestas proteínas, não depende dos mesmos aminoácidos que CspE de E. coli. / Characterization of Caulobacter crescentus cold response was performed. This bacterium showed to be psicrotolerant and have remarkable freezing resistance, which may be a result of multiple traits. C. crescentus has four CSP encoding genes, being cspA and cspB cold-induced and cspB, cspC and cspD stationary phase-induced. The absence of cspA and cspB or cspA and cspC led to growth deficiency under low temperature incubation. cspA and cspB are not self-regulated and are post-transcriptionally and translationally regulated during cold-shock. The cspB gene expression is affected by CspC at exponential growth phase and by CspC, SpdR and SpoT at stationary phase. The absence of CspC, or CspC and CspD, affects stationary phase fitness of this organism, also promoting morphological alterations. None of the C. crescentus CSPs were able to restore the phenotype of E. coli BX04 strain by heterologous expression. Although all of them have shown to be transcription antiterminators, this ability is not dependent on the same critical aminoacids displayed by CspE from E. coli.

PGC-1 é uma família de coativadores de fatores de transcrição que controlam a expressão de diversos genes envolvidos na homeostase energética celular. As isoformas PGC-1 e estão presente em tecidos com alto metabolismo oxidativo e são capazes de aumentar biogênese mitocondrial, -oxidação de ácidos graxos e gliconeogênese em resposta à exposição ao frio, jejum e exercício. Inicialmente mostramos que macrófagos in vitro aumentaram a expressão de PGC-1 após 1h da exposição à zymosan. Com isso, hipotetizamos que PGC-1 poderia ter sua expressão aumentada em resposta a um insulto bacteriano. Para verificar nossa hipótese analisamos a expressão de PGC-1 em um modelo de pancreatite aguda (PA), caracterizada por uma forte resposta inflamatória estéril inicial, seguida, após poucos dias, por translocação bacteriana intestinal e infecção disseminada. PA foi induzida por infusão retrograda de taurocolato de sódio (2,5%). Também analisamos PGC-1 em um modelo de sepse por ligadura e perfuração cecal (CLP), cujo conteúdo intestinal é depositado no peritôneo, causando infecção grave local e disseminada. Animais tratados com Imipenem durante 48h após PA também foram analisados, bem como a interferência de PGC-1 ASO no processo de fagocitose. A expressão de PGC-1 e foi medida por PCR quantitativo. PA foi confirmada pelo aumento da amilase sérica e a inflamação sistêmica ratificada por leucocitose. PGC1 aumentou no baço e nos leucócitos circulantes 48h após PA e no lavado peritoneal 24h após PA e CLP. No entanto, PGC1 diminuiu no baço 24h após PA. Tratamento com Imipenem diminuiu PGC- 1. A diminuição de PGC-1 após transfecção com ASO levou à redução do processo de fagocitose. Assim, concluímos que ocorre aumento de PGC-1 na presença de bactérias e esse aumento está relacionado com fagocitose / PGC1 is a family of transcriptional coactivators that controls the expression of several genes involved in cell energy homeostasis. PGC1 isoforms and are present in tissues with high oxidative metabolism and are able to enhance mitochondrial biogenesis, -oxidation of fatty acids and gluconeogenesis in response to exposure to cold, fasting and exercise. Initial results showed macrophages in vitro present increased PGC-1 expression after 1h exposure to zymosan. Thus, we hypothesized that PGC-1 could be up-regulated in response to bacterial insult. We tested our hypothesis following PGC-1 expression in an acute pancreatitis (AP) model, characterized initially by a strong sterile inflammatory response, followed, few days later, by bacterial intestinal translocation and disseminated infection. AP was induced by retrograde infusion of sodium taurocholate (2.5%). We also analysed PGC-1 in a model of sepsis by cecal ligation and puncture (CLP), whose intestinal content is deposited in the peritoneum, causing a severe local and disseminated infection. Animals submitted to PA and treated with Imipenem for 48 hours were also analyzed, as well as the interference of PGC-1 ASO in phagocytosis process. PGC-1 and expression were measured by quantitative PCR. AP was confirmed by increased blood amylase and the systemic inflammation was noted by leukocytosis after 48h. PGC1 was increased in spleen and circulating leukocytes 48h after AP and in peritoneal lavage 24h after AP and CLP. On the other hand, PGC1 was decreased in spleen 24h after AP induction. Imipenem treatment decreased PGC-1. The decreased of PGC-1 after ASO transfection led to a reduction of phagocytosis process. Thus, we conclude there is a PGC-1 increase in bacterial presence and this increase is related to phagocytosis

Escherichia fergusonii é um patógeno emergente na medicina humana e veterinária, nos relatos de casos de infecção em aves são escassos. O objetivo desse trabalho foi identificar e caracterizar estirpes de E. fergusonii isoladas de anatídeos de vida livre, aves cativas silvestres e aves comerciais criadas em sistemas convencionais e orgânico. Dentre as 431 amostras, foram isoladas 29 estirpes de Escherichia fergusonii, sendo a maior prevalência em galinhas no sistema de criação convencional. O perfil de sensibilidade das amostras foi avaliado, revelando diferenças entre os grupos, com a presença de estirpes de frangos no sistema de criação convencional apresentando maiores índices de resistência aos antimicrobianos testados, enquanto estirpes de irerês apresentaram sensibilidade a todos os antibióticos. Foram identificadas duas estirpes multirresistentes com resistência a mais de três classes de antimicrobianos. A caracterização molecular dessas amostras revelou estirpes de irerês (Dendrocygna viduata) com maior presença de genes de virulência (iroN, cvi, cva, astA e ompT). O ensaio de produção de hemolisinas em ágar sangue revelou amostras negativas, sem formação de hemólise ao redor da colônia. A técnica de AFLP classificou as estirpes em clados distintos sugerindo padrões de heterogeneidade entre as amostras. Esse é o primeiro relato de achados de Escherichia fergusonii em irerês de vida livre e gavião-pombo pequeno. / Escherichia fergusonii is an emerging pathogen in human and veterinary medicine, in cases reports associated with birds are scarce. The aims of this work were to identify and to characterize strains of E. fergusonii isolated from free-living ants, wild captive birds and poultry from conventional and organic farms. Among the 431 samples, 29 Escherichia fergusonii were isolated, being the highest prevalence in chickens from conventional breeding systems. The sensitivity profile of the samples was evaluated, revealing differences between the groups, with the higher antimicrobial resistance indexes in isolates from chicken in the conventional farms, while strains of white-faced whistling-duck showed sensitivity to all antibiotics. Two multiresistant strains with resistance to more than three classes of antimicrobial agents were identified. The molecular characterization of these samples revealed strains of white-faced whistlingduck (Dendrocygna viduata) with higher presence of virulence genes (iroN, cvi, cva, astA and ompT). The assay of hemolysin production on blood agar revealed negative strains, with no hemolysis forming around the colony. The AFLP technique classified the strains into distinct clades suggesting patterns of heterogeneity between the strains. This is the first report of Escherichia fergusonii in free-living white-faced whistling duck and white-necked hawk.

No sentido de colaborar com o estudo da redução de microrganismos em Endodontia, foi realizada uma análise crítica dos modelos metodológicos in vivo sobre as técnicas moleculares utilizadas na avaliação da microbiota endodôntica e na capacidade de medir a antissepsia que o tratamento endodôntico proporciona. Desta maneira, os trabalhos foram agrupados de acordo com a proposta do presente estudo. Na análise critica e comparativa, pode-se observar uma grande variedade de métodos moleculares aplicados nos estudos, sendo que o mais utilizado nos ensaios para avaliação da microbiota foi o PCR. Havia estudos que utilizavam uma combinação de vários métodos onde foi possível identificar microrganismos ainda não conhecidos. Nos ensaios que utilizam iniciadores universais e que se valem da identificação de microrganismos através do DNA, foram listados de maneira a poder observar que o iniciador universal formado pela seguinte cadeia de oligonucleotídeos: F: 5- AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3/R: 5-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3 foi o mais descrito pela literatura. / In order to collaborate with the study of disinfection in Endodontics, was performed a study of critical methodological models in vivo on the molecular techniques used in the evaluation of endodontic microbiota and the ability to measure the disinfection capacity of endodontic treatment. Thus, the studies were grouped according to the purpose of this study. Under in critical and comparative analysis its can be seen a wide variety of molecular techniques used in the studies, and as used in the tests was to evaluate the microbial PCR studies using a combination of various methods which could be identified microorganisms has not known. In assays using universal primers which rely on the identification of microorganisms using the DNA, were listed as to be able to observe that the universal primer chain formed by the following primers: F: 5\'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3 \'/ R: 5\'-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3\' was as described in the literature.